JP2002325598A - エナンチオマー濃縮したアミノ酸の製法またはラセミ化法ならびにｎ−保護アミノ酸の保護基の切断法、および得られたアミノ酸の使用 - Google Patents
エナンチオマー濃縮したアミノ酸の製法またはラセミ化法ならびにｎ−保護アミノ酸の保護基の切断法、および得られたアミノ酸の使用Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ウレタンまたはカルバモイル保護基により保
護されたアミノ酸のラセミ体混合物から光学的に濃縮さ
れたアミノ酸を製造するための方法を提供すること。 【解決手段】 式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨであり、Ｒ１＝ＣＨ３、ＣＨ３Ｃ
Ｈ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ここでＸがＮＨ
であればＲ１はＨであってよく、Ｒ２は、天然または合
成アミノ酸のα−基を表す］の化合物を、Ｎ−アセチル
アミノ酸ラセマーゼ活性（ＡＡＲ）を示す酵素と、アミ
ノ酸アシラーゼ活性を示す酵素の存在下でまたは連続し
て反応させる、エナンチオマー濃縮されたアミノ酸の製
法。
護されたアミノ酸のラセミ体混合物から光学的に濃縮さ
れたアミノ酸を製造するための方法を提供すること。 【解決手段】 式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨであり、Ｒ１＝ＣＨ３、ＣＨ３Ｃ
Ｈ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ここでＸがＮＨ
であればＲ１はＨであってよく、Ｒ２は、天然または合
成アミノ酸のα−基を表す］の化合物を、Ｎ−アセチル
アミノ酸ラセマーゼ活性（ＡＡＲ）を示す酵素と、アミ
ノ酸アシラーゼ活性を示す酵素の存在下でまたは連続し
て反応させる、エナンチオマー濃縮されたアミノ酸の製
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、光学的に濃縮され
たアミノ酸の製造方法およびその使用に関する。特に方
法は、一方でラセミ化に関し、他方で特異的Ｎ−保護ラ
セミ体アミノ酸の光学的に純粋なアミノ酸への変換にお
ける、アシラーゼ／ラセマーゼ中での特異的Ｎ−保護ア
ミノ酸の脱保護に関する。
たアミノ酸の製造方法およびその使用に関する。特に方
法は、一方でラセミ化に関し、他方で特異的Ｎ−保護ラ
セミ体アミノ酸の光学的に純粋なアミノ酸への変換にお
ける、アシラーゼ／ラセマーゼ中での特異的Ｎ−保護ア
ミノ酸の脱保護に関する。
【０００２】光学的に純粋なアミノ酸は、化学合成なら
びに非経口栄養補給のための重要な出発物質である。光
学的に純粋なアミノ酸の製造に関する様々な方法が、当
業者に公知である。一方で触媒的に働き、他方で非常に
高いエナンチオマー濃度でアミノ酸を製造することが可
能であることから、好適な方法には、関連の酵素法が挙
げられる。
びに非経口栄養補給のための重要な出発物質である。光
学的に純粋なアミノ酸の製造に関する様々な方法が、当
業者に公知である。一方で触媒的に働き、他方で非常に
高いエナンチオマー濃度でアミノ酸を製造することが可
能であることから、好適な方法には、関連の酵素法が挙
げられる。
【０００３】アミノ酸アシラーゼが、実際には、Ｎ−ア
セチル−保護アミノ酸およびアミン／アルコールの分解
にのみ特異的であると考えられているにもかかわらず、
原則として、アミノ酸アシラーゼによりアセチル化アミ
ノ酸がＬ−アミノ酸に変換されることが知られている
（ＥＰ９９１１８８４４.２；A. S. Bommarius et al.,
Tetrahedron; Asymmetry, 1997, vol. 8, 3197〜320
0）。
セチル−保護アミノ酸およびアミン／アルコールの分解
にのみ特異的であると考えられているにもかかわらず、
原則として、アミノ酸アシラーゼによりアセチル化アミ
ノ酸がＬ−アミノ酸に変換されることが知られている
（ＥＰ９９１１８８４４.２；A. S. Bommarius et al.,
Tetrahedron; Asymmetry, 1997, vol. 8, 3197〜320
0）。
【０００４】多くのラセミ化法は、Ｄ−アセチル部分の
残留に使用できるようにも開発されてきた。ＤＥ１９９
３５２６８.２から、アシラーゼ／アセチルアミノ酸ラ
セマーゼ系との合弁により、アセチルアミノ酸ラセマー
ゼがアセチルメチオニンを完全にＬ−メチオニンへと変
換することが分かる。
残留に使用できるようにも開発されてきた。ＤＥ１９９
３５２６８.２から、アシラーゼ／アセチルアミノ酸ラ
セマーゼ系との合弁により、アセチルアミノ酸ラセマー
ゼがアセチルメチオニンを完全にＬ−メチオニンへと変
換することが分かる。
【０００５】Streptomyces atratus Y−５３（Tokuyama
et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 1994, 40, 83
5〜840）およびAmycolatopsis sp. ＴＳ−１−６０（To
kuyama et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 1995a,
42, 853〜859）のＮ−アセチルアミノ酸ラセマーゼ
（ＡＡＲ）が公知である。
et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 1994, 40, 83
5〜840）およびAmycolatopsis sp. ＴＳ−１−６０（To
kuyama et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 1995a,
42, 853〜859）のＮ−アセチルアミノ酸ラセマーゼ
（ＡＡＲ）が公知である。
【０００６】ＴＳ−１−６０は僅かな程度のＮ−カルバ
モイルアミノ酸をラセミ化できることが知られている。
モイルアミノ酸をラセミ化できることが知られている。
【０００７】にもかからわず、アセチル−保護またはカ
ルバモイル−保護アミノ酸以外のアミノ酸を、ラセミ化
しかつ更なる保護基の酵素切断により光学的に濃縮され
たアミノ酸へと光学的に完全に変換できる方法が必要と
されている。
ルバモイル−保護アミノ酸以外のアミノ酸を、ラセミ化
しかつ更なる保護基の酵素切断により光学的に濃縮され
たアミノ酸へと光学的に完全に変換できる方法が必要と
されている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の課題
は、ウレタンまたはカルバモイル保護基により保護され
たアミノ酸のラセミ体混合物から光学的に濃縮されたア
ミノ酸を製造するための方法を提供することである。
は、ウレタンまたはカルバモイル保護基により保護され
たアミノ酸のラセミ体混合物から光学的に濃縮されたア
ミノ酸を製造するための方法を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】この課題は、請求項１の
特徴を有する方法により達成される。請求項２は、本発
明の反応に関する第１の態様、すなわちラセミ化を示す
ものであり、請求項３は、本発明の反応に関する第２の
態様、すなわち保護基の切断を示すものである。請求項
４および５は、本発明の変換の特別な態様である。請求
項６は、この方法により製造されるアミノ酸の使用に関
する。
特徴を有する方法により達成される。請求項２は、本発
明の反応に関する第１の態様、すなわちラセミ化を示す
ものであり、請求項３は、本発明の反応に関する第２の
態様、すなわち保護基の切断を示すものである。請求項
４および５は、本発明の変換の特別な態様である。請求
項６は、この方法により製造されるアミノ酸の使用に関
する。
【００１０】式（Ｉ）：
【００１１】
【化４】
【００１２】［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨ、Ｒ１＝ＣＨ３、Ｃ
Ｈ３ＣＨ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ＸがＮＨ
の場合Ｒ１はＨであり、Ｒ２は、天然または合成アミノ
酸のα−基である］化合物を、Ｎ−アセチルアミノ酸ラ
セマーゼ活性（ＡＡＲ）を示す酵素と、アミノ酸アシラ
ーゼ活性を示す酵素の存在下に反応させるかまたは次い
でアミノ酸アシラーゼ活性を示す酵素と反応させること
から成るエナンチオマー濃縮されたアミノ酸の製法にお
いて、前記型の光学的に高く濃縮されたアミノ酸が、ア
セチルアミノ酸経路に負けずとも劣らない方法および手
段により製造され得ることは全くもって意外である（Ｄ
Ｅ１９９３５２６８.２）。従来、アミノ酸アシラーゼ
は化合物の前記クラスに属するアセチルアミノ酸ラセマ
ーゼといっしょに使用できることが知られている。
Ｈ３ＣＨ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ＸがＮＨ
の場合Ｒ１はＨであり、Ｒ２は、天然または合成アミノ
酸のα−基である］化合物を、Ｎ−アセチルアミノ酸ラ
セマーゼ活性（ＡＡＲ）を示す酵素と、アミノ酸アシラ
ーゼ活性を示す酵素の存在下に反応させるかまたは次い
でアミノ酸アシラーゼ活性を示す酵素と反応させること
から成るエナンチオマー濃縮されたアミノ酸の製法にお
いて、前記型の光学的に高く濃縮されたアミノ酸が、ア
セチルアミノ酸経路に負けずとも劣らない方法および手
段により製造され得ることは全くもって意外である（Ｄ
Ｅ１９９３５２６８.２）。従来、アミノ酸アシラーゼ
は化合物の前記クラスに属するアセチルアミノ酸ラセマ
ーゼといっしょに使用できることが知られている。
【００１３】本発明の別の態様は、一般式（Ｉ）：
【００１４】
【化５】
【００１５】［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨ、Ｒ１＝ＣＨ３、Ｃ
Ｈ３ＣＨ２、tert−ブチル、ベンジル、Ｒ２は、天然ま
たは合成アミノ酸のα−ラジカルを示す］のＮ−保護ア
ミノ酸の、Ｎ−アセチルアミノ酸ラセマーゼ活性を示す
酵素を使用することによるラセミ化法である。
Ｈ３ＣＨ２、tert−ブチル、ベンジル、Ｒ２は、天然ま
たは合成アミノ酸のα−ラジカルを示す］のＮ−保護ア
ミノ酸の、Ｎ−アセチルアミノ酸ラセマーゼ活性を示す
酵素を使用することによるラセミ化法である。
【００１６】さらに、本発明の別の態様は、式（Ｉ）：
【００１７】
【化６】
【００１８】［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨ、Ｒ１＝ＣＨ３、Ｃ
Ｈ３ＣＨ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ＸがＮＨ
である場合にＲ１はＨであり、Ｒ２は天然または合成ア
ミノ酸のα−基を示す］のＮ−保護アミノ酸から、アミ
ノ酸アシラーゼ活性を示す酵素を使用することにより保
護基を切断する方法である。
Ｈ３ＣＨ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ＸがＮＨ
である場合にＲ１はＨであり、Ｒ２は天然または合成ア
ミノ酸のα−基を示す］のＮ−保護アミノ酸から、アミ
ノ酸アシラーゼ活性を示す酵素を使用することにより保
護基を切断する方法である。
【００１９】本発明により相当して使用される酵素が前
記化合物を変換するという、前記のいずれの方法態様も
従来公知ではない。記載の酵素を化学的方法に上手く利
用することにより、導入部で述べたアミノ酸を製造でき
ることから、この新規活性が発見された。
記化合物を変換するという、前記のいずれの方法態様も
従来公知ではない。記載の酵素を化学的方法に上手く利
用することにより、導入部で述べたアミノ酸を製造でき
ることから、この新規活性が発見された。
【００２０】Ｎ−アセチルアミノ酸ラセマーゼという用
語は、光学的に濃縮されたＮ−アセチルアミノ酸をラセ
ミ化できる酵素のクラスを表す。酵素のタンパク質レベ
ルがそれぞれの高く類似しているので、原則的に、従来
技術において当業者に公知の全てのＮ−アセチルアミノ
酸を本発明の変換に利用できる。有利に使用されるラセ
マーゼは、Streptomyces atratusＹ−５３ならびにAmyc
olatopsis sp.ＴＳ−１−６０由来のものである。しか
し、方法は特に有利にAmycolatopsis orientalis亜種lu
rida由来のアセチルアミノ酸（配列番号２）を使用す
る、というのも、このクラスに属する他の典型的アセチ
ルアミノ酸の中で、金属イオン依存性および活性に関し
て優れているからである（ＥＰ９９１１８８４４.
２）。
語は、光学的に濃縮されたＮ−アセチルアミノ酸をラセ
ミ化できる酵素のクラスを表す。酵素のタンパク質レベ
ルがそれぞれの高く類似しているので、原則的に、従来
技術において当業者に公知の全てのＮ−アセチルアミノ
酸を本発明の変換に利用できる。有利に使用されるラセ
マーゼは、Streptomyces atratusＹ−５３ならびにAmyc
olatopsis sp.ＴＳ−１−６０由来のものである。しか
し、方法は特に有利にAmycolatopsis orientalis亜種lu
rida由来のアセチルアミノ酸（配列番号２）を使用す
る、というのも、このクラスに属する他の典型的アセチ
ルアミノ酸の中で、金属イオン依存性および活性に関し
て優れているからである（ＥＰ９９１１８８４４.
２）。
【００２１】本発明の範囲でアミノ酸アシラーゼという
用語は、立体特異的方法においてＮ−アシルアミノ酸を
脱アセチル化する酵素を表すものと理解される。原則的
に、この化合物クラスに属する従来技術において当業者
に公知のもでありかつ本発明の反応に好適な全ての典型
的アミノ酸アシラーゼを使用してよい。しかし、Asperg
illus oryzae由来のＬ−特異的アシラーゼＩまたはＤ−
特異的アシラーゼのようなアミノ酸アシラーゼを使用す
るのが有利である。いずれのアミノ酸アシラーゼもＡｍ
ａｎｏＣｏｍｐａｎｙから入手できる。反応に使用でき
る別のアシラーゼは以下の引用文献に記載される：Waka
yama M, Yada H, Kanda S, Hayashi S,Yatsuda Y, Saka
i K, Moriguchi M, Role of conserved histidine resi
dues inD-aminoacylase from Alcaligenes xylosocydan
s subsp. xylosoxydans A-6, Biosci. Biotechnol. Bio
chem. 2000 Jan; 64(1): 1〜8; Wakayama M, Hayashi
S, Yatsuda Y, Katsuno Y, Sakai K, Moriguchi M., Ov
erproduction of D-aminoacylase from Alcaligenes xy
losoxydans subsp. xylosoxydans A-6 in Escherichia
coli and its purification, Protein Expr. Purif. 19
96 Jun; 7(4):395〜9; Wakayama M, Katusno Y, Hayash
i S, Miyamoto Y, Sakai K, Moriguchi M., Cloning an
d sequencing of a gene encoding D- aminoacylase fr
om Alcaligenes xylosoxydans subsp. xylosoxydans A-
6 and expression of the gene inEscherichia coli, B
iosci. Biotechnol. Biochem. 1995 Nov; 59(11): 2115
〜9; Wakayama M, Ashika T, Miyamoto Y, Yoshikawa
T, Sonoda Y, Sakai K, Moriguchi M.; Primary struct
ure of N-acyl-D-glutamate amidohydrolase from Alca
ligenes xylosoxydans subsp. xylosoxydans A-6, J. B
iochem. (Tokyo). 1995 Jul; 118(1): 204〜9; Chen H
P, Wu SH, Wang KT., D-Aminoacylase from Alcaligene
s faecalis possesses novel activities on D-methion
ine, Bioorg. Med. Chem. 1994 Jan; 2(1): 1〜5; Mori
guchi M, skai K, Miyamoto Y, WakayamaM., Productio
n, purification, and characterization of D-aminoac
ylase from Alcaligenes xylosoxydans subsp. xylosox
ydans A-6, Biosci. Biotechnol.Biochem. 1993 Jul; 5
7(7): 1149〜52; Yang YB, Hsiao KM, Li H, Yano H, T
sugita A, Tsai YC, Characterization of D-aminoacyl
ase from Alcaligenes denitrificans DA181, Biosci.
Biotechnol. Biochem. 1992 Sep; 56(9): 1392〜5; Tsa
i YC, Lin CS, Tseng TH, Lee H, Wang YJ, Production
and immobilization of D-aminoacylase of Alcaligen
es faecalis DA1 for optical resolutionof N-acyl-DL
-amino acids, Enzyme Microb. Technol. 1992 May; 14
(5): 384〜9; Batisse N, Weigel P, Lecocq M, Sakany
an V., Two amino acid amidohydrolase genes encodin
g L-stereospecific carbamoylase and aminoacylase a
re organized in a common operon in Bacillus stearo
thermophilus, Appl. Environ. Microiol. 1997 Feb;63
(2): 763〜6; YandYB, Hu HL, Chang MC, Li H, TsaiY
C, Purification and characterization of L-aminoacy
lase from Alcaligenes denitrificans DA181, Biosci.
Biotechnol. Biochem. 1994 Jan;58(1):204〜5; Jakob
M, Miller YE, Rohm KH, Cloning and sequence analy
ses of cDNAs encoding aminoacylase I from porcine
kidney, Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1992 Dec; 373(1
2):1227〜31； Mitta M, Ohnogi H, Yamamoto A, Kato
I, Sakiyama F, Tsunasawa S., The primary structure
of porcine aminoacylase 1 deduced from cDNA seque
nce, J. Biochem. (Tokyo). 1992 Dec; 112(6): 737〜4
2;Bommarius AS, Drauz K, Klenk H, Wandery C., Oper
ational stability of enzymes. Acylase-catalyzed re
solution of N-acetyl amino acids to enanatiomerica
lly pure L-amino acids, Ann. N Y Acad. Sci. 1992 N
ov 30; 672: 127〜36; Gentzen I, Loffler HG, Schnei
der F., Aminoacylase from Aspergillus oryzae. Comp
arison with the pig kidney enzyme, Z. Naturforsch.
［C］. 1980Jul-Aug; 35(7〜8): 54〜50。
用語は、立体特異的方法においてＮ−アシルアミノ酸を
脱アセチル化する酵素を表すものと理解される。原則的
に、この化合物クラスに属する従来技術において当業者
に公知のもでありかつ本発明の反応に好適な全ての典型
的アミノ酸アシラーゼを使用してよい。しかし、Asperg
illus oryzae由来のＬ−特異的アシラーゼＩまたはＤ−
特異的アシラーゼのようなアミノ酸アシラーゼを使用す
るのが有利である。いずれのアミノ酸アシラーゼもＡｍ
ａｎｏＣｏｍｐａｎｙから入手できる。反応に使用でき
る別のアシラーゼは以下の引用文献に記載される：Waka
yama M, Yada H, Kanda S, Hayashi S,Yatsuda Y, Saka
i K, Moriguchi M, Role of conserved histidine resi
dues inD-aminoacylase from Alcaligenes xylosocydan
s subsp. xylosoxydans A-6, Biosci. Biotechnol. Bio
chem. 2000 Jan; 64(1): 1〜8; Wakayama M, Hayashi
S, Yatsuda Y, Katsuno Y, Sakai K, Moriguchi M., Ov
erproduction of D-aminoacylase from Alcaligenes xy
losoxydans subsp. xylosoxydans A-6 in Escherichia
coli and its purification, Protein Expr. Purif. 19
96 Jun; 7(4):395〜9; Wakayama M, Katusno Y, Hayash
i S, Miyamoto Y, Sakai K, Moriguchi M., Cloning an
d sequencing of a gene encoding D- aminoacylase fr
om Alcaligenes xylosoxydans subsp. xylosoxydans A-
6 and expression of the gene inEscherichia coli, B
iosci. Biotechnol. Biochem. 1995 Nov; 59(11): 2115
〜9; Wakayama M, Ashika T, Miyamoto Y, Yoshikawa
T, Sonoda Y, Sakai K, Moriguchi M.; Primary struct
ure of N-acyl-D-glutamate amidohydrolase from Alca
ligenes xylosoxydans subsp. xylosoxydans A-6, J. B
iochem. (Tokyo). 1995 Jul; 118(1): 204〜9; Chen H
P, Wu SH, Wang KT., D-Aminoacylase from Alcaligene
s faecalis possesses novel activities on D-methion
ine, Bioorg. Med. Chem. 1994 Jan; 2(1): 1〜5; Mori
guchi M, skai K, Miyamoto Y, WakayamaM., Productio
n, purification, and characterization of D-aminoac
ylase from Alcaligenes xylosoxydans subsp. xylosox
ydans A-6, Biosci. Biotechnol.Biochem. 1993 Jul; 5
7(7): 1149〜52; Yang YB, Hsiao KM, Li H, Yano H, T
sugita A, Tsai YC, Characterization of D-aminoacyl
ase from Alcaligenes denitrificans DA181, Biosci.
Biotechnol. Biochem. 1992 Sep; 56(9): 1392〜5; Tsa
i YC, Lin CS, Tseng TH, Lee H, Wang YJ, Production
and immobilization of D-aminoacylase of Alcaligen
es faecalis DA1 for optical resolutionof N-acyl-DL
-amino acids, Enzyme Microb. Technol. 1992 May; 14
(5): 384〜9; Batisse N, Weigel P, Lecocq M, Sakany
an V., Two amino acid amidohydrolase genes encodin
g L-stereospecific carbamoylase and aminoacylase a
re organized in a common operon in Bacillus stearo
thermophilus, Appl. Environ. Microiol. 1997 Feb;63
(2): 763〜6; YandYB, Hu HL, Chang MC, Li H, TsaiY
C, Purification and characterization of L-aminoacy
lase from Alcaligenes denitrificans DA181, Biosci.
Biotechnol. Biochem. 1994 Jan;58(1):204〜5; Jakob
M, Miller YE, Rohm KH, Cloning and sequence analy
ses of cDNAs encoding aminoacylase I from porcine
kidney, Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1992 Dec; 373(1
2):1227〜31； Mitta M, Ohnogi H, Yamamoto A, Kato
I, Sakiyama F, Tsunasawa S., The primary structure
of porcine aminoacylase 1 deduced from cDNA seque
nce, J. Biochem. (Tokyo). 1992 Dec; 112(6): 737〜4
2;Bommarius AS, Drauz K, Klenk H, Wandery C., Oper
ational stability of enzymes. Acylase-catalyzed re
solution of N-acetyl amino acids to enanatiomerica
lly pure L-amino acids, Ann. N Y Acad. Sci. 1992 N
ov 30; 672: 127〜36; Gentzen I, Loffler HG, Schnei
der F., Aminoacylase from Aspergillus oryzae. Comp
arison with the pig kidney enzyme, Z. Naturforsch.
［C］. 1980Jul-Aug; 35(7〜8): 54〜50。
【００２２】本発明の方法は有利に酵素−膜反応器中で
実施される（ＤＥ１９９１０６９１.６）。
実施される（ＤＥ１９９１０６９１.６）。
【００２３】本発明の更なる態様は、請求項１または３
により製造されるアミノ酸の使用に関する。原則的にこ
れらのアミノ酸は、エナンチオマー−濃縮されたアミノ
酸、例えば非経口栄養補給または動物の栄養補給のため
の、従来技術において当業者に公知の、全ての可能な適
用に使用できる。しかし、有利には光学的に濃縮された
アミノ酸を、生物学的に活性な化合物の合成に利用す
る。
により製造されるアミノ酸の使用に関する。原則的にこ
れらのアミノ酸は、エナンチオマー−濃縮されたアミノ
酸、例えば非経口栄養補給または動物の栄養補給のため
の、従来技術において当業者に公知の、全ての可能な適
用に使用できる。しかし、有利には光学的に濃縮された
アミノ酸を、生物学的に活性な化合物の合成に利用す
る。
【００２４】前記酵素は、均質に精製した化合物として
または組み換え製造された酵素として、遊離の形で、い
っしょにまたは連続して使用してよい。さらに、酵素を
ゲスト生物の構成成分として（ＵＳ０９／４０７０６２
の全細胞触媒）使用するか、またはホスト生物の破砕細
胞マスとの結合に使用してもよい。同様に、酵素の固定
化形での使用も可能である（Bhavender P. Sharma, Lor
raine F. Bailey andRalph A. Messing "Immobilisiert
e Biomaterialiern - Techniken und Anwendungen", An
gew. Chem. 1982, 94, 836〜852）。有利には固定化を
凍結乾燥により実施する（Dordick等. J. Am. Chem. So
c. 194, 116, 5009〜5010；Okahata等 Tetrahedron Let
t.1997, 38, 1971〜1974；Adlercreutz等 Biocatalysis
1992, 6, 291〜305）。特に有利であるのは、エアロゾ
ールＯＴまたはポリビニルピロリドンまたはポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ）またはＢｒｉｊ５２（ジエチレ
ングリコール−モノ−セチルエーテル）のような界面活
性物質の存在下での凍結乾燥である（Goto等 Biotechno
l. Techniques 1997, 11, 375〜378）。
または組み換え製造された酵素として、遊離の形で、い
っしょにまたは連続して使用してよい。さらに、酵素を
ゲスト生物の構成成分として（ＵＳ０９／４０７０６２
の全細胞触媒）使用するか、またはホスト生物の破砕細
胞マスとの結合に使用してもよい。同様に、酵素の固定
化形での使用も可能である（Bhavender P. Sharma, Lor
raine F. Bailey andRalph A. Messing "Immobilisiert
e Biomaterialiern - Techniken und Anwendungen", An
gew. Chem. 1982, 94, 836〜852）。有利には固定化を
凍結乾燥により実施する（Dordick等. J. Am. Chem. So
c. 194, 116, 5009〜5010；Okahata等 Tetrahedron Let
t.1997, 38, 1971〜1974；Adlercreutz等 Biocatalysis
1992, 6, 291〜305）。特に有利であるのは、エアロゾ
ールＯＴまたはポリビニルピロリドンまたはポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ）またはＢｒｉｊ５２（ジエチレ
ングリコール−モノ−セチルエーテル）のような界面活
性物質の存在下での凍結乾燥である（Goto等 Biotechno
l. Techniques 1997, 11, 375〜378）。
【００２５】本発明の範囲で光学的な濃縮（エナンチオ
マー濃縮）という概念は、一方の光学対掌体が、他方の
対掌体との混合物中で＞５０モル％で存在することとし
て理解される。
マー濃縮）という概念は、一方の光学対掌体が、他方の
対掌体との混合物中で＞５０モル％で存在することとし
て理解される。
【００２６】アミノ酸のα−基という用語は、α−アミ
ノ酸のα−Ｃ原子上に位置する基を表すと理解される。
この基は、Beyer-Walter, Lehrbuch der organischen C
hemie, S. Hirzel Verlag Stuttgart, 22版, 1991, p.8
22fに記載される天然アミノ酸に由来してよい。しか
し、また、合成α−アミノ酸のα−基でもよく、ＤＥ１
９９０３２６８.８に例が挙げられている。
ノ酸のα−Ｃ原子上に位置する基を表すと理解される。
この基は、Beyer-Walter, Lehrbuch der organischen C
hemie, S. Hirzel Verlag Stuttgart, 22版, 1991, p.8
22fに記載される天然アミノ酸に由来してよい。しか
し、また、合成α−アミノ酸のα−基でもよく、ＤＥ１
９９０３２６８.８に例が挙げられている。
【００２７】微生物Amycolatopsis orientalis subsp.
luridaは、ドイツ微生物寄託所（German Collection fo
r Microorganisms）に、番号ＤＳＭ４３１３４として申
請されている。
luridaは、ドイツ微生物寄託所（German Collection fo
r Microorganisms）に、番号ＤＳＭ４３１３４として申
請されている。
【００２８】
【実施例】１． 組み換えＡＡＲ−酵素のラセマーゼ活
性の検出 Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
ｓｐ．ｌｕｒｉｄａ由来のＮ−アセチルアミノ酸ラセマ
ーゼの基質スペクトルを下記の酵素アッセイにより試験
した。
性の検出 Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
ｓｐ．ｌｕｒｉｄａ由来のＮ−アセチルアミノ酸ラセマ
ーゼの基質スペクトルを下記の酵素アッセイにより試験
した。
【００２９】アッセイは以下のように構成される： バッファー Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ５０ｍＭ（ｐＨ８.０） 基質 ２５ｍＭ 塩化コバルト ６ｍＭ ＡＡＲ 約１５０μｇの精製タンパク質 最終体積 １ｍｌ アッセイにおいて、エナンチオマー純粋なアミノ酸誘導
体を使用し、相当のラセミ体の形成を旋光計（Perkin -
Elmer 241）により追跡した。３０℃（加熱可能なキュ
ベット）で３〜１２時間インキュベートした。λ＝３６
５ｎｍの波長で測定した。
体を使用し、相当のラセミ体の形成を旋光計（Perkin -
Elmer 241）により追跡した。３０℃（加熱可能なキュ
ベット）で３〜１２時間インキュベートした。λ＝３６
５ｎｍの波長で測定した。
【００３０】 表１：試験基質および相当するＡＡＲの特異活性の一覧 基質 特異活性 ｎ−メチルオキシカルボニル−ｌ−Ｍｅｔ ４２ｍＵ／ｍｇ ２．Ｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ由来のＤ−ＭｅｔおよびＬ−Ｍｅｔ Ａ．Ｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ由来のＬ−Ｍｅｔ： バッファー Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ５０ｍＭ（ｐＨ８.０） Ｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ ２５ｍＭ 塩化コバルト ６ｍＭ Ｌ−アシラーゼ （Aspergillus oryzae） ２.０Ｕ 最終体積 ２００μｌ 体積活性： １.４Ｕ／ｍｌ Ｂ．Ｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ由来のＤ−Ｍｅｔ： バッファー Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ５０ｍＭ（ｐＨ８.０） Ｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ ２５ｍＭ 塩化コバルト ６ｍＭ Ｄ−アシラーゼ （ＡＭＡＮＯ） ２.４Ｕ ＡＡＲ ０.４Ｕ 最終体積 ２００μｌ 体積活性： ０.６Ｕ／ｍｌ Ｄ−ＭｅｔおよびＬ−ＭｅｔはＨＰＬＣにより検出した
（ＲＰ１８）；酵素のユニットデータは、Ｎ−Ａｃ−Ｌ
−ＭｅｔおよびＮ−Ａｃ−Ｄ−Ｍｅｔを基質とした場合
の特異活性を参照する。
（ＲＰ１８）；酵素のユニットデータは、Ｎ−Ａｃ−Ｌ
−ＭｅｔおよびＮ−Ａｃ−Ｄ−Ｍｅｔを基質とした場合
の特異活性を参照する。
【００３１】
【００３２】
【外１】
【００３３】
【外２】
【００３４】
【外３】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 シュテファン フェアゼック ドイツ連邦共和国 ハーナウ アーダルベ ルト−シュティフター−シュトラーセ ５ Ｆターム(参考） 4B024 AA03 BA07 GA11 HA03 4B064 AE03 CA21 CB05 CB28 CD27 CD30 4H006 AA02 AC80 NB00
Claims (6)
- 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨであり、Ｒ１＝ＣＨ３、ＣＨ３Ｃ
Ｈ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ここでＸがＮＨ
であればＲ１はＨであってよく、Ｒ２は、天然または合
成アミノ酸のα−基を表す］の化合物を、Ｎ−アセチル
アミノ酸ラセマーゼ活性（ＡＡＲ）を示す酵素と、アミ
ノ酸アシラーゼ活性を示す酵素の存在下で反応させるか
または引き続きアミノ酸アシラーゼ活性を示す酵素と反
応させることを特徴とする、エナンチオマー濃縮された
アミノ酸の製法。 - 【請求項２】 Ｎ−アセチルアミノ酸ラセマーゼ活性を
示す酵素を使用することを特徴とする、一般式（Ｉ）： 【化２】 ［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨであり、Ｒ１＝ＣＨ３、ＣＨ３Ｃ
Ｈ２、tert−ブチル、ベンジルであり、Ｒ２は、天然ま
たは合成アミノ酸のα−基を表す］のＮ−保護アミノ酸
のラセミ化法。 - 【請求項３】 アミノ酸アシラーゼ活性を示す酵素を使
用することを特徴とする、一般式（Ｉ）： 【化３】 ［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨであり、Ｒ１＝ＣＨ３、ＣＨ３Ｃ
Ｈ２、tert−ブチル、ベンジルであり、ここでＸがＮＨ
であればＲ１はＨであってよく、Ｒ２は、天然または合
成アミノ酸のα−基を表す］のＮ−保護アミノ酸の保護
基の切断法。 - 【請求項４】 アミコラトプシス オリエンタリス亜種
ルリダ由来のＮ−アセチルアミノ酸ラセマーゼを使用す
る、請求項１または２記載の方法。 - 【請求項５】 アスペルギルス オリザエ由来のアシラ
ーゼを使用する、請求項１または３記載の方法。 - 【請求項６】 生物学的に活性な化合物の合成におけ
る、請求項１または３により製造されるアミノ酸の使
用。
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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| CA (1) | CA2359648A1 (ja) |
| DE (2) | DE10050123A1 (ja) |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008048731A (ja) * | 2006-07-26 | 2008-03-06 | Ajinomoto Co Inc | Ｎ−アセチル−（Ｒ，Ｓ）−β−アミノ酸アシラーゼ遺伝子 |
| JP2012196231A (ja) * | 2006-07-26 | 2012-10-18 | Ajinomoto Co Inc | Ｎ−アセチル−（Ｒ，Ｓ）−β−アミノ酸アシラーゼ遺伝子 |
| JP2014511706A (ja) * | 2011-04-12 | 2014-05-19 | ドクター レディズ ラボラトリーズ （イーユー） リミテッド | 鏡像異性的に精製されたアミノ酸の生成 |
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| DE10244347A1 (de) * | 2002-09-24 | 2004-04-01 | Degussa Ag | Verfahren zur Herstellung von Carbamoylaminosäuren |
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| JP5147347B2 (ja) * | 2007-09-28 | 2013-02-20 | 旭化学工業株式会社 | Ｄ−アミノアシラーゼによるｄ−アミノ酸の製造方法 |
| WO2010050516A1 (ja) * | 2008-10-29 | 2010-05-06 | 株式会社カネカ | Ｌ－アミノ酸の製造方法 |
| IT201700022111A1 (it) * | 2017-03-02 | 2018-09-02 | Michelangelo Manfrini | Metodo per ottenere N-acetil-D-amminoacidi da miscele raceme degli stessi |
| CN114656388B (zh) * | 2020-12-23 | 2024-01-30 | 苏州引航生物科技有限公司 | 一种制备氟苯尼考中间体的方法 |
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| CA2038202A1 (en) * | 1990-09-14 | 1992-03-15 | Masaharu Tokuyama | Dna and use thereof |
| JP3510625B2 (ja) * | 1992-06-30 | 2004-03-29 | スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー | Ｄ−ｎ−カルバモイル−アミノ酸アミドヒドロラーゼおよびヒダントイナーゼ |
| CN1213400A (zh) * | 1996-03-13 | 1999-04-07 | 隆萨股份公司 | N－保护d－脯氨酸衍生物的制备方法 |
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-
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- 2001-10-10 JP JP2001312893A patent/JP2002325598A/ja active Pending
- 2001-10-10 CA CA002359648A patent/CA2359648A1/en not_active Abandoned
- 2001-10-11 DK DK01124428T patent/DK1197563T3/da active
- 2001-10-11 AT AT01124428T patent/ATE319850T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-10-11 EP EP01124428A patent/EP1197563B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-11 DE DE50109138T patent/DE50109138D1/de not_active Expired - Lifetime
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-
2003
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- 2003-09-02 US US10/651,938 patent/US7157251B2/en not_active Expired - Fee Related
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