JP2002193991A - 修飾ヌクレオチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 安全、高感度且つ高精度に検出可能な新規な
蛍光標識化ヌクレオチド誘導体、更には、例えばＲＮＡ
ポリメラーゼ作用を利用する核酸の塩基配列決定法に於
いて有用な３’−デオキシリボヌクレオチド誘導体の提
供。 【解決手段】 一般式［１］で示されるヌクレオチド誘
導体。例えば、下記式［２０］で示されるヌクレオチド
誘導体。 〔式中、Ｑはヌクレオチド残基を表し、Ｒa及びＲbは低
級アルキレン基を表し、Ｅは置換基を有していてもよい
イミノ基を表し、Ｗは蛍光色素基を表す。〕

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】 本発明は、新規な蛍光標識
化ヌクレオチド誘導体に関するもの、更には、例えば核
酸の塩基配列分析に有用な、３’−デオキシリボヌクレ
オチド誘導体に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】 ＤＮＡの塩基配列分析は、分子生物学
に於いて基幹的な技術の１つである。ＤＮＡ塩基配列決
定法としては、現在、マキサム−ギルバート法（化学分
解法）〔Methods of Enzymology, 65, 499-560(1980)〕
及びサンガー法（ジデオキシ連鎖停止法）〔Proc. Nat
l. Acad. Sei., USA, 74, 5463-5467(1977)〕の２つの
基本的な方法が知られている。中でも、ジデオキシ連鎖
停止法は、化学分解法よりも簡単で短時間に塩基配列が
決定できるとの理由から、ＤＮＡ塩基配列決定法の主流
となっている。

【０００３】ジデオキシ連鎖停止法の基本原理は、以下
の如きものである。

【０００４】先ず、塩基配列を決めようとするＤＮＡ断
片を含む一本鎖ＤＮＡを調製し、これを複製過程の鋳型
とする。次いで、これに該ＤＮＡ断片の挿入部位の近傍
に結合するプライマーを結合させ、クレノウフラグメン
トと呼ばれる酵素（ＤＮＡポリメラーゼ）で該一本鎖Ｄ
ＮＡに相補的なＤＮＡを合成する。この合成は、４種の
天然の２’−デオキシリボヌクレオチド、及び連鎖停止
剤（ターミネーター）として、ラジオアイソトープ、蛍
光色素等で標識した４種の各塩基に対応する標識化
２’，３’−ジデオキシヌクレオチドの存在下で行われ
る。即ち、２’，３’−ジデオキシヌクレオチドは、
２’−デオキシリボヌクレオチドと同様にクレノウフラ
グメントの基質になるが、２’，３’−ジデオキシヌク
レオチドが結合した場合は、そこでＤＮＡの連鎖伸長が
停止する。この結果、共通の５’末端を持つが鎖長の異
なる様々なＤＮＡ鎖が合成される。即ち、アデニン
（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン
（Ｔ）の各塩基について、２’，３’−ジデオキシヌク
レオチド体を併用して前記操作を行った後、これを電気
泳動にかけると、塩基配列の順番をＤＮＡ断片の長さで
解読できるのである。

【０００５】上記のジデオキシ連鎖停止法に用いられる
標識化ターミネーターに関しては、例えば、サンガー等
の報告〔J. Mol. Biol., 143, 161-178（1980）〕、ス
ミス等の報告〔Nucleic Acids Res., 13, 2399-2412（1
985）〕、プローバー等の報告〔Science, 238, 336-341
（1987）〕、コンネル等の報告〔BioTechniques, 5,342
-348（1987）〕、リー等の報告〔Nucleic Acids Res.,
20, 2471-2483 （1992）〕、特公表平5-502371号公報、
特公平7-121239号公報等、種々の報告がなされている。

【０００６】また、上記のジデオキシ連鎖停止法に於け
る、操作手順の煩雑さ（鋳型一本鎖ＤＮＡの調製等）、
処理時間の高速化が難しい等の問題点を解決する手段の
１つとして、ＲＮＡポリメラーゼの特性を利用した連鎖
伸長反応によるＤＮＡ塩基配列決定法が考えられてい
る。

【０００７】このようなＲＮＡポリメラーゼを用いる塩
基配列決定法のうち、連鎖停止法については、４種の天
然リボヌクレオチド、及びターミネーターとして、ラジ
オアイソトープである例えば³²Ｐ等の放射性同位元素を
標識物質として用いた４種の各塩基に対応する標識化
３’−デオキシヌクレオチドを用いる方法が知られてい
る〔Biochemistry, 24, 5716-5723（1985）〕。

【０００８】しかしながら、この標識ターミネーター
は、標識物質として放射性同位元素を用いているので、
人体に対する安全性や廃棄物処理等を考慮すると、使い
勝手のよいものではない。そこで、放射性同位元素に代
えて蛍光により標識されたターミネーターを利用するこ
とが考えられている。

【０００９】一方、ＤＮＡ塩基配列決定の如き高度な技
術が要求される分野に於いて、ＲＮＡポリメラーゼを利
用した連鎖停止法に用いられる、蛍光標識化合物や蛍光
標識化３’−デオキシリボヌクレオチドには、使用する
ＲＮＡポリメラーゼの活性を妨げてはならない、という
厳しい制約が課せられているため、ＲＮＡポリメラーゼ
を用いる連鎖停止法に有用な蛍光標識化ターミネーター
としてどのような構造を有するものが適しているのか
を、ＤＮＡポリメラーゼとＲＮＡポリメラーゼとの構造
相関等に基づいて、上記の如き公知の標識化ターミネー
ターから推測することは極めて困難である。

【００１０】そこで、本発明者等は、ＲＮＡポリメラー
ゼを利用したＤＮＡの塩基配列決定方法に於けるターミ
ネーターとして、リンカー（ヌクレオチド残基と蛍光色
素基との結合部位。）に二重結合を有する蛍光標識化
３’−デオキシリボヌクレオチド誘導体を開発した（特
開平11-80189号公報）。この蛍光標識化３’−デオキシ
リボヌクレオチド誘導体は、ＲＮＡポリメラーゼによる
取り込み率が良好であるという点で、ＤＮＡ塩基配列決
定用ターミネーターとして有用なものであるが、低温で
の長期保存安定性、耐熱性等に若干問題があった。ま
た、塩基配列決定装置を用いて塩基配列を決定する場
合、電気泳動の結果に表れるピークの高さ、形状等が、
取り込まれるターミネーターの種類によって不均一であ
るため、塩基配列の決定を困難にする場合がある、とい
う問題があった。

【００１１】このような状況の中、ＲＮＡポリメラーゼ
を利用した核酸の塩基配列決定用ターミネーターとし
て、更には、ＤＮＡポリメラーゼを利用した核酸の塩基
配列決定用ターミネーターとして、実用的なレベルで使
用可能な新規な蛍光標識化ヌクレオチド誘導体の開発が
望まれている。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記した如
き状況に鑑みなされたもので、安全、高感度且つ高精度
に検出可能な新規な蛍光標識化ヌクレオチド誘導体、更
には、例えばＲＮＡポリメラーゼ作用を利用する核酸の
塩基配列決定法に於いて有用な３’−デオキシリボヌク
レオチド誘導体を提供することを目的とする。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決する目的でなされたものであり、（１）一般式［１］

【００１４】

【化１５】

【００１５】（式中、Ｑはヌクレオチド残基を表し、Ｒ
ａ及びＲｂは低級アルキレン基を表し、Ｅは置換基を有
していてもよいイミノ基を表し、Ｗは蛍光色素基を表
す。）で示されるヌクレオチド誘導体、（２）一般式
[１]に於いて、Ｑで示されるヌクレオチド残基が、３’
−デオキシリボヌクレオチド残基である、上記（１）に
記載のヌクレオチド誘導体をターミネーターとして使用
することを特徴とする、ＲＮＡポリメラーゼを用いた塩
基配列決定方法、及び（３）一般式[１]に於いて、Ｑで
示されるヌクレオチド残基が、３’−デオキシリボヌク
レオチド残基である、上記（１）に記載のヌクレオチド
誘導体を含んで成る、ＲＮＡポリメラーゼを用いる塩基
配列決定用ターミネーター、に関する発明である。

【００１６】即ち、本発明者等は、上記目的を達成すべ
く鋭意研究を重ねた結果、一般式[１]で示される蛍光標
識化ヌクレオチド誘導体を、例えば核酸の塩基配列決定
方法に於けるターミネーターとして用いれば、核酸の塩
基配列を高精度且つ迅速に決定し得ることを見出し、本
発明を完成するに至った。

【００１７】本発明の一般式［１］で示されるヌクレオ
チド誘導体は、（ａ）ヌクレオチド残基：Ｑ、（ｂ）リ
ンカー：一般式[５]

【００１８】

【化１６】

【００１９】（式中、Ｒａ、Ｒｂ及びＥは前記に同
じ。）及び（ｃ）蛍光色素基：Ｗ、の３つの構成部分に
分けることができる。

【００２０】一般式[１]に於いて、Ｑで示されるヌクレ
オチド残基としては、例えばリボヌクレオチド残基、
３’−デオキシリボヌクレオチド残基、２’−デオキシ
リボヌクレオチド残基、２’，３’−ジデオキシリボヌ
クレオチド残基等が挙げられ、具体的には、一般式[６]
及び［７］で示されるプリンヌクレオチド残基、一般式
[８]及び［９］で示されるピリミジンヌクレオチド残基
が挙げられる。

【００２１】

【化１７】

【００２２】

【化１８】

【００２３】

【化１９】

【００２４】

【化２０】

【００２５】（式中、Ｒ¹及びＲ²は、夫々独立して水素
原子、水酸基、低級アルコキシ基、アミノ基、アジド
基、チオール基又はハロゲン原子を表し、Ｒ³は、−Ｐ
Ｏ₃Ｈ₂、−Ｐ₂Ｏ₆Ｈ₃、−Ｐ₃Ｏ₉Ｈ₄又はその塩を表
す。） 尚、一般式[６］〜［９］に於いて、Ｒ¹及びＲ²で示さ
れるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原
子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。

【００２６】低級アルコキシ基としては、通常炭素数１
〜６のものが挙げられ、例えばメトキシ基、エトキシ
基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イ
ソブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ
基、ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基等が挙げ
られる。

【００２７】Ｒ³で示される−ＰＯ₃Ｈ₂、−Ｐ₂Ｏ₆Ｈ₃及
び−Ｐ₃Ｏ₉Ｈ₄の塩としては、例えばナトリウム塩， カ
リウム塩，リチウム塩等のアルカリ金属塩、例えばバリ
ウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばトリエチルアン
モニウム塩，ピリジン塩等の有機アミン塩、アンモニウ
ム塩等が挙げられる。

【００２８】また、一般式[５]で示されるリンカーは、
Ｑで示されるヌクレオチド残基とＷで示される蛍光色素
基とを結合するものである。即ち、該リンカーの二重結
合を有する末端の炭素原子が、前記のＱで示されるヌク
レオチド残基のうち、ピリミジン環を有するものについ
てはその５位に、また７−デアザプリン環を有するもの
についてはその７位に夫々結合し、更に、リンカーのＥ
で示されるイミノ基が、蛍光色素基上のカルボニル基と
結合することにより、ヌクレオチド残基と、蛍光色素基
とを有する化合物を形成する。

【００２９】一般式[５]で示されるリンカーに於いて、
Ｒａ及びＲｂで示される低級アルキレン基としては、直
鎖状、分枝状或いは環状でもよく、通常炭素数１〜１
０、好ましくは炭素数１〜６のものが挙げられ、具体的
には、例えばメチレン基，エチレン基，トリメチレン
基，テトラメチレン基，ペンタメチレン基，ヘキサメチ
レン基，ヘプタメチレン基，オクタメチレン基，ノナメ
チレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例
えばエチリデン基，プロピレン基，イソプロピリデン
基，1-メチルトリメチレン基，2-メチルトリメチレン
基，1,1-ジメチルエチレン基，1,2-ジメチルエチレン
基，エチルエチレン基，1-メチルテトラメチレン基，1,
1-ジメチルトリメチレン基，2,2-ジメチルトリメチレン
基，2-エチルトリメチレン基，1-メチルペンタメチレン
基，1-メチルヘキサメチレン基，1-メチルヘプタメチレ
ン基，1,4-ジエチルテトラメチレン基，2,4-ジメチルヘ
プタメチレン基，1-メチルオクタメチレン基，1-メチル
ノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロ
プロピレン基，1,3-シクロブチレン基，1,3-シクロペン
チレン基，1,4-シクロへキシレン基，1,5-シクロヘプチ
レン基，1,5-シクロオクチレン基，1,5-シクロノニレン
基，1,6-シクロデカレン基等の環状アルキレン基等が挙
げられる。

【００３０】一般式[１]に於いて、Ｅで示されるイミノ
基の置換基としては、反応活性を有さない基なら特に限
定されないが、例えば炭素数１〜６の低級アルキル基が
挙げられ、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、具体的
には、例えばメチル基，エチル基，ｎ-プロピル基，イ
ソプロピル基，ｎ-ブチル基，イソブチル基，sec-ブチ
ル基，tert-ブチル基，ｎ-ペンチル基，イソペンチル
基，ネオペンチル基，sec-ペンチル基，tert-ペンチル
基，２-メチルブチル基，１-エチルプロピル基、1,2-ジ
メチルプロピル基、ｎ-ヘキシル基、イソヘキシル基、
ネオヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、2
-メチルペンチル基、3-メチルペンチル基、2,2-ジメチ
ルブチル基、2-エチルブチル基、1,1-メチルエチルプロ
ピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペ
ンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。またこれ
らの置換基の水素原子は、更にフッ素，塩素，臭素，ヨ
ウ素等のハロゲン原子等で置換されていてもよい。

【００３１】一般式[１]に於いて、Ｗで示される蛍光色
素基としては、特に限定されないが、アルゴンレーザー
のような適切な供給源からのエネルギー吸収による刺激
に引き続いて、検知可能な発光放射を生じる蛍光色素基
が好ましい。

【００３２】Ｗで示される蛍光色素基としては、例え
ば、一般式[２]

【００３３】

【化２１】

【００３４】〔式中、Ｔは炭素原子又は窒素原子を表
し、Ｒｃはヘテロ原子を有していてもよい二価の炭化水
素残基を表し、Ｘは酸素原子、硫黄原子、−ＣＨ₂−、
−ＮＲ⁴−（式中、Ｒ⁴は、水素原子、低級アルキル基、
アラルキル基又はアリール基を表す。）又は−ＢＦ₂−
を表し、環Ａ及び環Ｂは、何れか一方が

【００３５】

【化２２】

【００３６】であり、他方が

【００３７】

【化２３】

【００３８】（ここで、Ｚは、＝Ｏ又は＝Ｎ⁺Ｒ⁵Ｒ⁶を
表し、Ｙは、−ＯＨ又は−ＮＲ⁵Ｒ⁶を表し、Ｒ⁵及びＲ⁶
は、夫々独立して水素原子又は低級アルキル基を表す。
また、Ｒ⁵及びＲ⁶は、環Ａ又は環Ｂ上の−ＮＲ⁵Ｒ⁶又は
＝Ｎ⁺Ｒ⁵Ｒ⁶が結合している炭素原子の両隣の炭素原子
に夫々アルキレン基として結合しているものであっても
よい。）であるか、或いは何れか一方が、

【００３９】

【化２４】

【００４０】であり、他方が

【００４１】

【化２５】

【００４２】であり、環Ｃ

【００４３】

【化２６】

【００４４】に於ける破線-----は、環Ａ及び環Ｂの構
造に対応した位置の結合手を意味する。また、

【００４５】

【化２７】

【００４６】は、環Ａ、環Ｂ又は環Ｃの何れかの炭素原
子に任意に結合していることを意味する。更に、上記環
Ａ、環Ｂ、環Ｃ及びＲｃは、更に置換基を有していても
よい。〕で示される基等が挙げられる。

【００４７】一般式[２]に於いて、Ｒｃで示されるヘテ
ロ原子を有していてもよい二価の炭化水素残基として
は、二価の炭化水素基の鎖中の任意の位置に、ヘテロ原
子を有する二価の基を１つ以上、好ましくは１〜５個含
まれていてもよい基が挙げられる。

【００４８】二価の炭化水素基としては、例えばアルキ
レン基、アリーレン基等が挙げられる。

【００４９】アルキレン基としては、直鎖状、分枝状又
は環状でもよく、通常炭素数１〜10、好ましくは炭素数
１〜６のアルキレン基が挙げられ、具体的には、例えば
メチレン基，エチレン基，トリメチレン基，テトラメチ
レン基，ペンタメチレン基，ヘキサメチレン基，ヘプタ
メチレン基，オクタメチレン基，ノナメチレン基，デカ
メチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン
基，プロピレン基，イソプロピリデン基，1-メチルトリ
メチレン基，2-メチルトリメチレン基，1,1-ジメチルエ
チレン基，1,2-ジメチルエチレン基，エチルエチレン
基，1-メチルテトラメチレン基，1,1-ジメチルトリメチ
レン基，2,2-ジメチルトリメチレン基，2-エチルトリメ
チレン基，1-メチルペンタメチレン基，1-メチルヘキサ
メチレン基，1-メチルヘプタメチレン基，1,4-ジエチル
テトラメチレン基，2,4-ジメチルヘプタメチレン基，1-
メチルオクタメチレン基，1-メチルノナメチレン基等の
分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基，1,3-
シクロブチレン基，1,3-シクロペンチレン基，1,4-シク
ロへキシレン基，1,5-シクロヘプチレン基，1,5-シクロ
オクチレン基，1,5-シクロノニレン基，1,6-シクロデカ
レン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。

【００５０】アリーレン基としては、例えばo-フェニレ
ン基，m-フェニレン基，p-フェニレン基，4,4’-ビフェ
ニリレン基，2,7-ナフチレン基，p-キシレン-α,α’-
ジイル基，m-キシレン-α,α’-ジイル基等が挙げられ
る。

【００５１】これら二価の炭化水素基は、鎖中の任意の
位置にヘテロ原子を有する二価の基を１つ以上含んでい
てもよく、ヘテロ原子を有する二価の基としては、例え
ば窒素原子、硫黄原子、酸素原子等のヘテロ原子を有す
る、反応活性を有さない基であれば特に限定されない
が、具体的には、例えば−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ⁷−
（式中、Ｒ⁷は水素原子、低級アルキル基、アラルキル
基又はアリール基を表す。），

【００５２】

【化２８】

【００５３】等が挙げられる。

【００５４】ヘテロ原子を有する二価の基として表され
る−ＮＲ⁷−に於ける、Ｒ⁷で示される低級アルキル基と
しては、直鎖状、分枝状又は環状でもよく、通常炭素数
１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル
基、エチル基、ｎ-プロピル基、イソプロピル基、ｎ-ブ
チル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル
基、ｎ-ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル
基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、2-メチルブチ
ル基、１-エチルプロピル基、1,2-ジメチルプロピル
基、ｎ-ヘキシル基、イソヘキシル基、ネオヘキシル
基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、2-メチルペン
チル基、3-メチルペンチル基、2,2-ジメチルブチル基、
2-エチルブチル基、1,1-メチルエチルプロピル基、シク
ロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シ
クロヘキシル基等が挙げられる。

【００５５】Ｒ⁷で示されるアラルキル基としては、通
常炭素数７〜20のものが挙げられ、具体的には、例えば
ベンジル基、フェネチル基、フェニルプロピル基、フェ
ニルブチル基、ジフェニルメチル基、トリチル基等が挙
げられる。

【００５６】Ｒ⁷で示されるアリール基としては、単
環、縮合多環の何れでもよく、具体的には、例えばフェ
ニル基，o-トリル基，p-トリル基，m-トリル基，2,3-キ
シリル基，2,4-キシリル基，2,5-キシリル基，2,6-キシ
リル基，メシチル基等の単環、例えばナフチル基，アン
トリル基，フェナントリル基等の縮合多環等が挙げられ
る。

【００５７】これらのＲｃで示されるヘテロ原子を含ん
でいてもよい二価の炭化水素残基は、更に置換基を有し
ていてもよく、当該置換基としては、例えばメトキシ
基，エトキシ基，ｎ-プロポキシ基，イソプロポキシ基
等の低級アルコキシ基、例えばフッ素，塩素，臭素，ヨ
ウ素等のハロゲン原子、例えばカルボキシル基，スルホ
ン酸基又はその塩が挙げられる。カルボキシル基及びス
ルホン酸基の塩としては、例えばナトリウム塩，カリウ
ム塩，リチウム塩等のアルカリ金属塩、例えばバリウム
塩等のアルカリ土類金属塩、例えばトリエチルアンモニ
ウム塩，ピリジン塩等の有機アミン塩、アンモニウム塩
等が挙げられる。

【００５８】一般式[２]に於いて、Ｘとして表される−
ＮＲ⁴−に於ける、Ｒ⁴で示される低級アルキル基として
は、直鎖状、分枝状又は環状でもよく、通常炭素数１〜
６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エ
チル基、ｎ-プロピル基、イソプロピル基、ｎ-ブチル
基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ｎ-
ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、sec-ペ
ンチル基、tert-ペンチル基、2-メチルブチル基、１-エ
チルプロピル基、1,2-ジメチルプロピル基、ｎ-ヘキシ
ル基、イソヘキシル基、ネオヘキシル基、sec-ヘキシル
基、tert-ヘキシル基、2-メチルペンチル基、3-メチル
ペンチル基、2,2-ジメチルブチル基、2-エチルブチル
基、1,1-メチルエチルプロピル基、シクロプロピル基、
シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基
等が挙げられる。

【００５９】Ｒ⁴で示されるアラルキル基としては、通
常炭素数７〜20のものが挙げられ、具体的には、例えば
ベンジル基、フェネチル基、フェニルプロピル基、フェ
ニルブチル基、ジフェニルメチル基、トリチル基等が挙
げられる。

【００６０】Ｒ⁴で示されるアリール基としては、単
環、縮合多環の何れでもよく、具体的には、例えばフェ
ニル基，o-トリル基，p-トリル基，m-トリル基，2,3-キ
シリル基，2,4-キシリル基，2,5-キシリル基，2,6-キシ
リル基，メシチル基等の単環、例えばナフチル基，アン
トリル基，フェナントリル基等の縮合多環等が挙げられ
る。

【００６１】一般式[２]に於いて、Ｚとして表される＝
Ｎ⁺Ｒ⁵Ｒ⁶又はＹとして表される−ＮＲ⁵Ｒ⁶に於ける、
Ｒ⁵及びＲ⁶で示される低級アルキル基としては、直鎖
状、分枝状又は環状でもよく、通常炭素数１〜６のもの
が挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、
ｎ-プロピル基、イソプロピル基、ｎ-ブチル基、イソブ
チル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ｎ-ペンチル
基、イソペンチル基、ネオペンチル基、sec-ペンチル
基、tert-ペンチル基、2-メチルブチル基、１-エチルプ
ロピル基、1,2-ジメチルプロピル基、ｎ-ヘキシル基、
イソヘキシル基、ネオヘキシル基、sec-ヘキシル基、te
rt-ヘキシル基、2-メチルペンチル基、3-メチルペンチ
ル基、2,2-ジメチルブチル基、2-エチルブチル基、1,1-
メチルエチルプロピル基、シクロプロピル基、シクロブ
チル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げ
られる。

【００６２】一般式[２]に於いて、環Ａ、環Ｂ及び環Ｃ
は更に置換基を有していてもよく、当該置換基として
は、例えばフッ素，塩素，臭素，ヨウ素等のハロゲン原
子、例えばメチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，イソ
プロピル基，ｎ−ブチル基，イソブチル基等の低級アル
キル基、例えばビニル基，アリル基，１−プロペニル
基，イソプロペニル基，１−ブテニル基，２−ブテニル
基，1,3−ブタジエニル基等のアルケニル基、例えばベ
ンジル基，フェネチル基，フェニルプロピル基，フェニ
ルブチル基，ジフェニルメチル基等のアラルキル基、例
えばフェニル基，ｏ−トリル基，ｍ−トリル基，ｐ−ト
リル基，2,3-キシリル基，2,4-キシリル基，メシチル基
等のアリール基、例えばメトキシ基，エトキシ基，ｎ−
プロポキシ基，イソプロポキシ基等の低級アルコキシ
基、例えばチオラニル基，ピペリジル基、フリル基等の
複素環基等が挙げられる。またこれらの置換基のうち芳
香環を有するものについては、これら芳香環上に、更
に、例えばメチル基，エチル基，ｎ−プロピル基，イソ
プロピル基等の低級アルキル基、例えばメトキシ基，エ
トキシ基，ｎ−プロポキシ基，イソプロポキシ基等の低
級アルコキシ基、例えばフェニル基等のアリール基等の
置換基を有していてもよい。

【００６３】また、一般式[２]に於けるＴが炭素原子の
場合は、一般式[２]は好ましくは一般式[３]

【００６４】

【化２９】

【００６５】〔式中、Ｊはカルボキシル基を表し、Ｘは
酸素原子、硫黄原子、−ＮＲ⁴−（式中、Ｒ⁴は、前記に
同じ。）を表し、また、環Ａ及び環Ｂは、何れか一方が

【００６６】

【化３０】

【００６７】であり、他方が

【００６８】

【化３１】

【００６９】（ここで、Ｚ、Ｙ及びその他の定義は前記
に同じ。）であり、その他の定義は前記に同じであ
る。〕で示される基が挙げられる。

【００７０】更に、一般式[３]に於いて、Ｊで示される
カルボキシル基が一般式[１０]

【００７１】

【化３２】

【００７２】で示される如き位置に結合している場合、
一般式[１０]は、下記式の何れの状態をも取り得る。

【００７３】

【化３３】

【００７４】また、該カルボキシル基は、例えばナトリ
ウム塩，カリウム塩，リチウム塩等のアルカリ金属塩、
例えばバリウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばトリ
エチルアンモニウム塩，ピリジン塩等の有機アミン塩、
アンモニウム塩等の塩を形成していてもよい。

【００７５】一般式［３］に於いて、環Ｃ

【００７６】

【化３４】

【００７７】に於ける破線-----は、環Ａ及び環Ｂの構
造に対応した位置の結合手を意味するものであるが、こ
れを具体的に示すと、例えば以下の如くになる。即ち、
環Ａが

【００７８】

【化３５】

【００７９】である場合は、環Ｃに於ける結合手の位置
は以下に示す如きであり、

【００８０】

【化３６】

【００８１】また、環Ｂが

【００８２】

【化３７】

【００８３】である場合は、環Ｃに於ける結合手の位置
は以下に示す如きである。

【００８４】

【化３８】

【００８５】更に、Ｘが−ＮＨ−である場合、環Ａ（又
は環Ｂ）と環Ｃとは、下記に示す何れの状態をも取り得
る。

【００８６】

【化３９】

【００８７】尚、一般式[３]に於いて、環Ａ又は環Ｂに
於ける置換基Ｚが＝Ｎ⁺Ｒ⁵Ｒ⁶であり、Ｙが−ＮＲ⁵Ｒ⁶
である場合で、Ｒ⁵及びＲ⁶が、環Ａ又は環Ｂ上の＝Ｎ⁺
Ｒ⁵Ｒ ⁶又は−ＮＲ⁵Ｒ⁶が結合している炭素原子の両隣の
炭素原子に夫々アルキレン基として結合している場合と
しては、例えば一般式[１１]

【００８８】

【化４０】

【００８９】（式中、Ｑ₁、Ｑ₂、Ｑ₃及びＱ₄は、例えば
エチレン基、トリメチレン基等のアルキレン基を表し、
Ｊ及びＸは前記に同じ。）で示すものが挙げられる。

【００９０】一般式[２]に於けるＴが窒素原子の場合
は、一般式[２]は好ましくは一般式［４］

【００９１】

【化４１】

【００９２】（式中、Ｘは、−ＢＦ₂−を表し、環Ａ及
び環Ｂは、何れか一方が

【００９３】

【化４２】

【００９４】であり、他方が

【００９５】

【化４３】

【００９６】であり、Ｒｃ及びその他の定義は前記に同
じである。）で示される基が挙げられる。

【００９７】一般式[４]に於いて、環Ｃ

【００９８】

【化４４】

【００９９】に於ける破線-----は、環Ａ及び環Ｂの構
造に対応した位置の結合手を意味するものであるが、こ
れを具体的に示すと、例えば以下の如くになる。

【０１００】

【化４５】

【０１０１】一般式[２]で示される蛍光色素基として
は、好ましくは、ローダミン系色素、フルオレッセイン
系色素、4,4-ジフルオロ-4-ボラ-3a,4a-ジアザ-s-イン
ダセン系色素等に由来するものが挙げられる。これら色
素の具体例としては、例えば５（又は６）カルボキシテ
トラメチルローダミン（以下、ＴＭＲと略記する。），
５（又は６）カルボキシローダミンＸ（以下、ＸＲと略
記する。），５（又は６）カルボキシローダミン６Ｇ
（以下、Ｒ６Ｇと略記する。），５（又は６）カルボキ
シローダミン１１０（以下、Ｒ１１０と略記する。）等
のローダミン系色素、例えば５（又は６）カルボキシフ
ルオレッセイン（以下、ＦＡＭと略記する。），５（又
は６）カルボキシ-2',7'-ジクロロフルオレッセイン，
５（又は６）カルボキシ-2',4',5',7'-テトラクロロフ
ルオレッセイン，５（又は６）カルボキシ-4,7-ジクロ
ロ-2',7'-ジメトキシフルオレッセイン，５（又は６）
カルボキシ-4,7,4',5'-テトラクロロ-2',7'-ジメトキシ
フルオレッセイン，５（又は６）カルボキシ-4',5'-ジ
クロロ-2',7'-ジメトキシフルオレッセイン（以下、Ｊ
ＯＥと略記する。），５（又は６）カルボキシ-4,7-ジ
クロロ-1',2',7',8'-ジベンゾフルオレッセイン，５
（又は６）カルボキシ-4,7-ジクロロ-1',2',7',8'-ジベ
ンゾフルオレッセイン，５（又は６）カルボキシ-2',7'
-ジクロロフルオレッセイン，５（又は６）カルボキシ-
2',7'-ジフルオロフルオレッセイン（以下、オレゴング
リーン ４８８ カルボン酸と略記する。）等のフルオレ
ッセイン系色素、例えば4,4-ジフルオロ-1,3,5,7-テト
ラメチル-4-ボラ-3a,4a-ジアザ-s-インダセン-8-プロピ
オン酸（以下、ＢＯＤＩＰＹ 493/503と略記する。），
2,6-ジブロモ-4,4-ジフルオロ-5,7-ジメチル-4-ボラ-3
a,4a-ジアザ-s-インダセン-3-プロピオン酸（以下、Ｂ
ＯＤＩＰＹ Ｆｌ Ｂｒ₂と略記する。），4,4-ジフルオ
ロ-5-フェニル-4-ボラ-3a,4a-ジアザ-s-インダセン-3-
プロピオン酸（以下、ＢＯＤＩＰＹ Ｒ６Ｇと略記す
る。），4,4-ジフルオロ-5,7-ジフェニル-4-ボラ-3a,4a
-ジアザ-s-インダセン-3-プロピオン酸（以下、ＢＯＤ
ＩＰＹ 530/550と略記する。），6-((4,4-ジフルオロ-
1,3-ジメチル-5(4-メトキシフェニル)-4-ボラ-3a,4a-ジ
アザ-s-インダセン-2-プロピオニル)アミノ)ヘキサン酸
（以下、ＢＯＤＩＰＹＴＭＲと略記する。），4,4-ジフ
ルオロ-5-(4-フェニル-1,3-ブタジエニル)-4-ボラ-3a,4
a-ジアザ-s-インダセン-3-プロピオン酸（以下、ＢＯＤ
ＩＰＹ 581/591と略記する。），6(((4-(4,4-ジフルオ
ロ-5-(2-チエニル)-4-ボラ-3a,4a-ジアザ-s-インダセン
-3-イル)フェノキシ)アセチル)アミノ)-ヘキサン酸（以
下、ＢＯＤＩＰＹ ＴＲ−Ｘと略記する。）等の4,4-ジ
フルオロ-4-ボラ-3a,4a-ジアザ-s-インダセン系色素等
の蛍光色素に由来するものが挙げられる。

【０１０２】本発明のヌクレオチド誘導体は、例えば一
般式［１２］

【０１０３】

【化４６】

【０１０４】〔式中、Ｅ’は、置換基を１つ有していて
もよいアミノ基（置換基としては、Ｅで示される、置換
基を有していてもよいイミノ基の置換基と同様のものが
挙げられる。）を表し、Ｑ、Ｒａ及びＲｂは前記に同
じ。）で示されるヌクレオチド誘導体とＷ−ＯＳｕ（式
中、Ｓｕはスクシンイミド基を表し、Ｗは前記に同
じ。）で示される蛍光色素基のスクシンイミジルエステ
ル体とを反応させることにより容易に得られる。

【０１０５】蛍光標識化３’−デオキシリボヌクレオチ
ド誘導体は、例えば以下の如き合成経路に準じて製造す
ることができる。

【０１０６】尚、下記合成経路中、Ｗは上記した如き蛍
光色素基を表わす。また、下記合成経路に於いて使用さ
れる略称の正式名は下記の通りである。 （Ｂｏｃ）₂Ｏ：二炭酸ジ-tert-ブチル ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド sat.ＨＣｌ／Ｅｔ₂Ｏ： 飽和塩酸／ジエチルエーテル
溶液 Ｅｔ₃Ｎ：トリエチルアミン -Ｔｆａ：トリフルオロアセチル基 (ＥｔＯ)₃ＰＯ：リン酸トリエチル tris(ＴＢＡＰＰ)：トリス（トリ−ｎ−ブチルアンモニ
ウム）ピロホスフェート Ｗ−ＯＳｕ：蛍光色素基のコハク酸イミジルエステル体 (Ｐｈ₃Ｐ)₄Ｐｄ：テトラキス（トリフェニルホスフィ
ン）パラジウム（０）

【０１０７】（１）リンカー（一般式[５]に於いて、Ｒ
ａがメチレン基、Ｒｂがエチレン基及びＥがイミノ基で
ある化合物。）の合成。

【０１０８】

【化４７】

【０１０９】（２）リンカー（一般式[５]に於いて、Ｒ
ａがメチレン基、Ｒｂがテトラメチレン基及びＥがイミ
ノ基である化合物。）の合成。

【０１１０】

【化４８】

【０１１１】（３）蛍光標識３’−デオキシウリジン−
５’−トリホスフェート（一般式［１］に於けるＲａが
メチレン基、Ｒｂがテトラメチレン基である化合物）の
合成。

【０１１２】

【化４９】

【０１１３】（４）蛍光標識３’−デオキシシチジン−
５’−トリホスフェート（一般式［１］に於けるＲａが
メチレン基、Ｒｂがテトラメチレン基である化合物）の
合成。

【０１１４】

【化５０】

【０１１５】（５）蛍光標識７−デアザ−３’−デオキ
シアデノシン−５’−トリホスフェート（一般式［１］
に於けるＲａがメチレン基、Ｒｂがエチレン基である化
合物）の合成。

【０１１６】

【化５１】

【０１１７】（６）蛍光標識７−デアザ−３’−デオキ
シグアノシン−５’−トリホスフェート（一般式［１］
に於けるＲａがメチレン基、Ｒｂがエチレン基である化
合物）の合成。

【０１１８】

【化５２】

【０１１９】（７）蛍光標識７−デアザ−３’−デオキ
シグアノシン−５’−トリホスフェート（一般式［１］
に於けるＲａがメチレン基、Ｒｂがテトラメチレン基で
ある化合物）の合成。

【０１２０】

【化５３】

【０１２１】尚、本発明のヌクレオチド誘導体のうち、
３’−デオキシリボヌクレオチド誘導体以外のものにつ
いても同様に、上記の如き合成経路により製造すること
ができる。

【０１２２】本発明のヌクレオチド誘導体は、ＤＮＡ塩
基配列決定用ターミネーターとして有用であり、中でも
３’−デオキシリボヌクレオチド誘導体は、ＲＮＡポリ
メラーゼを用いる連鎖停止法によるＤＮＡ塩基配列決定
法に於けるＲＮＡ伸長反応停止剤として非常に有効であ
るので、これらを用いることによりＤＮＡ塩基配列を簡
便且つ短時間に決定することができる。

【０１２３】即ち、塩基配列を決定すべき鋳型ＤＮＡを
各ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターの下流に繋ぎ、ア
デニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、ウラ
シル（Ｕ）の４種類のリボヌクレオチドと該リボヌクレ
オチドに対応する本発明の異なる蛍光色素で修飾された
４種の３’−デオキシリボヌクレオチド誘導体の存在下
で各塩基の部位でＲＮＡポリメラーゼの伸長停止反応を
行い、それらの産物を混合して１つのレーンで電気泳動
した後、レーザーの励起による蛍光波長を分光すること
によりＤＮＡ塩基配列を逐次決定することができる。

【０１２４】上記の如きＲＮＡポリメラーゼを用いる連
鎖停止法に於いて使用されるＲＮＡポリメラーゼとして
は特に限定されないが、伸長反応のプロセッシビティの
高いプロモーター依存型ファージ由来のＲＮＡポリメラ
ーゼが好ましく挙げられる。これらＲＮＡポリメラーゼ
の具体例としては、Ｔ₇ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ₃ＲＮＡ
ポリメラーゼ、ＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼ等が挙げられ
る。

【０１２５】また、本発明のヌクレオチド誘導体は、プ
ライマーに組み込むことによりＤＮＡの塩基配列を決定
することも可能である。

【０１２６】以下に、実施例及び参考例を挙げて本発明
を更に詳細に説明するが、本発明はこれらにより何等限
定されるものではない。

【０１２７】

【実施例】参考例１．N-Boc-2-アミノエタノール(前述
の合成経路中の化合物２に相当し、以下、化合物２と略
記する。尚、以下の化合物についても同様に合成経路中
の化合物を夫々示す。)の合成 2-アミノエタノール(化合物１：4.7g, 77mmol)（和光純
薬工業（株）製）をアセトニトリル(100ml)に溶解し、
１Ｎ水酸化ナトリウム溶液(38ml)及び二炭酸-ジ-tert-
ブチル(25g, 115mmol)を加え、35〜40℃で５時間反応さ
せた。反応終了後、得られた反応液を濃縮した後、残渣
をシリカゲルカラム(溶出液；クロロホルム：メタノー
ル＝20：１)で精製し、目的物(化合物２) 11.1gを得た
（収率 89.5％）。 元素分析 C₇H₁₅NO₃(Mw= 161.20)として 計算値(％)； C:52.16, H:9.38, N:8.69 実測値(％)； C:52.18, H:9.36, N:8.79

【０１２８】参考例２．3-(N-Boc-2-アミノエチルオキ
シ)-1-プロペン(化合物３)の合成 参考例１．で得た N-Boc-2-アミノエタノール(化合物
２：53.5g, 330mmol)をDMF(１Ｌ)に溶解し、次いで水酸
化バリウム八水和物(78g)、酸化バリウム(305g)及び臭
化アリル(48.4g, 400mmol)を順次添加し、室温で６時間
反応させた。反応終了後、得られた反応液をクロロホル
ム(1L)で希釈した後、不溶物を濾別し、次いで母液を0.
2Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水及び食塩水で順次
洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥
後、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラム(溶出液；
ヘキサン：酢酸エチル＝６：１)で精製し、目的物(化合
物３)49.8gを得た(収率 75.0％)。 元素分析 C₁₀H₁₉NO₃(Mw= 201.27)として 計算値(％)； C:59.68, H:9.52, N:6.96 実測値(％)； C:59.58, H:9.58, N:6.93

【０１２９】参考例３．3-(2-トリフルオロアセタミド
エチルオキシ)-1-プロペン(化合物４)合成 参考例２．で得た3-(N-Boc-2-アミノエチルオキシ)-1-
プロペン(化合物３：33.4g, 166mmol)を飽和塩酸ジエチ
ルエーテル溶液(330ml)に溶解し、室温で終夜攪拌反応
させた後、析出した結晶を濾取した。得られた結晶をク
ロロホルム(250ml)に懸濁し、トリエチルアミン(14ml,
100mmol)及びトリフルオロ酢酸メチル(11m, 10mmol)を
添加した後、室温で２時間反応させた。反応終了後、得
られた反応液を0.2Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水
及び食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで
乾燥させた。乾燥後、溶媒を留去し、目的物(化合物４)
17.5gを得た(収率 53.6％)。 元素分析 C₇H₁₀F₃NO₂(Mw= 197.16)として 計算値(％)； C:42.64, H:5.11, N:7.10 実測値(％)； C:42.67, H:5.15, N:7.04¹ H-NMR (400MHz，DMSO) δppm: 3.32-3.37 (m, 2H, -OC
H₂ CH₂NHTfa), 3.40 (t,1H, J= 2.4Hz, HCC-), 3.54 (t,
2H, J=5.6Hz, -CH₂ NHTfa), 4.14 (d, 2H, J=2.4Hz, HC
CCH₂ -), 9.47 (br s, 1H, NHTfa)

【０１３０】参考例４．N-Boc-4-アミノブタノール(化
合物６)の合成 4-アミノ-1-ブタノール(化合物５：25g, 280mmol)(東京
化成工業（株）製)をアセトニトリル(500ml)に溶解し、
次いで1Ｎ水酸化ナトリウム溶液(140ml)及び二炭酸-ジ-
tert-ブチル(92g, 420mmol)を加え、35〜40℃で2.5時間
攪拌反応させた。以下、参考例１．で示した方法と同様
に操作を行い、目的物(化合物６) 28.1gを得た(収率 5
2.9％)。 元素分析 C₉H₁₉NO₃(Mw= 189.25)として 計算値(％)； C:57.12, H:10.12, N:7.40 実測値(％)； C:57.20, H:10.20, N:7.21

【０１３１】参考例５．3-(N-Boc-4-アミノブチルオキ
シ)-1-プロペン(化合物７)の合成 参考例４．で得たN-Boc-4-アミノブタノール(化合物
６：28g, 150mmol)をDMF(400ml)に溶解し、次いで水酸
化バリウム八水和物(35g)、酸化バリウム(136g)及び臭
化アリル(25.4g, 210mmol)を順次添加し、室温で終夜攪
拌反応させた。以下、参考例２．で示した方法と同様に
操作を行い、目的物(化合物７) 20.5gを得た(収率 59.5
％)。 元素分析 C₁₂H₂₃NO₃(Mw= 229.32)として 計算値(％)； C:62.85, H:10.11, N:6.11 実測値(％)； C:62.80, H:10.07, N:6.16

【０１３２】参考例６．3-(4-トリフルオロアセタミド
ブチルオキシ)-1-プロペン(化合物８)の合成 参考例５．で得た3-(N-Boc-4-アミノブチルオキシ)-1-
プロペン(化合物７：20g, 88mmol)を飽和塩酸ジエチル
エーテル溶液(200ml)に溶解し、室温で終夜攪拌反応さ
せた。反応終了後、析出した結晶を濾取し、次いで、得
られた結晶をクロロホルム(250ml)に懸濁し、トリエチ
ルアミン(12ml, 85mmol)及びトリフルオロ酢酸メチル(1
0ml, 93mmol)を添加し、室温で２時間攪拌反応させた。
以下、参考例３．で示した方法と同様に操作を行い、目
的物(化合物８) 16.2gを得た(収率93.6％)。 元素分析 C₉H₁₄F₃NO₂(Mw= 225.21)として 計算値(％)； C:48.00, H:6.27, N:6.22 実測値(％)； C:48.10, H:6.29, N:6.25¹ H-NMR (400MHz, DMSO) δppm: 1.50-1.53 (m, 4H, -OC
H₂ CH₂CH₂ CH₂NHTfa), 3.16-3.17 (m, 2H, -OCH₂ CH₂CH₂CH
₂NHTfa), 3.35 (t, 1H, J=2.4Hz, HCC-), 3.41-3.44
(m, 2H, -CH₂ NH-Tfa), 4.09 (d, 2H, J=2.4Hz, HCCCH
₂ -), 9.36 (br s, 1H,NHTfa)

【０１３３】参考例７．3'-デオキシ-5-{(4'''-トルフ
ルオロアセタミドブチルオキシ)-1''-プロピニル}ウリ
ジン(化合物10)の合成 塩化パラジウム (885mg,5mmol)と塩化リチウム (425mg,
10mmol)のメタノール(50ml)溶液を一晩攪拌し、0.1Ｍリ
チウムテトラクロロパラデート溶液を調製した。3'-デ
オキシウリジン（化合物９：342mg, 1.5mmol）と酢酸水
銀（ＩＩ）(495mg, 1.5mmol)を水(15ml)に溶解し、60℃
で４時間攪拌した。得られた反応液を減圧濃縮後、残渣
を無水メタノール(15ml)に懸濁させ、先に調製した0.1
Ｍリチウムテトラクロロパラデート溶液(16.5ml)及び参
考例６．で得た3-(4-トリフルオロアセタミドブチルオ
キシ)-1-プロペン(化合物８：1.2g, 5.3mmol)を加え18
時間環流反応させた。反応液を硫化水素ガスで飽和させ
た後、沈殿物をセライト濾過で濾別し、得られた濾液を
濃縮した。次いで、残渣をシリカゲルカラム（溶出液；
クロロホルム：メタノール＝９：１）及び、ＨＰＬＣ
(カラム; WakosilＩＩ 5C18 RS Prep 20.0×250mm, 溶
出液；アセトニトリル-水混合溶液）にて精製し、目的
物（化合物10) 75mgを得た(収率 11.1％)。¹ H-NMR (400MHz, DMSO) δppm: 1.51 (br s, 4H, -OCH₂
CH₂CH₂ CH₂NHTfa), 1.73(m, 1H, 3’-Ha), 2.00 (m, 1H,
3’-Hb), 3.18 (d, 2H, J=6.0Hz, -OCH₂ CH₂CH₂CH₂NHTf
a), 3.38 (m, 2H, -CH₂ NHTfa), 3.53-3.56 (m, 1H, 5’
-Ha), 3.78-3.81(m, 1H, 5’-Hb), 3.95 (d, 2H, J=5.6
Hz, -CH=CHCH₂ O-), 4.22 (m, 1H, 4’-H), 4.23 (m, 1
H, 2’-H), 5.21 (t, 1H, J=5.0Hz, 5’-OH), 5.53 (d,
1H, J=4.0Hz, 2’-OH), 5.65 (s, 1H, 1’-H), 6.22
(d, 1H, J=15.6Hz, -CH=CHCH₂O-),6.47 (dt, 1H, J =5.
9, 16.0Hz, -CH=CHCH₂O-), 8.26 (s, 1H, 6-H), 9.38
(brs, 1H, NHTfa), 11.37 (s, 1H, 3-NH)

【０１３４】参考例８．5-{(4'''-アミノブチルオキシ)
-1''-プロピニル}-3'-デオキシウリジントリホスフェー
ト(化合物11)の合成 参考例７．で得た3'-デオキシ-5-{(4'''-トルフルオロ
アセタミドブチルオキシ)-1''-プロピニル}ウリジン(化
合物10：135mg, 0.3mmol)をリン酸トリエチル(1.3ml)に
溶解した後、氷冷下、オキシ塩化リン(48.6μl， 0.52m
mol)を添加し、17時間攪拌反応させた。反応終了後、得
られた反応液を0.5Ｍビス(トリブチルアンモニウム)ピ
ロリン酸−ＤＭＦ溶液(3.6ml)に投入し、氷冷下、２時
間攪拌反応させた。反応終了後、得られた反応液に７％
トリエチルアミン水溶液(８ml)を加え、冷蔵庫内で終夜
攪拌反応させた。反応終了後、得られた反応液をジエチ
ルエーテルで洗浄し、得られた水層をDEAE-TOYOPEARLイ
オン交換カラムクロマトグラフィー(東ソー社製；1.2×
30.0cm，溶出液；0.3Ｍ炭酸水素トリエチルアンモニウ
ム緩衝液)で精製し、溶出画分を減圧濃縮後、得られた
残渣を25％アンモニア水(40ml)に溶解し、冷蔵庫内で終
夜攪拌反応させた。得られた反応液を減圧濃縮し、残渣
を凍結乾燥させ目的物(化合物11) 65.6mgを得た（収率
21.9％）。 元素分析 4トリエチルアミン塩C₄₀H₈₈N₇O₁₅P₃(Mw= 10
00.10)として 計算値(％)； C:48.04, H:8.87, N:9.80, 実測値(％)； C:47.90, H:8.91, N:9.63,

【０１３５】実施例１．5-{(4'''-ＴＭＲ-アミノブチル
オキシ)-1''-プロピニル}-3'-デオキシウリジントリホ
スフェート(化合物12)の合成 参考例８．で得た5-{(4'''-アミノブチルオキシ)-1''-
プロピニル}-3'-デオキシウリジントリホスフェート(化
合物11：12.6mg, 8μmol)を水−ＤＭＦ混合溶媒(400μ
l)に溶解し、トリエチルアミン(10μl, 70μmol)及び5-
カルボキシテトラメチルローダミンコハク酸イミドエス
テル（モレキュラープローブ社製）(8.4mg, 16μmol)を
加え、室温で終夜攪拌反応させた。反応終了後、得られ
た反応液をDEAE-TOYOPEARLイオン交換カラムクロマトグ
ラフィー(東ソー社製；1.2×30cm，溶出液；0.1Ｍ炭酸
水素トリエチルアンモニウム緩衝液, 40％アセトニトリ
ル)で精製し、得られた溶出画分を減圧濃縮後、残渣を
凍結乾燥させ、目的物(化合物12) 8.9mgを得た（収率
78.6％）。

【０１３６】

【化５４】

【０１３７】（式中、Ｍｅはメチル基を示す。） また、得られた目的物(化合物12)を、DU-640紫外可視分
光解析システム〔ベックマン（株）製〕を用いて、紫外
可視吸収スペクトルを測定した結果(測定波長：700〜20
0nm、対照：蒸留水)を図１に示す。

【０１３８】参考例９．3'-デオキシ-5-{(4'''-トルフ
ルオロアセタミドブチルオキシ)-1''-プロピニル}シチ
ジン(化合物14)の合成 5-ヨード-3'-デオキシシチジン（化合物13：353mg, 1.0
mmol）のＤＭＦ（５ml）溶液に窒素気流下、参考例６．
で得た3-(4-トリフルオロアセタミドブチルオキシ)-1-
プロペン(化合物８：676mg, 3.0mmol）、ヨウ化銅
（Ｉ）（38mg, 0.2mmol）、テトラキス（トリフェニル
ホスフィン）パラジウム（0）（115mg, 0.10mmol）及び
トリエチルアミン（0.28ml, 2.0mmol）を加え60℃で18
時間反応させた。反応液を塩化メチレン-メタノール混
液（12ml）で希釈し、イオン交換樹脂ＡＧ１×８（バイ
オラド社製, HCO₃−型; 0.80g）を加え30分間撹拌し
た。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカゲルカ
ラム(溶出液；クロロホルム：メタノール＝７：１)及
び、ＨＰＬＣ(カラム; WakosilＩＩ 5C18 RS Prep 20.0
×250mm, 溶出液；アセトニトリル-水混合溶液）にて精
製し、目的物(化合物14) 35mgを得た(収率 7.8％)。¹ H-NMR (400MHz, DMSO) δppm: 1.51 (br s, 4H, -OCH₂
CH₂CH₂ CH₂NHTfa), 1.65-1.67 (m, 1H, 3’-Ha), 1.95
(m, 1H, 3’-Hb), 3.18 (m, 2H, -OCH₂ CH₂CH₂CH₂NHTf
a), 3.38-3.39 (m, 2H, -CH₂ NHTfa), 3.53-3.56 (m, 1
H, 5’-Ha), 3.81-3.83 (m, 1H, 5’-Hb), 3.96 (d, 2
H, J=6.0Hz, -CH=CHCH₂ O-), 4.11 (m, 1H, 4’-H), 4.3
1 (m, 1H, 2’-H), 5.20 (t, 1H, J=5.0Hz, 5’-OH),
5.49 (d, 1H, J=3.6Hz, 2’-OH), 5.65 (s, 1H, 1’-
H), 5.99 (dt, 1H, J=6.0, 15.6Hz, -CH=CHCH₂O-), 6.4
2 (d, 1H, J=15.2Hz, -CH=CHCH₂O-), 7.15 (br s, 2H,
4-NH₂), 8.36(s, 1H, 6-H), 9.39 (br s, 1H, NHTfa)

【０１３９】参考例１０．5-{(4'''-アミノブチルオキ
シ)-1''-プロピニル}-3'-デオキシシチジントリホスフ
ェート(化合物15)の合成 参考例９．で得た3'-デオキシ-5-{(4'''-トルフルオロ
アセタミドブチルオキシ)-1''-プロピニル}シチジン(化
合物14：135mg, 0.3mmol)をリン酸トリエチル(1.4ml)に
溶解し、氷冷下、オキシ塩化リン(50μl，0.53μmol)を
加え、6.5時間攪拌反応させた。反応終了後、得られた
反応液を0.5Ｍビス(トリブチルアンモニウム)ピロリン
酸−ＤＭＦ溶液(3.6ml)に投入し、氷冷下で更に２時間
攪拌反応させた。反応終了後、得られた反応液に、７％
トリエチルアミン水溶液(７ml)を加え、冷蔵庫内で終夜
攪拌反応させた。以下、参考例８．で示した方法と同様
に操作を行い、目的物(化合物15) 114mgを得た（収率
38.1％）。 元素分析 4トリエチルアミン塩C₄₀H₈₉N₈O₁₄P₃(Mw= 9
99.11)として 計算値(％)； C:48.09, H:8.98, N:11.22, 実測値(％)； C:47.98, H:9.02, N:11.11,

【０１４０】実施例２．5-{(4'''-ＸＲ-アミノブチルオ
キシ)-1''-プロピニル}-3'-デオキシシチジントリホス
フェート(化合物16)の合成 参考例１０．で得られた5-{(4'''-アミノブチルオキシ)
-1''-プロピニル}-3'-デオキシシチジントリホスフェー
ト(化合物15：20mg, 20μmol)を水−ＤＭＦ混合溶媒(２
ml)に溶解し、トリエチルアミン(150μl, 1mmol)及び5-
カルボキシ-Ｘ-ローダミンコハク酸イミドエステル（モ
レキュラープローブ社製）(37.8mg, 60μmol)を添加
し、室温で終夜攪拌反応させた。以下、実施例１．で示
した方法と同様に操作を行い、目的物(化合物16) 14mg
を得た（収率 46.2％）。

【０１４１】

【化５５】

【０１４２】また、得られた目的物(化合物16) を、DU-
640紫外可視分光解析システム〔ベックマン（株）製〕
を用いて紫外可視吸収スペクトルを測定した結果(測定
波長；700〜200nm、対照：蒸留水)を図２に示す。

【０１４３】参考例１１．7-デアザ-3'-デオキシ-7-
{(4'''-トルフルオロアセタミドエチルオキシ)-1''-プ
ロピニル}アデノシン(化合物18)の合成 7-デアザ-7-ヨード-3'-デオキシアデノシン(化合物17：
564mg, 1.5mmol)のＤＭＦ（7.5ml）溶液に窒素気流下、
参考例３．で得た3-(2-トリフルオロアセタミドエチル
オキシ)-1-プロペン(化合物４：887mg, 4.5mmol)、ヨウ
化銅（Ｉ）（57mg,0.3mmol）、テトラキス（トリフェニ
ルホスフィン）パラジウム（0）（173mg, 0.15mmol）及
びトリエチルアミン（0.42ml, 3.0mmol）を加え60℃で1
5時間反応させた。反応液を塩化メチレン-メタノール混
液（18ml）で希釈し、イオン交換樹脂ＡＧ１×８（バイ
オラド社製, HCO₃−型; 1.2g）を加え30分間撹拌した。
濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカゲルカラム
(溶出液；酢酸エチル：メタノール＝10：１)及び、ＨＰ
ＬＣ(カラム; WakosilＩＩ 5C18 RS Prep 20.0×250mm,
溶出液；アセトニトリル-水混合溶液）にて精製し、目
的物(化合物18)67mgを得た(収率 10.1％)。¹H-NMR (400
MHz, DMSO) δppm: 1.90 (m, 1H, 3’-Ha), 2.20 (m, 1
H, 3’-Hb),3.45-3.50 (m, 4H, -OCH₂CH₂ NHTfa), 3.59-
3.62 (m, 2H, 5’-Ha,b), 4.05-4.11 (m, 2H, -CH=CHCH
₂ O-), 4.21 (m, 1H, 4’-H), 4.38 (m, 1H, 2’-H), 5.
02 (t, 1H, J=5.4Hz, 5’-OH), 5.51 (d, 1H, J=4.8Hz,
2’-OH), 6.03 (d, 1H, J=1.0Hz, 1’-H), 6.07 (dt,
1H, J=6.8, 16.8Hz, -CH=CHCH₂O-), 6.97 (d, 1H, J=1
4.4Hz, -CH=CHCH₂O-), 7.25 (br s, 2H, 6-NH₂), 7.64
(s, 1H, 8-H), 8.05 (s,1H, 2-H), 9.49 (br s, 1H, NH
Tfa)

【０１４４】参考例１２．7-{(4'''-アミノエチルオキ
シ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシアデノシン
トリホスフェート(化合物19)の合成 参考例１１．で得た7-デアザ-3'-デオキシ-7-{(4'''-ト
ルフルオロアセタミドエチルオキシ)-1''-プロピニル}
アデノシン(化合物18：134mg, 0.3mmol)をリン酸トリエ
チル(1.3ml)に溶解し、氷冷下、オキシ塩化リン(47.6μ
l, 0.52mmol)を添加し、３時間攪拌反応させた。反応終
了後、得られた反応液を0.5Ｍビス(トリブチルアンモニ
ウム)ピロリン酸−ＤＭＦ溶液(3.6ml)に投入し、氷冷下
で更に２時間攪拌反応させた。反応終了後、得られた反
応液に７％トリエチルアミン水溶液(６ml)を添加し、冷
蔵庫内で終夜攪拌反応させた。得られた反応液をジエチ
ルエーテルで洗浄し、水層をDEAE-TOYOPEARLイオン交換
カラムクロマトグラフィー(東ソー社製；1.2×30cm，溶
出液；0.6Ｍ炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液)で
精製し、得られた溶出画分を減圧濃縮後、残渣を25％ア
ンモニア水(20ml)に溶解し、冷蔵庫内で終夜攪拌した。
得られた反応液を減圧濃縮した後、残渣を凍結乾燥させ
目的物(化合物19) 101mgを得た（収率 33.8％）。 元素分析 4トリエチルアミン塩C₄₀H₈₆N₉O₁₃P₃(Mw= 9
94.10)として 計算値(％)； C:48.33, H:8.72, N:12.68, 実測値(％)； C:48.21, H:8.77, N:12.62,

【０１４５】実施例３．7-{(4'''-Ｒ６Ｇ-アミノエチル
オキシ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシアデノ
シントリホスフェート(化合物20)の合成 参考例１２．で得た7-{(4'''-アミノエチルオキシ)-1''
-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシアデノシントリホ
スフェート(化合物19：9.2mg, 8μmol)を水−ＤＭＦ混
合溶媒(1ml)に溶解し、次いでトリエチルアミン(40μl,
0.3mmol)及び5-カルボキシローダミン６Ｇコハク酸イ
ミドエステル（モレキュラープローブ社製； 8.8mg, 16
μmol)を添加し、室温で終夜攪拌反応させた。以下、実
施例１．で示した方法と同様に操作を行い、目的物(化
合物20) 6.2mgを得た（収率 68.6％）。

【０１４６】

【化５６】

【０１４７】（式中、Ｍｅはメチル基を、また、Ｅｔ基
はエチル基を夫々示す。） また、得られた目的物(化合物20)を、DU-640紫外可視分
光解析システム〔ベックマン（株）製〕を用いて紫外可
視吸収スペクトルを測定した結果(測定波長；700〜200n
m，対照：蒸留水)を図３に示す。

【０１４８】参考例１３．7-デアザ-3'-デオキシ-7-
{(4'''-トルフルオロアセタミドエチルオキシ)-1''-プ
ロピニル}グアノシン(化合物22)の合成 7-デアザ-7-ヨード-3'-デオキシグアノシン(化合物21：
588mg, 1.5mmol)のＤＭＦ（7.5ml）溶液に窒素気流下、
参考例３．で得た3-(2-トリフルオロアセタミドエチル
オキシ)-1-プロペン(化合物４：887mg, 4.5mmol)、ヨウ
化銅（Ｉ）（57mg, 0.3mmol）、テトラキス（トリフェ
ニルホスフィン）パラジウム（0）（173mg, 0.15mmol）
及びトリエチルアミン（0.42ml, 3.0mmol）を加え60℃
で18時間反応させた。反応液を塩化メチレン-メタノー
ル混液（18ml）で希釈し、イオン交換樹脂ＡＧ１×８
（バイオラド社製, HCO₃−型; 1.2g）を加え30分間撹拌
した。以下、参考例９．で示した方法と同様に操作を行
い、目的物(化合物22) 76mgを得た(収率 11.0％)。¹ H-NMR (400MHz, DMSO) δppm: 1.87 (m, 1H, 3’-Ha),
2.13 (m, 1H, 3’-Hb),3.35-3.56 (m, 6H, -OCH₂CH₂ NH
Tfa and 5’-Hab), 4.03 (d, 2H, J=5.6Hz, -CH=CHCH₂ O
-), 4.19 (m, 1H, 4’-H), 4.28 (m, 1H, 2’-H), 4.84
(t, 1H, J=5.6Hz, 5’-OH), 5.43 (d, 1H, J=4.4Hz,
2’-OH), 5.82 (d, 1H, J=2.8Hz, 1’-H),6.24 (br s,
1H, 2-NH₂), 6.55 (d, 1H, J=16.0Hz, -CH=CHCH₂O-),
6.78 (dt,1H, J=6.0, 16.0Hz, -CH=CHCH₂O-), 7.03 (s,
1H, 8-H), 9.48 (br s, 1H, NHTfa), 10.34 (br s, 1
H, 1-NH)

【０１４９】参考例１４．7-{(4'''-アミノエチルオキ
シ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシグアノシン
トリホスフェート(化合物23)の合成 参考例１３．で得た7-デアザ-3'-デオキシ-7-{(4'''-ト
ルフルオロアセタミドエチルオキシ)-1''-プロピニル}
グアノシン(化合物22：110mg, 0.24mmol)をリン酸トリ
エチル(１ml)に溶解し、氷冷下、オキシ塩化リン(40μ
l, 0.43mmol)を添加し、16時間攪拌反応させた。反応終
了後、得られた反応液を0.5Ｍビス(トリブチルアンモニ
ウム)ピロリン酸−ＤＭＦ溶液(4.8ml)に投入し、氷冷下
で２時間攪拌反応させた。反応終了後、得られた反応液
を７％トリエチルアミン水溶液(８ml)を添加し、冷蔵庫
内で終夜攪拌した。以下、参考例１２．で示した方法と
同様に操作を行い、目的物(化合物23) 84mgを得た（収
率 34.9％）。 元素分析 4トリエチルアミン塩C₄₀H₈₆N₉O₁₄P₃(Mw= 1
010.10)として 計算値(％)； C:47.56, H:8.58, N:12.48 実測値(％)； C:48.47, H:8.62, N:12.44

【０１５０】実施例４．7-{(4'''-Ｒ１１０-アミノエチ
ルオキシ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシグア
ノシントリホスフェート(化合物24)の合成 参考例１４．で得た7-{(4'''-アミノエチルオキシ)-1''
-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシグアノシントリホ
スフェート(化合物23：20mg, 20μmol)を水−ＤＭＦ混
合溶媒(２ml)に溶解し、次いでトリエチルアミン(150μ
l, 1.1mmol)及び5-カルボキシローダミン 110-ビス-ト
リフルオロアセテート コハク酸イミドエステル（モレ
キュラープローブ社製）(33.5mg, 50μmol)を順次添加
し、室温で終夜攪拌反応させた。反応終了後、得られた
反応液をDEAE-TOYOPEARLイオン交換カラムクロマトグラ
フィー(東ソー社製；1.2×30cm，溶出液，0.2Ｍ炭酸水
素トリエチルアンモニウム緩衝液, 40％アセトニトリ
ル)で精製し、得られた溶出画分を減圧濃縮し、残渣を
凍結乾燥させ目的物(化合物24) 12mgを得た（収率 43.
5％）。

【０１５１】

【化５７】

【０１５２】また、得られた目的物(化合物24)を、DU-6
40紫外可視分光解析システム〔ベックマン（株）製〕を
用いて紫外可視吸収スペクトルを測定した結果(測定波
長；700〜200nm，対照：蒸留水)を図４に示す。

【０１５３】参考例１５．7-デアザ-3'-デオキシ-7-
{(4'''-トルフルオロアセタミドブチルオキシ)-1''-プ
ロピニル}グアノシン(化合物25)の合成 7-デアザ-7-ヨード-3'-デオキシグアノシン(化合物21：
588mg, 1.5mmol)のＥＭＦ（7.5ml）溶液に窒素気流下、
参考例６.で得た3-(4-トリフルオロアセタミドブチルオ
キシ)-1-プロペン(化合物８：1.0g, 4.5mmol)、ヨウ化
銅（Ｉ）（57mg,0.3mmol）、テトラキス（トリフェニル
ホスフィン）パラジウム（0）（173mg,0.15mmol）及び
トリエチルアミン（0.42ml,3.0mmol）を加え60℃で18時
間反応させた。反応液を塩化メチレン-メタノール混液
（18ml）で希釈し、イオン交換樹脂ＡＧ１×８（バイオ
ラド社製, HCO₃−型; 1.2g）を加え30分間撹拌した。以
下、参考例９．で示した方法と同様に操作を行い、目的
物(化合物25) 100mgを得た(収率 13.3％)。¹ H-NMR (400MHz, DMSO)δppm: 1.52 (br s, 4H, -OCH₂ C
H₂CH₂ CH₂NHTfa), 1.87 (m, 1H, 3’-Ha), 2.13 (m, 1H,
3’-Hb), 3.18 (m, 2H, -OCH₂ CH₂CH₂CH₂NHTfa),3.39-
3.55 (m, 2H, -CH₂ NHTfa), 3.38-3.55 (m, 2H, 5’-Ha,
b), 3.98 (d, 2H,J=5.6Hz, -CH=CHCH₂ O-), 4.18 (m, 1
H, 4’-H), 4.28 (m, 1H, 2’-H), 4.85 (t, 1H, J=5.6
Hz, 5’-OH), 5.43 (d, 1H, J=4.4Hz, 2’-OH), 5.82
(d, 1H, J=2.8Hz, 1’-H), 6.24 (br s, 1H, 2-NH₂),
6.52 (d, 1H, J=16.0Hz, -CH=CHCH₂O-), 6.74 (dt, 1H,
J=6.0, 16.0Hz, -CH=CHCH₂O-), 7.03 (s, 1H, 8-H),
9.39 (br s, 1H, NHTfa), 10.29 (br s, 1H, 1-NH)

【０１５４】参考例１６．7-{(4'''-アミノブチルオキ
シ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシグアノシン
トリホスフェート(化合物26)の合成 参考例１５．で得た7-デアザ-3'-デオキシ-7-{(4'''-ト
ルフルオロアセタミドブチルオキシ)-1''-プロピニル}
グアノシン(化合物25：100mg, 0.2mmol)をリン酸トリエ
チル(１ml)に溶解し、氷冷下、オキシ塩化リン(32.3μ
l, 0.35mmol)を添加し、氷冷下で３時間攪拌反応させ
た。反応終了後、得られた反応液を0.5Ｍビス(トリブチ
ルアンモニウム)ピロリン酸−ＤＭＦ溶液(2.4ml)に投入
し、氷冷下で更に２時間攪拌反応させた後、得られた反
応液に７％トリエチルアミン水溶液(６ml)を添加し、冷
蔵庫内で終夜攪拌反応させた。以下、参考例１２．で示
した方法と同様に操作を行い、目的物(化合物26) 45mg
を得た（収率 21.4％）。 元素分析 4トリエチルアミン塩C₄₂H₉₀N₉O₁₄P₃(Mw= 1
038.15)として 計算値(％)； C:48.59, H:8.74, N:12.14 実測値(％)； C:48.50, H:8.80, N:12.11

【０１５５】実施例５．7-{(4'''-Ｒ１１０-アミノブチ
ルオキシ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシグア
ノシントリホスフェート(化合物27)の合成 参考例１６．で得た7-{(4'''-アミノブチルオキシ)-1''
-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキシグアノシントリホ
スフェート(化合物26：13mg, 12.4μmol)を水−ＤＭＦ
混合溶媒(１ml)に溶解し、次いでトリエチルアミン(90
μl, 0.63mmol)及び5-カルボキシローダミン-１１０-ビ
ス-トリフルオロアセテート コハク酸イミドエステル
（モレキュラープローブ社製； 16.4mg, 25μmol)を順
次添加し、室温で終夜攪拌反応させた。以下、実施例
１．で示した方法と同様に操作を行い、目的物(化合物2
7) 7.7mgを得た（収率 44.7％）。

【０１５６】

【化５８】

【０１５７】また、得られた目的物(化合物27) を、DU-
640紫外可視分光解析システム〔ベックマン（株）製〕
を用いて紫外可視吸収スペクトルを測定した結果(測定
波長；700〜200nm， 対照：蒸留水)を図５に示す。

【０１５８】実験例１．化合物20の安定性評価 〔試料〕 １．化合物20：実施例３の化合物 ２．比較化合物１：7-デアザ-7-(6''-Ｒ６Ｇ-アミノ-
1''-ヘキシニル)-3'-デオキシアデノシントリホスフェ
ート

【０１５９】

【化５９】

【０１６０】〔操作方法〕各試料を、ジチオスレイトー
ル １ｍＭを含有するトリシン緩衝液 10ｍＭ(ｐＨ 7.5)
に溶解し、0.3〜0.4ｍＭ緩衝液となるようにそれぞれ調
製した。各溶液を８℃下で保存し、ＨＰＬＣ（カラム：
WakosilＩＩ 5Cl8 HG, 4.6×150mm, 溶出液；0.02Ｍ Ｎ
Ｈ₄Ｈ₂ＰＯ₄, 0.01ＭＢｕ₄ＮＨ₂ＰＯ₄−アセトニトリル
混合溶液）で純度を求め、その経日変化を追跡した。そ
の結果を図６に示す。

【０１６１】実験例２．化合物24の安定性評価 〔試料〕 １．化合物24：実施例４の化合物 ２．比較化合物２：7-デアザ-7-(6''-Ｒ１１０-アミノ-
1''-ヘキシニル)-3'-デオキシグアノシントリホスフェ
ート

【０１６２】

【化６０】

【０１６３】〔操作方法〕実験例１．で示した方法と同
様に操作を行い、経日変化によるＨＰＬＣ純度を求め
た。その結果を図７に示す。

【０１６４】実験例３．化合物27の安定性評価 〔試料〕 １．化合物27：実施例５の化合物 ２．比較化合物２：7-デアザ-7-(6''-Ｒ１１０-アミノ-
1''-ヘキシニル)-3'-デオキシグアノシントリホスフェ
ート 〔操作方法〕実験例１．で示した方法と同様に操作を行
い、経日変化によるＨＰＬＣ純度を求めた。その結果を
図８に示す。

【０１６５】図６〜８から明らかな如く、化合物２０、
２４及び２７は、比較化合物１及び２に比べると、長期
保存安定性が著しく向上したことが判る。また、化合物
１２及び１６についても、実験例１と同様の操作により
安定性評価を行ったところ、化合物２０、２４及び２７
と同様の安定性を示すことが判った。以上のことから、
本願に係る蛍光標識化ヌクレオチド誘導体は長期保存安
定性に優れており、これらをターミネーターとして用い
れば高感度且つ高精度にＤＮＡ塩基配列を決定し得るこ
とが判る。

【０１６６】

【発明の効果】本発明は、新規なリンカーを有する標識
化ヌクレオチド誘導体であり、例えばＲＮＡポリメラー
ゼ作用を利用する核酸に於いて安全、高感度且つ高精度
に目的の塩基配列を決定するために有用な、蛍光標識化
３’−デオキシリボヌクレオチド誘導体を提供するもの
であり、本発明の蛍光標識化３’−デオキシリボヌクレ
オチド誘導体を用いてＲＮＡポリメラーゼを用いる連鎖
停止法を行えば、簡便且つ高精度に核酸の塩基配列を決
定し得る点に優れた効果を奏するものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例１で得られた、5-{(4'''-ＴＭＲ-アミ
ノブチルオキシ)-1''-プロピニル}-3'-デオキシウリジ
ントリホスフェート(化合物12)の紫外可視吸収スペクト
ルを測定した結果を示す。

【図２】 実施例２で得られた、5-{(4'''-ＸＲ-アミノ
ブチルオキシ)-1''-プロピニル}-3'-デオキシシチジン
トリホスフェート(化合物16)の紫外可視吸収スペクトル
を測定した結果を示す。

【図３】 実施例３で得られた、7-{(4'''-Ｒ６Ｇ-アミ
ノエチルオキシ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオキ
シアデノシントリホスフェート(化合物20)の紫外可視吸
収スペクトルを測定した結果を示す。

【図４】 実施例４で得られた、7-{(4'''-Ｒ１１０-ア
ミノエチルオキシ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオ
キシグアノシントリホスフェート(化合物24)の紫外可視
吸収スペクトルを測定した結果を示す。

【図５】 実施例５で得られた、7-{(4'''-Ｒ１１０-ア
ミノブチルオキシ)-1''-プロピニル}-7-デアザ-3'-デオ
キシグアノシントリホスフェート(化合物27)の合成

【図６】 実験例１で得られた、化合物20（実施例３の
化合物）及び比較化合物１の経日変化によるＨＰＬＣ純
度の結果を示す。

【図７】 実験例２で得られた、化合物24（実施例４の
化合物）及び比較化合物２の経日変化によるＨＰＬＣ純
度の結果を示す。

【図８】 実験例３で得られた、化合物27（実施例５の
化合物）及び比較化合物２の経日変化によるＨＰＬＣ純
度の結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山本 直之 兵庫県尼崎市高田町６番１号 和光純薬工 業株式会社大阪研究所内 (72)発明者 田中 巧 兵庫県尼崎市高田町６番１号 和光純薬工 業株式会社大阪研究所内 (72)発明者 林崎 良英 茨城県つくば市稲荷前22−１−201 Ｆターム(参考） 4B024 AA11 CA04 FA07 HA19 4B063 QA13 QQ42 QQ52 QR32 QR62 QX02 4C057 AA18 BB02 BB05 DD01 LL10 LL17 LL19 LL22 LL29 LL40 LL42 LL45

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式［１］ 【化１】 〔式中、Ｑはヌクレオチド残基を表し、Ｒａ及びＲｂは
   低級アルキレン基を表し、Ｅは置換基を有していてもよ
   いイミノ基を表し、Ｗは蛍光色素基を表す。）で示され
   るヌクレオチド誘導体。
2. 【請求項２】 一般式[１]に於いてＷで示される蛍光色
   素基が、一般式［２］ 【化２】 〔式中、Ｔは炭素原子又は窒素原子を表し、Ｒｃはヘテ
   ロ原子を有していてもよい二価の炭化水素残基を表し、
   Ｘは酸素原子、硫黄原子、−ＣＨ₂−、−ＮＲ⁴−（式
   中、Ｒ⁴は、水素原子、低級アルキル基、アラルキル基
   又はアリール基を表す。）又は−ＢＦ₂−を表し、環Ａ
   及び環Ｂは、何れか一方が 【化３】 であり、他方が 【化４】 （ここで、Ｚは、＝Ｏ又は＝Ｎ⁺Ｒ⁵Ｒ⁶を表し、Ｙは、
   −ＯＨ又は−ＮＲ⁵Ｒ⁶を表し、Ｒ⁵及びＲ⁶は、夫々独立
   して水素原子又は低級アルキル基を表す。また、Ｒ⁵及
   びＲ⁶は、環Ａ又は環Ｂ上の−ＮＲ⁵Ｒ⁶又は＝Ｎ⁺Ｒ⁵Ｒ⁶
   が結合している炭素原子の両隣の炭素原子に夫々アルキ
   レン基として結合しているものであってもよい。）であ
   るか、或いは何れか一方が、 【化５】 であり、他方が 【化６】 であり、環Ｃ 【化７】 に於ける破線-----は、環Ａ及び環Ｂの構造に対応した
   位置の結合手を意味する。また、 【化８】 は、環Ａ、環Ｂ又は環Ｃの何れかの炭素原子に任意に結
   合していることを意味する。更に、上記環Ａ、環Ｂ、環
   Ｃ及びＲｃは、更に置換基を有していてもよい。〕で示
   される基である、請求項１に記載のヌクレオチド誘導
   体。
3. 【請求項３】 一般式[２]が、一般式［３］ 【化９】 〔式中、Ｊはカルボキシル基を表し、Ｘは酸素原子、硫
   黄原子、−ＮＲ⁴−（式中、Ｒ⁴は、前記に同じ。）を表
   し、また、環Ａ及び環Ｂは、何れか一方が 【化１０】 であり、他方が 【化１１】 （ここで、Ｚ及びＹは前記に同じ。）であり、その他の
   定義は前記に同じである。〕で示される基である、請求
   項２に記載のヌクレオチド誘導体。
4. 【請求項４】 一般式[２]が、一般式[４] 【化１２】 （式中、Ｘは、−ＢＦ₂−を表し、環Ａ及び環Ｂは、何
   れか一方が 【化１３】 であり、他方が 【化１４】 であり、Ｒｃ及びその他の定義は前記に同じである。）
   で示される基である、請求項２に記載のヌクレオチド誘
   導体。
5. 【請求項５】一般式[１]に於いて、Ｑで示されるヌクレ
   オチド残基が、３’−デオキシリボヌクレオチド残基で
   ある、請求項１に記載のヌクレオチド誘導体。
6. 【請求項６】請求項５に記載のヌクレオチド誘導体をタ
   ーミネーターとして使用することを特徴とする、ＲＮＡ
   ポリメラーゼを用いた塩基配列決定方法。
7. 【請求項７】請求項５に記載のヌクレオチド誘導体を含
   んで成る、ＲＮＡポリメラーゼを用いる塩基配列決定用
   ターミネーター。