JP2002506003A - インターフェロン−γフラグメントを含むリポペプチド、及び薬学的組成物におけるその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、哺乳動物のインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）Ｃ末端の末端から近接する約３０〜約５０アミノ酸からなるペプチド配列を含むペプチド部分（ここで、必要に応じ、その末端から３〜２０アミノ酸が抑制されており；そして１個又は数個の親油性部分は、直鎖若しくは分枝の、飽和か若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ２０鎖の炭素原子、又はステロイド基を含む）を含むことを特徴とするいかなるリポペプチドにも関する。本発明は、１個又は数個ＣＤ８、及び／又はＣＤ４，及び／又はＢエピトープを含む上記のような、いかなるリポペプチドにもまた関する。本発明は、上記のようないかなるポリペプチドをも含む医薬品又はワクチンに更に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、インターフェロン−γフラグメントを含むリポペプチドに関し、さ
らに、特に、インターフェロン−γがその生物学的効果のうちの少なくとも一つ
により活性を有すると考えられる症状の治療もしくは予防に関連した医薬品とし
て、又は任意の抗原に対する免疫応答のバランスを、特にこの抗原に対する２型
応答と相対的な１型免疫応答の確立を促進することにより、刺激、修正、もしく
は再修正するためのワクチン組成物において用いられうる免疫アジュバントとし
てのその使用に関する。

【０００２】 細胞性免疫の要素であるサイトカインは、それぞれＩＬ−２、ＩＬ−１２、イ
ンターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＩＬ−４、及びＩＬ−５により特徴付
けられる、１型サイトカイン及び２型サイトカインという２つの群に分類される
。これらの２つの群は、相互に制御及び調節し合う。それらは、免疫応答の誘導
及び制御と密接に関連している。

【０００３】 「１型免疫応答」という表現は、１型サイトカイン・プロフィールの誘導を意
味する。

【０００４】 「２型免疫応答」という表現は、２型サイトカイン・プロフィールの誘導を意
味する。

【０００５】 その多面的な活性のため、ＩＦＮ−γは免疫バランスの確立において基本的な
役割を果たす。特に、このサイトカインは、特にウイルス、細菌、及び原生動物
寄生虫に対する、様々な免疫防御過程に関与している。さらに、それは、２型サ
イトカインを阻害し、ある種の腫瘍と格闘するため、そしてウイルス及び寄生虫
感染と格闘するためにしばしば必要とされる１型応答の確立を促進する。

【０００６】 その結果、このサイトカインが関与する治療戦略は、魅力的であると考えられ
るが、いくつかの問題に直面する。これらの問題は、大用量の反復注射をやむな
くし、分子の活性の広域スペクトルによる副作用としばしば関連している、ＩＦ
Ｎ−γの短い半減期の結果である。

【０００７】 組換えヒトＩＦＮ−γの作製及びヒト治療におけるその使用も、用いられてい
る発現系では得ることが極めて困難であるか、又は不可能である、分子のグリコ
シル化の状態に高度に依存する（Saraneva et al., 1995）、分子の不安定性と 直面する。

【０００８】 ＩＦＮ−γは、ホモダイマーの形態で活性を有する、種に応じて１３３〜１４
３アミノ酸の糖タンパク質である。それは、種の障壁（species barrier）に関 する限り膜貫通型レセプターを刺激することにより標的細胞に作用する。この種
特異性は、ＩＦＮ−γレセプターの外側（又は細胞外）部分とサイトカインのＮ
末端部分との特異的な認識に基づく。

【０００９】 ＩＦＮ−γとそのレセプターとの相互作用は、このレセプターのダイマー化を
もたらし、細胞質におけるチロシン・ヤヌス（Janus）キナーゼ２（ＪＡＫ２） とレセプターのアルファ鎖との相互作用を制御する。これにより、ＪＡＫ１及び
ＪＡＫ２のトランスリン酸化及び／又は自己リン酸化が引き起こされる。これは
、クラスＩＩ ＭＨＣ分子、Ｆｃ−γレセプター、及びＶＣＡＭ−１のような接 着分子の発現の誘導のような生物学的活性を引き起こす、このサイトカインによ
る刺激に関連したシグナルの伝達経路の活性化カスケードの最初の段階となって
いる。

【００１０】 しかし、種の障壁に依存した生物学的活性は、サイトカインが標的細胞内に輸
送されるか（リポソームで（Fidler et al., 1985））、又は微量注入（Smith e
t al., 1990）もしくはトランスフェクション（Sanceau et al., 1987）により 導入される場合に観察される。これらの結果は、細胞内活性化経路の存在を示唆
しているように思われる。

【００１１】 この第二の活性化経路は、ＩＦＮ−γのＣ末端部分（マウスＩＦＮ−γの場合
配列９５〜１３３）とＩＦＮ−γレセプターのアルファ鎖との相互作用の後に起
こる可能性が極めて高い。この配列は、強い親和性を有するマウスＩＦＮ−γレ
セプターのアルファ鎖の残基２５３〜２８７のレベルに位置する、種に依存する
結合部位を有する（Szente and Johnson, 1994）。この細胞質内結合部位は、細
胞膜及びＪＡＫ２チロシンキナーゼ結合部位の近傍に位置する。この第二の認識
段階は、このサイトカインの生物学的機能にとって必須であると思われる。ＩＦ
Ｎ−γのＣ末端ペプチドとＩＦＮ−γレセプターの細胞質部分との相互作用は、
ＪＡＫ２とレセプターのアルファ鎖との結合を増加させ（Szente et al., 1995 ）、シグナル伝達経路の活性化を引き起こす。

【００１２】 これらの観察は、ベクター化（vectorize）されたヒトＩＦＮ−γを有するマ ウス・マクロファージのＩＦＮ−γレセプターを活性化する能力に関する従来の
観察を支持し、説明した。従って、ＩＦＮ−γの生理学的作用メカニズムには、
おそらく、最初の認識段階の後の、ＩＦＮ−γとそのレセプターとの間に形成さ
れた複合体の取り込みが関与していると考えられる。

【００１３】 ＩＦＮ−γ産生細胞が、サイトカインレセプターの細胞外部分を介した自己分
泌（autocrine）活性を必要とせずに、細胞内に産生されたＩＦＮ−γにより自 己リン酸化される過程における、内分泌（intracrine）刺激に相当すると考えら
れる、もう一つのメカニズムが構想されうる。

【００１４】 in vitroで、高濃度（１００μM）における２４時間のマウス（配列９５〜１ ３３）又はヒト（配列９５〜１３４）ＩＦＮ−γペプチドによるマウスＰ３８８
Ｄ１細胞株（マクロファージ単球）の食細胞の処理は、クラスＩＩ ＭＨＣレセ プターの発現を誘導することができる。高濃度が必要とされるのは、（研究され
た細胞のピノサイトーシス活性による）ペプチドの細胞膜浸透の低いレベルによ
り、又はペプチドの不適切なコンフォメーションにより、又は２つの現象の組み
合わせにより説明されうる（Szente et al., 1994）。

【００１５】 さらに最近、SzenteはＣ末端ペプチドのアゴニスト活性に関与する構造的因子
を同定し、ユニットＲＫＲＫＲを含むαヘリックスが、ＩＦＮ−γレセプターの
細胞質ドメインへの結合にとって、そして生物学的活性の誘導にとって必須であ
ることを観察した（Szente et al., 1996）。

【００１６】 食細胞のみが、Szenteにより用いられたＩＦＮ−γのＣ末端ペプチドに対する
相対的な感受性を有する。これらの観察は、このサイトカインの内分泌活性の仮
説を支持することを可能にするため、基本的に重要であるが、用いられうる生成
物自体を提唱しない。未修飾ペプチドで観察された生物学的活性は、さらに、Ｉ
ＦＮ−γの活性の完全なスペクトルを有しなかった。特に、標準的な試験を実施
するために用いられる細胞が食活性を有しないため、Szenteは、ＩＦＮ−γ活性
の特徴と見なされ、このサイトカインの産生バッチの活性をアッセイするために
用いられる抗ウイルス活性の誘導を得なかった。

【００１７】 前記のマウスペプチド９５〜１３３又はヒトペプチド９５〜１３４のような、
哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端部分に相当するペプチドの治療的使用は、このＩＦ
Ｎ−γの細胞外レセプターの認識の中間段階を経由せずに、該ペプチドとＩＦＮ
−γ細胞内レセプターとの直接的な結合により、完全なＩＦＮ−γを用いた場合
に観察される生物学的活性の誘導を可能にすると同時に、内分泌活性が参照され
た場合に、生理学的活性化メカニズムに従い、従って完全なアゴニスト性質を示
すことができるため、特に有利であろう。

【００１８】 特に、前述のように、完全なＩＦＮ−γはまず、ある特定の種に特異的な細胞
外レセプターに結合する。次に、ＩＦＮ−γは、細胞内に取り込まれ、前記のよ
うにある特定の種に特異的ではないと思われる該レセプターの細胞内部分と反応
するようである。

【００１９】 結果として、哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端部分に相当する前記ペプチドの使用
は、この種障壁問題を解決することを可能にし、従って全ての哺乳動物の治療に
関連して、ある特定の哺乳動物のＩＦＮ−γのＣ末端部分に相当するペプチドを
使用することを可能にする。さらに、これらのペプチドの直接的な細胞内取り込
みは、細胞外レセプターの認識の段階を回避しているため、細胞外でのペプチド
の残留時間を制限し、このペプチドの分解のリスクの制限に寄与するという利点
を有するであろう。

【００２０】 しかし、前述のように、特に抗原提示細胞、又は細胞障害性もしくはヘルパー
Ｔ細胞を含む、これらのペプチドの主要な標的細胞は、該ペプチドの迅速かつ効
率的な取り込みにとって不十分である、前記のSzenteらによる１９９４年の文献
から導き出されるピノサイトーシス活性のみをせいぜい有するため、マクロファ
ージにおいてin vitroで観察された前記マウスＩＦＮ−γペプチド９５〜１３３
の低い浸透度は、前記ペプチドの治療的使用の構想を可能にしない。

【００２１】 脂質鎖で修飾することにより生存細胞内にペプチドをベクター化する可能性は
、既に研究対象となっている。プロテインキナーゼＣの偽基質配列から誘導され
た一連のリポペプチドの比較は、本発明者らが、Ｎ又はＣ末端パルミトイル−リ
シン基によるペプチドの修飾が、細胞質移行に関して効率的なベクターの作製を
もたらすことを証明することを可能にした（Loing et al., 1996）。パルミトイ
ル−リシンによる修飾は、生物学的活性を測定することにより間接的に観察され
うる（Thiam et al., 1997）、又は光学顕微鏡、共焦点顕微鏡、もしくは電子顕
微鏡により実施される実験により間接的に観察されうる、生存細胞内の９〜１７
残基からなるペプチドの迅速な移動を可能にする。

【００２２】 本発明は、哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端部分に相当する前記ペプチドを含むリ
ポペプチドが、該ペプチドが食活性とは無関係に細胞内に浸透することを可能に
し、同時にそれらの生物学的活性を保存しているという事実の、本発明者らによ
る証明に由来する。本発明者らにより実施された実験は、前記ペプチド９５〜１
３３がこのペプチド９５〜１３３を含むリポペプチドと同用量で用いられる場合
、この生物学的活性を非食細胞において観察することが不可能であることを立証
した。第一に、単純な脂質鎖をそのような大きなペプチド（Thiam et al., 1997
による文献における前記のものよりも著しくサイズが大きい）と組み合わせるこ
とが、このペプチドの細胞膜通過を可能にすること、第二に、この脂質鎖が、特
にマスキング現象により、該ペプチドと哺乳動物ＩＦＮ−γレセプターの細胞内
部分との結合を妨害しないであろうことを予測することは不可能であった。

【００２３】 従って、本発明の主要な目的は、哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端部分に相当する
ペプチドのＩＦＮ−γの標的細胞への効率的な浸透を可能にする新規なリポペプ
チド化合物を提供することである。

【００２４】 これに関して、本発明は、ＩＦＮ−γの活性の全部又は一部のアゴニストであ
り、本発明者らによりin vivoで初めて証明された動物における活性を有する、 ヒト又は動物の治療において用いられうる化合物（即ち、ＩＦＮ−γの生物学的
又は薬理学的活性のうちの少なくとも一つと類似した活性を有する化合物）を提
供することを可能にする。

【００２５】 本発明のさらなる目的は、新規な実験試薬、及び前記リポペプチドを含む新規
な薬学的組成物を提供することである。

【００２６】 本発明のさらなる目的は、特に、該薬学的組成物が投与される回数がＩＦＮ−
γの場合よりも著しく少ないため、そしてこれらの組成物の作用の遅延時間がＩ
ＦＮ−γの場合よりもはるかに短いため、組換えＩＦＮ−γよりも少ない副作用
を示す、組換えＩＦＮ−γよりも優れた利点を有する新規な薬学的組成物を提供
することである。

【００２７】 さらに、本発明の薬学的組成物は、それらの冷却条件の時々の中断による心配
がなく、従ってこれに関して大気温度で保存されうるため、組換えＩＦＮ−γよ
りも著しく長い期間にわたり保存されうるという利点、及び著しく制限の少ない
条件下でこれを可能にするという利点を有する。

【００２８】 本発明は、 −適切な場合には、末端から３〜２０アミノ酸が抑制されている、哺乳動物イン
ターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）のＣ末端の末端から約３０〜約５０の隣接する
アミノ酸からなるペプチド配列、 −又は、前記の哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端のペプチド配列の、特に約５〜約
３０アミノ酸からなる任意のフラグメント、 −又は、前記のＩＦＮ−γのＣ末端、もしくは前記フラグメントのペプチド配
列から誘導された任意のペプチドフラグメント、 を含む、ＩＦＮ−γレセプターの細胞内部分に結合することができるが、該レセ
プターの細胞外部分には結合することができないペプチド部分、 −及び、 ＊直鎖状もしくは分岐状の、飽和もしくは非飽和のＣ４からＣ２０炭化水素ベ
ースの盤鎖 ＊又は、適切な場合には、前記の炭化水素ベースの盤鎖と連結しているステロ
イド基 を含むものから有利に選択される一つ又は複数の親油性部分 （該親油性部分は、場合により、（このようにベクター・リポペプチド・ユニッ
トを形成するため）生理学的ｐＨにおいてイオン化される一つ又は複数の官能基
、並びに該炭化水素ベースの盤鎖及び／又は該ステロイド基と共有結合するため
の官能基を含む短いベクター・ペプチドと組み合わされていてもよい） を含むことを特徴とする任意のリポペプチドに関する。

【００２９】 前記及び下記の文中、「親油性部分」という表現は、上で定義されたペプチド
部分と結合した場合に、該分子の疎水性のために、得られたリポペプチドの受動
的な細胞内移動を可能にする、任意の非水溶性親油性分子を意味する。親油性部
分とペプチド部分との結合から生じるリポペプチドは、有利には水溶性である。

【００３０】 親油性部分の炭化水素ベースの盤鎖は、好ましくは、 −パルミチン酸 −オレイン酸 −リノール酸 −リノレン酸 のものから選択される。

【００３１】 また、好ましくは、（一つ又は複数の）親油性部分のステロイド基は、コレス
ト−５−エニル−３−オキシ酢酸（cholest-5-enyl-3-oxyacetic acid）又はコ レスト−５−エニル−３−オキシ炭酸（cholest-5-enyl-3-oxycarbonic acid） のようなコレステロール誘導体から選択される。

【００３２】 本発明は、より具体的には、（一つ又は複数の）親油性部分が、ペプチド部分
の一つ又は複数のアミノ酸と共有結合していることを特徴とする、任意の前記リ
ポペプチドに関する。（一つ又は複数の）親油性部分が、ペプチド部分のＮ末端
又はＣ末端部分に位置するリシンのαＮＨ₂もしくはεＮＨ₂官能基、又はシステ
インのチオール官能基、又は場合によりシンプルスペーサーがペプチドに追加さ
れていてもよい任意のアミノ官能基、アルコール官能基、もしくはチオール官能
基と共有結合している場合、有利である。

【００３３】 これに関して、本発明は、より具体的には、（一つ又は複数の）親油性部分が
、Ｎα−アセチル−リシンＮε（パルミトイル）基（Ａｃ−Ｋ（Ｐａｍ）とも略
記される）により示される、上で定義された任意のリポペプチドに関する。

【００３４】 本発明は、細胞膜を介したベクター化を確実にする、上で定義されたベクター
・リポペプチド・ユニットと、前記哺乳動物ＩＦＮ−γ配列のうちの一つから誘
導された機能ユニットとの間の共有結合的相互作用から生じるリポペプチドにも
関する。ベクター・リポペプチド・ユニットは、好ましくは、生理学的ｐＨにお
いてイオン化される官能基（Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、又はＧｌｕ）を含む短い
配列及び前記脂質（又は親油性）部分に相当する。ベクター・リポペプチド・ユ
ニットと、機能ユニットとの間の共有結合的相互作用は、アミド結合、又はチオ
ール（チオエーテル、チオエステル、もしくはジスルフィド）官能基、もしくは
弱塩基を有するアルデヒド官能基（チアゾリシン、オキシム、ヒドラゾン）の反
応性のため得られる単純な化学的ライゲーションから生じる非ペプチド結合であ
りうる。当業者にとって慣習的なそのようなライゲーションの例は、Tam and Sp
etzler, 1995による概説に記載されている。

【００３５】 「適切な場合には、末端から３から２０アミノ酸が抑制されている、哺乳動物
インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）のＣ末端の末端から約３０〜約５０の隣接
するアミノ酸からなるペプチド配列」という本発明のリポペプチドのペプチド部
分の前記の定義は、哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端の末端から約３０〜約５０の隣
接するアミノ酸からなる任意のペプチド配列、及び末端から３〜２０アミノ酸が
抑制されている、様々な型の哺乳動物ＩＦＮ−γに相当する、哺乳動物ＩＦＮ−
γフラグメントのＣ末端の末端から約３０〜約５０の隣接するアミノ酸からなる
任意のペプチド配列を意味する。

【００３６】 哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端の末端から約３０〜約５０の隣接するアミノ酸か
らなる前記ペプチド配列（以下、ＩＦＮ−γ Ｃ末端部分に相当する配列とも表 記される）、並びにこの配列から誘導された前記のフラグメント及び配列は、有
利には、ＸＫＲＹＲ（ここで、ＸはＲ、Ｇ、Ｉ、Ｆ、又はＫを表し、ＹはＫ又は
Ｒを表す）なる型の配列を含む。

【００３７】 また、有利には、ＩＦＮ−γ Ｃ末端部分に相当する該ペプチド配列、及びこ の配列から誘導された前記のフラグメント及び配列は、哺乳動物ＩＦＮ−γレセ
プターの細胞内部分を特異的に認識し、そして、これに関して、哺乳動物ＩＦＮ
−γの生物学的及び薬理学的特性のうちの少なくとも一つを有し、哺乳動物ＩＦ
Ｎ−γの活性の全部又は一部のアゴニストと呼ばれる。

【００３８】 例示のため、前記リポペプチド中のＩＦＮ−γ Ｃ末端部分に相当するペプチ ド配列、又は配列のフラグメント、又はこれらの配列もしくはフラグメントから
誘導された配列は、 −該レセプターのペプチド配列の２５２位及び２９１位に位置するアミノ酸によ
って区切られているヒトＩＦＮ−γレセプターの細胞内部分 −又は、人間以外の哺乳動物のＩＦＮ−γレセプターの任意の細胞内部分、特に
該レセプターのペプチド配列の２５３位及び２８７位に位置するアミノ酸によっ
て区切られているマウスＩＦＮ−γレセプターの細胞内部分 を特異的に認識することをさらに特徴とする。

【００３９】 前記のように、本発明の前記リポペプチドのペプチド部分は、ＩＦＮ−γを有
する哺乳動物ＩＦＮ−γレセプターの細胞外部分を認識しない。

【００４０】 これに関して、本発明のリポペプチドの該ペプチド部分は、哺乳動物ＩＦＮ−
γのＮ末端を含むとき、このＮ末端の最初の２０アミノ酸のうちの少なくとも一
つが天然又は非天然のアミノ酸により抑制又は置換されており、このように修飾
された該Ｎ末端が細胞外ＩＦＮ−γレセプターを認識し結合することができない
ようになっている。

【００４１】 本発明の前記リポペプチドのペプチド部分は、有利には、ＩＦＮ−γを有する
哺乳動物ＩＦＮ−γレセプターの細胞外部分の特異的認識に必要である、哺乳動
物ＩＦＮ−γのＮ末端を含まない。

【００４２】 本発明の前記リポペプチドのペプチド部分は、好ましくは、一方は哺乳動物Ｉ
ＦＮ−γのペプチド配列（特に、下記のＩＦＮ−γペプチド配列）の１位に位置
するアミノ酸、そしてもう一方は１４位に位置するアミノ酸によって区切られて
いる配列を含まないようになっている。

【００４３】 本発明は、より具体的には、ペプチド部分が以下のペプチド配列のうちの少な
くとも一つを含むことを特徴とする、上で定義された任意のリポペプチドに関す
る。 −９５位及び１３４位に位置するアミノ酸によって区切られている配列： ＊以下のヒトＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QDPYVKEAEN LKKYFNAGHS DVADNGTLFL GILKNWKEES DRKIMQSQIV SFYFKLFKNF KDDQSIQKSV ETIKEDMNVK FFNSNKKKRD DFEKLTNYSV TDLNVQRKAI HELIQVMAEL SPAAKTGKRK RSQMLFRGRR ASQ ＊以下のウシＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QGQFFREIEN LKEYFNASSP DVAKGGPLFS EILKNWKDES DKKIIQSQIV SFYFKLFENL KDNQVIQRSM DIIKQDMFQK FLNGSSEKLE DFKKLIQIPV DDLQIQRKAI NELIKVMNDL SPKSNLRKRK RSQNLFRGRR ASM ＊以下のサル・カリスリックス・ジャッカス（Callithrix jacchus）由来のＩＦ
Ｎ−γペプチド配列のもの： QDPYVKEAEN LKKYFNAGDS DVADNGTLFL DILRTWREEG DRKMQSQII SFYFKLFKNF KDNQSIQKSM ETIKEDMNVK FFNSNKRKQD DFERLTNYSV NDLNVQRKAI HELIQVMAEL SPAPKIGKRR RSQTLFRGRR ASQ ＊以下のサル・セルコセブス・トークアティス・アティス（Cercocebus torquat
is atys）由来のＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QDPYVKEAEN LKKYFNAGDP DVADNGTLFL DILRNWKEES DRKIMQSQIV SFYFKLFKSF KDDQRIQKSV ETIKEDINVK FFNSNKKKRD DFEKLTNYSV TDLNVQRKAV HELIQVMAEL SPAAKIGKRK RSQTFRGRRA SQ ＊以下のイヌＩＦＮ−γペプチド配列のもの： YCQAMFFKEI ENLKEYFNAS NPDVSDGGSL FVDILKKWRE ESDKTIIQSQ IVSFYLKLFD NFKDNQIIQR SMDTIKEDML GKFLNSSTSK REDFLKLIQI PVNDLQVQRK AINELIKVMN DLSPRSNLRK RKRSQNLFRG RRASK ＊以下のネコＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QAMFFKEIEE LKGYFNASNP DVADGGSLFV DILKNWKEES DKTIIQSQIV SFYLKMFENL KDDDQRIQRS MDTIKEDMLD KLLNTSSSKR DDFLKLIQIP VNDLQVQRKA INELFKVMND LSPRSNLRKR KRSQNLFRGR RASK ＊以下のシカＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QGPFFKEIEN LKEYFNASNP DVAEGGPLFI EILKNWKEES DRKIIQSQIV SFYFKLFENE KDNQVIQRSV DIIKQDMFQK FLNGSSEKLE DFKKLIQISV DDMQIQRKAI NELIKVMNDL SPKSNLIKRK RSQNLFRGRR ASM ＊以下のニワトリＩＦＮ−γペプチド配列のもの： LNLVQLQDDI DKLKADFNSS HSDVADGGPI IVEKLKNWTE RNEKRIILSQ IVSMYLEMLE NTDKSKPHIK HISEELYTLK NNLPDGVKKV KDIMDLAKLP MNDLRIQRKA ANELFSILQK LVDPPSFKRK RSQSQRRCNC ＊以下のウマＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QAAFFKEIEN LKEYFNASNP DVGDGGPLFL DILKNWKEDS DKKIIQSQIV SFYFKLFENL KDNQVIQKSM DTIKEDLFVK FFNSSTSKLE DFQKLIQIPV NDLKVQRKAI SELIKVMNDL SPKANLRKRK RSQNPFRGRR ALQ ＊以下のマカークＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QDPYVKEAEN LKKYFNAGDP DVADNGTLFL DILRNWKEES DRKIMQSQIV SFYFKLFKNF KDDQRIQKSV ETIKEDINVK FFNSNKKKRD DFEKLTNYSV TDSNVQRKAV HELIQVMAEL SPAAKIGKRK RSQMFRGRRA SQ ＊以下のブタＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QAPFFKEITI LKDYFNASTS DVPNGGPLFL EILKNWKEES DKKIIQSQIV SFYFKFFEIF KDNQAIQRSM DVIKQDMFQR FLNGSSGKLN DFEKLIKIPV DNLQIQRKAI SELIKVMNDL SPRSNLRKRK RSQTMFQGQR ASK ＊以下のウサギＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QDTLTRETEH LKAYLKANTS DVANGGPLFL NILRNWKEES DNKIIQSQIV SFYFKLFDNL KDHEVIKKSM ESIKEDIFVK FFNSNLTKMD DFQNLTRISV DDRLVQRKAV SELSNVLNFL SPKSNLKKRK RSQTLFRGRR ASKY ＊以下のヒツジＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QGPFFKEIEN LKEYFNASNP DVAKGGPLFS EILKNWKEES DKKIIQSQIV SFYFKLFENL KDNQVIQRSM DIIKQDMFQK FLNGSSEKLE DFKRLIQIPV DDLQIQRKAI NELIKVMNDL SPKSNLRKRK RSQNLFRGRR ASM ＊以下のマーモットＩＦＮ−γペプチド配列のもの： QDTVNKEIED LKGYFNASNS NVSDGGSLFL DILDKWKEES DKKVIQSQVV SFYFKLFEHL KDNKNIQRSM DTIKGDLFAK FFNSSTNKLQ DFLKVSQVQV NDLKIQRKAV SELKKVMNDL LPHSTLRKRK RSQSSIRGRR ASK ＊以下のメリオネス・ウンギキュラツス（Meriones unguiculatus）のＩＦＮ− γペプチド配列のもの： QVPIIEEIEN LKRYFNSSNS AVGDSKDVVL HVLRNWQEDG DTKVIDVQIV SFYFKLFEAL KGNQAIEKSI NAIRADLIAN FFNNSEAKYD GFMSIMKIEV NDPQIQSKAI NELVKVMGHL SPRVTLRKRK RSRCCFGGGN RLNKNNPAST I ９５位及び１３３位又は１３２位に位置するアミノ酸によって区切られている配
列： ＊以下のマウスＩＦＮ−γペプチド配列のもの： HGTVIESLES LNNYFNSSGI DVEEKSLFLD IWRNWQKDGD MKLQSQIIS FYLRLFEVLK DNQAISNNIS VIESHLITTF FSNSKAKKDA FMSIAKFEVN NPQVQRQAFN ELIRVVHQLL PESSLRKRKR SRC ＊以下のラットＩＦＮ−γペプチド配列のもの： GTLIESLESL KNYFNSSSMD AMEGKSLLLD IWRNWQKDGN TKILESQIIS FYLRLFEVLK DNQAISNNlS VIESHLITNF FSNSKAKKDA FMSLAKFEVN NPQIQHKAVN ELIRVIHQLS PESSLRKRKR SRC −Ｎ末端側は上に表されたマウスＩＦＮ−γペプチド配列の１１３位から１２１
位のうちの一つに位置するアミノ酸、そしてＣ末端側は１３２位に位置するアミ
ノ酸によって区切られている配列

【００４４】 本発明は、Ｃ末端アミノ酸のＣＯＯＨ官能基が、生物のエキソペプチダーゼに
耐性の基、特にカルボキサミド基に置換されていることを特徴とする、上で定義
された任意のリポペプチドにも関する。

【００４５】 本発明は、より具体的には、ペプチド配列が −上に表されたヒトＩＦＮ−γペプチド配列の９５位及び１３４位に位置するア
ミノ酸によって区切られている配列 −又は、上に表されたマウスＩＦＮ−γペプチド配列の９５位、及び１３３位も
しくは１３２位に位置するアミノ酸によって区切られている配列 −又は、Ｎ末端側は上に表されたマウスＩＦＮ−γペプチド配列の１１３位から
１２１位のうちの一つに位置するアミノ酸、そしてＣ末端側は１３２位に位置す
るアミノ酸を境界とし、より具体的には、該ＩＦＮ−γペプチド配列の１１３位
及び１３２位に位置するアミノ酸によって区切られている配列 （ここで、前記ペプチド配列のＣ末端アミノ酸のＣＯＯＨ基は、適切な場合には
、生物のエキソペプチダーゼに耐性の基、特にカルボキサミド基で置換されてい
る） である、上で定義された任意のリポペプチドに関する。

【００４６】 本（空白（lacuna））に関連して好ましいリポペプチドは、 −以下の式に相当する、上に表されたヒトＩＦＮ−γペプチド配列の９５位及び
１３４位に位置するアミノ酸によって区切られている配列を有するリポペプチド
： Ａｃ−Ｋ（Ｐａｍ）ＬＴＮＹＳＶＴＤＬＮＶＱＲＫＡＩＨＥＬＩＱＶＭＡＥＬＳ
ＰＡＡＫＴＧＫＲＫＲＳＱＭ−ＮＨ₂ −以下の式に相当する、上に表されたマウスＩＦＮ−γペプチド配列の９５位及
び１３２位に位置するアミノ酸によって区切られている配列を有するリポペプチ
ド： Ａｃ−Ｋ（Ｐａｍ）ＡＫＦＥＶＮＮＰＱＶＱＲＱＡＦＮＥＬＩＲＶＶＨＱＬＬＰ
ＥＳＳＬＲＫＲＫＲＳＲ−ＮＨ₂ −以下の式に相当する、上に表されたマウスＩＦＮ−γペプチド配列の１１３位
及び１３２位に位置するアミノ酸によって区切られている配列を有するリポペプ
チド： Ａｃ−Ｋ（Ｐａｍ）ＩＲＶＶＨＱＬＬＰＥＳＳＬＲＫＲＫＲＳＲ−ＮＨ₂ である。

【００４７】 本発明のリポペプチドに関連して、「ＩＦＮ−γのＣ末端の前記ペプチド配列
から誘導されたペプチド配列、又はＩＦＮ−γのＣ末端の前記ペプチド配列のフ
ラグメント」という表現は、 −前記配列もしくはフラグメントの一つもしくは複数のアミノ酸の置換及び／も
しくは抑制及び／もしくは付加、並びに／又は −前記配列もしくはフラグメントのペプチド鎖の少なくとも一つのペプチド結合
−ＣＯ−ＮＨ−の修飾、特にレトロ（retro）型もしくはレトロ・インバーソ（r
etoro-inverso）型の結合の導入、並びに／又は −前記配列もしくはフラグメントのペプチド鎖の少なくとも一つのアミノ酸の非
タンパク質生成アミノ酸への置換 により誘導された任意の配列を意味する（ここで、該誘導された配列は、哺乳動
物ＩＦＮ−γレセプターの細胞内部分を特異的に認識し、これに関して、哺乳動
物ＩＦＮ−γの生物学的又は薬理学的特性のうちの少なくとも一つ、特に上に挙
げられた特性のうちの少なくとも一つを有している）。

【００４８】 「レトロ・インバーソ結合の導入により誘導された配列」という表現は、残基
のうちの少なくとも一つが一方では−ＮＨ−ＣＯ−結合を介して少なくとも一つ
の隣接残基と結合しており、もう一方では親ペプチド（即ち、前記の配列又はフ
ラグメント）のペプチド鎖内のこの同一アミノアシル残基と反対のキラリティー
を有しているペプチド鎖からなる前記の配列又はフラグメントの任意のペプチド
・アナログを意味するものと理解されるべきである。

【００４９】 「レトロ結合の導入により誘導された配列」という表現は、残基のうちの少な
くとも一つが−ＮＨ−ＣＯ−結合を介して少なくとも一つの隣接残基と結合して
おり、少なくとも一つの−ＮＨ−ＣＯ−結合に関与している全てのアミノアシル
残基のキラリティーが親ペプチドのペプチド鎖の対応する残基と比較して保存さ
れているペプチド鎖からなる前記の配列又はフラグメントの任意のペプチド・ア
ナログを意味するものと理解されるべきである。

【００５０】 −ＣＯ−ＮＨ−結合及び−ＮＨ−ＣＯ−結合が、前記の文中、アミノ末端（Ｎ
末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）へと進む親ペプチド鎖の方向で考慮される
べきであることは言うまでもない。前記の文中、「タンパク質生成アミノ酸」と
いう表現は、天然のタンパク質又はペプチドの構成の一部を形成する任意のアミ
ノ酸を意味する。

【００５１】 前述の定義と反対に、「非タンパク質生成アミノ酸」という表現は、天然のタ
ンパク質又はペプチドの構成の一部を形成しない任意のアミノ酸を意味する。「
非タンパク質生成アミノ酸」という表現は、より具体的には、天然のペプチド鎖
の−ＣＯ−と−ＮＨ−との間に位置する側鎖Ｒを保有する炭素、即ち−ＣＨＲ−
が、天然のタンパク質又はペプチドの構成の一部を形成しないユニットに交換さ
れている任意のアミノ酸を意味する。

【００５２】 本発明は、より具体的には、親ペプチドのペプチド鎖の−ＣＯ−ＮＨ−ペプチ
ド結合のうちの少なくとも一つが、特に −ＣＨ₂−ＮＨ− （メチレンアミノ）； −ＣＨ₂−ＣＨ₂− （カルバ）； −ＣＯ−ＣＨ₂− （ケトメチレン）； −ＣＨ₂−０− （メチレンオキシ）； −ＣＨＯＨ−ＣＨ₂− （ヒドロキシエチレン）； −ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ− （ジヒドロキシエチレン）； −ＣＨ＝ＣＨ− （Ｅ又はＺオレフィン）； −ＣＨＣＮ−ＮＨ− （シアノメチレンアミノ）； −Ｓ−ＣＨ₂− （チオメチレン）； −ＣＨ₂−Ｓ− （メチレンチオ）； −ＣＳ−ＮＨ− （チオアミド）； −Ｐ０₂−ＮＨ− （ホスホンアミド）； −ＣＨＯＨ− （ヒドロキシメチレン）； −ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ− （尿素）；

【化１】 −ＣＨ₂−ＣＯ−ＮＨ− （ホモロゲーション）； −ＣＨＯＨ−ＣＨ₂−ＮＨ− （ヒドロキシエチレンアミノ）； −ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ− （ヒドラジノ）； から選択される−ＣＯ−ＮＨ−結合以外の結合に交換されていることを特徴とす
る、前記の誘導された配列に関する。

【００５３】 前記リポペプチド中のＩＦＮ−γ Ｃ末端部分に相当するペプチド配列又はこ れらの配列のフラグメント又は上で定義されたこれらの配列もしくフラグメント
から誘導された配列は、有利には、ＩＦＮ−γアゴニストであり、哺乳動物ＩＦ
Ｎ−γ型の少なくとも一つの生物学的活性、即ち、以下の特性、 １）生物学的特性に関して −イムノアジュバント効果、 −抗ウイルス効果、 −特に −細胞性サイトカイン産生の刺激、 −特に −クラスＩ ＨＬＡ遺伝子、及びβ２−ミクログロブリン遺伝子の発現の増 加（これは、ＣＤ８＋リンパ球への外来抗原の提示の可能性を増加させる）によ
る −クラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子及び不変鎖の発現の増加もしくは誘導（これは 、ＣＤ４＋リンパ球への外来抗原の提示の可能性を増加させる）による 抗原の提示に対する作用、 −様々な細胞（マクロファージ、内皮細胞）の表面におけるＶＣＡＭ−１タン
パク質の合成及び発現を刺激し、従って、免疫学的な細胞協調作用の現象を促進
することによる、細胞付着現象に対する作用、 −補体タンパク質の発現の増加、 −Ｂリンパ球に対する成熟化効果、 −細胞障害性Ｔリンパ球に対する成熟化効果、 −ＮＫ細胞に対する活性化効果（細胞障害活性の増加）及びＬＡＫ細胞（リン
ホカイン活性化キラー細胞）の生成に対する誘導効果、 −特に −ＴＮＦαの合成の増加、 −酸素化（oxygenated）フリーラジカルの産生の刺激、 −一酸化窒素（ＮＯ^-）の産生、 −ピコリン酸のようなトリプトファン由来メディエーターの産生の誘導、 −リソソーム酵素の放出の増加、 による、単球株及び巨核球株の細胞障害可能性を増加させる効果、 −炎症反応に対する作用、 による免疫調節効果、 −線維素生成に対する効果（抗線維素生成）並びに線溶系及び止血系に対する効
果、 −抗感染効果、 ２）薬理学的特性に関して −慢性肉芽腫症に罹患した患者における感染性合併症の発生を減少させる効果、 −感染性免疫療法における効果、特に −抗菌効果、 −抗真菌効果、 −特にリーシュマニア症、トキソプラスマ症、及びマラリアの症例における抗
寄生虫効果、 −駆虫効果、 −ウイルス感染に対する効果、 −アトピー及びアレルギー性症状、特に肺過好酸球増加性アレルギー又は皮膚ア
レルギー（皮膚炎）に対する効果、 −自己免疫疾患に対する効果、 −特に腎臓癌、皮膚Ｔリンパ種、慢性骨髄性白血病、卵巣癌、及び中皮腫の症例
における抗癌効果、 のうちの少なくとも一つを有する。

【００５４】 本発明は、上で定義された一つ又は複数の異なるリポペプチドのミセル又は微
小凝集物にも関する。

【００５５】 該ミセル又は微小凝集物は、有利には、約１μM未満の大きさである。

【００５６】 本発明に係るミセル又は微小凝集物は、好ましくは、該リポペプチドをおよそ
８０％濃縮酢酸溶液、又は溶液中のリポペプチドの分子分散を確実にすることが
できる任意の溶媒中に分散させることにより得られるものである。

【００５７】 本発明は、適切な場合には前記のようなミセルの形態の、そして生理学的に許
容される薬学的製剤に関連した媒体と組み合わされた一つ又は複数のリポペプチ
ドを含むことを特徴とする、任意の薬学的組成物にも関する。

【００５８】 本発明は、より具体的には、ＩＦＮ−γが作用すると考えられる症状、特にＩ
ＦＮ−γの薬理学的特性に関連して上に挙げられた症状の治療及び適切な場合に
は予防を目的とする医薬品の調製のための、適切な場合には前記のようなミセル
の形態のリポペプチドの使用に関する。

【００５９】 適切な場合には前記のようなミセルの形態のリポペプチドは、有利には、ＡＩ
ＤＳ、パピローマウイルスにより引き起こされる状態（特にある種の子宮癌）、
Ｂ型肝炎又は非Ａ非Ｂ型肝炎を含む様々な形態の肝炎のようなウイルス性症状を
処置することを目的とする抗ウイルス医薬品の調製のため用いられる。

【００６０】 また、有利には、適切な場合にはミセルの形態の前記リポペプチドは、結核も
しくはニューモシスティス症のような細菌性もしくはウイルス性肺感染を治療す
るため、又はＯＲＬ域（より具体的には頬咽頭域）の細菌もしくはウイルス感染
を治療するための医薬品の調製のため用いられる。

【００６１】 前記薬学的組成物は、好ましくは、非経口、筋肉内、皮下、もしくは皮内注射
の部位周辺の、又は接触表面（肺内エアロゾルもしくは噴霧剤、舌下、経粘膜、
もしくは経皮経路）からの微小拡散域において高濃度の活性成分が得られること
を可能にする薬学的形態、又は局所適用されうる形態、特にクリームもしくは軟
膏の形態である。

【００６２】 ２〜３μgの本発明に係るリポペプチドが１ＩＵのＩＦＮ−γに相当するとす れば、ＩＦＮ−γによる治療のような治療のための前記薬学的組成物の好ましい
用量は、組換えＩＦＮ−γの場合に用いられる用量と関係しているべきである。
例えば、転移性腎臓癌に罹患した患者に対して実施された臨床試験に関連して処
方された組換えＩＦＮ−γの用量は、１ヶ月間、隔週で、５日間１日当たり１mg
／m²静注である（０．２ng／ｌＩＵ付近に設定されたバッチの比活性に応じて１
用量当たりおよそ４〜５×１０⁶ＩＵ（Mani S., Poo W.J., Am. J. Clin. Oncol
., 1996, 19:2, 149-153頁））。

【００６３】 下記のようなワクチンと組み合わされたイムノアジュバントとして、本発明に
係るリポペプチドの用量は、有利には、人間における又は獣医学的適用における
０．５〜３mLの注射量のため、約１２５〜約５００μg／mL（平均約２５０μg／
mL）である。

【００６４】 従って、免疫刺激特性、抗癌特性、又は抗感染特性のため単独で用いられるＩ
ＦＮ−γアナログとして、本発明のリポペプチドの好ましい用量は、約２５〜５
０μMの濃度の溶液の吸入により、又は鼻腔内経路を介して投与される場合、人 間において１日当たり１用量当たり約２５０〜約５００μg／mL、即ち、約１． ５〜３mgである（原則として、６ヶ月間、週３回の割合で）。

【００６５】 本発明は、適切な場合には前記のようなミセルの形態であり、 −細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬとも呼ばれる）により特異的に認識され、細胞
障害性Ｔリンパ球を活性化することができる一つもしくは複数のエピトープ（Ｃ
ＴＬエピトープもしくはＣＤ８⁺エピトープとも呼ばれる）を含む、一つもしく は複数のペプチドもしくはリポペプチド、及び／又は −ヘルパーＴリンパ球（ＨＴＬとも呼ばれる）により特異的に認識され、ヘルパ
ーＴリンパ球を活性化することができる一つもしくは複数のエピトープ（ＨＴＬ
エピトープもしくはＣＤ４⁺エピトープとも呼ばれる）を含む、一つもしくは複 数のペプチドもしくはリポペプチド、及び／又は −Ｂエピトープに対する抗体により特異的に認識される一つもしくは複数のＢエ
ピトープを含む、一つもしくは複数のペプチドもしくはリポペプチド と組み合わされた一つ又は複数のリポペプチドを含むことを特徴とする任意の組
成物にも関する。

【００６６】 本発明は、より具体的には、ＣＤ８⁺エピトープが −腫瘍細胞に特徴的なエピトープ、例えば ＊慢性骨髄性白血病のエピトープ（特に、表１に挙げられているもの）、 ＊タンパク質ｐ５３のエピトープ（特に、表２に挙げられているもの）、 ＊黒色腫エピトープ（特に、表３に挙げられているヒト黒色腫エピトープ）、
より具体的には、ヒト黒色腫ｍｅｌａｎ−Ａ／ｍａｒｔ−１抗原のエピトープ、 ＊変異から生じた腫瘍のエピトープ（特に、表４に挙げられているもの）、 ＊表５に挙げられているもののような様々な腫瘍に共通の抗原、 −ウイルス・タンパク質に特徴的なエピトープ、例えば ＊Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質のエピトープ、 ＊ＡＩＤＳウイルス（ＨＩＶ）タンパク質のエピトープ（特に、表６に挙げら
れているもの）、 ＊パピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、特にＨＰＶ Ｅ₆タンパク質又は
Ｅ₇タンパク質のエピトープ（特に、表７に挙げられているもの）、 であることを特徴とする、任意の前記組成物に関する。

【００６７】 本発明は、より具体的には、ＣＤ４⁺エピトープとして、破傷風毒素ペプチド ＴＴ（８３０〜８４６）（Panina-Bordignon et al., 1989）、インフルエンザ ・ヘマグルチニンＨＡ（３０７〜３１９）（Krieger et al., 1991）、ＰＡＤＲ
Ｅ（Alexander et al., 1994）、ＨＩＶ−１ ４５〜６９ＮＥＦペプチド（Estaq
uier et al., 1992）、マラリアの原因物質であるプラスモジウム・ファルシパ ルム（Plasmodium falciparum）のＬＳＡ３ペプチド（Ben Mohamed et al., 199
7）のような複数のエピトープを含むことを特徴とする、任意の前記組成物に関 する。

【００６８】 本発明は、より具体的には、Ｂエピトープとして、ハウスダスト・アレルゲン
のようなアレルギー反応に関連したタンパク質、特にデルマトファゴイデス・テ
ロニシナス（Dermatophagoides pteronyssinus）（ペプチド５２〜７１、１１７
〜１３３、１７６〜１８７、もしくは１８８〜１９９）又はデルマトファゴイデ
ス・ファリナ（Dermatophagoides farinae）のエピトープのうちの一つを含むこ
とを特徴とする、任意の前記組成物に関する。

【００６９】 本発明は、該リポペプチドの親油性部分、及び／又は哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ
末端の前記ペプチド配列、又はそれらから誘導されたフラグメントもしくは配列
に共有結合した、一つ又は複数の前記ＣＤ８⁺及び／又はＣＤ４⁺及び／又はＢエ
ピトープを含む、上で定義された任意のリポペプチドにも関する。

【００７０】 前記リポペプチドは、好ましくは、それらのペプチド部分が、哺乳動物ＩＦＮ
−γのＣ末端の前記ペプチド配列、又はそれらから誘導されたフラグメントもし
くは配列に（直接的に、又は約２〜５アミノ酸の配列を介して）共有結合した一
つ又は複数の前記ＣＤ８⁺及び／又はＣＤ４⁺及び／又はＢエピトープを含むもの
である。該エピトープとＣ末端の該ペプチド配列との間の結合は、好ましくは、
ペプチド結合、又は前記のような単純なライゲーションから生じた結合のうちの
任意のものである。

【００７１】 本発明は、上で定義された一つ又は複数の共有結合したＣＤ８⁺及び／又はＣ Ｄ４⁺及び／又はＢエピトープを含む、一つ又は複数の異なるリポペプチドのミ セル又は微小凝集物にも関する。

【００７２】 前記のように、該ミセル又は微小凝集物は、有利には、約１μm未満のサイズ であり、好ましくは、該リポペプチドをおよそ８０％濃縮酢酸溶液中に分散させ
ることにより得られる。

【００７３】 本発明は、 −適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数のＣＤ８⁺及び／もし くはＣＤ４⁺及び／もしくはＢエピトープと組み合わされた、上で定義された一 つもしくは複数のリポペプチドの組成物、並びに／又は −適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数の共有結合した前記Ｃ
Ｄ８⁺及び／もしくはＣＤ４⁺及び／もしくはＢエピトープを含む、上で定義され
た一つもしくは複数のリポペプチド、及び場合により、適切な場合にはミセルの
形態であり、生理学的に許容される薬学的製剤に関連した媒体と組み合わされた
ＩＦＮ−γのＣ末端の前記ペプチド配列のみを含む、上で定義された一つもしく
は複数のリポペプチド を含むことを特徴とする、任意の薬学的組成物又はワクチンにも関する。

【００７４】 エピトープを含む前記薬学的組成物は、非経口、筋肉内、皮下、もしくは皮内
注射の部位周辺の、又は接触表面（肺内エアロゾルもしくは噴霧剤、舌下、経粘
膜、もしくは経皮経路）からの微小拡散域において高濃度の活性成分が得られる
ことを可能にする薬学的形態、又は局所適用されうる形態、特にクリームもしく
は軟膏の形態である。

【００７５】 好ましい用量は、上で定義されたとおりである。

【００７６】 本発明の主題は、より具体的には、 より具体的には、抗原提示細胞の表面におけるクラスＩ ＭＨＣ分子と連結した 該ＣＤ８⁺エピトープ、及び／又はクラスＩＩ ＭＨＣ分子と連結した該ＣＤ４⁺ エピトープにより、それぞれ、ＣＴＬ及び／又はＨＴＬを活性化することにより
調節されうる症状の治療及び適切な場合には予防に関連して、該エピトープに対
応する抗原に対する特異的免疫応答を誘導するための医薬品又はワクチンの調製
のため、並びに／又はＢエピトープに対する、より具体的にはアレルゲンに対す
る抗体による免疫応答を再修正するための医薬品又はワクチンの調製のための −適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数のＣＤ８⁺及び／もし くはＣＤ４⁺及び／もしくはＢエピトープと組み合わされた、上で定義された一 つもしくは複数のリポペプチドの組成物、又は −適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数の共有結合したＣＤ８ ⁺ 及び／もしくはＣＤ４⁺及び／もしくはＢエピトープを含む、上で定義された一
つもしくは複数のリポペプチド の使用である。

【００７７】 本発明は、より具体的には、 −適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数のＣＤ８⁺エピトープ と組み合わされた一つもしくは複数のリポペプチドの前記組成物 −又は、適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数の共有結合した
ＣＤ８⁺エピトープを含む、上で定義された一つもしくは複数のリポペプチド の前記使用に関する（ここで、エピトープは、 ＊慢性骨髄性白血病もしくは黒色腫のような腫瘍症状の治療を目的とする抗腫瘍
医薬品の調製のための前記腫瘍細胞、又は ＊ＡＩＤＳ、パピローマウイルスにより引き起こされる状態（特にある種の子宮
癌）、Ｂ型肝炎もしくは様々な非Ａ非Ｂ型肝炎を含む様々な形態の肝炎のような
ウイルス性症状の予防及び適切な場合には治療を目的とする医薬品もしくはワク
チンの調製のための前記ウイルス・タンパク質 に特徴的なエピトープである）。

【００７８】 本発明は、より具体的には、 特にウイルス性又は寄生虫性症状に関連して、他の任意の抗原に対する免疫応答
を強化するための医薬品又はワクチンの調製のための、 −適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数のＣＤ４⁺エピトープ と組み合わされた一つもしくは複数のリポペプチドの前記組成物、 −又は、適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数の共有結合した
ＣＤ４⁺エピトープを含む、上で定義された一つもしくは複数のリポペプチド の前記使用に関する（ここで、該ＣＤ４⁺エピトープは、未選択の集団における 他の任意の抗原に対する免疫応答を強化することができる多重特異的エピトープ
であり、特に前記の破傷風毒素ＴＴ（８３０〜８４６）、インフルエンザ・ヘマ
グルチニンＨＡ（３０７〜３１９）、ＰＡＤＲＥ、ＨＩＶ−１ ４５−６９ＮＥ Ｆペプチド、プラスモジウム・ファルシパルムのＬＳＡ３ペプチドに特徴的なエ
ピトープである）。

【００７９】 本発明は、より具体的には、 アレルギー性喘息のようなアレルギー性症状の予防及び適切な場合には治療を目
的とする医薬品又はワクチンの調製のための、 −適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数のＢエピトープと組み
合わされた一つもしくは複数のリポペプチドの前記組成物、 −又は、適切な場合にはミセルの形態であり、一つもしくは複数の共有結合した
Ｂエピトープを含む、上で定義された一つもしくは複数のリポペプチド の前記使用に関する（ここで、エピトープは、ハウスダストのアレルゲンに対応
するＢエピトープのような、アレルギー反応に関連したタンパク質、特にデルマ
トファゴイデス・テロニナヌス（ペプチド５２〜７１、１１７〜１３３、１７６
〜１８７、もしくは１８８〜１９９）又はデルマトファゴイデス・ファリナのペ
プチドに特徴的なエピトープである）。

【００８０】 本発明は、健康であるか又は治療を必要とするヒト又は動物から細胞を採取す
る工程、その後本発明に係るリポペプチド又はリポペプチド組成物と共にインキ
ュベートすることにより該細胞を治療する工程、及びこのようにして治療された
細胞を採取された患者又はそのような治療を必要とする任意の他の患者に投与す
る工程を含む、ヒト又は動物の生体の細胞のin vitro（又はex vivo）治療のた めの方法の実施に関連した、前記の任意のリポペプチド又は任意のリポペプチド
組成物の使用にも関する。

【００８１】 本発明は、特に −これらの細胞に対する他の探究を実施する前に、それらを活性化するため、本
発明に係るリポペプチドを細胞に添加することにより、ＩＦＮ−γの細胞活性化
効果を再生するための −研究中のワクチン成分の免疫応答を試験するためのイムノアジュバントとして
の −イムノモジュレータとして、即ち免疫応答を偏向させることができる能力のた
めの 実験試薬としての、適切な場合にはミセルの形態である、前記リポペプチドの使
用にも関する。

【００８２】 本発明は、Ｎ末端側は上に表されたマウスＩＦＮ−γペプチド配列の１１３位
〜１２１位のうちの一つに位置するアミノ酸、そしてＣ末端側は１３２位に位置
するアミノ酸によって区切られている配列を有する、任意のペプチドにも関する
。

【００８３】 これに関して、本発明は、より具体的には、以下の配列番号１ ＩＲＶＶＨＱＬＬＰＥＳＳＬＲＫＲＫＲＳＲ の配列に相当する、マウスＩＦＮ−γペプチド配列の１１３位及び１３２位に位
置するアミノ酸によって区切られているペプチドに関する。

【００８４】 本発明は、Ｃ末端アミノ酸のＣＯＯＨ基が、生物のエキソペプチダーゼに耐性
の基、特にカルボキサミド基に置換されていることを特徴とする、任意の前記リ
ポペプチドにも関する。

【００８５】 本発明に関連して用いられる前記ペプチド配列は、有利には、特に以下の実験
の項に記載される固相ペプチド合成の慣習的な手法に従い、化学的に合成される
。

【００８６】 変法として、特に該ペプチド配列をコードするＤＮＡ配列を含むベクターで適
当な宿主細胞を形質転換することにより、遺伝子組み換えを介して、前記ペプチ
ド配列を得ることができる。

【００８７】 本発明に係るポリペプチドの調製、及びそれらの生物学的特性の研究の、以下
の詳細な説明の助けを借りて、本発明をさらに例示する。

【００８８】 Ａ） ＭｕＬペプチドの研究 Ｉ．本発明に従ったＭｕＬポリペプチドのペプチド合成 Ｍｕペプチドとも呼ばれ、マウスＩＦＮ−γペプチド配列の位置９５及び１３
２にあるアミノ酸を境界とする配列に対応する以下のペプチドを合成した。 AKFEVNNPQVQRQAFNELIRVVHQLLPESSLRKRKRSR

【００８９】 Ｍｕペプチドに対して以下の修飾が実施された。 − エキソペプチダーゼとの関係における安定性を強化するべくＣ末端にカルボ
キサミド端を導入した。 − ペプチドのＮ末端は、細胞活性とは独立して、膜を越えてペプチドが浸入で
きるようにするためＮα−アセチル−リシンＮε（パルミトイル）基で修飾され
た。 かくして修飾されたＭｕペプチドは、ＭｕＬと記され、下記式： Ac-K(Pam)AKFEVNNPQVQRQAFNELIRVVHQLLPESSLRKRKRSR- NH₂ （Ａｃ−Ｋ（Ｐａｍ）＝Ｎα−アセチル−リシン Ｎα（パルミトイル） で表わされる。

【００９０】 もとのペプチドとのあらゆる配列上の関係を避けるためにアミノ酸を配列した
ＭｕＬリポペプチドに対応する、「スクランブルされた」とも呼ばれる対照リポ
ペプチドが合成された。この対照リポペプチドは、 PSRENQNAVKIQKLSVVLRREQKHRVERLAFRNQSLPF という式のＭｕＳペプチドから得られ、ＭｕＳＬ Ａｃ−Ｋ（Ｐａｍ）と記さ れた；これは、下記式： Ac-K(Pam)PSRENQNAVKIQKLSVVLRREQKHRVERLAFRNQSLPF- NH₂ に対応する。

【００９１】 下記のペプチドの非脂質類似体も同様に、比較研究の実施を目的として合成さ
れた。 Mu peptide : Ac-AKFEVNNPQVQRQAFNELIRVVHQLLPESSLRKRKRSR- NH₂ MuS peptide : AC-PSRENQNAVKIQKLSVVLRREQKHRVERLAFRNQSLPF- NH₂

【００９２】 ペプチド合成：ペプチドは、ＡＢＩ４３０Ａ ペプチド合成装置（Foster City
, USA）を用いて、in situ中和プロトコール及びＢｏＣ−ベンジル方法（Merrif
ield, R. B., 1963; Merrifield, R. B., 1986）を使用してＭＢＨＡ樹脂（０. ６３mmol/g, Applied Biosystems, Foster City, USA）上で合成された。保護さ
れたアミノ酸は、プロペプチド（Vert-le-Petit,フランス）から得られる。側鎖
は、以下のように保護される。：Ａrg（Ｔos）、Ｔhr（Ｂzl)、Ａsp（ＯｃＨex ）、Ｇlu（ＯｃＨex)、Ｇln（Ｔrt）、Ａsn（Ｔrt）、Ｌys（２−ＣｌＺ）、Ｈi
s（Ｂom)。ＣＨ₂Ｃｌ₂中の１０％の酢酸無水物及び５％のＤＩＥＡを用いて、Ｎ
末端基の各再カップリングの後に系統的にアセチル化を実施した。

【００９３】 リポペプチドを得るため、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（France B
iochem, Meudon、フランス）を介してＮ末端リシンを導入した。合成の終りで、
ＤＭＦ中で２０％のピペリジンを用いてＦｍｏｃ基を除去した。リポペプチドは
、ペプチジル樹脂上でのＮ末端Ｌｙｓのεアミノ基の選択的アシル化の後に得ら
れた（３０分間ＤＭＦ中の、パルミチン酸／ＨＢＴＵ／ＤＩＥＡ：４当量／４当
量／１２当量、×２）。リポペプチドを樹脂から切断し（０℃で１時間３０分、
乾燥樹脂／ＨＦ／ｐ−クレゾール／チオクレゾール：１ｇ／１０mL／０.７５ｇ ／０.２５ｇ）凍結乾燥させた。Ｃ１８のヌクレオシル（Nucleosil）カラム（１
２.５mm×５００mm、溶剤Ａ：０.０５％のＴＦＡを含有する水；溶剤Ｂ：ＭｃＣ
Ｎ／Ｈ₂Ｏ；４／０.０５％のＴＦＡを含有するもの）で数回のＲＰ−ＨＰＬＣク
ロマトグラフィによって精製を実施した。均質性は、Ｃ３ Zorbax（４.６×２５
０mm）上のＲＰ−ＨＰＬＣによって確認された。０.２５mmolのＭＢＨＡ樹脂を 用いて、純度が９５％を上回る１４０mg（１０％の累積収量）のリポペプチドが
得られた。同一性は、全ての酸加水分解後のアミノ酸組成を決定し、ＴＯＦ−Ｐ
ＤＭＳにより分子質量を決定することによって確認された（Bio-Ion 20 Plasma
Desorption Mass Spectrometer）：〔ＭＨ⁺〕計算値：４９８０．９；実際値： ４９８２．７。

【００９４】 II−生物学的結果の要約 以下で言及するテストは全て、使用培地に固有の成分に起因する可能性ある分
解からペプチド構築物を保護することは試みずに、最適な細胞培養条件下にある
ために任意のプロテアーゼ阻害物質を導入するか又はウシ胎児血清を除去するこ
となく完全培地を使用することを共通点として有している。

【００９５】 １−クラスIIのＭＨＣ分子の誘発： 原理：上述のペプチドを用いて細胞系統（Ｐ３８８Ｄ１及びＷＥＨＩ３）に対
するクラスIIのＭＨＣ分子の誘発を検査すること。

【００９６】 手順：２４ウェルの培養平板（ＮＵＮＣ）内で１ウェルあたり細胞３×１０⁵ 個の割合で前日に細胞を培養した。翌日、１mLの培地中５０μMという最終濃度 で、さまざまなリポペプチド及びペプチド構築物で細胞を刺激する。５％のＣＯ ₂ で飽和させた雰囲気内で、３７℃で２４時間インキュベートした後、細胞を回 収し、３μgのビオチン化されたマウス抗−Ｉ−Ａdモノクローナル抗体（Pharmi
ngen, San Diego, USA）を用いて４℃で１時間インキュベートした。１：１００
の希釈度でＦＩＴＣストレプトアビジンを用いて３０分間顕示させた後（Sigma,
St. Louis, USA）、クラスIIの分子の発現をフローサイトメトリーにより決定 した。

【００９７】 結果：以下の表８は、さまざまなペプチド構成体を用いて２４時間刺激させた
さまざまな細胞系統上でフローサイトメトリーによって検出されたクラスIIのＭ
ＨＣの百分率を表わしている。

【００９８】

【表１】

【００９９】 Szenteにより考察されているように（Szente et al., 1994）、クラスIIのＭ ＨＣ分子の誘発は、２４時間の刺激の後に最大となり、一方組換え型ＩＦＮ−γ
を用いた場合、それは４８時間後にその最大に達し、このことはすなわち、合成
構築物が実際に、シグナル形質導入経路のより速い活性化を可能にすることにな
るということを示唆している。

【０１００】 さらに、リポペプチド構築物は、研究対象の濃度で非ベクター化ペプチドより
もさらに活性である。これは、リポペプチドにより優れた細胞質アドレッシング
を与えるグラフトされたパルミチン酸の存在に起因することである。これらの結
果に照らし合わせて、ex vivo研究でのＭｕＬの潜在能を評価できるようになる べく、動物（Ｂａｌｂ／ｃマウス）から採取した細胞に対する研究を拡大した。

【０１０１】 ２．動物（Ｂａｌｂ／ｃマウス）から採取した脾細胞及び腹膜細胞上でのクラ
スIIＭＨＣ分子及びＦｃ−γレセプター（Ｆｃ−γＲ）の発現の誘発 原理：（その後のin vivo研究の値を評価する目的で）動物から採取されin vi
troで処理された細胞上でのベクター化されたアゴニストの活性を評価すること 。

【０１０２】 手順：動物（Ｂａｌｂ／ｃマウス）から採取した脾細胞及び腹膜細胞を、１mL
の最終容量中５０μMの異なるペプチドで刺激させた２４ウェルの平板（ＮＵＮ Ｃ）内で１ウェルあたり１０⁶個の腹膜細胞及び２.５×１０⁶個の脾細胞の割合 で再培養した。２４時間の刺激の後、細胞を、前段落で記述した抗１Ａ^dモノク ローナル抗体を用いて、同じプロトコルに従って標識づけした。Ｆｃ−γＲを検
出するために、１μgのラット抗Ｆｃ−γＲモノクローナル抗体（Pharmingen, S
an Diego, USA）で細胞を標識付けした。次に、ラット抗ＩｇＧビオチン化ポリ クローナル抗体を用いて３０分間細胞をインキュベートした。

【０１０３】 その後、１：１００の希釈度でＦＩＴＣストレプトアビジン（Sigma, St. Lou
is, USA）を用いて、顕示を実施した。Ｆｃ−γＲの発現をフローサイトメトリ ーにより決定した。

【０１０４】 結果。動物から採取した脾細胞及び腹膜細胞についてフローサイトメトリーに
より検出されたＩＡ^d及びＦｃ−γＲの百分率は、以下の表９に表わされている 。

【０１０５】

【表２】

【０１０６】 ＩＡ^d及びＦｃ−γＲの著しい増加が、ＭｕＬで処理した細胞について観察さ れ、一方そのスクランブルされたリポペプチド対照は、著しい活性を全く有して
いない。その上、ＭｕＬの活性は、Ｍｕのものに比べ著しく高い：このことも又
、パルミチン酸を添加することによって付与される否定しがたい利点を確認して
いる。これらの結果は、観察された活性が、１つか２つの細胞型に制限されず、
動物から採取された細胞上でも観察され、この活性はそれらの細胞機能とは独立
したものであることを示している。

【０１０７】 ３．ＩＦＮ−γレセプターの関与の確認 原理：観察された生物活性が、ＩＦＮ−γレセプターの刺激と実際に関連性を
もっていたことを確認するため、我々は、マウス１２８（野生型：ＷＴ）から採
取された脾細胞及びＩＦＮ−γレセプターのアルファ鎖をもはや発現しないマウ
ス１２９（ＫＯマウス）から採取した細胞について並行して同じ実験をくり返し
行なった。

【０１０８】 手順：遵守した実験プロトコルは、上述の段落２で記述されたものと同一であ
る。

【０１０９】 結果。以下の表１０は、ＩＦＮ−γレセプターのα鎖についてＫＯ動物から採
取した細胞の２４時間の刺激後に得られた結果を示す。ＩＡ^d及びＦｃ−γＲの 発現をフローサイトメトリーによって分析した。

【０１１０】

【表３】

【０１１１】 ＭｕＬは野生型動物から採取した細胞に対しＩＡ^d及びＦｃ−γＲの発現を誘 発する能力をもつが、一方、ＩＦＮ−γレセプターに関して欠損している動物か
ら採取した細胞上では類似の活性が全く得られない、ということがわかった。こ
のことは、ＭｕＬの活性がサイトカインレセプターとの相互作用を介して作用す
るという証拠を提供し、かくして１つのアゴニストについて観察される生物活性
の特異性を確認した。その結果、ベクター化された構築物（又はリポペプチド）
は、このサイトカインについてのレセプターとの相互作用を介して、II ＭＨＣ 及びＦｃ−γＲの発現を誘発した。

【０１１２】 ４．ベクター化されたアゴニストの細胞内浸入の確認、ヒト細胞を刺激するＭ
ｕＬの潜在能の確認。 原理：マウスＩＦＮ−γは、細胞内で作用するのでないかぎり、ヒト細胞を刺
激する能力をもたず：ヒト細胞に対するＭｕＬリポペプチドにより誘発される生
物活性の実証は、結果として、ペプチドがＩＦＮ−γレセプターの内部部分と相
互作用することができたことを意味し、細胞質区画内へのリポペプチドの浸入の
間接的証拠となった。

【０１１３】 手順。９６ウェルの平板（ＮＵＮＣ）内の集密状態にあるヒト皮膚細胞の初代
培養を、２５及び５０μMの最終濃度（最終容量１００μl中）のさまざまなペプ
チド構築物又はヒトＩＦＮ−γを用いて２４時間刺激した。次に、ＶＣＡＭ−１
付着分子の発現を「細胞−ＥＬＩＳＡ」により評価した。これを行なうために、
細胞を、マウス抗ＶＣＡＭ−１モノクローナル抗体０.５μg（Pharmingen, Camb
ridge, USA）を用いて４℃で標識付けした。その後、細胞をパラホルムアルデヒ
ドで固定させペルオキシダーゼカップリングさせたヤギ抗−マウスＩｇ（Ｇ、Ａ
、及びＭ）ポリクローナル抗体を用いて標識づけした。ｏ−フェニレンジアミン
（ＯＰＤ）での顕示を実施し、平板を分光計で４９２nmで読みとった。

【０１１４】 結果：図１のヒストグラムは、さまざまな構築物で２４時間刺激されたヒトの
皮膚細胞上のＶＣＡＭ−１の発現を示している。結果は、ヒトＩＦＮ−γ（５０
０Ｕ／mL：７５ng／mL）の活性に１の値を与える発現指数として表わした。

【０１１５】 ベクター化されたアゴニスト（すなわち、ＭｕＬリポペプチド）で処置された
細胞に対するＶＣＡＭ−１の著しい誘発が見られた。この誘発は用量依存性であ
り、すなわち、特定的には、細胞が２５μMから５０μMのいずれのペプチドで処
置されたかに応じてＶＣＡＭの発現差が見られた。対照構築物（ＭｕＳＬ）の効
果は、高濃度でのリポペプチドの存在に起因するストレス状態に応答した、これ
らの細胞によるＴＮＦといったようなある種の炎症性サイトカインの産生によっ
て説明することができる。しかしながら、刺激の著しい差がＭｕＬとＭｕＳＬの
間に観察された。これらの結果は、観察されたＶＣＡＭ−１の誘発により確認さ
れるように、その生物活性を保存するベクター化されたアゴニストの細胞質アド
レッシングを立証した。その上、これらの結果は、ＭｕＬが異種系において細胞
を刺激する能力をもつことを立証しており、ヒト系において使用することに対し
てベクター化されたアゴニストが示す一定レベルの潜在能を確認した。

【０１１６】 ５．ヒト細胞系統上でのクラスIIのＭＨＣ分子（ＨＬＡ−ＤＲ）の誘発 原理：ヒト結腸ガン細胞（ＣＯＬＯ ２０５）を、さまざまなペプチド構築物 で刺激させた後ＨＬＡ−ＤＲを発現するそれらの能力について分析する。

【０１１７】 手順。細胞系統ＣＯＬＯ２０５を、２４ウェルの培養平版（ＮＵＮＣ）内でウ
ェルあたり３×１０³細胞の割合で培養した。翌日、１mLの培地中５０μMの最終
濃度でさまざまなペプチド構築物を用いて細胞を刺激し、これらを２４時間３７
℃でインキュベートした。その後、細胞を回収し、３μgの抗ＨＬＡ−ＤＲマウ スビオチン化モノクローナル抗体（クローンＬ２４３）を用いて標識づけした。
ＦＩＴＣストレプトアビジンでの顕示の後、細胞をフローサイトメトリーによっ
て分析した。

【０１１８】 結果。 表１１は、５０μMのＭｕＬ又はＭｕＳＬで処置された又は処置されていない ＣＯＬＯ２０５細胞上でフローサイトメトリーにより定量化されたＨＬＡ−ＤＲ
の発現百分率を示した。

【０１１９】

【表４】

【０１２０】 ＭｕＬで刺激されたＣＯＬＯ２０５細胞に対しＨＬＡ−ＤＲの発現の著しい誘
発が観察された。この結果は、異種系内のＭｕＬの免疫刺激潜在能を第２のモデ
ルについて確認した。対照のスクランブルされたリポペプチド及びSzente ５mu)
により記述されている基準ペプチドは、このモデルにおいていかなる活性ももた
ない。

【０１２１】 ６．ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）上でのＨＬＡ−ＤＲ、ＩＣＡＭ−１及びＶ
ＣＡＭ−１の誘発。 原理。ヒト細胞系統及びヒト初代培養について得られた結果に照らして、健康
なドナーから直接採取したヒト細胞についてＭｕＬの免疫刺激潜在能を評価した
。

【０１２２】 手順。血液バッグからＰＢＭＣを単離し、その後細胞を、最終容量１mL中の２
５μM及び５０μMのＭｕＳＬ又はＭｕＬで２４時間培養し刺激した。その後、細
胞を回収し、ＶＣＡＭ−１、ＩＣ−ＡＭ−１及びＨＬＡ−ＤＲの発現のため、す
でに前述したプロトコルに従って標識づけした。最後に、フローサイトメトリー
により細胞を分析した。

【０１２３】 結果：表１２は、ＭｕＳＬ及びＭｕＬで２４時間刺激させたＰＢＭＣ上で検出
されたＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１及びＨＬＡ−ＤＲの百分率を示した。

【０１２４】

【表５】

【０１２５】 ＰＢＭＣについて得られた結果は、ＭｕＬが、用量依存的な形で、患者から採
取したばかりの細胞上でのＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１及びＨＬＡ−ＤＲの発現
を誘発しうるということを立証した。リポペプチド自体に起因しうるものであり
うるＭｕＳＬの場合に見られた効果にもかかわらず、ＭｕＬで処置された細胞上
では、研究対象のさまざまな表面標識の著しい誘発が観察された。これらの結果
は、ＭｕＬを人体に使用することが可能であることを表わしている。

【０１２６】 ７．抗ウイルス効果 原理：ヒト及びマウス系の中で、ＭｕＬがさまざまな細胞型を刺激しさまざま
な表面標識の発現を誘発する能力を有していたことを立証した後、エフェクター
機能により反映される、細胞機能を活性化するＭｕＬの能力が評価された。これ
を行なうため、我々は、ＶＳＶウイルスに感染した細胞上での抗ウイルス状態の
誘発を研究した。抗ウイルス状態の誘発は、天然サイトカインにより活性化され
る全ての形質導入経路の完全な使用に対応する。このテストは組換え型ＩＦＮ−
γバッチの活性を検定するための標準的テストである。

【０１２７】 手順 Ｌ９２９細胞（マウス線維芽細胞）を、異なる濃度でマウスＩＦＮ−γ，Ｍｕ
ＳＬ又はＭｕＬを用いて６時間刺激した。２４時間インキュベーションの後、Ｖ
ＳＶを添加し、細胞を２４時間３７℃でインキュベートした。ウイルスで溶解さ
れた細胞を次に、洗浄によって除去し、生細胞を、生体染色液つまりクリスタル
紫の１％溶液を用いて染色した。クリスタル紫での染色を最終的に、５７０nmで
の分光光度計での読取りによって定量化した。

【０１２８】 結果。図２に表わされたヒストグラムは、ＭｕＳＬ又はＭｕＬペプチドで処置
されたＬ９２９線維芽細胞上で実施された抗ウイルステストの結果を示している
。生細胞をクリスタル紫で染色し、この染色を５７０nmの分光光度計上での読取
りにより定量化した。黒色の棒は、ＭｕＬを表わし、白色棒はＭｕＳＬを表わす
。図３に表わされたヒストグラムは、組換え型ＩＦＮ−γで処置されたＬ９２９
線維芽細胞に対し実施された抗ウイルステストの結果を示した。

【０１２９】 得られた結果は、ＭｕＬで処置した細胞におけるウイルス溶解に対する耐性を
示すが、一方ＭｕＳＬ対照構築物は、ウイルス溶解に対しいかなる効果ももたな
かった。これは、ペプチドのきわめて低い濃度において注目すべきものであり、
かくして、ＭｕＬが細胞上で抗ウイルス状態を誘発する能力をもつことを立証し
ている。さらに、このテストは、天然サイトカインを基準として我々の産物の生
物活性を検定することを可能にした。このテストは、ＩＦＮ−γの１ＩＵが５〜
６μMのペプチドすなわち２〜３μgの産物内に含有されていることを立証するこ
とを可能にした。この抗ウイルス状態の活性化がＩＦＮ−γの特徴であることを
考えると、かくしてここからＭｕＬがサイトカインの効果を再現する能力をもつ
という結論を下すことができる。

【０１３０】 III．結論 これらの研究は、パルミチン酸で修飾されたＩＦＮ−γのＣ末端ドメインから
誘導されたペプチドが、あらゆる面で、使用された細胞の型の如何に関わらずサ
イトカインの効果を擬態する能力を有することを立証している。かくして、その
作用はサイトカインレセプターとの相互作用を介して起こることが立証された。
さらに、異種系（ヒト細胞）内で、より特定的には患者から採取されたばかりの
細胞について得られた結果は、ＭｕＬ構成体の根本的な価値を確認している。特
定的に言うと、強力な免疫刺激物質であることが発見され、抗原提示を増強し、
マウス細胞及びヒト細胞の両方で細胞エフェクタ機能を活性化するこの構築物は
、免疫刺激作用及び免疫アジュバント効果の両方を介して、或る程度の治療的価
値をもち得る。

【０１３１】 Ｂ）ＩＦＮ−γのＭｕＬリポペプチドアゴニストの免疫調節潜在能 Ｉ．ＩＬ−４の活性に対する効果 ＩＦＮ−γの免疫調節潜在能は、同時に２型Ｔヘルパー（Ｔｈ２）応答の発生
を阻害しながら、１型Ｔヘルパー（Ｔｈ１）応答の確立を分極化させるその能力
にあるということが一般に記述されている。Ｔｈ２応答の分極化に対するこの阻
害作用は、主としてＩＬ−４の活性の阻害を介して発生する。かくして、ＩＦＮ
−γ合成アゴニストがマウスから採取された脾細胞に対するＩＬ−４の生物学的
効果を阻害する能力をもつことを示すため、我々は以下の細胞系を使用した。抗
ＣＤ４０抗体（表面細胞標識に対し方向づけられた抗体：ＣＤ４０）及びＩＬ−
４での脾細胞の刺激は、ＣＤ４０とＩＬ−４刺激の間の相乗作用に続くマウスＢ
細胞の増殖を誘発する（Hasbold et al. 1994）。

【０１３２】 １．手順 Ｂａｌｂ／ｃマウスから採取された脾細胞を培養し、抗−ＣＤ４０（１０μg ／mL)及びＩＬ−４（１０Ｕ／mL）を用いて刺激した。ＩＦＮ−γ（ＭｕＬ）の 合成アゴニスト又はその対照リポペプチド（ＭｕＳＬ）を１０μM添加する。２ ４時間刺激した後、ウェルあたり０.５μキュリーの割合で、トリチウム標識チ ミジンを添加する。１８時間のインキュベーションの後、細胞をろ過し、トリチ
ウム標識チミジンの取込みを評価した。この取込みは細胞増殖に比例している。

【０１３３】 ２．結果 抗−ＣＤ４０（Ａｃ ＣＤ４０）でのマウス脾細胞の刺激は、細胞の増殖を結 果としてもたらした（図４）。ＩＬ−４が添加された時点で、このサイトカイン
及び抗ＣＤ４０の細胞増殖に対する相乗作用が存在した。この増殖は、ＩＬ−４
に対照イソタイプ抗体（Ｉｓｏ）を加えたものが細胞増殖に対しいかなる効果も
もたないことから、抗ＣＤ４０及びＩＬ−４に特異的であった。

【０１３４】 １０μMのＭｕＬを添加すると、マウス脾細胞の増殖に対する抗ＣＤ４０及び ＩＬ−４の相乗効果が阻害される結果となる。ＭｕＬの存在下での増殖レベルは
、抗ＣＤ４０単独で刺激された細胞のものと同じであった。かくしてＣＤ４０＋
ＩＬ−４の相乗効果は完全に無くなった。対照リポペプチド（ＭｕＳＬ）の添加
は、ＣＤ４０／ＩＬ４依存性増殖に対し、いかなる効果ももたないことから、こ
れは、ＩＦＮ−γアゴニストに特異的なことであった。

【０１３５】 かくして、この実験は、ＩＦＮ−γの合成アゴニストがマウスＩＬ−４の生物
活性を阻害することを立証した。

【０１３６】 ＭｕＬでのＩＬ−４の活性の阻害がＩＦＮ−γアゴニスト活性に特異的なもの
であることを実証する目的で、かくしてＭｕＬのこの阻害性が、機能的ＩＦＮ−
γレセプターを発現する細胞に制限されることが立証された。

【０１３７】 かくして、ＩＦＮ−γレセプターのα鎖について欠損しているマウス（ＩＦＮ
−γＲ ＫＯ）から採取された細胞及び同じ遺伝的背景をもち、作動性ＩＦＮ− γレセプターを発現しているマウス（ＷＴマウス）について、類似の実験が再現
された。

【０１３８】 図５及び６の結果は、ＭｕＬでのＩＬ−４の生物活性の阻害が「ＩＦＮ−γ様
の」活性に特異的であること及びこの活性がサイトカインレセプターを介して起
こることを実証した。

【０１３９】 ＩＬ−４の生物学的効果を調節する合成アゴニストの能力は、ＭｕＬがin viv
oで、その病理における２型サイトカインの羅患率から見て特に肺過敏症のモデ ルにおいて使用できるものであることを示唆している。特定的には、一例として
は、組換え型ＩＦＮ−γの鼻腔内投与が肺アレルギー応答の発生を阻害すること
が、マウスにおいて示されている（Lack et al., 1996）。さらに、ＩＬ−４の 活性を阻害するＩＦＮ−γアゴニストの能力は、Ｔｈ１型の免疫応答の確立をin
vivoで容易にするはずであり、このことはすなわち、Ｔｈ１免疫応答の優先的 分極化を可能にする免疫調節物質として、in vivoでこの合成構成体を使用でき るということを示唆している。

【０１４０】 II．免疫グロブリンの合成に対する効果 免疫グロブリンの合成に対するＭｕＬの効果をin vitroで研究し、in vivoで の体液性応答の確立に対するアゴニストの効果を評価することができるようにす
るため、抗ＣＤ４０を伴うマウスの脾細胞をＭｕＬの存在又は不在下でのin vit
roで刺激した。

【０１４１】 １．手順 脾細胞を以下の条件下で刺激する： − 未刺激細胞（０） − １０μg／mLの抗−ＣＤ４０で刺激された細胞（ａＣＤ４０） − １０μg／mLの抗ＣＤ＋ＭｕＬ１０μMで刺激された細胞（ａＣＤ４０＋Ｍｕ
Ｌ） − 抗−ＣＤ４０＋ＭｕＳＬ１０μMで刺激された細胞（ａＣＤ４０＋ＭｕＳＬ ） − 抗−ＣＤ４０のイソタイプ対照で刺激された細胞（Ｉｓｏ） − 抗−ＣＤ４０のイソタイプ対照＋ＭｕＬ１０μMで刺激された細胞（Ｉｓｏ ＋ＭｕＬ） − 抗−ＣＤ４０のイソタイプ対照＋ＭｕＳＬ１０μMで刺激された細胞（Ｉｓ ｏ＋ＭｕＳＬ）。

【０１４２】 ２．結果 図７、８及び９に示された結果は、ＭｕＬが抗−ＣＤ４０で刺激された脾細胞
による全ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧＩ及びＩｇＧの産生を増殖させることを示している
。免疫クロブリンの産生に対するＭｕＬのこの効果は、それ自体免疫グロブリン
の合成を促進することになるサイトカインの産生を刺激すると考えられているア
ゴニストのヘルパー効果の結果であり得る。

【０１４３】 これらの結果は、ＭｕＬが、特にin vivoで、体液性応答の確立に役立ち、体 液性応答を誘発する或る種の抗原の注入に続いて免疫性を増強させることができ
るということを示している。

【０１４４】 III．Ex vivo及びin vivo研究 in vivoで抗体の産生を刺激するＩＦＮ−γのＭｕＬ合成アゴニストの能力を 研究するため、以下のプロトコルを選択した。

【０１４５】 １．手順 ニワトリオバルブミンから誘導されたＯｖａペプチド（３２３〜３３９）（Mu
rphy et al., 1990）を特異的に認識する、Ｔ細胞レセプターについて遺伝子導 入型であるマウスを以下の条件下で免疫化した。 １−Ｏｖａペプチド５０μgの皮下注射（Ｏｖａ）； ２−Ｏｖａペプチド５０μg＋ＭｕＬ５０μgの皮下注射（ＭｕＬ＋Ｏｖａ）、 ３−Ｏｖａペプチド５０μg＋ＭｕＳＬ５０μgの皮下注射（ＭｕＳＬ＋Ｏｖａ）
、 ４−免疫化２４時間前におけるＭｕＬ５０μgの皮下注射、とそれに続く翌日の Ｏｖａペプチド５０μgでの免疫化（Ｍｕ／２４Ｈそしてその後Ｏｖａ)。 ５−免疫化２４時間前におけるＭｕＳＬ５０μgの皮下注射とそれに続く翌日の Ｏｖａペプチド５０μgでの免疫化（ＭｕＳＬ２４Ｈそしてその後Ｏｖａ)。

【０１４６】 免疫化から１５日目に、動物を屠殺する。その脾細胞を培養し、免疫グロブリ
ンの合成を研究することができるように、ＭｕＬ（１、２、３、４、５そしてそ
の後ＣＤ４０＋ＭｕＬ）又はＭｕＳＬ（１、２、３、４、５そしてその後ＣＤ４
０＋ＭｕＳＬ）の存在下又は不在下で１０μg／mLの抗ＣＤ４０（１、２、３、 ４、５そしてその後ＣＤ４０）でin vitroで再刺激する。免疫グロブリンイソタ
イプを、従来のＥＬＩＳＡ技術により決定した。

【０１４７】 ２．結果 Ｏｖａ及びＭｕＬ及びＯｖａ＋ＭｕＳＬでの免疫化の比較研究は、Ｏｖａ＋Ｍ
ｕＬで免疫化された動物から採取された細胞の、ａＣＤ４０＋ＭｕＬ再刺激の後
のＩｇＧ２ａの産生の増強を示している。これらの結果は、二次免疫化の条件下
で、これらの動物におけるＩｇＧ２ａの産生の増大が存在することを示唆してい
る。この抗体イソタイプがマウス体内のＩ型応答と関連性をもつことから考えて
、ＭｕＬがＴｈ１応答に向けての免疫応答の優先的分極化を可能にしたと想定す
ることができる。Ｏｖａでの免疫化より２４時間前のＭｕＬ２４の注入がＩｇ２
Ａの合成を増強するということに留意することも同様に重要である。かくして合
成アゴニストは免疫応答の優先的開始を可能にしたと思われ、このことで、Ｉｇ
Ｇ２ａの合成及びＴｈ１分極化の説明をすることが可能である。

【０１４８】 前述の結果（図１０）とは対照的に、ＭｕＬ＋Ｏｖａでの免疫化は、ＩｇＧ１
の合成を増強しない。このことは、図１０に記述された実験において観察された
免疫応答の分極化を確認するものである。特定的に言うと、ＩＦＮ−γがＩｇＧ
１の合成を犠牲にしてＩｇＧ２ａの合成を促進することによって体液性応答に対
し作用するということが一般に記述されている。

【０１４９】 図１０及び１１に示された結果は、かくして、Ｔｈ１プロフィールに向かって
の免疫応答の分極化を確認している。免疫応答に対するこの分極化効果は、アジ
ュバントに結びつけられたその他の抗原について又はその他の形で観察すること
ができる。

【０１５０】 Ｃ）Ｍｕペプチドのフラグメントから成るリポペプチドすなわちリポペプチド
Ｌ−ｍＩＦＮγ１１３−１３２及びＬ−ｍＩＦＮγ１２２−１３２の研究。 上述のＭｕＬ化合物が比較的サイズの大きいもの（５０００Ｄａ）であるため
に膜を横断するその通過の効力が制限されがちであることから、リポペプチド配
列の長さを減少させると同時にクラスIIＭＨＣ分子の発現を誘発するその活性を
保存することが、ヒト及びマウスの細胞について研究された。ＩＦＮ−γから誘
導された新規のリポペプチドならびに脂質鎖の役割の研究及び最小活性化合物の
決定について以下で、上述のＭｕＬ及びＭｕＳＬペプチドで得られた結果と比較
しながら記述する。

【０１５１】 １）実験の部 ａ）ペプチド合成とその特徴づけ リポペプチドＬ−ｍＩＦＮγ１１３−１３２は、ペプチド配列番号１，すなわ
ちそのＣ末端部分がカルボキサミド端部で修飾されたマウスＩＦＮγの位置１１
３及び１３２にあるアミノ酸を境界とするフラグメントに対応し、前記ペプチド
はそのＮ末端端部を介して、Ｎα−アセチル−リシンＮβ（パルミトイル）基（
Ａc−Ｋ（Ｐａｍ）又はＬとも呼ばれる）にリンクされている。

【０１５２】 リポペプチドＬ−ｍＩＦＮγ１２２−１３２は、ペプチド配列番号４，すなわ
ち、そのＣ末端部分がカルボキサミド端部で修飾されたマウスＩＦＮγの位置１
２２及び１３２にあるアミノ酸を境界とするフラグメントに対応し、前記ペプチ
ドはそのＮ末端端部を介してＡｃ−Ｋ（Ｐａｍ）基にリンクされている。

【０１５３】 ペプチド及びリポペプチドは、Ｆｍｏｃ−ｔＢｕ法（Fields. G. B.及びNoble
, R. L., 1990; Merrifield, R. B., 1986）を用いたＲｉｎｋアミド樹脂（Senn
Chemicals A. G., Dielsdorf, CH）上で、及びＮ−メチルピロリジノン（ＮＭ Ｐ）中の２−（１Ｈ−ベンゾチアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラ
メチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）０.４５Ｍでの活性化により合成された。保護され たアミノ酸を４当量用いた系統的な２重カップリングとそれに続くApplied Bios
ystem４３０Ａペプチド合成装置（Foster City, USA）内の０.５ＭのＨＯＢｔの
存在下でのＮＭＰ内の無水酢酸／ＤＩペプチドＡを用いた系統的アセチル化段階
を実施した。リポペプチドを獲得するため、Ｎ末端端部に、Ｆｍｏｃ Ｌｙｓ（ Ｐａｍ）−ＯＨ基（BACHEM Bubendorf, CH）を取込んだ。

【０１５４】 フェノール／エタンジチオール／チオアニゾール／Ｈ₂Ｏ（０.７５ｇ：２５０
μl；２５０μl：５００μl）存在下でのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）での処置 により、ペプチド及びリポペプチドを保護解除し樹脂から除去した。ジエチルエ
ーテルでの沈降によりＴＦＡ溶液からペプチドを分離し、凍結乾燥させた。アセ
トニトリル／Ｈ₂Ｏ／０.０５％ＴＦＡ溶媒系を用いて、固定相としてNucleosil ／Ｃ１８（０.０３，５μm）が充てんされた１２.５mm×２５０mmのカラム内で のＲＰ−ＨＰＬＣ上の数回にわたる並列通過により、精製を実施した。２つの異
なるＲＰ−ＨＰＬＣ系内で均質性を確認した：全てのペプチド及びリポペプチド
は９０％以上の純度であった。完全な酸加水分解の後にアミノ酸組成を決定しＴ
ＯＦ−ＰＤＭＳ（Ｂｉｏ−Ｉｏｎ ２０血漿脱着質量分析計、Uppsala, Sweden) により分子質量を決定することによって、それらの同一性を確認した。全ての化
合物は，水溶性である。

【０１５５】 Ｌ−ｍＩＦＮγ９５・１３２（ＭｕＬ）の蛍光類似体の合成のため４−メチル
トリチル（Ｍtt）保護基と共にアンテペナルティメートリシン９４を導入した。
ジクロロメタン中の１％のＴＦＡでのＭｔｔ基の選択的保護解除の後、５（６）
−カルボキシテトラメテルローダミンの樹脂上への導入を、ＨＢＴＵ／ＨＵＢｔ
活性化により実施した。上述のようなＴＦＡでの最終的保護解除及び樹脂からの
脱離の後、蛍光類似体をジエチルエーテルでの沈降により精製した。

【０１５６】 ｂ）円偏光二色性の研究 ペプチドについての円偏光二色性の測定は、制御された温度のJobin Yoon Ｃ Ｄ−６機を用いて、２５℃で実施した。平均５秒の時間で長さ０.１cmの細胞に ついて走査を実施した。測定された波長間隔は、０.５nm／段階の走査段階速度 で１８５〜２６０nmの範囲内にある。走査は、ヘリックス安定化試薬トリフルオ
ロエタノール（ＴＦＥ）を含む又は含まない２ｍＭのリン酸緩衝液中の中性ｐＨ
のペプチド上で行なった。ペプチド濃度は、定量アミノ酸分析による１００μM 溶液の正確な量の決定後に、２０μMの濃度に調整された。４回の反復走査の平 均値を、残基あたりの平均モル楕円率（deg・cm²dmol）として表現した。

【０１５７】 ｃ）細胞培養及びその刺激 生後７週目の雌の１２９Ｓｖマウスから、新鮮な脾臓を得た。ＡＴＣＣ（Amer
ican Type Culture Collection）からＣＯＬＯ２０５ヒト結腸ガン系統を得た。
脾細胞及びＣＯＬＯ２０５細胞を、１０％のＦＣＳ（Gibco BRL)、ピルビン酸ナ
トリウム（Sigma St, Louis, USA）で補足されたＲＰＭＩ１６４０（Gibco BRL,
Courbevoie, France）の中に維持した。

【０１５８】 細胞を２４時間、異なる濃度のＭｕＬ、Ｌ−ｍＩＦＮγ１１３−１３２、Ｌ−
ｍＩＦＮγ１２２−１３２又はＭｕＳＬで刺激した。マウスの脾細胞及びＣＯＬ
Ｏ２０５細胞を、それぞれ１μgの抗マウス１Ａ^b ＦＩＴＣモノクローナル抗体 （ｍＡｂ）（Pharmingen, San Diego, USA）及び１０μlの抗−ＨＬＡ−ＤＲク ローンＴＡＬ，ＩＢ５マウスＦＩＴＣｍＡｂ（Cymbus Biotechnology Ltd., Han
ts, UK）を用いてＩＩ ＭＨＣの発現のために標識づけした。対照イソタイプと して、負の制御マウスＦＩＴＣ ＩｇＧ１（DAKO S. A., Trappes, France)を使 用した。ＰＢＳ，１０％ＦＣＳ内で４℃で１時間、細胞をインキュベートし、次
に洗浄を行ない、標本１個につき１００００回の事象の割合でCoulter EPILS II
サイトメータ（Coulter, Hialeak, F １，USA）を用いてフローサイトメトリー によりII ＭＨＣの発現を分析した。

【０１５９】 ｄ）免疫標識づけ及び蛍光顕微鏡検査 リポペプチドの細胞内通過は、ローダミンで標識づけされたＭｕＬリポペプチ
ド１μMを用いて３７℃又は４℃で１０分間インキュベートされた、マウスから 得たばかりの１−１０⁴個の脾細胞の中で実証された。細胞を低温ＰＢＳで２回 洗浄し、４℃で１５分間ＰＢＳ中の４％のパラホルムアルデヒドで固定した。固
定した細胞を４℃で１０分間ＰＢＳ中の０.０５％のＮＰ−４０，１％のＢＳＡ で透過性をもたせ、非特異的部位をＰＢＳ中の２％のＢＳＡでブロックした。次
に、ＩＦＮγＲのα鎖の細胞質ドメインに対し向けられたウサギＩｇＧｓと共に
細胞をインキュベートした（Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA,
USA）。この抗体は１：１００の希釈度で使用した。蛍光を結合したヒツジ抗ウ
サギＩｇＧｓ（Santa Cruz Biotechnology Inc.）を二次抗体として１：２００ の希釈度で使用した。次に、細胞をＰＢＳで４回洗浄し、スライド上にとりつけ
、Leica共焦顕微鏡で写真撮影した。

【０１６０】 ２）結果 ローダミン標識づけされたＭｕＬ類似体の場合を除き、全てのペプチド（以下
の表１３に示されているもの）は、自動式固相合成により得られ、ＲＰ−ＨＰＬ
Ｃで直ちに精製された。この蛍光類似体の細胞間分布は、１０分間のインキュベ
ーションの後マウス脾細胞内で観察された。３８アミノ酸リポペプチドは、その
標的レセプターによって観察された局在化と相容性ある分布状態で、血漿膜に極
く近いところで凝集物の形で観察された。

【０１６１】

【表６】

【０１６２】 ペプチドの分子量（Ｍ．Ｗ）は、質量分析法によって決定された。ペプチドは
、１mL／分の溶出速度で５０℃で溶出されたＶｙｄａｃ Ｃ１８カラム（０.０１
〜５μm）（２５０×４.６mm）又はＺｏｒｂａｘ Ｃ３カラム（０.０３−５μm ）（１５０×４.６mm）のいずれかを用いる２つの異なるシステムにおいてＲＰ −ＨＰＬＣにより分析された。溶媒の組成：Ａ＝Ｈ₂Ｏ中の０.０５％のＴＦＡ、
Ｂ＝６０分以上にわたり０〜１００％のＢ線形勾配を用いて２１５nmでＨ₂Ｏ／ アセトニトリル（２０：８０）中０.０５％のＴＦＡ。２つのシステムにおいて 、設計能力ｋ′Ｃ３及びｋ′Ｃ１８を測定した。

【０１６３】 膜内外移送に関与するメカニズムは４℃で細胞をインキュベートした後に見ら
れるように受動的であり、培地用のエキソペプチダーゼによるペプチドの完全な
分解を回避するのに充分高速である。

【０１６４】 らせん組織及びポリカチオンテールは、ＴＦＮ−γアゴニストペプチドのその
レセプターに対する結合のために不可欠な要素として記述されてきた（Szente e
t al., 1996）。ペプチド１０８−１３２は、ＩＦＮ−γＲの細胞質ドメインに 結合することのできる最小のペプチドであるものとして記述されてきた（Szente
et al., 1996）。マウス細胞上でクラスIIＭＨＣ分子の発現を誘発するその能 力は、ペプチド９５−１３３に比べ２分の１に減少した（Szente et al., 1996 ）。

【０１６５】 相同なヒトサイトカインの結晶構造（Ealick et al., 1991）は、生物活性を もつＣ末端ペプチドの３８の残基のうちの１８（４７％）に対応する、分子のこ
の部分の中の５Ｆヘリックスターンの存在を示している。ＭｕＬ化合物の大部分
が切断されていた：すなわち、５Ｆヘリックスターンのうちの３つを含む最初の
１９の残基は、Ｌ−ｍＩＦＮ−γ１１３−１３２構成体の中で抑制されており、
Ｃ末端部分の１１個の残基のみがＬ−ｍＩＦＮ−γ１２２−１３２内に存在して
いる。サイトカインの位置１３３（Ｃ末端端部）に見られるシステインは、ジス
ルフィドの形成によるその２量体化を回避する目的ですべてのリポペプチドの中
で削除され、カルボキシペプチターゼに関するそれらの安定性を強化するべく単
純なカルボキサミド端部で置換されてきた。

【０１６６】 異なる濃度のリポペプチドを用いて２４時間インキュベートされた、マウスの
脾細胞又はヒトＣＯＬＯ２０５細胞系統によるクラスIIのＭＨＣ分子の発現を誘
発するその能力に基づいて、さまざまなリポペプチドを比較した（これらの実験
条件下では非脂質Ｍｕペプチドは不活性である）（図１２）。ＭｕＬ又はＬ−ｍ
ＩＦＮ−γ１１３−１３２での刺激により、２つの細胞型上でクラスIIＭＨＣ分
子の著しい用量依存性の増大が観察されたが、一方Ｌ−ｍＩＦＮ−γ１２２−１
３２又はＭｕＳＬのいずれも活性ではない。この結果から、パルミチン酸による
クラスIIＭＨＣ分子の発現の非特異的誘発の可能性は排除されることになる。図
１２に示された結果は、切形リポペプチドＬ−ｍＩＦＮ−γ１１３−１３２の生
物活性が、５０μMの濃度で各々のリポペプチド（それぞれ１４０又は２３０μg
／mL）で刺激された細胞によるクラスII ＭＨＣ分子の発現の１３倍の増加を伴 って、マウスから得られたばかりの脾細胞についてのＭｕＬの生物活性と同等で
あることを示している。Ｌ−ｍＩＦＮ−γ１１３−１３２は、ヒト細胞上のＭｕ
Ｌに比べ活性が低く、５０μMの濃度での２２倍に対し、ＨＬＡ−ＤＲの発現の １０倍の増加を伴っている。しかしながら、ＭｕＬとは対照的に、切形リポペプ
チドの高い濃度は細胞障害性をもたない：すわなち、このペプチドの７５μM（ ２１０μg／mL）の濃度は、ヒト細胞系統について１５倍量のＨＬＡ−ＤＲ発現 を誘発し、１００μM（２８０μg／mL）の濃度で使用したときマウス細胞につい
てのＬＡ^bの発現を１８倍増加させる。

【０１６７】 脂質修飾の影響をさらに特徴づけするため、脂質テールによりペプチド内に誘
発された立体配座の変化を精査する目的で、ペプチド及びリポペプチドに対する
円偏光２色性研究が実施された。図１３は、ヘリックス安定化試薬トリフルオロ
エタノールを伴う又は伴わない室温の２mMのpH７のリン酸緩衝液中で得られた、
Ｍｕ及びＭｕＬについてのＣＤスペクトルを示す。水性緩衝液中で、１９０nmの
小さな正の楕円率そして２０３及び２１８での２つの最小値は、ペプチドが、拡
張されているか又はランダムコイルの形をしている優性の立体配座と集団の少な
いらせん段の間の急速な平衡状態にあることを示唆している。トリフルオロエタ
ノールの存在下では、スペクトルは、１９０nmに最大及び２０９nmと２２１nmに
２つの最小値をもつαヘリックスの高い集団を伴う特徴的組織へと変化する。２
５％又は５０％（容量で）のトリフルオロエタノールでは、秩序立った立体配座
はそれぞれ５３％又は６５％に達する（１００％ヘリックスについての値〔θ〕 ²²² ＝−３３０００と考える）。緩衝液中のＭｕｌのスペクトルを２５％のトリ フルオロエタノール中のＭｕのスペクトル上に重ね合わせることができるという
のは興味深いことである。リポペプチド溶液に対する２５％又は５０％のトリフ
ルオロエタノールの添加は、それぞれ６５％から７２％，すなわち、天然サイト
カイン中の対応するセグメントの理論的らせん含有率よりも大きい相対的割合で
、らせん組織を増加させる。

【０１６８】 切形及びスクランブル型リポペプチドのＣＤスペクトルは、図１４Ａ（緩衝液
中の溶液）及び１４Ｂ（トリフルオロエタノール２５％）に示されている；緩衝
液中に見られる低含有量のβシート又はらせんを伴う集団は、トリフルオロエタ
ノール２５％を添加することによって、約５０〜６０％のらせん立体配座へと変
化する。驚くべきことに、このことは、天然の状況でのサイトカインの端部のら
せん組織が不在であるにもかかわらず、１２アミノ酸リポペプチドＬ−ｍＩＦＮ
−γ１２２〜１３２の場合でさえ観察された。

【０１６９】 これらの比較的大きい水溶性化合物がもつ細胞膜を受動的に交差する驚くべき
能力は、水中のα−ヘリックス組織を自発的に採用するそれらの傾向と結びつけ
ることができるものである。リポソーム−リポペプチドの相互作用を細胞−リポ
ペプチドの相互作用のモデルとしてみなすことができるならば、そのとき、まず
は細胞の表面におけるリポペプチドの挿入、そして次に、本発明のリポペプチド
とい特殊なケースにおいては、細胞内部の作動性カーゴ配列の急速な転座及びそ
の後のそれらによるその標的レセプターの認識が存在すると想定することががき
る。

【０１７０】 ３）結論 以上で示された結果は、結びつけられたペプチド（らせんの欠如した短かいペ
プチドの場合でさえ）のらせん組織の安定化及び細胞質内でのその分布に向けて
貢献する少なくとも２つの面での役割を脂質修飾が果たすことを示している。Ｉ
ＦＮ−γＲを結合する能力をもち弱い生物活性を有するものとして記述されてい
る最も短かいペプチドはペプチド１０８〜１３２であった（Szente et al., 199
6）ことから、５残基だけ短かいペプチドの生物活性の維持は、脂質テールが、 付加的な疎水性相互作用によってペプチド−レセプター結合を安定化することに
向けて貢献しうるもう１つの役割をもつことを示唆している。

【０１７１】 この研究は、生体タンパク質の生物学的に有意な部位を選択的に認識する機能
的ペプチドの見かけ上の能力を例示しており、これは、さまざまな標的のための
リガンドの同定のための供給源としての大きいペプチドライブラリの開発の基礎
を成す特性である。

【０１７２】 本研究では、脂質テールの導入が、基本ペプチド配列の生物活性及びその細胞
内レセプターに達する能力を改善した。ＩＮＦ−γから誘導されたこれらのリポ
ペプチド構成体が提示する生物活性は、免疫調節物質としてのその使用を確認す
るものである。それらの生物学的に活性である濃度（およそmLあたり数百μg） 及びそれらの可溶性（５mg／mL以上）は、その注入のために受容可能である容量
と相容れるものである。

【０１７３】 組換え型サイトカインに比べた本発明のリポペプチドのもう１つの利点は、冷
蔵状態が中断された場合でも貯蔵品質が優れているという点にある。

【０１７４】

【表７】

【０１７５】

【表８】

【０１７６】

【表９】

【０１７７】

【表１０】

【０１７８】

【表１１】

【０１７９】

【表１２】

【０１８０】

【表１３】

【０１８１】

【表１４】

【０１８２】

【表１５】

【０１８３】

【表１６】

【０１８４】

【表１７】

【０１８５】 参照 Alexander, J. et al., Immunity, 1:9, 751-761 (1994) Ben Mohamed L., et al., Eur J Immunol, 27:5, 1242-1253 (1997) Ealick S.E., Cook W.J., Vijay-Kumar S., Carson M., Nagabhusan T.L., Tr
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ciences, 4, 1-6, 1997.

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒト皮膚細胞（ＨＭＶＥＣｄ）に対するＶＣＡＭ−１の誘導を示すヒストグラ
ム。結果を、１の値のヒトＩＦＮ−γ（５００Ｕ／mL；７５ng／mL）の活性を与
える発現指数として示した。左から右の柱は、それぞれ 該細胞の処理無しで、 ５００Ｕ／mLのヒトＩＦＮ−γでの細胞処理によって、 １０ng／mLのＴＮＦでの細胞処理によって、 ５００Ｕ／mLのヒトＩＦＮ−γ及び１０ng／mLのＴＮＦの混合物での細胞
処理によって ２５μMのＭｕＳＬペプチドでの細胞処理によって、 ５０μMのＭｕＳＬペプチドでの細胞処理によって、 ２５μMのＭｕＬペプチドでの細胞処理によって、 ５０μMのＭｕＬペプチドでの細胞処理によって、 得られた結果に相当する。

【図２】 ＭｕＳＬ又はＭｕＬペプチドで処理したＬ９２９繊維芽で実施した抗ウイルス
テストの結果を示すヒストグラム。結果を光学密度（ＯＤ）で示した。左から右
の柱はそれぞれ ・ＶＳＶで感染させた細胞で、 ・ＶＳＶで感染させ、そしてＭｕＳＬ又はＭｕＬで処理していない細胞で ・ＶＳＶで感染させ、そして１μM、２μM、３μM、４μM、５μM、６μM
、７μM、８μM、９μM、１０μMでＭｕＳＬ（白柱）又はＭｕＬ（黒柱）で処理
した細胞で 実施した測定に相当する。

【図３】 ヒストグラムは、リコンビナントＩＦＮ−γで処理した繊維芽Ｌ９２９で実施
した抗ウイルステストの結果を示す。結果を光学密度（ＯＤ）で示した。左から
右への柱は、それぞれ ・ＶＳＶで感染させていない細胞で、 ・ＶＳＶで感染させ、そして０．１８ＩＵ、０．３８ＩＵ、０．７５ＩＵ
、１．５ＩＵ、３．１２ＩＵ、６．２５ＩＵ、１２．５ＩＵ、２５ＩＵ、５０Ｉ
Ｕ、１００ＩＵ、２００ＩＵでリコンビナントＩＦＮ−γで処理した細胞で 実施した測定に相当する。

【図４】 マウス脾細胞に対する抗ＣＤ４０＋ＩＬ−４刺激の増殖効果。マウスＩＬ−４の
生物学的活性のＭｕＬによる阻害。

【図５】 ＩＦＮ−γＲ ＫＯ動物から取られたマウス脾細胞に対する抗ＣＤ４０＋ＩＬ−
４刺激の増殖効果。機能的ＩＦＮ−γレセプターの不在下で、ＭｕＬの阻害活性
が認められた。

【図６】 ＷＴ動物から取られたマウス脾細胞に対する抗ＣＤ４０＋ＩＬ−４刺激の増殖効
果。機能的ＩＦＮ−γレセプターの存在は、ＩＬ−４の生物学的活性を阻害する
ことができるＭｕＬに必要である。

【図７】 ＭｕＬの存在又は不在下で、抗ＣＤ４０によってin vitroで刺激されたマウス脾
細胞によるＩｇＧ２ａの合成。

【図８】 ＭｕＬの存在又は不在下で、抗ＣＤ４０によってin vitroで刺激されたマウス脾
細胞によるＩｇＧ１の合成。

【図９】 ＭｕＬの存在又は不在下で、抗ＣＤ４０によってin vitroで刺激されたマウス脾
細胞によるＩｇＧｓの合成。

【図１０】 方法に記載した種々の条件によって免疫化し、そしてｙ軸に記した条件下におい
て生体外で再刺激した動物の脾細胞によるＩｇＧ２ａの産生。ＩｇＧ２ａ合成の
定量はＥＬＩＳＡで実施した。

【図１１】 方法に記載した種々の条件によって免疫化し、そしてｙ軸に記した条件下におい
て生体外で再刺激した動物の脾細胞によるＩｇＧ１の産生。ＩｇＧ１合成の定量
はＥＬＩＳＡで実施した。

【図１２】 ＩＦＮ−γに由来するリポペプチドで刺激したヒト又はマウス細胞によるクラス
IIＭＨＣ分子の誘導。マウス脾細胞（Ａ）及びＣＯＬＯ２０５ヒト細胞系統（Ｂ
）を、種々の濃度のＩＦＮ−γに由来するリポペプチドで２４時間インキュベー
トした。細胞をクラスIIＭＨＣ分子に対するモノクローナル抗体でラベルし、そ
してフローサイトメトリーで解析した。リポペプチドで処理した細胞の平均蛍光
強度と無処理細胞の平均蛍光強度との比をｙ軸に示した。リポペプチド濃度をｘ
軸にμMで示した；ＭｕＬ：黒丸；ＭｕＳＬ：白丸；Ｌ−ｍＩＦＮ １１３〜１３
２：三角；Ｌ−ｍＩＦＮ １２２〜１３２：Ｘ。

【図１３】 ２５％ＴＦＥ（ｍＩＦＮ ９５〜１３２：円；Ｌ−ｍＩＦＮ ９５〜１３２：大四
角）又は５０％ＴＦＥ（ｍＩＦＮ ９５〜１３２：円；Ｌ−ｍＩＦＮ ９５〜１３
２：小四角）含有、ＰＦＥ（ｍＩＦＮ ９５〜１３２：Ｘ；Ｌ−ＩＦＮ ９５〜１
３２：菱形）不含、２mM pH７リン酸バッファー中で２０μMの濃度のＭｕ及びＭ
ｕＬのＣＤ（円偏光２色性）。温度：２９８Ｋ。ｙ軸に示した値は、シータ×１
０^-3（deg.cm².dmol^-1）に相当し、そしてｘ軸に示した値は、波長（nm）に相当
する。

【図１４】 ２mM pH７リン酸バッファー（図１４Ａ）中で２０μMの濃度でか、又は２５％ ＴＦＥ（図１４Ｂ）；（Ｌ−ｍＩＦＮ１１３〜１３２：三角；Ｌ−ｍＩＦＮ １ ２２〜１３２：Ｘ；ＭｕＳＬ：白丸）存在下で、Ｌ−ｍＩＦＮ １１３〜１３２ ，Ｌ−ｍＩＦＮ １２２〜１３２及びＭｕＳＬのＣＤスペクトラ。ｙ軸に示した 値は、シータ×１０^-3（deg.cm².dmol^-1）に相当し、そしてｘ軸に示した値は、
波長（nm）に相当する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，Ｌ Ｔ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ， ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，Ｕ Ａ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 アンスティトゥー パストゥール ド リ ール フランス国 59019 リール リュ デュ プロフェスール カルメット １ (71)出願人 セーエヌエールエス（サントル・ナショナ ル・ドゥ・ラ・ルシェルシェ・シャンティ フィク) ＣＮＲＳ（ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡ Ｌ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ Ｓ ＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ) フランス国、エフ−75794 パリ・セデッ クス・16、リュ・ミシェル−アンジュ ３ (72)発明者 ティアム，カデール フランス国、エフ−59000 リール、アヴ ニュ・マルクス・ドルモワ 113 (72)発明者 オリオー，クロード フランス国、エフ−59310 ノマン、リ ュ・ルイ・ギスラン 60 (72)発明者 グラ−マス，エレーヌ フランス国、エフ−59710 ムリニー、リ ュ・ドゥ・ラ・ロジェール 321 (72)発明者 ルワン，エステル フランス国、エフ−59000 リール、レジ ダンス・クロワゼ・デ・ポスト、リュ・ド ゥ・ラ・ジュスティス １ (72)発明者 ヴェルワエルド，クローディ フランス国、エフ−59800 リール、リ ュ・フレデリック・モッテ 45 Ｆターム(参考） 4C076 AA16 BB15 BB16 CC07 CC16 CC27 CC35 DD41 DD70 FF16 4C084 AA02 AA06 BA18 BA19 CA59 DA24 MA66 NA14 ZA752 ZB072 ZB262 ZB272 ZB332 ZC552 4C085 AA03 BB01 CC05 CC29 DD03 DD23 GG03 GG04 GG05 4H045 AA10 AA30 BA17 BA19 BA55 DA18 EA31

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 リポペプチドにおいて、 − ＩＦＮ−γレセプターの細胞内部分に結合することができるペプチド部分、
   ただしそれは該レセプターの細胞外部分に結合することができず、該ペプチド部
   分は、 ・哺乳動物インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）のＣ末端の末端から約３０〜５０
   個の隣接するアミノ酸からなるペプチド配列（ここで、適切には、末端から３〜
   ２０個のアミノ酸が抑制されている）、 ・哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端の上記ペプチド配列の、特に約５〜約３０個のア
   ミノ酸の、あらゆるフラグメント、又は ・ＩＦＮ−γのＣ末端の上記ペプチド配列から派生するか、若しくは上記フラグ
   メントのあらゆるペプチド配列 を含み、及び − 親油性部分が、 ＊直鎖若しくは分枝鎖の、飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ２０炭化水素ベースの
   鎖、又は ＊適切には上記炭化水素ベースの鎖に結合している、ステロイド基、 を含む親油性部分から有利には選択される、１以上の親油性部分を含み、 該親油性部分は、場合により、生理的pHでイオン化している１以上の基、及び該
   炭化水素ベースの鎖及び／若しくは該ステロイド基を共有結合するための基を含
   む短いベクターペプチド（このようにベクターリポペプチドユニットを形成する
   ための）と結合していることを特徴とする、リポペプチド。
2. 【請求項２】 親油性部分の脂肪酸炭化水素ベースの鎖が、 − パルミチン酸、 − オレイン酸、 − リノール酸、 − リノレン酸 から選択される、請求項１記載のリポペプチド。
3. 【請求項３】 ステロイド基が、コレスト−５−エニル−３−オキシ酢酸又
   はコレスト−５−エニル−３−オキシ炭酸のようなコレステロール誘導体から選
   択される、請求項１又は２記載のリポペプチド。
4. 【請求項４】 親油性部分が、ペプチド部分の１以上のアミノ酸と共有結合
   している、請求項１〜３のいずれか１項記載のリポペプチド。
5. 【請求項５】 親油性部分が、ペプチド部分のＮ末端若しくはＣ末端位置に
   位置するリシンのαＮＨ₂若しくはεＮＨ₂基にか、又は、場合によりシンプルス
   ペーサーとともにペプチドに付加されている、あらゆるアミノ、アルコール若し
   くはチオール基に共有結合している、請求項１〜４のいずれか１項記載のリポペ
   プチド。
6. 【請求項６】 Ｃ末端アミノ酸のＣＯＯＨ基が、生物体のエキソペプチダー
   ゼに抵抗性である基で、特にカルボキサミド基で置換されている、請求項１〜５
   のいずれか１項記載のリポペプチド。
7. 【請求項７】 ペプチド配列が、 − ヒトＩＦＮ−γペプチド配列の９５位及び１３４位に位置するアミノ酸によ
   って区切られているか、 − マウスＩＦＮ−γペプチド配列の９５位，及び１３３若しくは１３２位に位
   置するアミノ酸によって区切られているか、又は − Ｎ末端側がマウスＩＦＮ−γペプチド配列の１１３〜１２１位の１つに位置
   するアミノ酸によって、そしてＣ末端側がその１３２位に位置するアミノ酸によ
   って区切られており、特に、該ＩＦＮ−γペプチド配列の１１３及び１３２位に
   位置するアミノ酸によって区切られている、請求項１〜６のいずれか１項記載の
   リポペプチド。
8. 【請求項８】 親油性部分が、Ｎα−アセチル−リシンＮε（パルミトイル
   ）基、特に下記リポペプチド： − 配列が、下記式： Ac-K(Pam)LTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQM-NH₂ に相当する、ヒトＩＦＮ−γペプチド配列の９５及び１３４位に位置するアミノ
   酸によって区切られているリポペプチド、 − 配列が、下記式： Ac-K(Pam)AKFEVNNPQVQRQAFNELIRVVHQLLPESSLRKRKRSR-NH₂ に相当する、マウスＩＦＮ−γペプチド配列の９５及び１３２位に位置するアミ
   ノ酸によって区切られているリポペプチド、 − 配列が、下記式： Ac-K(Pam)IRVVHQLLPESSLRKRKRSR-NH₂ に相当する、マウスＩＦＮ−γペプチド配列の１１３及び１３２位に位置するア
   ミノ酸によって区切られているリポペプチド、 で示される、請求項１〜７のいずれか１項記載のリポペプチド。
9. 【請求項９】 ミセル又は微小凝集物が、好都合には約１μm未満の大きさ である、請求項１〜８のいずれか１項で定義された１以上の異なるリポペプチド
   のミセル又は微小凝集物。
10. 【請求項１０】 約８０％の濃縮された酢酸溶液中でリポペプチドを分散さ
    せることによって得られる、請求項９記載のミセル又は微小凝集物。
11. 【請求項１１】 適切には請求項９又は１０記載のミセルの形態での、請求
    項１〜８のいずれか１項記載の１以上のリポペプチドを、 − 細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬｓともいう）によって特異的に認識される１以
    上のエピトープを含み、そしてリポペプチド（ＣＴＬエピトープ又はＣＤ８⁺エ ピトープともいう）を活性化することができる１以上のペプチド又はリポペプチ
    ド及び／又は、 − ヘルパーＴリンパ球（ＨＴＬｓともいう）によって特異的に認識される１以
    上のエピトープを含み、そしてリポペプチド（ＨＴＬエピトープ又はＣＤ４⁺エ ピトープともいう）を活性化することができる１以上のペプチド又はリポペプチ
    ド及び／又は − リポペプチドに対する抗体によって特異的に認識される１以上のＢエピトー
    プを含む１以上のペプチド又はリポペプチド と組み合わせて含む組成物。
12. 【請求項１２】 −該ＣＤ８⁺エピトープが、 − 例えば、 ＊慢性骨髄性白血病のエピトープ、 ＊タンパク質ｐ５３のエピトープ ＊メラノーマエピトープ、特にヒトメラノーマｍｅｌａｎ−Ａ／ｍａｒｔ−１抗
    原のエピトープ、 ＊突然変異の結果生じた腫瘍のエピトープ、 ＊種々の腫瘍に共通する抗原 のような腫瘍細胞の特徴を示し、 − 例えば、 ＊肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ）タンパク質のエピトープ、 ＊ＡＩＤＳウイルス（ＨＩＶ）タンパク質のエピトープ、 ＊ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、特にＨＰＶのＥ₆又はＥ₇タン
    パク質のエピトープ のようなウイルスタンパク質の特徴を示し、 − 該ＣＤ４⁺エピトープが、複数エピトープ、例えば破傷風毒素ペプチドであ るＴＴ（８３０〜８４６）、インフルエンザヘマグルチニンであるＨＡ（３０７
    〜３１９）、ＰＡＤＲＥ、ＨＩＶ−１の４５〜６９のＮＥＦペプチド及びプラス
    モジウム ファルシパルムのＬＳＡ３ペプチドであり、 − 該Ｂエピトープが、アレルギー反応に関連するタンパク質、例えばハウスダ
    ストのアレルゲン、特にデルマトファゴイデス テロニシナスのペプチド（５２
    〜７１，１１７〜１３３，１７６〜１８７若しくは１８８〜１９９のペプチド）
    、又はデルマトファゴイデス ファリナのペプチドのものである、請求項１１に
    記載の組成物。
13. 【請求項１３】 請求項１２で定義される１以上のＣＤ８⁺及び／又はＣＤ ４⁺及び／又はＢエピトープ（該エピトープは、哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端の 、請求項１で定義される該リポペプチドの親油性部分及び／又はペプチド配列に
    か、又はそれらから誘導されるフラグメント若しくは配列に共有結合している）
    を含む、適切には、請求項９又は１０に記載のミセルの形態の、請求項１〜８の
    いずれか１項記載のリポペプチド。
14. 【請求項１４】 ペプチド部分が、１以上の上記ＣＤ８⁺及び／又はＣＤ４⁺ 及び／又はＢエピトープ（該エピトープは、哺乳動物ＩＦＮ−γのＣ末端の上記
    ペプチド配列にか、又はそれらから誘導されるフラグメント若しくは配列に共有
    結合している）を含む、請求項１３記載のリポペプチド。
15. 【請求項１５】 生理学的に許容し得る薬学的製剤である媒体と組み合わせ
    た、 − 適切には請求項９又は１０記載のミセルの形態の、請求項１〜８のいずれか
    １項記載の１以上のリポペプチド、 − １以上のＣＤ８⁺及び／又はＣＤ４⁺及び／又はＢエピトープと組み合わせた
    １以上のリポペプチドの請求項１１又は１２記載の組成物、及び／又は − 共有結合している１以上のＣＤ８⁺及び／又はＣＤ４⁺及び／又はＢエピトー
    プを含む、請求項１３又は１４記載の１以上のリポペプチド、 を含む、薬学的組成物又はワクチン。
16. 【請求項１６】 配列が、下記式： IRVVHQLLPESSLRKRKRSR（配列番号１） のマウスＩＦＮ−γヌクレオチド配列の１１３及び１３２位に位置するアミノ酸
    によって区切られているペプチドのような、マウスＩＦＮ−γヌクレオチド配列
    の、Ｎ末端側が１１３〜１２１位の１つに位置するアミノ酸によって、そしてＣ
    末端側がその１３２位に位置するアミノ酸によって区切られているペプチド。