JP2002272457A - アセチルリジン認識モノクローナル抗体及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 隣接のアミノ酸の種類に依存せずにＮε−ア
セチルリジン残基を認識し得る抗アセチルリジンモノク
ローナル抗体とその製造法の提供。 【解決手段】 軽鎖が、不変領域がマウスモノクローナ
ル抗体の特定のアミノ酸配列からなり、可変領域がマウ
ス由来の特定のアミノ酸配列又は該アミノ酸配列におい
て１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加
されたアミノ酸配列からなるものであって、且つ、重鎖
が、不変領域がマウス由来の特定のアミノ酸配列からな
り、可変領域がマウス由来の特定のアミノ酸配列又は該
アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠
失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、蛋
白質中のＮε−アセチルリジンを認識するに際し、隣接
のアミノ酸の種類に特に依存せず広範囲の隣接アミノ酸
を許容し得るモノクローナル抗体と、化学的にアセチル
化した蛋白質を抗原として用いる該モノクローナル抗体
の製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なモノクローナ
ル抗体及びその製造方法に関する。詳しくは、隣接のア
ミノ酸の種類に依存せずに蛋白質中のＮ^ε-アセチルリ
ジン残基を認識し得るモノクローナル抗体とその製造方
法に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年真核生物の遺伝子発現制御において
コアヒストンのＮ末端領域のリジン残基のＮ^ε-アセチ
ル化が重要な役割を果たしていることが明らかになって
きた。そのアセチル化を担う酵素であるヒストンアセチ
ルトランスフェラーゼ及び脱アセチル化を担う酵素であ
るヒストンデアセチラーゼは１９９６年に初めてクロー
ニングされたが、その後同活性を有する分子が複数見出
されてきている。また、近年ではヒストン以外にｐ５
３、ＴＣＦ、ＨＭＧ−１等種々の非ヒストン蛋白質がア
セチル化を受けることが明らかにされてきており、アセ
チル化はリン酸化に匹敵する広範な役割を果たす翻訳後
修飾である可能性が指摘されるようになった。上記の様
な未知の新規アセチル化蛋白質を検索するためにはＮ^ε
-アセチルリジン残基を特異的にかつ隣接アミノ酸のい
かんを問わず認識するプローブ分子が有用であることは
論を待たない。その様な目的に最もかなった分子として
は抗体が考えられるが、これまでに隣接アミノ酸の種類
によらず様々な状況下のアセチルリジンを認識できる抗
体はほとんど報告されていなかった。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記した如き
現状に鑑みなされたもので、隣接のアミノ酸の種類に特
に依存せず広範囲の隣接アミノ酸を許容し得る、Ｎ^ε−
アセチルリジン認識抗アセチルリジンモノクローナル抗
体を提供することを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記課題
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、広範囲の隣接アミ
ノ酸を許容する抗アセチルリジンモノクローナル抗体を
作製することに成功した。また、作製したモノクローナ
ル抗体の可変領域のｃＤＮＡ配列を決定することによ
り、作製した抗体が互いに類似した構造上の特徴を有し
ていることを明らかにし、本発明を完成するに至った。

【０００５】即ち、本発明は、Ｎ^ε−アセチルリジンを
認識するモノクローナル抗体に関する。詳しくは、蛋白
質中のＮ^ε−アセチルリジンを認識するに際し、隣接の
アミノ酸の種類に特に依存せず広範囲の隣接アミノ酸を
許容し得る、該モノクローナル抗体に関する。

【０００６】更に詳しくは、（１）軽鎖が、不変領域が
配列番号：１に記載されたアミノ酸配列からなり、可変
領域が配列番号：２に記載されたアミノ酸配列又は該ア
ミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、
置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるものであ
って、且つ、（２）重鎖が、不変領域が配列番号：３に
記載されたアミノ酸配列からなり、可変領域が配列番
号：４に記載されたアミノ酸配列又は該アミノ酸配列に
おいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは
付加されたアミノ酸配列からなる、該モノクローナル抗
体に関する。

【０００７】また、本発明は、化学的にアセチル化した
蛋白質を抗原として用いることを特徴とする該モノクロ
ーナル抗体の製造方法に関する。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明のモノクローナル抗体にお
いて、軽鎖の可変領域が、配列番号：２に記載されたア
ミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が置換さ
れたアミノ酸配列からなるものとしては、例えば、配列
番号：５、配列番号：６又は配列番号：７等に記載のア
ミノ酸配列を有するものが挙げられる。また、本発明の
モノクローナル抗体において、重鎖の可変領域が、配列
番号：４に記載されたアミノ酸配列おいて１若しくは数
個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列からなるものと
しては、例えば、配列番号：８に記載のアミノ酸配列を
有するもの等が、１若しくは数個のアミノ酸が欠失した
アミノ酸配列からなるものとしては、例えば、配列番
号：９に記載のアミノ酸配列を有するもの等が、また、
１若しくは数個のアミノ酸が付加されたアミノ酸配列か
らなるものとしては、例えば、配列番号：１０に記載の
アミノ酸配列を有するもの等が、それぞれ挙げられる。

【０００９】本発明のモノクローナル抗体は、Ｎ^ε−ア
セチルリジンを認識する抗体であって、且つ、蛋白質中
に存在するＮ^ε−アセチルリジン残基を認識する際に、
隣接のアミノ酸の種類に特に依存せず、広範な隣接アミ
ノ酸を許容するという性質を有するが、これらの抗体は
アセチルリジンを含有する様々な分子を抗原に用いるこ
とにより製造することができる。特に優れた性質の抗体
は、複数のリジン残基を持つ蛋白質を化学的にアセチル
化したものを抗原として用いる作製方法によりもたらさ
れる。本発明の抗体は、例えばアセチルリジンを含む合
成ペプチドをムラサキカサガイヘモシアニン等のキャリ
アー蛋白質に結合させたもの、あるいは複数のリジン残
基を化学的にアセチル化した蛋白質、例えば無水酢酸で
アセチル化したムラサキカサガイヘモシアニンを抗原と
して用いて動物、例えばマウスを免疫し、得られた抗体
産生細胞、例えば脾臓細胞を、例えばミエローマ細胞と
融合させることによって不死化することにより得られる
抗体産生不死化細胞により産生される。上記抗原分子の
内、分子中に複数のリジン残基を含む蛋白質を化学的に
アセチル化したものを用いる方法は単一のリジン残基を
含むペプチドを抗原とした方法よりもより好ましい。従
って、優れた抗体を得るために多種類のアセチルリジン
含有ペプチドの混合物を用いることが好ましいことは容
易に想像できる。

【００１０】また、別の方法として、例えばファージに
ディスプレーされた抗体ライブラリーを抗原とのアフィ
ニティーによりスクリーニングする様な方法により抗体
産生細胞を得ることもできる。この様な抗体産生不死化
細胞を得るためには従来から使用されているモノクロー
ナル抗体産生技術及び将来開発される新たなモノクロー
ナル抗体産生技術をともに全て利用出来る。

【００１１】抗体産生細胞のスクリーニングは複数のリ
ジン残基をアセチル化した抗原とは異なる蛋白質、例え
ばアセチル化ウシ血清アルブミンや種々の隣接アミノ酸
を有するアセチルリジン含有ペプチドを用いて、なるべ
く多くの隣接アミノ酸を許容する抗体を産生するクロー
ンを選別することにより行うことができる。また、産生
された抗体分子は、アセチルリジンを固相化したアフィ
ニティーカラムや、プロテインＡを用いたアフィニティ
ーカラムにより精製できる。産生された抗体が本発明の
抗体であるかどうかは、抗体産生不死化細胞の抗体遺伝
子の可変領域のＤＮＡ配列を解析し、それを蛋白質に翻
訳した際の配列的特徴が上記配列に高度に類似するかど
うかで判断できる。

【００１２】また、本発明は前記してきた本発明のＮ^ε
−アセチルリジンを認識するモノクローナル抗体をコー
ドする遺伝子、好ましくはＤＮＡを提供するものでもあ
る。本発明のＤＮＡの例を配列表の配列番号１１〜１８
に示す。配列番号の１１〜１４は軽鎖に関するものであ
り、配列番号１５〜１８は重鎖に関するものである。本
発明のＤＮＡはこれらの相補鎖又はこれらの塩基配列に
ストリージェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基
配列を包含している。本発明のモノクローナル抗体は、
感作動物としてマウス、ラット、ウサギ、イヌなどの各
種の哺乳動物や、ニワトリなどの鳥類などを使用するこ
ともできる。また、本発明のモノクローナル抗体の可変
領域及び／又は超可変領域をもちいてキメラ抗体やヒト
型抗体にすることもできる。

【００１３】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるも
のではない。

【００１４】実施例１．抗Ｎ^ε−アセチルリジンモノク
ローナル抗体の作製 表１に記載の三種類の免疫用抗原及びスクリーニング用
抗原の組み合わせで抗Ｎ^ε−アセチルリジンモノクロー
ナル抗体の作製を行った。なお、ウシ血清アルブミン及
びムラサキカサガイヘモシアニンのアセチル化は、無水
酢酸を用いて以下の方法で行った。１０ｍｇの蛋白質を
１ｍｌのホウ酸緩衝液（２０ｍＭ Ｎａ _２Ｂ_４Ｏ_７，ｐ
Ｈ９.３）に溶解し、氷冷下、２５０μｍｏｌの無水酢
酸（約２２.６μｌ）と５００μｌの１Ｍ ＮａＯＨを加
え、３０分間時々かき混ぜながらインキュベートした。
反応終了後、Ｇ−２５ゲルろ過（ＰＤ−１０，ファルマ
シア社）を用いて溶媒交換して、アセチル化蛋白質のリ
ン酸緩衝液（ＰＢＳ）溶液を得た。

【００１５】

【表１】

【００１６】免疫はＢａｌｂ／ｃマウスのメスにて行
い、一週間ごとに３回、一回目はフロインド完全アジュ
バントを、二回目及び三回目はフロインド不完全アジュ
バントを用いて、背部皮下に行った。免疫量は０.１ｍ
ｇ／マウスである。免疫が成立したマウスから、常法を
用いて抗アセチルリジンモノクローナル抗体を産生する
ハイブリドーマのクローニングを行った。その結果、ケ
ース１からクローン−１、ケース２からクローン−２、
ケース３からクローン−３及びクローン−４の計４クロ
ーンをそれぞれ樹立できた。ＥＬＩＳＡプレート（岩城
硝子、AquaBind plate）にＣ末システインを介して共有
結合した種々のアセチルリジン含有ペプチドを用いて、
それらに対する反応性を比較した結果を図１に示した。
図１中、Ａはクローン−１、Ｂはクローン−２、Ｃはク
ローン−３、Ｄはクローン−４の結果をそれぞれ示す。
各グラフの右には吸光度０．５を与える時の各抗体の濃
度を記してある。なお、図中使用されたペプチドの一覧
は以下の表２に示すとおりである。図１に示されるよう
に、クローン−１〜−４のいずれの抗体も様々な隣接ア
ミノ酸が存在する条件下でアセチルリジンに対して結合
反応性を示すことが判った。この実験からは、特にクロ
ーン−２〜−４の三つが今回調べたペプチドのいずれと
もほぼ同程度の反応性を示し、隣接アミノ酸を広く許容
することが明らかになった。また、抗体のアイソタイプ
を決定した結果、いずれもＩｇＧ１κであることを確認
した。

【００１７】

【表２】

【００１８】実施例２．ウエスタンブロッティング法に
よるアセチル化蛋白質の検出 Ｂ１６／ＢＬ６、ＭＯＬＴ−４Ｆ、ＨｅＬａ−Ｓ３、Ｃ
ＯＳ-１、及びＣＯＳ-７の５種の細胞を１μＭのヒスト
ンデアセチラーゼ阻害剤ＣＨＡＰ３１で２４時間処理し
た後、細胞ライセートを調製し、電気泳動で展開後、上
記４種の抗体を一次抗体として使用して、アセチル化蛋
白質の検出を実施した。結果を図２に示す。図２中、
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄはそれぞれ、クローン−１、クローン−
２、クローン−３、及びクローン−４抗体を用いて検出
を行った結果を示す。ウエスタンブロッティングに用い
た一次抗体の濃度は、それぞれ、１０７、６５.７、２
５８、及び１５８ｎｇ／ｍｌであり、いずれもアセチル
化ウシ血清アルブミンを固相化したＥＬＩＳＡにおいて
同じ反応性（Ａ４９２＝１）を与える濃度である。各細
胞を１μＭのＣＨＡＰ３１で２４時間処理した後の細胞
（＋）または無処理の細胞（−）から総細胞ライセート
を調製した。各レーンには２０μｇの蛋白質を乗せた。
用いた５種の細胞は１：Ｂ１６／ＢＬ６、２：ＭＯＬＴ
−４Ｆ、３：ＨｅＬａ−Ｓ３、４：ＣＯＳ-１、及び
５：ＣＯＳ-７である。図２に示されるように、実施例
１のケース１で作製したクローン−１抗体はＣＨＡＰ３
１で亢進したヒストンのアセチル化以外検出出来ず、ま
たケース２で作製したクローン−２はヒストン以外に数
個の蛋白を検出できるがそれ以外に対する反応性は不十
分であったのに対して、ケース３で作製したクローン−
３及びクローン−４抗体はＭＯＬＴ−４Ｆ、ＣＯＳ-
１、及びＣＯＳ-７細胞においてヒストン以外に、５０
ｋＤａ付近の位置のアセチル化蛋白質を強く検出し、更
に、ＭＯＬＴ−４Ｆ細胞では２０ｋＤａ付近及び高分子
部分の複数の蛋白質を、ＣＯＳ-７細胞では更に多くの
アセチル化蛋白質を検出出来ることが分かった。この検
討により、ウエスタンブロッティング法によるアセチル
化非ヒストン蛋白質の検出には、アセチル化ムラサキカ
サガイヘモシアニンを抗原として用いたクローン−３及
び−４が特に優れていることが確認された。即ち、アセ
チルリジンの隣接アミノ酸をより広く許容する抗体を作
製するためには、アセチル化ムラサキカサガイヘモシア
ニンに代表される、蛋白質内の複数のリジン残基がアセ
チル化された分子を抗原として用いることが優れている
ことが判った。

【００１９】実施例３．Ｎ^ε−アセチルリジンに対する
特異性の確認 作製した抗体がＮ^ε−アセチル化リジンに特異的に反応
していることを確かめるために、ＥＬＩＳＡプレートに
アセチル化ウシ血清アルブミンを固相化し、各抗体のＥ
ＬＩＳＡ反応性がＮ^ε−アセチルリジン及びＮ^α−アセ
チルリジンで競合されるかどうかを調べた。即ち、１μ
ｇ／ｍｌのアセチル化ウシ血清アルブミンのリン酸緩衝
液（５０μｌ）溶液で一晩４℃で固相化したＥＬＩＳＡ
プレートを用いて、各抗体１μｇ／ｍｌを反応させる条
件でＮ^ε−アセチルリジン及びＮ ^α−アセチルリジンに
よる阻害を調べた。結果を図３に示す。図３中、●、
▲、■及び◆は、Ｎ^ε−アセチルリジンによる阻害を、
また、○、△、□及び◇は、Ｎ^α−アセチルリジンによ
る阻害を調べた結果をそれぞれ示す。また、●及び○は
クローン−１を用いた場合の結果を、▲及び△はクロー
ン−２を用いた場合の結果を、■及び□はクローン−３
を用いた場合の結果を、◆及び◇はクローン−４を用い
た場合の結果をそれぞれ示す。図３から明らかなよう
に、クローン−１〜−４のいずれの抗体の反応もＮ^ε−
アセチルリジンによっては競合され反応性が低下した
が、Ｎ^α−アセチルリジンでは競合されず、これらの抗
体がＮ^ε−アセチルリジンに特異的に反応していること
が明らかになった。

【００２０】実施例４．各抗体の可変領域のｃＤＮＡ及
びアミノ酸配列決定 どの様な可変領域のアミノ酸配列がＡＫＬ３Ｈ６及びＡ
ＫＬ５Ｃ１抗体の上記実施例に示されたような優れた性
質を担っているのかを明らかにするために、ハイブリド
ーマより各抗体のＬ鎖及びＨ鎖の可変領域のＤＮＡをク
ローニングし、その配列を決定した。クローニングは、
まずハイブリドーマからＱＩＡＧＥＮ社のＲＮｅａｓｙ
Ｍｉｎｉ Ｋｉｔを用いてＲＮＡを単離した後、ｒａ
ｎｄｏｍ−９ｍｅｒをテンプレートとして用いＳａｗａ
ｄｙ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＴｒｕｅＳｃｒｉｐｔ Ｉ
Ｉ ＲＴを用いて逆転写反応を実施し、更に、５'−プラ
イマーとしてＮｏｖａｇｅｎ社のｍｉｘプライマーを、
３'−プライマーとして、軽鎖に関しては、５'−ＡＣＴ
ＧＴＴＣＡＧＧＡＣＧＣＣＡＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＣＡ
ＣＴ−３’、重鎖に関しては、５'−ＧＧＡＴＣＣＡＧ
ＡＧＴＴＣＣＡＧＧＴＣＡＣＴＧＴ−３’をプライマー
として用いてＳａｗａｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社の
ＳｕｐｅｒＴａｑ ２ｘ ｋｉｔによるＰＣＲ法により可
変領域ｃＤＮＡを増幅することにより行った。得られた
ＤＮＡ断片はＮｏｖａｇｅｎ社のｐＴ７ Ｂｌｕｅ Ｔ−
ＶｅｃｔｏｒにＴａＫａＲａのＤＮＡ Ｌｉｇａｔｉｏ
ｎ ｋｉｔ ｖｅｒ.２を用いてライゲートし、それを用
いて宝酒造のＪＭ１０９コンピテントセルをトランスフ
ォームし、Ｘ−ｇａｌ、アンピシリン、ＩＰＴＧ含有プ
レートに播種後、白いコロニーをピックアップした。正
常なサイズのインサートを含むクローン各５種よりプラ
スミドを調製後、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１０型自動シー
ケンサーを用いてＤＮＡ配列を決定した。決定した配列
は一部にＰＣＲエラーによると思われる変異が認められ
た以外は５クローンとも同じ配列を示したので、その配
列をもって目的のＤＮＡ配列とした。結果を配列番号：
１１〜配列番号：１８に示す。また、上記のごとく決定
したＤＮＡ配列を元にしてＬ鎖及びＨ鎖のアミノ酸配列
を推定した結果を配列番号：１９〜配列番号：２６に示
す。また、図４には、アミノ酸配列をアラインし、各抗
体の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を比較した結
果を示す。なお、アミノ酸は一文字表記で表した。ま
た、可変領域中の相補性決定領域を四角で囲って、ＣＤ
Ｒ１〜３と明示した。この図で判る通り、３回の独立の
免疫操作により得た４種の抗体は何れも共通のフレーム
ワーク構造を有しており、この共通性がアセチルリジン
認識自体に何らかの重要性をもっているものと思われ
る。一方、実施例１及び２で示したような、抗体間の性
質の違いは、ここで示される、配列のわずかな違いに帰
着されるはずであるが、立体構造的な情報がない現時点
では、どこの部分の差異が抗体のどういう性質の違いを
もたらしているのかまでは明らかでない。

【００２１】

【発明の効果】本発明の抗体はアセチルリジンの隣接ア
ミノ酸の種類に余り依存せずアセチルリジンを検出する
ことができるので、既知の種々のアセチル化蛋白質のア
セチル化状態を検出するのに有用である。例えば、種々
の刺激剤の影響下ヒストンのアセチル化レベルがどう変
動するかをウエスタンブロッティング等の方法で容易に
検出できる。また、本発明の抗体は同様の理由から未知
の新たなアセチルリジン含有蛋白質を検索するのにも非
常に有用である。具体的には、本抗体を用いた免疫沈降
法や本抗体を固相化したアフィニティーカラムあるいは
抗体チップ等を使用することにより、未知の新規なアセ
チルリジン含有蛋白質を見出せることが予想される。更
に、本発明の抗体はモノクローナル抗体であるから、既
に樹立された方法により一本鎖抗体に改変可能で、ある
いは、エピトープがアセチルリジンと小さいことから、
軽鎖または重鎖のいずれか一方のみで活性を持つ可能性
もあり、そうなればこれをコードするＤＮＡを用いたツ
ー・ハイブリッド法により、抗体に対するアフィニティ
ーの弱いアセチルリジン含有蛋白質を発見することにも
用いることもできる。また、種々の細胞内で発現させる
ことにより、アセチルリジン含有蛋白質の機能解析にも
用い得る。更に、将来的に病態と何らかの関連を示すア
セチル化蛋白質の存在が明らかになった上は、その診断
法を構築する上で重要な役割を果たし得る。

【００２２】

【配列表】 配列表 SEQUENCE LISTING <110> Japan Science and Technology Corporation ; Japan Energy Corporation <120> A monoclonal antibody for N^ε-acetyl-lysine and a method for preparation thereof <130> PA906412 <160> <210> 1 <211> 57 <212> PRT <213> MOUSE <400> 1 Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser 1 5 10 15 Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn 20 25 30 Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 35 40 45 Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser 50 55 57 <210> 2 <211> 110 <212> PRT <213> MOUSE <400> 2 Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Asp Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Leu 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp 100 105 110 <210> 3 <211> 54 <212> PRT <213> MOUSE <400> 3 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser 1 5 10 15 Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val 20 25 30 Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 35 40 45 Thr Trp Asn Ser Gly Ser 50 54 <210> 4 <211> 110 <212> PRT <213> MOUSE <400> 4 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 <210> 5 <211> 110 <212> PRT <213> MOUSE <400> 5 Asp A!a Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 20 25 30 Asp Gly Thr Thr Asp Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro GIy Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser G!y Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Glu Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110 <210> 6 <211> 110 <212> PRT <213> MOUSE <400> 6 Asp Ala Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Lys Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Phe Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Leu 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110 <210> 7 <211> 110 <212> PRT <213> MOUSE <400> 7 Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Leu 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110 <210> 8 <211> 110 <212> PRT <213> MOUSE <400> 8 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Asp Pro Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 <210> 9 <211> 109 <212> PRT <213> MOUSE <400> 9 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ile Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Cys Tyr Gly Tyr Gly Gly Ala Trp Phe Ser Tyr Trp Gly 100 105 109 <210> 10 <211> 112 <212> PRT <213> MOUSE <400> 10 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Asp Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Tyr Ala Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Phe Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Ser Tyr Phe Ala Asp Gly Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 112 <210> 11 <211> 501 <212> DNA <213> MOUSE <400> 11 gatgctgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca ggtctagtca gagccttgaa aacagtaatg gaaacaccga tttgaactgg 120 tacctccaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acagggtttc caaccgattt 180 tctggggtcc tagacaggtt cagtggtagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tatttctgcc tccaagttac acatgtcccg 300 tggacgttcg gtggaggcac caagctggac atcaaacggg ctgatgctgc accaactgta 360 tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 420 ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 480 caaaatggcg tcctgaacag t 501 <210> 12 <211> 501 <212> DNA <213> MOUSE <400> 12 gatgctgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca ggtctagtca gagccttgaa aacagtgatg gaaccaccga tttgaactgg 120 tacctccaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acagggtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggtagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga attgggagtt tatttctgcc ttcaagttac acatgtcccg 300 tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacggg ctgatgctgc accaactgta 360 tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 420 ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 480 caaaatggcg tcctgaacag t 501 <210> 13 <211> 501 <212> DNA <213> MOUSE <400> 13 gatgctgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca ggtctagtca gagccttgaa aaaagtaatg gaaacaccta tttgaactgg 120 tatttccaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acagggtttc caaccgattt 180 tctggggtcc tagacaggtt cactggtagt ggatcaggga cagatttcac attgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tatttctgcc tccaagttac acatgtcccg 300 tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacggg ctgatgctgc accaactgta 360 tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 420 ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 480 caaaatggcg tcctgaacag t 501 <210> 14 <211> 501 <212> DNA <213> MOUSE <400> 14 gatgctgtga tgacccaaac tccactctcc ctgtctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca ggtctagtca gagccttgaa aacagtaatg gaaacaccta tttgaactgg 120 tacctccaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acagggtttc caaccgattt 180 tctggggtcc tagacaggtt cagtggtagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tatttctgcc tccaagttac acatgtcccg 300 tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacggg ctgatgctgc accaactgta 360 tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 420 ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 480 caaaatggcg tcctgaacag t 501 <210> 15 <211> 492 <212> DNA <213> MOUSE <400> 15 caggtccagc tgcagcagtc tggagctgag ttggtaaggc ctgggacttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg ctgctggata caccttcact aaccactgga taggttgggt aaagcagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagat atttaccctg gaagtggtta tactaactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca catcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgccatct attactgtgc aagatccgat 300 tactacggct cctggtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagcc 360 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc 420 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg 480 aactctggat cc 492 <210> 16 <211> 492 <212> DNA <213> MOUSE <400> 16 caggtccagc tgcagcagtc tggagctgag ctggtaaggc ctgggacttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg ctgctggata caccttcact aaatactgga taggttgggt aaagcagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagat atttaccctg gaagtggtta tactaactac 180 aatgagaaat tcaagggcaa ggccaaactg actgcagacc cttcctccac cacagcctac 240 ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgccatct attactgtgc aagagcggga 300 aattacggcg cctggtttgc ttactggggt caagggactc tggtcactgt ctctgcagcc 360 aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc 420 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg 480 aactctggat cc 492 <210> 17 <211> 489 <212> DNA <213> MOUSE <400> 17 caggtccagc tgcagcagtc tggagctgag ctggtaaggc ctgggacttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg ctgctggata caccttcact aagtattgga taggttgggt taagcagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagat atttaccctg caggtggtta tactaactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca catcctccag cacaatctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgccatct attactgttg ctatggttac 300 ggcggggcct ggttttctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgcagccaaa 360 acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg ctgcccaaac taactccatg 420 gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac 480 tctggatcc 489 <210> 18 <211> 498 <212> DNA <213> MOUSE <400> 18 caggtccaac tgcagcagtc tggagctgag ctggtaaggc ctgggacttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg ctgctggata caccttcact aactactgga taggttgggt aaagcagagg 120 cctggacatg accttgagtg gattggagat atttaccctg gaagtggtta tgcttactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca catcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgccttct attactgtgt aagatcctac 300 ttcgctgatg gcccggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360 gcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 420 aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 480 acctggaact ctggatcc 498 <210> 19 <211> 167 <212> PRT <213> MOUSE <400> 19 Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Asp Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Leu 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys 100 105 110 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser 165 167 <210> 20 <211> 167 <212> PRT <213> MOUSE <400> 20 Asp A!a Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 20 25 30 Asp Gly Thr Thr Asp Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro GIy Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser G!y Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Glu Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser 165 167 <210> 21 <211> 167 <212> PRT <213> MOUSE <400> 21 Asp Ala Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Lys Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Phe Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Leu 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser 165 167 <210> 22 <211> 167 <212> PRT <213> MOUSE <400> 22 Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Leu 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser 165 167 <210> 23 <211> 164 <212> PRT <213> MOUSE <400> 23 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ser 164 <210> 24 <211> 164 <212> PRT <213> MOUSE <400> 24 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Asp Pro Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ser 164 <210> 25 <211> 163 <212> PRT <213> MOUSE <400> 25 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ile Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Cys Tyr Gly Tyr Gly Gly Ala Trp Phe Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ser 163 <210> 26 <211> 166 <212> PRT <213> MOUSE <400> 26 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Asp Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Tyr Ala Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Phe Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Ser Tyr Phe Ala Asp Gly Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser 115 120 125 Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val 130 135 140 Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Thr Trp Asn Ser Gly Ser 165 166

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明の４種の抗アセチルリジンモノ
クローナル抗体の種々のアセチルリジン含有ペプチドに
対する反応性の比較（ＥＬＩＳＡ法）を示したものであ
る。

【図２】図２は、本発明の４種の抗アセチルリジンモノ
クローナル抗体による、種々の細胞の総細胞ライセート
中のアセチル化蛋白質の検出結果を示す。

【図３】図３は、本発明の４種の抗アセチルリジンモノ
クローナル抗体のＥＬＩＳＡ反応性がＮ^ε−アセチルリ
ジン及びＮ^α−アセチルリジンで競合されるかどうかを
調べた結果を示す。

【図４】図４は、本発明の４種の抗アセチルリジンモノ
クローナル抗体の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列
を比較した結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA43 GA18 HA15 4B064 AG27 CA10 CC24 DA13 4H045 AA11 BA10 CA40 DA76 EA50 FA71

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｎ^ε−アセチルリジンを認識するモノク
   ローナル抗体。
2. 【請求項２】 蛋白質中のＮ^ε−アセチルリジンを認識
   するに際し、隣接のアミノ酸の種類に特に依存せず広範
   囲の隣接アミノ酸を許容し得る、請求項１に記載のモノ
   クローナル抗体。
3. 【請求項３】 モノクローナル抗体が、（１）軽鎖が、
   不変領域が配列番号：１に記載されたアミノ酸配列から
   なり、可変領域が配列番号：２に記載されたアミノ酸配
   列又は該アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ
   酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からな
   るものであって、且つ、（２）重鎖が、不変領域が配列
   番号：３に記載されたアミノ酸配列からなり、可変領域
   が配列番号：４に記載されたアミノ酸配列又は該アミノ
   酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
   若しくは付加されたアミノ酸配列からなるものである請
   求項１又は２に記載のモノクローナル抗体。
4. 【請求項４】 軽鎖の可変領域が、配列番号：２に記載
   されたアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸
   が置換されたアミノ酸配列からなるものである請求項３
   に記載のモノクローナル抗体。
5. 【請求項５】 配列番号：２に記載されたアミノ酸配列
   において、１若しくは数個のアミノ酸が置換されたアミ
   ノ酸配列が、配列番号：５に記載されたアミノ酸配列で
   ある請求項４に記載のモノクローナル抗体。
6. 【請求項６】 配列番号：２に記載されたアミノ酸配列
   において、１若しくは数個のアミノ酸が置換されたアミ
   ノ酸配列が、配列番号：６に記載されたアミノ酸配列で
   ある請求項４に記載のモノクローナル抗体。
7. 【請求項７】 配列番号：２に記載されたアミノ酸配列
   において、１若しくは数個のアミノ酸が置換されたアミ
   ノ酸配列が、配列番号：７に記載されたアミノ酸配列で
   ある請求項４に記載のモノクローナル抗体。
8. 【請求項８】 重鎖の可変領域が、配列番号：４に記載
   されたアミノ酸配列おいて１若しくは数個のアミノ酸が
   欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるも
   のである請求項３〜７の何れかに記載のモノクローナル
   抗体。
9. 【請求項９】 配列番号：４に記載されたアミノ酸配列
   において、１若しくは数個のアミノ酸が置換されたアミ
   ノ酸配列が、配列番号：８に記載されたアミノ酸配列で
   ある請求項８に記載のモノクローナル抗体。
10. 【請求項１０】 配列番号：４に記載されたアミノ酸配
    列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失したアミ
    ノ酸配列が、配列番号：９に記載されたアミノ酸配列で
    ある請求項８に記載のモノクローナル抗体。
11. 【請求項１１】 配列番号：４に記載されたアミノ酸配
    列において、１若しくは数個のアミノ酸が付加されたア
    ミノ酸配列が、配列番号：１０に記載されたアミノ酸配
    列である請求項８に記載のモノクローナル抗体。
12. 【請求項１２】 マウスモノクローナル抗体である請求
    項１〜１１の何れかに記載のモノクローナル抗体。
13. 【請求項１３】 化学的にアセチル化した蛋白質を抗原
    として用いることを特徴とする請求項１〜１２の何れか
    に記載のモノクローナル抗体の製造方法。
14. 【請求項１４】 蛋白質が分子内に複数のリジンを有す
    る蛋白質である請求項１３に記載の製造方法。
15. 【請求項１５】 化学的にアセチル化した蛋白質がアセ
    チル化したムラサキカサガイヘモシアニンである請求項
    １３に記載の製造方法。