JP2002512034A - Ｂ細胞成長因子関連タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ヒトB細胞成長因子関連タンパク質（BGFRP）並びにBGFRPを同定及びコードするポリヌクレオチドを提供する。また、本発明は発現ベクター、宿主細胞、抗体、アゴニスト、及びアンタゴニストを提供する。更に、本発明はBGFRPの発現に関わる疾患の診断、治療、又は予防の方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 技術分野 本発明は、ヒトB細胞成長因子関連タンパク質の核酸配列およびアミノ酸配列
、並びに免疫異常症、細胞増殖障害、及び感染症の診断・予防・治療におけるこ
れらの配列の利用法に関するものである。

【０００２】 発明の背景 全ての脊椎動物は、ウイルス、細菌、真菌、及び寄生虫の感染症の保護のため
の高度に複雑な免疫系を発達させてきた。免疫系の基本的特徴は、自己の分子か
ら外来性の分子を特異的に識別する能力にある。外来性の分子、即ち抗原によっ
て、免疫応答を構成する現象のカスケードが誘発される。免疫応答は、連続的な
選択、増幅、及び細胞防御メカニズムの活性化を調和させ、最終的には外来性の
病原体を破壊へと導く。効果的な免疫応答は、抗原を認識して破壊する異なった
細胞型の中で細胞間の伝達を必要とする。この伝達は、免疫系に関連する細胞の
分化および増殖を調節するサイトカインや成長因子等のシグナル伝達分子によっ
て行われる。

【０００３】 細胞性および体液性の免疫応答の2つの基本的なクラスが存在する。細胞性の
免疫応答は、主にTリンパ球、即ちT細胞によって媒介され、それらは侵入する微
生物を直接的に破壊し、或いは他の免疫性の細胞の活性を刺激する。細胞性の免
疫応答は、菌類、寄生虫、癌細胞、移植組織、及び細胞内のウィルス性の感染に
対して最も有効である。体液性の免疫応答は、主にBリンパ球、即ちB細胞によっ
て媒介され、それらは抗体を循環系に分泌する。体液性の免疫応答は、細菌およ
び細胞外のウィルス性の感染に対して最も有効である。抗体は、侵入する微生物
の表面上の分子と結合し、それらが不活性化されてダウンストリームエフェクタ
ー(downstream effectors)による破壊の標的とされる。

【０００４】 免疫系の主要な器官は、第1及び第2のリンパ系器官として分類される。第1の
リンパ系器官には、B細胞を産生する骨髄、T細胞を産生する胸腺が含まれる。B
細胞およびT細胞は、成熟するとリンパ系を通って移動し、リンパ節、アデノイ
ド、扁桃腺、脾臓、及び腸のパイエル板等の身体の至る所の第2のリンパ系器官
に存在する。

【０００５】 未成熟のB細胞は、その細胞表面上で同一の抗体を発現する。細胞表面の抗体
への抗原の結合は、B細胞の分化およびクローン増殖を誘発する。未成熟のB細胞
とは異なり、分化されたB細胞は抗体を分泌する。抗体を分泌するB細胞のクロー
ン増殖は、同一の抗原特異性の抗体の大量の産生を可能として、免疫応答を増幅
する。クローン増殖は、ヒトB細胞成長因子（BCGF）によって刺激される。BCGF
は、活性化されたT細胞によって分泌され、分子の重量の範囲は12〜60キロダル
トンである。特に、BCGF1は、予測等電点が9.8の120個のアミノ酸の小さな塩基
性のタンパク質である。分泌された殆どの成長因子と同様に、BCGF1にはN末端の
推定(predicted)シグナルペプチド配列が含まれる（Sharma, S.ら(1987) Scienc
e 235:1489-1492）。

【０００６】 BCGFに加えて、T細胞は種々の成長因子及びサイトカインを分泌し、それらは
、例えばマクロファージのような別のタイプの免疫性の細胞の増殖および活性化
を誘発する。免疫応答におけるT細胞の重要な役割は、HIVレトロウィルスがT細
胞の数を著しく減少させる後天性免疫不全症候群（AIDS）の圧倒的効果によって
実証される。

【０００７】 免疫系に関連する他の障害には、非自己の分子と自己の分子とを識別するため
の免疫系の不全によって引起される種々の自己免疫疾患が含まれる。更に、免疫
性の細胞増殖に関連する疾病には、抗体を分泌する腫瘍が骨髄細胞から発生する
多発性骨髄腫が含まれる。HIVを含む種々の作用因子および疾病によって引起さ
れる免疫不全症は、苦しんでいる個体を、過酷で時には致命的な細菌及びウィル
スに感染しやすくする（Golub, E. S.ら(1987) Immunology: A Synthesis, Sina
uer Associates, Sunderland, MA, 481頁及び509-530頁）。

【０００８】 新規なヒトB細胞成長因子関連タンパク質及びそれらをコードするポリヌクレ
オチドの開示は、免疫異常症、細胞増殖障害、及び感染症の診断・治療・予防に
役立つ新たな組成物を提供して当業者の要求を満たすものである。

【０００９】 発明の概要 本発明は、新規なヒトB細胞成長因子関連タンパク質（BGFRP）、BGFRPをコー
ドするポリヌクレオチド、並びに免疫異常症、細胞増殖障害、及び感染症の診断
、治療、又は予防のためのこれらの組成物の利用に基づくものである。

【００１０】 本発明は、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含む実質的に
精製されたポリペプチドを特徴とする。

【００１１】 また、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片に対して少
なくとも90%以上のアミノ酸配列の同一性を有する実質的に精製された変異体を
提供する。更に本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含
むポリペプチドをコードする単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。
更に本発明にはSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドに対して少なくとも90%以上のポリヌクレ
オチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチドの変異配列が
含まれる。

【００１２】 更に、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して相補的な単離され精製されたポ
リヌクレオチドだけでなく、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片
を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと厳密な条件の下でハイブリ
ダイズする単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。

【００１３】 更に、本発明はSEQ ID NO:2のポリヌクレオチド配列又はSEQ ID NO:2の断片を
含む単離され精製されたポリヌクレオチド、並びにSEQ ID NO:2のポリヌクレオ
チド配列又はSEQ ID NO:2の断片を含むポリヌクレオチドに対して少なくとも90%
以上のポリヌクレオチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオ
チドの変異配列を提供する。また本発明は、SEQ ID NO:2のポリヌクレオチド配
列又はSEQ ID NO:2の断片を含むポリヌクレオチドに対して相補的な配列を有す
る単離され精製されたポリヌクレオチドを提供する。

【００１４】 更に、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクターを
提供する。別の態様では、その発現ベクターは宿主細胞に包含される。

【００１５】 更に、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリ
ペプチドの製造方法を提供し、その方法には、（ａ）SEQ ID NO:1のアミノ酸配
列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリペプチドの発現に適した条件の下で、前記
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクタ
ーを含む宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）その宿主細胞の培地からポリペプチ
ドを回収する過程とが含まれる。

【００１６】 更に、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を有する実
質的に精製されたポリペプチドを適切な製薬用担体と共に含む医薬品成分を提供
する。

【００１７】 更に、本発明には前記ポリペプチドの精製されたアゴニストおよび精製された
アンタゴニストだけでなく、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片
を含むポリペプチドに結合する精製された抗体が含まれる。

【００１８】 更に、本発明はBGFRPの活性または発現の低下に関連する免疫異常症の治療又
は予防の方法を提供し、その方法には、そのような治療が必要な被験者に対して
SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を有する実質的に精製された
ポリペプチドを含む医薬品組成物を有効な量投与する過程が含まれる。

【００１９】 更に、本発明はBGFRPの活性または発現の増大に関連する免疫異常症の治療又
は予防の方法を提供し、その方法には、そのような治療が必要な被験者に対して
SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を有するポリペプチドのアゴ
ニストを有効な量投与する過程が含まれる。

【００２０】 更に、本発明は細胞増殖障害の治療又は予防の方法を提供し、その方法には、
そのような治療が必要な被験者に対してSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID
NO:1の断片を有するポリペプチドのアンタゴニストを有効な量投与する過程が含
まれる。

【００２１】 更に、本発明は感染症の治療又は予防の方法を提供し、その方法には、そのよ
うな治療が必要な被験者に対してSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の
断片を有する実質的に精製されたポリペプチドを含む医薬品組成物を有効な量投
与する過程が含まれる。

【００２２】 更に、本発明は核酸を含む生物学的サンプルにおけるSEQ ID NO:1のアミノ酸
配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
の検出方法を提供し、その検出方法には、（ａ）生物学的サンプルの少なくとも
1つの核酸と、SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドの相補配列とをハイブリダイズさせて、ハ
イブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーシ
ョン複合体を検出する過程であって、該ハイブリダイゼーション複合体の存在が
前記生物学的サンプルにおけるSEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断
片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有するよ
うな検出過程とが含まれる。或る実施態様においては、前記ハイブリダイゼーシ
ョン過程の前にポリメラーゼ連鎖反応法によって生物学的サンプルの核酸を増幅
する。

【００２３】 発明を実施するための形態 本発明のタンパク質、核酸配列、及び方法について説明する前に、本発明は、
ここに開示した特定の方法論、プロトコル、細胞系、ベクター、及び試薬に限定
されるものではなく、その実施形態は変更可能であることを理解されたい。また
、ここで使用した専門用語は、特定の実施例のみを説明する目的で用いたもので
あり、特許請求の範囲のみで限定される本発明の範囲を限定することを意図した
ものではないことも理解されたい。

【００２４】 請求の範囲を含む本明細書において、単数形の「或る」及び「その（この）」
の表記は、文脈からそうでないことが明らかである場合以外は、複数の意味も含
むことに注意されたい。従って、例えば「或る宿主細胞」の表記には、複数のそ
のような宿主細胞が含まれ、この「抗体」の表記は、1またはそれ以上の抗体及
び当業者に周知のその等価物なども表している。

【００２５】 特別に定義されていない限り、本明細書における全ての専門用語及び特定の用
語は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に一般に理解され
るものと同じ意味を有する。ここで説明したものと類似あるいは等価な方法や材
料を本発明の実施や試験において使用可能であるが、本明細書においては好適な
方法、装置、材料を説明する。本発明で言及した全ての文献は、文献で報告され
た本発明に関して用いられ得る株化細胞、ベクター、及び方法論を説明・開示す
るために引用したものである。本明細書のあらゆる開示内容は、本発明が従来発
明によるそのような開示に先行し得ないことを認めるものと解釈してはならない
。

【００２６】 定義 ここで用いる「BGFRP」は、任意の種、詳細にはウシ、ヒツジ、ブタ、マウス、
ウマ、及び好ましくをヒトを含む特定の哺乳類の種から得られたものであって、
天然、合成、半合成か、或いは組換え体を起源として得られた実質的に精製され
たBGFRPのアミノ酸配列を指す。

【００２７】 ここで用いる用語「アゴニスト」は、BGFRPと結合した場合にBGFRPの効果を高め
たり、その効果の持続時間を延ばす分子を指す。アゴニストには、BGFRPに結合
してその作用を調節するタンパク質、核酸、糖質、または任意の他の分子が含ま
れ得る。

【００２８】 ここで用いる「アレル変異配列」は、BGFRPをコードする遺伝子の対立形である
。アレル変異配列は、核酸配列における少なくともひとつの突然変異に起因し、
変異したmRNA或いはポリペプチドが生ずるが、それらの構造又は機能は変化する
場合と変化しない場合がある。与えられた任意の自然の遺伝子または組換え型の
遺伝子には、アレル形がないもの、1つ存在するもの、或いは多数存在するもの
がある。一般にアレル変異配列が生じる通常の変異は、ヌクレオチドの自然な欠
失、付加、または置換に因るものである。これらのタイプの変化の各々は、単独
または他の変化と組み合わされて、所定の配列において１またはそれ以上の回数
で生じ得る。

【００２９】 ここで用いるBGFRPをコードする「変異(altered)」核酸配列には、結果として同
一のBGFRPまたはBGFRPの機能的特徴の少なくとも1つをともなうポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドをもたらす種々のヌクレオチドの欠失、挿入、また
は置換をともなうそれらの配列が含まれる。この定義には、BGFRPをコードする
ポリヌクレオチドの特定のオリゴヌクレオチドプローブを用いて容易に検出可能
な、或いは検出困難な多型と、またBGFRPをコードするポリヌクレオチド配列の
正常の染色体の位置とは別の所定の位置を有する、アレル変異配列に対する不適
切な或いは予期しないハイブリダイゼーションとが含まれる。コード化されたタ
ンパク質もまた「変異」したものであり得て、サイレント変化(silent change)を
生ずるアミノ酸残基の置換、欠失、または挿入を含み、結果的に機能的に等価BG
FRPとなるものである。意図的なアミノ酸置換は、BGFRPの生物学的または免疫学
的活性が保持される限りにおいて、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性
、および／または両親媒性の性質についての類似性に基づき行なわれ得る。例え
ば、負に荷電したアミノ酸にはアスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれ、正
に荷電したアミノ酸にはリジンおよびアルギニンが含まれ、同様な親水性値を有
する非電荷の極性頭基を有するアミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、バリン
、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェ
ニルアラニン、及びチロシンが含まれる。

【００３０】 ここで用いる「アミノ酸」または「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチド
、ポリペプチド、又はタンパク質の配列、またはそれらの何れかの断片であり、
自然発生又は合成の分子を指す。BGFRPの断片は、好ましくは約5〜約15個のアミ
ノ酸の長さを有し、BGFRPの生物的活性又は免疫学的活性を保持しているもので
ある。この文脈において、「断片」、「免疫原性の断片」、または「抗原性の断片」は
、好ましくは約5〜15のアミノ酸の長さ（最も好ましくは14のアミノ酸の長さ）
であってBGFRPの生物学的活性または免疫学的活性を保持するBGFRPの断片を指す
。ここで「アミノ酸配列」は、自然発生タンパク質分子のアミノ酸配列を指すも
のとして挙げているが、「アミノ酸配列」や類似の用語は、列挙されたタンパク
質分子に関連する完全で元のままのアミノ酸配列にアミノ酸配列を限定する意味
で用いられるわけではない。

【００３１】 ここで用いる「増幅」は、核酸配列の追加の複製物を生成することであり、通
常は当業者に周知のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術を用いて実施される（Die
ffenbach, C.W.及びG.S. Dveksler (1995) PCR Primer. a Laboratory Manual,
Cold Spring Harbor Press, Plainview, NY,pp.1-5参照）。

【００３２】 ここで用いる用語「アンタゴニスト」は、BGFRPに結合した場合にBGFRPの生物
学的又は免疫学的活性の効果の程度を低下させたり、効果の持続時間を短縮する
分子を指す。アンタゴニストには、タンパク質、核酸、糖質、或いはBGFRPの作
用を低下させる任意の他の分子が含まれ得る。

【００３３】 ここで用いる用語「抗体」は、完全な分子、並びに抗原決定基と結合し得るFa
、F(ab)₂、及びFvフラグメントのようなそれらの断片も指す。BGFRPポリペプチド
に結合する抗体は、無処置のポリペプチドを用いて、或いは免疫化する抗原とし
て関与する小型のペプチドを含むその断片を用いて調製することができる。動物
（例えば、マウス、ラット、またはウサギ）を免疫化するのに用いるポリペプチ
ドまたはオリゴペプチドは、RNAの翻訳または化学的に合成されたものから得ら
れ、必要ならば担体タンパク質と結合可能である。ペプチドと化学的に結合する
通常用いられる担体には、ウシ血清アルブミン及びサイログロブリン、キーホー
ルリンペットヘモシアニン（KLH）が含まれる。次に、この結合したペプチドを
用いて動物を免疫化する。

【００３４】 ここで用いる用語「抗原決定基」は、特定の抗体と接触する分子の断片（即ち
、エピトープ）を指す。タンパク質またはタンパク質の断片を用いてホストの動
物を免疫化する場合、このタンパク質の多くの領域が、抗原決定基（タンパク質
の所定の領域または3次元構造）と特異的に結合する抗体の産生を誘発し得る。
抗原決定基は抗体への結合について元の抗原（即ち、免疫応答を誘発するために
用いられる免疫原）と競合し得る。

【００３５】 ここで用いる用語「アンチセンス」は、特定の核酸配列の「センス」鎖と相補的
な核酸配列を含む任意の成分を指す。アンチセンス分子は、合成や転写を含む任
意の方法で作り出すことができる。この相補的ヌクレオチドは、一度細胞内に導
入されると、細胞によって作られた天然の配列と結合して2重鎖を形成し、転写
や翻訳を妨げる。「マイナス（−）」なる表現がアンチセンス鎖を指し、「プラ
ス（＋）」なる表現がセンス鎖を指すことがある。

【００３６】 ここで用いる用語「生物学的に活性」は、自然発生の分子の構造的機能、調節
機能、又は生化学的機能を有するタンパク質を指す。同様に「免疫学的に活性」
は、天然の、組換え体の、又は合成のBGFRP、若しくはその任意のオリゴペプチ
ドの能力を指し、適当な動物や細胞における特定の免疫応答を誘発し、特定の抗
体に結合する。

【００３７】 ここで用いる用語「相補的」または「相補性」は、任意の塩類及び温度条件の
下での塩基対によるポリヌクレオチド同士の自然な結合である。例えば、配列「
A-G-T」は相補的配列「T-C-A」に結合する。2つの1本鎖分子間の相補性は、幾つ
かの核酸のみが結合しているような「部分的」なものも、或いは1本鎖分子間に
完全な相補性が存在するような「完全」なものもある。核酸鎖同士の相補性の程度
は、核酸鎖同士のハイブリダイゼーションの効率及び強さに大きな影響を与える
。このことは、核酸鎖同士の結合によって左右される増幅反応や、ペプチド核酸
（PNA）分子の設計及び使用において特に重要である。

【００３８】 ここで用いる「所定のポリヌクレオチド配列を含む組成物」または「所定のア
ミノ酸配列を含む組成物」とは、概して所定のポリヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列を含む任意の組成物を指す。この組成物には、乾燥した製剤、水溶液、
または無菌の組成物が含まれ得る。BGFRPまたはBGFRPの断片をコードするポリヌ
クレオチドを含む組成物は、ハイブリダイゼーションプローブとして利用できる
。このプローブは凍結乾燥した形態で保存することができ、糖質のような安定化
剤と結合させることができる。ハイブリダイゼーションにおいて、このプローブ
は、塩（例えば、NaCl）、界面活性剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)
）及び他の物質（例えば、デンハート液、乾燥ミルク、サケ精子DNA等）を含む
水溶液に分散させることができる。

【００３９】 ここで用いる用語「コンセンサス配列」は、再度配列決定して不要な塩基が分
離された核酸配列か、XL-PCR^TM(Perkin Elmer, Norwalk, CT)を用いて5‘方向及
び／又は3’方向に伸長して再度配列決定した核酸配列か、或いはフラグメント
の組み合わせのためのコンピュータプログラム（例えば、GELVIEW^TM Fragment A
ssembly system, GCG, Madison WI）を用いて2種以上のインサイト社クローンの
重複した配列から組み合わせて作られた核酸配列である。いくつかの配列が伸長
され、かつ組み合わされてコンセンサス配列が作られる。

【００４０】 ここで用いる用語「ポリヌクレオチドの発現と相関性を有する」とは、ノーザ
ン解析によるBGFRPをコードする核酸配列と同一か又は関連する核酸の存在の検
出が、サンプル内のBGFRPをコードする核酸の存在を示しており、従ってBGFRPを
コードするポリヌクレオチドからの転写産物の発現と相関性を有している、とい
うことを表している。

【００４１】 ここで用いる「欠失」は、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における変化
であり、結果的に１個またはそれ以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸残基が欠
けることである。

【００４２】 ここで用いる用語「誘導体」は、ポリペプチド配列、又はポリヌクレオチド配
列の化学修飾を指す。ポリヌクレオチド配列の化学修飾には、例えば、水素から
アルキル基、アシル基、又はアミノ基への置換が含まれる。ポリヌクレオチド誘
導体は、自然発生の分子の生物学的又は免疫学的機能を保持しているポリペプチ
ドをコードする。誘導体ポリペプチドは、グリコシル化、ポリエチレングリコー
ル化(pegylation)、または元のポリペプチドの生物学的又は免疫学的機能を保持
する別の任意のプロセスで修飾されたものである。

【００４３】 ここで用いる用語「類似性」は、或る程度の相補性を意味する。部分的な類似
性と、完全な類似性の場合がある。用語「類似性」の代わりに「同一性」を用いるこ
とができる。同一の配列が標的の核酸とハイブリダイズするのを少なくとも部分
的に阻害する部分的に相補的な配列は、「実質的に類似な」ことを指す。完全に
相補的な配列と標的配列とのハイブリダイゼーションの阻害は、緩やかな厳密性
のもとで、ハイブリダイゼーションアッセイ（サザン法またはノーザン法、溶液
ハイブリダイゼーション等）を用いて検定可能である。実質的に類似な配列また
はハイブリダイゼーションプローブは、緩やかな厳密性の下で完全に類似（同一
）な配列との結合について標的の配列と競合し、それを阻害する。このことは、
緩やかな厳密性の条件が、非特異的な結合を許容するようなものであるというこ
とを意味するわけではなく、緩やかな厳密性の条件では2つの配列の相互の結合
が特異的（即ち選択的）相互作用であることが必要である。非特異的結合が存在
しないことを、部分的な程度の相補性（即ち約30%未満の類似性又は同一性）さ
えも有していない第2の標的配列を用いることにより検査することができる。非
特異的結合が存在しない場合、概ね類似な配列またはプローブは第2の非相補的
な標的配列とハイブリダイズしない。

【００４４】 ここで用いる用語「同一性のパーセント」又は「同一性の%」は、2以上のアミノ酸
または核酸配列の比較において見出された配列の類似性の百分率を指す。同一性
のパーセントは、例えばMegAlignプログラム（DNASTAR,Inc.,Madison WI）を用
いることによって電子的に決定できる。MegAlignプログラムは、例えばclustal
Method.（例えば、Higgins,D.G.及びSharp,P.M.(1988)Gene 73:237-244参照）の
ような種々の方法に従い、2以上の配列の間のアライメントを作成することがで
きる。clustalアルゴリズムは、全てのペアの間の距離を調べることによって配
列をクラスターに分類する。クラスターはペアでアライメントされ、次にグルー
プにおいてアライメントされる。2つのアミノ酸配列（例えば、配列A及び配列B
）の間の類似性のパーセンテージは、（配列Aと配列Bとの間で一致する残基の総
数）／（配列Aの長さ−配列Aにおけるギャップ残基(gap residues)の数−配列B
におけるギャップ残基の数）×100によって計算する。2つのアミノ酸の間の低い
類似性または非類似性のギャップは、類似性のパーセンテージの測定に含まれな
い。また、核酸配列の間の同一性のパーセントは、例えばJotun Hein Methodの
ような当業者に周知の他の方法により計算、即ちカウントできる（例えばHein,
J.(1990) Methods Enzymol. 183:626-645参照）。更に配列間の同一性は、例え
ばハイブリダイゼーション条件を変更することによる当業者に周知の別の方法に
よって測定可能である。

【００４５】 「ヒト人工染色体」（HACs）は6kb〜10MbのサイズのDNA配列を含んでおり、安定
した有糸分裂染色体の分離及び維持に必要な全ての要素を含む直鎖状の小染色体
である（Harrington, J.J.ら (1997) Nat Genet. 15:345-355参照）。

【００４６】 ここで用いる用語「ヒト化抗体」は、抗体が本来の結合能力をそのまま保持し
ながらヒト抗体により近づくように、非抗体結合領域におけるアミノ酸配列配列
を置換した抗体分子を指す。

【００４７】 ここで用いる用語「ハイブリダイゼーション」は、核酸の鎖が塩基対合を介し
て相補鎖と結合する任意の過程を指す。

【００４８】 ここで用いる用語「ハイブリダイゼーション複合体」は、相補的な塩基の間の
水素結合形成の効力によって、2つの核酸配列で形成された複合体を指す。ハイ
ブリダイゼーション複合体は、溶液中で形成されるか（例えば、C₀t又はR₀t解析
）、或いは核酸は溶液中に存在する一方の核酸と固体支持体（例えば、紙、メン
ブラン、フィルタ、ピン、またはスライドガラス、ポリマー、または細胞やその
核酸が固定される他の適切な基板）に固定されたもう一方の核酸との間で形成さ
れ得る。

【００４９】 ここで用いる「挿入」或いは「付加」は、自然発生の分子にみられる配列に対
して、1個または2個以上のヌクレオチド、アミノ酸残基が各々加わるような、ヌ
クレオチド配列或いはアミノ酸配列の変化を指す。

【００５０】 「免疫応答」は、炎症、心的外傷、免疫異常症、又は伝染性もしくは遺伝性の疾
患に関連する容態を指す。これらの容態は、細胞および全身の防御系に作用する
種々の因子（例えばサイトカイン、ケモカイン、及び他のシグナル伝達分子）の
発現によって特徴づけられる。

【００５１】 用語「マイクロアレイ」とは、例えば紙、ナイロン、又は他のタイプのメンブ
ラン、フィルタ、チップ、スライドガラス、又は他の任意の適切な固体支持体の
ような基板上に配列された個々のポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを配
列したものを指す。

【００５２】 ここでマイクロアレイコンテキスト用いる用語「エレメント」又は「アレイエレ
メント」は、支持体（基板）の表面に配置されたハイブリダイズ可能なポリヌク
レオチドを指す。

【００５３】 ここで用いる用語「調節(modulate)」は、BGFRPの活性の変化を指す。例えば
、調節によって、タンパク質活性の向上や低下、結合特性の変化、又はBGFRPの
生物学的、機能的、免疫学的特性等の他の変化がもたらされる。

【００５４】 ここで用いる「核酸」または「核酸配列」は、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチ
ド、ポリヌクレオチド、又はそれらの任意の断片を指す。また、これらの用語は
、1本鎖または2本鎖の、センス鎖又はアンチセンス鎖のゲノム起源又は合成起源
のDNA若しくはRNAや、ペプチド核酸（PNA）や、任意のDNA様若しくはRNA様物質
も指す。ここで「フラグメント（断片）」は、翻訳された場合に、完全長ポリペ
プチドの抗原性等の幾つかの機能的特徴や、ATP結合部位等の構造的ドメインの
特徴を維持するポリペプチドを生成する核酸配列を指す。

【００５５】 ここで用いる用語「操作可能に関連する」、即ち「操作可能に連結する」は、機能
的に関係した核酸配列を指す。プロモーターがコードされたポリペプチドの転写
を制御する場合、プロモーターはコード配列と操作可能に関連する、即ち操作可
能に連結する。操作可能に関連した、即ち操作可能に連結した核酸配列が、読み
枠に存在あるいは近接する際に、所定の遺伝因子（例えば、リプレッサー遺伝子
）は、コードされたポリペプチドには連続的に連結せずに、それでもポリペプチ
ドの発現を制御するオペレーター配列に結合する。

【００５６】 ここで用いる「オリゴヌクレオチド」は、PCR増幅又はハイブリダイゼーショ
ンアッセイ、またはマイクロアレイで用いることができる核酸配列であって、長
さが少なくとも約6ヌクレオチドから約60ヌクレオチド程度のもので、好適には1
5〜30ヌクレオチド、より好適には20〜25ヌクレオチドであるものを指す。ここ
で用いる「オリゴヌクレオチド」は、当技術分野において一般に定義されている用
語「アンプライマー」、「プライマー」、「オリゴマー」、及び「プローブ」と
概ね同義である。

【００５７】 ここで用いる「ペプチド核酸」（PNA）は、リジンを末端とするアミノ酸残基
のペプチドバックボーンに結合した5ヌクレオチド以上の長さのオリゴヌクレオ
チドを含むアンチセンス分子又は抗遺伝子剤(anti-gene agent)を指す。末端の
リジンがその組成に溶解性を賦与している。PNAは相補的な1本鎖DNAやRNAに優先
的に結合して転写物の伸長を止め、またPNAをポリエチレングリコール化して細
胞におけるPNAの寿命を延ばすことが可能である。（Nielsen, P.E.ら(1993) Ant
icancer Drug Des. 8:53-63）。

【００５８】 ここで用いる用語「サンプル」は、その最も広い意味で用いられる。BGFRPを
コードする核酸、若しくはその断片、またBGFRP自体を含む疑いのある生物学的
サンプルは、体液や、細胞から分離された染色体、細胞小器官、又は細胞膜から
の抽出物や、細胞や、（溶液中の、或いは固体支持体に結合した）ゲノムのDNA
、RNA、またはcDNAや、組織や、組織プリントその他を含み得る。

【００５９】 ここで用いる用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗体ならび
にタンパク質もしくはペプチド、抗体及びアンタゴニストの相互作用を指す。こ
の相互作用は、タンパク質の特定の構造（例えば、結合する分子が認識する抗原
決定基、つまりエピトープ）の存在に左右されることを意味している。例えば、
抗体がエピトープ「A」に対して特異的である場合、標識された遊離した「A」及
びその抗体を含む反応において、エピトープA（つまり遊離し、標識されていな
いA）を含むポリヌクレオチドが存在することにより、抗体に結合した標識され
たAの量が低下する。

【００６０】 ここで用いる用語「厳密（ストリンジェント）な条件」は、ポリヌクレオチド
と特許請求の範囲に記載されたポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションが
可能な条件を指す。厳密な条件は、塩濃度、有機溶剤（例えば、ホルムアミド）
の濃度、温度、及び当業者に周知の他の条件によって規定される。特に、塩の濃
度を低下させることや、ホルムアミドの濃度を上昇させることや、ハイブリダイ
ゼーション温度を上昇させることによって厳密性が増す。

【００６１】 例えば、厳密な塩濃度は、通常は約750mM未満の塩化ナトリウム及び約75mM未
満のクエン酸3ナトリウムであり、好ましくは約500mM未満の塩化ナトリウム及び
約50mM未満のクエン酸3ナトリウムであり、最も好ましくは約250mM未満の塩化ナ
トリウム及び約25mM未満のクエン酸3ナトリウムである。例えばホルムアミド等
の有機溶剤の非存在下では厳密性の低いハイブリダイゼーションとなり、一方で
約35%以上のホルムアミド、最も好ましくは約50%以上のホルムアミドの存在下に
おいて厳密性の高いハイブリダイゼーションとなる。厳密な温度条件は、通常は
約30℃以上であり、より好ましくは約37℃以上であり、最も好ましくは約42℃以
上である。例えば、ハイブリダイゼーション時間、ドデシル硫酸ナトリウム（SD
S）等の薬品濃度、キャリアDNAの含有または排除等の変動する付加的なパラメー
ターは、当業者には周知である。これらの必要とする種々の条件を組合わせるこ
とによって、様々なレベルの厳密性が実現される。好適な実施例では、温度30℃
、750mMの塩化ナトリウム、75mMのクエン酸3ナトリウム、及び1%のSDSにおいて
ハイブリダイゼーションが実施される。より好適な実施例では、温度37℃、500m
Mの塩化ナトリウム、50mMのクエン酸3ナトリウム、1%のSDS、35%のホルムアミド
、及び100μg/mlの変性サケ精子DNA（ssDNA）においてハイブリダイゼーション
が実施される。最も好適な実施例では、温度42℃、250mMの塩化ナトリウム、25m
Mのクエン酸3ナトリウム、1%のSDS、50%のホルムアミド、及び200μg/mlのssDNA
においてハイブリダイゼーションが実施される。これらの条件の有益な変更につ
いては、当業者には容易に理解されるであろう。

【００６２】 ハイブリダイゼーションの後の洗浄過程においても厳密性は変更し得る。洗浄
の厳密な条件は、塩濃度および温度によって規定できる。前述のように、塩濃度
を低下させるか、或いは温度を上昇させることで洗浄の厳密性が増大し得る。例
えば、洗浄過程の厳密な塩濃度の条件は、好ましくは約30mM未満の塩化ナトリウ
ム及び約3mM未満のクエン酸3ナトリウムであり、最も好ましくは約15mＭ未満の
塩化ナトリウム及び約1.5mM未満のクエン酸3ナトリウムである。洗浄過程の厳密
な温度の条件は、通常は約25℃以上であり、より好ましくは約42℃以上であり、
最も好ましくは約68℃以上である。好適実施例では、洗浄過程は、温度25℃、30
mMの塩化ナトリウム、3mMのクエン酸3ナトリウム、及び0.1%SDSにおいて実施さ
れる。より好適な実施例では、洗浄過程は、温度42℃、15mMの塩化ナトリウム、
1.5mMのクエン酸3ナトリウム、及び0.1%SDSにおいて実施される。最も好適な実
施例では、洗浄過程は、温度68℃、15mMの塩化ナトリウム、1.5mMのクエン酸3ナ
トリウム、及び0.1%SDSにおいて実施される。これらの条件の更なる変更につい
ては、当業者には容易に理解されるであろう。

【００６３】 ここで用いる用語「実質的に精製」は、天然の環境から取り除かれた核酸配列
又はアミノ酸配列であって、天然にはそれが結合して存在する他の構成成分から
単離又は分離されて、その構成要素が60%以上、好ましくは75%以上、最も好まし
くは90%以上除去された核酸配列又はアミノ酸配列である。

【００６４】 ここで用いる「置換」は、それぞれ1個または2個以上のヌクレオチド或いはア
ミノ酸を、別のヌクレオチド或いはアミノ酸に各々置換することを指す。

【００６５】 ここで用いる「形質転換」の定義は、外来性のDNAが入り込みレシピエント細
胞を変化させるプロセスを意味する。形質転換は、当業者に周知の種々の方法を
用いた天然または人工の条件の下で起こり、また外来性の核酸配列を原核細胞ま
たは真核細胞の宿主細胞に導入するための任意の既知の方法に基づき得る。形質
転換の方法は、形質転換される宿主細胞のタイプによって選択され、以下に限定
はされないが、ウイルス感染、熱ショック、電気穿孔法（エレクトロポレーショ
ン）、リポフェクション、及び微粒子銃を用いる方法が含まれる。このような「
形質転換された」細胞には、挿入されたDNAを自律的に複製するプラスミドとし
て、または宿主の染色体の一部として複製が可能な安定的に形質転換された細胞
が含まれ、またそれは限られた時間で導入されたDNAやRNAを一過性に発現する細
胞を指す。

【００６６】 ここで用いるBGFRPの「変異体」は、1又は2以上のアミノ酸が変異したアミノ
酸配列である。この変異体は「保存的」変化を含むものであり得、この場合、例
えばロイシンをイソロイシンで置き換えるように、置換されるアミノ酸が類似な
構造的及び化学的特性を有する。稀にではあるが、例えばグリシンがトリプトフ
ァンで置換されるように、変異体が「非保存的」に変化する場合もある。類似し
た小さい変化には、アミノ酸の欠失または挿入、或いはその両方が含まれる。例
えばDNASTARソフトウエアのような周知のコンピュータプログラムを用いて、何
れのアミノ酸残基が生物学的或いは免疫学的活性を損なわずに置換、挿入、又は
除去可能であるということを決定するガイダンスを提供することができる。

【００６７】 発明 本発明は、新規のヒトB細胞成長因子関連タンパク質（BGFRP）、BGFRPをコー
ドするポリヌクレオチド、並びに免疫異常症、細胞増殖障害、及び感染症の診断
、予防、又は治療のためのこれらの組成物の利用法の発見に基づくものである。

【００６８】 本発明のBGFRPをコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、心筋のcDNAライブラリー（CARDNOT01）からのインサイト
社クローン186149に於いて初めて同定された。コンセンサス配列のSEQ ID NO:2
は、このクローンから導出された。

【００６９】 一実施例において、本発明は図１Ａ及び図１Ｂに示すようなSEQ ID NO:1のア
ミノ酸配列を含むポリペプチドを包含する。BGFRPは、111個のアミノ酸の長さで
あり、T102におけるカゼインキナーゼIIによる潜在的リン酸化部位と、M1からA2
1までの推定シグナルペプチド配列とを有する。図２に示すように、BGFRPはヒト
BCGF1（GI 522145; SEQ ID NO:3）と化学的および構造的類似性を有する。BGFRP
とBCGF1は20%の同一性を共有する。特に、V94からI110までのBGFRPの領域は、対
応するBCGF1の領域と76%の同一性を共有する。更に、BGFRPとBCGF1は同様のサイ
ズ（各々111個及び120個のアミノ酸）、及び等電点（各々9.9及び9.8）を有する
。約アミノ酸37からアミノ酸48までのBGFRPにおける非反復配列(unique sequenc
e)の領域は、約ヌクレオチド232からヌクレオチド267までのSEQ ID NO:2の断片
によってコードされる。ノーザン分析は、心臓及び胎盤のcDNAライブラリーにお
いてこの分子の発現を示す。

【００７０】 また、本発明はBGFRPの変異体を含む。BGFRP変異体は、BGFRPアミノ酸配列に
対して好ましくは少なくとも80%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましく
は少なくとも95%以上のアミノ酸配列の同一性を有し、またBGFRPの機能的もしく
は構造的特徴の少なくとも1つを含む。

【００７１】 更に、本発明はBGFRPをコードするポリヌクレオチドを包含する。特定の実施
例において、本発明はBGFRPをコードするSEQ ID NO:2の配列を含むポリヌクレオ
チド配列を包含する。

【００７２】 更に、本発明はBGFRPをコードするポリヌクレオチドの変異配列を含む。特に
、そのようなポリヌクレオチドの変異配列は、BGFRPをコードするポリヌクレオ
チド配列に対して少なくとも80%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましく
は少なくとも95%以上のポリヌクレオチド配列の同一性を有する。本発明の特定
の態様には、SEQ ID NO:2の変異配列が含まれ、それはSEQ ID NO:2対して少なく
とも80%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%以上の
ポリヌクレオチド配列の同一性を有する。上記のポリヌクレオチドの変異配列は
何れもBGFRPの機能的または構造的特徴の少なくとも1つを含むアミノ酸配列をコ
ードすることが可能である。

【００７３】 遺伝暗号の縮重の結果、既知の遺伝子及び自然発生の遺伝子のポリヌクレオチ
ド配列に対する最小の類似性を有する幾つかのものを含め、多数のBGFRPをコー
ドするポリヌクレオチド配列が作り出されることが、当業者には理解されるであ
ろう。従って、本発明は、可能なコドン選択に基づく組合せの選択により作り出
され得るポリヌクレオチド配列の可能な全ての変異を考慮している。これらの組
合せは自然発生のBGFRPのヌクレオチド配列に対し適用されるような標準のトリ
プレット遺伝暗号に従い作り出されるものであり、また全てのそのような変異は
ここに明確に開示されると考えられたい。

【００７４】 BGFRPをコードするヌクレオチド配列及びその変異配列は、適切に選択された
厳密性の条件下に於いて、自然発生のBGFRPのヌクレオチド配列に対してハイブ
リダイズ可能であることが好ましいが、それは非自然発生のコドンを含める等の
実質的に異なるコドンの用法を有するBGFRP又はその誘導体をコードするヌクレ
オチド配列を作り出すのに有利である。特定のコドンが宿主により利用される頻
度に従い、真核生物又は原核生物の宿主に於いてペプチドの発現が起こる割合を
高めるようにコドンを選択することができる。コードされるアミノ酸配列を変化
させることなしにBGFRP及びその誘導体をコードするヌクレオチド配列を実質的
に変更する別の理由は、自然発生の配列から作り出された転写物よりも長い半減
期のようなより望ましい特性を有するRNA転写物を作り出すためである。

【００７５】 また本発明は、BGFRP及びその誘導体をコードするDNA配列、またはその断片を
専ら合成化学によって作り出すことを含む。作製の後に、合成配列を当業者によ
って周知の試薬を用いて任意の多数の利用可能な発現ベクター及び細胞系に挿入
することが可能である。更に、合成化学を利用してBGFRPをコードする配列又は
それらの任意のフラグメントに突然変異を導入し得る。

【００７６】 また本発明に包含されるものには、種々の厳密な条件の下で、請求項に記載さ
れたポリヌクレオチド配列、また特にSEQ ID NO:2又はSEQ ID NO:2の断片に対し
てハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド配列が含まれる（例えば、Wahl, G.M.
及びS.L. Berger(1987) Methods Enzymol. 152:399-407；Kimmel, A.R.(1987) M
ethods Enzymol. 152:507-511参照）。

【００７７】 DNA塩基配列決定方法は周知のものであり、一般に先行技術に於いても利用さ
れ、本発明の任意の実施例においても利用されうる。その方法は、DNAポリメラ
ーゼＩのクレノウフラグメント、Sequenase ^ョ（US Biochemical Corp,Cleveland ,OH）、Taqポリメラーゼ（Perkin Elmer）、耐熱性T7ポリメラーゼ（Amersham,
Chicago,IL）、或いはELONGASE増幅システム（GIBCO/BRL,Gaithersburg,MD）に
於いて発見されたようなプルーフリーディングエキソヌクレアーゼ及びポリメラ
ーゼの組合せのような酵素を使用する。そのプロセスは、Hamilton Micro Lab 2
200（Hamilton,Reno,NV）、Peltier Thermal Cycler（PTC200; MJ Research,Wat
ertown,MA）及びABI Catalyst及び373及び377 DNA sequencers（Perkin Elmer）
のような装置によって自動化することが好ましい。

【００７８】 BGFRPをコードする核酸配列は、部分的なヌクレオチド配列を用いて先行技術
に於いて周知の種々のPCR法をベースとした方法で伸長し、プロモータ及び調節
エレメントのような上流の配列を検出することができる。例えば、用いられる方
法の1つである制限部位PCR法は、一般的なプライマー及びネスト化プライマーを
用いてクローニングベクター内のゲノムDNAから未知の配列を増幅する（例えば
、Sarkar, G. (1993) PCR Methods Applic. 2:318-322を参照）。逆PCR法を用い
る別の方法では、多岐に伸長して環状化鋳型から未知の配列を増幅するプライマ
ーを用いる。この鋳型は、既知のゲノム遺伝子座及びその周辺の配列を含む制限
酵素断片に由来する。（Triglia, T.ら（1988）Nucleic Acids Res. 16:8186）
。第3の方法として、捕獲PCR法(capture PCR)には、ヒト及び酵母菌の人工染色
体DNAの既知の配列に隣接するDNA断片のPCR増幅が含まれる（例えば、Lagerstro
m, M.ら（1991）PCR Methods Applic 1:111-119を参照）。この方法では、多数
の制限酵素の消化及びライゲ−ションを用いて、PCRを行う前に未知の配列の領
域に組換え2本鎖配列を挿入することができる。また、未知の配列を回収するの
に用いられ得る他の方法が当業者に周知である（例えば、Parker, J.D. ら (199
1)Nucleic Acids Res. 19:3055-306を参照）。更に、PCR法、ネスト化プライマ
ー、PromoterFinder^TMライブラリーを用いて、ゲノムDNA内の歩行が可能である
（Clontech, Palo Alto, CA）。この方法ではライブラリをスクリーニングする
必要がなく、イントロン／エキソン移行部の発見に有用である。全てのPCR法を
ベースとした方法については、プライマーは、OLIGO^TM 4.06 Primer Analysis s
oftware（National Biosciences Inc., Plymouth, MN）のような市販のソフトウ
ェア又は別の適切なプログラムを用いて、長さが22〜30ヌクレオチド、GC含有率
が約50%以上、また約68℃〜72℃の温度で鋳型に対してアニーリングするよう設
計され得る。

【００７９】 完全長cDNAをスクリーニングするとき、大きなcDNAを含むようにサイズ選択さ
れたライブラリーを用いることが好ましい。また、遺伝子の5’領域を配列を含
むことが多いランダムプライムド(random-primed)ライブラリーは、oligo d(T)
ライブラリーで完全な長さのcDNAを得られない場合に好適である。またゲノムラ
イブラリーは、5’非転写領域における配列の伸長のために役立ち得る。

【００８０】 配列決定やPCRの産物のヌクレオチド配列のサイズ分析または確認のために、
市販のキャピラリー電気泳動法システムを用いることができる。特に、キャピラ
リーシークエンシングでは、電気泳動分離のための流動性ポリマー、4つの異な
るヌクレオチドに特異的なレーザーで活性化される蛍光色素、及び放射された波
長の検出を行うCCDカメラを使用し得る。出力／光強度は適切なソフトウエア（
例えば、Perkin Elmer製のGenotyper^TM及びSequence Navigator^TM）を用いて電
気信号に変換され、サンプルのローディングからコンピュータ解析及び電子デー
タ表示までの全過程がコンピュータ制御され得る。キャピラリー電気泳動法は、
特定のサンプル内に限られた量だけしか存在しないこともあるDNAの小片の配列
決定に特に好適である。

【００８１】 本発明の別の実施例では、BGFRPをコードするポリヌクレオチド配列またはそ
の断片を組換えDNA分子に用いて、BGFRP、その断片またはその機能的等価物の適
切な宿主細胞内における発現を指向することができる。遺伝暗号の固有の縮重に
よって、実質的に同一、即ち機能的に等価なアミノ酸配列をコードする他のDNA
配列が作り出され、BGFRPの発現のために用いることができる。

【００８２】 限定はしないが遺伝子産物のクローニング、プロセシング及び／又は発現を改
変すること等の種々の理由により、BGFRPをコードする配列を改変するために、
本発明のヌクレオチド配列を当業者に周知の方法を用いて操作可能である。ラン
ダムな断片化によるDNA混合や、遺伝子断片及び合成オリゴヌクレオチドのPCR再
構成を用いて、ヌクレオチド配列を操作できる。例えば、オリゴヌクレオチド媒
介の部位特異的変異誘発により、新しい制限部位を生成する突然変異の挿入、グ
リコシル化パターンの変更、コドン選好の変化、スプライシングバリアントの生
成等が可能である。

【００８３】 本発明の別の実施例では、当業者に周知の化学的手法を用いて、BGFRPをコー
ドする配列の全体、或いはその一部を合成することができる（例えば、Caruther
s.M.H.ら(1980)Nucl.Acids Res.Symp.Ser.215-223；Horn,T.ら(1980)Nucl.Acids
Res.Symp.Ser.225-232参照）。或いは、化学的手法を用いて、BGFRPそのもの又
はその断片を合成することができる。例えば、種々の固相技術を用いてペプチド
合成を行うことができる（例えば、Roberge, J.Y.ら(1995) Science 269:202-20
4参照）。また、ABI 431Aペプチドシンセサイザ（Perkin Elmer）を用いて合成
の自動化を行なうことができる。更に、BGFRPのアミノ酸配列もしくはその任意
の部分を、直接の合成において改変することにより、並びに／又は他のタンパク
質もしくはその任意の部分に由来する配列と結合させることにより、変異体ポリ
ペプチドを生成可能である。

【００８４】 そのペプチドは、分離用の高速液体クロマトグラフィにより実質的に精製する
ことができる（例えば、Chiez, R.M.およびRegnier. F.Z. (1990) Methods Enzy
mol. 182:392-421参照）。合成されたペプチドの組成は、アミノ酸解析或いは配
列決定法により確認することができる（Creighton,T.(1983) Proteins. Structu res avd Molecular Properties ,WH Freeman and Co.,New York,NY）。

【００８５】 生物学的に活性なBGFRPを発現させるために、BGFRPをコードするヌクレオチド
配列またはその誘導体を、適切な発現ベクター（即ち、適切な宿主に挿入された
コーディング配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含むベクター）に挿入
する。これらのエレメントには、ベクター及びBGFRPをコードするポリヌクレオ
チド配列におけるエンハンサー、構成型及び発現誘導型のプロモーター、5’及
び3’の非翻訳領域等の調節配列が含まれる。このようなエレメントの長さ及び
特異性は変化し得る。特定の開始シグナルを利用して、BGFRPをコードする配列
のより効果的な翻訳を行なうことが可能である。このようなシグナルには、ATG
開始コドンや例えばコザック配列等の隣接する配列が含まれる。BGFRPをコード
する配列、その開始コドン、及び上流の調節配列が、適切な発現ベクターに挿入
された場合は、付加的な転写調節シグナルや翻訳調節シグナルは不用となり得る
。しかしながら、コーディング配列或いはその断片のみが挿入された場合は、読
み枠の中のATG開始コドンを含む外来性の翻訳調節シグナルが発現ベクターよっ
て与えられなければならない。外来性の翻訳エレメント及び開始コドンは、天然
及び合成の種々のものからなり得る。用いられる特定の宿主細胞株に適当なエン
ハンサーを含むことにより、発現の効率を高めることが可能である（例えば、Sc
harf, D. ら (1994) Results Probl. Cell Differ. 20:125-162.を参照）。

【００８６】 BGFRPをコードする配列および適切な転写や翻訳の調節領域を含む発現ベクタ
ーを作製するために、当業者に周知の方法が用いられる。これらの方法には、in vitro 組換えDNA技術、合成技術、及びin vivo遺伝的組換え技術が含まれる（例
えば、Sambrook, J.ら(1989)Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold S
pring Harbor Press, Plainview, NY, ch.4,8,及び16-17；Ausubel,F.M.ら(1995
, and periodic supplements) Current Protocols in Molecular Biology, John
Wiley & Sons, New York, NY, ch.9,13,及び16参照）。

【００８７】 BGFRPをコードする配列を包含し、発現するために、種々の発現ベクター／宿
主系が利用できる。これらには、以下に限定しないが、組換え型のバクテリオフ
ァージ、プラスミド或いはコスミドDNA発現ベクターで形質転換した細菌のよう
な微生物や、酵母菌発現ベクターで形質転換した酵母菌や、ウイルス発現ベクタ
ー（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系や、ウイルス発現ベクタ
ー（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（CaMV）またはタバコモザイクウイ
ルス（TMV））或いは細菌の発現ベクター（例えば、TiまたはpBR322プラスミド
）で形質転換した植物細胞系や、或いは動物細胞系が含まれる。本発明は、利用
される宿主細胞によって限定されるものではない。

【００８８】 細菌系では、多数のクローニングベクター及び発現ベクターを、BGFRPをコー
ドするポリヌクレオチド配列の使用の目的に応じて選択できる。例えば、BGFRP
をコードするポリヌクレオチド配列の日常的なクローニング、サブクローニング
、及び増殖は、Bluescript? （Stratagene）又はpSportl^TM plasmid （GIBCO BR
L）等の多機能性E.coliベクターを用いて実施することが可能である。ベクター
の多数のクローニング部位へのBGFRPをコードする配列のライゲーションによりl
acZ遺伝子が破壊され、組換え分子を含む形質転換された細菌の同定のための比
色スクリーニング法が可能となる。更に、これらのベクターは、クローニングさ
れた配列のin vitroでの転写、ジデオキシークエンシング、ヘルパーファージに
よる1本鎖の救出、入れ子状態の欠失の生成に有用である（例えば、Van Heeke.
G.及びS.M. Schuster (1989) J. Biol. Chem. 264:5503-5509を参照）。例えば
、抗体産生の目的等に多量のBGFRPが必要な場合、ハイレベルなBGFRPの発現をも
たらすベクターが用いられ得る。例えば、強力な誘発性のT5又はT7バクテリオフ
ァージプロモーターを含むベクターが用いられ得る。

【００８９】 BGFRPの生成に酵母の発現系を利用できる。酵母菌Saccharomyces cerevisiae
又はPichia pastorisにおいて、α因子、アルコールオキシダーゼ、及びPGHなど
の構成型又は誘導型のプロモーターを含む多種のベクターを使用可能である。更
に、このようなベクターは、発現したタンパク質の分泌若しくは細胞内保持の何
れかを導き、安定した増殖のために宿主ゲノムの中に外来性の配列を組込みを可
能とする（例えば、上記のAusubel, 前出; 及び Grantら(1987) Methods Enzymo
l.153:516-54；Scorer, C.A.ら(1994) Bio/Technology 12:181-184を参照）。

【００９０】 植物系もBGFRPの発現に使用できる。BGFRPをコードする配列の転写は、ウイル
ス性のプロモータ（例えば、CaMVの35S及び19Sプロモーター単独、又はTMV由来
のオメガリーダー配列との組合わせ）で促進され得る（Takamatsu, N.ら(1987)
EMBO J. 6:307-311）。これらの作製物は、直接のDNA形質転換または病原体媒介
の形質移入によって、植物細胞中に導入可能である。（例えば、Hobbs, S.又はM
urry, L.E. in McGraw Hill Yearbook of Science and Technology(1992) McGra
w Hill, New York; pp.191-196を参照）。

【００９１】 哺乳類の細胞においては、多数のウイルスベースの発現系を利用することがで
きる。発現ベクターとしてアデノウイルスが用いられる場合、BGFRPをコードす
る配列が、後発のプロモータ及び三連のリーダー配列からなるアデノウイルス転
写／翻訳複合体の中に結合され得る。ウイルスのゲノムの非必須E1又はE3領域に
おける挿入により、宿主細胞においてBGFRPを発現する感染性のウイルスが得ら
れる（例えば、Logan, J.及びShenk, T.(1984)Proc. Natl. Acad. Sci. 81:3655
-3659を参照）。さらに、ラウス肉腫ウイルス（RSV）エンハンサーのような転写
エンハンサーを、哺乳類の宿主細胞内の発現を増大させるために用いることがで
きる。また、タンパク質の高レベルの発現のために、SV40またはEBVをベースと
したベクターを用いることができる。

【００９２】 また、ヒト人工染色体（HAC）を用いることにより、プラスミドに含まれ発現
され得るものに比べてより大きなDNAの断片を供給することもできる。治療を目
的とし、6kb〜10MbのHACを構築して従来のデリバリー方法（リポソーム、ポリカ
チオンのアミノポリマー、又は小胞）を介して供給することができる。

【００９３】 哺乳類系の組換え型タンパク質の産生を長期間にわたり確保するためには、細
胞株におけるBGFRPの安定した発現が好ましい。例えば、発現ベクターを用いてB
GFRPをコードする配列を細胞株に形質転換することが可能であり、その発現ベク
ターには、ウイルス起源の複製及び／若しくは内在性の発現エレメント並びに同
一或いは個別のベクターの上の選択マーカー遺伝子が含まれる。ベクターの導入
の後、選択培地に切り替える前に濃縮培地内で細胞を1〜2日間増殖させる。選択
可能なマーカーの目的は、選択的な媒介物に対して耐性を与えることであり、ま
たその存在によって導入された配列をうまく発現する細胞の増殖および回収が可
能とすることである。安定的に形質転換された細胞の耐性クローンは、その細胞
の型に適した組織培養技術を用いて増殖することができる。

【００９４】 形質転換された細胞株を回収するために任意の数の選択系を用いることができ
る。これらには、以下に限定しないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ
及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子が含まれ、それぞれは、
tk^-及びapr^-細胞において用いられる（例えば、Wigler,M.ら(1977)Cell 11:223-
32；Lowy,I.ら(1980)Cell 22:817-23参照）。また代謝拮抗剤、抗生剤或いは除
草剤への耐性を選択の基礎として用いることが可能で、例えばdhfrはメトトレキ
セートに対する耐性を与え、neoはアミノグリコシドネオマイシン及びG-418に対
する耐性を与え、als或いはpatはクロルスルフロン(chlorsulfuron)、ホスフィ
ノトリシンアセチルトランスフェラーゼ(phosphinotricin acetyltransferase)
に対する耐性を与える（例えば、Wigler, M.ら(1980) Proc. Natl. Acad. Sci.
77:3567-70；Colberre-Garapin, F. ら(1981) J. Mol. Biol. 150:1-14；Murry,
前出を参照）。さらに選択可能な遺伝子として、例えば、代謝産物に対する細
胞の必要性を変更するtrpB及びhisDが文献に記載されている（例えば、Hartman,
S.C.及びR.C. Mulligan(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85:8047-8051参照）。
例えば、アントシアニン、緑色蛍光タンパク質（GFP）（Clontech, Palo Alto,
CA）、β-グルクロニダーゼ及びその基質GUS、ルシフェラーゼ及びその基質ルシ
フェリン等の可視マーカーを利用できる。これらのマーカーは形質転換体を同定
するだけでなく、特定のベクター系による一過性の或いは安定的なタンパク質発
現の量を定量するために広く用いられる（例えば、Rhodes, C.A.ら(1995)Method
s Mol. Biol.55:121-131参照）。

【００９５】 マーカー遺伝子発現の存在／非存在によって目的の遺伝子の存在も示唆される
が、その遺伝子の存在及び発現の確認を必要とすることもある。例えばBGFRPを
コードする配列がマーカー遺伝子配列内に挿入された場合、BGFRPをコードする
配列を含む形質転換された細胞は、マーカー遺伝子の機能が存在しないことによ
り同定できる。或いは、単一のプロモータの制御下において、BGFRPをコードす
る配列とマーカー遺伝子を直列に配置することができる。選択または誘導に応じ
た標識遺伝子の発現は、通常直列に配置された配列の発現も同様に示す。

【００９６】 一般に、当業者に周知の様々な方法により、BGFRPをコードする核酸配列を含
みBGFRPを発現する宿主細胞を同定できる。このような方法には、以下に限定し
ないが、DNA−DNA或いはDNA−RNAハイブリダイゼーション、PCR増幅、並びに核
酸とタンパク質配列を検出及び／若しくは定量するための技術に基づく膜、溶液
、若しくはチップを含むタンパク質バイオアッセイ又はイムノアッセイが含まれ
る。

【００９７】 特異的なポリクローナル抗体若しくはモノクローナル抗体のいずれかを用いる
BGFRPの発現を検出・測定するための免疫学的手法は、当業者に周知のものであ
る。そのような技術の例には、酵素結合免疫検定法（ELISA）、ラジオイムノア
ッセイ（RIAs）及び蛍光細胞分析分離（FACS）が含まれる。BGFRP上において2つ
の非干渉エピトープに対して反応するモノクローナル抗体を利用する二部位のモ
ノクローナルベースのイムノアッセイ（two-site, monoclonal-based immunoass
ay）が好ましいが、競合的結合実験も用いられうる。これらアッセイおよび他の
アッセイは、当業者によって開示されている（例えば、Hampton, R.ら(1990);Se rological Methods, a Laboratory Manual , APS Press,St Paul,MN Section IV
；Coligan, J. E.ら(1997 and periodic supplements) Current Protocols in I mmunology , Greene Pub. Associates and Wiley-lnterscience, New York, NY;
及びMaddox, D.E.ら(1983); J. Exp. Med. 158:1211-1216を参照）。

【００９８】 多様なラベル及び結合技術が当業者には周知であり、そして種々の核酸及びア
ミノ酸のアッセイにおいて用いることができる。BGFRPをコードするポリヌクレ
オチドに関係する配列を検出するための、標識されたハイブリダイゼーションプ
ローブやPCRプローブを作製するための手段には、オリゴ標識(oligolabeling)、
ニックトランスレーション法、末端標識(end-labeling)、或いは標識ヌクレオチ
ドを用いるPCR増幅などが含まれる。或いは、BGFRPをコードする配列、又はその
任意の断片を、mRNAプローブの作製のためのベクターにクローン化できる。その
ようなベクターは当業者に周知で、また市販されており、これを用いて、例えば
T7、T3或いはSP6のような適切なRNAポリメラーゼ及び標識したヌクレオチドを加
えることによってin vitroでRNAプローブを合成することができる。これらの方
法は、種々の市販のキット（Pharmacia & Upjohn (Kalamazoo, MI)；Promega (M
adison WI)；及びU.S. Biochemical Corp., Cleveland, OH提供）を用いて実施
することができる。検出を容易にするために用いる適切なレポーター分子、即ち
標識には、放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤或いは色素生産剤や、基質、
コファクター、インヒビター、磁性粒子等が含まれる。

【００９９】 細胞培養からのタンパク質の回収および発現に適した条件下において、BGFRP
をコードするヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を培養することができ
る。形質転換された細胞により産生されるタンパク質は、用いられる配列及び／
またはベクターに応じて分泌されるか、又は細胞内に保持され得る。当業者に理
解されるように、BGFRPをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、
原核生物か真核生物の細胞膜を通してBGFRP分泌を指向するシグナル配列を含む
ように設計することができる。 更に、宿主細胞株は、挿入した配列の発現の調節能力または発現したタンパク質
を所望の形にプロセシングする能力によって選択される。このようなポリペプチ
ドの修飾には、以下に限定するものではないが、アセチル化、カルボキシル化、
グリコシル化、リン酸化、脂質化(lipidation)、及びアシル化が含まれる。タン
パク質の「prepro」形を切断する翻訳後プロセシングを用いて、タンパク質の標
的、折り畳み及び／又は活性を特定することができる。翻訳後の活性のための特
定の特徴的な機構及び細胞装置を有する種々の宿主細胞（例えば、CHO、HeLa、M
DCK、MEK293、WI38）は、American Type Culture Collection（ATCC, Bethesda
, MD）より入手可能であり、外来性のタンパク質の正しい修飾及びプロセシング
を確実にするために選択され得る。

【０１００】 本発明の別の実施例では、BGFRPをコードする天然の核酸、改変された核酸、
又は組換えの核酸配列を、前述の任意の宿主系の融合タンパク質の翻訳となる異
種配列に結合させ得る。例えば、市販の抗体によって識別できる異種部分を含む
キメラBGFRPタンパク質が、BGFRPの活性のインヒビターに対するペプチドライブ
ラリのスクリーニングを促進し得る。また、市販の親和性の基質を用いて、異種
タンパク質及びペプチド部分が、融合タンパク質の精製を促進し得る。このよう
な部分には、以下に限定されるものではないが、グルタチオンSトランスフェラ
ーゼ（GST）、マルトース結合タンパク質（MBP）、チオレドキシン（Trx）、カ
ルモジュリン結合ペプチド（CBP）、6-His、FLAG、c-myc、赤血球凝集素（HA）
が含まれる。GST、MBP、Trx、CBP、及び6-Hisによって、固定されたグルタチオ
ン、マルトース、フェニルアルシン酸化物、カルモジュリン、及び金属キレート
樹脂の各々で同族の融合タンパク質の精製が可能となる。FLAG、c-mc、及び赤血
球凝集素（HA）によって、これらのエピトープ標識を特異的に識別する市販のモ
ノクロナール抗体及びポリクロナール抗体を用いて、融合タンパク質の免疫親和
性の精製が可能である。また、BGFRPをコードする配列と異種タンパク質配列と
の間に位置するタンパク質切断部位を融合タンパク質が含むように、融合タンパ
ク質が操作されて、精製の後にBGFRPが異種部分から切断され得る。融合タンパ
ク質の発現及び精製方法については、Ausubel, F. M.らの (1995 and periodic
supplements) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons,
New York, NY, ch 10に記載されている。また、融合タンパク質の発現及び精製
の促進のために、種々の市販のキットを用いることができる。

【０１０１】 本発明の更に別の実施例では、TNT^TMウサギ網状赤血球可溶化液またはコムギ
胚芽抽出系（Promega, Madison, WI）を用いてin vitroで放射能標識したBGFRP
の合成を行なうことができる。これらの系は、T7、T3、又はSP6プロモーターと
操作可能に結合したタンパク質をコードする配列の転写と翻訳を結びつける。転
写は放射能標識されたアミノ酸前駆体（好ましくは³⁵S-メチオニン）の存在の下
で起こる。

【０１０２】 組換え体の生成だけでなく、固相技術を用いた直接のペプチド合成によって、
BGFRPの断片を作り出すことができる（例えば、Creighton, 前出 pp.55-60を参
照）。タンパク質合成は手作業または自動で行なうことができる。自動化された
合成は、例えば、Applied Biosystem 431Aペプチドシンセサイザ（Perkin Elmer
）を用いて行うことができる。BGFRPの種々の断片を個別に合成して、次に結合
させて完全長分子を作り出すことも可能である。

【０１０３】 治療 本発明のBGFRPとヒトBCGF1（GI 522145）との間には化学的および構造的類似
性が存在する。従って、BGFRPは免疫異常症、細胞増殖障害、及び感染症におい
て所定の役割を果たしていると考えられる。

【０１０４】 従って、一実施例においては、BGFRPの発現及び活性の低下に関連する免疫異
常症の治療または予防のためにBGFRP又はその断片若しくは誘導体を被験者に投
与することができる。そのような障害には、以下に限定しないが、後天性免疫不
全症候群（AIDS）、ブルートンのＸ連鎖の無ガンマグロブリン血症、分類不能原
発性の免疫不全症（CVI）、ディジョージ症候群（胸腺の発育不全）、胸腺の形
成異常、IgA単独欠損症、重症複合型の免疫不全疾患（SCID）、血小板減少症お
よび湿疹を伴う免疫不全症（ウィスコット-アルドリッチ症候群）、チェディア
ック‐東症候群、慢性的肉芽腫症、遺伝性血管神経性浮腫、クッシング病に関連
する免疫不全症、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、強直性脊椎炎
、アミロイド症、貧血、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性溶血性貧血
、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎、胆嚢炎、接触性皮膚炎、クローン病、アトピ
ー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、リンパ球傷害因子を伴う偶発性のリン
パ球減少症、胎児赤芽球症、結節性紅斑、結節性紅斑、萎縮性胃炎、糸球体腎炎
、グッドパスチャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺炎、過好酸球増加
症、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋及び心臓周囲の炎症、骨関節炎、膵炎、
多発性筋炎、乾癬、ライター症候群、リウマチ様関節炎、強皮症、シェーグレン
症候群、全身アナフィラキシー、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、血小
板減少性の紫斑病、潰瘍性結腸炎、ウェルナー症候群や、癌、血液透析、及び体
外循環の合併症や、多発性骨髄腫などの白血病、及びホジキン病などのリンパ腫
が含まれる。

【０１０５】 別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む免疫異常症の治療ま
たは予防のために、BGFRP、又はその断片もしくは誘導体を発現可能なベクター
を被験者に投与してもよい。

【０１０６】 また別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む免疫異常症の治
療または予防のために、適切な医薬用担体と共に実質的に精製されたBGFRPを含
む医薬品組成物を被験者に投与してもよい。

【０１０７】 更に別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む免疫異常症の治
療または予防のために、BGFRPの活性を調節するアゴニストを被験者に投与して
もよい。

【０１０８】 更に別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含むBGFRPの発現又
は活性の増大に関連する免疫異常症の治療または予防のために、BGFRPのアンタ
ゴニストを被験者に投与してもよい。一実施態様では、BGFRPと特異的に結合す
る抗体をアンタゴニストとして直接用いるか、或いはBGFRPを発現する細胞や組
織に薬剤をもたらす送達機構またはターゲティングとして間接的に用いることが
できる。

【０１０９】 更に別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む免疫異常症の治
療または予防のために、BGFRPをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現
するベクターを被験者に投与してもよい。

【０１１０】 別の実施例においては、細胞増殖障害の治療または予防のためにBGFRPのアン
タゴニストを被験者に投与することができる。そのような障害には、以下に限定
しないが、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、滑液包炎、肝硬変、肝炎、混
合型結合組織病（MCTD）、骨髄線維症、発作性の夜間ヘモグロビン尿症、真性多
血症、乾癬、原発性血小板血症、並びに、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨
髄腫、肉腫、奇形癌腫や、特に、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚、胆嚢、
神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、
前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれる。
一実施態様では、BGFRPと特異的に結合する抗体をアンタゴニストとして直接用
いるか、或いはBGFRPを発現する細胞や組織に薬剤をもたらす送達機構またはタ
ーゲティングとして間接的に用いることができる。

【０１１１】 また別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む細胞増殖障害の
治療または予防のために、BGFRPをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発
現するベクターを被験者に投与してもよい。

【０１１２】 別の実施例においては、感染症の治療または予防のためにBGFRP又はその断片
若しくは誘導体を被験者に投与することができる。そのような感染症には、以下
に限定しないが、アデノウイルス、アレナウイルス、ブニアウイルス、カリチウ
イルス、コロナウイルス、フィロウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイル
ス、フラビウイルス、オルソミクソウイルス、パルボウイルス、パラミキソウイ
ルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、
ラブドウイルス、及びトガウイルスとして分類されるウイルス性媒介物による感
染症や、肺炎球菌、ブドウ球菌、連鎖球菌、桿菌、コリネバクテリウム、クロス
トリジウム、髄膜炎菌、淋菌、リステリア、モラクセラ、キンゲラ、ヘモフィル
ス、レジオネラ、ボルデテラ、また赤痢菌、サルモネラ、及びカンピロバクター
を含むグラム陰性の腸内細菌、更にシュードモナス、ビブリオ、ブルセラ、フラ
ンシセラ、エルシニア、バルトネラ、norcardium、アクチノミセス、ミコバクテ
リア、スピロヘターレス、リケッチア、クラミジア、及びマイコプラズマとして
分類される細菌性の媒介物による感染症や、コウジカビ、ブラストマイセス、皮
膚糸状菌、クリプトコッカス、コクシジオイデス、malasezzia、ヒストプラスマ
、及び種々の真菌症を引起す他の真菌の媒介物 として分類される真菌の媒介
物による感染症や、プラスモディウム又はマラリアを引起す寄生性のエントアメ
ーバ、レーシュマニア、トリパノソーマ、トキソプラズマ、ニューモシスチス‐
カリニ、トリコモナス及びジアルジア等の腸内原生動物、旋毛虫等の組織の線形
動物、回虫等の腸内線形動物、リンパのフィラリア性線形動物、住血吸虫等の吸
虫、及びサナダムシ等のcestrodesとして分類される寄生生物による感染症が含
まれる。

【０１１３】 別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む感染症の治療または
予防のために、BGFRP、又はその断片もしくは誘導体を発現可能なベクターを被
験者に投与してもよい。

【０１１４】 また別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む感染症の治療ま
たは予防のために、適切な医薬用担体と共に実質的に精製されたBGFRPを含む医
薬品組成物を被験者に投与してもよい。

【０１１５】 更に別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む感染症の治療ま
たは予防のために、BGFRPの活性を調節するアゴニストを被験者に投与してもよ
い。

【０１１６】 他の実施例においては、本発明のタンパク質、アンタゴニスト、抗体、アゴニ
スト、相補的配列またはベクターの何れかを、他の適切な治療薬と組合せて投与
することもできる。当業者は従来の製薬の原理に基づいて併用療法で使用するた
めの適切な薬剤を選択することができるであろう。治療薬を組み合わせることに
より、上述の種々の反応の治療又は予防に効果を与えるように相乗剤的に機能し
得る。この方法を用いることにより、より少ない各薬剤の投与量で治療効果を上
げることができ、従って副作用の可能性を低下させることができる。

【０１１７】 BGFRPのアンタゴニストは、当業者に周知の方法を用いて製造することができ
る。詳細には、精製されたBGFRPを用いて抗体を作り出したり、或いはBGFRPに特
異的に結合するものを同定するために、薬剤のライブラリーをスクリーニングす
ることができる。BGFRPの抗体は、当業者によく知られた方法を用いて産生する
ことができる。このような抗体には、以下に限定されないが、ポリクローナル抗
体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Fabフラグメント、及びFab発
現ライブラリーにより作られたフラグメントが含まれる。中和抗体（即ち、二量
体形成を阻害するもの）は治療の用途に特に好適である。

【０１１８】 抗体を産生するために、BGFRPか、免疫学的特性を有するその任意の断片或い
はそのオリゴペプチドを注射することによって、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス
、ヒト等を含む種々の宿主を免疫化することができる。宿主の種に応じて、免疫
学的反応を増強するために種々のアジュバントを用いることができる。そのよう
なアジュバントには、以下に限定しないが、フロイントのアジュバント、アルミ
ニウムの水酸化物ようなミネラルゲル、リゾレシチンのような界面活性剤、プル
ロニックポリオール(pluronic polyols)、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマ
ルジョン、KLH及びジニトロフェノールが含まれる。ヒトで使用するアジュバン
トの中では、BCG（カルメット‐ゲラン杆菌）及びCorynebacterium parvumが特
に好ましい。

【０１１９】 BGFRPの抗体を誘発するために用いられるオリゴペプチド、ペプチド、または
その断片は、好ましくは少なくとも5個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも1
0個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。またこれらのオリゴペプチド、
ペプチド、または断片は、天然のタンパク質のアミノ酸配列の一部と同一で、小
形の自然発生の分子の全アミノ酸配列を含んでいることが好ましい。BGFRPアミ
ノ酸の短い伸展部が、KLHのような別のタンパク質の伸展部と融合し、キメラ分
子の抗体が産生され得る。

【０１２０】 BGFRPのモノクローナル抗体は、培養における持続的な細胞株によって抗体分
子を産生させる任意の技術を用いて調製できる。このような技術には、以下に限
定しないが、ハイブリドーマ技術、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術、及びEBV-ハ
イブリドーマ技術が含まれる（例えば、Kohler, G.ら(1975) Nature 256:495-49
7；Kozbor, D. ら(1985) Immunol. Methods 81 :31-42；Cote, R.J. ら(1983) P
roc. Natl. Acad. Sci. 80:2026-2030；Cole, S.P. ら(1984) Mol. Cell Biol.
62:109-120参照）。

【０１２１】 さらに、適切な抗原特異性および生物活性を備えた分子を得るために、ヒト抗
体遺伝子へのマウス抗体遺伝子のスプライシングする技術のような「キメラ抗体
」の産生のために開発された技術を用いることができる（例えば、Morrison,S.L
.ら(1984)Proc. Natl. Acad. Sci. 81:6851-6855;Neuberger, M.S. ら(1984)Nat
ure 312:604-608;Takeda, S. ら(1985)Nature 314:452-454参照）。或いは、当
業者に周知の方法を用いて単鎖の抗体の生成のための技術を適用して、BGFRPに
特異的な単鎖抗体を産生することができる。関連する特異性を有するがイディオ
タイプ組成が異なる抗体は、ランダムな組み合わせの免疫グロブリンライブラリ
ーからの鎖混合(chain shuffling)によって産生することができる（例えば、Bur
ton D.R.(1991) Proc. Natl. Acad. Sci. 88:10134-10137参照）。

【０１２２】 抗体は、免疫グロブリンライブラリーまたは高度に特異的な結合試薬のパネル
をスクリーニングすることにより、或いはリンパ球集団でのin vivoの産生を誘
導することにより産生することができる（例えば、Orlandi,R.ら(1989), Proc.
Natl. Acad. Sci. 86:3833-3837；Winter, G.ら(1991) Nature 349:293-299参照
）。

【０１２３】 またBGFRPに対する特異的な結合部位を含む抗体フラグメントも作り出すこと
ができる。例えばこのような断片には、以下に限定はしないが、抗体分子のペプ
シン消化により生成することができるF(ab’)₂フラグメントや、F(ab’)₂フラグ
メントのジスルフィド架橋を減らすことにより生成することができるFabフラグ
メントが含まれる。或いは、所望の特異性を備えたモノクローナルFabフラグメ
ントを迅速かつ容易に同定可能なように、Fab発現ライブラリーを構成し得る（
例えば、Huse,W.D.ら(1989) Science 246:1275-1281参照）。

【０１２４】 種々のイムノアッセイを、所望の特異性を有する抗体を同定するためのスクリ
ーニングに用いることができる。確立された特異性を有するモノクローナル抗体
またはポリクローナル抗体の何れかを用いる競合的結合アッセイ或いは免疫放射
線測定法の多数のプロトコルが、当技術分野で周知である。このようなイムノア
ッセイには、一般にBGFRPとその特異的な抗体との間の複合体の形成の測定が含
まれる。2つの非干渉BGFRPエピトープに対して反応するモノクローナル抗体を用
いる2部位のモノクローナル抗体ベースのイムノアッセイ（two sites monoclona
l based immunoassay）が好適であるが、競合的結合アッセイも用いられ得る（M
addox , 前出）。

【０１２５】 本発明の別の実施例では、BGFRPをコードするポリヌクレオチド、またはその
任意の断片や相補配列を、治療を目的として用いることができる。一態様では、
mRNAの転写を阻害することが望ましい状況において、BGFRPをコードするポリヌ
クレオチドに対する相補配列を用いることができる。詳細には、BGFRPをコード
するポリヌクレオチドに相補的な配列で細胞を形質転換することができる。従っ
て、BGFRPの活性を調節する、或いは遺伝子の機能を調節するために、相補的な
分子または断片を用いることができる。現在このような技術は周知であり、セン
ス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド、或いはより大きな断片を、BGFRPをコ
ードする配列のコード領域や調節領域に従って様々な位置から設計可能である。

【０１２６】 レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスまたはワクシニアウイルスに由来
する、或いは種々の細菌性プラスミドに由来する発現ベクターは、標的の器官、
組織、即ち細胞群へのヌクレオチド配列の送達のために用いられ得る。当業者に
周知の方法を用いて、BGFRPをコードするポリヌクレオチドに相補的な核酸配列
を発現するためのベクターを産生することができる（例えば、Sambrook,前出、
及びAusubel,前出 参照）。

【０１２７】 BGFRPをコードするポリヌクレオチドまたはその断片を高レベルで発現する発
現ベクターで細胞または組織を形質転換させることによって、BGFRPをコードす
る遺伝子を作り出すことができる。このような作製物は、翻訳不能なセンス配列
或いはアンチセンス配列を細胞に導入するために用いることができる。DNAへ組
み込みが存在しない場合でも、このようなベクターは、それらが内在性のヌクレ
アーゼにより無能となるまで、RNA分子を転写し続け得る。一過性の発現は、非
複製ベクターでも1ヶ月以上、適切な複製エレメントがベクター系の一部である
場合にはさらに長い期間持続し得る。

【０１２８】 前述のように、BGFRPをコードする遺伝子の制御、5’、又は調節領域に対する
相補配列、つまりアンチセンス分子（DNA、RNAまたはPNA）を設計することによ
って、遺伝子発現を変更することができる。転写開始点（例えば、開始部位から
+10〜-10の位置）に由来するオリゴヌクレオチドが好ましい。同様に、三重らせ
ん体の塩基対形成方法論を用いて、阻害を達成することができる。ポリメラーゼ
、転写制御因子、或いは調節分子の結合のために二重らせんが十分にほどける能
力を阻害するので、三重らせん対合は有用である（例えば、Gee, J.E.ら(1994)I
n: Huber, B.E.及びB.I. Carr, Molecular and Immunologic Approaches, Futur
a Publishing Co.,Mt.Kisco,NY,pp.163-177参照）。転写物のリボソームへの結
合を阻止することによりmRNAの転写を阻害するために、相補的配列、即ちアンチ
センス分子を設計し得る。

【０１２９】 リボザイム、つまり酵素RNA分子を用いてRNAの特異的切断を触媒することがで
きる。リボザイム作用機構は、相補的標的RNAへのリボザイム分子の配列の特異
的ハイブリダイゼーションに関与し、その後のヌクレオチド鎖切断が行なわれる
。例えば、操作されたハンマーヘッドモチーフリボザイム分子は、BGFRPをコー
ドする配列のヌクレオチド鎖切断を特異的かつ効果的に触媒し得る。

【０１３０】 任意の潜在的なRNA標的物内の特異的なリボザイム切断部位は、最初、後続す
る配列GUA、GUU並びにGUCを含むリボザイム切断部位に対する標的分子を走査す
ることによって同定される。一度同定されると、切断部位を含む標的遺伝子の領
域に対応する15〜20個のリボヌクレオチドの間の短いRNA配列は、そのオリゴヌ
クレオチドを動作不能(inoperable)とする2次の構造的特徴について評価するこ
とができる。また候補の標的の適合性は、リボヌクレアーゼ保護アッセイ(ribon
uclease protection assay)を用い、相補的なオリゴヌクレオチドとのハイブリ
ダイゼーションに対する接触性(accessibility)の検査により評価することがで
きる。

【０１３１】 本発明の相補的リボ核酸分子及びリボザイムは、核酸分子を合成するのための
当技術分野で周知の方法により作り出すことができる。これらには、固相ホスホ
ラミダイト化学合成のようなオリゴヌクレオチドの化学的合成のための技術が含
まれる。或いは、RNA分子は、BGFRPをコードするDNA配列のin vitro及びin vivo の転写により作り出すことができる。このようなDNA配列は、T7或いはSP6のよう
な適切なRNAポリメラーゼプロモーターを伴う多様なベクターに取り込むことが
できる。或いは、構成的または誘導的に相補的なRNAを合成するこれらのcDNA作
製物は、株化細胞、細胞または組織内に導入することができる。

【０１３２】 細胞内の安定性を高め、また半減期を長くするために、RNA分子は修飾するこ
とができる。可能な修飾としては、以下に限定しないが、その分子の5′末端及
び／又は3’末端でのフランキング配列の付加や、分子のバックボーン内におけ
るホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオネート或いは2′O-メチルを
使用を含む。この概念はPNA生成において固有のものであり、内在性エンドヌク
レアーゼにより容易に認識されないアデニン、シチジン、グアニン、チミン、及
びウリジンの、アセチル−、メチル−、チオ−、及び類似の修飾形態だけでなく
、イノシン、クエオシン(queosine)、及びワイブトシン(wybutosine)のような従
来よりあまり用いられない塩基を含めることにより、これら全ての分子にに拡張
可能である。

【０１３３】 細胞或いは組織内にベクターを導入するための多くの方法が利用可能で、同様
にin vivo、in vitro、及びex vivoでの使用にも適している。ex vivoでの治療
法のに対し、ベクターを患者から採取された幹細胞に導入し、自己移植して同じ
患者に戻すためにクローンとして増殖させることができる。トランスフェクショ
ンによるデリバリー、或いはリポソーム注入またはポリカチオンアミノポリマー
によるデリバリーは、当技術分野でよく知られた方法を用いて実施することがで
きる（例えば、Goldman, C.K.ら(1997) Nature Biotechnology 15:462-466参照
）。

【０１３４】 前述の治療法は何れも、例えばイヌ、ネコ、雌ウシ、ウマ、ウサギ、サル、及
び最も好ましくはヒトのような哺乳類を含む治療が必要な任意の対象に適用する
ことができる。

【０１３５】 本発明の更なる実施例では、前述の任意の治療効果のために、医薬成分を薬剤
上受け入れられる担体とともに投与する。このような医薬成分は、BGFRP、BGFRP
の抗体、BGFRPの模倣体、アゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターから
なるものでありうる。この成分は、単体或いは例えば安定化する配合ような1以
上の他の薬剤とともに、任意の無菌の生体適合性の医薬用担体に投与され、その
担体には、以下に限定しないが、生理食塩水、バッファー食塩水、ブドウ糖或い
は水が含まれる。このような組成物は、単体或いは他の薬剤、ドラッグやホルモ
ンと結合した形で患者に投与されうる。

【０１３６】 本発明で用いられる医薬品組成物の投与経路には、以下に限定されないが、経
口投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、髄内投与、くも膜下腔内投与、
脳室内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、経腸投与、局所的
投与、舌下投与、或いは直腸投与が含まれ得る。

【０１３７】 有効成分に加えて、これらの医薬成分は、有効成分を医薬上使用できる製剤に
するための処理を容易にする医薬品添加物及び補助剤を含む、適切な医薬上認め
られる担体を含みうる。更に、製剤或いは投与に関する技術の詳細は、Remingto ns Pharmaceutical Sciences （Maack Publishing Co., Easton, PA）の最新版に
記載されている。

【０１３８】 経口投与のための医薬品組成物は、当技術分野でよく知られる医薬上認められ
る担体を用いて、経口投与に適当な投与量に配合される。このような担体により
、医薬品組成物を患者に摂取させるための錠剤、丸剤、糖衣丸、カプセル剤、液
体剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液等に調剤できる。

【０１３９】 経口投与用の医薬製剤は、有効成分と固形の賦形剤とを配合して、（所望によ
り、粉砕した後に）得られた顆粒の混合物を処理して錠剤或いは糖衣剤コア(dra
gee core)を作ることによって得られる。必要ならば、適切な添加物が加えるこ
とができる。適切な賦形剤には、ラクトース、スクロース、マンニトール或いは
ソルビトールを含む砂糖のような糖質またはタンパク質賦形剤や、トウモロコシ
、コムギ、コメ、ジャガイモ等からのデンプンや、メチルセルロース、ヒドロキ
シプロピルメチルセルロース或いはカルボキシルメチルセルロースナトリウムの
ようなセルロースや、アラビアゴム或いはトラガカントゴムのようなゴムや、並
びにゼラチン或いはコラーゲンのようなタンパク質が含まれる。必要ならば、架
橋したポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、又はアルギン酸ナトリウムの
ようなその塩のような崩壊剤または可溶化剤を加えてもよい。

【０１４０】 糖衣丸コアは、濃縮糖液のような適切な剤皮と共に用いられるが、それらには
アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル剤(carbopol ge
l)、ポリエチレングリコール及び／又はチタンの二酸化物、ラッカー溶液及び適
切な有機溶剤或いは溶剤の混合物等が含まれる。錠剤の識別のため、或いは有効
成分の量（即ち投与量）を特徴づけるために、染料或いは色素を錠剤或いは糖衣
錠皮に加えることができる。

【０１４１】 経口投与できる製剤には、ゼラチンからなるプッシュフィット(push-fit)カプ
セル、ゼラチンからなる軟性のシールされたカプセル及びグリセロール或いはソ
ルビトールのような錠皮が含まれる。プッシュフィットカプセルは、ラクトース
或いはデンプンのような賦形剤または結合剤、タルク或いはステアリン酸マグネ
シウムのような潤滑剤、及び所望により安定剤と混合された有効成分を含みうる
。軟性カプセルにおいて、有効成分は、安定剤とともに或いは安定剤なしに、脂
肪性の油、液体、または液状ポリエチレングリコールのような適切な液体に溶解
或いは懸濁される。

【０１４２】 非経口投与に適した医薬製剤は、水溶液中で、好適にはハンク溶液、リンゲル
溶液或いは生理緩衝食塩水のような生理学的に適合するバッファーの中で配合す
ることができる。水性の注射懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウ
ム、ソルビトールまたはデキストランのような懸濁液の粘性を高める物質を含み
うる。更に、有効成分の懸濁液は、適切な油性注入懸濁液として調製してもよい
。適切な親油性の溶媒或いは賦形剤には、胡麻油のような脂肪性の油や、オレイ
ン酸エチル、トリグリセリド或いはリポソームのような合成脂肪酸エステルが含
まれる。また非脂質ポリカチオンアミノポリマーが、送達のために用いられる。
所望により、懸濁液は化合物の溶解度を増加させて濃縮度の高い溶液の調製を可
能にする適切な安定剤または薬剤を含んでもよい。

【０１４３】 局所または経鼻投与用には、浸透する特定の障壁に対して適切な浸透剤が調合
に用いられる。このような浸透剤は、当技術分野において周知のものである。

【０１４４】 本発明の医薬組成物は周知の方法、例えば通常の混合処理、溶解処理、顆粒化
処理、糖衣形成処理、湿式粉砕処理(levigating)、乳化処理、カプセル化処理、
エントラップ処理(entrapping)或いは凍結乾燥処理により製造される。 この医薬組成物は塩類として提供されることもあり、以下に限定しないが、塩
酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む多くの酸とともに
形成することができる。塩は水性或いはプロトニック溶剤において、対応する遊
離塩基形態よりも溶解性が高くなる傾向がある。別のケースでは、好適な製剤と
しては、使用前に緩衝剤配合したpH4.5〜5.5の範囲にある1mM〜50mMのヒスチジ
ン、0.1%〜2%のショ糖、2%〜7%のマンニトールの何れか、或いは全てを含む凍結
乾燥粉末でもよい。

【０１４５】 医薬組成物は調製された後に適切な容器内に入れられて、指示された状態の治
療のためにラベル付けできる。BGFRPの投与の場合では、このようなラベルには
、投与量、投与頻度、投与方法が表示される。

【０１４６】 本発明において使用するのに適する医薬品組成物は、所望の目的を達成するた
めに有効成分を効果的な量だけ含む成分を含んでいる。有効量の決定は、当業者
の能力の範囲内で十分行うことができる。

【０１４７】 任意の化合物の場合、治療に有効な量は、最初は例えばマウス、ウサギ、イヌ
、ブタのような動物モデルまたは腫瘍性細胞の何れかの細胞培養のアッセイにお
いて見積もることができる。また、適切な濃度範囲および投与経路を決定するた
めに動物モデルを用いることができる。次にこのような情報を利用して、ヒトに
おける投与量や投与経路を決定することができる。

【０１４８】 治療的に有効な量とは、例えば、症状や状態を回復させるBGFRPまたはその断
片、BGFRPの抗体、BGFRPのアゴニスト、BGFRPのアンタゴニスト、又はBGFRPのイ
ンヒビターの有効成分の量を指す。治療的な効力および毒性は、細胞培養或いは
実験動物における標準的な製薬方法により、例えばED50(母集団の50%における治
療的な有効投与量)またはLD50(母集団の50%の致死投与量)統計量を計算すること
によって決定することができる。毒性に対する治療効果の用量比が治療指数であ
り、ED50/ LD50の比として表すことができる。医薬品組成物は大きな治療指数を
示すことが好ましい。細胞培養のアッセイ及び動物研究から得られたデータは、
ヒトの使用のための投与量の範囲をまとめるのに用いることができる。そのよう
な成分の投与量は、毒性が少ないか或いは全く毒性がなく、ED50を含む循環する
濃度の範囲内にあることが好ましい。使用する剤形、患者の感受性並びに投与経
路に応じて、投与量はこの範囲内で変化する。

【０１４９】 正確な用量は、治療が必要な被験者に関連する要因を考慮して医師が決定する
。投与及び投薬量は、十分なレベルの有効成分を与える、即ち所定の効果を維持
するために調節される。考慮すべき要因としては、疾病状態の重症度、全般的な
被験者の健康、年齢、体重、性別や、食餌、投与の時間及び頻度や、併用する薬
剤、反応感受性、および治療への反応が含まれる。長時間作用性の医薬品組成物
は、半減期及び特定の製剤のクリアランス率に応じて3〜4日毎に、1週間毎に、或
いは2週間に1度投与してもよい。

【０１５０】 通常の投与量は0.1〜100,000μgの範囲であり、最大約1gの総投与量まで、投
与経路に応じて変化する。特定の投与量或いは送達の方法のガイダンスは文献に
おいて提供され、通常当技術分野の医師に利用可能である。当業者は、ヌクレオ
チドに対しては、タンパク質やインヒビター用の製剤とは異なる製剤を採用する
ことができる。同様に、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの送達は、特定の
細胞、状態、位置等に対して特異的でありうる。

【０１５１】 診断 別の実施例においては、BGFRPに特異的に結合する抗体を、BGFRPの発現によっ
て特徴づけられる状態や疾病の診断や、BGFRP又はBGFRPのアゴニスト、アンタゴ
ニスト、インヒビターで治療を受けている患者のモニタリングのためのアッセイ
に用いることができる。診断目的に対して有用な抗体は、前述の治療のためのも
のと同様の方法で作製することができる。BGFRPの診断のアッセイには、ヒトの
体液、細胞或いは組織の抽出物においてBGFRPを検出するために抗体および標識
を用いる方法が含まれる。抗体は修飾しても、修飾なしでも用いることができ、
また共有結合或いは非共有結合かのいずれかによりリポーター分子と結合させて
標識することができる。当業者に周知の多様なリポーター分子が用いられ、その
うちの幾つかについては前述の通りである。

【０１５２】 ELISA、RIA及びFACSを含む、BGFRPを測定するための種々のプロトコルが当技術
分野では周知であり、またこれによりBGFRP発現の変化や異常性のレベルを診断
するための基礎が得られる。BGFRPの発現の正常値、即ち標準値は、複合体形成
に適した条件下で、哺乳類、好ましくはヒトの正常な被験者から得られる体液或
いは細胞抽出物とBGFRPの抗体を結合させることによって確立できる。標準の複
合体形成量は、種々の方法、好ましくは測光手段を用いて定量化できる。被験者
の生検組織からの対照サンプル及び患部サンプルにおいて発現されたBGFRPの量
を、標準値と比較する。標準値と被験者の値との偏差によって疾病診断のための
パラメータを確立する。

【０１５３】 本発明の別の実施例において、BGFRPをコードするポリヌクレオチドを、診断
の目的で用いることができる。用いられるポリヌクレオチドには、オリゴヌクレ
オチド配列、相補的RNA及びDNA分子、及びPNAが含まれる。このポリヌクレオチ
ドは、BGFRPの発現が疾病と関連するであろう生検組織における遺伝子発現の検
出や定量のために用いられる。診断アッセイは、BGFRPが存在、非存在、過剰発
現の何れの状態かを識別したり、治療の処置の際にBGFRPレベルの調節をモニタ
リングするために用いることができる。

【０１５４】 一態様では、BGFRPまたは密接に関連分子をコードする、ゲノム配列を含むポ
リヌクレオチド配列を検出可能なPCRプローブとのハイブリダイゼーションを用
いて、BGFRPをコードする核酸配列を同定することができる。そのプローブの特
異性、つまりそのプローブが非常に高度に特異的な領域（例えば、5’調節領域
）に由来するか、或いはより特異性の度合いの低い領域（例えば、保存されたモ
チーフ）の何れに由来するかによって、またハイブリダイゼーション或いは増幅
の（最大の、高い、中程度の、或いは低い）厳密性によって、そのプローブがBG
FRPをコードする自然発生の配列のみを同定するか、或いはアレルや関連する配
列も同定するかが決定される。

【０１５５】 プローブは関連する配列を検出するためにも用いることができ、また好ましく
はBGFRPをコードする任意の配列に対して少なくとも50%の配列同一性を有するべ
きである。本発明のハイブリダイゼーションプローブは、DNA若しくはRNAか、ま
たSEQ ID NO:2の配列に由来するものか、或いはBGFRP遺伝子のイントロン、エン
ハンサー、及びプロモータを含むゲノムの配列に由来するものでもよい。

【０１５６】 BGFRPをコードするDNAのための特異的なハイブリダイゼーションプローブを作
製するための手段には、mRNAプローブを作り出すためにBGFRP又はBGFRP誘導体を
コードするポリヌクレオチド配列をベクターにクローンニングする方法がある。
このようなベクターは当業者に周知で、また市販されており、適切なRNAポリメ
ラーゼや適切な標識されたヌクレオチドを付加することにより、in vitroでRNA
プローブを合成するために用いることができる。ハイブリダイゼーションプロー
ブは種々のリポータグループにより標識され、例えば、その標識は、³²Pや³⁵Sの
ような放射性核種によるものや、アビジン／ビオチン結合系を介してプローブに
結合するアルカリホスファターゼのような酵素による標識等である。

【０１５７】 BGFRPをコードするポリヌクレオチド配列を、BGFRPの発現に関連する疾患の診
断のために用いることができる。そのような疾患の例には、以下に限定はしない
が、後天性免疫不全症候群（AIDS）、ブルートンのＸ連鎖の無ガンマグロブリン
血症、分類不能原発性の免疫不全症（CVI）、ディジョージ症候群（胸腺の発育
不全）、胸腺の形成異常、IgA単独欠損症、重症複合型の免疫不全疾患（SCID）
、血小板減少症および湿疹を伴う免疫不全症（ウィスコット-アルドリッチ症候
群）、チェディアック‐東症候群、慢性的肉芽腫症、遺伝性血管神経性浮腫、ク
ッシング病に関連する免疫不全症、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギ
ー、強直性脊椎炎、アミロイド症、貧血、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己
免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎、胆嚢炎、接触性皮膚炎、ク
ローン病、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、リンパ球傷害因子を
伴う偶発性のリンパ球減少症、胎児赤芽球症、結節性紅斑、結節性紅斑、萎縮性
胃炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺
炎、過好酸球増加症、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋及び心臓周囲の炎症、
骨関節炎、膵炎、多発性筋炎、乾癬、ライター症候群、リウマチ様関節炎、強皮
症、シェーグレン症候群、全身アナフィラキシー、全身性エリテマトーデス、全
身性硬化症、血小板減少性の紫斑病、潰瘍性結腸炎、ウェルナー症候群や、癌、
血液透析、及び体外循環の合併症や、多発性骨髄腫などの白血病、及びホジキン
病などのリンパ腫等の免疫異常症、並びに、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化
症、滑液包炎、肝硬変、肝炎、混合型結合組織病（MCTD）、骨髄線維症、発作性
の夜間ヘモグロビン尿症、真性多血症、乾癬、原発性血小板血症、並びに、腺癌
、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌腫や、特に、副腎、膀胱、
骨、骨髄、脳、乳房、頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉
、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲
状腺、及び子宮の癌等の細胞増殖障害、並びに、アデノウイルス、アレナウイル
ス、ブニアウイルス、カリチウイルス、コロナウイルス、フィロウイルス、ヘパ
ドナウイルス、ヘルペスウイルス、フラビウイルス、オルソミクソウイルス、パ
ルボウイルス、パラミキソウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、レ
オウイルス、レトロウイルス、ラブドウイルス、及びトガウイルスとして分類さ
れるウイルス性媒介物による感染症や、肺炎球菌、ブドウ球菌、連鎖球菌、桿菌
、コリネバクテリウム、クロストリジウム、髄膜炎菌、淋菌、リステリア、モラ
クセラ、キンゲラ、ヘモフィルス、レジオネラ、ボルデテラ、また赤痢菌、サル
モネラ、及びカンピロバクターを含むグラム陰性の腸内細菌、更にシュードモナ
ス、ビブリオ、ブルセラ、フランシセラ、エルシニア、バルトネラ、norcardium
、アクチノミセス、ミコバクテリア、スピロヘターレス、リケッチア、クラミジ
ア、及びマイコプラズマとして分類される細菌性の媒介物による感染症や、コウ
ジカビ、ブラストマイセス、皮膚糸状菌、クリプトコッカス、コクシジオイデス
、malasezzia、ヒストプラスマ、及び種々の真菌症を引起す他の真菌の媒介物 として分類される真菌の媒介物による感染症や、プラスモディウム又はマラリ
アを引起す寄生性のエントアメーバ、レーシュマニア、トリパノソーマ、トキソ
プラズマ、ニューモシスチス‐カリニ、トリコモナス及びジアルジア等の腸内原
生動物、旋毛虫等の組織の線形動物、回虫等の腸内線形動物、リンパのフィラリ
ア性線形動物、住血吸虫等の吸虫、及びサナダムシ等のcestrodesとして分類さ
れる寄生生物による感染症等の感染症が含まれる。BGFRPをコードするポリヌク
レオチド配列を、患者の生検組織や体液を利用するサザンブロット法またはノー
ザン分析、ドットブロット法或いは他の膜をベースとした技術や、PCR技術や、
ディップスティック試験法(dipstick)、ピン、ELISAアッセイまたはマイクロア
レイにおいて用いて、BGFRP発現の変化を検出することができる。このような定
性的または定量的試験法は当業者に周知のものである。

【０１５８】 特定の態様では、特に上述のような関連疾患の存在を検出するアッセイにおい
て、BGFRPをコードするヌクレオチド配列は有用であり得る。BGFRPをコードする
ヌクレオチド配列を標準的な方法で標識し、またハイブリダイゼーション複合体
の形成に適した条件下で、患者からの体液や組織サンプルに加えることができる
。適当なインキュベーション期間の後、そのサンプルを洗浄し、シグナルを定量
して標準値と比較する。患者のサンプルにおけるシグナルの量が、対照サンプル
に比べて有意に変化している場合、サンプルのなかのBGFRPをコードするヌクレ
オチド配列のレベルの変化は、関連する疾患の存在を示している。また、このよ
うなアッセイを用いて、動物実験、臨床試験、または個々の患者の治療のモニタ
リングにおける特定の治療学的な処置法の有効性を評価することもできる。

【０１５９】 BGFRPの発現に関連する疾病の診断のための基礎を提供するために、正常な、
即ち標準の発現のプロフィールを確立する。これは、ハイブリダイゼーション或
いは増幅に適した条件下で、動物またはヒト何れかの正常な被験者から採取され
た体液或いは細胞抽出物をBGFRPをコードする配列又はその断片と結合させるこ
とにより達成される。標準のハイブリダイゼーションは、正常な被験者から得ら
れる値と、既知の量の実質的に精製されたポリヌクレオチドを用いる実験から得
られる値とを比較することにより定量することができる。このように正常なサン
プルから得られた標準値は、疾病の徴候がある患者のサンプルから得られる値と
比較することができる。標準値からの偏差を用いて疾病の存在を証明する。

【０１６０】 一旦疾患の存在が確認されて治療プロトコルが開始されると、ハイブリダイゼ
ーションアッセイが定期的に繰り返され、患者の発現のレベルが正常な患者で観
察されるレベルに近づき始めたか否かを評価できる。連続的なアッセイから得ら
れる結果を用いて、数日から数ヶ月にわたる治療の効果を示すことができる。

【０１６１】 癌に関しては、個体からの生検組織における比較的多量の転写物の存在が、疾
病の発生の素因を示し、つまり実際の臨床的症状が現れる前に疾病を検出するた
めの手段となり得る。このタイプのより決定的な診断により、健康の専門家が予
防的処置を講じたり、より早期に積極的な治療を行なうことが可能となり、故に
癌の発生や更なる進行を予防することができる。

【０１６２】 BGFRPをコードする配列から設計されたオリゴヌクレオチドの更なる診断のた
めの使用法には、PCR法の利用が含まれる。これらのオリゴマーは化学的に合成
されるか、酵素を用いて作製されるか、或いはin vitroで作製されてもよい。オ
リゴマーは、好ましくはBGFRPをコードするポリヌクレオチドの断片、またはBGF
RPをコードするポリヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチドの断片を含み、特
定の遺伝子或いは状態を同定するための最適化された条件の下で用いられる。ま
た密接に関連するDNAまたはRNA配列の検出及び／又は定量のために、オリゴマー
は緩やかな厳密性の条件で用いることができる。

【０１６３】 またBGFRP発現を定量するために用いられる方法には、放射標識或いはビオチ
ン化したヌクレオチドの利用、対照核酸の同時増幅(coamplification)の利用、
及び標準の検量線で補間する実験結果の利用が含まれる（例えば、Melby, P.C.
ら(1993) J. Immunol. Methods, 159:235-244；Duplaa, C. ら(1993) Anal. Bio
chem. 229-236参照）。多数のサンプルの定量の速度は、目的のオリゴマーが種
々の希釈溶液中に存在し、分光光度法または比色定量応答により迅速に定量する
ELISA形式のアッセイを実施することによって加速することができる。

【０１６４】 別の実施例においては、ここに開示した任意のポリヌクレオチド配列に由来す
るオリゴヌクレオチド又はより長い断片を、マイクロアレイにおける標的として
用いることができる。マイクロアレイを用いて、同時に多くの遺伝子の発現レベ
ルをモニタし、また遺伝子の変異配列、変異及び多形性を同定することができる
。この情報は、遺伝子機能の決定、疾病の遺伝的基礎の理解、疾病の診断、並び
に治療薬の開発およびその活性のモニタリングにおいて有用である。

【０１６５】 マイクロアレイが準備され、それを用いて当業者に周知の方法で分析してもよ
い（例えば、Brennan, T.M.ら(1995) U.S. Patent NO. 5,474,796; Schena, M.
ら(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. 93:10614-10619; Baldeschweilerら(1995) P
CT application WO95/251116; Shalom D.ら (1995) PCT application WO95/355
05: Heller. R.A. ら(1997) Proc. Natl. Acad. Sci. 94:2150-2155; 並びにHel
ler. M.J.ら(1997) U.S. Patent No.5,605,662を参照）。

【０１６６】 本発明の別の実施例においては、BGFRPをコードする核酸配列を用いて、自然
発生のゲノム配列をマッピングするのに有用なハイブリダイゼーションプローブ
を作り出すことができる。この配列は、特定の染色体、染色体の特定の部分、又
は人工染色体作製物にマッピングすることができ、その人工染色体作製物には、
例えば、ヒト人工染色体（HACs）、酵母菌人工染色体（YACs）、細菌人工染色体
（BACs）、細菌性P1作製物又は1本鎖染色体cDNAライブラリーがある（例えば、P
rice, C.M.(1993) Blood Rev. 7:127-134）；及びTrask, B. J. (1991) Trends
Genet.7:149-154参照）。

【０１６７】 蛍光性in situハイブリダイゼーション（FISH）は、他の物理的な染色体マッ
ピング技術や遺伝地図データと関連し得る（例えば、Heinz-Ulrichら(1995)in M
eyers, R.A.(ed.) Molecular Biology and Biotechnology, VCH Publishers New
York, NY, pp.965-968を参照）。遺伝地図データの例は、種々の科学誌、また
はOnline Mendelian Inheritance in Man（OMIM）に見られる。物理的な染色体
地図上のBGFRPをコードする配列の位置および特定の疾病、もしくは特定の疾病
の素因との関連性が、疾患に関係するDNAの領域の範囲を定めるのに役立つ。本
発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者とキャリア、また発症した個体との間
の遺伝子配列の違いを検出することができる。

【０１６８】 遺伝地図を拡大するために、染色体作製物のin situハイブリダイゼーション
及び確立された染色体マーカーを用いる連鎖解析のような物理的マッピング技術
を用いることができる。多くの場合、特定のヒト染色体の数やアームが未知であ
っても、マウスのような別の哺乳類の染色体上の遺伝子配置によって関連するマ
ーカーが明らかになる。物理的マッピングによって、新たな配列を染色体のアー
ム、或いはその一部へ割当てることができる。これにより、位置クローニングま
たは別の遺伝子発見技術を用いて、疾病遺伝子を検索する研究者に価値ある情報
を提供できる。ひとたび疾患或いは症候群が、特定のゲノム領域（例えば、11q2
2-23に対する毛細血管拡張性運動失調 ）への遺伝連鎖による不完全な位置ぎめ
がなされると、その領域にマッピングされる任意の配列は、さらなる研究のため
の関連する遺伝子または調節遺伝子を表し得る（例えば、Gatti, R.A.ら（1988
）Nature 336:577-580参照）。また、本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常
者の染色体の位置と、キャリア、又は発症した個体の、転座、逆位等によって生
じた染色体の位置との違いを検出することもできる。

【０１６９】 本発明の別の実施例においては、BGFRPや、その触媒作用性または免疫原性断
片、又はそれらのオリゴペプチドを、種々の薬剤スクリーニング技術における化
合物のライブラリーのスクリーニングのために用いることができる。そのような
スクリーニングにおいて用いられる断片は、溶液中で遊離しているか、固体支持
体へ付着しているか、細胞表面へ付着しているか、或いは細胞内に位置している
ものであり得る。BGFRPと試験する薬剤との結合複合体の形成を測定することが
できる。

【０１７０】 別の薬物スクリーニング技術によって、目的のタンパク質に対する適切な結合
親和性を有する化合物の高スループットスクリーニングが提供される（例えば、
Geysenら(1984) PCT出願WO84/03564参照）。この方法においては、多くの異なる
小形の試験化合物がプラスチックピン或いは別の表面のような固体基板において
合成される。試験化合物をBGFRP又はその断片と反応させ、そして洗浄する。次
に、当技術分野で周知の方法で結合BGFRPを検出する。また、前述の薬剤スクリ
ーニング技術において使用するために、精製されたBGFRPをプレート上に直接コ
ーティングすることもできる。或いは、非中和性抗体を用いて、ペプチドを捕捉
して固体支持体上に固定することができる。

【０１７１】 別の実施例においては、BGFRPの結合のためにBGFRPと結合可能な中和抗体が試
験化合物と特異的に競合する競合的薬物スクリーニングアッセイを用いることが
できる。この方法において、抗体を用いて、1以上の抗原決定基をBGFRPと共有す
る任意のペプチドの存在を検出することができる。

【０１７２】 さらに別の実施例においては、その新技術が、以下に限らないが、トリプレッ
ト遺伝暗号及び特異的な塩基対相互作用のようなものを含め現在周知のヌクレオ
チド配列の特性に基づくものであれば、BGFRPをコードするヌクレオチド配列を
、未だ開発されていない分子生物学的技術に用いることができる。

【０１７３】 以下に示す実施例は本発明の例示であって、本発明を限定しようとするもので
はない。

【０１７４】

【実施例】

１ CARDNOT01 cDNAライブラリーの作製 CARDNOT01 cDNAライブラリーは、自己加害の銃創により死亡した65歳の白人男
性から得られた心筋組織から作製された。乳鉢と乳棒を用いて、凍結組織をグア
ニジニウムイソチオシアネート溶液中で溶解した。溶解産物をフェノール／クロ
ロホルムで数回抽出し、RNAをエタノールで沈殿させた。ビオチン化したoligo d
(T)及び常磁性ビーズに結合させたストレプトアビジンを用いてpolyAとRNAを単
離した（Promega, Madison, WI）。Stratagene（LaJolla, CA）は、このpolyAと
RNAを用いてCARDNOT01 cDNAライブラリーを調製した。oligo d(T)プライミング
及び逆転写酵素に基づく方法を利用してcDNAを合成した。合成アダプターオリゴ
ヌクレオチドをcDNAと結合させ、次にλUni-ZAP^TMベクター系（Stratagene）に
クローン化する。

【０１７５】 ２ cDNAクローンの単離および配列決定 クローン化したcDNAを含む組換え型pBluescriptョファージミドベクターをStra tageneによる記載のようにin vivoでの切除によって回収する。1本鎖のファージ
ミドクローンがE.coli SOLR^TMを宿主細胞（Stratagene）に感染させるのに用い
られ、QIAwell-8 プラスミド精製システム（QIAGEN, Chatsworth, CA）を用いて
2本鎖のファージミドクローンを感染した細胞から精製する。

【０１７６】 Sangerら（1975, J. Mol. Biol. 94:441f）の方法によってcDNAの配列決定を
行った。連鎖停止反応生成物を尿素-ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動させ
、オートラジオグラフィーによって検出する。或いは、DNA配列決定及び配列解
析のための高スループット法は、Applied Biosystems 373 DNA sequencer若しく
はCatalyst 800並びに蛍光検出法を利用する。

【０１７７】 ３ cDNAクローン及びそれらの類推されるタンパク質の類似性検索 配列表のヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列を、GenBank、SwissPr
ot、BLOCKS、及びPima IIデータベースにおいて問い合わせ配列として用いた。
これらのデータベースには既に同定された注釈付きの配列が含まれており、BLAS
T(Basic Local Alignment Search Tool)を用いて類似性を有する領域をこのデー
タベースの中から検索した（例えば、Altschul. S.F.(1993) J. Mol. Evol. 36:
290-300；及びAltschulら(1990) J. Mol. Biol. 215:403-410参照）。

【０１７８】 BLASTはヌクレオチド及びアミノ酸配列の両方のアライメントを作成し、配列
の類似性を判定する。そのアライメントの局部的性質のため、BLASTは厳密な一
致の判定、即ち原核生物（細菌）又は真核生物（動物、真菌、植物）起源のホモ
ログを同定する際に特に有効である。他のアルゴリズムを、一次配列パターン及
び二次的な構造ギャップペナルティを取り扱う際に用いることができる（例えば
、Smith, Tら(1992) Protein Engineering 5:35-51参照）。本明細書に開示され
た配列は、少なくとも49ヌクレオチドの長さであり、不要な塩基は12%以下であ
る（ここでは、A、C、G、TではなくNが記録される）。

【０１７９】 BLASTアプローチは、問い合わせ配列とデータベースの配列の一致を検索する
。また、BLASTは、発見されたあらゆる配列の一致の統計的有意性を評価して、
ユーザが選択した有意性のしきい値を満たすそれらの一致のみを報告する。本出
願でのしきい値は、ヌクレオチドで10^{- 25}、ペプチドで10^{- 8}に設定した。

【０１８０】 インサイト社のヌクレオチド配列を、霊長類（pri）、げっ歯類（rod）、及び
他の哺乳類配列（mam）のGenBankデータベースで検索し、そこで同じクローンか
ら類推されたアミノ酸配列を、GenBankの機能性タンパク質データベース、哺乳
類（mamp）、脊椎動物（vrtp）、及び真核生物（eukp）で類似性について検索し
た。

【０１８１】 更に、BLOCKSなどの適切な解析プログラムを用いて、cDNAライブラリから同定
された配列を解析して、保存されたタンパク質モチーフをコードするそれらの遺
伝子配列を同定する。BLOCKSは、PROSITEデータベースから集められた短いアミ
ノ酸セグメント、即ちブロックに基づく荷重行列解析アルゴリズムである。（Ba
iroch. A. ら(1997) Nucleic Acids Res. 25:217-221）。BLOCKSアルゴリズムは
、未知の機能を有する遺伝子を分類するのに有用である。（Henikoff S.及びHen
ikoff G.J., Nucleic Acids Research (1991) 19:6565-6572）。ブロックは、3
〜60個のアミノ酸の長さであり、タンパク質の最も高度に保存された領域に対応
する。BLOKSアルゴリズムは、問合わせの配列をBLOKSデータベースのブロックの
荷重評点行列(weighted scoring matrix)と比較する。BLOKSデータベースのブロ
ックを、SWISS-PROTデータベースからの既知の機能を有するタンパク質配列に対
して較正し、一致の確率分布を決定する。また、PRINTS等の類似のデータベース
であるタンパク質フィンガープリントデータベースは、BLOKSアルゴリズムを用
いて検索可能である（Attwood, T. K.ら(1997) J. Chem. Inf. Comput. Sci. 37
:417-424）。PRINTSは、SWISS-PROT、GenBank、PIR、及びNRL-3D等のソースから
得られた非重複性の配列に基づいている。

【０１８２】 BLOKSアルゴリズムは、問合わせ配列とBLOKS若しくはPRINTSデータベースとの
一致を検索し、発見した全ての一致の統計的有意性を評価する。BLOKS若しくはP
RINTS検索での一致は、局部的類似と全体的類似の2つのレベルで評価される。局
部的類似の程度はスコアによって判断され、全体的類似の程度はスコアの格付と
確率値によって判断される。最も高い格付のBLOKSの一致の場合の1000以上のス
コアは、一致したブロックをSWISS-PROTに対して較正した場合に、一致が、偽陽
性率(false-positives)の0.5パーセンタイル値以内のレベルにあることを示して
いる。同様に、1×10^-3未満の確率値は、一致が、1000回の検索において1回以上
の頻度で生じないことを示している。1000以上のカットオフスコア及び1×10^-3
以下のカットオフ確率値を有するそれらの一致のみが、配列リストにおけるタン
パク質配列の機能解析において考慮される。

【０１８３】 また、配列リストの核酸及びアミノ酸配列は、PFRMを用いて解析され得る。PF
AMは、タンパク質ファミリー検索に有用なHidden Markov Model （HMM）に基づ
くプロトコルである。HMMは、遺伝子ファミリーのコンセンサス1次構造を解析す
る確率的アプローチである（例えば、Eddy, S.R. (1996) Cur. Opin. Str. Biol
. 6:361-365を参照）。

【０１８４】 PFAMデータベースには、SWISS-PROT及びPROSITE等の公的に利用可能なソース
から集められた527のタンパク質ファミリーのタンパク質配列が含まれる。PFRM
は、2つの高品位なアライメントルーチンであるシード(seed)アライメント及び
完全(full)アライメントを用いて、十分に特徴づけられたタンパク質ドメインフ
ァミリーを検索する（例えば、Sonnhammer, E.L.L.ら(1997) Proteins 28:405-4
20）。シードアライメントは、hmmlsプログラム、局所的一致を検索するプログ
ラム、及びPFAMデータベースの非重複性のセットを利用する。完全アライメント
は、hmmfsプログラム、反復およびモチーフ等の長い配列における複数の断片を
検索するプログラム、及びPFRMデータベースの全ての配列を利用する。100「ビッ
ト」のスコア又は結果は、それが2¹⁰⁰倍であり、恐らく配列がモデル又は比較配
列に対して厳密に一致していることを示している可能性がある。10〜50ビットの
範囲のカットオフスコアは、SWISS-PROT配列をモデル若しくは比較配列として用
いる個々のタンパク質ファミリーに対して一般に用いられる。

【０１８５】 前述のHMMアルゴリズム（例えば、Eddy, 前出；及びSonnhammer, 前出を参照
）に基づく別の2つのアルゴリズムSIGPEPT及びTMは、潜在的シグナル配列及び膜
貫通ドメインをそれぞれ同定する。SIGPEPTは、SWISS-PROT由来のシグナル配列
の注釈(annotations)を有するタンパク質配列を用いて作成される。それには、1
4〜36のアミノ酸残基の長さの範囲の約1413の非重複性のシグナル配列が含まれ
る。同様に、TMは膜貫通ドメインの注釈を用いて作成される。それには、1579の
膜貫通ドメインセグメントを包囲する約453の非重複性の膜貫通配列が含まれる
。適切なHMMモデルは、前述の配列を用いて構築され、高い相関係数、解析の正
確な測定が得られるまで、既知のSWISS-PROTシグナルペプチド配列または膜貫通
ドメイン配列で精製される。SWISS-PROTデータベースからのタンパク質配列を試
験セットとして用いて、前述のように決定された11ビットのカットオフスコアが
、91〜94%の陽性率(true-positives)及び4.1％の偽陽性率に相関し、SIGPEPTに
対する約0.87〜0.90の相関係数を得る。TMに対する11ビットのスコアは、一般に
以下のような結果を与える。75％の陽性率、1.72％の偽陽性率、及び0.76の相関
係数である。各検索は、発見された一致の統計的有意性を評価し、少なくとも11
ビット以上のスコアの一致のみが報告される。

【０１８６】 ４ ノーザン分析 ノーザン分析は、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験用技
術であり、特定の細胞種或いは組織に由来するRNAが結合している膜と、標識さ
れたヌクレオチド配列とのハイブリダイゼーションを伴う（例えば、Sambrookら
、前出, ch.7；並びにAusubel, F.M.ら前出, ch.4および16.参照）。

【０１８７】 BLASTを使用する類似のコンピュータ技術を用いて、GenBank或いはLIFESEQ^TM データベース（インサイト社）のようなヌクレオチドデータベース内の同一或
いは関連する分子を検索する。この分析は、多くの膜をベースとしたハイブリダ
イゼーションに比べてより高速である。さらにコンピュータ検索の感度を変更し
て、任意の特定の一致が、厳密な一致或いは類似の何れとして分類されるかを決
定することができる。

【０１８８】 検索の基準は、以下で定義される積スコア(product score)である。 （配列同一性%×最大BLASTスコア%）／100 積スコアは、2つの配列間の類似度および配列一致の長さの両方を考慮に入れる
。例えば、積スコア40の場合、その一致は1〜2%誤差の範囲内の正確さであり、積
スコア70の場合は正確な一致となる。類似の分子は通常15〜40間の積スコアを示
す分子を選択することにより同定されるが、それより低いスコアでは関連した分
子として同定される。

【０１８９】 ノーザン分析の結果は、BGFRPをコードする転写物が発生するライブラリのリ
ストとして報告される。また存在量および存在比も報告される。存在量は、特定
の転写物がcDNAライブラリに現れる回数を直接的に表すものであり、存在率のパ
ーセントは、存在量をcDNAライブラリで検査された配列の総数で割った値である
。

【０１９０】 ５ BGFRPをコードするポリヌクレオチドの伸長 インサイト社クローン186149の核酸配列を用いて、部分的なヌクレオチド配列
を完全長まで伸長するためのオリゴヌクレオチドプライマーを設計した。一方の
プライマーはアンチセンスポリヌクレオチドの伸長を開始するために合成し、他
方のプライマーはセンスポリヌクレオチドの伸長を開始するために合成した。プ
ライマーを用いることにより、既知の配列を「外側に」伸長することを容易にし
、対象の領域に対する新たな未知のヌクレオチド配列を含むアンプリコンを生成
した。初期のプライマーを、OLIGO^TM4.06 (National Biosciences,Plymouth,MN)
或いは他の適切なプログラムを用いて、約22〜30個のヌクレオチドからなる長さ
であって50%以上のGC含有物を有し、且つ約68〜72℃の温度で標的配列にアニー
リングするようにcDNAから設計した。ヘアピン構造及びプライマー−プライマー
2量体を生ずるようなヌクレオチドの如何なる伸長も回避した。

【０１９１】 選択されたヒトcDNAライブラリー（Gibco/BRL）を用いてその配列を伸長した
。2以上の伸長が必要であるか、もしくは望ましい場合には、さらに別のプライ
マーの組を設計して既知領域をさらに伸長させる。

【０１９２】 XL-PCR^TM キット（Perkin Elmer）の取扱説明書に従って、酵素及び反応混合
物を完全に混合することで高い適合度の増幅が得られた。PCRはPeltier Thermal
Cycler (PTC200; M.J.Research, Watertown,MA)を用いて実施され、以下のパラ
メータで、40pmolの各プライマーおよびキットの他の全ての成分は推奨された濃
度で開始した。 ステップ1 94℃で1分間（初期変性） ステップ2 65℃で1分間 ステップ3 68℃で6分間 ステップ4 94℃で15秒間 ステップ5 65℃で1分間 ステップ6 68℃で7分間 ステップ7 ステップ4〜6をさらに15サイクル繰返す ステップ8 94℃で15秒間 ステップ9 65℃で1分間 ステップ10 68℃で7分15秒間 ステップ11 ステップ8〜10を12サイクル繰返す ステップ12 72℃で8分間 ステップ13 4℃（保持する） 反応混合物の5〜10μlのアリコットを低濃度（約0.6〜0.8%）アガロースミニ
ゲル上で電気泳動法により分析し、どの反応物が配列の伸長に成功したかを判定
した。最も大きな生成物を含むと考えられるバンドをゲルから切出し、QIA Quic
k^TM （QIAGEN Inc.）を用いて精製し、クレノウ酵素を用いてオーバーハングを
切除して、再連結及びクローニングを容易にした。

【０１９３】 エタノール沈殿の後、その生成物を13μlの連結緩衝液中に再溶解し、1μlのT
4-DNAリガーゼ（15単位）及び1μlのT4ポリヌクレオチドキナーゼを加えて、そ
の混合物を室温で2〜3時間、或いは16℃で一晩インキュベートした。コンピテン
トE.coli細胞（40μlの適切な培養液中の）を3μlの連結混合物を用いて形質転
換し、80μlのSOC培養液で培養した（例えば、Sambrook、前出,Appendix A, p.2
参照）。37℃で1時間インキュベートした後、E.coli混合物を、カルベニシリン
（2x carb）を含むLuria Bertani (LB)-agar（例えば、Sambrook、前出, Append
ix A, p.1参照）上で平板培養(plated)した。翌日、いくつかのコロニーを各プ
レートから無作為に選択して、適切な市販の滅菌96穴マイクロタイタープレート
の個々のウエル内に置かれた150μlの液体LB/2x carb培地で培養した。その翌日
、終夜培養した各5μlの培養物を非滅菌の96穴プレートに移し、水で1:10に希釈
した後、各サンプルから5μlをPCRアレイに移した。

【０１９４】 PCR増幅の場合、ベクタープライマー、伸長反応のために用いられる1つ或いは
両方の遺伝子特異性プライマー、及び4単位のrTth DNAポリメラーゼを含む18μl
の濃縮PCR反応混合物（3.3x）が各ウエルに加えられた。増幅は、以下の条件で
実施した。 ステップ1 94℃で60秒間 ステップ2 94℃で20秒間 ステップ3 55℃で30秒間 ステップ4 72℃で90秒間 ステップ5 ステップ2〜4をさらに29サイクル繰返す ステップ6 72℃で180秒間 ステップ7 4℃（保持する） PCR反応物のアリコットを、分子量マーカーと共にアガロースゲル上で移動さ
せた。PCR生成物の大きさを元の部分的なcDNAと比較し、適切なクローンを選択
し、プラスミドに結合させて配列決定した。

【０１９５】 同様に、SEQ ID NO:2のヌクレオチド配列を使用し、上記手順、5’伸長用に設
計されたオリゴヌクレオチド、及び適切なゲノムライブラリを用いて5’調節配
列が得られる。

【０１９６】 ６ 個々のハイブリダイゼーションプローブの標識化及び使用 SEQ ID NO:2から得られたハイブリダイゼーションプローブを用いて、cDNA、
ゲノムDNA、又はmRNAをスクリーニングする。約20塩基対からなるオリゴヌクレ
オチドの標識について特に記載するが、より大きなヌクレオチド断片にも概ね同
じ手順を用いる。オリゴヌクレオチドを、OLIGO^TM 4.06ソフトウェア（National
Biosciences）のような当技術分野のソフトウエアを用いて設計し、50pmolの各
オリゴマー、250μCiの[γ-³²P]アデノシン3リン酸 （Amersham,Chicago,IL）、
及びT4ポリヌクレオチドキナーゼ（DuPont NEN^ョ, Boston MA）を結びつけること により標識する。標識されたオリゴヌクレオチドを、Sephadex^TM G-25超微細分
子サイズ排除デキストランビーズカラム（Pharmacia＆Upjohn,Kalamazoo,MI）を
用いて実質的に精製する。毎分10⁷カウントの標識されたプローブを含むアリコ
ットを、以下のエンドヌクレアーゼ、Ase I、Bgl II、Eco RI、Pst I、Xba1、又
はPvu II（DuPont NEN, Boston, MA）の中の1つで消化されたヒトゲノムDNAの典
型的な膜ベースのハイブリダイゼーション解析に用いる。

【０１９７】 各消化物からのDNAを、0.7%アガロースゲルに上で分画して、ナイロン膜（NyB
GFRPlus, Schleicher & Schuell, Durham NH）に移す。ハイブリダイゼーション
は40℃で16時間実施する。非特異的シグナルを除去するために、0.1xクエン酸ナ
トリウム食塩水及び0.5%ドデシル硫酸ナトリウムまでの徐々に厳密性を増す条件
下で、ブロットを室温にて連続的に洗浄する。XOMAT AR^TMフィルム （Kodak, Ro
chester, NY）を数時間ブロットに露光した後、ハイブリダイゼーションパター
ンを視覚的に比較する。

【０１９８】 ７ マイクロアレイ 化学的結合プロシージャ及びインクジェット装置を用いることにより、基板の
表面上でアレイエレメントを合成することができる。（例えば、Baldeschweiler
, 前出 参照）。また、ドットブロット又はスロットブロット法に類似の所定の
アレイを用いて、熱、UV、化学的もしくは機械的結合プロシージャを利用して、
基板の表面にエレメントを配置及び結合させてもよい。標準的なアレイは、手製
で或いは手近な方法及び機械を用いて製作でき、また任意の適切な数のエレメン
トを含む。ハイブリダイゼーション後、ハイブリダイズしていないプローブを取
除き、スキャナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを判定する。マイクロアレ
イ上のエレメントとハイブリダイズする各プローブの相補性の度合及び相対的な
存在量は、スキャナーで読取られた画像を解析することにより評価する。

【０１９９】 完全長cDNA、発現された配列タグ（ESTs）、又はそれらの断片は、マイクロア
レイのエレメントを含み得る。ハイブリダイゼーションに適した断片は、当業者
に周知のLASERGENE^TMのようなソフトウェアを用いて選択可能である。本発明の
ヌクレオチド配列の1つに対応する完全長cDNA、EST、若しくはそれらの断片を、
又は本発明に関連するcDNAライブラリーから無作為に選択されたものを、例えば
スライドガラスのような適切な基板に配置する。そのcDNAを、例えばUV架橋の後
に熱的および化学的に処置し、さらに乾燥することによって、スライドガラスに
固定する（例えば、Schena, M.ら (1995) Science 270:467-470; 並びにShalon,
D.ら(1996) Genome Res. 6:639-645参照）。蛍光プローブを作製し、基板上の
エレメントとのハイブリダイゼーションに用いる。基板は前述の方法によって解
析する。

【０２００】 ８ 相補的ポリヌクレオチド BGFRPをコードする配列に相補的な配列、或いはその任意の一部を、自然発生B
GFRPの発現を検出し、低下させる、即ち抑制するために用いる。約15〜約30塩基
対を含むオリゴヌクレオチドの使用について記載するが、より小さな、或いはよ
り大きな配列フラグメントの場合でも本質的に同じ方法が用いられる。OLIGO^TM4
.06ソフトウェア及びBGFRPのコーディング配列を用いて適切なオリゴヌクレオチ
ドを設計する。転写を抑制するために、相補オリゴヌクレオチドを最も独特な5
’配列から設計してコーディング配列へのプロモーターの結合を防止するために
用いる。翻訳を抑制するために、相補的なオリゴヌクレオチドを設計してBGFRP
をコードする転写物へのリボソームの結合を防ぐ。

【０２０１】 ９ BGFRPの発現 BGFRPの発現及び精製は、細菌またはウイルスに基づく発現系を用いて実施さ
れる。細菌におけるBGFRPの発現の場合、抗菌性の耐性遺伝子とcDNAの転写レベ
ルを高める誘導性のプロモーターとを含む適切なベクターにcDNAをサブクローニ
ングする。このようなプロモーターの例としては、以下に限定しないが、lacオ
ペレーター調節エレメントに関連するT5またはT7バクテリオファージプロモータ
ー及びtrp-lac(tac)ハイブリッドプロモーターが挙げられる。組換えベクターを
、BL21(DE3)などの適切な細菌性の宿主に形質転換する。抗生物質耐性菌が、イ
ソプロピルβ−Ｄチオガラクトピラノシド（IPTG）での誘発によりBGFRPを発現
する。真核生物の細胞におけるBGFRPの発現は、昆虫または哺乳動物の細胞株に
、一般にバキュロウイスルスとして知られているAutographica californica核多
角体ウイルス（AcMNPV）を感染させることによって行う。バキュロウイルスの非
必須ポリヘドリン遺伝子を、相同的組換え又は転移プラスミド中間体を含む細菌
媒介の遺伝子転移の何れかによって、BGFRPをコードするcDNAと置換する。ウイ
ルスの感染力は維持され、強力なポリヘドリンプロモータによって高レベルのcD
NAの転写が行われる。多くの場合、組換え型バキュロウイルスは、Spodoptera fr ugiperda （Sf9）昆虫細胞の感染に用いられるが、場合によっては、ヒト肝細胞
の感染にも用いられる。後者の感染には、バキュロウイルスに対する更なる遺伝
的変更が必要となる。（例えば、Engelhard. E. K.ら(1994) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 91:3224-3227; Sandig, V.ら(1996) Hum. Gene Ther. 7:1937-1945.
を参照）。

【０２０２】 殆どの発現系において、BGFRPは、例えばグルタチオンSトランスフェラーゼ（
GST）、またはFLAG若しくは6-His等のペプチドエピトープ標識で融合タンパク質
として合成され、粗製の細胞溶解産物からの組換え型融合タンパク質の親和性ベ
ースの精製を迅速に1段階で行うことができる。Schistosoma japonicumからの26
キロダルトンの酵素のGSTによって、タンパク質の活性及び抗原性を維持した条
件の下で固定化されたグルタチオにおける融合タンパク質の精製が可能となる。
（Pharmacia, Piscataway, NJ）。精製の後に、特定の操作部位においてBGFRPか
らGST部分をタンパク分解的に切断可能である。8個のアミノ酸のペプチドである
FLAGにより、市販のモノクロナール及びポリクロナール抗FLAG抗体を用いて免疫
親和性の精製が可能となる（Eastman Kodak, Rochester, NY）。6個の連続した
ヒスチジン残基のストレッチである6-Hisによって、金属キレート樹脂（QIAGEN
Inc, Chatsworth, CA）における精製が可能となる。タンパク質の発現及び精製
の方法については、Ausubel. F. M. らの（1995年、更に定期的に増補された） Current Protocols in Molecular Biology , John Wiley & Sons, New York, NY,
ch 10, 16に記載されている。これらの方法によって得られた精製されたBGFRP
を、以下のアッセイで直接用いることができる。

【０２０３】 １０ BGFRP活性の実証 BGFRP活性に対するアッセイは、培養されたBD9細胞、BCGF反応性細胞株におけ
るDNA合成の刺激作用を測定する。 [³H]チミジン、放射性のDNA前駆体の存在下
において、静止状態のBD9培養細胞にBGFRPの量の変更が加えられる。このアッセ
イに対するBGFRPは、組換え手法または生化学的な調製法によって得ることがで
きる。酸不溶性のDNAへの[³H]チミジンの組込みは、適切な時間間隔で測定され
、組込み量は新たに合成されたDNAの量に直接的に比例する。少なくとも100倍の
濃度範囲における線形の用量反応曲線は、成長因子活性を示している。1ミリリ
ットル当たりの活性の1単位は、50%の反応レベルを生じさせるBGFRPの濃度と定
義され、ここで100%は、酸不溶性のDNAへの[³H]チミジンの最大の組込みを表す
。

【０２０４】 １１ 機能的アッセイ BGFRPの機能は、哺乳類細胞培養系における生理学的に高められたレベルでのB
GFRPをコードする配列の発現によってアッセイする。高レベルでcDNAを発現する
強力なプロモーターを含む哺乳類の発現ベクターにcDNAをサブクローニングする
。選り抜きのベクターには、pCMV SPORT^TM （Life Technologies, Gaithersburg
, MD）及びpCR^TM 3.1 （Invitrogen, Carlsbad, CA）が含まれ、その各々にはサ
イトメガロウイルスプロモーターが含まれる。5〜10μgの組換えベクターを、リ
ポソーム製剤或いは電気穿孔法によって、好ましくは内皮若しくは造血由来のヒ
ト細胞株に一過性に形質移入する。また、標識タンパク質をコードする配列を含
む1〜2μgの付加的なプラスミドを同時形質移入する。標識タンパク質の発現に
より、形質移入された細胞と形質移入されていない細胞とを区別することができ
、また組換えベクターからのcDNAの発現を確実に予測できる。選り抜きの標識タ
ンパク質には、緑色蛍光タンパク質（GFP）（Clontech, Palo Alto, CA）、CD64
、又はCD64-GFP融合タンパク質が含まれる。自動化されたレーザー光学に基づい
た技術であるフローサイトメトリー（FCM）を用いて、GFP又はCD64-GFPを発現す
る形質移入された細胞を同定し、またアポトーシスの状態等の特性を評価する。
FCMによって、先行する或いは同時の細胞死の現象を診断する蛍光分子の取込み
を検出及び定量化する。これらの現象には、プロピジウムヨウ化物でのDNAの染
色によって測定される核DNA内容物の変化、ブロモデオキシウリジンの取込み量
の低下によって測定されるDNA合成の下方制御、特異的抗体との反応性によって
測定される細胞表面および細胞内のタンパンク質の発現の変化、並びにフルオレ
セイン結合アネキシンVタンパク質の細胞表面への結合によって測定される原形
質膜組成の変化が含まれる。フローサイトメトリーの方法については、Ormerod,
M. G.の (1994) Flow Cytometry, Oxford, New York, NYに記載されている。

【０２０５】 遺伝子発現におけるBGFRPの影響は、BGFRPをコードする配列並びにCD64若しく
はCD64-GFPの何れかが形質移入された高度に精製された細胞集合を用いて評価す
ることができる。CD64及びCD64-GFPは、形質転換された細胞表面で発現し、ヒト
免疫グロブリンG（IgG）の保存された領域と結合する。形質転換された細胞を、
ヒトIgG若しくはCD64の抗体の何れかで被覆された磁気ビーズを用いて、形質転
換されていない細胞から分離することができる（DYNAL, Lake Success, NY）。m
RNAは、当業者に周知の方法で細胞から精製することができる。BGFRP及び目的と
する他の遺伝子をコードするmRNAの発現は、ノーザン分析やマイクロアレイ技術
で解析することが可能である。

【０２０６】 １２ BGFRP特異的抗体の産生 ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（PAGE）（例えば、Harrington, M.G. (19
90) Methods Enzymol. 182:488-495参照）、或いは他の精製技術を使用して実質
的に精製されたBGFRPを用いて、標準的なプロトコルに従ってウサギを免疫化し
て抗体を生成する。

【０２０７】 或いは、BGFRPのアミノ酸配列をLASERGENE^TM software （DNASTAR Inc.）を用
いて解析して免疫原性の高い領域を判定し、対応するオリゴポリペプチドを合成
し、これを用いて当業者に知られた方法により抗体を産生させる。C-末端付近ま
たは親水性領域内のエピトープのような適切なエピトープの選択方法の詳細につ
いては当業者の文献に記載されている（例えば、Ausubelら 前出, ch.11参照）
。

【０２０８】 通常、15残基の長さのオリゴペプチドを、fmoc法の化学作用を利用するApplied
Biosystems Peptide Synthesizer Model 431Aを用いて合成し、MBS（N-maleimi
dobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester）を用いた反応によりKLH(Sigma, St.Lo
uis, MO)に結合させて免疫抗原性を増強させる（例えば、Ausubel前出 参照）。
ウサギをフロイント完全アジュバントにおけるオリゴペプチド-KLH複合体で免疫
化する。その結果生じる抗血清は、例えば、プラスチックにペプチドを結合させ
、1%BSAでブロッキングし、ウサギ抗血清と反応させ、洗浄し、さらに放射性ヨ
ウ素標識したヤギ抗ウサギIgGと反応させることにより、抗ペプチド活性に対し
て検査される。

【０２０９】 １３ 特異的抗体を用いる自然発生BGFRPの精製 BGFRPに特異的な抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィにより
、自然発生或いは組換えBGFRPを実質的に精製する。イムノアフィニティーカラ
ムは、BGFRP抗体を、CnBr-活性化セファロース（Pharmacia＆Upjohn）のような
活性化されたクロマトグラフィー用樹脂に共有結合させることにより作製する。
結合の後、製造者の取扱説明書に従って樹脂をブロック及び洗浄する。

【０２１０】 BGFRPを含む培養液をイムノアフィニティーカラムに通し、BGFRPを優先的に吸
着させる条件下（例えば、界面活性剤の存在下における高イオン強度のバッファ
ー）でそのカラムを洗浄する。抗体／BGFRP結合を分裂させる条件下（例えば、p
H2〜3のバッファー、又は尿素もしくはチオシアン酸塩イオンのような高濃度の
カオトロープ(chaotrope)）でカラムを溶出させ、BGFRPを回収する。

【０２１１】 １４ BGFRPと相互作用する分子の同定 ¹²⁵I Bolton-Hunter試薬を用いて、BGFRP或いはその生物学的に活性な断片を
標識する（例えば、Boltonら(1973) Biochem.J.133:529参照）。マルチウエルプ
レートのウエル内に予め配置した候補分子を、標識したBGFRPと共にインキュベ
ートし、洗浄し、標識したBGFRP複合体を有する任意のウエルをアッセイする。
種々のBGFRP濃度で得られたデータを用いて、BGFRPと候補分子との会合、親和性
、及び数についての値を計算する。

【０２１２】 上記の刊行物および特許出願の全ては、ここで言及することにより本明細書の
一部とする。当業者は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく本明細書に
記載した方法及びシステムの種々の改変を行うことができるであろう。本発明を
特定の好適実施例に関して説明してきたが、請求する発明がそのような特定の実
施例に過度に制限されるべきではないことを理解されたい。実際に、記載した本
発明の実施のための方法の種々の改変は、分子生物学或いは関連する分野の当業
者には明らかであり、請求の範囲内に含まれることを意図するものである。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 BGFRPのアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す図
である。アライメントの作成にはMacDNASIS PROTMソフトウエア（Hitachi Softw
are Engineering Co. Ltd., San Bruno, CA）を使用した。

【図１Ｂ】 BGFRPのアミノ酸配列（SEQ ID NO:1）及び核酸配列（SEQ ID NO:2）を示す図
である。アライメントの作成にはMacDNASIS PROTMソフトウエア（Hitachi Softw
are Engineering Co. Ltd., San Bruno, CA）を使用した。

【図２】 LASERGENETMソフトウエアのマルチシーケンスアライメントプログラム（DNAST
AR Inc, Madison WI）を使用して作成したBGFRP（186149; SEQ ID NO:1）とヒト
BCGF1（GI 522145; SEQ ID NO:3）の間のアミノ酸配列アライメントを示す図で
ある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 7/06 ４Ｈ０４５ 3/10 9/10 7/06 11/00 9/10 11/06 11/00 13/12 11/06 17/06 13/12 29/00 17/06 31/00 29/00 35/00 31/00 35/02 35/00 37/02 35/02 37/08 37/02 43/00 37/08 Ｃ０７Ｋ 14/52 43/00 16/24 Ｃ０７Ｋ 14/52 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 16/24 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ， ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 コーレイ、ニール・シー アメリカ合衆国カリフォルニア州94040・ マウンテンビュー・＃30・デールアベニュ ー 1240 (72)発明者 ボーグン、マライア アメリカ合衆国カリフォルニア州94577・ サンレアンドロ・サンティアゴロード 14244 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA19 BA80 CA04 CA07 CA09 CA20 DA02 DA06 EA02 EA04 GA11 HA03 HA13 HA14 4B063 QA01 QQ43 QQ53 QR08 QR32 QR35 QR40 QR42 QR56 QR62 QR84 QS16 QS25 QS34 QX02 4B065 AA26X AA90X AA93Y AB01 AC14 BA02 BD14 CA24 CA44 CA46 4C084 AA01 AA02 AA07 AA17 BA01 BA22 DA17 ZB072 ZB312 4C085 AA13 AA14 BB17 DD63 GG02 GG03 GG04 GG05 GG06 GG08 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 CA40 DA75 EA20 EA50 FA71 FA74 GA26

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 SEQ ID NO:1のアミノ酸配列又はSEQ ID NO:1の断片を含む
   実質的に精製されたポリペプチド。
2. 【請求項２】 請求項１の配列に対して少なくとも90%以上のアミノ酸配
   列の同一性を有する実質的に精製された変異体。
3. 【請求項３】 請求項１のポリペプチドをコードする単離され精製された
   ポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 請求項３のポリヌクレオチドに対して少なくとも90%以上
   のポリヌクレオチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチド
   の変異配列。
5. 【請求項５】 厳密な条件の下で請求項３のポリヌクレオチドとハイブリ
   ダイズする単離され精製されたポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項３のポリヌクレオチドに対して相補的な単離され精
   製されたポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 SEQ ID NO:2のポリヌクレオチド配列又はSEQ ID NO:2の断
   片を含む単離され精製されたポリヌクレオチド。
8. 【請求項８】 請求項７のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも90%
   以上のポリヌクレオチド配列の同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオ
   チドの変異配列。
9. 【請求項９】 請求項７のポリヌクレオチドに対して相補的な配列を有す
   る単離され精製されたポリヌクレオチド。
10. 【請求項１０】 請求項３のポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発
    現ベクター。
11. 【請求項１１】 請求項１０の発現ベクターを含む宿主細胞。
12. 【請求項１２】 SEQ ID NO:1の配列又はSEQ ID NO:1の断片を含むポリペ
    プチドの製造方法であって、 （ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で、請求項１１の宿主細胞を
    培養する過程と、 （ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含むこと
    を特徴とする製造方法。
13. 【請求項１３】 適切な医薬用担体と共に請求項１のポリペプチドを含む
    医薬品組成物。
14. 【請求項１４】 請求項１のポリペプチドに特異的に結合する精製された
    抗体。
15. 【請求項１５】 請求項１のポリペプチドの精製されたアゴニスト。
16. 【請求項１６】 請求項１のポリペプチドの精製されたアンタゴニスト。
17. 【請求項１７】 免疫異常症の治療または予防の方法であって、そのよう
    な治療が必要な患者に対して、有効な量の請求項１３の医薬品組成物を投与する
    過程を含む方法。
18. 【請求項１８】 免疫異常症の治療または予防の方法であって、そのよう
    な治療が必要な患者に対して、有効な量の請求項１６のアンタゴニストを投与す
    る過程を含む方法。
19. 【請求項１９】 細胞増殖障害の治療または予防の方法であって、そのよ
    うな治療が必要な患者に対して、有効な量の請求項１６のアンタゴニストを投与
    する過程を含む方法。
20. 【請求項２０】 感染症の治療または予防の方法であって、そのような治
    療が必要な患者に対して、有効な量の請求項１３の医薬品組成物を投与する過程
    を含む方法。
21. 【請求項２１】 所定の生物学的サンプルにおいてSEQ ID NO:1のアミノ
    酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの検出方法であって、 （ａ）請求項６のポリヌクレオチドを前記生物学的サンプルの少なくとも1つ
    の核酸とハイブリダイズさせて、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程
    と、 （ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、該ハイブ
    リダイゼーション複合体の存在が前記生物学的サンプルにおける前記ポリペプチ
    ドをコードするポリヌクレオチドの存在と相関性を有するような検出過程とを含
    むことを特徴とする検出方法。
22. 【請求項２２】 前記ハイブリダイゼーション過程の前に、ポリメラーゼ
    連鎖反応法によって前記生物学的サンプルの核酸を増幅することを特徴とする請
    求項２１に記載の方法。