JP2002505096A - Ｔａｇｅ分子をコードする単離核酸分子、およびその利用方法 - Google Patents
Ｔａｇｅ分子をコードする単離核酸分子、およびその利用方法Info
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Abstract
(57)【要約】
腫瘍拒絶抗原前駆体の新しいファミリーおよびそれらをコードする核酸分子を開示する。これらの腫瘍拒絶抗原前駆体はＴＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体と称され、そして、それらをコードする核酸分子はＴＡＧＥをコードする分子と称される。コード配列および腫瘍拒絶抗原の様々な診断および治療への利用方法およびそれらの前駆体分子が開示される。
Description
【０００１】発明の分野 本発明は腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする、核酸分子のファミリーに関する。
腫瘍拒絶抗原前駆体、即ち、“TRAP”は、プロセシングされてヒト白血球抗原分
子によって提示されるペプチドとなることができる。問題となる遺伝子は他の既
知の腫瘍拒絶抗原前駆体のコード配列とは関連はないようである。
腫瘍拒絶抗原前駆体、即ち、“TRAP”は、プロセシングされてヒト白血球抗原分
子によって提示されるペプチドとなることができる。問題となる遺伝子は他の既
知の腫瘍拒絶抗原前駆体のコード配列とは関連はないようである。
【０００２】背景および従来技術 哺乳類の免疫系が外来、または、異質の物質を認識し、それらと反応するプロ
セスは複雑なものである。これらのシステムの重要な局面は、Ｔリンパ球、すな
わち、“Ｔ細胞”応答である。この応答は、Ｔ細胞がヒト白血球抗原（“ＨＬＡ
”）、または、主要組織適合遺伝子複合体（“ＭＨＣ”）と称される細胞表面分
子とペプチドとからなる複合体を認識し、それと相互作用することを必要とする
。前記ペプチドは、ＨＬＡ／MHC分子にも提示する細胞によってプロセシングさ れるより大きな分子に由来する。この点に関しては、メール（Ｍａｌｅ）等， Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．ｐ．Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ，１９８７）、特にその６−１０章を参照。Ｔ細胞とＨＬＡ／ペプチ
ド複合体との相互作用は限定されたものである。というのは、Ｔ細胞とＨＬＡ分
子とペプチドとの特定の組み合わせに対して特異的なＴ細胞が必要とされる。も
し特異的なＴ細胞が存在しなければ、たとえそのパートナー複合体が存在してい
ても、Ｔ細胞応答は起こらない。同様に、Ｔ細胞が存在していても、特異的な複
合体が存在しなければ応答はおこらない。このメカニズムは、異物に対する免疫
系の応答、自己免疫疾患、および、細胞異常に対する応答に関与している。タン
パク質がＨＬＡ結合ペプチドへとプロセシングされるメカニズムに関して多くの
研究がなされてきている。この点に関しては、バリナガ（Ｂａｒｉｎａｇａ），
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：８８０（１９９２），フリーモント（Ｆｒｅｍｏｎ
ｔ）等， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９１９（１９９２），マツムラ（Ｍａｔｓ ｕｍｕｒａ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９２７（１９９２），ラトロン（Ｌ
ａｔｒｏｎ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９６４（１９９２）を参照。
セスは複雑なものである。これらのシステムの重要な局面は、Ｔリンパ球、すな
わち、“Ｔ細胞”応答である。この応答は、Ｔ細胞がヒト白血球抗原（“ＨＬＡ
”）、または、主要組織適合遺伝子複合体（“ＭＨＣ”）と称される細胞表面分
子とペプチドとからなる複合体を認識し、それと相互作用することを必要とする
。前記ペプチドは、ＨＬＡ／MHC分子にも提示する細胞によってプロセシングさ れるより大きな分子に由来する。この点に関しては、メール（Ｍａｌｅ）等， Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．ｐ．Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ，１９８７）、特にその６−１０章を参照。Ｔ細胞とＨＬＡ／ペプチ
ド複合体との相互作用は限定されたものである。というのは、Ｔ細胞とＨＬＡ分
子とペプチドとの特定の組み合わせに対して特異的なＴ細胞が必要とされる。も
し特異的なＴ細胞が存在しなければ、たとえそのパートナー複合体が存在してい
ても、Ｔ細胞応答は起こらない。同様に、Ｔ細胞が存在していても、特異的な複
合体が存在しなければ応答はおこらない。このメカニズムは、異物に対する免疫
系の応答、自己免疫疾患、および、細胞異常に対する応答に関与している。タン
パク質がＨＬＡ結合ペプチドへとプロセシングされるメカニズムに関して多くの
研究がなされてきている。この点に関しては、バリナガ（Ｂａｒｉｎａｇａ），
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：８８０（１９９２），フリーモント（Ｆｒｅｍｏｎ
ｔ）等， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９１９（１９９２），マツムラ（Ｍａｔｓ ｕｍｕｒａ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９２７（１９９２），ラトロン（Ｌ
ａｔｒｏｎ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９６４（１９９２）を参照。
【０００３】 Ｔ細胞が細胞異常を認識するメカニズムは癌にも関係している。例えば、参考
文献として本出願にその内容を合体させる、１９９２年５月２２日出願、１９９
２年１１月２６日公表のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４には、１つの
遺伝子遺伝子ファミリーが開示されており、それらはプロセシングされてペプチ
ドとなり、次に、細胞表面に発現され、特異的なＣＴＬ細胞溶解性Ｔリンパ球、
すなわち、以後“ＣＴＬ”と称されるものによって腫瘍細胞の溶解を引き起こす
ことができる。前記遺伝子は、“腫瘍拒絶抗原前駆体”、または、“ＴＲＡＰ”
分子をコードするものであると言われ、これら分子に由来するペプチドは“腫瘍
拒絶抗原”、または、“ＴＲＡ”と称される。このファミリーの遺伝子の詳細に
関してはトラヴァーサリ（Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）等，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ ３５：１４５（１９９２）； ファン・デア・ブルッゲン（ｖａｎ ｄ ｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１６４３（１９９１）を
参照。また、参考文献として本出願にその内容の全体を合体させる、現在米国特
許第５，３４２，７７４号となっている、１９９１年１２月１２日出願の米国特
許出願第８０７，０４３号も参照。“ＭＡＧＥ”ファミリーの腫瘍拒絶抗原前駆
体はこの特許において開示されている。
文献として本出願にその内容を合体させる、１９９２年５月２２日出願、１９９
２年１１月２６日公表のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４には、１つの
遺伝子遺伝子ファミリーが開示されており、それらはプロセシングされてペプチ
ドとなり、次に、細胞表面に発現され、特異的なＣＴＬ細胞溶解性Ｔリンパ球、
すなわち、以後“ＣＴＬ”と称されるものによって腫瘍細胞の溶解を引き起こす
ことができる。前記遺伝子は、“腫瘍拒絶抗原前駆体”、または、“ＴＲＡＰ”
分子をコードするものであると言われ、これら分子に由来するペプチドは“腫瘍
拒絶抗原”、または、“ＴＲＡ”と称される。このファミリーの遺伝子の詳細に
関してはトラヴァーサリ（Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）等，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ ３５：１４５（１９９２）； ファン・デア・ブルッゲン（ｖａｎ ｄ ｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１６４３（１９９１）を
参照。また、参考文献として本出願にその内容の全体を合体させる、現在米国特
許第５，３４２，７７４号となっている、１９９１年１２月１２日出願の米国特
許出願第８０７，０４３号も参照。“ＭＡＧＥ”ファミリーの腫瘍拒絶抗原前駆
体はこの特許において開示されている。
【０００４】 その開示内容を本出願に参考文献として合体させる、米国特許５，４０５，９
４０号において、前記ＭＡＧＥ−１遺伝子が、プロセシングされてＨＬＡ−Ａ１
分子によって提示されるノナペプチドとなる腫瘍拒絶抗原前駆体をコードするこ
とが説明されている。ＨＬＡ−Ａ１分子に結合する前記ノナペプチドは、あるモ
チーフが満足されるという点で、結合のための“ルール”に従っている。この点
に関しては、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０７４２１；フォーク（Ｆａｌｋ）等
，Ｎａｔｕｒｅ ３５１：２９０−２９６（１９９１）；エンゲルハルト（Ｅｎ
ｇｅｌｈａｒｄ），Ａｎｎ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：１８１−２０７（
１９９４）；ルッパート（Ｒｕｐｐｅｒｔ）等，Ｃｅｌｌ ７４：９２９−９３
７（１９９３）；ロチュケ（Ｒｏｔｚｓｃｈｋｅ）等，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：
２５２−２５４（１９９０）；ビヨルクマン（Ｂｊｏｒｋｍａｎ）等，Ｎａｔｅ
ｒｅ ３２９：５１２−５１８（１９８７）；トラヴァーサリ（Ｔｒａｖｅｒｓ
ａｒｉ）等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１４５３−１４５７（１９９２）を
参照。前記参考文献は、特定のＨＬＡ分子に対する特定のペプチドの特異性が判
明すれば、ある特定のペプチドは一つのＨＬＡ分子に対して結合するが、他のＨ
ＬＡ分子に対しては結合しないと推測される、ということを教示している。異な
る個体は異なるＨＬＡ表現型を有することから、このことは重要なことである。
結果として、ある特定のペプチドが、ある特定のＨＬＡ分子に対するパートナー
であると同定されたことが、診断上および治療上の効果を有しているとしても、
その効果はその特定のＨＬＡ表現型を有する個体に対してしか適切でないのであ
る。細胞異常は一つの特定のＨＬＡ表現型に限られるわけではないため、また、
標的化療法には、問題の異常細胞の表現型に関する相当な知識が必要をされるた
め、この分野において更なる研究を行う必要がある。
４０号において、前記ＭＡＧＥ−１遺伝子が、プロセシングされてＨＬＡ−Ａ１
分子によって提示されるノナペプチドとなる腫瘍拒絶抗原前駆体をコードするこ
とが説明されている。ＨＬＡ−Ａ１分子に結合する前記ノナペプチドは、あるモ
チーフが満足されるという点で、結合のための“ルール”に従っている。この点
に関しては、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０７４２１；フォーク（Ｆａｌｋ）等
，Ｎａｔｕｒｅ ３５１：２９０−２９６（１９９１）；エンゲルハルト（Ｅｎ
ｇｅｌｈａｒｄ），Ａｎｎ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：１８１−２０７（
１９９４）；ルッパート（Ｒｕｐｐｅｒｔ）等，Ｃｅｌｌ ７４：９２９−９３
７（１９９３）；ロチュケ（Ｒｏｔｚｓｃｈｋｅ）等，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：
２５２−２５４（１９９０）；ビヨルクマン（Ｂｊｏｒｋｍａｎ）等，Ｎａｔｅ
ｒｅ ３２９：５１２−５１８（１９８７）；トラヴァーサリ（Ｔｒａｖｅｒｓ
ａｒｉ）等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１４５３−１４５７（１９９２）を
参照。前記参考文献は、特定のＨＬＡ分子に対する特定のペプチドの特異性が判
明すれば、ある特定のペプチドは一つのＨＬＡ分子に対して結合するが、他のＨ
ＬＡ分子に対しては結合しないと推測される、ということを教示している。異な
る個体は異なるＨＬＡ表現型を有することから、このことは重要なことである。
結果として、ある特定のペプチドが、ある特定のＨＬＡ分子に対するパートナー
であると同定されたことが、診断上および治療上の効果を有しているとしても、
その効果はその特定のＨＬＡ表現型を有する個体に対してしか適切でないのであ
る。細胞異常は一つの特定のＨＬＡ表現型に限られるわけではないため、また、
標的化療法には、問題の異常細胞の表現型に関する相当な知識が必要をされるた
め、この分野において更なる研究を行う必要がある。
【０００５】 参考文献として本出願にその内容を合体させる、１９９３年１月２２日出願の
米国特許出願第００８，４４６号には、ＭＡＧＥ−１発現産物がプロセシングさ
れて第２のＴＲＡになるという事実が開示されている。この第２のＴＲＡはＨＬ
Ａ−Ｃｗ★１６０１分子によって提示される。この開示は一定のＴＲＡＰから複
数のＴＲＡが生じることができ、そのそれぞれがＭＨＣ分子に対する結合につい
てのモチーフルールを満足するであろうということを示している。
米国特許出願第００８，４４６号には、ＭＡＧＥ−１発現産物がプロセシングさ
れて第２のＴＲＡになるという事実が開示されている。この第２のＴＲＡはＨＬ
Ａ−Ｃｗ★１６０１分子によって提示される。この開示は一定のＴＲＡＰから複
数のＴＲＡが生じることができ、そのそれぞれがＭＨＣ分子に対する結合につい
てのモチーフルールを満足するであろうということを示している。
【０００６】 ここで、参考文献として本出願にその内容を合体させる、１９９２年１２月２
２日出願の米国特許出願第９９４，９２８号には、いくらかの正常細胞（例えば
メラノサイト）によって産生される分子である、チロシナーゼが、腫瘍細胞中に
おいてプロセシングされてＨＬＡ−Ａ２分子によって提示されるペプチドを生じ
るということを教示している。
２日出願の米国特許出願第９９４，９２８号には、いくらかの正常細胞（例えば
メラノサイト）によって産生される分子である、チロシナーゼが、腫瘍細胞中に
おいてプロセシングされてＨＬＡ−Ａ２分子によって提示されるペプチドを生じ
るということを教示している。
【０００７】 参考文献として本出願にその内容全体を合体させる、米国特許第５，６８３，
８８６号には、チロシナーゼ由来ではない、第２のＴＲＡがＨＬＡ−Ａ２分子に
よって提示されるということが教示されている。このＴＲＡはＴＲＡＰ由来であ
るが、非−ＭＡＧＥ遺伝子によってコードされている。この開示はある特定のＨ
ＬＡ分子が異なる起源に由来するＴＲＡを提示することができるということを示
している。
８８６号には、チロシナーゼ由来ではない、第２のＴＲＡがＨＬＡ−Ａ２分子に
よって提示されるということが教示されている。このＴＲＡはＴＲＡＰ由来であ
るが、非−ＭＡＧＥ遺伝子によってコードされている。この開示はある特定のＨ
ＬＡ分子が異なる起源に由来するＴＲＡを提示することができるということを示
している。
【０００８】 参考文献として本出願にその内容を合体させる、１９９３年出願の米国特許第
５，５７１，７１１号には、関連のない腫瘍拒絶抗原前駆体である、いわゆる、
“ＢＡＧＥ”前駆体が記載されている。ＢＡＧＥ前駆体はＭＡＧＥファミリーと
は関連していない。
５，５７１，７１１号には、関連のない腫瘍拒絶抗原前駆体である、いわゆる、
“ＢＡＧＥ”前駆体が記載されている。ＢＡＧＥ前駆体はＭＡＧＥファミリーと
は関連していない。
【０００９】 参考文献として本出願にその両方の内容を合体させる、米国特許出願第０８／
０９６，０３９号および第０８／２５０，１６２号には、非−関連ＴＲＡＰ前駆
体ＧＡＧＥも開示されている。
０９６，０３９号および第０８／２５０，１６２号には、非−関連ＴＲＡＰ前駆
体ＧＡＧＥも開示されている。
【００１０】 先に引用した論文、特許、および特許出願に示されている研究は、大部分は、
ＭＡＧＥファミリーの遺伝子、およびそれとは関連のないＢＡＧＥおよびＧＡＧ
Ｅ遺伝子について扱っている。しかしながら、更に別の、細胞によって発現され
る腫瘍拒絶抗原前駆体が存在することを示している。これらの腫瘍拒絶抗原前駆
体は“ＴＡＧＥ”腫瘍拒絶抗原前駆体と称される。それらはＭＡＧＥファミリー
の遺伝子、ＢＡＧＥファミリーの遺伝子、ＧＡＧＥファミリーの遺伝子とはホモ
ロジーを示さない。したがって、本発明はＴＡＧＥ ＴＲＡＰをコードする遺伝
子、コード化される腫瘍拒絶抗原前駆体、それら由来の腫瘍拒絶抗原、遺伝子断
片、および、それらの利用方法に関する。
ＭＡＧＥファミリーの遺伝子、およびそれとは関連のないＢＡＧＥおよびＧＡＧ
Ｅ遺伝子について扱っている。しかしながら、更に別の、細胞によって発現され
る腫瘍拒絶抗原前駆体が存在することを示している。これらの腫瘍拒絶抗原前駆
体は“ＴＡＧＥ”腫瘍拒絶抗原前駆体と称される。それらはＭＡＧＥファミリー
の遺伝子、ＢＡＧＥファミリーの遺伝子、ＧＡＧＥファミリーの遺伝子とはホモ
ロジーを示さない。したがって、本発明はＴＡＧＥ ＴＲＡＰをコードする遺伝
子、コード化される腫瘍拒絶抗原前駆体、それら由来の腫瘍拒絶抗原、遺伝子断
片、および、それらの利用方法に関する。
【００１１】 本発明を更に詳細に以下の開示において説明する。
【００１２】好適実施例の詳細説明 例１ 本例は本発明に従って核酸分子の単離について記載する。
【００１３】 １つのｃＤＮＡライブラリーを標準的方法論に従って、精巣組織から調製した
。詳細には、ポリＡ ＲＮＡを商業的に利用可能なオリゴ−ｄＴ ｍＲＮＡ抽出
キットを使用して単離した。ＲＮＡを単離したら、オリゴ−ｄＴプライマーおよ
び標準的方法を使用してｃＤＮＡに変換した。
。詳細には、ポリＡ ＲＮＡを商業的に利用可能なオリゴ−ｄＴ ｍＲＮＡ抽出
キットを使用して単離した。ＲＮＡを単離したら、オリゴ−ｄＴプライマーおよ
び標準的方法を使用してｃＤＮＡに変換した。
【００１４】 このｃＤＮＡをＮｏｔＩ／ＢｓｔＸアダプターに連結させて、既知の発現ベク ターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐに挿入し、その結果得られた組換えプラスミドをＥ．
ｃｏｌｉ ＤＨ５αＦ´ＩＱにエレクトロポレーションした。その後、参考文献
として本出願に合体される、サムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）等，分子クロー
ニング：実験室マニュアル（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）ｐ．１．９４に従って、トランスフェク
ションされた細菌をアンピシリン（５０ｕｇ／ｍｌ）で選抜し、ナイロンメンブ
ラン上で平板培養し、複写した。要するに、細菌を固体培地上におかれたメンブ
ラン上で平板培養し、コロニーが肉眼でみえるとき、第２のメンブランを第１の
メンブラン上に置く。いくらかの細菌は第２のメンブラン上に固着し、かくて、
複写を生成する。
ｃｏｌｉ ＤＨ５αＦ´ＩＱにエレクトロポレーションした。その後、参考文献
として本出願に合体される、サムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）等，分子クロー
ニング：実験室マニュアル（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）ｐ．１．９４に従って、トランスフェク
ションされた細菌をアンピシリン（５０ｕｇ／ｍｌ）で選抜し、ナイロンメンブ
ラン上で平板培養し、複写した。要するに、細菌を固体培地上におかれたメンブ
ラン上で平板培養し、コロニーが肉眼でみえるとき、第２のメンブランを第１の
メンブラン上に置く。いくらかの細菌は第２のメンブラン上に固着し、かくて、
複写を生成する。
【００１５】 前処理の後、前記メンブランをハイブリダイゼーション実験に使用した。詳細
には、これらを６５℃で１０％デキストラン溶液、１％ＳＤＳおよび１ＭＮａＣ
ｌ溶液と接触させ、32Ｐオリゴヌクレオチドプローブと接触させた。前記プロー
ブは本出願にその内容を合体させる米国特許第５，５７１，７１１号の配列認識
番号１のヌクレオチド１００−３８５からなり、続いて、室温で５分間の２回に
洗浄を行い、続いて、６０℃で２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳで３０分間の洗浄を行っ
た。
には、これらを６５℃で１０％デキストラン溶液、１％ＳＤＳおよび１ＭＮａＣ
ｌ溶液と接触させ、32Ｐオリゴヌクレオチドプローブと接触させた。前記プロー
ブは本出願にその内容を合体させる米国特許第５，５７１，７１１号の配列認識
番号１のヌクレオチド１００−３８５からなり、続いて、室温で５分間の２回に
洗浄を行い、続いて、６０℃で２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳで３０分間の洗浄を行っ
た。
【００１６】 陽性クローンのうちの一つを部分的にシークエンシングした。４８２塩基対の
部分的配列が配列認識番号１として示される。これは、既知の配列と、また、ハ
イブリダイゼーションプローブ由来のｃＤＮＡ配列ともホモロジーを示さなかっ
た。低度のストリンジェントな条件のためにハイブリダイゼーションがおこった
。
部分的配列が配列認識番号１として示される。これは、既知の配列と、また、ハ
イブリダイゼーションプローブ由来のｃＤＮＡ配列ともホモロジーを示さなかっ
た。低度のストリンジェントな条件のためにハイブリダイゼーションがおこった
。
【００１７】例２ 以後、ＴＡＧＥと称させる単離核酸分子が遺伝子ファミリーに属するかを判定
するための実験を行った。これを行うために、メラノーマ細胞ラインＭＺ２−Ｍ
ＥＬ（参考文献として本出願にその開示内容を合体させる、米国特許第５，３４
２，７７４号に記載）からのゲノムＤＮＡをＥｃｏＲＩで消化した。配列認識番
号１に基づいたヌクレオチドプローブを調製し、それは配列認識番号１のヌクレ
オチド１６６−４４６からなり、ゲノム消化物のサザンブロッティングにおいて
使用した。ストリンジェントな条件（０．２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳ、６０℃で２
０分間）を使用し、それぞれ３．５および６．５ｋｂの２つのバンドが観察され
た。前記実験を、ＨｉｎｄIII消化を使用して繰り返し行い、そして、４つのバ ンドが観察された。２つのバンドが１２ｋｂより長く、他の二つは５および７キ
ロベース長であった。これらの結果は、恐らくこれらがＴＡＧＥ遺伝子ファミリ
ーであることを示している。
するための実験を行った。これを行うために、メラノーマ細胞ラインＭＺ２−Ｍ
ＥＬ（参考文献として本出願にその開示内容を合体させる、米国特許第５，３４
２，７７４号に記載）からのゲノムＤＮＡをＥｃｏＲＩで消化した。配列認識番
号１に基づいたヌクレオチドプローブを調製し、それは配列認識番号１のヌクレ
オチド１６６−４４６からなり、ゲノム消化物のサザンブロッティングにおいて
使用した。ストリンジェントな条件（０．２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳ、６０℃で２
０分間）を使用し、それぞれ３．５および６．５ｋｂの２つのバンドが観察され
た。前記実験を、ＨｉｎｄIII消化を使用して繰り返し行い、そして、４つのバ ンドが観察された。２つのバンドが１２ｋｂより長く、他の二つは５および７キ
ロベース長であった。これらの結果は、恐らくこれらがＴＡＧＥ遺伝子ファミリ
ーであることを示している。
【００１８】例３ ＴＡＧＥ遺伝子が正常または癌性の細胞および組織において発現するかどうか
を判定する研究を実行した。これを行うために、全ＲＮＡを標準的なグアニジン
−イソチオシアネート法を使用して抽出した。ｃＤＮＡを確保すべく、逆転写が
オリゴ−ｄＴプライマーを使用して２ｕｇのＲＮＡで行われた。１００ｎｇの全
ＲＮＡ（１０4 ｃｅｌｌｓ）に対応するｃＤＮＡ量をＰＣＲにより３０サイクル
で増幅し、ＰＣＲでの増幅の前に、９４℃で５分間、７３℃での処理を行なった
。１サイクルを９４℃で１分、５９℃で２分、そして７３℃で２分と定義した。
プライマーはそれぞれ配列認識番号１のヌクレオチド配列１６６−１８７とヌク
レオチド配列４２５−４４６の相補鎖（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）からなる。予想
されるＰＣＲ増幅産物は２８１塩基対長である。
を判定する研究を実行した。これを行うために、全ＲＮＡを標準的なグアニジン
−イソチオシアネート法を使用して抽出した。ｃＤＮＡを確保すべく、逆転写が
オリゴ−ｄＴプライマーを使用して２ｕｇのＲＮＡで行われた。１００ｎｇの全
ＲＮＡ（１０4 ｃｅｌｌｓ）に対応するｃＤＮＡ量をＰＣＲにより３０サイクル
で増幅し、ＰＣＲでの増幅の前に、９４℃で５分間、７３℃での処理を行なった
。１サイクルを９４℃で１分、５９℃で２分、そして７３℃で２分と定義した。
プライマーはそれぞれ配列認識番号１のヌクレオチド配列１６６−１８７とヌク
レオチド配列４２５−４４６の相補鎖（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）からなる。予想
されるＰＣＲ増幅産物は２８１塩基対長である。
【００１９】 増幅の後、増幅産物をアガロースゲル上でサイズ分画した。ヒトβ−アクチン
のＰＣＲ増幅をコントロールとして使用した。
のＰＣＲ増幅をコントロールとして使用した。
【００２０】 試験された２０の正常な成人の組織タイプのうちで、精子および精巣のみが陽
性であった。試験された６の胎児組織のうちのいずれも陽性ではなかった。試験
された２２の腫瘍タイプのうち、精上皮腫において強い発現が見られ、そして、
メラノーマ、肉腫、頭部および首部扁平上皮細胞癌および神経芽細胞腫において
も発現が見られた。１５のタイプの腫瘍細胞ラインを試験したところ、肉腫、神
経芽細胞腫、胸膜の中皮腫および甲状腺癌の細胞ラインが陽性であった。
性であった。試験された６の胎児組織のうちのいずれも陽性ではなかった。試験
された２２の腫瘍タイプのうち、精上皮腫において強い発現が見られ、そして、
メラノーマ、肉腫、頭部および首部扁平上皮細胞癌および神経芽細胞腫において
も発現が見られた。１５のタイプの腫瘍細胞ラインを試験したところ、肉腫、神
経芽細胞腫、胸膜の中皮腫および甲状腺癌の細胞ラインが陽性であった。
【００２１】 上記諸例は腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする核酸分子の単離を示している。し
かしながら、この“ＴＲＡＰ”をコードする分子は前述した諸文献に記載されて
いる以前に開示されたＭＡＧＥ、ＢＡＧＥまたはＧＡＧＥをコードする配列のい
ずれとも、または、他の既知の遺伝子いずれとも相同性を見いだせなかった。し
たがって、本発明の一態様は配列認識番号１に示すヌクレオチド配列を有する単
離核酸分子、および、ＴＲＡをコードする配列認識番号１の断片または一部分、
すなわち、それらは、しばしば“ミニ遺伝子”およびＴＡＧＥタンパク質の免疫
学的活性部位をコードする核酸分子の断片または一部分と称される、である。こ
の配列はＭＡＧＥ、ＢＡＧＥまたはＧＡＧＥをコードする配列ではない。このこ
とは引用した諸文献において記載されているこれら遺伝子のすべての配列と比較
することによって明らかである。腫瘍拒絶抗原前駆体をコードし、そして、スト
リンジェントな条件の下、配列認識番号１のヌクレオチド配列を有する核酸分子
とハイブリダイズする核酸分子配列も本発明の一部分である。ここで使用される
学術用語“ストリンジェントは条件”とは、当該技術において、よく知られてい
るパラメーターをいう。より詳細には、ここで使用されるストリンジェントな条
件とは、３．５ｘＳＳＣ、１ｘデンハルト溶液（０．０２％フィコール、０．０
２％ポリビニルピロリドン、０．０２％ＢＤＡ）、２５ｍＭＮａＨ2ＰＯ4、ｐＨ
７．０、０．５％ＳＤＳ、２ｍＭＥＤＴＡ中でのハイブリダイゼーションを指し
、続いて、６５℃で、２ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤＳでの１５分間の２回の洗浄を
行い、続いて、６５℃で、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳでの１５分間の１回
の洗浄を行った。同程度、または、より高度な程度のストリンジェントな条件を
もたらすために使用可能なその他の条件、試薬等もある。このような条件は当業
者には、よく知られており、したがって、ここでは述べない。
かしながら、この“ＴＲＡＰ”をコードする分子は前述した諸文献に記載されて
いる以前に開示されたＭＡＧＥ、ＢＡＧＥまたはＧＡＧＥをコードする配列のい
ずれとも、または、他の既知の遺伝子いずれとも相同性を見いだせなかった。し
たがって、本発明の一態様は配列認識番号１に示すヌクレオチド配列を有する単
離核酸分子、および、ＴＲＡをコードする配列認識番号１の断片または一部分、
すなわち、それらは、しばしば“ミニ遺伝子”およびＴＡＧＥタンパク質の免疫
学的活性部位をコードする核酸分子の断片または一部分と称される、である。こ
の配列はＭＡＧＥ、ＢＡＧＥまたはＧＡＧＥをコードする配列ではない。このこ
とは引用した諸文献において記載されているこれら遺伝子のすべての配列と比較
することによって明らかである。腫瘍拒絶抗原前駆体をコードし、そして、スト
リンジェントな条件の下、配列認識番号１のヌクレオチド配列を有する核酸分子
とハイブリダイズする核酸分子配列も本発明の一部分である。ここで使用される
学術用語“ストリンジェントは条件”とは、当該技術において、よく知られてい
るパラメーターをいう。より詳細には、ここで使用されるストリンジェントな条
件とは、３．５ｘＳＳＣ、１ｘデンハルト溶液（０．０２％フィコール、０．０
２％ポリビニルピロリドン、０．０２％ＢＤＡ）、２５ｍＭＮａＨ2ＰＯ4、ｐＨ
７．０、０．５％ＳＤＳ、２ｍＭＥＤＴＡ中でのハイブリダイゼーションを指し
、続いて、６５℃で、２ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤＳでの１５分間の２回の洗浄を
行い、続いて、６５℃で、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳでの１５分間の１回
の洗浄を行った。同程度、または、より高度な程度のストリンジェントな条件を
もたらすために使用可能なその他の条件、試薬等もある。このような条件は当業
者には、よく知られており、したがって、ここでは述べない。
【００２２】 上記諸例から、本発明が前記配列の発現ベクター中における使用と、更に、原
核（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、または、真核（例えば、ＣＨＯ、または、ＣＯＳ
細胞）のいずれであってもよい宿主細胞および細胞ラインをトランスフェクショ
ンまたはトランスホーメンションするためこれらの配列の使用とを含むことも理
解されるであろう。ヒト白血球抗原が腫瘍拒絶抗原前駆体由来の腫瘍拒絶抗原を
提示することを見いだしたので、前記発現ベクターはＨＬＡ分子をコードする核
酸配列を含むことができる。ベクターが両方のコード配列を含む状況においては
、通常には、いずれも発現しない細胞をトランスフォーメーションまたはトラン
スフェクションするように使用することもできる。前記腫瘍拒絶抗原前駆体コー
ド配列は、例えば、宿主細胞が既にＨＬＡ分子を発現する場合において、単独で
使用することが可能である。もちろん、使用可能な具体的な宿主細胞についての
限定はない。ベクターは前記２つのコード配列を含むので、それらをＨＬＡの発
現しない宿主細胞において使用することができる。
核（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、または、真核（例えば、ＣＨＯ、または、ＣＯＳ
細胞）のいずれであってもよい宿主細胞および細胞ラインをトランスフェクショ
ンまたはトランスホーメンションするためこれらの配列の使用とを含むことも理
解されるであろう。ヒト白血球抗原が腫瘍拒絶抗原前駆体由来の腫瘍拒絶抗原を
提示することを見いだしたので、前記発現ベクターはＨＬＡ分子をコードする核
酸配列を含むことができる。ベクターが両方のコード配列を含む状況においては
、通常には、いずれも発現しない細胞をトランスフォーメーションまたはトラン
スフェクションするように使用することもできる。前記腫瘍拒絶抗原前駆体コー
ド配列は、例えば、宿主細胞が既にＨＬＡ分子を発現する場合において、単独で
使用することが可能である。もちろん、使用可能な具体的な宿主細胞についての
限定はない。ベクターは前記２つのコード配列を含むので、それらをＨＬＡの発
現しない宿主細胞において使用することができる。
【００２３】 本発明は技術者がそれによって所望の単数又は複数の発現ベクターを調製する
ことが可能な、いわゆる、発現キットをも含む。このような発現キットは前述し
たコード配列の各々の少なくとも個別の部分を含む。前述した必要な配列が含ま
れる限り、所望の場合に他の要素を追加することもできる。
ことが可能な、いわゆる、発現キットをも含む。このような発現キットは前述し
たコード配列の各々の少なくとも個別の部分を含む。前述した必要な配列が含ま
れる限り、所望の場合に他の要素を追加することもできる。
【００２４】 本発明の核酸分子とＴＲＡＰとを前述したＭＡＧＥ、ＢＡＧＥおよびＧＡＧＥ
物質から区別するために、本発明をＴＡＧＥファミリー遺伝子およびＴＲＡＰと
称する。従って、“ＴＡＧＥ”をここで使用するときは、ＴＡＧＥはここで記載
された配列によってコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体を指す。“ＴＡＧＥコード
分子”とこれに類似の学術用語とは、前記核酸分子自身を記載するのに使用され
る。
物質から区別するために、本発明をＴＡＧＥファミリー遺伝子およびＴＲＡＰと
称する。従って、“ＴＡＧＥ”をここで使用するときは、ＴＡＧＥはここで記載
された配列によってコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体を指す。“ＴＡＧＥコード
分子”とこれに類似の学術用語とは、前記核酸分子自身を記載するのに使用され
る。
【００２５】 ここで記載される、本発明は多数の利用方法を有し、いくつがここに記載され
ている。第１に、本発明により、当業者は、ＴＲＡＰの発現によって特徴付けら
れる疾患を診断することができる。これらの方法は、前記ＴＲＡＰ遺伝子の発現
の判定、および／または、ＨＬＡによって提示されるＴＲＡ等の、それらに由来
するＴＲＡの発現の判定を含む。前者の場合、このような判定は、ポリメラ−ゼ
連鎖反応を含むすべての標準的核酸測定アッセイ、または標識化ハイブリダイゼ
ーションプローブによるアッセイ等により、行うことができる。後者の場合には
、抗体等の、ＴＲＡとＨＬＡとの複合体に対する結合パートナーによるアッセイ
が特に好ましい。判定の別の方法としては、上述したタイプのＴＮＦまたは51Ｃ
ｒ放出アッセイがある。
ている。第１に、本発明により、当業者は、ＴＲＡＰの発現によって特徴付けら
れる疾患を診断することができる。これらの方法は、前記ＴＲＡＰ遺伝子の発現
の判定、および／または、ＨＬＡによって提示されるＴＲＡ等の、それらに由来
するＴＲＡの発現の判定を含む。前者の場合、このような判定は、ポリメラ−ゼ
連鎖反応を含むすべての標準的核酸測定アッセイ、または標識化ハイブリダイゼ
ーションプローブによるアッセイ等により、行うことができる。後者の場合には
、抗体等の、ＴＲＡとＨＬＡとの複合体に対する結合パートナーによるアッセイ
が特に好ましい。判定の別の方法としては、上述したタイプのＴＮＦまたは51Ｃ
ｒ放出アッセイがある。
【００２６】 前記ＴＲＡＰ遺伝子の単離により、ＴＲＡＰ分子自身、特に、配列認識番号１
によってコードされる前記アミノ酸配列を含むＴＲＡＰ分子を単離することも可
能になる。これらの単離された分子は、ＴＲＡとして、または、ＴＲＡとＨＬＡ
の複合体として提示された場合、ＴＲＡＰ分子の発現によって特徴付けられる疾
患の治療に有用なワクチンを製造するため、アジュバンド等の物質と結合させる
こともできる。加えて、ワクチンは、非増殖性の癌細胞、非増殖性のトランスフ
ェクション体等、その表面にＴＲＡ／ＨＬＡ複合体を提示する細胞から調製する
ことができる。細胞がワクチンとして使用されるすべてのケースにおいて、これ
らはＣＴＬ応答を供給するのに必要な前記成分の一つまたは両方をコードする配
列でトランスフェクションされた細胞またはトランスフェクション無しで両方の
分子を発現する細胞とすることができる。更に、前記ＴＲＡＰ分子、その関連す
るＴＲＡ、およびＴＲＡとＨＬＡの複合体は当該技術においてよく知られている
標準的な手法を使用して抗体、またはＣＴＬの産生に利用することができる。こ
のようなワクチンはＧＭ−ＣＦＳ等の１つ、または、より多数のサイトカイン類
を含んでもよい。
によってコードされる前記アミノ酸配列を含むＴＲＡＰ分子を単離することも可
能になる。これらの単離された分子は、ＴＲＡとして、または、ＴＲＡとＨＬＡ
の複合体として提示された場合、ＴＲＡＰ分子の発現によって特徴付けられる疾
患の治療に有用なワクチンを製造するため、アジュバンド等の物質と結合させる
こともできる。加えて、ワクチンは、非増殖性の癌細胞、非増殖性のトランスフ
ェクション体等、その表面にＴＲＡ／ＨＬＡ複合体を提示する細胞から調製する
ことができる。細胞がワクチンとして使用されるすべてのケースにおいて、これ
らはＣＴＬ応答を供給するのに必要な前記成分の一つまたは両方をコードする配
列でトランスフェクションされた細胞またはトランスフェクション無しで両方の
分子を発現する細胞とすることができる。更に、前記ＴＲＡＰ分子、その関連す
るＴＲＡ、およびＴＲＡとＨＬＡの複合体は当該技術においてよく知られている
標準的な手法を使用して抗体、またはＣＴＬの産生に利用することができる。こ
のようなワクチンはＧＭ−ＣＦＳ等の１つ、または、より多数のサイトカイン類
を含んでもよい。
【００２７】 “疾患”をここで使用する場合、腫瘍拒絶抗原前駆体が発現され、プロセシン
グされるすべての病的な状態を指す。このような疾患の一例は癌、特にメラノー
マである。メラノーマは色素を生産する細胞の癌としてよく知られている。
グされるすべての病的な状態を指す。このような疾患の一例は癌、特にメラノー
マである。メラノーマは色素を生産する細胞の癌としてよく知られている。
【００２８】 当開示に基づく治療アプローチは、ＴＲＡを提示する細胞の溶解を導く、患者
の免疫システムによる応答を前提としている。このようなアプローチの一つは、
複合体に対して特異的なＣＴＬを、問題の表現型の異常細胞を有する患者に、投
与することである。ＣＴＬをイン・ヴィトロで開発することは当業者の技術の範
囲内である。詳細には、血液細胞等のサンプル細胞を、前記複合体を提示し、特
異的なＣＴＬの増殖を促進することができる細胞に接触させる。標的細胞は上述
したタイプのＣＯＳ細胞等のトランスフェクション体とすることができる。これ
らのトランスフェクション体はその表面に所望の複合体を提示し、関心のＣＴＬ
と結合したとき、その増殖を刺激する。
の免疫システムによる応答を前提としている。このようなアプローチの一つは、
複合体に対して特異的なＣＴＬを、問題の表現型の異常細胞を有する患者に、投
与することである。ＣＴＬをイン・ヴィトロで開発することは当業者の技術の範
囲内である。詳細には、血液細胞等のサンプル細胞を、前記複合体を提示し、特
異的なＣＴＬの増殖を促進することができる細胞に接触させる。標的細胞は上述
したタイプのＣＯＳ細胞等のトランスフェクション体とすることができる。これ
らのトランスフェクション体はその表面に所望の複合体を提示し、関心のＣＴＬ
と結合したとき、その増殖を刺激する。
【００２９】 養子免疫細胞移入と称される治療法方法学（グリーンバーグ（Ｇｒｅｅｎｂｅ
ｒｇ）等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６（５）：１９１７（１９８６）；リッデ
ル（Ｒｉｄｄｅｌ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：２３８（７−１０−９２）；
リンチ（Ｌｙｎｃｈ）等，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１４０３−１４
１０（１９９１）；カスト（Ｋａｓｔ）等，Ｃｅｌｌ ５９：６０３−６１４（
１１−１７−８９））について詳述すると、所望の複合体を提示する細胞をＣＴ
Ｌと結合させると、これに対して特異的なＣＴＬの増殖を導く。次に、この増殖
したＣＴＬを、ある特定の複合体を提示している異常細胞のいくつかによって特
徴付けられる細胞異常を有する患者に投与する。ここで、前記複合体には適切な
ＨＬＡ分子を含む。前記ＣＴＬは異常細胞を溶解し、それによって、所望の治療
目的を達成する。
ｒｇ）等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６（５）：１９１７（１９８６）；リッデ
ル（Ｒｉｄｄｅｌ）等，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：２３８（７−１０−９２）；
リンチ（Ｌｙｎｃｈ）等，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１４０３−１４
１０（１９９１）；カスト（Ｋａｓｔ）等，Ｃｅｌｌ ５９：６０３−６１４（
１１−１７−８９））について詳述すると、所望の複合体を提示する細胞をＣＴ
Ｌと結合させると、これに対して特異的なＣＴＬの増殖を導く。次に、この増殖
したＣＴＬを、ある特定の複合体を提示している異常細胞のいくつかによって特
徴付けられる細胞異常を有する患者に投与する。ここで、前記複合体には適切な
ＨＬＡ分子を含む。前記ＣＴＬは異常細胞を溶解し、それによって、所望の治療
目的を達成する。
【００３０】 前述の治療法は患者の異常細胞のうち、少なくともいくつかが適切なＨＬＡ／
ＴＲＡ複合体を提示することを前提としている。これは、特定のＨＬＡ分子を提
示する細胞を同定する方法、および、前記適切な配列、この場合にはＴＡＧＥ配
列、を有するＤＮＡを発現する細胞を同定する方法が当該技術において非常によ
く知られているため、非常に容易に判定することができる。関連する複合体を提
示する細胞が、上述したスクリーニング方法論によって同定されると、これらを
、患者からのサンプル、前記サンプルはＣＴＬを含む、と結合させることができ
る。もし、複合体提示細胞が前記混合ＣＴＬサンプルよって溶解されるのであれ
ば、ＴＡＧＥ由来の腫瘍拒絶抗原が提示されていると推定することが可能であり
、その患者は、上述の治療アプローチにとって適切な候補である。
ＴＲＡ複合体を提示することを前提としている。これは、特定のＨＬＡ分子を提
示する細胞を同定する方法、および、前記適切な配列、この場合にはＴＡＧＥ配
列、を有するＤＮＡを発現する細胞を同定する方法が当該技術において非常によ
く知られているため、非常に容易に判定することができる。関連する複合体を提
示する細胞が、上述したスクリーニング方法論によって同定されると、これらを
、患者からのサンプル、前記サンプルはＣＴＬを含む、と結合させることができ
る。もし、複合体提示細胞が前記混合ＣＴＬサンプルよって溶解されるのであれ
ば、ＴＡＧＥ由来の腫瘍拒絶抗原が提示されていると推定することが可能であり
、その患者は、上述の治療アプローチにとって適切な候補である。
【００３１】 養子免疫細胞移入のみが本発明によって利用可能な唯一の治療法ではない。種
々のアプローチを使用して、生体内でＣＴＬを刺激することもできる。一つのア
プローチ、すなわち、前記複合体を発現する非増殖性細胞の使用は既に記載した
。このアプローチにおいて使用される細胞は、照射を受けたメラノーマ細胞、ま
たは、前記複合体の提示に必要な前記遺伝子の一つまたは両方によってトランス
フェクションされた細胞等の、前記複合体を通常時において発現する細胞を使用
することができる。チェン（Ｃｈｅｎ）等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ８８ １１０−１１４（１９９１年１月）にはアプローチの具体
例が例証されており、ここには、治療法におけるＨＰＶＥ７ペプチドを発現する
トランスフェクションされた細胞の使用が示されている。種々の細胞タイプを使
用することができる。同様に、関心の遺伝子の一つまたは両方を担持するベクタ
ーを使用することができる。ウィルス性またはバクテリア性のベクターが特に好
ましい。これらのシステムにおいて、関心の遺伝子は、例えば、参考文献として
本出願にその内容を合体させる、レイトン（Ｌａｙｔｏｎ）等，Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ ８７（２）：１７１−１７８（１９９６）、ギルバート（Ｇｉｌｂｅｒ
ｔ）等，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（１２）：１２８０−１２８４に
記載される、ワクシニアウィルス、アデノウィルス、レトロウィルス、エルジニ
アウィルス、または、Ｔｙウィルス様粒子、または、細菌ＢＣＧによって運ばれ
、そしてこれらの物質が事実上宿主細胞に“感染”する。リポソ−ム、またはカ
トニック（ｃａｔｏｎｉｃ）脂質等、他のタイプの担体を使用することもできる
。その結果、得られる細胞は、関心の複合体を提示し、自己由来のＣＴＬによっ
て認識され、そしてそのＣＴＬは増殖する。類似の効果は、前記腫瘍拒絶抗原ま
たは前記前駆体自身を、関心のＨＬＡ／ペプチド複合体を提示するＨＬＡ提示細
胞への結合を促進するためのアジュバンドと組み合わせることによっても達成す
ることができる。前記ＴＲＡＰは、ＨＬＡ分子のペプチドパートナーを生成する
ために、プロセシングされるが、他方、前記ＴＲＡは更なるプロセシングを必要
とせずに提示される。
々のアプローチを使用して、生体内でＣＴＬを刺激することもできる。一つのア
プローチ、すなわち、前記複合体を発現する非増殖性細胞の使用は既に記載した
。このアプローチにおいて使用される細胞は、照射を受けたメラノーマ細胞、ま
たは、前記複合体の提示に必要な前記遺伝子の一つまたは両方によってトランス
フェクションされた細胞等の、前記複合体を通常時において発現する細胞を使用
することができる。チェン（Ｃｈｅｎ）等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ８８ １１０−１１４（１９９１年１月）にはアプローチの具体
例が例証されており、ここには、治療法におけるＨＰＶＥ７ペプチドを発現する
トランスフェクションされた細胞の使用が示されている。種々の細胞タイプを使
用することができる。同様に、関心の遺伝子の一つまたは両方を担持するベクタ
ーを使用することができる。ウィルス性またはバクテリア性のベクターが特に好
ましい。これらのシステムにおいて、関心の遺伝子は、例えば、参考文献として
本出願にその内容を合体させる、レイトン（Ｌａｙｔｏｎ）等，Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ ８７（２）：１７１−１７８（１９９６）、ギルバート（Ｇｉｌｂｅｒ
ｔ）等，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（１２）：１２８０−１２８４に
記載される、ワクシニアウィルス、アデノウィルス、レトロウィルス、エルジニ
アウィルス、または、Ｔｙウィルス様粒子、または、細菌ＢＣＧによって運ばれ
、そしてこれらの物質が事実上宿主細胞に“感染”する。リポソ−ム、またはカ
トニック（ｃａｔｏｎｉｃ）脂質等、他のタイプの担体を使用することもできる
。その結果、得られる細胞は、関心の複合体を提示し、自己由来のＣＴＬによっ
て認識され、そしてそのＣＴＬは増殖する。類似の効果は、前記腫瘍拒絶抗原ま
たは前記前駆体自身を、関心のＨＬＡ／ペプチド複合体を提示するＨＬＡ提示細
胞への結合を促進するためのアジュバンドと組み合わせることによっても達成す
ることができる。前記ＴＲＡＰは、ＨＬＡ分子のペプチドパートナーを生成する
ために、プロセシングされるが、他方、前記ＴＲＡは更なるプロセシングを必要
とせずに提示される。
【００３２】 本発明のその他の態様も当業者には明確であり、ここで繰り返す必要はない。
【００３３】 使用した学術用語および表現は、記載のための学術用語として使われたもので
あり、限定的なものではない。したがって、これらの学術用語および表現の使用
にあたって、図示および記載された特徴またはその一部分のいかなる均等物も除
外する意図はなく、本発明の範囲内で種々の変更が可能であると認識される。
あり、限定的なものではない。したがって、これらの学術用語および表現の使用
にあたって、図示および記載された特徴またはその一部分のいかなる均等物も除
外する意図はなく、本発明の範囲内で種々の変更が可能であると認識される。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 605 ＴＨＩＲＤ ＡＶＥＮＵＥ，ＮＥＷ ＹＯＲＫ，ＮＥＷ ＹＯＲＫ 10158， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭ ＥＲＩＣＡ (72)発明者 ブーン‐ファラー，ティエリー ベルギー ビー‐1200 ブリュッセル ア ベニュー・ヒポクラート 74 ユーシーエ ル 7459 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 CA04 CA09 CA12 DA02 EA04 GA11 HA13 HA14 HA17 4B063 QA01 QQ08 QQ43 QQ53 QR08 QR14 QR32 QR40 QR42 QR56 QR62 QS16 QS25 QS34 QX01 4B064 AG31 CA10 CA19 CC01 CC24 DA01 DA13 4B065 AA90X AA93Y AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4H045 AA11 BA10 CA40 DA86 EA20 EA50 FA74
Claims (20)
- 【請求項１】 本質的に配列認識番号１に示すヌクレオチド配列からなる単
離核酸分子。 - 【請求項２】 配列認識番号１に示す核酸分子とストリンジェントな条件で
ハイブリダイズする相補的な配列であり、かつ、腫瘍拒絶抗原前駆体をコードす
る単離核酸分子。 - 【請求項３】 配列認識番号１のヌクレオチド配列によってコードされる蛋
白質のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする単離核酸分子。 - 【請求項４】 請求項１に記載の核酸分子に対して十分に相補的な単離ｍＲ
ＮＡ分子。 - 【請求項５】 請求項１に記載の核酸分子でトランスフェクションまたはト
ランスフォーメーションされた宿主細胞。 - 【請求項６】 請求項２に記載の核酸分子でトランスフェクションまたはト
ランスフォーメーションされた宿主細胞。 - 【請求項７】 請求項３に記載の核酸分子でトランスフェクションまたはト
ランスフォーメーションされた宿主細胞。 - 【請求項８】 プロモーターに操作可能にリンクした請求項１に記載の単離
核酸分子を有する発現ベクター。 - 【請求項９】 プロモーターに操作可能にリンクした請求項２に記載の単離
核酸分子を有する発現ベクター。 - 【請求項１０】 プロモーターに操作可能にリンクした請求項３に記載の単
離核酸分子を有する発現ベクター。 - 【請求項１１】 前記宿主細胞が哺乳類の細胞である請求項５に記載の宿主
細胞。 - 【請求項１２】 前記宿主細胞が哺乳類の細胞である請求項６に記載の宿主
細胞。 - 【請求項１３】 前記宿主細胞が哺乳類の細胞である請求項７に記載の宿主
細胞。 - 【請求項１４】 ヒト白血球抗原をコードする核酸分子を有する請求項８に
記載の発現ベクター。 - 【請求項１５】 ヒト白血球抗原をコードする核酸分子を有する請求項９に
記載の発現ベクター。 - 【請求項１６】 ヒト白血球抗原をコードする核酸分子を有する請求項１０
に記載の発現ベクター。 - 【請求項１７】 次の各要素の個別部分を有する発現キット （ｉ）請求項１に記載の単離核酸分子、および （ｉｉ）ヒト白血球抗原をコードする核酸分子。
- 【請求項１８】 次の各要素の個別部分を有する発現キット （ｉ）請求項２に記載の単離核酸分子、そして （ｉｉ）ヒト白血球抗原をコードする核酸分子。
- 【請求項１９】 次の各要素の個別部分を有する発現キット （ｉ）請求項３に記載の単離核酸分子、そして （ｉｉ）ヒト白血球抗原をコードする核酸分子。
- 【請求項２０】 請求項１、２または３に記載の核酸分子によってコードさ
れる単離腫瘍拒絶抗原前駆体。
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