JP2002501031A

JP2002501031A - ウイルスおよび寄生体感染ならびに癌の治療のために細胞性免疫を促進するためのｉｌ−１１の使用方法

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Publication number: JP2002501031A
Application number: JP2000528302A
Authority: JP
Inventors: ウィリアム・エル・トレピッチオ; ジュディス・エル・ブリス; マーゴット・オトゥール; アンドリュー・ジェイ・ドーナー
Original assignee: ジェネティックス・インスチチュート・インコーポレーテッド
Priority date: 1998-01-23
Filing date: 1999-01-12
Publication date: 2002-01-15
Also published as: EP1049484A1; AU764292B2; WO1999037322A1; EP1049484B1; ATE262919T1; DE69916022D1; DE69916022T2; CA2318382A1; AU2222999A

Abstract

(57)【要約】本発明によれば、インフルエンザのごとき急性ウイルス性疾患、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヘルペス、肝炎および帯状疱疹のごとき慢性ウイルス性疾患、マラリアおよび結核のごとき寄生体感染ならびに癌を包含する、細胞障害性Ｔ細胞活性の増強が有益であることが示されている種々の疾患の治療方法が提供される。さらに、本発明により、上記疾患を有する患者由来の細胞からのＴ細胞活性をエクスビボにおいて増大させ、ついで、患者に修飾した細胞を再導入することによる治療方法も提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野一般的には、本発明は、種々のウイルスおよび寄生体感染ならびに癌の治療方
法、特に、細胞障害性Ｔ細胞の生成を促進することによる方法に関する。

【０００２】発明の背景インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）は、種々の造血細胞および免疫細胞系
に対して活性を有する多機能サイトカインである。その巨核球、骨髄および赤血
球前駆細胞に対する影響のほかに、ＩＬ−１１は活性化マクロファージからの前
炎症サイトカンの産生を強力にダウンレギュレーションする。したがって、ＩＬ
−１１は、急性および慢性炎症に関する動物モデルにおいて炎症を抑制し、治癒
を促進することが示されている。細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）はＣＤ８＋エフェクター細胞であり、その主目的
はＭＨＣクラスＩに限定的な様式で標的細胞を認識して死滅させることである。
細胞毒性の機構は、電子豊富な細胞質顆粒の放出ならびに標的細胞に対するＣＤ
９５Ｌ（ＦａｓＬ）とＣＤ９５（Ｆａｓ）との相互作用である。ＣＴＬの免疫監
視目的はウイルスおよび寄生体のごとき広範な種々の細胞内病原体からの宿主の
防御を生じさせる。さらに、ＣＤ８＋Ｔ細胞による腫瘍抗原の認識は腫瘍に対す
る細胞特異的免疫応答の誘導を生じさせる（Zinkernagel, R. M. and Hengartne
r, H., Antiviral Immunity Immunology Today 18: 258-260 (1997)）。これらの疾患およびそれらの徴候を以下にまとめる。本発明方法によれば、Ｉ
Ｌ−１１がインビボまたはエクスビボにおいて投与され、宿主のＣＴＬ応答は促
進され免疫監視が増強されて以下の疾患が治療される。

【０００３】発明の概要驚くべきことに、本発明者らは、ＩＬ−１１が細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の
生成を改善する能力を示すことを見出した。ＩＬ−２およびＩＬ−１１の存在下
で再刺激された細胞は、ＩＬ−１のみで再刺激された細胞よりも有意に増強され
た抗原特異的細胞溶解活性を示す。さらにそのうえ、インビトロでの再刺激の間
にＩＬ−１１は、抗原による刺激に応答してインターフェロンγ（ＩＦＮγ）の
レベルおよびＩＦＮ産生細胞数を増加させた。他の系において、ＩＬ−１１はＩ
Ｌ−１２のごとき他の因子と相乗作用して、ＣＴＬの数および溶解活性を増大さ
せた。これらの研究は、ＩＬ−１１はＣＴＬの生成を促進することができ、細胞
内病原体に対する防衛において役割を果たしていることを示す。よって、ＩＬ−
１１はＣＴＬ誘導におけるヘルパー因子として機能しうる。

【０００４】本発明によれば、インフルエンザのごとき急性ウイルス性疾患、エプスタイン
−バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヘルペス、肝炎
および帯状疱疹のごとき慢性ウイルス性疾患、マラリアおよび結核のごとき寄生
体感染ならびに癌を包含する、細胞障害性Ｔ細胞活性の増強が有益であることが
示されている種々の疾患の治療方法が提供される。さらに、本発明により、上記
疾患を有する患者由来の細胞からのＴ細胞活性をエクスビボにおいて増大させ、
ついで、患者に修飾した細胞を再導入することによる治療方法も提供される。本発明によれば、ＩＬ−１１、アナログ、およびそれらの誘導体が、予防的に
、あるいは上記疾患に関連した徴候の発生時に投与される。ＩＬ−１１を単独あ
るいは上記疾患に関連した徴候を改善するのに有用な他の慣用的な作用剤ととも
に適当な医薬担体中に入れてＩＬ−１１を投与することができる。好ましい具体例において、ＩＬ−１１を、ウイルスまたは細菌病原体に対する
ワクチンとともに共投与することができる。もう１つの好ましい具体例において
、ＩＬ−１１を抗腫瘍剤と共投与することができ、癌または他の腫瘍発生に苦し
んでいる患者に投与することができる。

【０００５】発明の詳細な説明本発明により、インフルエンザのごとき急性ウイルス性疾患、ＥＢＶ、ＨＩＶ
、ヘルペス、肝炎および帯状疱疹のごとき慢性ウイルス性疾患、マラリアおよび
結核のごとき寄生体感染ならびに癌を包含する、細胞障害性Ｔ細胞活性の増強が
有益であることが示された種々の疾患の治療方法が提供される。さらに、本発明
により、上記疾患を有する患者由来の細胞からのＴ細胞活性をエクスビボにおい
て増大させ、ついで、患者に修飾した細胞を再導入することによる治療方法も提
供される。休止Ｂ細胞、マクロファージ、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞はＩＬ−
１１受容体α鎖を発現し、これらの細胞受容体とＩＬ−１１との潜在的相互作用
が示される。免疫調節蛋白としてのＩＬ−１１の役割を理解するために、種々の
リンパ球集団と直接相互作用するＩＬ−１１の能力を試験した。ＩＬ−１１は抗
原提示細胞（ＡＰＣ）、マクロファージと直接相互作用して、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ
−１ｂおよびＩＬ−１２のごときＬＰＳにより誘導される前炎症サイトカイン産
生を阻害する。またＩＬ−１１は活性化されたネズミのＣＤ４＋Ｔ細胞の精製さ
れた集団と直接相互作用して、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３お
よびＩＮＦ−ｇのごときサイトカインの産生を促進または阻害する。これらの結
果は、ＡＰＣを介して直接的または間接的にＴ細胞ヘルパー活性を促進するＩＬ
−１１の能力を示す。マクロファージおよびＣＤ４＋Ｔ細胞のエフェクター活性
を転調させる能力がＩＬ−１１に存在する場合、ＡＰＣを介して直接的または間
接的にＣＤ８＋細胞障害性Ｔ細胞エフェクターに影響するＩＬ−１１の能力が試
験される。インフルエンザウイルスで免疫されたＢａｌｂ／ｃマウス由来の脾臓
細胞を単離し、インフルエンザ由来のＭＨＣクラスＩ制限ペプチドを用いてイン
ビボにおいて７日間再刺激した。ＩＬ−２およびｒｈＩＬ−１１の両方の存在下
で再刺激された細胞は、ＩＬ−１のみの存在下で再刺激された細胞と比較して抗
原特異的細胞溶解活性の有意な増大を示した。また、ｒｈＩＬ−１１のみの存在
下で再刺激された細胞は、抗原特異的細胞溶解活性の有意な増加を示した。この
ことは、この系においてｒｈＩＬ−１１が外因性ＩＬ−２の代用となりうること
を示す。インビトロでの再刺激中におけるｒｈＩＬ−１１の添加もまた、抗原に
より引き起こされるＩＦＮγ産生およびＩＮＦγ分泌細胞の数を増加させた。

【０００６】インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）は、原始的なリンパ造血前駆細胞を刺
激し、他の造血性成長因子と相乗作用して巨核球の分化および成熟を刺激する多
面発現性サイトカインである。ＩＬ−１１は、１９９１年５月３０日に公開され
た国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６８０３ならびに１９９３年６月１日に付
与された米国特許第５２１５８９５号に詳細に説明されている。クローン化され
たヒトＩＬ−１１はすでにATCC, Parklawn Drive, Rockville, Marylandに１９９０年３月３０日にＡＴＣＣ６８２８４として寄託されている。そのうえ、１９９３年１２月１４日に付与された米国特許第５２７０１８１号および１９９４
年３月８日に付与された米国特許第５２９２６４６号に記載されたように、ＩＬ
−１１は別の蛋白との融合蛋白としても組換え的に製造されうる。現在用いるこ
とのできる慣用的な遺伝子組換え法を用いることにより種々の宿主細細胞におい
てＩＬ−１１を製造することができる。さらに、ＩＬ−１１を種々の細胞系から
得ることができ、例えば、ヒト肺繊維芽細胞系ＭＲＣ−５（ＡＴＣＣ受託番号Ｃ
ＣＬ１７１）およびヒト栄養芽細胞系ＴＰＡ３０−１（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ１５８３）から得ることができる。ヒトＩＬ−１１をコードするｃＤＮＡならびに推定アミノ酸配列（アミノ酸１から１９９まで）がProc. Natl. Acad. Sc
i. USA 87: 7512 (1990)に記載されている。上記米国特許第５２９２６４６号に
は、成熟形態のＩＬ−１１（アミノ酸２２〜１９９）のＮ末端プロリンが除去さ
れた（アミノ酸２３〜１９９）ｄｅｓ−Ｐｒｏ形態のＩＬ−１１が記載されてい
る。当業者に理解されるように、ＩＬ−１１活性を保持しているいずれの形態の
ＩＬ−１１も、本発明に有用である。

【０００７】組換え法のほかに、既知の慣用的な化学合成によりＩＬ−１１を製造してもよ
い。本発明において有用なポリペプチドを合成的手段により構築する方法は当業
者に知られている。合成的に構築されたサイトカインポリペプチド配列は、一次
、二次、または三次構造ならびにコンホーメーション的特徴を天然サイトカイン
ポリペプチドと共有することにより、それらに共通した生物学的活性を有すると
考えられる。かかる合成的に構築されたサイトカインポリペプチド配列またはそ
のフラグメントはその機能をそのままあるいは部分的に有しており、本発明方法
に使用できる。よって、それらを、本発明において有用な、天然の精製サイトカ
インの生物学的に活性のある置換物または免疫学的置換物として本発明において
用いてもよい。

【０００８】これらのサイトカインまたはその活性フラグメントの蛋白、ペプチドまたはＤ
ＮＡ配列中における修飾によって、本発明方法において使用できる蛋白を得ても
よい。当業者は既知方法を用いてかかる修飾サイトカインを製造することができ
る。サイトカイン配列、例えばＩＬ−１１配列中の修飾は、コーディング配列中
の１個またはそれ以上の選択アミノ酸残基の置換、挿入または欠失を包含しうる
。かかる置換、挿入または欠失のために突然変異法は当業者によく知られている
（例えば、米国特許第４５１８５８４号参照）。

【０００９】本明細書記載のように治療的に有用でありうる、サイトカインポリペプチドに
配列に対する他の特異的変異は、例えば、１個またはそれ以上の糖鎖付加部位の
挿入を包含する。アスパラギン結合糖鎖付加認識部位を、ペプチド配列中のアミ
ノ酸あるいはＤＮＡ中のヌクレオチドの欠失、置換または付加により配列に挿入
することができる。Ｏ−結合糖の付加により修飾分子のいずれの部位にもかかる
変化を導入することができる。かかる変化したヌクレオチドまたはペプチド配列
の発現により、それらの部位において糖鎖付加されていてもよい変種が得られる
。

【００１０】活性を全体的または部分的に保持または増強しており、本発明方法において有
用であると考えられる選択サイトカイン配列のさらなるアナログおよび誘導体を
、当業者は容易に製造することができる。１のかかる修飾は、サイトカイン配列
中に存在するリジン残基に対するポリエチレングリコールの結合あるいはＰＥＧ
を結合させる慣用的方法による配列のＰＥＧ誘導体化であってもよい。

【００１１】これらの選択サイトカインのさらなるアナログを、それらをコードするＤＮＡ
配列における対立遺伝子、あるいはそれらをコードするＤＮＡ配列中の誘発され
た変異により特徴づけてもよい。上記刊行物に開示されたすべてのアナログ（ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件下または非ストリンジェント条件
下（Sambrook et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 2d edit., C
old Spring Harbor Laboratory, New York (1989)）で開示サイトカイン配列にハイブリダイゼーションしうるＤＮＡ配列により特徴づけられるものを包含）は
同様に本発明において有用であると考えられる。

【００１２】さらに、ＩＬ−１１受容体と相互作用でき、かくしてＩＬ−１１の効果をブロ
ック（アンタゴニスト）する、あるいはＩＬ−１１の効果と同じまたは類似の効
果を生じる（アゴニスト）ＩＬ−１１のペプチドリガンドまたは小型分子アナロ
グも、当該分野において存在する。かかるリガンドおよび小型分子を得てアッセ
イする方法はＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／１９７５４に開示されている（その開示
を参照により本明細書に含める）。かかるリガンドおよび小型分子アナログもま
た、本発明方法において有用である。

【００１３】１のサイトカインの配列またはその配列の生物学的に活性のあるフラグメント
を別のサイトカインまたは蛋白性治療剤に融合させることにより製造される、例
えばＩＬ−６に融合したＩＬ−１１のごとき融合分子もこれらの方法において有
用であると考えられる（例えば、１９９２年３月１９日に公開されたＰＣＴ／Ｕ
Ｓ９１／０６１８６（ＷＯ９２／０４４５５）に記載された融合方法参照）。別
法として、サイトカインの混合物を本発明方法により投与してもよい。

【００１４】よって、本発明は、インフルエンザのごとき急性ウイルス性疾患、ＥＢＶ、Ｈ
ＩＶ、ヘルペス、肝炎および帯状疱疹のごとき慢性ウイルス性疾患、マラリアお
よび結核のごとき寄生体感染ならびに癌の患者を治療することを包含し、さらに
、医薬担体中の有効量のＩＬ−１１を投与することを包含する。処置は治療的ま
たは予防的であってよく、あるいは上記疾患に関連した徴候が生じた時に行うも
のであってもよい。

【００１５】好ましい具体例において、上記疾患を引き起こすようなウイルスまたは細菌病
原体に対するワクチンとともにＩＬ−１１を共投与する。もう１つの好ましい具
体例において、抗腫瘍剤とともにＩＬ−１１を共投与し、癌または他の腫瘍発生
に苦しむ患者に投与できる。

【００１６】適当な医薬上許容される担体はＩＬ−１１の投与を容易にするものであり、当
該分野においてよく知られている。典型的な担体は、滅菌セイライン、ラクトー
ス、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストリン、寒天、ペクチン
、ピーナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、および水を包含する。さらに、担体また
は希釈剤は、モニステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル単独
またはロウとの混合物のごとき時間遅延材料を包含する。さらに、除放性ポリマ
ー処方を用いることもできる。適当な持続放出マトリックスは以下のものの１つ
またはそれ以上との混合物となった有効成分を含有する：ナトリウムベントナイ
ト、エチルセルロース、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、アジピン酸、
フマル酸、ポリエチレングリコール、脱アセチル化キチン、および酢酸セルロー
ス。適当な保存料および／または安定化剤を含んでいてもよい。

【００１７】別法として、当業者に明らかなように、ＩＬ−１１を、上記疾患に関連した徴
候改善することにおいて有用な他の生物学的因子および／または慣用的作用剤と
混合することができる。例えば、ＧＣＳＦ、ＧＭＣＳＦまたはＭＣＳＦのごとき
ＣＳＦとともに、エリスロポイエチン、ヘマトポイエチンとともに、あるいはＩ
Ｌ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ
−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４またはＩＬ
−１５のごきインターロイキンとともにＩＬ−１１を共投与することができる。
好ましい具体例は、ＩＬ−１２、ＩＬ−６またはＩＬ−２との共投与を包含する
。適当なＩＬ−１１処方は、例えば、５ｍｇのＩＬ−１１、３．１０ｍｇのヒス
チジン、および２２．５ｍｇのグリシンを含有し、例えば、１ｍｌの注射用水で
復元されうる凍結乾燥粉末である。当業者に明らかなように、他の適当な処方は
本発明方法において等しく有用である。

【００１８】上記疾患の治療において、いずれの適当な経路によってもＩＬ−１１を投与す
ることができるが、特定疾患には特定経路が好ましく、例えば、全身投与、すな
わち非経口投与が好ましい。非経口投与のうち、皮下および静脈経路が好ましい
。ＩＬ−１１を静脈から投与することができ、あるいは鼻粘膜または結膜または
口腔粘膜に対しては局所処方を、それぞれ水性ドロップ処方または洗口剤として
適用することができる。局所表面反応においては局所処方が好ましいが、より重
症の全身的疾患においては皮下または静脈注射のごとき非経口経路が好ましい。
ＩＬ−１１の適当な用量は、皮下注射の場合１〜５０μｇ／ｋｇを１日複数回投
与し、重症のＴ細胞状態の短期間の治療には、５０ないし１００μｇ／ｋｇに増
量して皮下注射または静脈注射する。一般的には、サイトカイン、例えば、ＩＬ
−１１の適当な用量は広範囲であり、好ましくは、１ないし１００μｇ／体重ｋ
ｇの間である。ＩＬ−１１の別の適当な用量は約１０ないし５０μｇ／ｋｇの範
囲であってもよく、約５０μｇ／ｋｇ、好ましくは２５μｇ／ｋｇである。所望
ならば、これらの用量を単位にすることができる。慣用的には、単位は、適当な
アッセイにおいて最大刺激の半分の刺激を生じさせるポリペプチド濃度として説
明され、例えば、ＩＬ−１１に関してはＰＣＴ／ＵＳ９０／０６８０３に記載さ
れたＴ１１６５アッセイがある。１日ないし６カ月にわたり毎日投与してもよく
、あるいは治療すべき疾患の性質に応じて医師が標準的試験により容易に確認で
きることであるが、必要かつ安全と考えられるかぎり投与してもよい。適当な場
合には、用量を上方または下方修正してもよく、例えば、２５μｇ／ｋｇのＩＬ
−１１を１週間、数週間または多週間にわたり毎日投与する投与規則であっても
よい。治療すべき疾患に関連したマーカーを測定することにより治療の進行を適
切にモニターして、かかる用量が例えばパーフォリン（perforin）（または対応
マーカー）の増加を引き起こすかどうかを調べ、増加しない場合には、効果的が
得られるまでさらなる治療期間において２倍量を投与し、マーカーレベルを測定
する。

【００１９】別の治療的処置モードは、罹病患者由来のＣＴＬをエクスビボで増殖させるこ
とである。例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を患者の血液から単離し、異な
る用量のｒｈＩＬ−１１を用いてインビトロにおいて刺激してＣＴＬの生成を促
進することができる。適当なインビトロ用量は１０ｎｇ／ｍｌ〜５００ｎｇ／ｍ
ｌが望ましい。細胞障害性Ｔ細胞アッセイを行って最大効果用量を決定すること
ができる。その後、細胞を患者に再注入する。

【００２０】以下の実施例は、本発明方法、特にインフルエンザのごとき急性ウイルス性疾
患、ＥＢＶ、ＨＩＶ、ヘルペス、肝炎および帯状疱疹のごとき慢性ウイルス性疾
患、マラリアおよび結核のごとき寄生体感染ならびに癌の治療におけるＩＬ−１
１の使用を説明する。さらに、上記疾患を有する患者由来の細胞からのＴ細胞活
性をエクスビボにおいて増大させ、ついで、患者に修飾した細胞を再導入するこ
とによる治療方法も本発明により提供される。しかしながら、本明細書を読んだ
当業者には、本発明に対する多くの修飾および変更が明らかであろう。例えば、
ＩＬ−１１は、当該分野において現在開示されている配列により生成される蛋白
、ならびにＩＬ−１１と実質的に同様の活性を保持している上記修飾体により特
徴づけられる蛋白を包含することを、当業者は理解するであろう。さらに、上記
ＩＬ−１１の修飾体やアナログは本発明方法において有用であることが理解され
よう。よって、実施例は本発明の範囲を何ら限定しない。

【００２１】実施例１ＩＬ−１１受容体α鎖はＢおよびＴリンパ球上に発現される製造者（Miltenyi Biotec, Sunnyvale, CA）のプロトコールに従って、抗−マ
ウスＢ２２０、ＣＤ４またはＣＤ８抗体に結合したＭＡＣＳ（磁気的細胞ソーテ
ィング）マイクロビーズを用いるポジテイブセレクションを用いてネズミＢ細胞
およびＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞をＢａｌｂ／ｃ脾臓から精製した。製造
者（Tel-test, Inc., TX）のプロトコールに従って、RNA Stat-60を用いて上記のごとく精製細胞集団からＲＮＡを抽出した。３７℃でＲＮＡを３０分間ＤＮａ
ｓｅ（RQ1 DNase, Promega, Madison, WI）処理し、ついで、７５℃で５分間熱不活性化した。４０μｇのＲＮＡ（ＧＡＰＤＨに対して１０ｎｇ）ならびにネズ
ミＧＡＰＤＨ、ＩＬ−１１受容体α鎖、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−６受容体また
はｇｐ１３０に対して特異的なオリゴペアーを用いてＲＴ−ＰＣＲ（GeneAmp RN
A PCR Kit, Perkin Elmer）を行って、エチジウム染色アガロースゲル上で可視化した（図示）。逆転写酵素不存在下でのＲＮＡ試料に対するＰＣＲ反応は各オ
リゴペアーに関して陰性であり、ＤＮＡ混入に関する対照として役立った。当該
実施例は、ＩＬ−１１受容体α鎖ｍＲＮＡがＣＤ４＋、ＣＤ８＋およびＢ２２０
＋リンパ球の高度に精製された集団において検出されることを示す（図１参照）
。

【００２２】実施例２ＩＬ−１１はバルク脾臓培養において抗原特異的細胞溶解活性を増大
させるＩＬ−２、あるいはＩＬ−２およびＩＬ−１１で処理された細胞由来の脾臓性
バルク培養物（７日培養）を系列希釈して、１ｘ１０⁴個の⁵¹Ｃｒ標識Ｐ８１５．Ｐ１ＨＴＲ細胞に添加し、ＮＰペプチド存在下または不存在下で１時間パルス
を与えた。細胞を４時間インキュベーションした。上清を集め、⁵¹Ｃｒの遊離を
調べた。標的細胞に対する最大溶解は２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００により誘導された。溶解％＝［（ＣＰＭ−ＮＰペプチドでパルスされた標的の自発的ＣＰＭ
）／（ＮＰペプチドでパルスされた標的細胞の最大ＣＰＭ−ＮＰペプチドでパル
スされた標的の自発的ＣＰＭ）］ｘ１００。特異的溶解％＝（ＮＰペプチドでパ
ルスされた標的細胞に対する溶解％）−（対照標的細胞の溶解％）。実施例は、
ＩＬ−１１がＮＰペプチド特異的細胞障害性Ｔ細胞の特異的溶解活性％を有意に
上昇させうることを示す。５０：１の標的細胞に対するエフェクターの割合の場
合、ＩＬ−２のみで処理された細胞と比較すると、ＩＬ−２およびＩＬ−１１で
処理された細胞において特異的溶解％が２５０％促進されることが観察される（
図２参照）。

【００２３】実施例３バルク脾臓培養中の抗原特異的細胞溶解活性の発生においてＩＬ−１
１は外因性ＩＬ−２の代替物となりうるｍｕＩＬ−２、ｍｕＩＬ−６、あるいはｒｈＩＬ−１１で処理された細胞由来
の脾臓性バルク培養物（７日培養）を系列希釈して、１ｘ１０⁴個の⁵¹Ｃｒ標識Ｐ８１５．Ｐ１ＨＴＲ細胞に添加し、ＮＰペプチド存在下または不存在下で１時
間パルスを与えた。細胞を４時間インキュベーションした。上清を集め、⁵¹Ｃｒ
の遊離を調べた。特異的溶解％を計算して図３のごとき結果となった。実施例は
、外因性ＩＬ−２不存在下におけるＩＬ−１１のみでの細胞の処理は、ＮＰペプ
チド特異的細胞障害性Ｔ細胞の溶解活性％を有意に増大させることを示す。５０
：１の標的細胞に対するエフェクターの割合の場合、ＩＬ−１１処理細胞と外因
性添加サイトカインなしで処理された細胞との間に、特異的溶解％の７倍の増加
が観察される（図３参照）。

【００２４】実施例４ＩＬ−１１はインフルエンザ特異的ＩＦＮγ産生細胞数を増加させる滅菌平底９６ウェルプレート（Costar）を、３７℃において抗ＩＦＮγ抗体（
Ｒ４６Ａ２，１０μｇ／ｍｌ，５０μｌ／ウェル）で２時間コーティングし、３
７℃においてＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で１時間ブロッ
クし、ついで、ＰＢＳで洗浄した。脾臓細胞をＲＰＭＩ＋１０％ＦＣＳ中に系列希釈したものをプレートに添加し、３７℃で１６時間インキュベーションし、
ついで、６回洗浄した。ビオチン化抗ＩＦＮγ抗体ＸＧＭ．１（１．１９μｇ／
ｍｌ）を各ウェルに添加し、室温で９０分インキュベーションした。さらに４回
洗浄した後、ストレプトアビジンアルカリ性ホスファターゼを添加し、室温で１
時間インキュベーションした。４回洗浄した後、１ｍｇ／ｍｌＢＣＩＰ（５− ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート）含有０．１Ｍ２−アミノ −２−メチル−１−プロパノール，ｐＨ１０．５中０．６％低融点アガロース溶
液とともにプレートを発色させた。プレートを室温で１６時間インキュベーショ
ンし、ついで、スポットをカウントした。実施例は、ＩＬ−１１がインフルエン
ザ特異的ＩＦＮγ産生細胞数を増加させることを示す。ＩＬ−２と１０ｎｇ／ｍ
ｌまたは１００ｎｇ／ｍｌいずれかのＩＬ−１１とで処理された細胞は、ＩＬ−
２のみで処理された細胞と比較すると、ＩＦＮγ産生細胞数を２〜３．５倍の増
加させた（図４参照）。

【００２５】実施例５ＩＬ−１１はインフルエンザ特異的ＣＴＬからのＩＦＮγ産生を増加
させるＥＬＩＳＡプレート（ＥＩＡ捕捉プレート,Costar）を、４℃において抗ＩＦＮγ抗体（Ｒ４６Ａ２，１０μｇ／ｍｌ，５０μｌ／ウェル）で１６時間コーテ
ィングし、３７℃においてＴＨＳＧ（Ｔｒｉｓ高塩濃度ゼラチン）で２時間ブロ
ックし、ついで、４回洗浄した。ＩＦＮγ対照上清のＰＢＳ＋１０％ＦＣＳ中への系列希釈物および未知試料のＰＢＳ＋１０％ＦＣＳ中への系列希釈物をプレートに添加し、室温で２時間インキュベーションし、ついで、４回洗浄した。
ビオチン化抗体ＸＧＭ．１（１．１９μｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加し、室温で
９０分インキュベーションした。さらに４回洗浄した後、暗所にてプレートをＡ
ＢＴＳ（Kirkegaard and Perry）とともに９分間発色させ、１％ＳＤＳで発色停止させた。Vmax kinetic microplate reader （Molecular Devices）を用いて
４０５ｎｍにける吸光度を調べた。実施例は、ＩＬ−１１がインフルエンザ特異
的ＣＴＬからのＩＦＮγ産生を増加させうることを示す。ＩＬ−２と１０ｎｇ／
ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌいずれかのＩＬ−１１とで処理された細胞のならし
培地中において、２〜４倍のＩＦＮγレベルの上昇がみられた（図５参照）。

【００２６】特定の方法および組成物に関して本発明を説明したが、当業者が本発明を考慮
して変更および修飾を行うであろうということが理解される。上記実施例で説明
した本発明における多くの修飾および変更が当業者によってなされ、結果的に、
請求の範囲における限定のみが本発明に課されるべきである。したがって、添付
した請求の範囲は、特許請求される本発明の範囲内にあるすべてのかかる均等な
発明を包含するものと考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ジュディス・エル・ブリスアメリカ合衆国01950マサチューセッツ州ニューベリーポート、ティットコーム・ストリート30番 (72)発明者マーゴット・オトゥールアメリカ合衆国02160マサチューセッツ州ニュートン、ケンジントン・ストリート72 番 (72)発明者アンドリュー・ジェイ・ドーナーアメリカ合衆国02173マサチューセッツ州レキシントン、バスキン・ロード20番Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA03 AA13 DA12 NA14 ZB092 ZB262 ZB332 ZB352 ZB382

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】薬理学的に有効な量のＩＬ−１１を投与することを含む、細
胞障害性Ｔ細胞の産生を誘導する方法。
【請求項２】細胞障害性Ｔ細胞がエクスビボにおいてＩＬ−１１蛋白で処
理される、請求項１の方法。
【請求項３】ＩＬ−１１蛋白をコードするＤＮＡ分子で細胞障害性Ｔ細胞
がトランスフェクションされ、ＩＬ−１１蛋白が産生される条件下で該細胞が培
養される、請求項１の方法。
【請求項４】急性ウイルス性疾患にかかっている患者にＩＬ−１１が投与
される、請求項１の方法。
【請求項５】寄生体感染にかかっている患者にＩＬ−１１が投与される、
請求項１の方法。
【請求項６】薬理学的に有効な量のＩＬ−１１を適当な細胞集団に投与す
ることを含む、細胞障害性Ｔ細胞活性の増強を誘導する方法。