JP2002516669A - 分子遺伝学的診断のための組織サンプルの採取、及び初期調製のための方法 - Google Patents

分子遺伝学的診断のための組織サンプルの採取、及び初期調製のための方法

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、分子遺伝学的研究に適した組織／血液又はその他の有核またはＤＮＡを含有する細胞あるいは細胞成分サンプルの採取及び初期調製に適した装置及び方法に関する。ＤＮＡを含有する細胞のサンプルの採取及び初期調製に適した本発明の装置は、サンプル受け取り容器及び、サンプルの採取の後にサンプル受け取り容器内に導入され、これを密封するサンプル採取ツールとを含む。サンプル受け取り容器は底部と側壁を有し、貫通可能な蓋により密閉され、さらに底部より離れた側壁域には導入されたサンプル採取ツールを固定する手段を有している。容器内にはＤＮＡ分解酵素からの保護物質が存在している。サンプルの採取のためのツールは、サンプル受け取り容器内に導入された時にサンプル受け取り容器内の固定のための手段により所定位置に固定され、サンプル受け取り容器をサンプル受け取り容器の底部及び側壁ならびにサンプル採取ツールの先端により規定される、少なくとも１つのサンプル空間に分離する様に形成されている。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、分子遺伝学的試験に適した組織、血液、又は有核細胞又はＤＮＡを
含有する細胞又は細胞成分のその他のサンプルを採取し、また初期調製するため
の装置及び方法に関する。
【０００２】 多くの研究及び応用計画には、大量の組織サンプル又はＤＮＡサンプルの採取
が必要とされる。特定の状況下では、農場全体の動物の個体群（例えば、生物学
的に機能的な動物の生産）又は地域的あるいは特別に特徴付けられた動物の個体
群に関する情報を集めなければならない。
【０００３】 例えば、ＢＳＥスキャンダルや、影響のない農場産の肉や製品であることを保
証することに関連する問題により引き起こされた例では、全ＥＵにおいて出産時
または出産直後に、動物の耳にタグを付けて識別する畜牛（cattle）の強制的な
識別が導入された。これらの動物には、各農場を識別する固有の数字が入ってい
る。即ち、例えば後日屠殺場で数字を調べることにより、動物がどの農場から来
たのか決定できる。
【０００４】 しかし、このような耳タグは偽造されやすく、操作により交換することも可能
であることから、導入された認識システムを回避することができる。従って、消
費者及び中間業者は、動物が実際に表示通りの農場より来たのか確認することは
できない。
【０００５】 従って、生産者、加工業者及び販売業者からの情報を独立に確認することがで
きる簡便な分析方法が望まれている。
【０００６】 周知の如く、各動物は特定のＤＮＡの変異を試験することで（「遺伝的指紋」
）個別に同定することができる。法医学及び飼育動物の血統試験においては、こ
れら最新の分子遺伝学的試験が既に分析に利用されている。動物からのサンプル
は通常獣医により血液サンプルとして採取され、分析される。しかし、さらに大
きい動物の個体群に関しては、この方法は重労働であり、また経済的観点から実
施不可能である。
【０００７】 現代の検出方法（ＰＣＲ、配列決定等）を利用すれば、それらが特定の個体に
由来するか否かが、極少量の組織サンプルからでも決定できる。試験は比較的容
易に実施可能であり、信頼性は９９．９％以上である。
【０００８】 しかし、現時点に於いてはこのような数のサンプルの分離、目的別採取、保存
、分類ならびに分析を実施するための経済的出費ならびに労力は多大である。
【０００９】 本発明の１つの機能は、被検体からのＤＮＡを含有するサンプルの採取が容易
かつコスト的に有効に実行できる装置を提供することである。
【００１０】 発明の別の機能は、組織または血液サンプルを分析研究を目的として、容易に
被検体より採取できる方法を供給することである。
【００１１】 本機能はサンプルを受け取る容器と、サンプル採取のためのツールとを有する
、ＤＮＡを含有する細胞サンプルを採取、及び初期調製するための装置によって
実施される。サンプルを採取した後、サンプル採取ツールはサンプル受け取り容
器内に導入され、密封される。サンプル受け取り容器は底壁及び側壁を有し、容
易に貫通可能な蓋により密閉される。底部から離れた側壁部には、導入されたサ
ンプル採取ツールを固定する手段があり、容器内の物質はＤＮＡ分解酵素から保
護される。サンプルを採取するためのツールは、サンプル受け取り容器内に導入
されると、このツールを固定する手段（サンプル受け取り容器内に備えられてい
る）が所定位置に固定し、そしてツールはサンプル受け取り容器を、サンプル受
け取り容器の底部と側部の壁と、サンプル採取ツールの先端部とにより規定され
る、少なくとも１つのサンプル空間内に分割する。
【００１２】 更に、前記の機能は、好適なサンプルがサンプル採取ツール先端にて採取され
、これがサンプル受け取り容器内に導入され、それによりサンプル受け取り容器
の底部及び側壁と、サンプル採取ツールの先端部とによって、周囲に対し密閉さ
れるように規定された空間が形成されることを特徴とする本発明の装置の利用に
より行われる。
【００１３】 以下、本発明を添付図面を参照して説明する。
【００１４】 以下発明を好適なモデル及び図を参照しながらより詳細に説明する。
【００１５】 発明の装置は、サンプル受け取り容器１とサンプル採取ツール２とを含む。
【００１６】 サンプル受け取り容器１は底部２と側壁３とを持ち、かつフィルムまたはメン
ブレンのような容易に貫通可能な蓋により密閉されている。このサンプル受け取
り容器１はそれ自体を別のメンブレンにより再分割することできる。その結果、
使用するまで、２以上の成分をサンプル受け取り容器１内にてそれぞれ別々に分
けることができ、サンプル採取ツール４がサンプル受け取り容器１内へ侵入する
ことによってのみ、成分が互いに、及びサンプルと接触する。サンプル受け取り
容器１は更に、例えば底部２の全直径に広がった突起８のような隔壁により、少
なくとも２個のチャンバーに再分割することもできる。これによりサンプル採取
時に少なくとも２の完全に独立したサンプルを採取することができる。
【００１７】 好適なモデルでは、サンプル受け取り容器１は少なくともサンプル採取ツール
４の先端部を受け取る。必要であれば、底部２が先細りの突起８を持つように形
成することができ、サンプル採取ツール４は突起８と互いに適切にはめこむこと
ができる。結果として、サンプル採取ツール４がサンプル受け取り容器１内に侵
入すると、サンプルは強く圧砕され、サンプル受け取り容器１の底部２と側壁３
とサンプル採取ツール４の先端部７とにより限定されるサンプル空間６，６ａ内
に押し込められる。
【００１８】 サンプル受け取り容器１は、平面アタッチメント、例えばこれを適当に締結す
るための、孔を持ったトング（tongue）のような固定装置９も持つことができる
。即ち、例えばトングは耳タグ１０．１１を適用するのにプライヤーが用いられ
る場合には、プライヤーに固定することができる。トングは認識番号表示に好適
であり、同様にイヤータグの取り付けにも好適である。ラベリングは溝部に手で
行うことができ、あるいはトングは、例えば刻印により事前印刷することができ
、あるいはイヤータグ１０、１１のプレート部分に適用された認識番号と、同時
かつ同一のものを印刷することもできる。
【００１９】 必要であれば（例えば、手でサンプルを更に加工する場合）、サンプル受け取
り容器１は、サンプル採取ツール４により密閉された後にサンプル空間６、６ａ
を規定するサンプル受け取り容器１の領域が、サンプル受け取り容器１の本体に
ネジ山により連結されており、容易にネジを外し、容易にサンプルに接触するこ
とができるように形成することができる。
【００２０】 好適な装置のモデルでは、サンプル受け取り容器１は、形成されたサンプル空
間６，６ａが装置を破壊することなしには開放不可能な様にサンプル採取ツール
４により密閉される。即ち、気付かれることなく採取されたサンプルを操作する
ことが不可能なことは確実である。
【００２１】 サンプル受け取り容器１中には組織サンプルのタンパク質成分を不活性化し、
ＤＮＡを安定化する物質が存在する。
【００２２】 組織サンプルのタンパク質（酵素類、ＤＮＡｓｅｓ等）を不活性化し、ＤＮＡ
を安定化する物質は例えば以下より成るグループから選択することができる。
【００２３】 タンパク質を分解するプロテイナーゼＫ（例えば保管中の安定化のために凍結
乾燥されている）及び（別々に充填された）タンパク質を消化するための緩衝液
、強塩基、極端に吸湿性であり、それと接触する（及びそれを暖める）組織サン
プルを乾燥させ、それにより不活性化するモレキュラーシーブ（例えばＥ．Ｍｅ
ｒｃｋ社製 ０．２ｎｍ Ｎｏ．１．０５７０４．０２５０，Ｋ２３００４５９
０４ ６２４、水吸収能＞２０％）。例えば望ましくない空気中の湿気の吸収か
らモレキュラーシーブを保護するために、それは不活性気体であるアルゴンによ
りコートされ、フィルムにより密閉される。タンパク質成分の不活性化、及びＤ
ＮＡの安定化を支援するその他の物質。物質は、それらが長時間、例えば１年以
上活性を維持し、さらにサンプル導入後少なくとも数ヶ月から１年間分析研究に
適したＤＮＡの保全性が十分保証されるように処方される。
【００２４】 サンプル採取ツール４は、サンプルを採取してサンプル受け取り容器内に導入
でき、導入後密閉されたサンプル受け取り容器１を密封するいずれかの形態を取
ることができる。これには、円筒、円錐等の形態が含まれる。
【００２５】 装置の好適なモデルでは、サンプル採取ツール４は使用前には互いに接続（た
だし分離可能）しており、使用時に相互に分離する２つのパーツより構成される
。これは例えば特定の破壊点を持つプラスチックの狭い架橋により実現できる。
サンプル採取ツール４は堅牢であるか、あるいはその背面は、例えば使用時の安
定化を目的としてプライヤーからのスチール製ロッドの導入が可能な、例えばに
中空部１２を持つロッドの挿入が可能である。
【００２６】 サンプル採取ツール４は複数の機能を持つ。サンプルは、例えば血液、リンパ
液、または尿のような体液に単純に液浸すること、又は被検体から組織を擦過又
はパンチングすることにより採取される。
【００２７】 好適なモデルでは、被検体の耳が本発明の装置により穿孔される。サンプル採
取ツール４の前端部は、耳を押し通すことで少量の組織サンプルが穿孔および破
砕されるような鋭利な端部を持つように形成できる。
【００２８】 さらに好適な装置モデルでは、サンプル採取ツールは、例えば耳タグ取り付け
用のプライヤーのような好適な装置と共に使用する、サンプル採取のためのサン
プル採取ツールは、耳タグが被検体の耳に押し通されると同時に使用され、その
結果耳タグ取り付けとサンプル採取りが１回の作業で行われる。
【００２９】 認識のために用いられる耳タグは通常２つのパーツからなる。スパイク１０を
持つプレート（スパイクプレート）と、スパイクプレートとほぼ同じサイズであ
るか、又はスパイク１０ａが耳の中に滑り落ちるのを防ぐのに十分な大きさを持
つ限りより小型でもよいのアパーチャープレート１１とにより構成されている。
両パーツは食物への利用に好適な組織適合性の合成材料（例えばポリウレタンＢ
ａｙｅｒ社製Ｄｅｓｍｏｐａｎ７９５Ｕ）または、部分的に金属（例えばステン
レススチール、真鍮、青銅等）でできている。
【００３０】 耳タグ１０、１１を挿入するには、市販の耳タグ取り付け用プライヤーが利用
できる。この目的に利用できるプライヤーの大部分は、必要に応じて小型の追加
のパーツを加えることで極めて容易に改良することができる。その結果サンプル
受け取り容器１は耳タグ１０、１１の挿入後もプライヤーに掛かった状態を保ち
、それにより採取を容易にすることが可能である。追加のパーツは、例えばサン
プル受け取り容器を持つトング９内の孔の上にあって、サンプル受け取り容器を
引き出すための小型のノブである。耳タグ１０，１１を耳内に挿入した後、必要
に応じて耳タグ１０、１１はプライヤー中のホールドから剥脱され、ノブはサン
プル受け取り容器１でトング９をプライヤー上にしっかり保持する。その後トン
グはノブから容易に外すことができ、それによりサンプル受け取り容器１を採取
することができる。
【００３１】 サンプル採取ツール４は挿入時にサンプル受け取り容器１を密封し、固定具５
により所定位置に固定され、その結果サンプルの漏れ、及び異物侵入が防止され
る。
【００３２】 サンプル受け取り容器１及びサンプル採取ツール４は、例えば金属のような好
適な材料、またはガラスファイバーにより強化された合成材料より作ることがで
きる。サンプル採取ツール４が合成材料により作られる場合、耳内への挿入中、
プライヤー内に金属のロッドを利用することでそれを補強することができる。
【００３３】 発明の装置により、耳タグ１０，１１による認識票取り付けと同時に動物から
サンプルを取ることが可能であり、これは多くの追加作業又は出費なしに、ルー
チンで実施される。これによる節約は極めて大きい。
【００３４】 通常のサンプル受け取り容器に比べた本発明の装置の更なる利点は、平坦なト
ングの形状を持ち、サンプルのラベルおよび認識に利用できるサンプル受け取り
容器上の固定装置９である。通常、ラベリングは手を使い大きな労力をかけ、多
くの場合、円筒状容器（例えばエペンドルフチューブ）の曲がった表面で行われ
るるため、読みとりは容易でない。その結果、数字またはデータのスキャン及び
自動採取は困難である。
【００３５】 本発明のシステムは、サンプルがすべての構造の静止部分である材料から取ら
ねばならず、従って、通常、道具（ナイフ、鋭匙、メス等）を使ってサンプルを
採取する必要がある場合に特に有益である。再使用可能な道具を利用する場合、
汚染の危険は極めて高く、ＰＣＲ（ポリメラーゼチェインリアクション）のよう
な高感度試験では１細胞によっても汚染が引き起こされ、その結果誤った陽性の
結果が生じる。本発明の装置を利用すれば、１回の使用パーツのみがサンプル材
料に接触する。
【００３６】 発明の装置はまた、例えば液体サンプル（血液、尿、唾液及びその他）を信頼
性高くかつ確実に採取し、加工するのに利用することもできる。この場合、液体
はサンプル受け取り容器１の開口部、又はサンプル採取ツール４の全面部に適用
され、続いて例えばプライヤーのような好適装置によりサンプル受け取り容器１
内に押し込まれる。表面からのサンプル（皮膚、粘膜等）も、サンプル採取ツー
ルの先端部が「鋭匙」のようなものであり、表面上を簡単に削ぎ／剥離する本発
明の装置を利用し、清浄かつ、信頼性と確実な認識をもって採取できる。
【００３７】 本発明の実質的な利点は、サンプル受け取り容器１が耳タグ（スパイクプレー
ト１０、アパーチャープレート１１）と同時にラベルできることである。これに
よりユーザーまたは動物の所有者への発送前に過誤なく同一番号ｎを付けること
ができる。例えば、ラベリングはプラスチック製の耳タグの場合、拭ったり除去
したりする程度の通常の使用では剥がれない程度に強く合成材料に結合する（黒
色の）マスターミックスが利用されるプリンターにて実施することができる。更
に、対応するパーツ同士は、その上に固有の番号をプリントすることができる。
【００３８】 次に、本発明の装置により集められたサンプルは中央の採取施設に集められ、
そこで分析される。サンプル受け取り容器１の収集は、移送中の温度や期間に関
する特別な配慮なしに実施することができる。サンプル受け取り容器１は、郵便
受け、配送会社、サンプル収集業者により研究室又は保管場所まで、問題なく、
リスクなしに輸送することができる。
【００３９】 研究室でのサンプル取り扱いでは、サンプルの一部採取、試験反応、及び分析
はロボットコントロールされたシステムにより自動化することができる。サンプ
ルの認識番号は読みとり装置（スキャナー）により登録され、さらに処理される
。手入力を省くことで、誤りを無視できる程度まで低くすることができる。
【００４０】 本発明の装置により採取されたサンプルのＤＮＡを処理または分析するために
は、サンプル受け取り容器１は、スキャナーがサンプルの認識を記録できる様コ
ンベアーベルトに乗せられる。続いて、カニューレがサンプル空間６、６ａの床
を通し挿入され、サンプル採取のために液が注入され、続いてその一部が採取さ
れる。次に挿入点は再度密封され、サンプル受け取り容器は保存することができ
る。サンプル空間６、６ａが好適な方法により当初より分割されている場合には
、発明の装置内に分析に利用可能な別のサンプルが存在する。
【００４１】 ＤＮＡの単離はピペッティングロボット（Ｂｉｏｍｅｃ２０００）、（Ｂｅｃ
ｋｍａｎ）及びシリコン粒子（例えばＩｎｓｔａＧｅｎｅ Ｍａｔｒｉｘ、ＢＩ
Ｏ−ＲＡＤ）を使ったＤＮＡ精製を利用し自動化することができる。これらサン
プルの試験反応も自動化により調整することができる。
【００４２】 ここに記したサンプルの簡便な採取及び自動化分析のシステムは以下の利点を
持つ：
【００４３】 消費に至るまでの全ての段階で、全ての畜牛（cattle）及びそれら畜牛の肉
に関する出所及び認識を偽造されることなく証明することができ、それによりＢ
ＳＥのない地域起源であることを証明することができる。有機農場で飼育された
、又は自然公園で飼育された、あるいは特別なグレードの認識を持つ動物のよう
な、目的を絞った販売プログラムをコントロールし、安定化することができる。
全ての畜牛に関する輸送経路及び時間と距離の証明とモニタリング。オークショ
ン、展覧会等のいかなる時点に於いても可能な認識確認を利用した、全畜牛の誤
りのない同定。誕生した全ての畜牛に関する起源の完全な証明、及び誤り又は偽
造書類の発見。絶対の信頼性を持つ法医学的証拠（医学検査官による、胃内容物
の既に消化された牛肉からのものも含む）。絶対の信頼性を持つ（不合格）及び
疫学コントロールのモニタリング。ペットフードを含む、試験された全（加工さ
れた）食物中の牛肉混合の決定。禁止のホルモンまたは成長ホルモンの使用に関
する無作為抽出試験が行われる屠殺場での、製造元の割り出し。皮革、角、蹄、
臓器、血液等のような畜牛生産からの他の製品の出所証明。直販ミルク及び乳製
品に関する動物ならびに家畜の証明及び試験。全ての畜牛群及び販売経路の正確
な登録。ＤＮＡ多形の詳細分析、遺伝学的距離、及び遺伝的スクリーニングに利
用できるサンプル。
【００４４】 繁殖プログラムの最適化。遺伝的距離の測定。出生動物品種の系統的な及び掛
け合わせの履歴。マーカー支援選択プログラム（ＭＡＳ）の一部としての分析。
特定遺伝的欠損の存在及び頻度の正確な証拠。法医学的観点より、ここに記載の
装置及びここに記載の方法は、認識可能なサンプル受け取り容器に必要な操作を
行うことなしに採取されたサンプルを変更（交換、偽造）することができないと
いう利点も有している。
【００４５】 サンプルを採取、分類することで、更なるタイピング、起源試験、遺伝的欠損
のスクリーニング、集団分析、変異検出及び食物スクリーニング、病原菌診断、
トランスジェニック診断、食物加工作業場の衛生状態モニタリングが多大な出費
なしに可能である。
【００４６】 ここに記載したシステムを利用すれば、全ての動物及び消費されるまでの動物
由来の全ての製品に関する遺伝的情報を試験することが可能である。ここに記し
た装置を利用すると、これに通常伴うコストが大きく減少する。
【００４７】 強力に加工された動物起源の食物でさえ（ソーセージ、加工肉、“Ｌｅｂｅｒ
ｋａｓ”（オーブン内で焼かれる、あるいは事前に焼かれた、スパイス及びその
他の添加物と共に細く粉砕された肉）、種及び個体に特異的なＤＮＡを確立する
ことができる。これにより、食物の異質の肉成分の汚染を検出することができる
。もちろん、この方法を利用すれば、たとえ出所農場において好適（第１）なサ
ンプルが採取されていれば、特定の食物が特定の動物に由来する（記述の如くの
）ことに関する疑問について証明することができる（図３）。
【００４８】 その為には、ＤＮＡタイピングを目的として全てのうまれたての家畜から耳の
組織サンプルを採取し、タイピングセンターに送付する必要がある。マイクロサ
テライトプライマーを使った（自動化された）ＰＣＲ ＤＮＡフィンガープリン
トを利用し、各動物についての疑う余地のないなパターンが登録される。
【００４９】 これらのデータはセントラルファイルに保存され、それを通じアクセスするこ
とができる。ルーティン試験のフィンガープリント、即ちＤＮＡタイピング後の
第２サンプル送付時のフィンガープリントを初回解析時のフィンガープリントと
比較することで、合致する動物を見つけることができる。この結果は通常１日以
内に入手可能である。極端なケースの場合、例えば動物の輸送中、あるいは緊急
時には３時間以内に迅速に結果を得ることができる。動物の番号、即ちＤＮＡフ
ィンガープリント及び全てのその他のデータは、登録された動物毎に呼び出すこ
とができる。動物の所有者、即ち１人の所有者又は１人の牧夫により販売された
全ての動物は蓄積することができる。このファイルを通じて、動物の親について
、即ち生まれた全畜牛の登録の数年後、各親の子孫の割合及び数を見ることがで
きる。農場の動物の完全な個体群の個別のタイピングは新規である。全ての利用
者、顧客、消費者、販売業者、屠殺業者、加工業者、所有者及び検査官が、動物
または動物製品の身元をチェックし、それにより起源をチェックすることができ
る（図４）。この試験のためには、例えば屠殺場、スーパーマーケット、既に調
理された肉（例えばレストランにおいてテーブルの上にあるカツレツから）から
第２サンプルを必要とするだけである。
【００５０】 生きている動物の場合、例えば動物が承認された方法（距離）で輸送されたか
チェックするのに、タイピングは同様に可能であろう。試験結果に関するこの確
実性の大きさと十分に高い試験頻度は、その高い信頼性を持ち、法律的に議論の
余地のない証拠、及び発見されるリスクに対する恐れから、詐欺行為を自動的に
最少まで低下させるだろう。
【００５１】 将来、リスク予防、疫学コントロール、または動物中の違法残存物（ホルモン
、成長ホルモン）を理由として成される、動物又は獣群の特定のグループのモニ
ターのあらゆる段階が、既に採取されたＤＮＡデータを利用して迅速に行うこと
ができるだろう。
【００５２】 ここに記したシステムによる個別タイピングが１国において継続的に成されれ
ば、いずれの時点においても発生した問題（例えば動物のＢＳＥの疑い、農場で
のブタコレラの流行等）に即時的、例えば同日に対処でき、それによって諸費者
に対し従来にない保護及び従来にないモニタリング試験の可能性が提供できるだ
ろう。
【００５３】 具体的には、例えば個別タイピングにより動物及び“選択された”製造方法に
よる製品が真実どこから来たのかを完璧かつ疑いなく証明することができる。こ
のことは、全ての顧客が、長期輸送及び肉が販売されたのちでも、サンプル（第
２サンプル）を送付することで肉に添付された情報の試験をアレンジできること
を意味する。
【００５４】 以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、これはクレームに記述された
発明を制限するものではない。
【００５５】 [実施例１] [畜牛（cattle）における個別タイピング] ウシは通常の耳タグによりマークされた。スパイクプレートのスパイクにはサ
ンプル採取ツールが取り付けられており、これは前方の先端部に円錐状の形態を
有し、底部にはスパイクプレートのスパイクを受け入れるための円筒状の底部と
空洞とを有する。
【００５６】 プライヤー上には、トングと一体化するように作成されたサンプル受け取り容
器は、合成フィルムｎの蓋により密閉されたサンプル受け取り容器ｎの蓋が、ア
パーチャープレートの孔と一列になる位置がアパーチャープレートに提供される
ように取り付けられている。
【００５７】 トングは、サンプル受け取り容器と反対側にプライヤー上に固定するための孔
を有している。
【００５８】 スパイクプレートのサンプル採取ツールにより提供されたスパイクをウシの耳
を通し押すことにより、打ち抜かれた耳のサンプルがサンプル受け取り容器内に
押し込まれた。侵入後、サンプル採取ツールはサンプル受け取り容器の内壁上の
突起により所定位置に固定され、これにより形成されたサンプル空間は密封され
た。
【００５９】 サンプル受け取り容器内には採取したサンプルのＤＮＡを分解から保護するた
めのモレキュラーシーブ（Ｍｅｒｃｋ社製、０．２ｎｍ Ｎｒ．１．０５７０４
．０２５０）が入っている。
【００６０】 既知遺伝子のＤＮＡフットプリント及びＰＣＲ分析は、半年後にサンプル受け
取り容器内に存在した遺伝的物質についても問題なく実施できた。
【００６１】 [実施例２] 特定の系統（例えば異物移植用の１．３Ｇａｌ／Ｇａｌ３陰性ブタ）の繁殖の
ための機能的な突然変異のスクリーニング。 自然の突然変異率によれば、単一の個体内における十分なサイズの個体群中で
は、ゲノム中に存在していずれの遺伝子も各種サイレント突然変異のみならず、
一定の蓋然性で、対立遺伝子の不活性化をもたらす突然変異をも含む。このよう
な例の多くでは、これは優性の突然変異ではなく劣性の突然変異を含む。Ｈａｒ
ｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇの法則によれば、突然変異による遺伝子型のこのような
変化の大部分はヘテロ接合体としてマスクされている。
【００６２】 スクリーニング方法では、対象となるブタ集団中の適当な遺伝子座の好適な分
子遺伝学的な解析を利用して、突然変異を持つ（単一の）ヘテロ接合体キャリア
動物を発見することが重要である。次に、遺伝子ノックアウトを利用して作られ
る系と同様の、望ましく、また必要とされる遺伝子欠損を持つホモ接合陰性系を
この動物を利用して創り上げることができる。それは決してこれに劣るものでは
ない。
【００６３】 提言される方法は、マーカーを持たない好適な構築体と組み換えを行った後に
、ある程度の幹細胞株のスクリーニングを行うものである。差は以下の通りであ
る。幹細胞株の細胞は全て、一回の突然変異を起こした後に変化し、または組み
換えを行った細胞を除き、解析された全ての遺伝子型は異なるものである。ブタ
集団のスクリーニングでは、全ての遺伝子型を解析することは困難である。それ
らは目標を定めて突然変異誘導されていないが、進化及び交配の過程に於いて蓄
積された突然変異を有している（ヘテロ接合体の状態にある限り、それらは負の
選択圧に曝されることはない）。
【００６４】 １．３Ｇａｌ／Ｇａｌ３の発現には定量的な差が存在することが知られている
。突然変異分析が多様な個体群中の既存の変異を発見することを目的としている
ことから、交配動物が分析されるだろう。新しい突然変異を無視すれば、生れた
ブタは交配親に存在していた変異のみを保有している。実務的には、Ｔｙｐｉ−
ｆｉｘシステムを使った組織サンプルの保存と採取は、成功または経済的現実性
にとって重要なファクターである。突然変異キャリアーを見つけるための分析で
は、１．３Ｇａｌ／Ｇａｌ３を欠損している可能性のある動物を発見するために
は恐らく１００，０００の遺伝子型を試験しなければならないと推定される。１
００，０００頭のブタから個別サンプルを安価に採取するためには、本発明のシ
ステムが選択方法である。サンプルは研究室に輸送するだけで（郵便またはサン
プル集配人により）あり、そしてそこで検査が行われる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、底部２に突起部８を持つサンプル受け取り容器１のモデルの断面図を
示す。サンプル採取ツール４はサンプル受け取り容器１内にあり、これを密封す
る。サンプル空間６、６ａから離れた場所にあるサンプル採取ツール４の側面に
は中空１２があり、ロッドの挿入が可能である。
【図２】 図２は、スパイク１０ａを有するスパイクプレート１０と、トング９が取り付
けられたサンプル受け取り容器１を有するアパーチャープレート１１との配置の
断面図である。サンプル受け取り容器１はサンプル採取ツール４により密閉され
ており、イヤータグ１０、１１が適用され、同時にサンプルが採取された後の状
態を表す。
【図３】 図３は，スパイクプレート１０と、アパーチャープレート１１とにより構成さ
れるイヤータグ１０，１１の側面図であり、サンプル受け取り容器１は、好適な
装置を用いて組み立てられる前にトング９と一体化する。
【図４】 図４は、畜牛での個別ＤＮＡタイピングの略図である。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年５月１８日（２０００．５．１８）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B029 AA08 AA09 BB11 GA08 GB01 GB02 GB04 GB05 GB10 HA10 4B063 QA13 QA20 QQ08 QQ43 QR08 QR33 QR40 QR42 QR55 QR62 QS16 QS25 QS34 QS39

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 サンプル受け取り容器（１）と、サンプル採取後サンプル受
    け取り容器内に侵入して該サンプル受け取り容器を密封するサンプルを採取する
    ためのツール（４）とを含み、 前記サンプル受け取り容器（１）は、底部（２）と側壁（３）とを有し、容易
    に貫通可能な蓋により密閉されており、底部と反対側の空間的に離れた領域の容
    器側壁上にサンプル採取ツールの導入を確実にするための手段（５）があり、容
    器内にはＤＮＡ分解酵素から保護するための手段が提供されており、 前記サンプル採取ツール（４）は、サンプル受け取り容器（１）内に侵入時に
    、サンプル受け取り容器上に提供された固定のための手段（５）により所定位置
    に固定され、サンプル受け取り容器を、サンプル受け取り容器の底部（２）と側
    壁（３）とサンプル採取ツール（４）の先端部（７）とにより規定される少なく
    とも１つのサンプルスペース（６，６ａ）に分かれる様に作られていることを特
    徴とする、ＤＮＡを含有する細胞のサンプルを採取し、初期調製するための装置
    。
  2. 【請求項２】 前記サンプル受け取り容器の貫通可能な蓋が、フィルム又は
    水不透過膜であることを特徴とする、請求項１に記載の装置。
  3. 【請求項３】 前記ＤＮＡ分解酵素からの保護手段が、塩基、プロテイナー
    ゼＫ、またはモレキュラーシーブであることを特徴とする、請求項１又は２に記
    載の装置。
  4. 【請求項４】 前記サンプル採取ツールの侵入により破壊され、それにより
    プロテイナーゼＫが好適な緩衝液に接触するようになる膜によって、前記プロテ
    イナーゼＫが好適な緩衝液から隔離されていることを特徴とする、請求項３に記
    載の装置。
  5. 【請求項５】 前記サンプル採取ツール（４）が、正面先端で先細りになる
    ことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の装置。
  6. 【請求項６】 前記サンプル採取ツール（４）が、少なくとも正面先端部に
    鋭利な端部を有することを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の装置置。
  7. 【請求項７】 前記サンプル受け取り容器（１）の底部（２）が、容器の内
    部空間内に出る突起部（８）を有し、サンプル採取ツール（４）の先端部（７）
    が、該突起部を受け取るのに好適であり、該サンプル採取ツール（４）によって
    導入されたサンプル物質が該突起部（８）と該サンプル採取ツール（４）との間
    で破砕されるように形成されることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載
    の装置。
  8. 【請求項８】 好適なサンプル採取ツール（４）の導入後にサンプル受け取
    り容器（１）が２のサンプル空間（６，６ａ）に分割される様に、前記突起部（
    ８）がサンプル受け取り容器（１）の側壁（３）に接続されていることを特徴と
    する請求項７に記載の装置。
  9. 【請求項９】 前記突起部（８）が、円錐形状を含むことを特徴とする請求
    項７または８に記載の装置。
  10. 【請求項１０】 前記突起部（８）が、サンプル受け取り容器を２つの領域
    に分割する隔壁であることを特徴とする、請求項７〜９のいずれかに記載の装置
    。
  11. 【請求項１１】 前記サンプル受け取り容器（１）が、固定装置（９）に取
    り付けられていることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の装置。
  12. 【請求項１２】 前記固定装置（９）がトングであることを特徴とする、請
    求項１０に記載の装置。
  13. 【請求項１３】 前記サンプル採取ツールが、その背面においてロッドの挿
    入が可能であるように形成されていることを特徴とする、請求項１〜１２のいず
    れかに記載の装置。
  14. 【請求項１４】 前記サンプル採取ツール（１）が、耳タグのスパイクプレ
    ート（１０）に分離可能に接続されていることを特徴とする、請求項１〜１３の
    いずれかに記載の装置。
  15. 【請求項１５】 前記サンプル受け取り容器が、耳タグのアパーチャープレ
    ート（１１）に分離可能に接続されていることを特徴とする、請求項１〜１４の
    いずれかに記載の装置。
  16. 【請求項１６】 前記耳タグ（１０，１１）及び前記サンプル受け取り容器
    （１）に同一の認識番号が与えられることを特徴とする、請求項１４または１５
    に記載の装置。
  17. 【請求項１７】 好適なサンプルが、サンプル採取ツール（４）の先端部（
    ７）を利用して採取され、該サンプル採取ツールがサンプル受け取り容器（１）
    に導入された結果、サンプル受け取り容器（１）の底部（２）と側壁（３）とサ
    ンプル採取ツール（４）の先端部（７）とにより規定されるサンプル空間（６，
    ６ａ）が形成され、該サンプル空間が周囲から密閉されることを特徴とする、動
    物からＤＮＡを含有する細胞のサンプルを採取するための方法。
  18. 【請求項１８】 好適な装置の前記サンプル採取ツールが、動物の耳に押し
    通され、サンプル受け取り容器（１）内に導入されることを特徴とする、請求項
    １７に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 動物の耳にタグ付けすると同時に実施されることを特徴と
    する請求項１８に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 サンプルが請求項１〜１６のいずれかに記載の装置により
    採取され、研究室において解析的に分析され、分類されることを特徴とする動物
    の個体群のタイピング方法。
  21. 【請求項２１】 動物からのＤＮＡを含有する細胞のサンプルの採取を目的
    とした、請求項１〜１６のいずれかに記載の装置の使用。
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