JP2002523424A - 新規な抗糖尿病ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ある種の所望のアミリン活性に関してアミリン・アゴニストとして、またある種の所望のカルシトニン活性に関してカルシトニン・アゴニストとして作用する式（Ｉ）の化合物が提供される。かかる化合物は、限定されるものではないが、Ｉ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病を含む真性糖尿病を含めた哺乳動物における食物代謝における妨害を治療するのに有用である。また、本発明は、治療上有効量の該化合物のうちの１つを投与することを特徴とする、Ｉ型糖尿病を治療する方法およびＩＩ型糖尿病を治療する方法、ならびに胃腸運動を有利に調節する方法に関する。また、式（Ｉ）の化合物および医薬上許容される担体を含むことを特徴とする医薬組成物が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明の分野 本発明は、カルシトニン・アゴニストとして、およびある種の所望のアミリン
活性に関してのアミリン・アゴニストとして使用するための新規なペプチド化合
物に指向される。これらの化合物は、限定するものではないが、Ｉ型糖尿病およ
びＩＩ型糖尿病を含む真性糖尿病を含めた哺乳動物の食物代謝における妨害を治
療するのに有用である。

【０００２】発明の背景および序文 真性糖尿病は、血中グルコースの慢性的に上昇したレベル（高血糖症）の存在
によって定義される重篤な代謝障害である。高血糖症のこの状態は、ペプチドホ
ルモンであるインスリンの活性の相対的なまたは絶対的な損失の結果である。イ
ンスリンは、膵臓のβ細胞によって産生され分泌される。インスリンは、グルコ
ース利用、蛋白質合成、およびグリコーゲンとしての炭水化物エネルギーの形成
および貯蔵を促進することが報告されている。グルコースは、重合したグルコー
スの形態であるグリコーゲンとして体内に貯蔵され、代謝の必要があるとグルコ
ースに逆変換できる。通常の条件下では、インスリンは、ベース速度にておよび
グルコース刺激に続いての増強された速度にての両者で分泌され、グルコースの
グリコーゲンへの変換によって代謝的ホメオスタシスを維持する。

【０００３】 真性糖尿病なる用語はいくつかの異なる高血糖状態を含む。これらの状態は、
Ｉ型（インスリン依存性真性糖尿病またはＩＤＤＭ）およびＩＩ型（インスリン
非依存性真性糖尿病またはＮＩＤＤＭ）糖尿病を含む。Ｉ型糖尿病の個人に存在
する高血糖症は、不十分な、低下したまたは存在しないインスリンレベルと関連
付けられ、それは生理学的範囲内の血中グルコースレベルを維持するために不十
分である。Ｉ型糖尿病の治療は、一般的に非経口経路による補充用量のインスリ
ンの投与を含む。ＩＩ型糖尿病の個人に存在する高血糖症は、最初には正常レベ
ルまたは上昇したレベルのインスリンと関連し；しかしながら、これらの個人は
、末梢組織および肝臓におけるインスリン抵抗性の状態のために、および疾患が
進むにつれ、インスリンの分泌を担う膵臓β細胞の進行性の悪化のために代謝的
ホメオスタシスを維持できなくなる。かくして、ＩＩ型糖尿病の初期治療は、ス
ルホニル尿素のごとき経口低血糖剤での治療によって増加した食事およびライフ
スタイルの変化に基づくであろう。インスリン治療は、しかしながら、特に該疾
患の後期の状態において、高血糖のいくらかのコントロールを生じさせ、疾患の
合併症を最小にすることを企ててしばしば必要とされる。

【０００４】 アミリンの構造および生物学は、従前に概説されている。例えば、Young、Cur
rent Opinion in Endocrinology and Diabetes、４：２８２−２９０（１９９７
）；GaetaおよびRink、Med. Chem. Res.、３：４８３−４９０（１９９４）；お
よびPittnerら、J. Cell. Biochem.、５５S：１９−２８（１９９４）参照。ア
ミリンは、３７個のアミノ酸のペプチドホルモンである。それは、死亡したヒト
ＩＩ型糖尿病患者の膵臓の小島においてアミロイド沈着物の主成分として単離、
精製され、化学的に特徴付けられた（Cooperら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、
８４：８６２８−８６３２（１９８７））。アミリン分子は、２つの重要な翻訳
後修飾：Ｃ末端をアミド化し、すなわち、第３７番目の残基をチロシンアミドと
し、次いで、２および７位のシステインを架橋させて、分子内Ｎ末端ループを形
成する、を有し、この双方が十分な生物学的活性につき重要である（Cooperら、
Proc. Natl. Acad. Sci. USA、８５：７７６３−７７６６（１９８８））。アミ
リンは、１９９４年１１月２２日に発行された米国特許第５,３６７,０５２号の
主題である。

【０００５】 Ｉ型糖尿病および後期ステージのＩＩ型糖尿病において、アミリンが欠乏して
いることが示され、インスリンと組み合せた置き換えが、インスリン依存性糖尿
病の全形態におけるインスリン単独を超える好ましい処置として提唱されている
。真性糖尿病の治療でのアミリンおよびアミリン・アゴニストの使用は、１９９
２年１２月２９日に発行された米国特許第５,１７５,１４５号の主題である。ア
ミリンおよびアミリン＋インスリンを含有する医薬組成物は、１９９２年６月２
３日に発行された米国特許第５,１２４,３１４号に記載されている。

【０００６】 過剰なアミリン作用は、早期のステージのＩＩ型糖尿病の重要な特徴を模倣す
ると言われ、アミリン遮断が新規な治療戦略として提唱された。アミリンが骨格
筋中のグリコーゲンへの標識グルコースの基本的なおよびインスリン刺激の取り
込みを共に低下させることが１９９３年１１月３０日に発行された米国特許第５
,２６６,５６１号に開示されている。アミリン・アンタゴニストでのＩＩ型糖尿
病およびインスリン抵抗性の治療は開示されている。

【０００７】 アミリンは、膵臓ベータ細胞中で初期合成され、グルコースおよびアルギニン
のごとき栄養刺激に応答して分泌される。クローン化ベータ細胞腫瘍系（Moore
ら、Biochem. Biophys. Res. Commun.、１７９（１）（１９９１）および灌流し
たラット膵臓（Ogawaら、J. Clin. Invest.、８５：９７３−９７６（１９９０
））での研究は、１０ないし２０分間の短いパルスのグルコースおよびアルギニ
ンのごとき栄養分泌促進剤が、アミリンならびにインスリンの遊離を刺激するこ
とを示した。分泌された蛋白質のアミリン：インスリンのモル比は、約０.０１
ないし０.４の調製物間で変わるが、いずれの調製物においても急性刺激で大き
くは変わらないようである。しかしながら、グルコースの上昇による延長した刺
激の間、アミリン：インスリンの比は、漸増できる（Gedulinら、Biochem. Biop
hys. Res. Commun.、１８０（１）：７８２−７８９（１９９１））。かくして
、アミリンおよびインスリンは、常に一定比率で分泌されるとは限らない。

【０００８】 アミリンのある種の作用が、ＣＧＲＰおよびカルシトニンの非代謝作用と同様
であり；しかしながら、この最近確認された蛋白質の研究中に見出されたアミリ
ンの代謝作用が、その初期の生物学的役割を反映しているらしいことが見出され
報告された。これらの代謝作用の少なくともいくらかは、著しく血管拡張する用
量においてもＣＧＲＰと類似する。（例えば、LeightonおよびCooper、Nature、
３３５：６３２−６３５（１９８８））；Molinaら、Diabetes、３９：２６０−
２６５（１９９０）参照）。

【０００９】 アミリンは、原形質膜に存在する受容体を介して作用すると考えられている。
アミリンおよびＣＧＲＰならびに選択的アンタゴニストの効果の研究は、アミリ
ンがＣＧＲＰ受容体で最初に作用するという他の研究者の結論（例えば、Chantr
yら、Biochem. J. ２７７：１３９−１４３（１９９１））；Zhuら、Biochem. B
iophys. Res. Commun.、１７７（２）：７７１−７７６（１９９１））とは対照
的に、アミリンがそれ自身の受容体を介して作用することを報告した（Beaumont
ら、Br. J. Pharmacol.、１１５（５）：７１３ −７１５（ １９９５）；Wang
ら、FEBS Letts.、２１９：１９５−１９８（１９９１ ｂ））。アミリン受容体
、およびアミリン・アゴニストおよびアンタゴニスト化合物のスクリーニングお
よびアッセイ方法におけるそれらの使用は、１９９３年１１月２３日に発行され
た米国特許第５,２６４,３７２号に記載されている。

【００１０】 また、アミリンおよびアミリン・アゴニストは、グルカゴン分泌を抑制するこ
とが示されている。グルカゴン分泌とは別に影響するであろう影響がコントロー
ルされる場合（血漿中グルコース、インスリンおよび血圧）に、アミリンはラッ
トにおいてアルギニンに対するグルカゴン応答を抑制すると報告された。Geduli
nら、Metabolism、４６：６７−７０（１９９７）。アミリンアナログであるプ
ラムリンチド（pramlintide）（^{２５，２８，２９}Ｐｒｏ−ヒトアミリン）は、
Ｉ型糖尿病の対象のグリコーゲン濃度における食後の急上昇を消失させると報告
されている（Finemanら、Diabetes、４０：３０A（１９９７）。プラムリンチド
および他のアミリン・アゴニストアナログは、１９９７年１１月１１日に発行さ
れた米国特許第５,６８６,４１１号に記載され特許請求されている。

【００１１】 アミリンおよびアミリン・アゴニストは、ラット（Youngら、Diabetologia ３
８（６）：６４２−６４８（１９９５））、イヌ（Brownら、Diabetes ４３（su
ppl １）：１７２A（１９９４））およびヒト（Macdonaldら、Diabetologia ３
８（Suppl １）：A３２（アブストラクト１１８）（１９９５））における胃内
容排出を強力に阻害する。胃内容排出は、アミリン欠乏のＩ型糖尿病ＢＢラット
（Youngら、Diabetologia、前記；Nowakら、J. Lab. Clin. Mad.、１２３（１）
：１１０−６（１９９４））において、およびアミリン・アンタゴニストである
ＡＣ１８７で処置したラット（Gedulinら、Diabetologia、３８（Suppl １）：A
２４４（１９９５））において促進されると報告されている。胃内容排出に対す
るアミリンの効果は、生理的である（通常に循環する濃度にて効果をもたらす）
らしい。

【００１２】 アミリンの非代謝作用は、ＣＧＲＰ血管受容体との相互作用によって媒介でき
る血管拡張作用を含む。報告されたｉｎ ｖｉｖｏ試験は、アミリンが、血管拡
張剤としてのＣＧＲＰより少なくとも約１０ないし１０００倍小さな効力である
ことを示唆する（Brainら、Eur. J. Pharmacol.、１８３：２２２１（１９９０
）；Wangら、FEBS Letts.、２９１：１９５−１９８（１９９１））。

【００１３】 脳内に注射されたまたは末梢的に投与されたアミリンは、食物摂取（例えば、
Chanceら、Brain Res.、５３９：３５２−３５４（１９９１））、ＣＧＲＰおよ
びカルシトニンと共有する作用を抑制すると報告されている。この作用を媒介す
る細胞での有効濃度は知られていない。また、アミリンは、単離された破骨細胞
に対して細胞を休止させ、ｉｎ ｖｉｖｏにてページェット病のラット、ウサギ
およびヒトにおいて２０％まで血漿中カルシウムを低下させる両効果を有するこ
とが報告された（Zaidiら、Trends in Endocrinal. and Metab.、４：２５５−
２５９（１９９３）参照）。入手可能なデータから、アミリンは、これらの作用
につきヒトカルシトニンより１０ないし３０倍小さな効力であるらしい。興味深
いことには、アミリンが、破骨細胞のｃＡＭＰ産生を増加させるが細胞質Ｃａ^{２ ＋} を増加させず、一方、カルシトニンは両者を増加させるようである（Alamら、
Biochem. Biophys. Res. Commun.、１７９（１）：１３４−１３９（１９９１）
）。アミリンは単一の受容体タイプを介して作用するが、カルシトニンは２つの
受容体を介して作用でき、それらのうちの一つはアミリン活性に共通することが
、確立されてはいないが、示唆された。

【００１４】 また、驚くべきことには、その前記の腎血管拡張および他の特性ゆえに、アミ
リンは、血圧のいずれの妨害をも避けるように皮下的に与えられる場合に無傷の
ラットにおける血漿中レニン活性を著しく増大させる。低下した血圧がレニン遊
離に対する強力な刺激であるために、この後者の点は重要である。ＣＧＲＰおよ
び／またはカルシトニン受容体に比較してアミリン受容体に選択的なものを含め
たアミリン受容体アンタゴニストのごときアミリン・アンタゴニストは、血漿中
レニン活性のアミリン誘発の上昇をブロックするために用いることができる。レ
ニン関連障害を治療するためのアミリン・アンタゴニストの使用は、１９９４年
１２月２７日に発行された米国特許第５,３７６,６３８号に記載されている。

【００１５】 正常なヒトでは、絶食時のアミリンレベルは１ないし１０ｐＭであり、食後ま
たはグルコース投与後のレベルは、５ないし２０ｐＭであると報告されている（
例えば、Kodaら、The Lancet、３３９：１１７９−１１８０（１９９２）参照）
。肥満のインスリン抵抗性の個人において、食事後のアミリンレベルはより高く
なり、約５０ｐＭまで達する。比較では、絶食および食後インスリンについての
値は２０ないし５０ｐＭであり、健康な人々においては各々１００ないし３００
ｐＭであり、インスリン抵抗性の人々においてはおそらく３ないし４倍高レベル
である。Ｉ型糖尿病において、ベータ細胞が破壊された場合、アミリンレベルは
、検出レベル以下であり、グルコースに応答して上昇しない（Kodaら、The Lanc
et、３３９：１１７９−１１８０（１９９２））。正常なマウスおよびラットに
おいて、基本的なアミリンレベルは、３０ないし１００ｐＭと報告されているが
、６００ｐＭまでの値がある種のインスリン抵抗性の糖尿病の種の齧歯類におい
て測定された（例えば、Huangら、Hypertension、１９：Ｉ−１０１−Ｉ−１０
９（１９９１））。

【００１６】 哺乳動物において、カルシトニンは、骨髄ターンオーバーおよびカルシウム代
謝の調節に機能する。血清中カルシウムレベルの上昇によって甲状腺から遊離さ
れるカルシトニンは、骨および他の器官に対して作用し、血清中カルシウムレベ
ルを低下させる傾向にある。カルシトニンは、破骨細胞活性を阻害し、骨吸収を
低下させ、それによって血清中カルシウムレベルを低下させる。また、カルシト
ニンは、腎臓によって、カルシウム、リン酸塩および電解質の排泄を変更するが
、これの生理学的有意さは報告されていない。カルシトニンは、カルシウム代謝
の障害および痛みの治療に臨床的に用いられ、哺乳動物におけるグルコースレベ
ルの増大とのその関連性は、多様な報告の主題であった。例えば、Azriaら、「C
alcitonin −−physiological and Pharmacologlcal Aspects」、pp. ２４−２
５（springer−Verlag １９８９）参照。真性糖尿病の治療におけるカルシトニ
ンの使用は、１９９４年６月１４日に発行された米国特許第５,３２１,００８号
および１９９６年４月１６日に発行された米国特許第５,５０８,２６０号に記載
されている。カルシトニン誘導体であると報告されたある種の化合物は、１９８
８年７月１９日に発行された米国特許第４,７５８,５５０号において、カルシウ
ム血漿レベルを低下させ、骨代謝に影響すると言われている。

【００１７】発明の概要 本発明は、哺乳動物におけるアミリンおよびカルシトニンによって媒介される
ある種の代謝効果を調節するのに使用する新規な化合物を提供する。驚くべきこ
とには、これらの化合物は、アミリンのある種の効果につきアミリン・アゴニス
トとして、また、カルシトニンのある種の効果につきカルシトニン・アゴニスト
として作用する。

【００１８】 因子中とりわけ、本発明は、本発明の化合物がカルシトニンおよびアミリンの
ある種の効果についてのアゴニストとして作用することを含む生物学的プロフィ
ールを示すという発明者らの予期されない発見に基づいている。特に、これらの
化合物は、胃内容排出の阻害においてアミリン・アゴニストとして作用する。生
物学的効果のこの驚くべき組合せのために、これらの化合物は、部分的に胃内容
排出の阻害に対するその効果のために、Ｉ型糖尿病およびインスリン依存性（後
期ステージ）ＩＩ型を含めた糖尿病を治療するのに有用であるであろう。出願者
らは、本発明の化合物が有利な生物学的活性を示し、さらにアミリンの約半分な
いし約５分の２未満のサイズであるペプチドアミドであることに注目する。それ
らの小さなサイズおよび分子量のために、これらの化合物は、合成するのが容易
で、かつより経済的である。さらに、これらの化合物は、とりわけ、パッチ技術
、ミクロスフェア技術および／またはバッカル技術を介する薬物送達に従う。出
願者らは、従前に報告したアミリンのアンタゴニストが実質的に全長であったこ
とに注目する。米国特許第５,６８６,４１１号を参照されたし。

【００１９】 本発明により、式Ｉ： X_１−Xaa_１−X_２−Xaa_２−X_３−Xaa_３−X_４−Xaa_４−X_５−Xaa_５−X_６−NH_２
［式中、X_１は、Lys、Argまたは不存在であり； X_２は、Xaa_６Xaa_７Xaa_８Xaa_９（配列番号４７）またはZ−Xaa_１０SerThrであ
り、但し、X_２がZ−Xaa_１０Ser−Thrであるならば、X_１およびXaa_１は共に不存
在であり； X_３は、AlaThr、AlaSer、SerMet、GluThrまたはValThrであり； X_４は、ArgLeuAla、HisLeuAla、ArgIleAla、LysIleAla、ArgMetAla、HisMetAl
a、LysMetAlaまたはArgLeuThrであり； X_５は、PheLeu、PheIle、PheMet、TyrLeu、TyrIle、TyrMet、TrpMet、TrpIle
またはTrpMetであり； X_６は、ArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）、LysSerSerGlyTyr（配列番号４９
）、HisSerSerGlyTyr（配列番号５０）、ProSerSerGlyTyr（配列番号５１）、Ar
gSerArgGlyTyr（配列番号５２）、ArgThrSerGlyTyr（配列番号５３）、ArgAlaSe
rGlyTyr（配列番号５４）、AlaSerSerGlyTyr（配列番号５５）、ArgSerAlaGlyTy
r（配列番号５６）、HisSerAlaGlyTyr（配列番号５７）、ArgSerGlyTyr（配列番
号５８）、ArgSer、LysSer、HisSer、ArgThr、ProSerまたはArgであり； Xaa_１は、Cysまたは不存在であり； Xaa_２は、CysまたはAlaであり； Xaa_３は、Gln、AlaまたはAsnであり； Xaa_４は、Asn、AlaまたはGlnであり； Xaa_５は、Val、Ala、Ile、Met、Leu、ペンチルGly、またはt−ブチルGlyであ
り； Xaa_６は、Asn、GlnまたはAspであり； Xaa_７は、Thr、Ser、Met、Val、LeuまたはIleであり； Xaa_８は、AlaまたはValであり； Xaa_９は、ThrまたはSerであり； Xaa_１０は、Leu、Val、MetまたはIleであり； また、Zは、約１ないし８個の炭素原子のアルカノイル基または不存在である
］ で表される化合物；およびその医薬上許容される塩を提供する。また、糖尿病お
よび胃腸障害のごときかかる疾患のためになるであろう種々の疾患の治療におけ
る本発明の化合物、ならびに本発明の化合物を含有する医薬組成物の使用方法が
、本明細書に記載され、特許請求される。

【００２０】定義 本発明により、また本明細書で用いるごとく、以下の用語は、特に明示的に述
べない限りは、以下の意味を有すると定義する。 「アミリン」なる用語は、膵臓のベータ細胞から分泌されたヒトペプチドホル
モンのアミリンを含むと理解される。

【００２１】 また、「アミリン・アゴニスト」とは当該技術分野において知られた用語であ
り、アミリンの１以上の生物学的活性を有する化合物をいう。アミリン・アゴニ
ストは、ペプチド化合物または非ペプチド化合物であってもよい。かかる化合物
は、アミリン・アゴニストとして働き、通常、アミリン受容体もしくは他の受容
体、またはアミリン自体が相互作用して生物学的応答を得る受容体に結合するか
、そうでなければそれらと直接的にまたは間接的に相互作用することによると現
在考えられている。

【００２２】 「アミリン・アンタゴニスト」なる用語は、アミリンの１以上の効果を阻害す
る化合物をいう。アミリン・アンタゴニストは、ペプチド化合物または非ペプチ
ド化合物であってもよい。 「アルカノイル」なる用語は、Ｒが直鎖のまたは分岐鎖のアルキル基である基
ＲＣ（=Ｏ）−をいい、それは対応するカルボン酸から誘導できる。

【００２３】 「アミノ酸」なる用語は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸およびアミノ酸アナ
ログをいい、それらの構造が立体異性体形態を許容する場合には、それらのＤお
よびＬ立体異性体のすべてをいう。天然アミノ酸には、アラニン（Ala）、アル
ギニン（Arg）、アスパラギン（Asn）、アスパラギン酸（Asp）、システイン（C
ys）、グルタミン（Gln）、グルタミン酸（Glu）、グリシン（Gly）、ヒスチジ
ン（His）、イソロイシン（Ile）、ロイシン（Leu）、リジン（Lys）、メチオニ
ン（Met）、フェニルアラニン（Phe）、プロリン（Pro）、セリン（Ser）、トレ
オニン（Thr）、トリプトファン（Trp）、チロシン（Tyr）およびバリン（Val）
が含まれる。非天然アミノ酸には、限定されるものではないが、アゼチジンカル
ボン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、ベータ−アラニン、ア
ミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、
２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノ
ピメリン酸、第三級−ブチルグリシン、２,４−ジアミノイソ酪酸、デスモシン
、２,２'−ジアミノピメリン酸、２,３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグ
リシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリシン、アロ−ヒ
ドロキシリシン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデス
モシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルアラニン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−
メチルイソロイシン、Ｎ−メチルペンチルグリシン、Ｎ−メチルバリン、ナフト
アラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、ペンチルグリシン、ピペコ
リン酸およびチオプロリンが含まれる。アミノ酸アナログには、例えば、メチオ
ニンスルホキシド、メチオニンスルホン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システイ
ン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システインスルホキシドおよびＳ−（カルボキ
シメチル）−システインスルホンのごとき、それらのＮ−末端アミノ基またはそ
れらの側鎖基に対して可逆的にまたは不可逆的に化学的にブロックされるか、あ
るいは修飾された天然および非天然のアミノ酸が含まれる。

【００２４】 「アミノ酸アナログ」なる用語は、Ｃ−末端カルボキシ基、Ｎ−末端アミノ基
または側鎖官能基のいずれかがもう一つの官能基に化学的に体系化された（codi
fied）アミノ酸をいう。例えば、アスパラギン酸−（ベータ−メチルエステル）
は、アスパラギン酸のアミノ酸アナログであり；Ｎ−エチルグリシンは、グリシ
ンのアミノ酸アナログであり；またはアラニンカルボキサミドは、アラニンのア
ミノ酸アナログである。

【００２５】 「アミノ酸残基」なる用語は、（１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ−ＮＨ−または−ＮＨ−
Ｒ−Ｃ（Ｏ）−、ここに、Ｒは典型的には−ＣＨ（Ｒ'）−であり、ここに、Ｒ'
はアミノ酸側鎖、典型的にはＨまたは炭素を含む置換基であり；または（２）

【００２６】

【化１】

【００２７】 ［式中、ｐは１、２または３であり、各々、アゼチジンカルボン酸、プロリンま
たはピペコリン酸の残基を表す］構造を有する基をいう。

【００２８】 「カルシトニン・アゴニスト」とは、カルシトニンの１以上の生物学的活性を
有する化合物をいう。カルシトニン・アゴニストは、ペプチド化合物または非ペ
プチド化合物であってもよい。

【００２９】 アルキル基のごとき有機基と関連して本明細書で言及される「低級」なる用語
は、約６個以下の、好ましくは４個以下の、有利には１または２個の炭素原子を
有するかかる基を定義する。かかる基は、直鎖であっても分岐鎖であってもよい
。

【００３０】 「医薬上許容される塩」には、かかる化合物と有機酸または無機酸との組合せ
から誘導された本明細書に記載された化合物の塩が含まれる。実際問題としては
、塩形態の使用は帰するところ塩基形態の使用となる。該化合物は、遊離塩基お
よび塩形態の双方で有用である。

【００３１】 さらに、以下の略語は、以下のことを表している： 「ACN」または「ＣＨ_３ＣＮ」とはアセトニトリルをいう。 「Boc」、「tBoc」または「Tboc」とはt-ブトキシカルボニルをいう。 「DCC」とはN,N'−ジシクロヘキシルカルボジイミドをいう。 「Ｆｍｏｃ」とはフルオレニルメトキシカルボニルをいう。 「HBTU」とは２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−
テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェートをいう。 「HOBt」とは１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物をいう。 「homoP」またはhPro」とはホモプロリンをいう。 「MeAla」または「Nme」とはN−メチルアラニンをいう。 「naph」とはナフチルアラニンをいう。 「Pg」あるいはpGly」とはペンチルグリシンをいう。 「tBuG」とは第三級ブチルグリシンをいう。 「ThioP」またはtPro」とはチオプロリンをいう。 「３Hyp」とは３−ヒドロキシプロリンをいう。 「４Hyp」とは４−ヒドロキシプロリンをいう。 「NAG」とはN−アルキルグリシンをいう。 「NAPG」とはN−アルキルペンチルグリシンをいう。 「Norval」とはノルバリンをいう。 「Norleu」とはノルロイシンをいう。

【００３２】本発明の詳細な記載 好ましい化合物 本発明により、式Ｉ： X_１−Xaa_１−X_２−Xaa_２−X_３−Xaa_３−X_４−Xaa_４−X_５−Xaa_５−X_６−NH_２
［式中、X_１は、Lys、Argまたは不存在であり； X_２は、Xaa_６Xaa_７Xaa_８Xaa_９（配列番号４７）またはZ−Xaa_１０SerThrであ
り、但し、X_２がZ−Xaa_１０Ser−Thrであるならば、X_１およびXaa_１が共に不存
在であり； X_３は、AlaThr、AlaSer、SerMet、GluThrまたはValThrであり； X_４は、ArgLeuAla、HisLeuAla、ArgIleAla、LysIleAla、ArgMetAla、HisMetAl
a、LysMetAlaまたはArgLeuThrであり； X_５は、PheLeu、PheIle、PheMet、TyrLeu、TyrIle、TyrMet、TrpMet、TrpIle
またはTrpMetであり； X_６は、ArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）、LysSerSerGlyTyr（配列番号４９
）、HisSerSerGlyTyr（配列番号５０）、ProSerSerGlyTyr（配列番号５１）、Ar
gSerArgGlyTyr（配列番号５２）、ArgThrSerGlyTyr（配列番号５３）、ArgAlaSe
rGlyTyr（配列番号５４）、AlaSerSerGlyTyr（配列番号５５）、ArgSerAlaGlyTy
r（配列番号５６）、HisSerAlaGlyTyr（配列番号５７）、ArgSerGlyTyr（配列番
号５８）、ArgSer、LysSer、HisSer、ArgThr、ProSerまたはArgであり；および Xaa_１は、Cysまたは不存在であり； Xaa_２は、CysまたはAlaであり； Xaa_３は、Gln、AlaまたはAsnであり； Xaa_４は、Asn、AlaまたはGlnであり； Xaa_５は、Val、Ala、Ile、Met、Leu、ペンチルGly、またはt−ブチルGlyであ
り； Xaa_６は、Asn、GlnまたはAspであり； Xaa_７は、Thr、Ser、Met、Val、LeuまたはIleであり； Xaa_８は、AlaまたはValであり； Xaa_９は、ThrまたはSerであり； Xaa_１０は、Leu、Val、MetまたはIleであり； また、Zは、約１ないし８個の炭素原子のアルカノイル基または不存在である
］ で表される化合物；およびその医薬上許容される塩を提供する。

【００３３】 X_１がLysまたは不存在である化合物が好ましい。 好ましいX_２基には、Xaa_６Xaa_７Xaa_８Xaa_９が含まれ、ここに、Xaa_６はAsnで
あり、Xaa_８はAlaであり、また、Xaa_９はThrまたはZ−Xaa_１０SerThrであり、こ
こに、Xaa_１０はLeu、ValまたはMetである。X_２がXaa_６Xaa_７Xaa_８Xaa_９である
場合、好ましいX_２基には、AsnThrAlaThr（配列番号５９）、AsnValAlaThr（配
列番号６０）、AsnLeuAlaThr（配列番号６１）およびAsnMetAlaThr（配列番号６
２）が含まれる。X_２がZ−Xaa_１０SerThrである場合、特に、Xaa_１０がLeuであ
る化合物が好ましい。 好ましいX_３基にはAlaThrが含まれる。 好ましいX_４基にはArgLeuAlaが含まれる。 好ましいX_５基にはPheLeuが含まれる。 好ましいX_６基には、ArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）、HisSerSerGlyTyr（
配列番号５０）、ArgSerおよびHisSerが含まれる。特に、ArgSerSerGlyTyr（配
列番号４８）およびArgSerが好ましい。 Xaa_３がGlnまたはAlaである化合物が好ましい。 Xaa_４がAsnまたはAlaである化合物が好ましい。 Xaa_５がValまたはAlaである化合物が好ましい。 好ましいZ基には、約３ないし約６個の炭素原子を有するアルカノイル基が含
まれる。 好ましい化合物には、Xaa_１およびXaa_２がCysである化合物が含まれる。特に
好ましい態様により、有利には２個のシステインはジスルフィド架橋を形成でき
る。

【００３４】 好ましい１つの態様により、好ましい化合物には、Xaa_３がAlaである化合物が
含まれる。特に、Xaa_４とXaa_５がAlaである化合物が好ましい。あるいは、特に
好ましい化合物には、Xaa_４がAsnであって、Xaa_５がValである化合物が含まれる
。 別法の好ましい態様による好ましい化合物には、Xaa_３がGlnであり、Xaa_４はA
snであって、Xaa_５はValである化合物が含まれる。

【００３５】 別の態様により、X_３がAlaThrであり、X_４がArgLeuAlaであって、X_５がPheLeu
である化合物が供される。X_６がArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）、HisSerSerG
lyTyr（配列番号６０）、ArgSerまたはHisSerである化合物が特に好ましい。特
に好ましい１つの態様により、X_６はArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）またはAr
gSerである。別の好ましい態様により、X_６はArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）
またはHisSerSerGlyTyr（配列番号５０）である。好ましい化合物には、Xaa_１が
Cysであるものが含まれ、特に好ましい化合物には、Xaa_２がCysであるものが含
まれる。Xaa_１およびXaa_２が共にCysである場合、それらは有利にはジスルフィ
ド架橋を形成できる。好ましくは、X_２がAsnThrAlaThr（配列番号５９）、AsnVa
lAlaThr（配列番号６０）、AsnLeuAlaThr（配列番号６１）またはAsnMetAlaThr
（配列番号６２）である。Xaa_３がAlaまたはGluであり、Xaa_４がAlaまたはAsnで
あって、Xaa_５がAlaまたはValである化合物が好ましい。この態様により、特に
好ましい化合物には、X_２がAsnThrAlaThr（配列番号５９）またはAsnValAlaThr
（配列番号６０）であって、X_６がArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）であるもの
が含まれる。この態様による特に好ましい化合物には、X_２がAsnThrAlaThr（配
列番号５９）であり、Xaa_３、Xaa_４およびXaa_５がAlaであるものが含まれ；特に
、X_１がLysである化合物が好ましい。別法として、この態様による特に好ましい
化合物には、X_６がArgSerまたはHisSerであり、より好ましくはArgSerであり；
好ましくは、X_２がAsnValAlaThr（配列番号６０）であり、Xaa_３がGlnであり、X
aa_４がAsnであり、Xaa_５がValであって、X_１が不存在である化合物が含まれる。

【００３６】 別の態様により、好ましい化合物には、X_１が不存在のものが含まれる。特に
、Xaa_１が不存在である化合物が好ましい。この態様により、好ましいX_６基には
、ArgSerおよびHisSer、より好ましくはArgSerが含まれる。この態様による特に
好ましい化合物は、X_２がZ−Xaa_１０SerThrであり、好ましくXaa_１０がLeu、Val
またはMetであるものが含まれる。好ましい化合物には、Xaa_３がAlaであり、Xaa _４ がAlaであって、Xaa_５がAlaであるものが含まれる。

【００３７】 本発明の好ましいペプチド化合物には、配列番号１ないし４６から選択される
アミノ酸配列を有するものが含まれる。配列番号１ないし１６から選択されるア
ミノ酸配列を有するものが特に好ましい。特に好ましいペプチド化合物には、配
列番号１ないし６から選択されるアミノ酸配列を有するものが含まれる。

【００３８】 また、（ａ）X_１がLysまたは不存在であって、Xaa_１がCysであり、X_２がAsnTh
rAlaThr（配列番号５９）またはAsnValAlaThr（配列番号６０）である、または
（ｂ）X_１およびXaa_１が不存在であって、X_２はZ−LeuSerThrである化合物が特
に好ましい。Xaa_１が不存在であるならば、Xaa_２は好ましくはAlaである。Xaa_１ がCysであるならば、Xaa_２は好ましくはCysであって、Xaa_１およびXaa_２はジス
ルフィド架橋を形成する。特に、好ましい化合物には、実施例１ないし６（配列
番号１ないし６）に記載されたものが含まれる。

【００３９】化合物の調製 本明細書に記載された化合物は、標準的な固相ペプチド合成技術および、好ま
しくは、自動または半自動のペプチド合成機を用いて調製できる。典型的には、
かかる技術を用いて、α−Ｎ−カルバモイル保護アミノ酸および樹脂上の伸長す
るペプチド鎖に結合したアミノ酸を、ジイソプロピルエチルアミンのごとき塩基
の存在下、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾールのごときカップリング剤の存在下、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピ
ロリジノンまたは塩化メチレンのごとき不活性溶媒中で室温にてカップリングさ
せる。トリフルオロ酢酸またはピペリジンのごとき試薬を用いて、α−Ｎ−カル
バモイル保護基を得られたペプチド−樹脂から除去し、次いで、ペプチド鎖に付
加すべき次の所望のＮ−保護アミノ酸を用いて該カップリング反応を繰返す。適
当なＮ−保護基は当業者によく知られているが、ここにおいては、ｔ−ブチルオ
キシカルボニル（ｔＢＯＣ）およびフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ
）が好ましい。

【００４０】 ペプチド合成機で用いる溶媒、アミノ酸誘導体および４−メチルベンズヒドリ
ル−アミン樹脂は、Applied Biosystems社（Foster City、CA）から購入できる
。以下の側鎖保護アミノ酸：Boc−Arg（Mts）、Fmoc−Arg（Pmc）、Boc−Thr（B
zl）、Fmoc−Thr（t−Bu）、Boc−Ser（Bzl）、Fmoc−Ser（t−Bu）、Boc−Tyr
（BrZ）、Fmoc−Tyr（t−Bu）、Boc−Lys（Cl−Z）、Fmoc−Lys（Boc）、Boc−G
lu（Bzl）、Fmoc−Glu（t−Bu）、Fmoc−His（Trt）、Fmoc−Asn（Trt）およびF
moc−Gln（Trt）は、Applied Biosystems社から購入できる。Boc−His（BOM）は
、Applied Biosystems社.またはBachem社（Torrance，CA）から購入できる。ア
ニソール、ジメチルスルフィド、フェノール、エタンジチオールおよびチオアニ
ソールは、Aldrich Chemical Company（Milwaukee、WI）から得ることができる
。Air Products and Chemicals（Allentown、PA）はＨＦを供給している。エチ
ルエーテル、酢酸およびメタノールは、Fisher Scientific（Pittsburg、PA）か
ら購入できる。

【００４１】 固相ペプチド合成は、ＮＭＰ／ＨＯＢｔ（オプション１）システムおよびｔＢ
ｏｃまたはＦｍｏｃ化学（Applied Biosystems User's Manual for the ABI ４
３０A Peptide Synthesizer、Version １.３B、１９８８年７月１日、第６章、
４９−７０頁、Applied Biosystems社製、Foster City、CAを参照）を用いる自
動ペプチド合成機（Model ４３０A， Applied Biosystems社製，Foster City、C
A）で行い、キャッピングできる。Boc−ペプチド−樹脂はＨＦ（−５℃ないし０
℃にて１時間）を用いて切断できる。水と酢酸とを交互に用いて該樹脂からペプ
チドを抽出でき、その濾液を凍結乾燥できる。Ｆｍｏｃ−ペプチド樹脂は、標準
的な方法（Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems社、１
９９０、６−１２頁）に従って切断できる。ペプチドは、Advanced Chem Tech S
ynthesizer（Model MPS ３５０，Louisville、Kentucky）を用いてアセンブリー
させることもできる。

【００４２】 ペプチドは、Waters Delta Prep ３０００システムを用いるＲＰ−ＨＰＬＣ（
分取および分析用）によって精製できる。Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８分取用カラム
（１０μ、２.２×２５ｃｍ；Vydac社製，Hesperia，CA）を用いてペプチドを単
離することができ、純度はＣ４、Ｃ８またはＣ１８分析用カラム（５μ、０.４
６×２５ｃｍ；Vydac社製）を用いて決定できる。溶媒（Ａ＝０.１％ ＴＦＡ／
水およびＢ＝０.１％ ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）は１.０ｍｌ／分の流速で分析用カ
ラムに流すことができ、１５ｍｌ／分の流速で分取用カラムに流すことができる
。アミノ酸分析は、Waters Pico Tag system上で行い、Maximaプログラムを用い
てプロセシングできる。ペプチドは、気相酸加水分解（１１５℃にて２０−２４
時間）によって加水分解できる。加水分解物は、標準的な方法（Cohenら、The P
ico Tag Method: A Manual of Advanced Techniques for Amino Acid Analysis,
１１−５２頁, Millipore Corporation社, Milford, MA（１９８９））によっ
て誘導化および分析できる。高速原子衝撃分析は、M−Scan，Incorporated（Wes
t Chester，PA）によって行うことができる。質量較正は、ヨウ化セシウムまた
はヨウ化セシウム／グリセロールを用いて行うこともできる。飛行時間検出を用
いるプラズマ吸光イオン化分析は、Applied Biosystems Bio-Ion ２０質量分析
機で行うこともできる。電子スプレー質量分析は、VG-Trio機で行い得る。

【００４３】 また、本発明において有用なペプチド化合物は、今や当該技術分野で知られて
いる方法を用いる組換えＤＮＡ技術を用いて調製できる。例えば、Sambrookら、 Molecular Cloning：A Laboratory Manual 、第２版、Cold Spring Harbor Labor
atory Press（１９８９）を参照されたし。 本発明の化合物を調製するのに有用な非−ペプチド化合物は、当該技術分野で
知られている方法によって調製できる。例えば、リン酸含有アミノ酸およびかか
るアミノ酸を含有するペプチドは、当該技術分野において知られた方法を用いて
調製できる。例えば、BartlettおよびLanden、Biorg. Chem. １４：３５６−３
７７（１９８６）を参照されたし。

【００４４】 上記に参照した化合物は、種々の無機および有機の酸および塩基と塩を形成し
ていてもよい。かかる塩には、有機酸および無機酸、例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、
Ｈ_２ＳＯ_４、Ｈ_３ＰＯ_４、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン酸、
トルエンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸、琥珀酸および酒石酸ならびにカン
ファスルホン酸で調製される塩が含まれる。塩基で調製される塩には、アンモニ
ウム塩、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムおよびカリウム塩、ならびにアル
カリ土類塩、例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩が含まれる。酢酸塩、塩
酸塩およびトリフルオロ酢酸塩が好ましい。該塩は、遊離酸または塩基形態の生
成物と１以上の当量の適当な塩基または酸とを、当該塩が不溶性である溶媒また
は媒質中あるいは水のごとき溶媒中にて反応させ、ついで該水を真空中でまたは
凍結乾燥によって除去するか、または適当なイオン交換樹脂上で、存在する塩の
イオンを他のイオンに交換することによるごとく、慣用手段によって形成できる
。

【００４５】生物学的活性 本発明の化合物の活性は、実施例Ａに記載された側坐核受容体結合アッセイ、
実施例Ｂに記載されたＣ１ａアゴニストアッセイ、実施例Ｃに記載されたＣ１ａ
結合アッセイおよび実施例Ｄに記載された胃内容排出アッセイを含めた種々のス
クリーニングアッセイを行うことによって調べられおよび／または定量される。

【００４６】 膜結合アミリン受容体に特異的に結合する化合物の能力を測定する競合アッセ
イである側坐核（nucleus accumbens）受容体結合アッセイは、１９９３年１１
月２３日に発行された米国特許第５,２６４,３７２号（その開示をここに出典明
示して本明細書の一部とみなす）に記載されている。また、側坐核受容体結合ア
ッセイは以下の実施例Ａに記載されている。アッセイに用いた膜標本の好ましい
源は、側坐核および周囲領域からの膜を含む前脳基底である。アッセイすべき化
合物は、これらの受容体標本への結合につき放射性標識^１２５Ｉ Bolton Hunter
ラットアミリンと競合する。結合量（Ｂ）をリガンドの濃度の対数の関数とし
てプロットした競合曲線は、４変数のロジスティックな等式に対する非線形回帰
（Inplotプログラム：GraphPAD Software、San Diego、California）またはDeLe
anらのALLFITプログラムによる解析（ALLFIT、Version ２.７（NIH、Bethesda、
MD ２０８９２））を用いてコンピューターによって解析する。MunsonおよびRod
bard、Anal. Biochem. １０７：２２０−２３９（１９８０）。その結果を表Ｉ
に報告する。

【００４７】 本発明のペプチド化合物は、実施例Ｂに記載された手法を用いてアゴニスト活
性につき調べることができる。７−膜貫通Ｇ蛋白質結合受容体（ＣＧＲＰ）の原
形質膜標本は、受容体だけではなく、該受容体がアゴニストリガンドによって活
性化された場合の細胞内シグナル伝達プロセスにおける第一ステップを構成する
Ｇ蛋白質も含有する。これらのＧ蛋白質は、通常、休止または不活性の立体配置
のＧＤＰにより占有されるグアニンヌクレオチド結合部位を有する。ＧＰＣＲの
アゴニスト活性化は、この部位からのＧＴＰによるＧＤＰの置き換えに伴う。か
くして、この結合部位についての放射性標識リガンド、いわゆる［^３５Ｓ］−Ｇ
ＴＰγＳの結合の測定は、所与のリガンドについてのアゴニスト効力の測定を構
成する。Ｃ１ａ受容体でのアゴニズムでは、Ｃ１ａ結合試験につき後記したもの
に類似する膜標本を用いる。Ｃ１ａ ｐｃＤＮＡ構築およびトランスフェクショ
ンを従前に記載されたごとく行った（Albrandtら、１９９３、FESS Letters、３
２５：２２５−２３２）。ラットＣｌａ型カルシトニン受容体（Ｃｌａ／２９３
）またはヒトＣｌａ型カルシトニン受容体（１１５４／２９３）の安定した発現
を示すＨＥＫ２９３細胞系は、Ｇ４１８耐性および限界希釈培養法によって選択
された。原形質膜は、ホモジナイズしたＨＥＫ２９３細胞から集め、それを［^{３ ５} Ｓ］−ＧＴＰγＳアッセイにおいて用いた。１０^−５Ｍ付近にて開始する６ｌ
ｏｇ単位にわたる濃度の個々の試験ペプチドを［^３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを結合す
る能力につき調べた。最大アゴニスト特異的結合を１μＭヒトカルシトニンの存
在下にて測定し、構成的な結合を緩衝液単独の存在下にて測定した。ペプチドの
効力（濃度応答曲線についてのＥＣ_５０）は、Prism^ＴＭ（バージョン２.０１、
GraphPAD Softmare、San Diego、CA）を用いて、非線形回帰により計算した。そ
の結果を表Ｉに示す。

【００４８】 本発明のペプチド化合物は、実施例Ｃに記載の手法を用いてＣ１ａ受容体に対
する結合につき調べることができる。該Ｃｌａ受容体は、優位な哺乳動物のカル
シトニン受容体サブタイプである。従前に記載されたように、Ｃｌａ ｐｃＤＮ
Ａ構築およびトランスフェクションが行なわれた（Albrandtら、１９９３、FEBS
Letters）、３２５：２２５−２３２）。ラットＣｌａ型カルシトニン受容体（
Ｃｌａ／２９３）またはヒトＣｌａ型カルシトニン受容体（１１５４／２９３）
の安定した発現を示すＨＥＫ２９３細胞系は、Ｇ４１８耐性および限界希釈培養
法によって選択された。原形質膜は、ホモジナイズされたＨＥＫ２９３細胞から
集められ、受容体結合アッセイに用いた。１０^−６Ｍ付近にて出発して６ｌｏｇ
単位にわたる濃度の個々の試験ペプチドを９６ウェルマイクロタイタープレート
形式およびWallac LKB Betaプレート・カウンターでのシンチレーション計数を
用いて原形質膜標本からの［^１２５Ｉ］−ヒト・カルシトニンを置き換える能力
につき調べた。競合的結合曲線を構築した。非特異結合は、１００ｎＭのカルシ
トニンの存在下にて測定された。ペプチドの効力（競合的結合についてのＩＣ_{５ ０} ）は、Prism^TM（バージョン２.０１、GraphPAD Software、San Diego、CA）を
用いて、非線形回帰により計算した。その結果を表Ｉに報告する。

【００４９】 本発明のペプチド化合物は、例えば、Youngら、Diabetologia、３８（６）：
６４２−６４８（１９９５）に開示された胃内容排出速度を測定する方法を用い
て、アミリン・アゴニスト活性につき評価できる。以下の実施例Ｄに記載された
フェノールレッド法において、覚醒ラットは、ガバージによってメチルセルロー
スおよびフェノールレッド指示薬を含有する無カロリーゲルを受ける。ガバージ
の２０分後に、動物をハロタンを用いて麻酔し、胃を開き、幽門および下部食道
括約筋にてクランプし、取り出し、アルカリ溶液中へ開けた。胃内容量は、５６
０ｎｍの波長での吸収によって測定されたアルカリ溶液中のフェノールレッドの
強度から得られた。トリチウム化グルコース法において、覚醒ラットは水中のト
リチウム化グルコースでガバージされる。ラットを尾によって穏やかに拘束し、
その先端をリドカインを用いて麻酔する。尾の血液から分離した血漿中のトリチ
ウムを種々の時点で集め、ベータカウンターで検出する。通常、試験化合物はガ
バージの約１分前に投与される。その結果を表ＩＩに報告する。

【００５０】 好ましくは、本発明の化合物は、約１ないし１００ｎＭより小さな、より好ま
しくは約１０ｎＭより小さなオーダーで側坐核受容体結合アッセイにおいて活性
を示す。胃内容排出アッセイにおいては、好ましい化合物は、１００μｇ／ラッ
トより小さな、より好ましくは１０μｇ／ラットより小さなオーダーでのＥＤ_{５ ０} 値を示す。

【００５１】処方および投与 本発明に有用な組成物は、（静脈内、筋肉内および皮下を含む）非経口または
鼻腔もしくは経口投与に適する処方の形態、または適当にカプセル化されるか、
経口投与につき公知技術の方法によって調製された処方の形態で簡便に提供でき
る。適当な投与形式は、各患者個人につき医師によって最良に決定できる。医薬
上許容される担体およびその処方は、標準的な処方文献、例えば、E. W. Martin
によるRemington's Pharmaceutical Sciencesに記載されている。また、Wang，Y
.J.およびHanson，M.A. 「Parenteral Formulations of Proteins and Peptides
: Stability and Stabilizers」、Journal of Parenteral Science and Technol
ogy, Technical Report No. １０, supp.４２：２S（１９８８）を参照されたし
。

【００５２】 本発明において有用な化合物は、注射または点滴用の非経口組成物として提供
でき、それは、例えば、不活性油剤、好適にはゴマ油、落花生油、オリーブ油の
ごとき植物油または他の許容できる担体中に懸濁させることができる。好ましく
は、それを水性担体、例えば約５.６ないし７.４のｐＨの等張緩衝液中に懸濁す
る。これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌するか、または濾過滅菌で
きる。該組成物は、ｐＨ緩衝化剤のごとき、生理条件に近づけるために必要な医
薬上許容される補助剤物質を含み得る。有用な緩衝液には、例えば、酢酸ナトリ
ウム／酢酸緩衝液が含まれる。治療上有効量の調製物が経皮注射または送達の後
、多くの時間または日数にわたって血流中に送達されるように、持続性または「
貯蔵」形態の徐放性調製物を用いることができる。

【００５３】 好ましくは、こららの非経口投与形態は、「アミリン・アゴニストペプチド用
の非経口の液体処方」と題する共有の出願特許である、１９９７年１月８日に出
願されたシリアル番号６０／０３５,１４０および１９９８年１月８日に出願さ
れた米国出願シリアル番号０９／００５,２６２（ここに出典明示して本明細書
の一部とみなす）により調製され、それらは、約３.０ないし６.０（より好まし
くは、３.０ないし５.５）の最終組成物のｐＨを得るために、約０.０２ないし
０.５％（w／v）の酢酸、リン酸、クエン酸またはグルタミン酸緩衝液と共に水
系において、各々、約０.０１ないし０.５％（w／v）の化合物、ならびに水性連
続相において約１.０ないし１０％（w／v）の炭水化物または多価アルコール等
張化剤を含む。また、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベンおよびフェノールよりなる
群から選択される約０.００５ないし１.０％（w／v）の抗菌保存剤を患者が多回
投与をやめるのを可能とするように設計された好ましい処方の製品において存在
させる。十分量の注射用水を用いて、所望の濃度の溶液を得る。塩化ナトリウム
ならびに他の賦形剤も所望ならば存在させてもよい。しかしながら、かかる賦形
剤は、ペプチドの全体的な安定性を維持しなけらばならない。液体処方は、実質
的に等張、すなわち、±２０％以内の等張性であり、好ましくは１０％以内の等
張性であろう。最も好ましくは、非経口投与用の処方において、多価アルコール
はマンニトールであり、緩衝液は酢酸緩衝液であり、保存剤は約０.１ないし０.
３w／v％のｍ−クレゾールであって、ｐＨは３.７ないし４.３である。

【００５４】 所望の等張性は、塩化ナトリウム、またはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナ
トリウム、プロピレングリコール、（マンニトールおよびソルビトールのごとき
）ポリオールのごとき他の医薬上許容される薬剤、あるいは他の無機または有機
の溶質を用いて達成できる。塩化ナトリウムが、ナトリウムイオンを含有する緩
衝液用に特に好ましい。所望ならば、前記の組成物の液剤をメチルセルロースの
ごとき増粘剤で粘度を増すことができる。それらは、油中水または水中油のいず
れかの乳化形態において調製してもよい。いずれの非常に様々な医薬上許容され
る乳化剤も、例えば、アラビアゴム粉末、（Tweenのごとき）非イオン界面活性
剤、または（アルカリポリエーテルアルコールスルフェートまたはスルホネート
、例えば、Tritonのごとき）イオン性界面活性剤を含めて使用できる。

【００５５】 本発明に有用な組成物は、一般的に容認された手順に続いて成分を混合するこ
とによって調製される。例えば、選択した成分は、ブレンダーまたは他の標準的
な装置中で単に混合して、濃縮した混合物を得、次いで、水または増粘剤の添加
によって最終の濃度または粘度に調整し、可能な緩衝液でｐＨをコントロールし
、またはさらなる溶質で張性をコントロールしてもよい。

【００５６】 医師による使用では、該組成物は、本発明のある量の化合物、例えば、選択さ
れたレベルでの治療効果を得るために単回または多回投与において有効であろう
化合物を含有する投与単位形態で提供されるであろう。インスリン抵抗性と関連
した高血糖症を含めた高血糖症のコントロールに使用される治療上有効量の本発
明の化合物は、食後グルコース濃度の曲線下面積を比較することによって測定で
きるごとき、コントロールに関して食後グルコースレベルをかなり低下させるも
のである。当業者によって認識されるように、有効量の治療剤は、患者の年齢お
よび体重、患者の身体的状態、得るべき作用および他の因子を含めた多くの因子
で異なるであろう。

【００５７】 有効な単回の、分割したまたは連続投与の化合物は、典型的には、約０.１μ
ｇ／ｋｇ／日ないし約１０００μｇ／ｋｇ／日、好ましくは約１.０μｇ／ｋｇ
／日ないし約１００μｇ／ｋｇ／日の範囲で、単回または多回用量で投与される
であろう。 当業者によって認識されるように、有効量の治療剤は、患者の年齢および体重
、患者の身体的状態、得るべき作用および他の因子を含めた多くの因子で異なる
であろう。経口的に活性な化合物は、経口で摂取され、しかしながら、用量は、
５−１０倍増加し、または前記の比で増加させる（または減少させる）べきであ
る。

【００５８】 本発明を理解するのを助けるために、いくつかの実験結果を記載する以下の実
施例を含む。本発明に関連する実験は、もちろん、何ら公知のまたは後に開発さ
れた発明および発明のかかる変形を限定するように構成されるものではなく、そ
れは当業者の視野内にあり、本明細書に記載され、後記の特許請求された本発明
の範囲内にあると考えるべきである。

【００５９】実施例 実施例１ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cy Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg S
er Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号１）。 上記ペプチドは、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems社製）を用い
て、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチルフェノキシ
アセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０.５５ミリモル／ｇ）
上で組立てた。一般に、合成中シングルカップリングサイクルを用い、溶媒とし
てN−メチルピロリジンを用いるジイソプロピルエチルアミンの存在下のＨＡＴ
Ｕ化学（O−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラ
メチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート）を使用した。しかしながら、
同一位置にて、カップリングは、期待されたほど有効ではなく、二重カップリン
グが必要であった。伸長するペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基の除去）は、ピペ
リジンを用いて達成した。N末端を最終カップリングサイクルにおいて、（ビス
−ｔＢｏｃ）−リジンを用いて比較した。完了したペプチド樹脂の最終的脱保護
は、標準的方法（切断技術の導入、Applied Biosystems社）によるトリエチルシ
ラン（０.２ｍｌ）、エタンジチオール（０.２ｍｌ）、アニソール（０.２ｍｌ
）、水（０.２ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）の混合物を用いて達
成した。該ペプチドは、エーテル／水（５０ｍｌ）で沈殿させ遠心した。沈殿は
、氷酢酸に復元し、凍結乾燥し、得られた粗ペプチドを水に再溶解させ、トリス
−カルボエトキシホスフィンで軽く処理し、遊離チオールの完全な生成を保証し
た。ｐＨ６.５のフェリシアン化カリウムへの曝露は、モノ−ジスルフィド架橋
したペプチドに環化をもたらした。酸性化およびBiorad AG４X４アニオン交換樹
脂での処理は、いずれの残留するＦｅ^２＋およびＦｅ^３＋イオンも取り除いた。
凍結乾燥法は、粗ペプチドを与えた。粗純度は約７５％であった。

【００６０】 精製工程および分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒
Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。 ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−１８カラムに適用し、精製した（４０分
間にわたる溶媒Ａ中の１０％ないし４０％の溶媒Ｂ）。画分の純度は、Ｃ−１８
分析用カラムを用いてアイソクラティック的に決定した。純粋な画分をプールし
て、上記のペプチドを供給した。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ
（３０分間にわたる溶媒Ａ中の５％ないし９５％溶媒Ｂの勾配）は、１２.９６
分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレー質量分
析（Ｍ）：計算値 ２２７２.１２；実測値 ２２７３.７６（Ｍ＋Ｈ）。

【００６１】実施例２ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号２）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）は、１
８.４８分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：２３９８.２；実測値 ２３９９.９（Ｍ＋Ｈ）。

【００６２】実施例３ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg Ser −NH_２（配列番号３）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわ
たる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１６.９３分間の観察し
た保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレー質量分析（Ｍ）：１
８３６.９１；実測値 １８３８.９（Ｍ＋Ｈ）。

【００６３】実施例４ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： イソカプロイル−Leu Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala
Arg Ser−NH_２ （配列番号４）。 上記ペプチドは、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems社製）を用い
て、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチルフェノキシ
アセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０.５５ミリモル／ｇ）
上で組立てた。一般に、合成中シングルカップリングサイクルを用い、溶媒とし
てN−メチルピロリジンを用いるジイソプロピルエチルアミンの存在下のＨＡＴ
Ｕ化学（O−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラ
メチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート）を使用した。しかしながら、
同一位置にて、カップリングは、期待されたほど有効ではなく、二重カップリン
グが必要であった。伸長するペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基の除去）は、ピペ
リジンを用いて達成した。N末端を最終的カップリングサイクルにおいて、イソ
カプロイル−ロイシンを用いて完成した。完了したペプチド樹脂の最終的脱保護
は、標準的方法（切断技術の導入、Applied Biosystems社）によるトリエチルシ
ラン（０.２ｍｌ）、エタンジチオール（０.２ｍｌ）、アニソール（０.２ｍｌ
）、水（０.２ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）の混合物を用いて達
成した。該ペプチドは、エーテル／水（５０ｍｌ）で沈殿させ遠心した。沈殿は
、氷酢酸に復元し、凍結乾燥し、得られた粗ペプチドを水に再溶解させた。凍結
乾燥は、粗ペプチドを与えた。粗純度は約７５％であった。

【００６４】 精製工程および分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒
Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。 ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−１８カラムに適用し、精製した（４０分
間にわたる溶媒Ａ中の１０％ないし４０％の溶媒Ｂ）。画分の純度は、Ｃ−１８
分析用カラムを用いてアイソクラティック的に決定した。純粋な画分をプールし
て、上記のペプチドを供給した。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ
（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、２９.１
７分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレー質量
分析（Ｍ）：計算値 １７１６.００；実測値 １７１６.８５（Ｍ＋Ｈ）。

【００６５】実施例５ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号５）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、２
０.５７分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：２３４３.１６；実測値 ２３４４.２４（Ｍ＋Ｈ）。

【００６６】実施例６ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： Leu Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg Ser−NH_２ （
配列番号６）。 上記ペプチドは、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems社製）を用い
て、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチルフェノキシ
アセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０.５５ミリモル／ｇ）
上で組立てた。一般に、合成中シングルカップリングサイクルを用い、溶媒とし
てN−メチルピロリジンを用いるジイソプロピルエチルアミンの存在下のＨＡＴ
Ｕ化学（O−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラ
メチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート）を使用した。しかしながら、
同一位置にて、カップリングは、期待されたほど有効ではなく、二重カップリン
グが必要であった。伸長するペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基の除去）は、ピペ
リジンを用いて達成した。完了したペプチド樹脂の最終的脱保護は、標準的方法
（切断技術の導入、Applied Biosystems社）によるトリエチルシラン（０.２ｍ
ｌ）、エタンジチオール（０.２ｍｌ）、アニソール（０.２ｍｌ）、水（０.２
ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）の混合物を用いて達成した。該ペプ
チドは、エーテル／水（５０ｍｌ）で沈殿させ遠心した。沈殿は、氷酢酸に復元
し、凍結乾燥し、得られた粗ペプチドを水に再溶解させた。凍結乾燥は、粗ペプ
チドを与えた。粗純度は約７５％であった。

【００６７】 精製工程および分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒
Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。 ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−１８カラムに適用し、精製した（４０分
間にわたる溶媒Ａ中の１０％ないし４０％の溶媒Ｂ）。画分の純度は、Ｃ−１８
分析用カラムを用いてアイソクラティック的に決定した。純粋な画分をプールし
て、上記のペプチドを供給した。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ
（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１６.９
６分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレー質量
分析（Ｍ）：計算値 １６１７.９３；実測値 １６１８.７３（Ｍ＋Ｈ）。

【００６８】実施例７ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg−NH
_２（配列番号７）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわ
たる溶媒Ａ中の３５％ないし６５％溶媒Ｂの勾配）は、８.６３分間の観察した
保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算
値 １７４９.８８；実測値 １７５０.９６（Ｍ＋Ｈ）。

【００６９】実施例８ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Ala Phe Leu Val Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号８）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、２
０.７６分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２３５７.１７；実測値 ２３５７.６（Ｍ＋Ｈ）。

【００７０】実施例９ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号９）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１
９.６６分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２３１３.１５；実測値 ２３１４.７７（Ｍ＋Ｈ）。

【００７１】実施例１０ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ala Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号１０）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１
７.３５分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２３８４.１８；実測値 ２３８５.６３（Ｍ＋Ｈ）。

【００７２】実施例１１ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val His
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号１１）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、２
１.０６分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２３８１.１４；実測値 ２３８２.３０（Ｍ＋Ｈ）。

【００７３】実施例１２ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Ala
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号１２）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１
６.１９分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２３１５.１２；実測値 ２３１５.９４（Ｍ＋Ｈ）。

【００７４】実施例１３ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号１３）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、２
１.０２分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２２７２.０８；実測値 ２２７２.９（Ｍ＋Ｈ）。

【００７５】実施例１４ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号１４）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１
６.７６分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２４００.１８；実測値 ２４００.１３。

【００７６】実施例１５ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ser Ala Gly Tyr−NH_２ （配列番号１５）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１
８.７０分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２３８４.１８；実測値 ２３８５.０４（Ｍ＋Ｈ）。

【００７７】実施例１６ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Ala Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号１６）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１
８.８５分間の観察した保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレ
ー質量分析（Ｍ）：計算値 ２３７２.１５；実測値 ２３７２.９７（Ｍ＋Ｈ）。

【００７８】実施例１７ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号１７）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２２７０.１４。

【００７９】実施例１８ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号１８）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２２５１.１０。

【００８０】実施例１９ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２）（配列番号1９）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２２８４.１６。

【００８１】実施例２０ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号２０）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２２６５.１１。

【００８２】実施例２１ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Met Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号２１）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２３０２.１１。

【００８３】実施例２２ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Met Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号２２）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２２８３.０７。

【００８４】実施例２３ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号２３）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２４１２.２２。

【００８５】実施例２４ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val His
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号２４）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２３９３.１７。

【００８６】実施例２５ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg
Ser Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号２５）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２３４１.１８。

【００８７】実施例２６ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Lys Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val His
Ser Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号２６）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（Ｃ
Ｈ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用
ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配
）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）
：計算値 ２３２２.１３。

【００８８】実施例２７ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号２７）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２１４２.０
５。

【００８９】実施例２８ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号２８）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２１２３.０
０。

【００９０】実施例２９ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg Ser
Ser Gly Tyr−NH_２ （配列番号２９）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２１５６.０
６。

【００９１】実施例３０ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号３０）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２１３７.０
２。

【００９２】実施例３１ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Met Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号３１）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２１７４.０
２。

【００９３】実施例３２ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Met Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号３２）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２１５４.９
８。

【００９４】実施例３３ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号３３）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２２８４.１
２。

【００９５】実施例３４ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Leu Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val His Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号３４）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２２６５.０
８。

【００９６】実施例３５ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号３５）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２２１３.０
８。

【００９７】実施例３６ 以下の配列を有する、モノ−ジスルフィド架橋しアミド化したペプチドの調製：
Cys Asn Val Ala Thr Cys Ala Thr Ala Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val His Ser
Ser Gly Tyr−NH_２（配列番号３６）。 上記ペプチドは、実施例１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、環化させ、
精製した。該配列は、第二の保護システイン残基の付加後に完成した。分析に用
いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％Ｔ
ＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０
分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、生成物ペプ
チドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値 ２１９４.０
３。

【００９８】実施例３７ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： イソカプロイル−Leu Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala
His Ser−NH_２ （配列番号３７）。 上記ペプチドは、実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
Ｎ末端は、最終的カップリングサイクルにおいてイソカプロイル−ロイシンを用
いて完成した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ
（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分
析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの
勾配）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（
Ｍ）：計算値 １６９５.９６。

【００９９】実施例３８ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： イソカプロイル−Val Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala
Arg Ser−NH_２ （配列番号３８）。 上記ペプチドは、実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
Ｎ末端は、最終的カップリングサイクルにおいてイソカプロイル−ロイシンを用
いて完成した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ
（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分
析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの
勾配）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（
Ｍ）：計算値 １７００.９８。

【０１００】実施例３９ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： イソカプロイル−Val Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala
His Ser−NH_２（配列番号３９）。 上記ペプチドは、実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
Ｎ末端は、最終的カップリングサイクルにおいてイソカプロイル−ロイシンを用
いて完成した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ
（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分
析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの
勾配）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（
Ｍ）：計算値 １６８１.９４。

【０１０１】実施例４０ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： イソカプロイル−Met Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala
Arg Ser−NH_２ （配列番号４０）。 上記ペプチドは、実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
Ｎ末端は、最終的カップリングサイクルにおいてイソカプロイル−ロイシンを用
いて完成した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ
（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分
析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの
勾配）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（
Ｍ）：計算値 １７３２.９５。

【０１０２】実施例４１ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： イソカプロイル−Met Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala
His Ser−NH_２（配列番号４１）。 上記ペプチドは、実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
Ｎ末端は、最終的カップリングサイクルにおいてイソカプロイル−ロイシンを用
いて完成した。分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ
（ＣＨ_３ＣＮ中０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分
析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの
勾配）を行い、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（
Ｍ）：計算値 １７１３.９１。

【０１０３】実施例４２ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： Leu Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His Ser−NH_２（
配列番号４２）。 上記ペプチドは、実施例６と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中
０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、
生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値
１５９８.８９。

【０１０４】実施例４３ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： Val Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg Ser−NH_２ （
配列番号４３）。 上記ペプチドは、実施例６と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中
０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、
生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値
１６０３.９２。

【０１０５】実施例４４ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： Val Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His Ser−NH_２（
配列番号４４）。 上記ペプチドは、実施例６と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中
０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、
生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値
１５８４.８７。

【０１０６】実施例４５ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： Met Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala Arg Ser−NH_２（
配列番号４５）。 上記ペプチドは、実施例６と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中
０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、
生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値
１６３５.８９。

【０１０７】実施例４６ 以下の配列を有するアミド化したペプチドの調製： Met Ser Thr Ala Ala Thr Ala Arg Leu Ala Ala Phe Leu Ala His Ser−NH_２（
配列番号４６）。 上記ペプチドは、実施例６と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applie
d Biosystems社製）を用いて、４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏ
ｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabioche
m、０.５５ミリモル／ｇ）上で組立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。
分析に用いたのは、溶媒Ａ（水中０.１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＣＨ_３ＣＮ中
０.１％ＴＦＡ）であった。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）を行い、
生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレー質量分析（Ｍ）：計算値
１６１６.８５。

【０１０８】実施例Ａ ラット側坐核膜（アミリン受容体）への結合 アミリン受容体への化合物の結合の評価は、以下の通り行った。^１２５Ｉ−Ｂ
Ｈ−ラットアミリンは、Amersham Corporation（Arlington Heights、IL）から
購入した。使用した時点での特異活性は、１９５０ないし２０００Ｃｉ／ミリモ
ルの範囲にあった。非標識参照ペプチドは、BACHEM Inc.（Torrance、CA）およ
びPeninsula Laboratories（Belmont、CA）から得た。 雄性Sprague Dawleyラット（２００ないし２５０グラム）を断頭により犠牲に
した。脳は冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に移した。切断は、腹側表面から
、嗅索と側面で接し、これらの索から内側に４５度の角度にて伸ばした視床下部
の吻側に行った。側坐核および周囲領域を含む前脳基底組織を重量測定し、氷冷
の２０ｍＭ ＨＰＥＴＳ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ酸、２３℃にてＮａＯＨで
ｐＨを７.４に調整）中でホモジナイズした。膜は、４８０００×ｇにて１５分
間の遠心によって新たな緩衝液で３回洗浄した。最終的な膜ペレットを０.２ｍ
Ｍフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）を含有した２０ｍＭ ＨＰ
ＥＴＳ緩衝液に懸濁した。

【０１０９】 ^１２５Ｉ−アミリン結合を測定するために、４ｍｇのオリジナルの湿重量の組
織からの膜を、０.５ｍｇ／ｍｌバシトラシン、０.５ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブ
ミンおよび０.２ｍＭ ＰＭＳＦを含有する２０ｍＭ ＨＰＥＴＳ緩衝液中で１２
ないし１６ｐＭの^１２５Ｉ−アミリンとインキュベートした。溶液を２３℃にて
６０分間インキュベートした。インキュベーションは、放射性標識したペプチド
の特異的結合を低下させるために、０.３％ポリエチレンイミン中で４時間予め
浸漬させたＧＦ／Ｂガラスファイバーフィルター（Whatman Inc.、Clifton、NJ
）を通しての濾過によって終了した。フィルターを濾過直前に５ｍｌ冷ＰＢＳで
、次いで濾過直後に１５ｍｌ冷ＰＢＳで洗浄した。フィルターを取り出し、７７
％のカウント効率にてガンマカウンターで放射活性を調べた。ＩＣ_５０として報
告した結果を表Ｉに示す。

【０１１０】実施例Ｂ ［^３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ Ｃ１ａアゴニスト試験 化合物−対−Ｃ１ａ受容体のアゴニスト活性の評価は、以下の通り行った： これらの試験に用いた参照ペプチドは、Bachem（Torrance、CA）から購入した
。他のすべての化学薬品は最高級の市販等級であった。［^３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ
は、NEN Life Science Products社、Pittsburgh、PAから購入した。［^１２５Ｉ
］−ヒトカルシトニンは、Amersham Pharmacia Biotech社、Piscataway、NJから
購入した。

【０１１１】 Ｃｌａ ｐｃＤＮＡ構築およびトランスフェクションのための方法は、従前に
記載されている（Albrandtら、１９９３、FEBS Letters、３２５：２２５−２３
２）。ラットＣｌａ型カルシトニン受容体（Ｃｌａ／２９３）またはヒトＣｌａ
型カルシトニン受容体（１１５４／２９３）を安定して発現するＨＥＫ２９３細
胞系は、Ｇ４１８耐性および限界希釈培養法によって選択した。

【０１１２】 密集細胞をＰＢＳ中の５ｍＭ ＥＤＴＡでのインキュベーションによって組織
培養フラスコから分離した。細胞は、氷冷のｐＨ７.４の２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ中
でPolytronホモジナイザーでホモジナイズした。原形質膜は、新たな緩衝液で洗
浄し、４８,０００×ｇで１５分間遠心する３サイクルを用いて集めた。最終的
な膜ペレットは、０.２ｍＭ フェニルメチルスルゴニルフルオリド（ＰＭＳＦ）
を含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝剤に再懸濁し、−７０℃にて貯蔵した。

【０１１３】 アッセイ緩衝液は、ｐＨ７.４の１μＭ ＧＤＰ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ Ｍ
ｇＣｌ_２、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓおよび１５０ｍＭ ＮａＣｌを含有した。膜（７
.５μｇ膜蛋白質／ウェル）、［^３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（２００ｐＭ）およびペ
プチドは、９６ウェルのマイクロタイタープレート中の２００μｌの緩衝液と合
わせた。室温にて７５分間のインキュベーションの後、ウェル内容物は、Tomtec
Mach ＩＩプレートハーベスター（Hamden、CT）を用いて、ＧＦ／Ｂガラスファ
イバーパッド上に採取した。乾燥したパッドは、シンチラントと合わせ、Wallac
LKB Beta Plateシンチレーションカウンターでカウントした。濃度応答曲線で
は、試料は、１０^−６または１０^−７Ｍにて出発する６ｌｏｇ濃度にわたって二
連にて行われた。最大アゴニスト特異的結合を１μＭヒトカルシトニンの存在下
にて測定し、緩衝液単独の存在下にて構成的結合を測定した。

【０１１４】 ペプチドの能力（競合的結合についてのＩＣ_５０、および濃度‐反応曲線につ
いてのＥＣ_５０）は、Prism（バージョン２.０１、GraphPAD Software、San Die
go、CA）を用いて、非線形回帰により計算した。 ＥＤ_５０として報告した結果を表Ｉに示す。

【０１１５】実施例Ｃ Ｃｌａ／２９３競合的結合試験： 化合物をＣ１ａ受容体への結合における競合につき以下のごとく調べた： これらの試験に用いた参照ペプチドは、Bachem（Torrance、CA）から購入した
。他のすべての化学薬品は最高級の市販等級であった。［^３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ
はNEN Life Science Products社、Pittsburgh、PAから購入した。［^１２５Ｉ］
−ヒトカルシトニンは、Amersham Pharmacia Biotech社、Piscataway、NJから購
入した。 Ｃｌａ ｐｃＤＮＡ構築およびトランスフェクションのための方法は従前に記
載されている（Albrandtら、１９９３）。ラットＣｌａ型カルシトニン受容体（
Ｃｌａ／２９３）またはヒトＣｌａ型カルシトニン受容体（１１５４／２９３）
を安定して発現するＨＥＫ２９３細胞系は、Ｇ４１８耐性および限界希釈培養法
によって選択した。 密集細胞は、ＰＢＳ中の５ｍＭ ＥＤＴＡでのインキュベーションによりイン
キュベーションによって組織培養フラスコから分離した。細胞は、Polytronホモ
ジナイザーでｐＨ７.４の氷冷２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ中でホモジナイズした。原形
質膜は、新たな緩衝液中で洗浄し、４８,０００×ｇにて１５分間遠心する３サ
イクルを用いて集めた。最終的な膜ペレットは、０.２ｍＭ フェニルメチルスル
ゴニルフルオリド（ＰＭＳＦ）を含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝剤に再懸濁
し、−７０℃にて貯蔵した。

【０１１６】 アッセイ緩衝液は、ｐＨ７.４の、５μｇ／ｍｌベスタチン、１μｇ／ｍｌフ
ォスフォラミドン、１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（フラクションV）、１
ｍｇ／ｍｌのバシトラシン、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２および２０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含
有した。膜（２−５μｇ膜蛋白質／ウェル）、［^１２５Ｉ］−ヒトカルシトニン
（２０ｐＭ）およびペプチドを９６ウェルのマイクロタイタープレート中の２０
０μｌの緩衝液と合わせた。室温にて６０分間のインキュベーションの後、ウェ
ル内容物は、Tomtec Mach ＩＩプレートハーベスター（Hamden、CT）を用いて、
ＧＦ／Ｂガラスファイバーパッド上に採取した。乾燥したパッドは、シンチラン
トと合わせ、Wallac LKB Beta Plateシンチレーションカウンター（Gaithersbur
g、MD）でカウントした。濃度応答曲線では、試料は、１０^−６または１０^−７
Ｍにて出発する６ｌｏｇ濃度にわたって二連にて行った。非特異的結合を１００
ｎＭヒトカルシトニンの存在下にて測定した。 ＩＣ_５０として報告した結果を表Ｉに示す。

【０１１７】

【表１】

【０１１８】実施例Ｄ フェノールレッド胃内容排出アッセイ： 胃内容排出は、Scarpignatoらのオリジナルの方法（Arch. Int. Pharmacodyn.
Ther. ２４６：２８６−２９５（１９８０））の修飾（Plourdeら、Life Sci.
５３：８５７−８６２（１９９３））を用いて測定した。覚醒ラットは、ガバー
ジによって、１.５％ メチルセルロース（M−０２６２、Sigma Chemical Co、St
. Louis、MO）および０.０５％ フェノールレッド指示薬を含有する１.５ｍｌの
無カロリーゲルを受けた。ガバージの２０分後、ラットを５％ハロタンを用いて
麻酔し、胃を開け、動脈鉗子を用いて幽門および下部食道括約筋にてクランプし
、取り出し、固定容量まで作成したアルカリ溶液中へ開けた。胃内容量は、５６
０ｎｍの波長での吸光度によって測定されたアルカリ溶液中のフェノールレッド
の強度から得た。大部分の実験において、胃内容物は透明であった。他の実験に
おいて、粒状の胃内容物を遠心して、吸光度測定のために溶液を澄明とした。希
釈された胃内容物が濁ったままである場合、フェノールレッドによる分光学的吸
光度をアルカリ性希釈液−対−酸性化した希釈液中に存在するものの間の差とし
て導いた。

【０１１９】 ７匹のラットに対する別々の実験において、胃および小腸を摘出し、アルカリ
溶液に開けた。ガバージの２９分以内に上部胃腸管から回収できたフェノールレ
ッドの量は８９±４％であり；腸管腔表面に回収しがたく結合したらしい染料は
残りを説明できる。この小さな損失を補正するために、２０分後に残留している
胃内容量のパーセントを同一実験におけるガバージ直後に犠牲にした対照ラット
から回収した胃内容量の分数として表した。パーセント胃内容残量=（２０分で
の吸光度）／（０分での吸光度）。ＥＤ_５０データを示すそれらの化合物では、
胃内容排出についての用量反応曲線は、最小二乗反復ルーチン（ALLFIT、v２.７
、NIH、MD）を用いる４変数ロジスティックモデルにフィットさせて、ＥＣ_５０
を導いた。ＥＣ_５０は対数−正規分布であるので、対数の±標準誤差で表す。ペ
アでの比較は、分散の片側分析およびStudent−Newman−Keulsの多重比較検定（
Instat v２.０、GraphPad Software、San Diego、CA）を用いて、有意レベルと
してＰ＜０.０５を用い行った。

【０１２０】 用量反応試験についての参照点として、０.１５Ｍ生理食塩水に溶解したラッ
トアミリン（Bachem、Torrance、CA）を、２０時間絶食したHarlan Sprague Daw
leyラット（非糖尿病）および６時間絶食した糖尿病ＢＢラットにガバージの５
分前にて、０、０.０１、０.１、１０または１００μｇの用量で０.１ｍｌの皮
下ボーラスとして投与した。皮下アミリン注射をフェノールレッド指示薬でのガ
バージの５分前に与えた場合、用量依存的な抑制の胃内容排出であった（データ
は示さず）。胃内容排出の抑制を１μｇのアミリンを投与した正常なＨＳＤラッ
トにおいて、および１０μｇを投与した糖尿病ラットにおいて完了した（Ｐ＝０
.２２、０.１４）。正常ラットにおける胃内容排出の阻害のＥＤ_５０は、０.４
３μｇ（０.６０ナノモル／ｋｇ）±０.１９ ｌｏｇ単位であり、糖尿病ラット
では２.２μｇ（２.３ナノモル／ｋｇ）±０.１８ ｌｏｇ単位であった。

【０１２１】 （ラットまたはヒト）アミリンおよび単離されたヒラメ筋におけるアミリン様
作用を示す（サケカルシトニン、ＣＧＲＰおよびラットカルシトニンを含めた）
化合物が、本覚醒ラットモデルにおいて胃内容排出を用量依存的に阻害すること
を観察した。ＣＧＲＰアゴニストとして作用するが、アミリンまたはカルシトニ
ン・アゴニストとして作用しないことが観察されているアドレノメデュリンは、
このモデルで用いた最大用量（１００μｇ）にて胃内容排出を阻害しない（この
モデルの胃内容排出の阻害がＣＧＲＰ受容体によって媒介することがありそうも
ないことを示す）。 結果を表ＩＩに示す。

【０１２２】

【表２】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ， ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｄ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ， ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｋ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ， ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 キャスリン・エス・プリケット アメリカ合衆国92126カリフォルニア州サ ンディエゴ、トレイルブラッシュ・テラス 7612番 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA07 BA01 BA02 BA18 CA59 DB31 DB33 NA14 ZA66 ZC35 4H045 AA10 AA30 BA17 DA30 EA27 FA34 FA58 FA61 FA81 GA25 HA03

Claims (82)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式： X_１−Xaa_１−X_２−Xaa_２−X_３−Xaa_３−X_４−Xaa_４−X_５−Xaa_５−X_６−NH_２
   ［式中、X_１は、Lys、Argまたは不存在であり； X_２は、Xaa_６Xaa_７Xaa_８Xaa_９（配列番号４７）またはZ−Xaa_１０SerThrであ
   り、但し、X_２がZ−Xaa_１０Ser−Thrであるならば、X_１およびXaa_１は共に不存
   在であり； X_３は、AlaThr、AlaSer、SerMet、GluThrまたはValThrであり； X_４は、ArgLeuAla、HisLeuAla、ArgIleAla、LysIleAla、ArgMetAla、HisMetAl
   a、LysMetAlaまたはArgLeuThrであり； X_５は、PheLeu、PheIle、PheMet、TyrLeu、TyrIle、TyrMet、TrpMet、TrpIle
   またはTrpMetであり； X_６は、ArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）、LysSerSerGlyTyr（配列番号４９
   ）、HisSerSerGlyTyr（配列番号５０）、ProSerSerGlyTyr（配列番号５１）、Ar
   gSerArgGlyTyr（配列番号５２）、ArgThrSerGlyTyr（配列番号５３）、ArgAlaSe
   rGlyTyr（配列番号５４）、AlaSerSerGlyTyr（配列番号５５）、ArgSerAlaGlyTy
   r（配列番号５６）、HisSerAlaGlyTyr（配列番号５７）、ArgSerGlyTyr（配列番
   号５８）、ArgSer、LysSer、HisSer、ArgThr、ProSerまたはArgであり； Xaa_１は、Cysまたは不存在であり； Xaa_２は、CysまたはAlaであり； Xaa_３は、Gln、AlaまたはAsnであり； Xaa_４は、Asn、AlaまたはGlnであり； Xaa_５は、Val、Ala、Ile、Met、Leu、ペンチルGly、またはt−ブチルGlyであ
   り； Xaa_６は、Asn、GlnまたはAspであり； Xaa_７は、Thr、Ser、Met、Val、LeuまたはIleであり； Xaa_８は、AlaまたはValであり； Xaa_９は、ThrまたはSerであり； Xaa_１０は、Leu、Val、MetまたはIleであり；および Zは、約１ないし８個の炭素原子のアルカノイル基または不存在である］ で表される化合物またはその医薬上許容される塩。
2. 【請求項２】 X_３がAlaThrである請求項１記載の化合物。
3. 【請求項３】 X_４がArgLeuAlaである請求項２記載の化合物。
4. 【請求項４】 X_５がPheLeuである請求項３記載の化合物。
5. 【請求項５】 X_６がArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）、HisSerSer GlyTyr（配列番号５０）、ArgSerまたはHisSerである請求項４記載の化合物。
6. 【請求項６】 X_６が、ArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）またはArgSerであ
   る請求項５記載の化合物。
7. 【請求項７】 X_６が、ArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）またはHis SerSerGlyTyr（配列番号５０）である請求項５記載の化合物。
8. 【請求項８】 Xaa_１がCysである請求項７記載の化合物。
9. 【請求項９】 Xaa_２がCysである請求項８記載の化合物。
10. 【請求項１０】 Xaa_１およびXaa_２が、ジスルフィド架橋を形成する請求項
    ９記載の化合物。
11. 【請求項１１】 X_２が、AsnThrAlaThr（配列番号５９）、AsnValAlaThr（
    配列番号６０）、AsnLeuAlaThr（配列番号６１）またはAsnMetAlaThr（配列番号
    ６２）である請求項９記載の化合物。
12. 【請求項１２】 Xaa_３がAlaまたはGlnである請求項１１記載の化合物。
13. 【請求項１３】 Xaa_４がAlaまたはAsnである請求項１２記載の化合物。
14. 【請求項１４】 Xaa_５がAlaまたはValである請求項１３記載の化合物。
15. 【請求項１５】 X_２が、AsnThrAlaThr（配列番号５９）またはAsnVal AlaThr（配列番号６０）である請求項１４記載の化合物。
16. 【請求項１６】 Xaa_１およびXaa_２が、ジスルフィド架橋を形成する請求項
    １５記載の化合物。
17. 【請求項１７】 X_６がArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）である請求項１５
    記載の化合物。
18. 【請求項１８】 X_２がAsnThrAlaThr（配列番号５９）である請求項１７記
    載の化合物。
19. 【請求項１９】 X_１がLysである請求項１８記載の化合物。
20. 【請求項２０】 Xaa_３がAlaである請求項１９記載の化合物。
21. 【請求項２１】 Xaa_４がAlaである請求項２０記載の化合物。
22. 【請求項２２】 Xaa_５がAlaである請求項２１記載の化合物。
23. 【請求項２３】 Xaa_１およびXaa_２が、ジスルフィド架橋を形成する請求項
    ２２記載の化合物。
24. 【請求項２４】 X_２がAsnValAlaThr（配列番号６０）である請求項１２記
    載の化合物。
25. 【請求項２５】 Xaa_３がGlnである請求項２４記載の化合物。
26. 【請求項２６】 Xaa_４がAsnである請求項２５記載の化合物。
27. 【請求項２７】 Xaa_５がValである請求項２６記載の化合物。
28. 【請求項２８】 X_１が不存在である請求項２７記載の化合物。
29. 【請求項２９】 Xaa_１およびXaa_２が、ジスルフィド架橋を形成する請求項
    ２８記載の化合物。
30. 【請求項３０】 X_６が、ArgSerまたはHisSerである請求項５記載の化合物
    。
31. 【請求項３１】 Xaa_１がCysである請求項３０記載の化合物。
32. 【請求項３２】 Xaa_２がCysである請求項３１記載の化合物。
33. 【請求項３３】 Xaa_１およびXaa_２が、ジスルフィド架橋を形成する請求項
    ３２記載の化合物。
34. 【請求項３４】 X_２が、AsnThrAlaThr（配列番号５９）またはAsnVal AlaThr（配列番号６０）である請求項３２記載の化合物。
35. 【請求項３５】 X_６がArgSerである請求項３４記載の化合物。
36. 【請求項３６】 X_２がAsnThrAlaThr（配列番号５９）である請求項３５記
    載の化合物。
37. 【請求項３７】 Xaa_３がAlaである請求項３６記載の化合物。
38. 【請求項３８】 Xaa_４がAlaである請求項３７記載の化合物。
39. 【請求項３９】 Xaa_５がAlaである請求項３８記載の化合物。
40. 【請求項４０】 Xaa_１およびXaa_２が、ジスルフィド架橋を形成する請求項
    ３９記載の化合物。
41. 【請求項４１】 X_１が不存在である請求項５記載の化合物。
42. 【請求項４２】 Xaa_１が不存在である請求項４１記載の化合物。
43. 【請求項４３】 X_６が、ArgSerまたはHisSerである請求項４２記載の化合
    物。
44. 【請求項４４】 X_２がZ−Xaa_１０SerThrである請求項４３記載の化合物。
45. 【請求項４５】 Xaa_１０が、Leu、ValまたはMetである請求項４４記載の化
    合物。
46. 【請求項４６】 Xaa_４がAlaである請求項４５記載の化合物。
47. 【請求項４７】 Xaa_３がAlaである請求項４６記載の化合物。
48. 【請求項４８】 Xaa_５がAlaである請求項４７記載の化合物。
49. 【請求項４９】 X_６がArgSerである請求項４８記載の化合物。
50. 【請求項５０】 Xaa_１０がLeuである請求項４９記載の化合物。
51. 【請求項５１】 X_１が不存在である請求項１記載の化合物。
52. 【請求項５２】 Xaa_１が不存在である請求項５１記載の化合物。
53. 【請求項５３】 X_２がZ−Xaa_１０SerThrである請求項５２記載の化合物。
54. 【請求項５４】 X_２がXaa_６Xaa_７Xaa_８Xaa_９（配列番号４７）である請求
    項１記載の化合物。
55. 【請求項５５】 Xaa_６がAsnであり、Xaa_８がAlaであって、Xaa_９がThrであ
    る請求項５４記載の化合物。
56. 【請求項５６】 配列番号１ないし４６から選択されるアミノ酸配列を有す
    る請求項１記載の化合物。
57. 【請求項５７】 配列番号１ないし１６から選択されるアミノ酸配列を有す
    る請求項５６記載の化合物。
58. 【請求項５８】 配列番号１ないし６から選択されるアミノ酸配列を有する
    請求項５７記載の化合物。
59. 【請求項５９】 Xaa_３がAlaまたはGlnであり、Xaa_４がAlaまたはAsnであっ
    て、Xaa_５がAlaまたはValである請求項１記載の化合物。
60. 【請求項６０】 Xaa_４がAlaである請求項５９記載の化合物。
61. 【請求項６１】 Xaa_３がAlaである請求項６０記載の化合物。
62. 【請求項６２】 Xaa_５がAlaである請求項６１記載の化合物。
63. 【請求項６３】 Xaa_３がGlnである請求項５９記載の化合物。
64. 【請求項６４】 Xaa_５がValである請求項６３記載の化合物。
65. 【請求項６５】 Xaa_４がAsnである請求項６４記載の化合物。
66. 【請求項６６】 X_４がArgLeuAlaである請求項１記載の化合物。
67. 【請求項６７】 X_５がPheLeuである請求項１記載の化合物。
68. 【請求項６８】 X_６が、ArgSerSerGlyTyr（配列番号４８）、HisSer SerGlyTyr（配列番号５０）、ArgSerまたはHisSerである請求項１記載の化合物
    。
69. 【請求項６９】 X_２が、AsnThrAlaThr（配列番号５９）、AsnValAlaThr（
    配列番号６０）、AsnLeuAlaThr（配列番号６１）またはAsnMetAlaThr（配列番号
    ６２）である請求項１記載の化合物。
70. 【請求項７０】 X_２が、AsnThrAlaThr（配列番号５９）またはAsnVal AlaThr（配列番号６０）である請求項６９記載の化合物。
71. 【請求項７１】 Xaa_１がCysである請求項１記載の化合物。
72. 【請求項７２】 Xaa_２がCysである請求項７２記載の化合物。
73. 【請求項７３】 Xaa_１およびXaa_２が、ジスルフィド架橋を形成する請求項
    ７３記載の化合物。
74. 【請求項７４】 X_２が不存在である請求項１記載の化合物。
75. 【請求項７５】 Xaa_１が不存在である請求項７４記載の化合物。
76. 【請求項７６】 Xaa_２がAlaである請求項７５記載の化合物。
77. 【請求項７７】 請求項１、５６、５７および５８のうちいずれか１記載の
    化合物および医薬上許容される担体を含むことを特徴とする医薬組成物。
78. 【請求項７８】 治療を必要とする対象における糖尿病を治療する方法であ
    って、請求項１、５６、５７または５８のうちいずれか１記載の化合物の治療上
    有効量を該対象に投与することを含むことを特徴とする該方法。
79. 【請求項７９】 該糖尿病がＩ型糖尿病である請求項７８記載の方法。
80. 【請求項８０】 該糖尿病がＩＩ型糖尿病である請求項７８記載の方法。
81. 【請求項８１】 対象における胃腸運動を有利に調節する方法であって、請
    求項１、５６、５７または５８のうちいずれか１記載の化合物の治療上有効量を
    該対象に投与することを含むことを特徴とする該方法。
82. 【請求項８２】 胃腸運動の該有利な調節が胃内排出を遅延させることを含
    むことを特徴とする請求項８１記載の方法。