WO2007114398A1 - ピラゾール系シアニン色素 - Google Patents

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WO2007114398A1
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Mutsuhiro Date
Satoshi Hasaba
Naoyuki Yamamoto
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Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
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    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label

Definitions

  • the present invention relates to a novel pyrazole cyanine dye.
  • fluorescent dyes for example, cyanine dye derivatives, coumarin dye derivatives, fluorescein dye derivatives, rhodamine dye derivatives, and the like are used according to various purposes. Among them, fluorescent dyes in the near infrared region of 600 or more are used. As a dye having characteristics, cyanine dye derivatives are widely used.
  • Cy3 and Cy5 are known as leading fluorescent reagents, and the photometric specifications of the detection device Is currently used as the S5 standard for fluorescence characteristics of Cy5.
  • Cy3 and Cy5 have a structure in which two indolenine skeletons are joined by a polymethine chain (indolenine cyanine dye). This structure is used as a basic skeleton, for example, to improve water solubility and avoid an associated state.
  • Various cyanine dye derivatives have been developed for the purpose of achieving high sensitivity by the use of (see, for example, Patent Document 1, Patent Document 2, Patent Document 3, etc.).
  • laser light sources used in optical systems are increasingly shortened in wavelength and output in order to increase the capacity of magneto-optical disks.
  • Patent Document 1 US Pat. No. 5,268,486
  • Patent Document 2 U.S. Pat.No. 5,486,616
  • Patent Document 3 U.S. Pat.No. 5,569,766
  • Patent Document 4 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-034696
  • Patent Document 5 Japanese Patent Laid-Open No. 2003-034697
  • Patent Document 6 U.S. Pat.No. 5,571,388
  • Patent Document 7 US Patent No. 5, 800, 995
  • Patent Document 8 International Publication WO01Z02374
  • the present invention has been made in view of the situation as described above, and has a pyrazole skeleton and an indole skeleton having a high sensitivity performance in a shorter wavelength region than a conventional optical system and exhibiting high water solubility. It is an object of the present invention to provide a novel cyanine dye derivative having:
  • the present invention is the following (1) to (3).
  • a compound represented by the general formula [50] or a salt thereof (1) A compound represented by the general formula [50] or a salt thereof.
  • R 1 to R 6 may have an amide bond
  • substituted or unsubstituted R 7 ′ to R 1G ′ are each independently a substituted or unsubstituted alkyl group, alkyl group, alkyl group, aryl group, alkoxy group, aryloxy group, alkylthio group, Arylothio group, alkylsulfol group, aryloylsulfol group, strong rubamoyl group, sulfamoyl group, ureido group or amino group, general formula [2]
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion, or a arone
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion, or a arone
  • R 13 represents a hydrogen atom, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonia ion, or an ion), a halogen atom, an aromatic heterocyclic group, Represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a formyl group, a thiol group or a -tro group, R 11 'represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group or an aryl group, n Represents an integer of 0-3.
  • R 1 ′ and R 2 ′, R 4 ′ and ′, R 1 ′ and R 6 ′, and R 2 , and R 4 is —O— group, —S— group, —COO— group.
  • R 5 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, or an aryl group.
  • at least one of the divalent groups is a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], amino Group having a group, a hydroxyl group, a thiol group or a formyl group and not forming the divalent group, at least one of ' ⁇ ! ⁇ 1 is a group represented by the general formula [2] 3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group.
  • the pyrazole cyanine dye of the present invention has a structure in which a pyrazole skeleton and an indole skeleton are bonded with a polymethine chain, and therefore has fluorescence characteristics in a shorter wavelength region than a conventional light source. Therefore, a light source having a short wavelength region with high energy efficiency can be used.
  • the detection sensitivity decreases due to, for example, low water solubility or quenching caused by association of dyes, which conventional cyanine dye derivatives had. This makes it possible to detect a measurement object with high detection sensitivity without having problems such as.
  • any one of R 1 , R 2 , R 4 ′,, R 1 , R 6 , and R 2 ′, R 4 is O Group, S group, COO group, and the basic force represented by the general formulas [52] to [54], a selected group and a substituted or unsubstituted alkylene group form a divalent group. Examples thereof include those represented by the following general formula [1].
  • R 7 to R 1C are each independently a substituted or unsubstituted alkyl group or alkenyl group.
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion, or a arone
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion, or a arone
  • R 13 represents a hydrogen atom, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonia ion or an ion], a halogen atom, an aromatic heterocyclic group, Represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a formyl group, a thiol group or a -tro group, R 11 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, an alkyl group or an aryl group, n Represents an integer of 0-3. However! At least one of ⁇ to 1 has a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group. ]
  • any one of R 1 , R 2 , R 4 ′, R 1 , R 6 , and R 2 , tR 4 is an O group , S group, COO group, and compounds represented by the general formulas [52] to [54].
  • Examples of the compound that forms a divalent group with a selected group and a substituted or unsubstituted alkylene group include Examples thereof include those represented by the formula [51].
  • R 7 each independently represents a substituted or unsubstituted alkyl group optionally having an amide bond
  • R 7 “to R 1G ” each independently represents a substituted or unsubstituted alkyl group; Unsubstituted alkyl group, alkyl group, alkyl group, aryl group, alkoxy group, aryloxy group, alkylthio group, arylthio group, alkylsulfol group, arylsulfol group, carbamoyl group, sulfamoyl group Group, ureido group or amino group, general formula [2]
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion or a arone), a general formula [3]
  • R 13 represents a hydrogen atom, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonia ion or an ion], a halogen atom, an aromatic heterocyclic group
  • R 11 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group or an aryl group
  • n Represents an integer of 0 to 3, provided that one of R 1 "and R 2 ", R 4 “and R 5 “, R 1 "and R 6 " and R 2 “and R 4 " is —O Group, —S group, —COO group and general formulas [52] to [54 ] [52] W? [53] ⁇ ? [54]
  • R ⁇ represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group or an aryl group.
  • R 1 " ⁇ 11 ", and R 1 "and R 2 ", R 4 “and R 5 “, R 1 “and R 6 “ and R 2 “and R 4 " At least one of the groups represented by general formula [2], a group represented by general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group.
  • Any one of O, S, COO, and the basic force selected from the general formulas [52] to [54] and a substituted or unsubstituted alkylene group form a divalent group.
  • Examples of such compounds include those represented by the following general formula [1].
  • R 7 to R 1G are independently a substituted or unsubstituted alkyl group, Aruke - Le Group, an alkyl group, an aryl group, an alkoxy group, an aryloxy group, an alkylthio group, an arylthio group, an alkylsulfol group, an arylsulfol group, a strong rubamoyl group , Sulfamoyl group, ureido group or amino group, general formula [2]
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion, or a arone
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion, or a arone
  • R 13 represents a hydrogen atom, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonia ion, or an ion], a halogen atom, an aromatic heterocyclic group, Represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, a cyano group, a formyl group, a thiol group or a -tro group, R 11 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, an alkyl group or an aryl group, n Represents an integer of 0-3. However! At least one of ⁇ to 1 has a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group. ]
  • the substituted or unsubstituted alkyl group represented by to which may have an amide bond is an amide bond in the alkyl chain of the substituted or unsubstituted alkyl group.
  • the alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group represented by ⁇ to may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 10 carbon atoms. , Preferably 1 to 6, specifically, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl Group, n-pentyl group, isopentyl group, sec-pentyl group, tert-pentyl group, neopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, sec-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group Sil group, n-heptyl group, isoheptyl group, sec-heptyl group, tert-heptyl group, neohepty
  • the cycloalkyl group may have an amide bond represented by ⁇ to, and as a substituent of the substituted alkyl group, a part of hydrogen atoms in the alkyl group that may have the amide bond may be a substituent.
  • substituents include a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], and the like.
  • examples of the alkali metal atom represented by R 12 and R 13 include a lithium atom, a sodium atom, a potassium atom, and a rubidium atom. Among them, a sodium atom is more preferable, and an atom or a potassium atom is more preferable.
  • Examples of the organic ammonium ions represented by R 12 and R 13 include trialkyl ammonium ions.
  • Examples of the trialkylammonium ions include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic.
  • the carbon number of R 12 represented by R 12 is:
  • the LO alkyl group is usually linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 10 carbon atoms. preferably 1 to 6 include those more preferred rather 1-3, specifically, for example, methyl group, Echiru group, n- propyl group, an isopropyl group, n - butyl group, isobutyl group, sec - Butyl, tert-butyl, n-pentinole, isopentinole, sec-pentinole, tert-pentinole, neopentinole, n-hexyl, isohexyl, sec-hexyl, tert-to Xyl group, neohexyl group, n- Heptyl, isoheptyl, sec-heptyl, tert-heptyl, neoheptyl
  • N-octyl group isooctyl group, sec-octyl group, tert-octyl group, neooctyl group
  • N-nonyl group isononyl group, sec-nonyl group, tert-nonyl group, isononyl group, n-decyl group
  • Isodecyl group sec-decyl group, tert-decyl group, neodecyl group, cyclopropyl group, cyclobutyl group, cyclopentyl group, cyclohexyl group, cycloheptyl group, cyclooctyl group, cyclonor group, cyclodecyl group, etc. Is mentioned.
  • Preferable specific examples of the group represented by the general formula [2] include, for example, a carboxyl group (one COOH), a cation thereof [carboxylate (—COO_)], an alkali metal salt thereof (for example, a lithium salt). , Sodium salts, potassium salts, rubidium salts, etc.), their ammonium salts, their organic ammonium salts (for example, trimethyl ammonium salts, triethyl ammonium salts, tripropyl ammonium salts, etc.), etc. Is mentioned.
  • Preferable specific examples of the group represented by the general formula [3] include, for example, a sulfo group (mono SO H),
  • Lithium salts, potassium salts, rubidium salts, etc. ammonium salts thereof, organic ammonium salts thereof (for example, trimethyl ammonium salt, triethyl ammonium salt, tripropyl ammonium salt, etc.), etc. Is mentioned.
  • a substituent of a substituted alkyl group (that is, a group represented by the general formula [2] or a group represented by the general formula [3]), which has an amide bond represented by Preferred are those substituted with a hydrogen atom at the end of the alkyl group.
  • R 1 and R 2 are as follows. Specific examples include, for example, a carboxyethyl group, a carboxypropyl group, a carboxybutyl group, a carboxypentyl group, their lone (carboxylate), these General formulas such as alkali metal salt groups (for example, sodium salts and potassium salts) and organic ammonium salt groups (for example, trimethylammonium salt, triethylammoum salt, and ammonium salt) [2 A alkyl group having 1 to 5 carbon atoms as a substituent, such as a sulfoethyl group, a sulfopropyl group, a sulfobutyl group, a sulfopentyl group, a cation thereof (sulfonate), or a group of these alkali metal salts (For example, sodium salts, potassium salts, etc.), groups of these organic ammonium salts (for example, tri
  • R 3 and R 4 and the preferred combination of R 5 and R 6 are any one (ie, any one of R 3 and R 4 and R 5 and R 6).
  • Any one of 6 ) is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms (for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n _Pentyl group, isopentyl group, sec-pentyl group, tert-pentyl group, neopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, s ec-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group, etc.)
  • the other is, for example, a carboxychetyl group, a carboxypropyl group,
  • the alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group represented by R 7 to R 1G is a normal carbon which may be linear, branched or cyclic.
  • Examples of the number 1 to 6, preferably 1 to 3, include, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n -butyl group, isobutyl group, sec -butyl group.
  • R 7 substituted or unsubstituted Aruke represented by 1G - Aruke Le group -
  • the group, linear, Yogu usually 2 to 6 carbon atoms either branched or cyclic, preferably Include those of 2 to 4, specifically, for example, bur group, allyl group, 1-probe group, iso-probe group.
  • the group usually 2 to 6 carbon atoms, preferably include those having 2 to 4, specifically, For example, ethynyl group, 2-propyl group, 3-butyl group, 1-methyl-2-propyl group, 4-pentyl group, 2-methyl-4-pentynyl group, 5- Examples include Kishuru group.
  • the Ariru group substituted or unsubstituted Ariru group represented by R 7 to R 1C includes generally one having 6 to 10 carbon atoms, specifically, for example Hue - group, a naphthyl group Etc.
  • the alkylthio group of a substituted or unsubstituted alkylthio group represented by R 7 to R 1G are those in which an oxygen atom in the alkoxy group is substituted with a sulfur atom, a linear, branched certain stomach Any of cyclic ones having 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms can be mentioned.
  • the Ariruchio group substituted or unsubstituted Ariruchio group represented by R 7 to R 1G are those oxygen atoms Ariruokishi group is substituted with a sulfur atom, usually having a carbon number of 6 to 1 0 Specific examples include a furothio group and a naphthylthio group.
  • a substituted or unsubstituted alkylsulfonyl represented by R 7 to R 1G -
  • those having 1 to 6 carbon atoms which may be linear, branched or cyclic, include, for example, methylsulfol group, ethylsulfol group, n-propylsulfonyl group.
  • the group include those OH groups of sulfo groups (SO OH) has been substituted with Ariru group
  • those having 6 to 10 carbon atoms which may be linear, branched or cyclic, may be mentioned, and specific examples include a phenylsulfol group and a naphthylsulfol group. It is possible.
  • the halogen atom represented by R 7 to R 1C for example, fluorine atom, chlorine atom, bromine atom, iodine atom and the like.
  • the aromatic heterocyclic group is, for example, a 5-membered ring or a 6-membered ring, and contains 1 to 3 hetero atoms such as a nitrogen atom, an oxygen atom, a sulfur atom, etc. as isomer atoms.
  • furyl group for example, furyl group, pyrrolyl group, indolyl group, purinyl group, quinolyl group, pyridyl group, virazyl group, pyrimidyl group, oxazolyl group, imidazolyl group, thiazolyl group, biranyl group, and the like.
  • furyl group for example, furyl group, pyrrolyl group, indolyl group, purinyl group, quinolyl group, pyridyl group, virazyl group, pyrimidyl group, oxazolyl group, imidazolyl group, thiazolyl group, biranyl group, and the like.
  • Group in which 1 to 2 hydrogen atoms are substituted with an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an aryl group having 6 to 10 carbon atoms specifically, for example, N-methylcarbamoyl group, N- Ethylcarbamoyl group, Nn-propyl-powered rubamoyl group, N-isopropyl-powered rubamoyl group, Nn-butylcarbamoyl group, N-tert-butylcarbamoyl group, N-n-hexylcarbamoyl group, N-cyclohexylcarbamoyl group, N-alkyl strength rubamoyl groups such as N-methylethylcarbamoyl group and N-dicyclohexylcarbamoyl group, for example, N-aryl strength rubamoyl groups such as N-phenylcarbamoyl group, N-diphenylcarbamoyl group
  • Examples include those in which 1 to 3 children are substituted, for example, the following formulas [4] to [7] HOHO
  • R 14 to R 16 each independently represents a halogen atom, an alkyl group, a sulfoamide group, a carboamide group, a sulfo group, a carboxyl group, a phospho group, a hydroxyl group, or an amino group.
  • examples of the halogen atom represented by R 14 to R 16 include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
  • alkyl sulfol group alkyl sulfoamido group
  • aryl sulfoamido group aryl sulfoamido group
  • the alkylsulfamido group may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the arylsulfamido group usually include those having 6 to 10 carbon atoms, and specific examples include a phenylsulfamido group and a naphthylsulfoamido group.
  • carboxamide group represented by R 14 to R 16 include those in which the hydrogen atom of the Amino group is substituted with Ashiru group.
  • examples of the acyl group include those derived from aliphatic carboxylic acids and those derived from aromatic carboxylic acids.
  • the carboamido group derived from the aliphatic carboxylic acid may be linear, branched or cyclic, and may further have a double bond in the chain. Includes those having 2 to 15 carbon atoms, more preferably 2 to 10 carbon atoms, and more preferably 2 to 6 carbon atoms.
  • acetylamide group propiolamido group, butyrylamide group, isobutyrylamide group, valerylamide group, Isovalerylamide group, bivaloylamide group, hexanoylamide group, heptanoylamide group, otatanylamide group, decanolamide group, lauroylamide group, myristoylamide group, normitoylamide group, stearoylamide group, icosanoyl Amide group, Ataryloylamide group, Methacryloylamide group, Crotonolamide group, Oleoylamide group, etc. It is below.
  • Examples of the carboamido group derived from an aromatic carboxylic acid usually include those having 7 to 15 carbon atoms, preferably 7 to L1, specifically, for example, a benzoylamide group or a naphthoylamide group. And anthylamide group.
  • Examples of the substituted amino group represented by R 7 to R 1C), include those one or two hydrogen atoms of the Amino group is substituted with a substituent, as these substituents, an alkyl group, an alkoxy Examples thereof include a phenyl group, an acyl group, and a sulfo group.
  • alkyl group exemplified as the substituent of the substituted amino group examples include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic. Specifically, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n-pentyl group, isopentyl group, sec- Pentyl group, tert-pentyl group, neopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, sec-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group, n-heptyl group, isoheptyl group, se c-heptyl group, tert-heptyl group, neohepty
  • alkoxycarbo yl group mentioned as the substituent of the substituted amino group include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic.
  • Examples of the acyl group exemplified as the substituent of the substituted amino group include those derived from aliphatic carboxylic acids and those derived from aromatic carboxylic acids.
  • the acyl group derived from the aliphatic carboxylic acid may be linear, branched or cyclic, and may further have a double bond in the chain, usually having 2 to 20 carbon atoms, Preferred are those having 2 to 15 carbon atoms, more preferably 2 to 10 carbon atoms, still more preferably 2 to 6 carbon atoms. Specific examples include acetyl group, propionyl group, butyryl group, isobutyryl group, valeryl group, isovaleryl group.
  • Bivaloyl group hexanoyl group, heptanoyl group, otatanyl group, decanoyl group, lauroyl group, myristoyl group, noremitoyl group, stearoyl group, icosanoyl group, attaroyl group, methacryloyl group, crotonoyl group, oleoyl group and the like.
  • Examples of the acyl group derived from the aromatic carboxylic acid usually include those having 7 to 15 carbon atoms, preferably 7 to L 1, and specifically include, for example, a benzoyl group, a naphthoyl group, an antoyl group, and the like. Is mentioned.
  • substituents of the alkylthio group, the substituted arylthio group, the substituted alkylsulfonyl group or the substituted arylsulfonyl group include a halogen atom, a sulfoamide group, a carboamide group, a sulfo group, a carboxyl group, and a phospho group (phosphate group).
  • halogen atom represented by R 14 to R 16 in the general formulas [4] to [7]. Examples thereof are the same as those exemplified for the thiol, sulfoamide group and carboamide group.
  • R 7 to R 1G is, three in R 7 to R 1G is a hydrogen atom, include those remaining one is a group derived from a sulfonic acid represented by the general formula [3]
  • groups derived from sulfonic acid for example, sulfo group, its ion (sulfonate), its alkali metal salt, organic ammonium salt, etc. are preferred, for example, sulfo group, sulfonate, its Alkali metal salts (for example, sodium salts) are more preferred, particularly those in which R 8 is a group represented by the general formula [3]! /.
  • the alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group represented by R 11 may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 carbon atom. ⁇ 10, preferably
  • Specific examples include 1 to 10, specifically, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n_pen Tinole group, isopentinole group, sec-pentinole group, tert-pentinole group, neopentinole group, n-hexyl group, isohexyl group, sec-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group, n-heptyl group Group, isoheptyl group, sec-heptyl group, tert-heptyl group, neoheptyl group
  • N-octyl group isooctyl group, sec-octyl group, tert-octyl group, neooctyl group
  • N-nonyl group isononyl group, sec-nonyl group, tert-nonyl group, isononyl group, n-decyl group
  • Isodecyl group sec-decyl group, tert-decyl group, neodecyl group, cyclopropyl group, cyclobutyl group, cyclopentyl group, cyclohexyl group, cycloheptyl group, cyclooctyl group, cyclonor group, cyclodecyl group, etc. Is mentioned.
  • the alkenyl group of the substituted or unsubstituted alkenyl group represented by R 11 is usually a straight chain, branched or cyclic carbon number of 2 to 6, preferably 2 to Specifically, for example, bur group, allyl group, 1-probe group, iso-probe group, 3-butyl group, 2-butur group, 1-butur group, 1, 3-butagel group, 4-pentale group, 3-pentale group, 2-pentale group, 1-pentale group, 1,3-pentagel group, 2,4-pentager group Group, 1,1-dimethyl-2-propylene group, 1-ethyl-2-propylene group, 1,2-dimethyl-1-propellyl group, 1-methyl-1-butyr Group, 5-hexyl group, 4-hexyl group, 3-hexyl group, 2-hexyl group, 1-hexyl group, 1-cyclopropylene group, 2-Cyclopentyl group, 2,4-Cyclopentane group, 1-Cy
  • R 11 alkyl - alkyl Le group - The group, usually 2 to 6 carbon atoms, preferably include those of 2 to 4, specifically, for example Echuru Group, 2-pile peel group, 3-buturyl group, 1-methyl-2-propyl group, 4-pentyl group, 2-methyl-4
  • the aryl group of the substituted or unsubstituted aryl group represented by R 11 usually has 6 carbon atoms.
  • R 11 a substituted alkyl group, substituted alkenyl group, the substituent of the substituted alkyl group or a substituted Ariru group, for example Nono androgenic atom, sulfonamide group, carboxamide group, a sulfo group, a carboxyl group, a phospho Groups, hydroxyl groups, amino groups, etc.
  • Specific examples of the halogen atom, sulfoamide group and carboamide group are halogen atoms represented by R 14 to R 16 in the general formulas [4] to [7]. , The same as those exemplified for the sulfoamido group and the carboamido group.
  • R 11 unsubstituted alkyl groups are preferred, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, n-pentyl group, n-hexyl group, etc. Is more preferred.
  • n is usually an integer of 0 to 3, preferably 1 or 2.
  • the group represented by the general formula [3] contained in the compound of the present invention increases water solubility, suppresses fluorescence quenching due to association between the dye molecules, and increases fluorescence intensity.
  • the compound of the present invention which is preferably introduced in a large amount in order to increase the amount, usually 1 to 4, preferably 2 to 4 are contained.
  • the group represented by the general formula [2] contained in the compound of the present invention is a group capable of binding to a labeling substance (for example, a reactive group such as a succinimide group or a norbornene group). ) Can be easily introduced, usually 1 to 3 in the compound of the present invention, Preferably 1 to 2 are contained.
  • R'-R 11 in the general formulas contains at least a group represented by [2], groups represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group or a formyl group (hereinafter, "the present invention It is abbreviated as “reactive group”.
  • the reactive group of the present invention itself exists as a scale 11 (that is, the reactive group is directly bonded to the pyrazole skeleton or the indole skeleton) or is contained as a substituent in the scale 1 ⁇ ! ⁇ 11 Either may be used, but when the reactive group is contained in R 11 , it is preferably contained as a substituent.
  • Examples of the compound represented by the general formula [1] include, for example, the general formula [1 1]
  • R la to R ba each independently represents an alkyl group optionally having a group represented by the general formula [2] or [3] as a substituent
  • R 8a represents The group represented by the formula [3] is preferred
  • R lla represents an alkyl group
  • n is as defined above.
  • alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group which may have an amide bond represented by ⁇ to are the same as those exemplified above.
  • R 3a and R 4a each independently has V as a substituent having a group represented by the general formula [2] or [3], and examples thereof include an alkyl group.
  • Preferred is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] or [3] as a substituent, and the other is an alkyl group.
  • R 5a and R 6a each independently has V as a substituent having a group represented by the general formula [2] or [3], and examples thereof include an alkyl group.
  • Preferred is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] or [3] as a substituent, and the other is an alkyl group.
  • alkyl group represented by R lla are the same as those of the exemplary alkylene Le group represented by in R 11 in the general formula [1].
  • the reactive group of the present invention contained in the compound of the present invention is bound to, for example, a labeling substance, etc.
  • the functional group contained in the labeling substance (For example, amino group, carboxyl group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.) (hereinafter sometimes abbreviated as “functional group of the target substance”).
  • a group (hereinafter sometimes abbreviated as “reactive group of the present invention”) may be further introduced.
  • reaction active group of the present invention that is, the reaction group of the present invention in which a group that enhances the binding property with the functional group of the target substance is introduced is also the reaction of the present invention. Included in sex groups.
  • Such a reactive group is not particularly limited as long as it can be bonded to the functional group of the labeling substance, and includes all those generally used in this field.
  • the reactive group of the present invention is not particularly limited as long as it can be bonded to the functional group of the labeling substance, but includes all those usually used in this field, for example, an amino group and Activating the reactivity of thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for amino groups”), activating the reactivity with thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for thiol groups”)
  • the reactive group with respect to the amino group include, for example, a succinimide group, a sulfosuccinimide group, a norbornene group, a 4-trophenoxy group, a group derived from a carboxylic acid anhydride (for example, an acetooxycarboromethyl group, propio- A carboxysulfonyl group, a benzoyloxybenzyl group, etc.), a halosulfoalkyl group having 1 to 3 carbon atoms (for example, a fluorosulfomethyl group, a fluorosulfo-ruethyl group, a fluorosulfo-nolepropinore group, a chlorosunolephoninoremethinole group, Chlorosnorephoninorechinore group, Chlorosnorephoninorepropinole group, Bromosnorephoninoremethinole group
  • fluorocarbo- Rumethyl group fluorocarboruethyl group, fluorocarboropropyl group, chlorocarborumethyl group, chlorocarboruethyl group, cyclocarbopropyl group, bromocarboromethyl group, bromocarboruethyl group, bromocarboropropyl group, Dodocarboromethyl group, oodocarboleethyl group, oodocarbopropyl group, etc.), halocarbole group (for example, fluorocarbon group, chlorocarbole group, bromocarbole group, oodocarbole group) Group), phosphoramidite group, isothiocyanate group, isocyanate group, monohalogen (eg F, C1, Br, I, etc.) substituted triazino group, dinogenogen (eg F, Cl, Br, I etc.) Substituted triazino groups, monohalogen (eg F, Cl, Br
  • Preferred examples of reactive groups for thiol groups include, for example, carboxylic acid anhydride-derived groups (for example, acetooxycarboromethyl group, propio-oxycarboxy-ruethyl group, benzoyloxybenzyl group, etc.), maleimide Group, sulfomaleimide group, sulfononorido group (eg F, Cl, Br, I etc.), ⁇ -norogeno (eg F, Cl, Br, I etc.) acetamide group, C 1-3 halocarbo -Alkyl groups (eg fluorocarbomethyl group, fluorocarboruethyl group, fluorocarboropropyl group, chlorocarbomethyl group, chlorocarboethyl group, carbocarbopropyl group, bromocarboromethyl group, bromocarbo- group Ruthel group, bromocarbopropyl group, ododyl group
  • the reactive group for the hydroxyl group include, for example, a group derived from a carboxylic acid anhydride (for example, acetooxycarboromethyl group, propio-oxycarboxyl-ethyl group, benzoyloxybenzyl group, etc.), carbon number 1 ⁇ 3 halosulfoalkyl groups (eg fluorosulfomethyl, fluorosulforuethyl, fluorosul) Honolepropinole group, Chlorosnolehoninoremethinole group, Chlorosnoleho-norechinole group, Chlorosnore Honinorepropinore group, Bromosnolehoninoremethinore group, Bromosnolehoninoretinore group, Bromosulfopropyl group, Yodosulfo- Rumethyl group, iodine sulfo-ruethyl
  • Preferable examples of the reactive group for the formyl group include a hydrazide group and the like.
  • a succinimide (Su) group for example, a succinimide (Su) group, a maleimide (Ma) group and the like are preferable.
  • a compound containing a reactive group is also included in the compound of the present invention represented by the general formula [1].
  • the reactive group of the present invention as described above is further introduced to the reactive group of the present invention in the compound of the present invention.
  • R 1 in the general formulas [1-1] to [1-4] R 2 and R 6 include those containing the reactive group.
  • R 17 represents an alkyl group or an aryl group,! ⁇ To 1 and n are the same as above.] [0130] In the general formulas [10] and [11], R 17 represents Examples of the alkyl group include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic.
  • Specific examples include a methyl group, an ethyl group, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n_pentyl, isopentyl, sec-pentyl, tert-pentyl, neopentyl, n- Hexyl, isohexyl, sec-hexyl, tert-hexyl, neohexyl, n-heptyl, isoheptyl, sec-heptyl, tert-heptyl, neoheptyl N-octyl group, isooctyl group, sec-octyl group, tert-octyl group, neooctyl group, n- Group, isonol group, sec-nonyl group, tert-nonyl group, neonon
  • Examples of the aryl group represented by R 17 usually include those having 6 to 10 carbon atoms, and specific examples include a phenyl group and a naphthyl group.
  • an indolenine compound represented by the general formula [8] indolenin skeleton portion
  • a compound represented by the general formula [9] [1 to 1 to the compound represented by the general formula [8] 2 times mole]
  • an acid anhydride represented by the general formula [10] [1 to 20 times mole relative to the compound represented by the general formula [8]] (for example, acetic anhydride, propionic anhydride, butyric anhydride, benzoic acid)
  • Anhydride, etc. is dissolved in a solvent (for example, carboxylic acids such as acetic acid, propionic acid, butyric acid, etc., for example, -tolyl such as acetonitol, propio-tolyl, n- butyguchi-tolyl)
  • a solvent for example, carboxylic acids such as acetic acid, propionic acid, butyric acid, etc., for example, -tolyl such as acetonitol,
  • the compound represented by the general formula [11] and the compound represented by the general formula [12] [virazole skeleton portion) [0.5 to 10 times the compound represented by the general formula [11] Mole, preferably 1 to 5 moles) of a basic catalyst (e.g., pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylaniline, piperidine, pyridine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.
  • a basic catalyst e.g., pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylaniline, piperidine, pyridine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.
  • triamine-metalamine hydrides such as sodium hydride, such as tri- ⁇ -butylamine, (E.g., basic alkali metal compounds such as ⁇ -butyl lithium) in the presence of dehydrating condensing agents (e.g., inorganic dehydrating agents such as concentrated sulfuric acid, phosphorous pentoxide, anhydrous zinc chloride, such as dicyclohexyl carpositimide, di Sopropyl carbodiimide, 1-ethyl-3- (3-dimethyla Nopropylcarbodiimide) hydrochlorides and other carbodiimides, acetic anhydride, polyphosphoric acid, carbodiimidazole, ⁇ ⁇ -toluenesulfochloride, etc.) and if necessary a solvent (for example, ⁇ , ⁇ -dimethylformamide ( DMF), ⁇
  • a solvent for example, ⁇ , ⁇ -dimethylformamide ( DMF), ⁇
  • the method of introducing the reactive group of the present invention into the reactive group of the present invention is a compound represented by the general formula [22] among the compounds represented by the general formula [1] (that is, in the general formula [1]
  • R 1 is a compound in which R 1 is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] as a substituent is used will be described.
  • T represents an alkylene group
  • ⁇ represents tetrafluoroborate or hexafluorophor
  • the compound represented by the general formula [22] is an alkyl group in which R 1 is a group represented by the general formula [2] as a substituent among the compounds represented by the general formula [1] ( That is, 12 T COOR
  • It may be branched, but is preferably a straight chain, and usually has 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 4 carbon atoms. Specific examples thereof include a methylene group, an ethylene group, a trimethylene group, and tetramethylene.
  • a linear alkylene group such as a tetramethylene group, a hexamethylene group, for example, an ethylidene group, a propylene group, an isopropylidene group, an ethylethylene group, a 1,2-dimethylethylene group, a 1,2-jetylethylene group, 1 , 2-di-n-propylethylene group, branched alkylene group such as 1,2-di-n-butylethylene group, and the like.
  • a linear alkylene group is preferable.
  • a methylene group or the like is more preferable.
  • a compound represented by the general formula [22] (compound having a reactive group of the present invention) is converted into a succinimide reagent such as a compound represented by the general formula [62] (general formula [22] 1 to 10-fold moles of the compound represented by formula (1) and a basic catalyst (for example, N-ethyldiisopropylamine, pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylaniline, piperidine, 4-dimethylaminopyri , Organic amines such as 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] unde force-7-en, tri- ⁇ -ptylamine) In the presence of a suitable solvent (e.g.
  • the compound represented by the general formula [23] is, for example, a maleimide reagent such as a compound represented by the general formula [68] (1 to 10 moles relative to the compound represented by the general formula [23]).
  • Basic catalysts eg triethylamine, N-ethyldiisopropylamine, pyridine, ⁇ , ⁇ -dimethylaminoline, piperidine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5 1, 8-diazabicyclo [5.4.0] unde force-7-ene, organic amines such as tri- ⁇ - butylamine, etc.
  • a suitable solvent eg DMF, DMA, acetoamide, N- In amides such as methylpyrrolidone
  • a compound represented by the general formula [24] a compound having a maleimide group which is a reactive group of
  • the succinimide reagent according to the present invention is not limited to the compound represented by the above general formula [62], and is a force that includes all of those usually used in this field. Specifically, for example, di (N- Succinimidyl) carbonate (DSC), 2-succinimide-1,1,3,3-tetramethyluorium tetrafluoroborate (TSTU), 2- (5-norbornene-2,3-dicarboximide) -1, 1 , 3,3-tetramethyl mouth-mu tetrafluoroborate (TNTU) and the like.
  • DSC di (N- Succinimidyl) carbonate
  • TSTU 2-succinimide-1,1,3,3-tetramethyluorium tetrafluoroborate
  • TNTU 3,3-tetramethyl mouth-mu tetrafluoroborate
  • the method of introducing the reactive group of the present invention other than the reactive group as described above can be obtained by appropriately synthesizing according to the above using the corresponding raw material.
  • examples of the halogen atom represented by X include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
  • the ketone compound represented by the general formula [13] and the compound represented by the general formula [14] are suitable.
  • an appropriate solvent for example, carboxylic acids such as acetic acid and propionic acid, for example, alcohols such as ethylene glycol and 1,4-butanediol.
  • compound represented by the general formula [21] can be obtained (e.g., Journal of Organic Chemistry, 42 (14 ), 2474 ⁇ 80, I9 77 , etc.).
  • the compound represented by the general formula [15] is combined with the halogenated compound represented by the general formula [16] or the tosylate compound represented by the general formula [17] in an appropriate solvent (for example, Halogenated aromatic hydrocarbons such as black benzene and 1,2-dichlorobenzene, halogenated hydrocarbons such as 1,2-dichloroethane, aromatic hydrocarbons such as toluene, xylene and benzene, For example, amides such as DMA, DMF, acetoamide, N-methylpyrrolidone, etc.) and reacted at 40 to 200 ° C for 1 to 24 hours to obtain an indolenine compound represented by the general formula [8] ( For example, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1.947-952.198 etc.).
  • an appropriate solvent for example, Halogenated aromatic hydrocarbons such as black benzene and 1,2-dichlorobenzene, halogenated hydrocarbons such as 1,2-dichloro
  • Ketone compounds represented by the general formula [13] are commercially available products (eg 3-methyl-2-butanone, 3-methyl-2-pentanone, 3-methyl-2-hexanone, 1-cyclohexane).
  • Propylethanone, 1-cyclopropylethanone, etc. may be used, or those appropriately synthesized by conventional methods may be used.
  • 2-methylacetoacetate and a leaving group for example, a halogen atom
  • a compound having a tosylate group, etc.) with a basic catalyst for example, metal hydrides such as sodium hydride and potassium hydride, for example, alkali metal carbonates such as lithium carbonate, sodium carbonate and potassium carbonate, such as sodium methoxide, Alkali metal alkoxides such as sodium ethoxide and potassium tert-butoxide, for example, basic alkali metal compounds such as n-butyllithium, such as lithium diisopropyl
  • amides such as DMF, DMA, acetoamide, N-methylpyrrolidone, alcohols such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, and ethylene glycol
  • ethers such as tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol monoethyl ether, and sulfoxides such as dimethyl sulfoxide
  • the diketone compound represented by the general formula [18] and hydrazine are mixed in an appropriate solvent (for example, alcohols such as methanol monole, ethanolanol, propanol, isopropanol, butanol, ethylene glycol).
  • an appropriate solvent for example, alcohols such as methanol monole, ethanolanol, propanol, isopropanol, butanol, ethylene glycol.
  • a dehydration reaction is performed at 100 ° C. for 1 to 4 hours to obtain a 4H-pyrazole compound represented by the general formula [26] (for example, Adv. Heterocycle. Chem. Vol. 34. 53-78. 1983).
  • the 4H-pyrazole ich compound represented by the general formula [19] is appropriately combined with the halogenated compound represented by the general formula [20] or the tosylate compound represented by the general formula [21].
  • Solvents for example, halogenated aromatic hydrocarbons such as black benzene and 1,2-dichlorobenzene, halogenated hydrocarbons such as 1,2-dichloroethane, for example, aromatics such as toluene, xylene, and benzene
  • an aromatic hydrocarbon such as DMF, DMA, acetoamide, amides such as N-methylpyrrolidone
  • Compounds are obtained (eg J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1. 947 ⁇ 952. 1984 etc.).
  • the diketone compound represented by the general formula [18] may be a commercially available product (such as 3,3-dimethyl-2,4-pentanedione) or may be appropriately synthesized by a conventional method. Specifically, for example, 3-methyl-2,4-pentanedione or 4-acetyl-5-oxohexanoic acid ethyl ester has a leaving group (for example, a halogen atom, a tosylate group, etc.).
  • Compounds can be converted to basic catalysts (e.g., metal hydrides such as sodium hydride and potassium hydride, e.g.
  • Alkali metal carbonates such as lithium acid, sodium carbonate, potassium carbonate, etc.
  • alkali metal alkoxides such as sodium methoxide, sodium ethoxide, potassium tert-butoxide, basic alkali metal compounds such as n-butyl lithium, for example
  • suitable solvents eg amides such as DMF, DMA, acetoamide, N-methylpyrrolidone, such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, ethylene glycol, etc.
  • ethers such as tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol monoethyl ether, and the like, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, etc.
  • 80 to 100 ° C. for 0.1 to 24 hours for example, Modern Synthic Reactions, California, 2nd e
  • the compound [1] of the present invention thus obtained is expected to be used as a fluorescent labeling substance such as a nucleic acid extraction method and an immunoassay method.
  • Examples of the labeled compound of the present invention include those in which the compound of the present invention (labeling substance) and the labeling substance are bound directly or indirectly.
  • the labeling compound is contained in the compound of the present invention.
  • a group represented by the general formula [2] for example, a carboxyl group
  • a group represented by the general formula [3] for example, a sulfo group
  • an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group directly or Indirectly coupled ones are listed.
  • a group represented by the general formula [2] for example, a force lpoxyl group, etc.
  • a group represented by the general formula [3] for example, a sulfo group, etc.
  • the group, hydroxyl group, thiol group or formyl group (hereinafter sometimes abbreviated as “reactive group of the present invention”) is usually represented by the general formula [1]! ⁇ ⁇ Scale 11, preferably ⁇ , which more preferably contains perforated to R 1 or R 6 is preferred.
  • the labeling substance labeled with the compound of the present invention includes, for example, all the powers usually used in this field as the labeling substance. Specifically, for example, piotin, avidin, streptavidin, antibody or its Degradation products (eg Fab, Fab, F (ab ') Etc), amino acids, proteins, peptides, enzyme substrates, hormones, lymphokines, metabolites,
  • Receptors ligands, agonists, antagonists, antigens, haptens, dendrimers, lectins, toxins, carbohydrates, eg sugars such as fructose, polysaccharides, nucleosides (eg ribonucleosides, deoxyribonucleosides etc.), Nucleotides (eg, ribonucleotides, doxyribonucleotides, etc.), nucleic acids (oligonucleotides, polynucleotides) (eg, doxyribonucleic acid (DNA), ribonucleic acids (RNA), etc.), nucleic acid derivatives (eg, DNA fragments, RNA fragments, etc.) ), Natural drugs, viruses, viral components, yeast components, blood cells, blood cell components, biological cells, non-cellular blood components, bacteria, bacterial components, natural and synthetic lipid sac, synthetic and natural drugs, poisons, environmental pollution Substance, polymer, polymer particle, glass
  • a nucleoside also serves as a purine base or pyrimidine base, and a pentose ska, which is a sugar moiety.
  • a ribonucleoside whose sugar moiety is D-ribose for example, a nucleoside whose sugar moiety is D-2-deoxyribose.
  • oxyribonucleosides for example, a ribonucleoside whose sugar moiety is D-2-deoxyribose.
  • the nucleotide consists of a purine base or pyrimidine base, a pentose that is a sugar moiety, and a phosphate.
  • a ribonucleotide in which the sugar moiety is D-ribose for example, a sugar moiety is D-2-deoxyribose. And deoxyribonucleotides.
  • nucleoside and nucleotide include, for example, nucleoside antibiotics whose basic base moiety is not a purine structure or pyrimidine structure, those whose structures are modified, and sugar moieties that are D- Those that are not ribose or deoxy-D-ribose, those that have been modified, phosphate moieties (one OPO-one) are other elements [eg sulfur atoms (
  • the nucleic acid is a linear oligo or polynucleotide in which the nucleotide is a basic unit and the phosphate is linked between each nucleotide by a diester bond between the 3 'and 5' carbons of the sugar, Specific examples include ribonucleic acid (RNA) whose sugar moiety is ribose, and deoxyribonucleic acid (DNA) whose sugar moiety is D-2-deoxyribose.
  • RNA ribonucleic acid
  • DNA deoxyribonucleic acid
  • nucleotides, nucleic acids and derived nucleic acids may be single-stranded or double-stranded or more
  • the nucleic acid chain strength may be sufficient. Further, these may be appropriately modified with appropriate ones as long as the object of the present invention can be achieved! /.
  • the reactive group of the present invention binds to a functional group (for example, amino group, carboxy group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.) in the labeling substance, for example, by ionic bond, covalent bond, etc.
  • a functional group for example, amino group, carboxy group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.
  • the compound of the present invention and the labeling substance are indirectly bound when, for example, the reactive group of the present invention binds to the functional group in the labeling substance via a linker (eg, ionic bond, covalent bond). It is meant to be combined).
  • linkers used in indirect binding include all those usually used in this field.
  • a method for labeling a target substance using the compound [1] of the present invention may be appropriately selected according to a method known per se.
  • the reactive group of the present invention that is, the general formula [1] groups represented by in scale 1 ⁇ ! ⁇ 11 is contained in at least one of the general formula [2] (for example, carboxyl group, etc.), the general formula a group represented by [3] (e.g. sulfo group, etc.) , Amino group, hydroxyl group, thiol group or formyl group) and a functional group in the target substance (for example, amino group, carboxy group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.) (hereinafter referred to as “functional group of target substance”).
  • “functional group of target substance” for example, amino group, carboxy group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.
  • a method for labeling nucleotides in addition to the above-described labeling method using a chemical reaction, a method using an enzyme can be easily labeled and used here. Enzymes include all those usually used in this field.
  • the reactive group of the present invention may be further introduced with a group that enhances the reactivity with the functional group of the substance to be labeled (hereinafter sometimes abbreviated as "reactive group”).
  • reactive group a group that enhances the reactivity with the functional group of the substance to be labeled
  • Specific examples of the method for labeling the labeling substance using the compound of the present invention include, for example, (1) after further introducing the reactive group of the present invention into the reactive group of the present invention, Labeling by binding to the functional group of the substance (hereinafter sometimes simply referred to as “functional group”) (2) a method in which the reactive group of the present invention is introduced into the functional group of the substance to be labeled, followed by binding to the reactive group of the present invention, and (3) the reactivity of the present invention.
  • the reactive group of the present invention is not particularly limited as long as it can be bonded to the functional group of the substance to be labeled, but includes all those usually used in this field, such as an amino group and the like. That activates the reactivity of thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for amino groups”), those that activate the reactivity with thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for thiol groups”).
  • reactive groups for hydroxyl groups those that activate the reactivity with formyl groups
  • reactive groups for formyl groups those that activate the reactivity with formyl groups
  • a compound containing a reactive group is also included in the compound of the present invention represented by the general formula [1].
  • the reactive group of the present invention is a group represented by the general formula [2] (hereinafter abbreviated as "carboxyl group of the present invention”).
  • carboxyl group of the present invention As a preferred method, it is preferable to bind to an amino group, a thiol group or a hydroxyl group which is a labeling substance or a functional group of a linker introduced into the labeling substance (hereinafter sometimes simply referred to as “labeled substance”).
  • labeling substance hereinafter sometimes simply referred to as “labeled substance”.
  • a condensing reagent such as N-hydroxysuccinimide and carpositimide
  • carboxychlorine by reacting a salt of the carboxyl group of the present invention with carboxy chloride.
  • the reactive group of the present invention is a group represented by the general formula [3] (hereinafter abbreviated as "sulfo group of the present invention") and this is bound to the labeling substance
  • the preferred method for binding to the amino group, imidazole group, thiol group, or phenol group of the labeling substance include (i) reacting the sulfo group of the present invention with chlorosulfonic acid and reacting the sulfochloride. And a method of reacting it with an amino group, an imidazole group, a thiol group, or a phenol group of a substance to be labeled.
  • the reactive group of the present invention is an amino group (hereinafter abbreviated as "amino group of the present invention") and this is bound to the labeling substance, the labeling substance or its linker
  • amino group of the present invention N-hydroxysuccinimide, carboxydiimide, and other condensation reagents may be used as a preferred method for bonding to the functional group force lpoxyl group, amino group, phenol group or thiol group.
  • a method for binding an amino group of the invention to an amino group of a labeling substance or its linker, GO A phosgene is allowed to act on the amino group of the present invention to form an isocyanate, followed by binding to an amino group of the labeling substance or its linker
  • Iii a method in which the amino group of the present invention is reacted with dartaldehyde, and this is reacted with an amino group or phenol group of a labeled substance or its linker
  • the linker is derived from sugar or glycoprotein, this is reacted with periodic acid in advance, then reacted with the amino group of the present invention, and further reduced with sodium borohydride or the like
  • V A bifunctional spacer having an amino group of the present invention having a maleimide group (for example, m-maleimidobenzoyl N-hydroxysuccinimide ester) or a pyridyldithiosulfide group.
  • Examples include a method of reacting with a thiol group of the linker.
  • the reactive group of the present invention is a hydroxyl group (hereinafter abbreviated as "the hydroxyl group of the present invention") and the labeling substance binds thereto, the labeling substance or a functional group of the linker thereof is used.
  • a preferred method for bonding with an amino group, a thiol group, or a hydroxyl group is, for example, (0.
  • a method of reacting with the amino group of the substance or its linker, GO acetylation of the hydroxyl group of the present invention, bromination, bromine-iodine substitution with sodium iodide, and then the amino group of the target substance or its linker examples thereof include a method of reacting with a thiol group or a hydroxyl group, and (m) a method of reacting the hydroxyl group of the present invention with cyanogen bromide and activating it, and then reacting with a labeled substance or an amino group of its linker.
  • the reactive group of the present invention is a thiol group (hereinafter abbreviated as "the thiol group of the present invention") and this is bound to the labeling substance, the labeling substance or its linker is used. It is preferable to combine with an amino group, thiol group or hydroxyl group which is a functional group of
  • the amino group of the 0 labeled substance or its linker is replaced with a bifunctional spacer having a maleimide group (for example, m-maleimidobenzoyl N-hydroxysuccinimide ester) or a pyridyldithiosulfide group) And then thiol group of the present invention after maleimidation or pyridyldithiosulfide formation with a bifunctional spacer (for example, 4_succinimidyloxycarbol- (X- (2-pyridyldithio) toluene etc.))
  • a bifunctional spacer such as GO bis-maleimidohexane, 1,4-di- [3 and 2'-pyridyldithio (propionamide)] butane, and the thiol group of the present invention.
  • Examples include a method of reacting a thiol group of a substance to be labeled or its linker.
  • the reactive group of the present invention is a formyl group (hereinafter abbreviated as "formyl group of the present invention"), and when this is bound to the labeling substance, the labeling substance or its linker is used.
  • a preferred method for bonding with an amino group or the like that is a functional group is, for example, (0 After reacting directly the amino group of the labeled substance or its linker with the formyl group of the present invention, boron hydride. The method of reducing with sodium etc. is mentioned.
  • Examples of the polyvalent reactive linker reagent include all those usually used in this field. Specifically, for example, one of the reactive group of the present invention and the functional group of the labeling substance is a key.
  • a divalent reagent in the case of a mino group and the other is a thiol group (hereinafter referred to as “amino group and thiol group”). It is abbreviated as “group divalent reagent”. )
  • group divalent reagent A bivalent reagent when one of the reactive group and the functional group is an amino group and the other is a group represented by the general formula [2] (carboxyl group, etc.) (hereinafter referred to as “amino group and carboxyl group”).
  • a divalent reagent in the case where one of the reactive group and the functional group is a thiol group and the other is a hydroxyl group (hereinafter referred to as “the divalent reagent of a thiol group and a hydroxyl group”).
  • the divalent reagent of a thiol group and a hydroxyl group Abbreviated as “reagent”.)
  • a bivalent reagent when the reactive group and the functional group are both amino groups hereinafter abbreviated as “bivalent reagent of amino group and amino group”
  • a bivalent reagent in which both the reactive group and the functional group are thiol groups (hereinafter abbreviated as “bivalent reagent of a thiol group and a thiol group”).
  • bivalent reagent of an amino group and a thiol group examples include N- (a-maleimidoacetoxy) succinimide, ⁇ - [ ⁇ -maleimidobutyryloxy] succinimide, ⁇ - (6-maleimide force) Pyloxy) succinimide, ⁇ - (8-maleimidocapryoxy) succinimide, ⁇ - (11-maleimidoundecanoxy) succinimide, m-maleimidobenzoyl- ⁇ -hydroxysuccinimide, succinimidyl 4_ [p-maleimidophenol- L] butyrate, succinimidyl 4- [N-maleimidomethyl] cyclohexane-1-carboxylate, succinimidyl-6- [ ⁇ -maleimidopropionamido] hexanoate, ⁇ -succinimidyl 3- (2-pyridyldithio) propionate, etc. Is mentioned.
  • divalent reagent of an amino group and a carboxyl group include, for example, 3-[(2-aminoethyl) dithio] propionic acid hydrochloride, 1-ethyl-3- [3-dimethylamino Propyl] carbodiimide hydrochloride and the like.
  • divalent reagent of a thiol group and a hydroxyl group include, for example, ⁇ - [ ⁇ -maleimidophenyl] isocyanate.
  • divalent reagent of an amino group and an amino group include, for example, methyl ⁇ -succinimidino adipate, disuccinimidino gnorelate, disuccicin imidinole suberate, ethylene glycol bis [succinimidyls] Succinate], dithiobis [succinimidyl propionate], disuccinimidinore tartarate, bis [2- (succinimidoxycanoloxy) ethyl] sulfone, 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene
  • methyl ⁇ -succinimidino adipate disuccinimidino gnorelate
  • disuccicin imidinole suberate ethylene glycol bis [succinimidyls] Succinate]
  • dithiobis succinimidyl propionate
  • disuccinimidinore tartarate bis [2- (succinimidoxycanoloxy) ethy
  • thiol groups and thiol group divalent reagents include, for example, bis-maleimide ester. 1,4-bis-maleimidobutane, bis-maleimidohexane, 1,4 bis-maleimidyl-2,3-dihydroxybutane, dithio-bis-maleimidoethane, 1,6-hexane-bis-vinylsulfonate, Examples include 1,8-bis-maleimidodiethylene glycol, 1,11-bis-maleimidotriethylene glycol, 1,4-di- [3 ′-(2′-pyridyldithio) -propionamido] butane.
  • the reaction of the present invention can be carried out by directly binding a reactive group in the compound of the present invention.
  • a reactive group for example, cytidine, adenine, guanine, etc.
  • nucleotide derivative A derivative in which is introduced (hereinafter abbreviated as “nucleotide derivative”) is synthesized, and then, for example, when bound to an amino group in a nucleotide derivative, it is bound to an active ester group or a carboxyl group in the compound of the present invention.
  • nucleotide derivative A derivative in which is introduced (hereinafter abbreviated as “nucleotide derivative”) is synthesized, and then, for example, when bound to an amino group in a nucleotide derivative, it is bound to an active ester group or a carboxyl group in the compound of the present invention.
  • carboxyl group in a nucleotide derivative it may be bound to an amino group in the compound of the present invention.
  • the compound of the present invention when bound to a thiol group in a nucleotide derivative, the compound of the present invention. What is necessary is just to combine with the maleimide group (reactive group) in the inside.
  • the linker used may be any of those usually used in this field, and may include an ester bond, an ether bond or z and an amide bond in the linker.
  • linker those generally used in this field can be used. 1S Specifically, a linker having a structure represented by the following general formula (A) can be mentioned. — E ⁇ X— T10— Y—— NH—— (A)
  • E represents —CH ⁇ CH or —C ⁇ C—
  • X and Y each independently represent an alkylene group
  • T10 represents ⁇ or NH—CO—.
  • the alkylene group represented by X may be linear, branched or cyclic, and is preferably linear. Examples thereof include 1 to 10, preferably 1 to 6, more preferably 1 to 3. Specifically, for example, a methylene group, an ethylene group, a trimethylene group, a tetramethylene group, a pentamethylene group, a hexamethylene group, Linear alkylene groups such as heptamethylene, otatamethylene, nonamethylene, decamethylene, such as ethylidene, propylene, isopropylidene, 1-methyltrimethylene, 2-methyltrimethylene, 1,1-dimethyl Ethylene group, 1,2-dimethylethylene group, ethylethylene group, 1-methyltetramethylene group, U-dimethyltrimethylene group, 2,2-dimethyltrimethylene group, 2-ethyltrimethylene group 1-methylpentamethylene group, 1-methylhexamethylene group, 1-methylhept
  • the alkylene group represented by ⁇ may be linear, branched or cyclic, and preferably linear, usually having 1 to LO, preferably 2 to 8, more preferably Examples include 2 to 6, specifically, for example, a methylene group, a ⁇ ethylene group, a trimethylene group, a tetramethylene group, a pentamethylene group, a hexamethylene group, a heptamethylene group, an otatamethylene group, a nonamethylene group, and a decamethylene group.
  • Linear alkylene groups such as ethylidene, propylene, isopropylidene, 1-methyltrimethylene, 2-methyltrimethylene, 1,1-dimethylethylene, 1,2-dimethylethylene, Ethylethylene, 1-methyltetramethylene, 1,1-dimethyltrimethylene, 2,2-dimethyltrimethylene, 2-ethyltrimethylene, 1-methylpentamethylene Group, 1-methylhexamethylene group, 1-methylheptamethylene group, 1,4-jetyltetramethylene group, 2,4-dimethylheptamethylene group, 1-methylotatamethylene group, 1-methylnonamethylene group, etc.
  • a branched alkylene group such as cyclopropylene 1,3-cyclobutylene group, 1,3-cyclopentylene group, 1,4-cyclohexylene group, 1,5-cycloheptylene group, 1,5-cyclooctylene group, 1,5 And cyclic alkylene groups such as a -cyclono-lene group and a 1,6-cyclodecalene group.
  • Examples of the labeled nucleotide according to the present invention include nucleotide residues labeled with the compound [1] of the present invention directly or indirectly through a linker and the like. And those containing the nucleotide residue shown in [22].
  • the compound represented by the general formula [1 '] is a compound represented by the general formula [1], wherein R 1 is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] as a substituent ( That is, 12 T COOR
  • nucleotide residue represented by Q1 in the general formula [22] examples include a ribonucleotide residue, a 2 'deoxyribonucleotide residue, a 3' deoxyribonucleotide residue, and a 5 'deoxy Examples include ribonucleotide residues, 2 ′, 3′-dideoxyribonucleotide residues, and the like.
  • nucleotide residues include those represented by the general formulas (0, (ii), (v), (vi), (vii), (viii), (xii) and (xiii) Or a pyrimidine nucleotide residue represented by the general formulas (iii), (iv), (x) and (xi).
  • Z 3 represents a bond bonded to VI
  • R 25 and R 26 each independently represent H, OH or O-
  • R 27 represents one PO H-, -PO H, 1 POH, 1 POH or
  • the salt includes, for example, alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt, alkaline earth metal salts such as barium salt, such as ammonium salt, triethylammonium salt, and pyridine salt. And organic amine salts.
  • the linker represented by VI in the general formula [22] has a nucleotide residue represented by Q1, This is a linker for binding the compound derivative (fluorescent label) of the present invention represented by Wl [general formula [1 ′]].
  • any of those capable of binding to the nucleotide residue represented by 12 Q 1 can be used, and specific examples include a linker having a structure represented by the following general formula (A).
  • nucleotide residues represented by the general formula [22] are represented by the following general formula [2
  • E1 represents —CH ⁇ CH or —C ⁇ C—
  • XI and Y1 each independently represents an alkylene group
  • T11 represents O or NH—CO—
  • Q1 And W1 is the same as above.
  • the alkylene group represented by XI is the same as the alkylene group represented by X described above, and specific examples and preferred examples thereof are also the same.
  • the alkylene group represented by Y1 is the same as the alkylene group represented by Y described above, and specific examples and preferred examples thereof are also the same.
  • r is an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, more preferably 1 to 4, and s is an integer of 1 to 10, preferably 2 to 8, more preferably 2 to 4.
  • Ql, Wl, El and Ti l are the same as above.
  • Such a compound derivative (labeling substance) of the present invention represented by W1 [general formula [1 ']] is derived from the compound [1] of the present invention as described above, and these are preferred. Specific examples are also the same as those of the compound [1] of the present invention as described above.
  • [0211] As a method for labeling the nucleotide as described above with the compound [1] (labeling substance) according to the present invention, a direct labeling method or an indirect labeling method known per se [for example, pamphlet of W096 / 17628 (Japanese Patent Laid-Open No. No. -12782), US Pat. No. 6,974,873, Japanese Patent Laid-Open No. 2002-193991, Pamphlet of W09 9/12544, Japanese Patent Laid-Open No. 11-80189, and the like.
  • a direct labeling method or an indirect labeling method known per se for example, pamphlet of W096 / 17628 (Japanese Patent Laid-Open No. No. -12782), US Pat. No. 6,974,873, Japanese Patent Laid-Open No. 2002-193991, Pamphlet of W09 9/12544, Japanese Patent Laid-Open No. 11-80189, and the like.
  • labeled mononucleotides to which the compound [1] (labeling substance) according to the present invention is bound are necessary.
  • These labeled nucleotides are known per se. It can be prepared by a method (for example, the labeling method described above).
  • W— OSu (b) [Wherein W represents Wl, Su represents a succinimide group. W1 is the same as above.]
  • T10 of the linker moiety represented by the general formula (a) as described above is -NH-CO, for example, it can also be prepared as follows.
  • the 5′-triphosphate derivative can be synthesized, for example, according to the following synthetic route.
  • this compound (E-X-T10-Y-NH-) represented by the above general formula (A), this compound is represented by E-X-NH- when T10 is NH-CO.
  • E is —CH ⁇ CH and X-force methylene group.
  • this compound is a CO—Y—NH— in the case where the linker represented by the general formula (A) (—E—X—T10—Y—NH—) and T10 is one NH—CO.
  • This compound is a compound corresponding to Q1-E1-X1-T11-Y1-NH in the general formula [22] (Q1-E1-X1-T11 Y1-NH-W1), wherein ⁇ 31 is 2 '—Deoxycytidine, E ⁇ S CH ⁇ CH—XI force S methylene group, T11 is one NH—CO—Y1 is a pentamethylene group.
  • the pyrazole cyanine dye of the present invention has a structure in which a pyrazole skeleton and an indole skeleton are bonded by a polymethine chain, it has fluorescence characteristics in a shorter wavelength region than a conventional light source.
  • a measurement object is detected using a light source in the short wavelength region with high energy efficiency as a labeling agent (labeling substance), for example, the water-solubility that conventional cyanine dye derivatives had It is possible to detect a measurement object with high detection sensitivity without problems such as low and low detection sensitivity due to quenching due to association between dyes.
  • any one of R 1 , R 2 , R 4 ′,, R 1 , R 6 , and R 2 , R 4 is an O group, an S group Examples of a compound that forms a divalent group with a selected group and a substituted or unsubstituted alkylene group represented by the following formula [51] ] Are shown.
  • R 7 each independently represents a substituted or unsubstituted alkyl group optionally having an amide bond
  • R 7 “to R 1G ” each independently represents a substituted or unsubstituted alkyl group; Unsubstituted alkyl group, alkyl group, alkyl group, aryl group, alkoxy group, aryloxy group, alkylthio group, arylthio group, alkylsulfol group, arylsulfol group, carbamoyl group, sulfamoyl group Group, ureido group or amino group, general formula [2]
  • R 12 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, an ammonium ion or a arone.
  • R 13 is a hydrogen atom, an alkali metal atom, an organic ammonium ion, or an ammonia Indicates on or key-on.
  • R ⁇ represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, or an aryl group.
  • R 1 " ⁇ 11 ", and R 1 "and R 2 ", R 4 “and R 5 “, R 1 “and R 6 “ and R 2 “and R 4 " At least one of the groups represented by general formula [2], a group represented by general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group.
  • R ⁇ represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, or an aryl group.
  • Examples of the compound that forms a divalent group and is represented by the general formula [51] include compounds represented by the following general formulas [55] to [58].
  • T represents a divalent group consisting of a group selected from —O group, —S group, COO group and groups represented by the general formulas [4] to [6] and a substituted or unsubstituted alkylene group.
  • R 3 " ⁇ RU" and And n are the same as above.
  • at least one of the divalent groups represented by R 3 “ ⁇ RU” and T is a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, and a thiol group. Or it has a formyl group.
  • R 1 "to”, “to 1 ", T and n are the same as those described above, provided that R 1 "to”, “to R 11 " and a divalent group represented by T At least one has a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group.
  • At least one of the divalent groups represented by T has a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group.
  • n is usually an integer of 0 to 3, preferably 1 or 2, and more preferably 2.
  • alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group which may be used include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 5 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic. Specifically, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n-pentyl group, isopentyl group, sec-pentyl group.
  • tert-pentyl group neopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, se c-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group, n-heptyl group, isoheptyl group, sec -Heptyl, tert-heptyl, neoheptyl, n-octyl, isooctyl, sec-octyl, tert-octyl, neooctyl, n-nor, isonol, sec -nonyl Group, tert-nonyl group, neononyl group, n-decyl group, isodecyl group Group, sec-decyl group, tert-decyl group, neodecyl group, cyclopropyl group, cyclobutyl group,
  • the substituted or unsubstituted alkyl group represented by "to” may have an amide bond, but the substituted or unsubstituted alkyl group does not have an amide bond, or a substituted or unsubstituted alkyl group.
  • the alkyl chain of the substituted alkyl group usually contains 1 to: LO, preferably 1 to 3, more preferably 1 amide bond.
  • An unsubstituted alkyl group having an amide bond is preferred. Specific examples thereof include, for example, the following general formula [59]
  • R 21 represents a hydrogen atom or an alkyl group
  • T and m T represent an alkylene group
  • n an integer of 0 to 10.
  • the alkyl group represented by R 21 may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the alkylene group represented by T and m pieces of T include linear, branched or cyclic.
  • any of those usually having 2 to 10 carbon atoms, preferably 2 to 8 carbon atoms may be mentioned.
  • Specific examples include methylene group, ethylene group, trimethylene group, tetramethylene group, pentamethylene group, hexamethylene group, hepta Linear alkylene groups such as methylene group, otatamethylene group, nonamethylene group, decamethylene group, etc., such as ethylidene group, propylene group, isopropylidene group, 1-methyltrimethylene group, 2-methyltrimethylene group, 1,1-dimethylethylene 1,2-dimethylethylene group, ethylethylene group, 1-methyltetramethylene group, 1,1-dimethyltrimethylene group, 2,2-dimethyltrimethylene group, 2-ethyltrimethylene group, 1-methyl Pentamethylene group, 2-methylpentamethylene, 1,3-dimethyltetramethylene, 3-ethyltetramethylene, 1-methylhexamethylene group Branched alky
  • m is usually an integer of 0 to 0, preferably an integer of 0 to 3, more preferably 0 or 1.
  • the substituent of the substituted alkyl group which may have an amide bond represented by “to”, includes the amide bond.
  • a hydrogen atom in the alkyl group that may be present is partially substituted with a substituent.
  • the substituent include a group represented by the general formula [2], a general formula [2] 3], a hydroxyl group, a cyano group, a formyl group, a thiol group, and the like. Among them, a group represented by the general formula [2] or a group represented by the general formula [3] is preferable.
  • Examples of the substituted alkyl group having an amide bond represented by "to" include, for example, a part of hydrogen atoms of an unsubstituted alkyl group having an amide bond represented by the above general formula [59] Preferred are those substituted with a group represented by [2] or a group represented by the general formula [3].
  • examples of the alkali metal atom represented by R 12 and R 13 include a lithium atom, a sodium atom, a potassium atom, and a rubidium atom. Among them, a sodium atom is more preferable, and an atom or a potassium atom is more preferable.
  • Examples of the organic ammonium ions represented by R 12 and R 13 include trialkyl ammonium ions.
  • Examples of the trialkylammonium ions include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic.
  • the alkyl group of LO is usually a straight chain, branched or cyclic carbon number of 1 to 10, preferably 1 to 6 include those more preferred rather 1-3, specifically, for example, methyl group, Echiru group, n- propyl group, an isopropyl group, n - butyl group, isobutyl group, sec - Butyl, tert-butyl, n-pentinole, isopentinole, sec-pentinole, tert-pentinole, neopentinole, n-hexyl, isohexyl, sec-hexyl, tert-to Xyl, neohexyl, n-heptyl, isoheptyl, sec-heptyl, tert-heptyl, neoheptyl, n-octyl, iso
  • Isodecyl group sec-decyl group, tert-decyl group, neodecyl group, cyclopropyl group, cyclobutyl group, cyclopentyl group, cyclohexyl group, cycloheptyl group, cyclooctyl group, cyclonor group, cyclodecyl group, etc. Is mentioned.
  • Preferable specific examples of the group represented by the general formula [2] include, for example, a carboxyl group (one CO OH), its lone [carboxylate (—COO_)], its alkali metal salt (for example, a lithium salt). , Sodium salts, potassium salts, rubidium salts, etc.), their ammonium salts, their organic ammonium salts (for example, trimethyl ammonium salts, triethyl ammonium salts, tripropyl ammonium salts, etc.), etc.
  • a carboxyl group, a carboxylate group, and a sodium salt thereof are preferable.
  • these may be collectively abbreviated as “carboxyl group etc.”.
  • a sulfo group, a sulfonate group, and a sodium salt thereof are preferable.
  • these may be collectively abbreviated as “sulfo group or the like”.
  • the substituent of the substituted alkyl group which may have an amide bond represented by "-" in the general formulas [51] and [55]-[58] are preferably substituted with the hydrogen atom at the terminal of the alkyl group.
  • R 1 "and R 2 " in the general formulas [51] and [56] to [58] include, for example, a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, and an n-butyl group. , N-pentyl group, n-hexyl group and the like, the hydrogen atom at the terminal of the linear alkyl group having 1 to 6 carbon atoms is the above substituent (that is, the group represented by the general formula [2], the general formula [3 Group, a hydroxyl group, a cyano group, a formyl group, or a thiol group). Among them, a group represented by the general formula [2] or a group represented by the general formula [3] Are preferred.
  • alkyl groups e.g., methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butynole group, tert-butynole group, n-pentinole group, isopentinole group, sec-pentynole group, tert-pentyl group, neopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, sec-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group, etc.), and the other is general A group represented by the formula [2], a group represented by the general formula [3], a hydroxyl group, a cyano group, a formyl group or a thiol group as a substituent, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms (in particular, the general formula [2] Or a group having a group having
  • R 3 "and R 4 " or R 5 “and R 6 " in the general formulas [51] and [56] to [58] forms a divalent group represented by T.
  • the other ie, R 3 ′′ and R 6 ′′ in general formula [56], R 5 in general formula [57], R 3 ′′ in general formula [58]
  • An alkyl group having 1 to 6 carbon atoms for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n_pentyl group, isopentyl group, sec-pentyl group, tert-pentyl group, neopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, sec-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group, etc.).
  • the substituted or unsubstituted alkyl group represented by R 7 "to R 1C> " is linear or branched.
  • those having 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms may be used, and specific examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, and n-butyl.
  • the alkenyl group of the substituted or unsubstituted alkenyl group represented by R 7 "to R 1G " may be any of straight chain, branched or cyclic, and usually has 2 to 6 carbon atoms. In particular, those having 2 to 4 may be mentioned.
  • bur group allyl group, 1-propenyl group, isopropyl group, 3-butenyl group, 2-butenyl group, 1-butenyl Group, 1,3-butadenyl group, 4-pente -L- group, 3-pentayl group, 2-pentayl group, 1-pentayl group, 1,3-pentagel group, 2,4-pentagel group, 1,1-dimethyl-2 -Propellyl group, 1-ethyl-2-propyl group, 1,2-dimethyl-1-probe group, 1-methyl-1-butur group, 5-hexyl group, 4-hexyl, 3-hexyl, 2-hexyl, 1-hexyl, 1-cyclopropyl, 2-cyclopentale, 2, Examples include 4-cyclopentane group, 1-cyclohexyl group, 2-cyclohexyl group, 3-cyclohexyl group and the like.
  • alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group represented by R 7 "to R 1G " examples include those having usually 2 to 6 carbon atoms, preferably 2 to 4 carbon atoms.
  • ethynyl group, 2-propyl group, 3-butyl group, 1-methyl-2-propyl group, 4-pentyl group, 2-methyl-4-pentynyl group, 5-hexul group and the like can be mentioned.
  • the aryl group of the substituted or unsubstituted aryl group represented by R 7 "to R 1G " usually includes those having 6 to 10 carbon atoms, and specifically includes, for example, a phenyl group and a naphthyl group. The group is listed.
  • the alkoxy group of the substituted or unsubstituted alkoxy group represented by R 7 "to R 1G " is usually a straight chain, branched or cyclic group having 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 Specifically, for example, methoxy group, ethoxy group, n_propoxy group, isopropoxy group, n-butoxy group, isobutoxy group, sec-butoxy group, tert-butoxy group, n-pentyl group Oxy group, isopentyloxy group, sec-pentyloxy group, tert-pentyloxy group, neopentyloxy group, n-hexyloxy group, isohexyloxy group, sec-hexyloxy group, tert-hexyloxy group, neo Examples include a hexyloxy group, a cyclopropoxy group, a cyclopentyloxy group, and a cyclohexyloxy group
  • Examples of the aryloxy group of the substituted or unsubstituted aryloxy group represented by R 7 "to R 1G " usually include those having 6 to 10 carbon atoms, and specific examples thereof include phenyloxy group and naphthoxy group. Etc.
  • the alkylthio group of a substituted or unsubstituted alkylthio group represented by R 7 " ⁇ R 1G", are those in which an oxygen atom in the alkoxy group is substituted with a sulfur atom, a linear, branched or Any of cyclic ones having 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms may be mentioned.
  • methylthio group ethylthio group, n-propylthio group, isopropyl Thio group, n-butylthio group, isobutylthio group, sec-butylthio group, tert-butylthio group, n-pentylthio group, isopentylthio group, sec-pentylthio group, tert-pentylthio group, neopentylthio group, n- Examples include a hexylthio group, an isohexylthio group, a sec-hexylthio group, a tert-hexylthio group, a neohexylthio group, a cyclopropylthio group, a cyclobutylthio group, a cyclopentylthio group, and a cyclohexylthio group.
  • the Ariruchio group substituted or unsubstituted Ariruchio group represented by R 7 " ⁇ R 1G" are those oxygen atoms Ariruokishi group is substituted with a sulfur atom, typically those in the number of 6-10 carbon atoms Specific examples include a phenolthio group and a naphthylthio group.
  • R 7 " ⁇ R 1G " substituted or unsubstituted alkylsulfonyl represented by - alkylsulfonyl Le group - The group, those OH groups of sulfo groups (SO OH) is replaced by an alkyl group
  • Examples thereof include those having 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic, and specifically include, for example, methylsulfol group, ethylsulfol group, n-propylsulfol group.
  • the aryl group of the substituted or unsubstituted aryl group represented by R 7 "to R 1G " includes those in which the OH group of the sulfo group (SOOH) is substituted with an aryl group.
  • Examples thereof include those having 6 to 10 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic, and specifically include, for example, a phenolsulfol group and a naphthylsulfol group. Can be mentioned.
  • Examples of the substituted sulfamoyl group represented by R 7 "to R 1G " include sulfamoyl (-SO
  • N-methylsulfamoyl group N-ethylsulfamoyl group, Nn-propylsulfamoyl group, N-isopropylsulfamoyl group, Nn, and the like.
  • N-butylsulfamoyl, N-tert-butylsulfamoyl, N-n-hexylsulfamoyl, N-cyclohexylsulfamoyl, N-methylethyl sulfamoyl, N-dicyclohexylsulf Examples include N-alkylsulfamoyl groups such as a famoyl group, for example, N-arylsulfamoyl groups such as an N-phenylsulfamoyl group and an N-diphenylsulfamoyl group.
  • the substituted ureido group represented by R ⁇ R 10 "includes a hydrogen atom of the ureido group (one NHCONH).
  • Examples include those in which 1 to 3 atoms are substituted, for example, the general formulas [4] to [7]
  • R 14 to R 16 each independently represents a halogen atom, an alkyl group, a sulfoamide group, a carboamide group, a sulfo group, a carboxyl group, a phospho group, a hydroxyl group, or an amino group.] And the groups shown.
  • the halogen atom represented by R 14 to R 16 for example fluorine atom, chlorine atom, bromine atom, and an iodine atom.
  • the sulfoamido group (one NHSO R) represented by R 14 to R 16 is a hydrogen atom of an amino group.
  • alkyl sulfol group alkyl sulfoamido group
  • aryl sulfoamido group aryl sulfoamido group
  • the alkylsulfamido group may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the arylsulfamide group usually include those having 6 to 10 carbon atoms, and specific examples include a phenylsulfamide group and a naphthylsulfamide group.
  • Examples of the carboamide group (one NHCOR) represented by R 14 to R 16 include those in which a hydrogen atom of an amino group is substituted with an acyl group.
  • Examples of the acyl group include those derived from aliphatic carboxylic acids and those derived from aromatic carboxylic acids.
  • the carboamido group derived from the aliphatic carboxylic acid may be linear, branched or cyclic, and may have a double bond in the chain, usually 2 to 20 carbon atoms, preferably Includes those having 2 to 15 carbon atoms, more preferably 2 to 10 carbon atoms, and more preferably 2 to 6 carbon atoms.
  • acetylamide group propiolamido group, butyrylamide group, isobutyrylamide group, valerylamide group, Isovalerylamide group, bivaloylamide group, hexanolamide group, heptanoylamide group, otatanylamide group, decanolamide group, lauroylamide group, myristoylamide group, normitoylamide group, stearoylamide group, icosa
  • Examples include a neuroamido group, an allyloylamide group, a methacryloylamide group, a crotonolamide group, and an oleoylamide group. I can get lost.
  • Examples of the carboamido group derived from an aromatic carboxylic acid usually include those having 7 to 15 carbon atoms, preferably 7 to L1, specifically, for example, a benzoylamide group, a naphthoylamide group, an antoylamide group. Etc.
  • Examples of the substituted amino group represented by R 7 "to R 1C) " include those in which 1 to 2 hydrogen atoms of an amino group are substituted with substituents.
  • substituents include alkyl groups. , Alkoxycarbonyl group, acyl group, sulfo group and the like.
  • alkyl group exemplified as the substituent of the substituted amino group examples include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic. Specifically, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n-pentyl group, isopentyl group, sec- Pentyl group, tert-pentyl group, neopentyl group, n-hexyl group, isohexyl group, sec-hexyl group, tert-hexyl group, neohexyl group, n-heptyl group, isoheptyl group, se c-heptyl group, tert-heptyl group, neohepty
  • alkoxycarbo yl group mentioned as the substituent of the substituted amino group include those having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic.
  • Examples of the acyl group exemplified as the substituent of the substituted amino group include those derived from aliphatic carboxylic acids and those derived from aromatic carboxylic acids.
  • the acyl group derived from the aliphatic carboxylic acid may be linear, branched or cyclic, and may have a double bond in the chain, usually having 2 to 20 carbon atoms, Preferred are those having 2 to 15 carbon atoms, more preferably 2 to 10 carbon atoms, still more preferably 2 to 6 carbon atoms. Specific examples include acetyl group, propionyl group, butyryl group, isobutyryl group, valeryl group, isovaleryl group.
  • Bivaloyl group hexanoyl group, heptanoyl group, otatanyl group, decanoyl group, lauroyl group, myristoyl group, noremitoyl group, stearoyl group, icosanoyl group, attaroyl group, methacryloyl group, crotonoyl group, oleoyl group and the like.
  • Examples of the acyl group derived from the aromatic carboxylic acid usually include those having 7 to 15 carbon atoms, preferably 7 to L1, and specific examples include a benzoyl group, a naphthoyl group, an antoyl group, and the like. Is mentioned.
  • the halogen atom represented by R 7 " ⁇ R 1C>" for example, a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
  • the aromatic heterocyclic group is, for example, a 5-membered ring or a 6-membered ring, and includes 1 to 3 hetero atoms such as nitrogen atoms, oxygen atoms, sulfur atoms, etc. as isomeric atoms, etc.
  • furyl group pyrrolyl group, indolyl group, prill group, quinolyl group, pyridyl group, pyrazyl group, pyrimidyl group, oxazolyl group, imidazolyl group, thiazolyl group, and biral group.
  • furyl group pyrrolyl group, indolyl group, prill group, quinolyl group, pyridyl group, pyrazyl group, pyrimidyl group, oxazolyl group, imidazolyl group, thiazolyl group, and biral group.
  • R 7 "to R 1G " in the general formulas [51] and [55] to [58] include " ⁇ ! ⁇ 1
  • a sulfonic acid-derived group for example, a sulfo group, on (sulfonate), its alkali metal salts, organic ammonium - ⁇ beam salts and the preferred tool in ⁇ , e.g. sulfo group, a sulfonate, an alkali metal salt (e.g. sodium salt) are particularly more preferred instrument, R 8 "Is a group represented by the general formula [3] is preferable.
  • the alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group represented by R 11 ′′ is linear, branched or cyclic. Any of those usually having 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 10 carbon atoms can be mentioned.
  • the alkenyl group of the substituted or unsubstituted alkenyl group represented by R 11 "usually has 2 to 6 carbon atoms, preferably 2 linear, branched or cyclic. Specifically, for example, a bur group, a allyl group, a 1-probe group, an iso-probe group, a 3-butyl group, a 2-butyl group, a 1-butur group, 1 , 3-butagel group, 4-pentale group, 3-pentale group, 2-pentale group, 1-pentale group, 1,3-pentagel group, 2,4-pentager group -L group, 1,1-dimethyl-2-propylene group, 1-ethyl-2-propylene group, 1,2-dimethyl-1-propylene group, 1-methyl-1- Butyl, 5-hexyl, 4-hexyl, 3-hexyl, 2-hexyl, 1-hexyl, 1-cyclopropyl , 2-cyclopentyl group, 2,4-cyclopen
  • the alkyl group of the substituted or unsubstituted alkynyl group represented by R 11 "usually includes those having 2 to 6 carbon atoms, preferably 2 to 4 carbon atoms. 2-propyl group, 3-butyl group, 1-methyl-2-propyl group, 4-pentyl group, 2-methyl group
  • the aryl group of the substituted or unsubstituted aryl group represented by R 11 "usually has 6 carbon atoms.
  • Examples of the substituent of the substituted alkyl group, the substituted alkenyl group, the substituted alkyl group, or the substituted aryl group represented by R 11 "include a neurogen atom, a sulfoamide group, a carboamide group, a sulfo group, and a carboxyl group. , A phospho group, a hydroxyl group, an amino group, etc.
  • Specific examples of the halogen atom, sulfoamide group, and carboamide group are halogens represented by R 14 to R 16 in the general formulas [14] to [17]. Examples thereof are the same as those of the atom, sulfoamide group and carboamide group.
  • R 11 unsubstituted alkyl groups are preferred, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, n-pentyl group, n-hexyl group Etc. are more preferable.
  • R ⁇ represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, an alkenyl group, or an aryl group.
  • the divalent group represented by T in the general formulas [55] to [58] includes, for example, the general formula [60]
  • R 18 and R 19 each independently - O-group, - S- group, - COO- group or the general formula [52] - represents a group represented by [54], R 2 Is the following general formula [70]-[72]
  • R 51 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, alkenyl group or aryl group, and R 5 is the same as defined above
  • a hydrogen atom a general formula A group represented by [2]
  • T and T each independently represent an alkylene group
  • p is 1 to 20 Represents an integer.
  • substituted or unsubstituted Aruke represented by R 51 - The group, linear, any branched or cyclic form Yogu usually 2 to 10 carbon atoms, preferably those having 2 to 6 Specific examples include a butyl group, a aryl group, a 1-probe group, an iso-probe group, a 3-butyl group, a 2-butyl group, a 1-butur group, and a 1,3-butadiene group.
  • Examples of the substituted or unsubstituted aryl group represented by R 51 usually include those having 6 to 10 carbon atoms, and specific examples thereof include a phenyl group and a naphthyl group.
  • substituted alkyl group represented by R 51 is a substituent of the substituted alkenyl group or a substituted Ariru group, for example an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, a halogen atom, sulfonamide group, Karuboa bromide group, phospho group ( Phosphate group), a group represented by the above general formula [2], a group represented by the above general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, a formyl group, and the like.
  • a substituted Ariru group for example an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, a halogen atom, sulfonamide group, Karuboa bromide group, phospho group ( Phosphate group), a group represented by the above general formula [2], a group represented by the above general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, a formyl group, and the
  • the alkyl group having 1 to 10 carbon atoms exemplified as the substituent is usually 1 to 10, preferably 1 to 6 carbon atoms, which may be linear, branched or cyclic.
  • the alkylene group represented by T and T is linear or branched.
  • It may be branched, but is preferably a straight chain, usually having 1 to 6 carbon atoms.
  • straight chain alkylene groups are preferred, but ethylene groups, pentamethylene groups, etc. are preferred. More preferred ,.
  • p is usually an integer of 1 to 20, preferably an integer of 1 to 10, more preferably an integer of 1 to 6.
  • At least one of p R 2Gs is represented by the general formulas [70] to [72], a group represented by the general formula [2], a group represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, Among them, a thiol group or a formyl group is preferable, and a group represented by the general formula [2] and a group represented by the general formula [71] are more preferable.
  • Examples are the same as the alkylene groups represented by ⁇ and ⁇ .
  • amino group, hydroxyl group, thiol group or formyl group the group represented by the general formula [2] or the group represented by the general formula [3] is preferable.
  • the group represented by the general formula [3] (sulfo group and the like) contained in the compound of the present invention increases water solubility, suppresses fluorescence quenching due to association between the dye molecules, and increases fluorescence intensity.
  • the compound of the present invention that is preferably introduced in order to increase the amount is usually contained in an amount of 1 to 4, preferably 2 to 4.
  • the group represented by the general formula [2] (carboxyl group and the like) contained in the compound of the present invention is a group capable of binding to the labeling substance (for example, a reactive group such as a succinimide group and norbornene group). ) Can be easily introduced, the compound of the present invention usually contains 1 to 3, preferably 1 to 2.
  • a divalent group that is, a divalent group represented by T in the general formulas [55] to [58] contained in at least one general formula [2 ], A group represented by the general formula [3], an amino group, a hydroxyl group, a thiol group or a formyl group (hereinafter sometimes abbreviated as “the reactive group of the present invention”).
  • the reactive group of the present invention When present in ⁇ ! ⁇ 11 ", those present as the reactive basic force 1 " ⁇ !
  • ⁇ 11 "of the present invention that is, the reactive group is directly bonded to the pyrazole skeleton or indole skeleton)
  • any of those contained as a substituent in RR 11 ′′ may be used, but when the reactive group is contained in R 11 ′′, it is preferably contained as a substituent.
  • R 8 ′′ b represents a group represented by the general formula [3], R 11 ′ represents an alkyl group, and n represents an integer of 0 to 3.
  • 1 ′ and R 2 ′′ b , R 4 ′′ b and R 5 ′′ b , R 1 ′ and R 6 ′′ b and R 2 ′′ b and R 4 ′′ b are —O— group, —S— group , —COO— group and the basic force represented by the general formulas [52] to [54]
  • a divalent group is formed by the selected group and a substituted or unsubstituted alkylene group, and! ⁇ , ⁇ !
  • At least one of the divalent groups has a group represented by the general formula [2] or a group represented by the general formula [3]. ] Are preferable.
  • alkyl group of the alkyl group which may be present as a substituent the general formula [51] Examples of the alkyl group of the substituted or unsubstituted alkyl group which may have an amide bond represented by “ ⁇ ” in FIG.
  • R 3a and R 4a each independently has a group represented by the general formula [2] or [3] as a substituent, and may be V or an alkyl group. Preferred is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] or [3] as a substituent, and the other is an alkyl group.
  • R 5a and R 6a each independently has a group represented by the general formula [2] or [3] as a substituent, and may be V or an alkyl group. Preferred is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] or [3] as a substituent, and the other is an alkyl group.
  • R 3 ′′, R 5 ′′ and R 11 ′′ represented by the general formula [55] are —CH groups, and R 7 ′′, R 9 ′′ and R 1G ′′ are hydrogen atoms.
  • R 8 is SO
  • R 3 ′′, R 6 ′′ and R 11 ′′ in the general formula [56] are —CH groups, and R 7 ′′, R 9 ′′ and R 1G ′′ are hydrogen atoms.
  • Preferable specific examples of the compound represented by the general formula [57] include, for example, those shown in Tables 17 to 20 below.
  • R 3 ′′, R 5 ′′ and R 11 ′′ in the general formula [57] are —CH groups, and R 7 ′′, R 9 ′′ and R 1C> ′′ are hydrogen. Is an atom, R 8 "— S
  • Preferable specific examples of the compound represented by the general formula [58] include, for example, those shown in Tables 21 to 24 below.
  • R 3 ′′, R 5 ′′ and R 11 ′′ in the general formula [58] are —CH groups, and R 7 ′′, R 9 ′′ and R 1C> ′′ are hydrogen. Is an atom, R 8 "— S
  • the reactive group of the present invention contained in the compound of the present invention is bound to, for example, a labeling substance or the like
  • the functional group contained in the labeling substance (For example, amino group, carboxyl group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.) (hereinafter sometimes abbreviated as “functional group of the target substance”).
  • a group (hereinafter sometimes abbreviated as “reactive group of the present invention”) may be further introduced.
  • reaction active group of the present invention that is, the reaction group of the present invention in which a group that enhances the binding property with the functional group of the labeled substance is introduced is also the reaction of the present invention. Included in sex groups.
  • Such a reactive group is not particularly limited as long as it can be bonded to the functional group of the labeling substance, and includes all those usually used in this field.
  • the reactive group of the present invention is not particularly limited as long as it can be bonded to the functional group of the substance to be labeled, but includes all those usually used in this field, for example, an amino group and That activates the reactivity of thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for amino groups”), those that activate the reactivity with thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for thiol groups”).
  • reactive groups for hydroxyl groups which activates reactivity with hydroxyl groups
  • active groups for the formyl group Examples thereof that activate the reactivity with the formyl group (hereinafter referred to as “reactive groups for the formyl group”) and the like.
  • Preferred examples of reactive groups for amino groups include, for example, succinimide group, sulphosuccinimide group, norbornene group, 4-trophenoxy group, carboxylic acid anhydride-derived groups (for example, acetooxycarboromethyl group, propio group).
  • halosulfoalkyl group having 1 to 3 carbon atoms for example, fluorosulfomethyl group, fluorosulfo-ruethyl group, fluorosulfo-norepropinore group, chlorosunorephoninoremethinore group
  • Chlorosnorephoninorechinore group Chlorosnorephoninorepropinole group, Bromosnorephoninoremethinole group, Bromosnolehoninoretinore group, Bromosnorejo Ninorepropinore group, Yodosnorehoninoremethinore group, Yodosnore Honino Lechinor group, Sulphophorol group, etc.
  • halosulfo-aryl groups eg, fluorosulfo-phenol group, chlorosuno
  • the reactive group for the thiol group include, for example, a group derived from a carboxylic acid anhydrate (eg, acetooxycarboromethyl group, propio-oxycarboxyl- ethyl group, benzoyloxybenzyl group, etc.), maleimide group , Sulfomaleimide group, Ru-nornolide groups (eg F, Cl, Br, I etc.), ⁇ -nologenos (eg F, Cl, Br, I etc.) acetamide groups, C 1-3 halocarboalkyl groups (eg fluorocarbo- Rumethyl group, fluorocarboruethyl group, fluorocarboropropyl group, black carbomethyl group, black carboruethyl group, black carbopropyl group, bromocarboromethyl group, bromocarboluethyl group, bromocarboropropyl group , Iodine force
  • the reactive group for the hydroxyl group include, for example, a group derived from a carboxylic acid anhydride (for example, acetooxycarboromethyl group, propio-oxycarboxyl- ethyl group, benzoyloxybenzyl group, etc.), carbon number 1 ⁇ 3 halosulfoalkyl groups (e.g., fluorosulfomethyl group, fluorosulfo-ruethyl group, fluorosulfol-nolepropinole group, chlorosunolehoninoremethinole group, chlorosnoreho-noretinole group, chlorosunolehoninorepropinore group, bromosenorephoninoleme group) Nore group, bromosulphonino retinole group, bromosulphopropyl group, sodosulfo-methyl group, sodosulfo-rue
  • Preferred examples of the reactive group for the formyl group include a hydrazide group and the like. Can be mentioned.
  • the group in which the reactive group is introduced into the reactive group of the present invention include, for example, a COOSu group, a -CONH (CH) Ma group and the like.
  • a COOSu group a -CONH (CH) Ma group and the like.
  • a compound containing a reactive group is also included in the compound of the present invention represented by the general formula [51].
  • the reactive group of the present invention as described above is further introduced into the reactive group of the present invention in the compound of the present invention.
  • examples thereof include all of the compounds contained therein, for example, those containing the reactive group in the divalent group represented by T in the general formulas [55] to [58]. It is preferable that the reactive group of the present invention represented by R 2 is introduced with the reactive group.
  • Preferable specific examples of the compound represented by the general formula [55] containing the reactive group of the present invention include, for example, those shown in Table 25 below.
  • R 3 ′′, R 5 ′′ and R 11 ′′ represented by the general formula [55] are —CH groups, and R 7 ′′, R 9 ′′ and R 1C> ′′ are hydrogen.
  • R 8 is a SO Na group.
  • R 8 ′′ is —SO Na group.
  • R 8 ′′ is —SO Na group.
  • R 8 ′′ is —SO Na group.
  • the compound represented by the general formula [51] can be synthesized, for example, by the following method.
  • the compound represented by the general formula [61] is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] as a substituent in which R 1 "is a substituent among the compounds represented by the general formula [51] (that is, , - ⁇ -COOR 12
  • R 2 is an alkyl group having a group represented by the general formula [2] as a substituent (ie, T -C
  • the compound represented by the general formula [65] is a compound represented by the general formula [63] among the compounds represented by the general formula [55] (wherein R 18 and R 19 are CONH This is the case.
  • the compound represented by the general formula [61] (the compound having a reactive group of the present invention) is converted into a compound represented by the general formula [62] or disuccimidyl carbonate (DSC) (—general formula [61] with a 20-fold molar equivalent) and a basic catalyst (eg, ⁇ -ethyldiisopropylamine, pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylaniline, piperidine, 4-dimethylaminoviridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] unde-7-en, organic amines such as tri- ⁇ -ptylamine)
  • an appropriate solvent eg, amides such as ⁇ , ⁇ -dimethylformamide (DMF), ⁇ , ⁇ -dimethylacetamide (DMA), acetoamide N-methylpyrrolidone, etc.
  • the compound represented by the general formula [63] and the compound represented by the general formula [64] are converted into a basic catalyst (for example, an alkali metal bicarbonate such as sodium bicarbonate or potassium bicarbonate, such as N- Tildiisopropylamine, pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylamine, piperidine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene, 1, 8 -Diazabicyclo [5.4.0] unde force-7 in the presence of 7-ene, organic amines such as tri- ⁇ - butylamine, etc.) amides such as DMF, DMA, acetoamide, N-methylpyrrolidone, etc. , Water, etc.) at 0 to 40 ° C. for 0.1 to 12 hours to obtain the target compound of the general formula [65].
  • a basic catalyst for example, an alkali metal bicarbonate such as sodium bicarbonate or potassium bicarbon
  • the method for introducing the reactive group of the present invention into the reactive group of the present invention is a compound represented by the general formula [55] among the compounds represented by the general formula [51] (that is, in the general formula [51] R 1 ′′ and R 2 ′′ in this case correspond to those forming a divalent group represented by T), and among the compounds represented by the above general formula [65], P is 5 and 5 R one of the two will be described general formula [2] compound is a group represented by the use (corresponding to a compound represented by the following general formula [66])! was the case with the connexion to the following examples.
  • a compound represented by the general formula [66] (compound having a reactive group of the present invention) is converted into a succinimide reagent such as a compound represented by the general formula [62] (general formula [66] 1 to 10-fold moles of the compound represented by formula (1) and a basic catalyst (for example, N-ethyldiisopropylamine, pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylaniline, piperidine, 4-dimethylaminopyri , Organic amines such as 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] unde force-7-en, tri- ⁇ -ptylamine) Compound represented by the general formula [67] by reacting in an appropriate solvent (for example, amides such as DMF, DMA, acetamide, N-methylpyrrolidone, etc.) at 0-40 ° C for 0.1-12 hours.
  • an appropriate solvent for example,
  • the compound represented by the general formula [67] is, for example, a male compound such as a compound represented by the general formula [68].
  • Imido reagent (1 to 10-fold mol with respect to the compound represented by the general formula [67]) and basic catalyst (for example, triethylamine, N-ethyldiisopropylamine, pyridine, ⁇ , ⁇ -dimethylamine, pipette Lysine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] unde force-7-ene, tri- ⁇ -butylamine, etc.
  • basic catalyst for example, triethylamine, N-ethyldiisopropylamine, pyridine, ⁇ , ⁇ -dimethylamine, pipette Lysine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene
  • the succinimide reagent according to the present invention is not limited to the compound represented by the above general formula [62], and is a force that includes all of those usually used in this field. Specifically, for example, di (N- Succinimidyl) carbonate (DSC), 2-succinimide-1,1,3,3-tetramethyluorium tetrafluoroborate (TSTU), 2- (5-norbornene-2,3-dicarboximide) -1, 1 , 3,3-tetramethyl mouth-mu tetrafluoroborate (TNTU) and the like.
  • DSC di (N- Succinimidyl) carbonate
  • TSTU 2-succinimide-1,1,3,3-tetramethyluorium tetrafluoroborate
  • TNTU 3,3-tetramethyl mouth-mu tetrafluoroborate
  • the method of introducing the reactive group of the present invention other than the reactive group as described above can be obtained by appropriately synthesizing according to the above using the corresponding raw material.
  • R 17 represents an alkyl group or an aryl group, and “ ⁇ ”, “ 1 ”, n, and other definitions are the same as defined above, provided that R 1 ”, R 3 ” and R 4 ”] At least one of them contains a group represented by the general formula [2] as a substituent, and at least one of R 2 ", R 5 " and R 6 "is represented by the general formula [2]. Containing groups.
  • the alkyl group represented by R 17 is usually linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 Specific examples include, for example, a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, and an n-butyl group.
  • the aryl group represented by R 17 usually includes those having 6 to 10 carbon atoms, and specific examples include a phenyl group and a naphthyl group.
  • an indolenine compound represented by the general formula [70] indolenine skeleton portion
  • acid anhydrides represented by general formula [72] [1 to 20 moles relative to the compound represented by general formula [70]] (eg acetic anhydride, propionic anhydride, butyric anhydride, benzoic anhydride) Etc.) in a solvent (for example, carboxylic acids such as acetic acid, propionic acid, butyric acid, etc., such as acetonitrile, propio-tolyl, and -tolyls such as n- butyorac-tolyl).
  • a solvent for example, carboxylic acids such as acetic acid, propionic acid, butyric acid, etc., such as acetonitrile, propio-tolyl, and -tolyls such as n- buty
  • the compound represented by the general formula [73] and the compound represented by the general formula [74] (virazole skeleton moiety) [0.5 to 10 times the compound represented by the general formula [73] Mole, preferably 1 to 5 moles) of a basic catalyst (e.g., pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylaniline, piperidine, pyridine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.
  • a basic catalyst e.g., pyridine, triethylamine, ⁇ , ⁇ -dimethylaniline, piperidine, pyridine, 4-dimethylaminopyridine, 1,5-diazabicyclo [4.3.
  • triamine-metalamine hydrides such as sodium hydride, such as tri- ⁇ -butylamine, (E.g., basic alkali metal compounds such as ⁇ -butyl lithium) in the presence of dehydrating condensing agents (e.g., inorganic dehydrating agents such as concentrated sulfuric acid, phosphorous pentoxide, anhydrous zinc chloride, such as dicyclohexyl carpositimide, di Sopropyl carbodiimide, 1-ethyl-3- (3-dimethyla Roh carbodiimide) hydrochloric acid Carbodiimides such as salts, acetic anhydride, polyphosphoric acid, carbodiimidazole, P-toluenesulfuryl chloride, etc.) and if necessary a solvent (for example, ⁇ , ⁇ -dimethylformamide (DMF), ⁇ , Amides
  • a solvent for example, ⁇ , ⁇ -dimethylformamide (DMF), ⁇ , Amides
  • examples of the halogen atom represented by X include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
  • the ketone compound represented by the general formula [76] and the compound represented by the general formula [77] are mixed in a suitable solvent (for example, carboxylic acids such as acetic acid and propionic acid, such as ethylene glycol, 1,4 -Alcohols such as butanediol), the compound represented by the general formula [78] is obtained by reacting at 40 to 250 ° C. for 0.1 to 24 hours (for example, Journal of Organic Chemistry, 42 (14) , 2474 ⁇ 80, I9 77 etc.).
  • a suitable solvent for example, carboxylic acids such as acetic acid and propionic acid, such as ethylene glycol, 1,4 -Alcohols such as butanediol
  • the compound represented by the general formula [78] is combined with the halogenated compound represented by the general formula [79]) or the tosylate compound represented by the general formula [80] in an appropriate solvent (for example, Black mouth Halogenated aromatic hydrocarbons such as benzene, 1,2-dichlorobenzene, halogenated hydrocarbons such as 1,2-dichloroethane, for example, aromatic hydrocarbons such as toluene, xylene and benzene, such as DMA, Indolenine compound represented by the general formula [70] is obtained by dissolving in DMF, acetoamide, amides such as N-methylpyrrolidone, etc.) and reacting at 40-200 ° C for 1-24 hours (for example, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1. 947-952. 198 4 etc.).
  • an appropriate solvent for example, Black mouth Halogenated aromatic hydrocarbons such as benzene, 1,2-dichlorobenzene, halogenated hydrocarbons
  • Ketone compounds represented by the general formula [76] are commercially available products (eg 3-methyl-2-butanone, 3-methyl-2-pentanone, 3-methyl-2-hexanone, 1-cyclohexane).
  • Propylethanone, 1-cyclopropylethanone, etc. may be used, or those appropriately synthesized by conventional methods may be used.
  • 2-methylacetoacetate and a leaving group for example, a halogen atom
  • a compound having a tosylate group, etc.) a basic catalyst for example, metal hydrides such as sodium hydride and potassium hydride, for example, alkali metal carbonates such as lithium carbonate, sodium carbonate and potassium carbonate, such as sodium methoxide, Alkali metal alkoxides such as sodium ethoxide and potassium tert-butoxide, for example, basic alkali metal compounds such as n-butyllithium, such as lithium diisopropyl
  • amides such as DMF, DMA, acetonitrile, N-methylpyrrolidone, alcohols such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, and ethylene glycol.
  • ethers such as tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol monoethyl ether, and sulfoxides such as dimethyl sulfoxide
  • a method of decarboxylating the solution using an acid catalyst see, for example, Modern Synthetic Reactions, California, 2nd ed., P. 492, 510, 756 (1972)).
  • the diketone compound represented by the general formula [81] and hydrazine are mixed in a suitable solvent (eg, alcohols such as methanolol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, ethylene glycol, etc.).
  • a suitable solvent eg, alcohols such as methanolol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, ethylene glycol, etc.
  • 4H-pyrazole compound represented by the general formula [82] is obtained (for example, Adv. Heterocycle. Chem. Vol. 34. 53-78. 1983).
  • the 4H-pyrazole ich compound represented by the general formula [82] is combined with the halogenated compound represented by the general formula [83] or the tosylate compound represented by the general formula [84] and an appropriate solvent.
  • halogenated aromatic hydrocarbons such as black benzene and 1,2-dichlorobenzene
  • halogenated hydrocarbons such as 1,2-dichloroethane
  • aromatic carbon such as toluene, xylene
  • benzene N-alkylation reaction in hydrogen (for example, amides such as DMF, DMA, acetamide, N-methylpyrrolidone, etc.) at 80 to 140 ° C. for 1 to 12 hours to obtain a compound represented by the general formula [74] Obtained (for example, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1. 947 ⁇ 952. 1984, etc.).
  • the diketone compound represented by the general formula [81] may be a commercially available product (such as 3,3-dimethyl-2,4-pentanedione) or may be appropriately synthesized by a conventional method. Specifically, for example, 3-methyl-2,4-pentanedione or 4-acetyl-5-oxohexanoic acid ethyl ester has a leaving group (for example, a halogen atom, a tosylate group, etc.).
  • the compound is converted into a basic catalyst (e.g., metal hydrides such as sodium hydride and potassium hydride, e.g. alkali metal carbonates such as lithium carbonate, sodium carbonate, potassium carbonate, e.g.
  • amides such as DMF, DMA, acetamide, N-methylpyrrolidone, e.g.
  • methanol ethanol
  • ethanol In alcohols such as propanol, isopropanol, butanol, ethylene glycol, etc., ethers such as tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol monoethyl ether, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, etc.) at 80 to 100 ° C.
  • ethers such as tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol monoethyl ether, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, etc.
  • Examples include a method of reacting for 1 to 24 hours (for example, Modern Synthic Reactions, California, 2nd ed., P. 492, 510, 756 (1972)).
  • the compound [51] of the present invention thus obtained is expected to be used as a fluorescent labeling substance such as a nucleic acid extraction method and an immunoassay method.
  • Examples of the labeled compound of the present invention include those in which the compound of the present invention (labeling substance) and the labeling substance are bound directly or indirectly.
  • the labeling compound is contained in the compound of the present invention.
  • the group represented by the general formula [2] (carboxyl group, etc.), the group represented by the general formula [3] (sulfo group, etc.), an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group is directly or indirectly attached to the labeling substance.
  • the group represented by the general formula [2] (carboxyl group, etc.)
  • the group represented by the general formula [3] sulfo group, etc.
  • an amino group, a hydroxyl group, a thiol group, or a formyl group is directly or indirectly attached to the labeling substance.
  • a group represented by the general formula [2] (carboxyl group, etc.), a group represented by the general formula [3] (sulfo group, etc.), an amino group,
  • the hydroxyl group, thiol group, or formyl group (hereinafter sometimes abbreviated as “reactive group of the present invention”) is usually represented by “ ⁇ ! ⁇ 11 ” or R 1 ”and R in the general formula [1].
  • a divalent group represented by T in the general formulas [7] to [10] for example, a divalent group represented by the general formula [36]). More preferably, those contained in R 2 in the general formula [36] are preferred.
  • Examples of the labeling substance to be labeled with the compound of the present invention include, for example, all the substances usually used as labeling substances in this field. Specifically, for example, piotin, avidin, streptavidin, amino acid, protein , Peptides, enzyme substrates, hormones, lymphokines, metabolites, receptors, ligands, agonists, antagonists, antigens, antigens, pentenes, dendrimers, lectins, toxins, carbohydrates such as sugars such as fructose and polysaccharides, nuclei Reoside (eg, ribonucleoside, deoxyribonucleoside, etc.), nucleotide (eg, ribonucleotide, deoxyribonucleotide, etc.), nucleic acid (oligonucleotide, polynucleotide) [eg, deoxyribonucleic acid (DNA), ribonucleic acid (RNA), etc.
  • Nucleic acid derivatives eg, DNA fragments, RNA fragments, etc.
  • natural drugs viruses, viral components, yeast components, blood cells, blood cell components, biological cells, non-cellular blood components, bacteria, butterfly components, natural And synthetic lipid sac, synthetic and natural drugs, poisons, environmental pollutants, polymers, polymer particles, glass particles, glass surface materials, plastic particles, plastic surface materials, polymer films, conductors and semiconductors, and antibodies to these and Degradation products (e.g., Fab, Fab ', F (ab'), etc.).
  • the degradation products are preferred.
  • a nucleoside is also a pentoseka, which is a purine base or pyrimidine base, and a sugar moiety.
  • a ribonucleoside having a sugar moiety of D-ribose for example, a nucleoside having a sugar moiety of D-2-deoxyribose.
  • oxyribonucleosides for example, a ribonucleoside having a sugar moiety of D-ribose, for example, a nucleoside having a sugar moiety of D-2-deoxyribose.
  • a nucleotide consists of a purine base or pyrimidine base, a pentose that is a sugar moiety, and a phosphate.
  • a ribonucleotide in which the sugar moiety is D-ribose for example, a sugar moiety that is D-2-deoxyribose. And deoxyribonucleotides.
  • nucleoside and nucleotide include, for example, nucleoside antibiotics whose basic base moiety is not a purine structure or pyrimidine structure, those whose structures are modified, and sugar moieties that are D- Those that are not ribose or deoxy-D-ribose, those that have been modified, phosphate moieties (one OPO-one) are other elements [eg sulfur atoms (
  • the nucleic acid is a linear oligo or polynucleotide in which the nucleotide is the basic unit and the phosphate is linked between each nucleotide by a diester bond between the 3 'and 5' carbons of the sugar,
  • Specific examples include ribonucleic acid (RNA) whose sugar moiety is ribose, for example, deoxyribonucleic acid (DNA) whose sugar moiety is D-2-deoxyribose.
  • nucleotides, nucleic acids, and derived nucleic acids may be single-stranded or may have double-stranded or more nucleic acid chain strength. Further, these may be appropriately modified with appropriate ones as long as the object of the present invention can be achieved! /. [0419]
  • the compound of the present invention and the labeled substance are directly bound to each other, for example, the compound of the present invention
  • the reactive group of the present invention binds to a functional group (for example, amino group, carboxy group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.) in the labeling substance, for example, by ionic bond, covalent bond, etc.
  • a functional group for example, amino group, carboxy group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.
  • the compound of the present invention and the labeling substance are indirectly bound when, for example, the reactive group of the present invention binds to the functional group in the labeling substance via a linker (eg, ionic bond, covalent bond). It is meant to be combined).
  • linkers used in indirect binding include all those usually used in this field.
  • a method for labeling a target substance using the compound [51] of the present invention may be appropriately selected according to a method known per se.
  • the reactive group of the present invention that is, the general formula [51] 1 ” ⁇ ! ⁇ 11 ”, or R 1 ”and R 2 ”, R 4 ”and R 5 ”, R 1 ”and R 6 ”, and R 2 ”and R 4 ”.
  • a group represented by the general formula [2] (carboxyl group, etc.), a group represented by the general formula [3] (sulfo group, etc.), an amino group, a hydroxyl group, Thiol group or formyl group) and functional groups in the labeling substance (for example, amino group, carboxyl group, thiol group, hydroxyl group, formyl group, etc.) (hereinafter abbreviated as “functional group of labeling substance”)
  • functional group of labeling substance May be directly bonded by, for example, ionic bonding, covalent bonding, etc., or may be bonded through a linker introduced into a part of the labeling substance. This can be done easily.
  • a method for labeling nucleotides in addition to the labeling method using the above chemical reaction, a method using an enzyme can also be easily used for labeling. Enzymes include all those usually used in this field.
  • the reactive group of the present invention may be further introduced with a group (reactive active group of the present invention) that enhances the reactivity with the functional group of the substance to be labeled.
  • Specific examples of the method for labeling the labeling substance using the compound of the present invention include, for example, (1) after further introducing the reactive group of the present invention into the reactive group of the present invention, Labeling by binding to the functional group of the substance (hereinafter sometimes simply referred to as “functional group”) (2) a method in which the reactive group of the present invention is introduced into the functional group of the substance to be labeled, followed by binding to the reactive group of the present invention, and (3) the reactivity of the present invention.
  • the reactive group of the present invention is not particularly limited as long as it can be bonded to the functional group of the labeling substance, but includes all those usually used in this field, such as an amino group and the like. That activates the reactivity of thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for amino groups”), those that activate the reactivity with thiol groups (hereinafter referred to as “reactive groups for thiol groups”).
  • reactive groups for hydroxyl groups those that activate the reactivity with formyl groups
  • reactive groups for formyl groups those that activate the reactivity with formyl groups
  • a compound containing a reactive group is also included in the compound of the present invention represented by the general formula [1].
  • the reactive group of the present invention is a group represented by the general formula [2] (hereinafter abbreviated as "carboxyl group of the present invention”).
  • carboxyl group of the present invention As a preferred method, it is preferable to bind to an amino group, a thiol group or a hydroxyl group which is a labeling substance or a functional group of a linker introduced into the labeling substance (hereinafter sometimes simply referred to as “labeled substance”).
  • labeling substance hereinafter sometimes simply referred to as “labeled substance”.
  • a condensing reagent such as N-hydroxysuccinimide and carpositimide
  • carboxychlorine by reacting a salt of the carboxyl group of the present invention with carboxy chloride.
  • the reactive group of the present invention is a group represented by the general formula [3] (hereinafter abbreviated as "sulfo group of the present invention"), and when this is bound to the labeling substance,
  • the preferred method for binding to the amino group, imidazole group, thiol group, or phenol group of the labeling substance include (i) reacting the sulfo group of the present invention with chlorosulfonic acid and reacting the sulfochloride. And a method of reacting it with an amino group, an imidazole group, a thiol group, or a phenol group of a substance to be labeled.
  • the reactive group of the present invention is an amino group (hereinafter abbreviated as "amino group of the present invention") and this is bound to the labeling substance, the labeling substance or its linker
  • amino group of the present invention N-hydroxysuccinimide, carboxydiimide, and other condensation reagents may be used as a preferred method for bonding to the functional group force lpoxyl group, amino group, phenol group or thiol group.
  • a method for binding an amino group of the invention to an amino group of a labeling substance or its linker, GO A phosgene is allowed to act on the amino group of the present invention to form an isocyanate, followed by binding to an amino group of the labeling substance or its linker
  • Iii a method in which the amino group of the present invention is reacted with dartaldehyde, and this is reacted with an amino group or phenol group of a labeled substance or its linker
  • the linker is derived from sugar or glycoprotein, this is reacted with periodic acid in advance, then reacted with the amino group of the present invention, and further reduced with sodium borohydride or the like
  • V A bifunctional spacer having an amino group of the present invention having a maleimide group (for example, m-maleimidobenzoyl N-hydroxysuccinimide ester) or a pyridyldithiosulfide group.
  • a spacer for example, 4-succinimidyloxycarboxyl-a- (2-pyridyldithio) toluene, etc.
  • Examples include a method of reacting with a thiol group of the linker.
  • the reactive group of the present invention is a hydroxyl group (hereinafter abbreviated as "hydroxyl group of the present invention") and this is bound to the labeling substance, the labeling substance or the functional group of the linker is used.
  • a preferred method for bonding with an amino group, a thiol group, or a hydroxyl group is, for example, (0.
  • a method of reacting with the amino group of the substance or its linker, GO acetylation of the hydroxyl group of the present invention, bromination, bromine-iodine substitution with sodium iodide, and then the amino group of the target substance or its linker examples thereof include a method of reacting with a thiol group or a hydroxyl group, and (m) a method of reacting the hydroxyl group of the present invention with cyanogen bromide and activating it, and then reacting with a labeled substance or an amino group of its linker.
  • the reactive group of the present invention is a thiol group (hereinafter abbreviated as "the thiol group of the present invention") and binds to the labeling substance
  • the labeling substance or its linker is used.
  • a 0-labeled substance or an amino group of its linker is preferably a bifunctional spacer having a maleimide group
  • the reactive group of the present invention is a formyl group (hereinafter abbreviated as "formyl group of the present invention").
  • the labeling substance or its linker A preferred method for bonding with an amino group or the like that is a functional group is, for example, (0 After reacting directly the amino group of the labeled substance or its linker with the formyl group of the present invention, boron hydride. The method of reducing with sodium etc. is mentioned.
  • Examples of the polyvalent reactive linker reagent include all those usually used in this field. Specifically, for example, one of the reactive group of the present invention and the functional group of the labeling substance is a key.
  • a divalent reagent in the case of a mino group and the other is a thiol group (hereinafter referred to as “amino group and thiol group” It is abbreviated as “group divalent reagent”. )
  • group divalent reagent A bivalent reagent when one of the reactive group and the functional group is an amino group and the other is a group represented by the general formula [2] (carboxyl group, etc.) (hereinafter referred to as “amino group and carboxyl group”).
  • a divalent reagent in the case where one of the reactive group and the functional group is a thiol group and the other is a hydroxyl group (hereinafter referred to as “the divalent reagent of a thiol group and a hydroxyl group”).
  • the divalent reagent of a thiol group and a hydroxyl group Abbreviated as “reagent”.)
  • a bivalent reagent when the reactive group and the functional group are both amino groups hereinafter abbreviated as “bivalent reagent of amino group and amino group”
  • a bivalent reagent in which both the reactive group and the functional group are thiol groups (hereinafter abbreviated as “bivalent reagent of a thiol group and a thiol group”).
  • bivalent reagent of an amino group and a thiol group include, for example, N- (a-maleimidoacetoxy) succinimide, ⁇ - [ ⁇ -maleimidobutyryloxy] succinimide, ⁇ - (6-maleimide force Pyloxy) succinimide, ⁇ - (8-maleimidocapryoxy) succinimide, ⁇ - (11-maleimidoundecanoxy) succinimide, m-maleimidobenzoyl- ⁇ -hydroxysuccinimide, succinimidyl 4- [p-maleimidophenol -L] butyrate, succinimidyl 4- [N-maleimidomethyl] cyclohexane-1-carboxylate, succinimidyl-6- [ ⁇ -maleimidopropionamido] hexanoate, ⁇ -succinimidyl 3- (2-pyridyldithio) propionate Etc.
  • divalent reagent of an amino group and a carboxyl group include, for example, 3-[(2-aminoethyl) dithio] propionic acid hydrochloride, 1-ethyl-3- [3-dimethylamino Propyl] carbodiimide hydrochloride and the like.
  • divalent reagent of a thiol group and a hydroxyl group include, for example, ⁇ - [ ⁇ -maleimidophenyl] isocyanate.
  • divalent reagent of an amino group and an amino group include, for example, methyl ⁇ -succinimidino adipate, disuccinimidino gnorelate, disuccicin imidinole suberate, ethylene glycol bis [succinimidyls] Succinate], dithiobis [succinimidyl propionate], disuccinimidinore tartarate, bis [2- (succinimidoxycanoloxy) ethyl] sulfone, 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene
  • methyl ⁇ -succinimidino adipate disuccinimidino gnorelate
  • disuccicin imidinole suberate ethylene glycol bis [succinimidyls] Succinate]
  • dithiobis succinimidyl propionate
  • disuccinimidinore tartarate bis [2- (succinimidoxycanoloxy) ethy
  • thiol group and the divalent reagent of the thiol group include, for example, bis-maleimide ester. 1,4-bis-maleimidobutane, bis-maleimidohexane, 1,4 bis-maleimidyl-2,3-dihydroxybutane, dithio-bis-maleimidoethane, 1,6-hexane-bis-vinylsulfonate, Examples include 1,8-bis-maleimidodiethylene glycol, 1,11-bis-maleimidotriethylene glycol, 1,4-di- [3 ′-(2′-pyridyldithio) -propionamido] butane.
  • the reaction of the present invention can be carried out by directly binding a reactive group in the compound of the present invention.
  • a group activated by a reactive group may be bonded, and it may be bonded to a group represented by the general formula [2] or a group into which a reactive group is introduced (active ester group). In particular, it is more preferable to combine with an active ester group.
  • nucleotide derivative a linker having a functional group such as an amino group, a carboxyl group, or a thiol group on the base or hydroxyl group of the nucleotide.
  • a linker having a functional group such as an amino group, a carboxyl group, or a thiol group on the base or hydroxyl group of the nucleotide.
  • the linker when it is bonded to a carboxyl group in a nucleotide derivative, it may be bonded to an amino group which is a reactive group in the compound of the present invention. When binding to the thiol group in the nucleotide derivative, it may be combined with the maleimide group (reactive group) in the compound of the present invention.
  • the linker used any linker usually used in this field may be used, and the linker may include an ester bond, an ether bond, or a Z and amide bond.
  • linker all those usually used in this field can be used. Specific examples include a linker having a structure represented by the following general formula (A).
  • E represents —CH ⁇ CH or —C ⁇ C—
  • X and Y each independently represent an alkylene group
  • T10 represents O or NH—CO—.
  • the alkylene group represented by X may be linear, branched or cyclic, and is preferably linear. Examples thereof include 1 to 10, preferably 1 to 6, more preferably 1 to 3. Specifically, for example, a methylene group, an ethylene group, a trimethylene group, a tetramethylene group, a pentamethylene group, a hexamethylene group, Linear alkylene groups such as heptamethylene, otatamethylene, nonamethylene, decamethylene, such as ethylidene, propylene, isopropylidene, 1-methyltrimethylene, 2-methyltrimethylene, 1,1-dimethyl Ethylene group, 1,2-dimethylethylene group, ethylethylene group, 1-methyltetramethylene group, U-dimethyltrimethylene group, 2,2-dimethyltrimethylene group, 2-ethyltrimethylene group, 1-methylpentamethylene group, 1-methylhexamethylene group, 1-methylh
  • the alkylene group represented by Y is linear, branched or! ⁇ may be cyclic, preferably linear, and usually has 1 to: LO, preferably 2 to 8, more preferably 2 to 6 carbon atoms.
  • Linear alkylene group such as ethylidene group, propylene group, isopropylidene group such as ethylidene group, propylene group, isopropylidene group, ⁇ ethylene group, trimethylene group, tetramethylene group, pentamethylene group, hexamethylene group, heptamethylene group, otatamethylene group, nonamethylene group, decamethylene group Group, 1-methyltrimethylene group, 2-methyltrimethylene group, 1,1-dimethylethylene group, 1,2-dimethylethylene group, ethylethylene group, 1-methyltetramethylene group, 1,1-dimethyltrimethylene group, 2,2-dimethyltrimethylene group, 2-ethyltrimethylene group, 1-methylpentamethylene group,
  • the labeled nucleotide according to the present invention includes a nucleotide residue labeled directly or indirectly through a linker or the like with the compound [51] of the present invention. And those containing a nucleotide residue represented by [74].
  • the compound represented by the general formula [51 '] includes a divalent group formed by R 1 "and R 2 " among the compounds represented by the general formula [51]. (Wherein R 2 is a group represented by the general formula [73]).
  • the nucleotide residue represented by Q1 in the general formula [74] includes, for example, a ribonucleotide residue, a 2 'deoxyribonucleotide residue, a 3' deoxyribonucleotide residue, a 5 'deoxy Examples include ribonucleotide residues, 2 ′, 3′-dideoxyribonucleotide residues, and the like.
  • nucleotide residues include those represented by the general formulas (0, (ii), (v), (vi), (vii), (viii), (xii) and (xiii) Or a purine nucleotide residue represented by general formula (iii), (iv), Examples include pyrimidine nucleotide residues represented by (X) and (xi).
  • Z 3 represents a bond bonded to VI
  • R 25 and R 26 each independently represent H, OH or O-
  • R 27 represents one PO H-, -PO H, 1 POH, 1 POH or
  • the salt includes, for example, alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt, alkaline earth metal salts such as barium salt, such as ammonium salt, triethylammonium salt, and pyridine salt. And organic amine salts.
  • alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt
  • alkaline earth metal salts such as barium salt, such as ammonium salt, triethylammonium salt, and pyridine salt.
  • organic amine salts organic amine salts.
  • one terminal force of the linker is the 5-position of the pyrimidine ring for the pyrimidine nucleotide residue among the nucleotide residues represented by Q1 described above (in the case of general formula (iii), Gv)] Alternatively, it binds to the phosphorus atom of the phosphate residue (in the case of general formulas (x) and (xi)), and for the purine nucleotide residue, the 7-position of the 7-daza (7-daza) purine ring [ In the case of general formula (in the case of 0, (ii), (v), (vi)) or the phosphoric acid residue phosphorus atom of the purine ring (or 7-dazapurine ring) [general formula (vii), (viii), (Ix), (xii), and (xiii)].
  • the other end of the linker is a carbonyl group of the compound derivative (labeling substance) of the present invention represented by W2 [general formula [51 ']] [T in the general formula [51'].
  • W2 general formula [51 ']] [T in the general formula [51'].
  • any of those capable of binding to the nucleotide residue represented by Q1 can be used, and specific examples include a linker having a structure represented by the following general formula (A).
  • nucleotide residue represented by the general formula [74] is represented by the following general formula [7
  • E1 represents —CH ⁇ CH or —C ⁇ C—
  • XI and Y1 each independently represent an alkylene group
  • T11 represents O or NH—CO—
  • Q1 And W2 are the same as above.
  • the alkylene group represented by XI is the same as the alkylene group represented by X described above, and specific examples and preferred examples thereof are also the same.
  • the alkylene group represented by Y1 is the same as the alkylene group represented by Y described above, and specific examples and preferred examples thereof are also the same. It is like.
  • r is an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, more preferably 1 to 4, and s is an integer of 1 to 10, preferably 2 to 8, more preferably 2 to 4.
  • Ql, W2, El and Ti l are the same as above.
  • the compound derivative (labeling substance) of the present invention represented by W2 [general formula [51 ']] is derived from the compound [51] of the present invention as described above, and these are preferred. Specific examples are also the same as those of the compound [51] of the present invention as described above.
  • labeled mononucleotides to which the compound [51] (labeling substance) according to the present invention is bound are necessary.
  • These labeled nucleotides are known per se. It can be prepared by a method (for example, the labeling method described above).
  • W, W2 and Su represents a succinimide group.
  • W2 is the same as above.
  • T10 as a part of the linker represented by the general formula (a) as described above is NH—CO, for example, it can be prepared as follows.
  • the 5′-triphosphate derivative can be synthesized, for example, according to the following synthetic route.
  • this compound (E-X-T10-Y-NH-) represented by the above general formula (A), this compound is represented by E-X-NH- when T10 is NH-CO.
  • E is —CH ⁇ CH and X-force methylene group.
  • this compound is a CO—Y—NH— in the case where the linker represented by the general formula (A) (—E—X—T10—Y—NH—) and T10 is one NH—CO.
  • This compound is a compound corresponding to Q1-E1-X1-T11-Y1-NH in the general formula [74] (Q1-E1-X1-T11 Y1-NH-W2), wherein ⁇ 31 is 2 '—Deoxycytidine, E ⁇ S CH ⁇ CH—XI force S methylene group, T11 is one NH—CO—Y1 is a pentamethylene group.
  • Q1 is 2'-deoxycytidine
  • XI is a methylene group
  • T11 is one NH—CO—
  • Y1 is a pentamethylene group
  • W2 is the following compound (14) or (25).
  • labeled nucleotides other than those described above can also be appropriately synthesized in accordance with the above using corresponding raw materials.
  • the novel pyrazole cyanine dye of the present invention (particularly the compound [51] of the present invention) has a structure in which a pyrazole skeleton and an indole skeleton are bonded by a polymethine chain and further crosslinked. Because it has fluorescence characteristics in a shorter wavelength region than conventional light sources, it is possible to use a light source in a short wavelength region with high energy efficiency, and this can be used as a labeling agent (labeling substance) to detect a measurement object In this case, it is possible to detect a measurement object with high detection sensitivity without problems such as low water-solubility that conventional cyanine dye derivatives have, or deterioration in detection sensitivity due to quenching caused by association between dyes. It becomes possible to do.
  • Dissolve compound (32) (10 mg, 0.019 mmol) in DMF (lml), add disuccimidyl carbonate (DSC) (113 mg ⁇ 0.37 mmol) and pyridine (120 ⁇ 1) at 40 ° C. Stirring was performed for 4 hours. After completion of the reaction, ethyl acetate (15 ml) was added to crystallize and wash to obtain Compound (42) (10 mg, yield 79%).
  • DSC disuccimidyl carbonate
  • pyridine 120 ⁇ 1

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Description

明 細 書
ピラゾール系シァニン色素
技術分野
[0001] 本発明は、新規なピラゾール系シァニン色素に関する。
背景技術
[0002] 近年、生化学検査や遺伝子検査の分野では、測定対象物の検出に対して高い検 出感度が求められており、標識剤 (標識物質)である蛍光色素の位置づけが非常に 重要なファクターとなってきて ヽる。
[0003] 蛍光色素としては、種々の目的に応じて、例えばシァニン色素誘導体、クマリン色 素誘導体、フルォレセイン色素誘導体、ローダミン色素誘導体等が用いられるが、中 でも 600應以上の近赤外領域に蛍光特性を有する色素として、シァニン色素誘導体 が汎用されている。
[0004] シァニン色素誘導体としては、例えば Cy3、 Cy5〔GEヘルスケアバイオサイエンス 社（旧社名アマシャムバイオサイエンス社)製〕等が先導的な蛍光試薬として知られて おり、また、検出装置の測光仕様としても Cy5の蛍光特性力 Sスタンダードとして用いら れている現状にある。
[0005] このような状況下、 Cy3と Cy5の 2波長を励起波長の基準として、シァニン色素誘導 体の開発が行われている。 Cy3及び Cy5は、 2つのインドレニン骨格をポリメチン鎖 で結合した構造 (インドレニン系シァニン色素）を有しており、この構造を基本骨格と して、例えば水溶性の改善、会合状態の回避等による高感度化を目的とした各種シ ァニン色素誘導体が開発されている (例えば特許文献 1、特許文献 2、特許文献 3等 参照)。
[0006] また、他のシァニン色素誘導体として、ァザインドレニン骨格とピラゾール骨格がポ リメチン鎖で結合された構造を有するものが開発されている（例えば特許文献 4、特 許文献 5等参照)。
[0007] 更には、例えばポリメチン鎖等で結合された 2つのインドレニン骨格が更にスぺーサ 一等で架橋された構造を有するものが開発されて!ヽる (例えば特許文献 6、特許文献 7、特許文献 8等)。
[0008] 一方、光学系に使用されるレーザー光源は、光磁気ディスクの大容量化を実現す るため、益々短波長化、高出力化されている。また、温度ドリフト幅の非常に小さい安 定した半導体レーザー等の入手も可能となってきている。
[0009] このような状況下、従来の光学特性よりもエネルギー的に効率的な短波長領域に 於いて、従来の色素よりも高感度な蛍光特性を示す新規なシァニン色素誘導体の開 発が望まれている。
[0010] 特許文献 1 :米国特許第 5, 268, 486号公報
特許文献 2 :米国特許第 5, 486, 616号公報
特許文献 3 :米国特許第 5, 569, 766号公報
特許文献 4：特開 2003— 034696号公報
特許文献 5 :特開 2003— 034697号公報
特許文献 6:米国特許第 5, 571, 388号公報
特許文献 7:米国特許第 5, 800, 995号公報
特許文献 8：国際公開 WO01Z02374号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0011] 本発明は、上記した如き状況に鑑みなされたもので、従来の光学系よりも短波長領 域で、高感度な性能を有し、且つ高い水溶性を示すピラゾール骨格とインドール骨 格を有する新規なシァニン色素誘導体を提供することを課題とする。
課題を解決するための手段
[0012] 本発明は、下記（1)〜（3)の発明である。
(1)一般式 [50]で示される化合物又はその塩。
Figure imgf000004_0001
[0013] 〔式中、 R 〜R6，は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7'〜R1G'は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
[0014] (式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
[0015] (式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11 ' は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。尚、 R1'と R2'、 R4'と '、 R1'と R6'及び R2，と R4，の何れかが、—O—基、—S—基、—COO—基及び一般式 [52]〜[54]
I [52] Υ, ？ [53] \ί ？ [54]
— Ν— — C-N— — S-N—
I I
Ο
[0016] (式中、 R5は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成していてもよぐ当該 2価の基を形成する場合は、 R 〜RU '、並びに R1，と R2，、 R4，と R5，、 R1，と R6，及び R2，と R4，の何れかで形成される 2価の基のうち 少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸 基、チオール基又はホルミル基を有し、当該 2価の基を形成しない場合は、 '〜!^1 のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基 、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
(2)上記（1)の化合物と被標識物質を直接又は間接的に結合させた標識化合物。
(3)上記（1)の化合物を直接又は間接的に被標識物質と結合させることを特徴とす る、被標識物質の標識方法。 発明の効果
[0017] 本発明のピラゾール系シァニン色素は、ピラゾール骨格とインドール骨格がポリメチ ン鎖で結合された構造を有して 、ることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特 性を有するため、エネルギー効率の高い短波長領域の光源が使用可能となる。また これを標識剤 (標識物質)として用いて測定対象物を検出する場合、従来のシァニン 色素誘導体が有していた例えば水溶性が低い、色素同士の会合に起因した消光に より検出感度が低下する等の問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で 検出することが可能となる。
発明を実施するための最良の形態
[0018] 一般式 [50]で示される化合物のうち、 R1，と R2，、 R4'と ，、 R1，と R6，及び R2'と R4 ，の何れかが、 O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示され る基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成して 、な ヽ 化合物としては、例えば下記一般式 [1]で示されるものが挙げられる。
Figure imgf000006_0001
[0019] 〔式中、 I^〜R。は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換ァ ルキル基を表し、 R7〜R1C)は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ -ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキルチオ 基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバモイル基 、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
[0020] (式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
[0021] (式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11は 水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキ-ル基若しくはァ リール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、！^〜 1のうち少なくとも 1つは一般 式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホ ルミル基を有する。〕
[0022] 一般式 [50]で示される化合物のうち、 R1，と R2，、 R4'と ，、 R1，と R6，及び R2， tR4 ，の何れかが、 O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示され る基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成する化合 物としては、例えば下記一般式 [51]で示されるものが挙げられる。
Figure imgf000007_0001
[0023] 〔式中、 "〜 "は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7"〜R1G"は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
[0024] (式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
[0025] (式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11" は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及 び R2"と R4"の何れかが、—O 基、—S 基、—COO 基及び一般式 [52]〜[54 ] [52] W ？ [53] ^ ？ [54]
— N— C-N— — S-N—
I I
O
[0026] (式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成する。ま 、 R1"^11",並びに R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される 基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する o ]
[0027] 一般式 [50]で示される化合物を、より具体的な化合物である一般式 [1]及び [51] で示される化合物の詳細を以下に説明する。
[0028] 従って、一般式 [50]に於ける R 〜RU'の定義等は、以下に述べる一般式 [1]に 於ける！^〜 1及び一般式 [51]で示される化合物中の "〜!^11"の定義等と実質 同じである。
[0029] 1.本発明の化合物 [1]
1 - 1.本発明の化合物 [1]
一般式 [50]で示される化合物のうち、 R1，と R2，、 R4'と ，、 R1，と R6，及び R2， R4
，の何れかが、 O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示され る基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成して 、な ヽ 化合物としては、例えば下記一般式 [1]で示されるものが挙げられる。
Figure imgf000008_0001
〔式中、！^〜 は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換ァ ルキル基を表し、 R7〜R1Gは夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ -ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキルチオ 基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバモイル基 、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
[0031] (式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
[0032] (式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11は 水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキ-ル基若しくはァ リール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、！^〜 1のうち少なくとも 1つは一般 式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホ ルミル基を有する。〕
[0033] 一般式 [1]に於いて、 〜 で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は 無置換アルキル基としては、置換又は無置換アルキル基のアルキル鎖中にアミド結 合を通常 1〜10個、好ましくは 1〜3個、より好ましくは 1個含有しているものが挙げら れる。
[0034] ！^〜 で示される、アミド結合を有して 、てもよ 、、置換又は無置換アルキル基の アルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10 、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プ 口ピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル 基、 n-ペンチル基、イソペンチル基、 sec-ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチ ル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキ シル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオ ヘプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネ ォォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec-ノ-ル基、 tert-ノ-ル基、ネオノ-ル 基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデシル基、シク 口プロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロへプチ ル基、シクロォクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられ、中でも、例 えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、 n-ペンチル基等の直鎖状のアルキル基が 好ましい。
[0035] ！^〜 で示される、アミド結合を有して 、てもよ 、、置換アルキル基の置換基として は、当該アミド結合を有していてもよいアルキル基中の水素原子の一部が置換基で 置換されているものが挙げられ、当該置換基としては、例えば一般式 [2]で示される 基、一般式 [3]で示される基等が挙げられる。
[0036] 一般式 [2]及び [3]に於いて、 R12及び R13で示されるアルカリ金属原子としては、 例えばリチウム原子、ナトリウム原子、カリウム原子、ルビジウム原子等が挙げられ、中 でもナトリウム原子又はカリウム原子が好ましぐ就中ナトリウム原子がより好ましい。
[0037] R12及び R13で示される有機アンモ-ゥムイオンとしては、例えばトリアルキルアンモ -ゥムイオン等が挙げられる。当該トリアルキルアンモ-ゥムイオンとしては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10のもの、好ましくは 1〜6のもの が挙げられ、具体的には、例えばトリメチルアンモ -ゥムイオン、トリェチルアンモ-ゥ ムイオン、トリ n-プロピルアンモ-ゥムイオン、トリイソプロピルアンモ-ゥムイオン、トリ ブチルアンモ -ゥムイオン、トリペンチルアンモ -ゥムイオン、トリへキシルアンモ-ゥ ムイオン、トリへプチルアンモ -ゥムイオン、トリオクチルアンモ -ゥムイオン、トリノニル アンモ-ゥムイオン、トリデシルアンモ -ゥムイオン、トリシクロプロピルアンモ-ゥムィ オン、トリシクロプチルアンモ -ゥムイオン、トリシクロペンチルアンモ -ゥムイオン、トリ シクロへキシルアンモ -ゥムイオン、トリシクロへプチルアンモ -ゥムイオン、トリシクロ ォクチルアンモ -ゥムイオン、トリシクロノ-ルアンモ -ゥムイオン、トリシクロデシルァ ンモ -ゥムイオン等が挙げられ、中でもトリメチルアンモ -ゥムイオン又はトリェチルァ ンモ -ゥムイオンが好ましぐ就中、トリェチルアンモ -ゥムイオンがより好ましい。
[0038] 一般式 [2]に於いて、 R12で示される炭素数 1〜： LOのアルキル基としては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6、より好まし くは 1〜3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基 、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n-ペン チノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペンチノレ基、ネオペンチノレ基、 n-へ キシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n- ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基
、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基
、 n-ノニル基、イソノニル基、 sec-ノニル基、 tert-ノニル基、イソノニル基、 n-デシル基
、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シ クロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチ ル基、シクロノ-ル基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0039] 一般式 [2]で示される基の好ましい具体例としては、例えばカルボキシル基（一 CO OH)、そのァ-オン〔カルボキシレート（— COO_)〕、そのアルカリ金属塩（例えばリ チウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモ-ゥム塩、その有機 アンモ-ゥム塩（例えばトリメチルアンモ -ゥム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、トリプロ ピルアンモ-ゥム塩等)等が挙げられる。
[0040] 一般式 [3]で示される基の好ましい具体例としては、例えばスルホ基（一 SO H)、
3 そのァ-オン〔スルホネート（一 SO―)〕、そのアルカリ金属塩 (例えばリチウム塩、ナト
3
リウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモ-ゥム塩、その有機アンモ-ゥム 塩（例えばトリメチルアンモ -ゥム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、トリプロピルアンモ- ゥム塩等)等が挙げられる。
[0041] ！^〜 で示される、アミド結合を有して 、てもよ 、、置換アルキル基の置換基 (即ち 、一般式 [2]で示される基又は一般式 [3]で示される基）は、当該アルキル基の末端 の水素原子と置換されて 、るものが好まし 、。
[0042] R1及び R2の好まし!/、具体例としては、例えばカルボキシェチル基、カルボキシプロ ピル基、カルボキシブチル基、カルボキシペンチル基、これらのァ-オン（カルボキシ レート）、これらのアルカリ金属塩の基 (例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、これらの 有機アンモ-ゥム塩の基（例えばトリメチルアンモ -ゥム塩、トリェチルアンモ-ゥム塩 、アンモニゥム塩等)等の一般式 [2]で示される基を置換基として有する炭素数 1〜5 のアルキル基、例えばスルホェチル基、スルホプロピル基、スルホブチル基、スルホ ペンチル基、これらのァ-オン (スルホネート）、これらのアルカリ金属塩の基（例えば ナトリウム塩、カリウム塩等）、これらの有機アンモ-ゥム塩の基 (例えばトリメチルアン モ -ゥム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、アンモ-ゥム塩等）等の一般式 [3]で示され る基を置換基として有する炭素数 1〜5のアルキル基等が挙げられる。
[0043] また、 R3と R4の好まし 、組み合わせ及び R5と R6の好まし 、組み合わせとしては、何 れか一方 (即ち、 R3と R4の何れか一方及び R5と R6の何れか一方）が炭素数 1〜6の アルキル基（例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基 、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n_ペンチル基、イソペンチル基、 sec -ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 s ec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基等）であり、他方が、例えばカルボ キシェチル基、カルボキシプロピル基、カルボキシブチル基、カルボキシペンチル基 、これらのァ-オン（カルボキシレート）、これらのアルカリ金属塩の基（例えばナトリウ ム塩、カリウム塩等）、これらのアンモ-ゥム塩の基若しくは有機アンモ-ゥム塩の基（ 例えばトリメチルアンモ -ゥム塩、トリェチルアンモ-ゥム塩等）等の一般式 [2]で示さ れる基を置換基として有する炭素数 1〜5のアルキル基、例えばスルホェチル基、ス ルホプロピル基、スルホブチル基、スルホペンチル基、これらのァ-オン（スルホネー ト）、これらのアルカリ金属塩の基 (例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、有機アンモ- ゥム塩の基（例えばトリメチルアンモ -ゥム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、アンモ-ゥ ム塩等)等の一般式 [3]で示される基を置換基として有する炭素数 1〜5のアルキル 基であるものが好ましい。
[0044] 一般式 [1]に於いて、 R7〜R1Gで示される置換又は無置換のアルキル基のアルキ ル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜6、好まし くは 1〜3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基 、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n-ペン チノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペンチノレ基、ネオペンチノレ基、 n-へ キシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、シ クロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基等が挙げられ る。
[0045] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のァルケ-ル基のァルケ-ル基としては、直鎖 状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 2〜6、好ましくは 2〜4のものが 挙げられ、具体的には、例えばビュル基、ァリル基、 1-プロべ-ル基、イソプロべ-ル 基、 3-ブテュル基、 2-ブテュル基、 1-ブテュル基、 1,3-ブタジェ-ル基、 4-ペンテ- ル基、 3-ペンテ-ル基、 2-ペンテ-ル基、 1-ペンテ-ル基、 1,3-ペンタジェ-ル基、 2 ,4-ペンタジェ-ル基、 1,1-ジメチル -2-プロぺ-ル基、 1-ェチル -2-プロぺ-ル基、 1, 2-ジメチル- 1-プロべ-ル基、 1-メチル -1-ブテュル基、 5-へキセ-ル基、 4-へキセ- ル基、 3-へキセ-ル基、 2-へキセ-ル基、 1-へキセ-ル基、 1-シクロプロぺ-ル基、 2-シクロペンテ-ル基、 2,4-シクロペンタンジェ -ル基、 1-シクロへキセ-ル基、 2-シ クロへキセ-ル基、 3-シクロへキセ -ル基等が挙げられる。
[0046] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のアルキ-ル基のアルキ-ル基としては、通常 炭素数 2〜6、好ましくは 2〜4のものが挙げられ、具体的には、例えばェチニル基、 2 -プロピ-ル基、 3-プチ-ル基、 1-メチル -2-プロピ-ル基、 4-ペンチ-ル基、 2-メチ ル -4-ペンチニル基、 5-へキシュル基等が挙げられる。
[0047] R7〜R1C)で示される置換又は無置換のァリール基のァリール基としては、通常炭素 数 6〜10のものが挙げられ、具体的には、例えばフエ-ル基、ナフチル基等が挙げ られる。
[0048] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のアルコキシ基のアルコキシ基としては、直鎖 状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜6、好ましくは 1〜3のものが 挙げられ、具体的には、例えばメトキシ基、エトキシ基、 n-プロポキシ基、イソプロポキ シ基、 n-ブトキシ基、イソブトキシ基、 sec-ブトキシ基、 tert-ブトキシ基、 n-ペンチルォ キシ基、イソペンチルォキシ基、 sec-ペンチルォキシ基、 tert-ペンチルォキシ基、ネ ォペンチルォキシ基、 n-へキシルォキシ基、イソへキシルォキシ基、 sec-へキシルォ キシ基、 tert-へキシルォキシ基、ネオへキシルォキシ基、シクロプロポキシ基、シクロ ペンチルォキシ基、シクロへキシルォキシ基等が挙げられる。
[0049] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のァリールォキシ基のァリールォキシ基として は、通常炭素数 6〜： LOのものが挙げられ、具体的には、例えばフエニルォキシ基、ナ フトキシ基等が挙げられる。
[0050] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のアルキルチオ基のアルキルチオ基としては、 アルコキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、直鎖状、分枝状或い は環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜6、好ましくは 1〜3のものが挙げられ、具体 的には、例えばメチルチオ基、ェチルチオ基、 n-プロピルチオ基、イソプロピルチオ 基、 n-ブチルチオ基、イソブチルチオ基、 sec-ブチルチオ基、 tert-ブチルチオ基、 n- ペンチルチオ基、イソペンチルチオ基、 sec-ペンチルチオ基、 tert-ペンチルチオ基、 ネオペンチルチオ基、 n-へキシルチオ基、イソへキシルチオ基、 sec-へキシルチオ 基、 tert-へキシルチオ基、ネオへキシルチオ基、シクロプロピルチオ基、シクロプチ ルチオ基、シクロペンチルチオ基、シクロへキシルチオ基等が挙げられる。
[0051] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のァリールチオ基のァリールチオ基としては、 ァリールォキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、通常炭素数 6〜1 0のものが挙げられ、具体的には、例えばフ 二ルチオ基、ナフチルチオ基等が挙げ られる。
[0052] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のアルキルスルホ-ル基のアルキルスルホ二 ル基としては、スルホ基（一 SO OH)の OH基がアルキル基で置換されたものが挙
2
げられ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜6のものが挙げ られ、具体的には、例えばメチルスルホ -ル基、ェチルスルホ -ル基、 n-プロピルス ルホニル基、イソプロピルスルホ-ル基、 n-ブチルスルホ -ル基、イソブチルスルホ- ル基、 sec-ブチルスルホ -ル基、 tert-ブチルスルホ -ル基、 n-ペンチルスルホ -ル 基、イソペンチルスルホ -ル基、 sec-ペンチルスルホ -ル基、 tert-ペンチルスルホ- ル基、ネオペンチルスルホ -ル基、 n-へキシルスルホ -ル基、イソへキシルスルホ- ル基、 sec-へキシルスルホ -ル基、 tert-へキシルスルホ -ル基、ネオへキシルスルホ ニル基、シクロプロピルスルホ-ル基、シクロプチルスルホ -ル基、シクロペンチルス ルホニル基、シクロへキシルスルホ -ル基等が挙げられる。
[0053] R7〜R1Gで示される置換又は無置換のァリールスルホ-ル基のァリールスルホ-ル 基としては、スルホ基（ SO OH)の OH基がァリール基で置換されたものが挙げ
2
られ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 6〜10のものが挙げら れ、具体的には、例えばフエ-ルスルホ-ル基、ナフチルスルホ-ル基等が挙げられ る。
[0054] R7〜R1C)で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原 子、ヨウ素原子等が挙げられる。 [0055] R7〜R1Gで示される芳香族へテロ環チォ基としては、チオール基（― SH)の水素原 子が芳香族へテロ環基で置換されたものである。当該芳香族へテロ環基としては、例 えば 5員環又は 6員環であり、異性原子として 1〜3個の例えば窒素原子、酸素原子 、硫黄原子等のへテロ原子を含んでいるもの等が好ましぐ具体的には、例えばフリ ル基、ピロリル基、インドリル基、プリニル基、キノリル基、ピリジル基、ビラジル基、ピリ ミジル基、ォキサゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、ビラニル基等が挙げられる
[0056] R7〜R1Gで示される置換力ルバモイル基としては、例えば力ルバモイル（一 CONH
2
)基の水素原子 1〜2個が炭素数 1〜6のアルキル基又は炭素数 6〜10のァリール基 で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えば N-メチルカルバモイル基、 N-ェ チルカルバモイル基、 N-n-プロピル力ルバモイル基、 N-イソプロピル力ルバモイル基 、 N-n-ブチルカルバモイル基、 N-tert-ブチルカルバモイル基、 N- n-へキシルカル バモイル基、 N-シクロへキシルカルバモイル基、 N-メチルェチルカルバモイル基、 N- ジシクロへキシルカルバモイル基等の N-アルキル力ルバモイル基、例えば N-フエ- ルカルバモイル基、 N-ジフエ-ルカルバモイル基等の N-ァリール力ルバモイル基等 が挙げられる。
[0057] R7〜R1Gで示される置換スルファモイル基としては、例えばスルファモイル（― SO
2
NH )基の水素原子 1〜2個が炭素数 1〜6のアルキル基又は炭素数 6〜10のァリー
2
ル基で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えば N-メチルスルファモイル基、 N-ェチルスルファモイル基、 N-n-プロピルスルファモイル基、 N-イソプロピルスルファ モイル基、 N-n-ブチルスルファモイル基、 N-tert-ブチルスルファモイル基、 N- n-へ キシルスルファモイル基、 N-シクロへキシルスルファモイル基、 N-メチルェチルスルフ ァモイル基、 N-ジシクロへキシルスルファモイル基等の N-アルキルスルファモイル基 、例えば N-フエ-ルスルファモイル基、 N-ジフエ-ルスルファモイル基等の N-ァリー ルスルファモイル基等が挙げられる。
[0058] R7〜R1Gで示される置換ウレイド基としては、ウレイド基（一 NHCONH )の水素原
2
子 1〜3個が置換されたものが挙げられ、例えば下記式 [4]〜 [7] H O H O
— N-C— NHR14 [4] — N— C-NR 4R15 [6]
R16 0 R16 O
— N— C-NHR14 [5] — N— C-NR14R15 [7]
[0059] (式中、 R14〜R16は夫々独立して、ハロゲン原子、アルキル基、スルホアミド基、カル ボアミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基又はアミノ基を表す 。）で示される基が挙げられる。
[0060] 一般式 [4]〜 [7]に於いて、 R14〜R16で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ 素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
[0061] R14〜R16で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよ ぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体的には、例えばメチ ル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブ チノレ基、 tert-ブチノレ基、 n-ペンチノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペン チル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へ キシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert- ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert -ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec-ノ-ル基、 tert-ノ-ル 基、イソノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデ シル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シ クロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0062] R14〜R16で示されるスルホアミド基（一 NHSO R)としては、ァミノ基の水素原子が
2
アルキルスルホ-ル基で置換されたもの（アルキルスルホアミド基）又はァリールスル ホ-ル基で置換されたもの（ァリールスルホアミド基）が挙げられる。
[0063] 当該アルキルスルホアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ 通常炭素数 1〜10のもの、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体的には、例えばメ チルスルホアミド基、ェチルスルホアミド基、 n-プロピルスルホアミド基、イソプロピルス ルホアミド基、 n-ブチルスルホアミド基、イソブチルスルホアミド基、 sec-ブチルスルホ アミド基、 tert-ブチルスルホアミド基、 n-ペンチルスルホアミド基、イソペンチルスルホ アミド基、 sec-ペンチルスルホアミド基、 tert-ペンチルスルホアミド基、ネオペンチル スルホアミド基、 n-へキシルスルホアミド基、イソへキシルスルホアミド基、 sec-へキシ ルスルホアミド基、 tert-へキシルスルホアミド基、ネオへキシルスルホアミド基、シクロ プロピルスルホアミド基、シクロプチルスルホアミド基、シクロペンチルスルホアミド基、 シクロへキシルスルホアミド基、 n-へプチルスルホアミド基、イソへプチルスルホアミド 基、 sec-へプチルスルホアミド基、 tert-へプチルスルホアミド基、ネオへプチルスルホ アミド基、 n-ォクチルスルホアミド基、イソォクチルスルホアミド基、 sec-ォクチルスルホ アミド基、 tert-ォクチルスルホアミド基、ネオォクチルスルホアミド基、 n-ノニルスルホ アミド基、イソノニルスルホアミド基、 sec-ノニルスルホアミド基、 tert-ノニルスルホアミ ド基、イソノニルスルホアミド基、 n-デシルスルホアミド基、イソデシルスルホアミド基、 s ec-デシルスルホアミド基、 tert-デシルスルホアミド基、ネオデシルスルホアミド基、シ クロへプチルスルホアミド基、シクロォクチルスルホアミド基、シクロノ-ルスルホアミド 基、シクロデシルスルホアミド基等挙げられる。
[0064] 当該ァリールスルホアミド基としては、通常炭素数 6〜10のものが挙げられ、具体的 には、例えばフエニルスルホアミド基、ナフチルスルホアミド基等が挙げられる。
[0065] R14〜R16で示されるカルボアミド基（一 NHCOR)としては、ァミノ基の水素原子が ァシル基で置換されたものが挙げられる。当該ァシル基としては、例えば脂肪族カル ボン酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。
[0066] 脂肪族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でも よぐまた更に鎖中に二重結合を有していてもよぐ通常炭素数 2〜20、好ましくは炭 素数 2〜15、より好ましくは 2〜10、更に好ましくは 2〜6のものが挙げられ、具体的 には、例えばァセチルアミド基、プロピオ-ルアミド基、ブチリルアミド基、イソブチリル アミド基、バレリルアミド基、イソバレリルアミド基、ビバロイルアミド基、へキサノィルアミ ド基、ヘプタノィルアミド基、オタタノィルアミド基、デカノィルアミド基、ラウロイルアミド 基、ミリストイルアミド基、ノ ルミトイルアミド基、ステアロイルアミド基、ィコサノィルアミド 基、アタリロイルアミド基、メタクリロイルアミド基、クロトノィルアミド基、ォレオイルアミド 基等が挙げられる。
[0067] 芳香族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、通常炭素数 7〜15、好ましくは 7 〜： L 1のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾィルアミド基、ナフトイルアミド基 、アントイルアミド基等が挙げられる。
[0068] R7〜R1C)で示される置換アミノ基としては、ァミノ基の水素原子 1〜2個が置換基で 置換されたものが挙げられ、これら置換基としては、例えばアルキル基、アルコキシ力 ルポ二ル基、ァシル基、スルホ基等が挙げられる。
[0069] 置換アミノ基の置換基として挙げられるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或 ヽ は環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体 的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、ィ ソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n-ペンチル基、イソペンチル基、 sec-ぺ ンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec— へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 se c-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec- ノニル基、 tert-ノニル基、イソノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 t ert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基 、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シクロデ シル基等が挙げられる。
[0070] 置換アミノ基の置換基として挙げられるアルコキシカルボ-ル基としては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙 げられ、具体的には、例えばメトキシカルボ-ル基、エトキシカルボ-ル基、 n-プロボ キシカルボ-ル基、イソプロポキシカルボ-ル基、 n-ブトキシカルボ-ル基、イソブト キシカルボ-ル基、 sec-ブトキシカルボ-ル基、 tert-ブトキシカルボ-ル基、 n-ペン チルォキシカルボ-ル基、イソペンチルォキシカルボ-ル基、 sec-ペンチルォキシカ ルボニル基、 tert-ペンチルォキシカルボ-ル基、ネオペンチルォキシカルボ-ル基 、 n-へキシルォキシカルボ-ル基、イソへキシルカルボ-ル基、 sec-へキシルォキシ カルボ-ル基、 tert-へキシルォキシカルボ-ル基、ネオへキシルォキシカルボ-ル 基、 n-ヘプチルォキシカルボニル基、イソへプチルォキシカルボニル基、 sec-へプチ ルォキシカルボ-ル基、 tert-ヘプチルォキシカルボ-ル基、ネオへプチルォキシカ ルボニル基、 n-ォクチルォキシカルボ-ル基、イソォクチルォキシカルボ-ル基、 sec -ォクチルォキシカルボ-ル基、 tert-ォクチルォキシカルボ-ル基、ネオォクチルォ キシカルボ-ル基、 n-ノ-ルォキシカルボ-ル基、イソノ-ルォキシカルボ-ル基、 se c-ノ-ルォキシカルボ-ル基、 tert-ノ-ルォキシカルボ-ル基、ネオノ-ルォキシカ ルボニル基、 n-デシルォキシカルボ-ル基、イソデシルォキシカルボ-ル基、 sec-デ シルォキシカルボ-ル基、 tert-デシルォキシカルボ-ル基、ネオデシルォキシカル ボ-ル基、シクロプロポキシカルボ-ル基、シクロブトキシカルボニル基、シクロペン チルォキシカルボ-ル基、シクロへキシルォキシカルボニル基、シクロへプチルォキ シカルボニル基、シクロォクチルォキシカルボ-ル基、シクロノ-ルォキシカルボ-ル 基、シクロデシルォキシカルボ-ル基等が挙げられる。
[0071] 置換アミノ基の置換基として挙げられるァシル基としては、例えば脂肪族カルボン 酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。
[0072] 当該脂肪族カルボン酸由来のァシル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でも よぐまた更に鎖中に二重結合を有していてもよぐ通常炭素数 2〜20、好ましくは炭 素数 2〜15、より好ましくは 2〜10、更に好ましくは 2〜6のものが挙げられ、具体的 には、例えばァセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、 イソバレリル基、ビバロイル基、へキサノィル基、ヘプタノィル基、オタタノィル基、デカ ノィル基、ラウロイル基、ミリストイル基、ノ レミトイル基、ステアロイル基、ィコサノィル 基、アタリロイル基、メタクリロイル基、クロトノィル基、ォレオイル基等が挙げられる。
[0073] 当該芳香族カルボン酸由来のァシル基としては、通常炭素数 7〜15、好ましくは 7 〜： L 1のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾィル基、ナフトイル基、アントイル 基等が挙げられる。
[0074] 一般式 [1]に於 、て、 R7〜R1Gで示される、置換アルキル基、置換ァルケ-ル基、 置換アルキニル基、置換ァリール基、置換アルコキシ基、置換ァリールォキシ基、置 換アルキルチオ基、置換ァリールチオ基、置換アルキルスルホニル基又は置換ァリ 一ルスルホ -ル基の置換基としては、例えばハロゲン原子、スルホアミド基、カルボア ミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基 (リン酸基）、ヒドロキシル基、アミノ基等 が挙げられる。置換基として挙げられる、ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボア ミド基の具体例としては、一般式 [4]〜[7]に於ける R14〜R16で示されるハロゲン原 子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
[0075] R7〜R1Gの好ましい例としては、 R7〜R1G中の 3つが水素原子であり、残りの一つが 一般式 [3]で示されるスルホン酸由来の基であるものが挙げられ、当該スルホン酸由 来の基の中でも、例えばスルホ基、そのァ-オン (スルホネート）、そのアルカリ金属 塩、有機アンモ-ゥム塩等が好ましぐ就中、例えばスルホ基、スルホネート、そのァ ルカリ金属塩 (例えばナトリウム塩等)等がより好ましぐ特に、 R8が一般式 [3]で示さ れる基であるものが好まし!/、。
[0076] 一般式 [1]に於いて、 R11で示される置換又は無置換のアルキル基のアルキル基と しては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは
1〜10のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、 イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n_ペン チノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペンチノレ基、ネオペンチノレ基、 n-へ キシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n- ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基
、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基
、 n-ノニル基、イソノニル基、 sec-ノニル基、 tert-ノニル基、イソノニル基、 n-デシル基
、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シ クロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチ ル基、シクロノ-ル基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0077] R11で示される置換又は無置換のァルケ-ル基のァルケ-ル基としては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 2〜6、好ましくは 2〜4のものが挙げ られ、具体的には、例えばビュル基、ァリル基、 1-プロべ-ル基、イソプロべ-ル基、 3-ブテュル基、 2-ブテュル基、 1-ブテュル基、 1,3-ブタジェ-ル基、 4-ペンテ-ル基 、 3-ペンテ-ル基、 2-ペンテ-ル基、 1-ペンテ-ル基、 1,3-ペンタジェ-ル基、 2,4- ペンタジェ-ル基、 1,1-ジメチル- 2-プロぺ-ル基、 1-ェチル -2-プロぺ-ル基、 1,2- ジメチル- 1-プロぺ-ル基、 1-メチル -1-ブテュル基、 5-へキセ-ル基、 4-へキセ-ル 基、 3-へキセ-ル基、 2-へキセ-ル基、 1-へキセ-ル基、 1-シクロプロぺ-ル基、 2- シクロペンテ-ル基、 2,4-シクロペンタンジェ -ル基、 1-シクロへキセ-ル基、 2-シク 口へキセ -ル基、 3-シクロへキセ -ル基等が挙げられる。
[0078] R11で示される置換又は無置換のアルキ-ル基のアルキ-ル基としては、通常炭素 数 2〜6、好ましくは 2〜4のものが挙げられ、具体的には、例えばェチュル基、 2-プ 口ピ-ル基、 3-ブチュル基、 1-メチル -2-プロピ-ル基、 4-ペンチ-ル基、 2-メチル -4
-ペンチニル基、 5-へキシュル基等が挙げられる。
[0079] R11で示される置換又は無置換のァリール基のァリール基としては、通常炭素数 6
〜10のものが挙げられ、具体的には、例えばフ -ル基、ナフチル基等が挙げられ る。
[0080] R11で示される、置換アルキル基、置換アルケニル基、置換アルキ-ル基又は置換 ァリール基の置換基としては、例えばノヽロゲン原子、スルホアミド基、カルボアミド基、 スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基、アミノ基等が挙げられ、当該ハ ロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体例は、一般式 [4]〜 [7]に於け る R14〜R16で示されるハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例示と同様 のものが挙げられる。
[0081] R11の中でも、無置換アルキル基が好ましぐ就中、例えばメチル基、ェチル基、 n- プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、 n-ペンチル基、 n-へキシル基等がより好ま しい。
[0082] 一般式 [1]に於いて、 nは、通常 0〜3の整数、好ましくは 1又は 2である。
[0083] 一般式 [1]に於ける！^〜尺11中に少なくとも 1つ含有される一般式 [2]で示される基 、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基の中でも、 一般式 [2]で示される基又は一般式 [3]で示される基が好ましい。
[0084] 本発明の化合物中に含有される一般式 [3]で示される基 (例えばスルホ基等）は、 水溶性を高め、該色素分子間での会合による蛍光消光を抑制し、蛍光強度を高める ため多く導入されている方が好ましぐ本発明の化合物中に通常 1〜4個、好ましくは 2〜4個含有される。
[0085] 本発明の化合物中に含有される一般式 [2]で示される基 (例えばカルボキシル基 等）は、被標識物質と結合し得る基 (例えばスクシンイミド基、ノルボルネン基等の反 応活性基)を容易に導入することができるため、本発明の化合物中に通常 1〜3個、 好ましくは 1〜 2個含有される。
[0086] R'-R11に少なくとも含有される一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基 、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基 (以下、「本発明の反応性基」と略記 する。 )は、！^〜尺11として本発明の反応性基そのものが存在するもの（即ちピラゾー ル骨格若しくはインドール骨格に当該反応性基が直接結合するもの)又は尺1〜!^11 に置換基として含有されるもののどちらでもよいが、当該反応性基が R11に含有される 場合には、置換基として含有されるのが好ましい。
[0087] 一般式 [ 1]で示される化合物としては、例えば一般式 [ 1 1]
Figure imgf000022_0001
[0088] (式中、！^〜 1は前記に同じ。）で示される化合物（一般式 [1]に於ける n= lのもの に相当）、一般式 [ 1 2]
Figure imgf000022_0002
[0089] (式中、！^〜 1は前記に同じ。）で示される化合物（一般式 [ 1]に於ける n= 2のもの に相当）、一般式 [ 1 3]
Figure imgf000022_0003
[0090] (式中、！^〜 1は前記に同じ。）で示される化合物（一般式 [1]に於ける n=0のもの に相当）、一般式 [ 1 4]
Figure imgf000022_0004
[0091] (式中、！^〜 1は前記に同じ。）で示される化合物（一般式 [1]に於ける n= 3のもの に相当）等が挙げられ、中でも一般式 [1 1]又は [1 2]で示されるものが好ましい
[0092] また、本発明の化合物 [1]の中でも、例えば下記一般式 [1 ' ]
Figure imgf000023_0001
[0093] (式中、 Rla〜Rbaは夫々独立して一般式 [2]又は [3]で示される基を置換基として有 していてもよいアルキル基を表し、 R8aは、一般式 [3]で示される基を表し、 Rllaはァ ルキル基を表し、 nは前記に同じ。）で示されるものが好ましい。
[0094] 一般式 [ 1 ' ]に於 、て、 Rla〜R6aで示される一般式 [2]又は [3]で示される基を置 換基として有していてもよいアルキル基のアルキル基としては、前記一般式 [1]に於 ける！^〜 で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基 のアルキル基の例示と同様のものが挙げられる。
[0095] R3a及び R4aは夫々独立して一般式 [2]又は [3]で示される基を置換基として有して V、てもよ 、アルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式 [2]又は [3]で示さ れる基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ま しい。
[0096] R5a及び R6aは夫々独立して一般式 [2]又は [3]で示される基を置換基として有して V、てもよ 、アルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式 [2]又は [3]で示さ れる基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ま しい。
[0097] Rllaで示されるアルキル基としては、前記一般式 [1]に於ける R11で示されるアルキ ル基の例示と同様のものが挙げられる。
[0098] 一般式 [1 1]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 1で示 されるもの等が挙げられる。
[0099] [表 1]
Figure imgf000024_0001
[0100] 一般式 [1 2]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 2で示 されるもの等が挙げられる。
[0101] [表 2]
Figure imgf000024_0002
[0102] 一般式 [1 3]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 3で示 されるもの等が挙げられる。
[0103] [表 3]
Figure imgf000024_0003
[0104] 一般式 [1 4]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 4で示さ れるもの等が挙げられる。
[0105] [表 4]
R1 R2 R3 R R5 Re R7 R8 R9 R'° R"
1 -4-1 -CCH2)5COOH -(CH2)3S03— -CH3 - (CH2)3S03Na -CH3 -(CH2)2COOH H -S03Na H H -CH3
1 -4-2 -CCH2)5COO" -(CH2)3S03H -CH3 - (CH2)3S03Na -CH3 -(CH2)2COOC2H5 H -S03Na H H -CH3
1 -4-3 -CCH2)5COO" -(CH2)3S03H -CH3 - (CH2)3S03Na -CH3 -(CH2)3S03Na H -S03 a H H -CH3
1 -4-4 -CCH2)2COO" -(CH2)2COOH -CH3 -CH3 -CH3 -(CH2)3S03Na H -S03Na H H -CH3
1 -4-5 -CCH2)2COO" -(CH2)3S03H -CH3 -CH3 -CH3 -(CH2)2COOH H -S03 a H H -CH3
1 -4-6 -CCH2)5COOH -(CH2)3S03H -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 H -S03Na H H -CH3
1 -4-7 CH2CH3 - (CH2)3S03H - CH3 - CH3 -CH3 - (CH2)2COOH H -S03 a H H - CH3 [0106] また、本発明の化合物中に含有される本発明の反応性基を、例えば被標識物質等 と結合させる場合には、当該反応性基に、被標識物質に含有される官能基 (例えば アミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標 識物質の官能基」と略記する場合がある。 )との結合性を高める (活性化させる)ような 基 (以下、「本発明の反応活性基」と略記する場合がある。）が更に導入されていても よい。
[0107] 尚、このような本発明の反応活性基、即ち、本発明の反応性基に被標識物質の官 能基との結合性を高めるような基を導入したものも、本発明の反応性基に含まれる。
[0108] このような反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるもの であれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
[0109] 本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるもの であれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例え ばァミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「ァミノ基に対する反応活性基」）、 チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基
」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」 )、 ホルミル基との反応性を活性ィ匕させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」 )等が挙げられる。
[0110] アミノ基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばスクシンイミド基、ス ルホスクシンイミド基、ノルボルネン基、 4--トロフエノキシ基、カルボン酸無水物由来 の基（例えばァセトキシカルボ-ルメチル基、プロピオ-ルォキシカルボ-ルェチル 基、ベンゾィルォキシベンジル基等）、炭素数 1〜3のハロスルホ -ルアルキル基（例 えばフルォロスルホ-ルメチル基、フルォロスルホ-ルェチル基、フルォロスルホ- ノレプロピノレ基、クロロスノレホニノレメチノレ基、クロロスノレホニノレェチノレ基、クロロスノレホニ ノレプロピノレ基、ブロモスノレホニノレメチノレ基、ブロモスノレホニノレェチノレ基、ブロモスノレホ 二ノレプロピノレ基、ョードスノレホニノレメチノレ基、ョードスノレホニノレェチノレ基、ョードスノレ ホ-ルプロピル基等）、ハロスルホ -ルァリール基（例えばフルォロスルホ-ルフエ- ノレ基、クロロスノレホ-ノレフエ-ノレ基、ブロモスノレホニノレフエ-ノレ基、ョードスノレホ-ノレ フエ-ル基等）、炭素数 1〜3のハロカルボ-ルアルキル基（例えばフルォロカルボ- ルメチル基、フルォロカルボ-ルェチル基、フルォロカルボ-ルプロピル基、クロロカ ルポ-ルメチル基、クロ口カルボ-ルェチル基、クロ口カルボ-ルプロピル基、ブロモ カルボ-ルメチル基、ブロモカルボ-ルェチル基、ブロモカルボ-ルプロピル基、ョ ードカルボ-ルメチル基、ョードカルボ-ルェチル基、ョードカルボ-ルプロピル基等 )、ハロカルボ-ルァリール基（例えばフルォロカルボ-ルフエ-ル基、クロ口カルボ- ルフヱ-ル基、ブロモカルボ-ルフヱ-ル基、ョードカルボ-ルフヱ-ル基等）、ホス ファアミダイト基、イソチオシァネート基、イソシァネート基、モノハロゲン（例えば F、 C1 、 Br、 I等）置換トリアジノ基、ジノヽロゲン (例えば F、 Cl、 Br、 I等）置換トリアジノ基、モ ノハロゲン（例えば F、 Cl、 Br、 I等）置換ピリミジノ基、ジハロゲン（例えば F、 Cl、 Br、 I 等)置換ピリミジノ基、モノハロゲン (例えば F、 Cl、 Br、 I等)置換ピリジノ基、ジハロゲ ン（例えば F、 Cl、 Br、 I等）置換ピリジノ基、ホスホリルノヽライド（例えば F、 Cl、 Br、 I等 )等が挙げられる。
[0111] チオール基に対する反応活性基の好ま 、具体例としては、例えばカルボン酸無 水物由来の基（例えばァセトキシカルボ-ルメチル基、プロピオ-ルォキシカルボ- ルェチル基、ベンゾィルォキシベンジル基等）、マレイミド基、スルホマレイミド基、ス ルホ-ルノヽライド基 (例えば F、 Cl、 Br、 I等）、 α -ノヽロゲノ（例えば F、 Cl、 Br、 I等）ァ セタミド基、炭素数 1〜3のハロカルボ-ルアルキル基（例えばフルォロカルボ-ルメ チル基、フルォロカルボ-ルェチル基、フルォロカルボ-ルプロピル基、クロ口カルボ -ルメチル基、クロ口カルボ-ルェチル基、クロ口カルボ-ルプロピル基、ブロモカル ボ-ルメチル基、ブロモカルボ-ルェチル基、ブロモカルボ-ルプロピル基、ョード力 ルポ-ルメチル基、ョードカルボ-ルェチル基、ョードカルボ-ルプロピル基等）、ノヽ 口カルボ-ルァリール基（例えばフルォロカルボ-ルフヱ-ル基、クロ口カルボ-ルフ ェ-ル基、ブロモカルボ-ルフエ-ル基、ョードカルボ-ルフエ-ル基等）、イソチォ シァネート基、イソシァネート基、 2-ピリジルジチォ基等が挙げられる。
[0112] 水酸基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばカルボン酸無水物 由来の基（例えばァセトキシカルボ-ルメチル基、プロピオ-ルォキシカルボ-ルェ チル基、ベンゾィルォキシベンジル基等）、炭素数 1〜3のハロスルホ -ルアルキル 基（例えばフルォロスルホ-ルメチル基、フルォロスルホ-ルェチル基、フルォロスル ホ-ノレプロピノレ基、クロロスノレホニノレメチノレ基、クロロスノレホ-ノレェチノレ基、クロロスノレ ホニノレプロピノレ基、ブロモスノレホニノレメチノレ基、ブロモスノレホニノレェチノレ基、ブロモス ルホ-ルプロピル基、ョードスルホ -ルメチル基、ョードスルホ -ルェチル基、ョード スルホ-ルプロピル基等）、ハロスルホ -ルァリール基（例えばフルォロスルホ -ルフ ェニノレ基、クロロスノレホニノレフエ-ノレ基、ブロモスノレホ-ノレフエ-ノレ基、ョードスノレホニ ルフエ-ル基等）、ホスファアミダイト基、炭素数 1〜3のハロカルボ-ルアルキル基（ 例えばフルォロカルボ-ルメチル基、フルォロカルボ-ルェチル基、フルォロカルボ 二ノレプロピノレ基、クロロカノレボニノレメチノレ基、クロロカノレボニノレェチノレ基、クロロカノレ ボ-ルプロピル基、ブロモカルボ-ルメチル基、ブロモカルボ-ルェチル基、ブロモ カルボ-ルプロピル基、ョードカルボ-ルメチル基、ョードカルボ-ルェチル基、ョー ドカルボ-ルプロピル基等）、ハロカルボ-ルァリール基（例えばフルォロカルボ-ル フエ-ル基、クロ口カルボ-ルフエ-ル基、ブロモカルボ-ルフエ-ル基、ョードカル ボユルフェ-ル基等）、イソチオシァネート基、イソシァネート基、ホスホリルノヽライド（ 例えば F、 Cl、 Br、 I等)基等が挙げられる。
[0113] ホルミル基に対する反応活性基の好ま 、具体例としては、例えばヒドラジド基等が 挙げられる。
[0114] また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反 応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被 標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様 のものが挙げられる。
[0115] 本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド (Su)基、マレイミド (Ma)基等 が好ましい。
[0116] 本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、 例えば— COOSu基、—CONH (CH ) Ma基等が挙げられる。このような本発明の
2 4
反応活性基を含有する化合物も一般式 [1]で示される本発明の化合物に含まれる。
[0117] このような本発明の反応活性基を含有する本発明の化合物の具体例としては、本 発明の化合物中の本発明の反応性基に上記の如き本発明の反応活性基が更に導 入された化合物が全て挙げられるが、例えば一般式 [1— 1]〜[1— 4]に於ける R1 R2及び R6に当該反応活性基を含有するものが挙げられる。
[0118] このような本発明の反応活性基が導入された本発明の化合物の一例を以下に示す
[0119] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [1 1]で示される化合物の好ましい具体 例としては、例えば下記表 5で示されるもの等が挙げられる。
[0120] [表 5]
Figure imgf000028_0001
[0121] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [1 2]で示される化合物の好ましい具体 例としては、例えば下記表 6で示されるもの等が挙げられる。
[0122] [表 6]
Figure imgf000028_0002
[0123] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [1 3]で示される化合物の好ましい具体 例としては、例えば下記表 7で示されるもの等が挙げられる。
[0124] [表 7]
Figure imgf000028_0003
[0125] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [1 4]で示される化合物の好ましい具体 例としては、例えば下記表 8で示されるもの等が挙げられる。
[0126] [表 8]
Figure imgf000028_0004
[0127] このように本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入した化合物も、本発明 の化合物に含まれる。
[0128] 1 2.本発明の化合物 [1]の合成法
1 - 2- 1.インドレニン化合物 ピラゾール化合物複合体 (本発明の一般式 [ 1 ]で示 される化合物に相当）の合成 一般式 [ 1]で示される化合物は、例えば下記方法によって合成し得る c
Figure imgf000029_0001
[0129] (式中、 R17はアルキル基又はァリール基を表し、！^〜 1及び nは前記に同じ。 ) [0130] 一般式 [ 10]及び [ 11]に於いて、 R17で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝 状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜3のものが挙げられ 、具体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル 基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n_ペンチル基、イソペンチル基、 s ec-ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基 、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル 基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチ ル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基 、 sec-ノニル基、 tert-ノニル基、ネオノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシ ル基、 tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペン チル基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シ クロデシル基等が挙げられる。
[0131] R17で示されるァリール基としては、通常炭素数 6〜10のものが挙げられ、具体的に は、例えばフエ-ル基、ナフチル基等が挙げられる。
[0132] 即ち、先ず、一般式 [8]で示されるインドレニン化合物 (インドレニン骨格部分)、一 般式 [9]で示される化合物〔一般式 [8]で示される化合物に対して 1〜2倍モル〕及 び一般式 [ 10]で示される酸無水物〔一般式 [8]で示される化合物に対して 1〜20倍 モル〕（例えば無水酢酸、無水プロピオン酸、無水酪酸、安息香酸無水物等）を、必 要ならば溶媒 (例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸等のカルボン酸類、例えばァセトニ トリル、プロピオ-トリル、 n-ブチ口-トリル等の-トリル類等）に溶解し、 0〜150°C (好 ましくは 40〜120°C)で 0. 1〜24時間（好ましくは 0. 5〜12時間、より好ましくは 1〜 8時間）で反応させることにより一般式 [ 11]で示される化合物が得られた。 [0133] 次いで、一般式 [11]で示される化合物及び一般式 [12]で示される化合物（ビラゾ ール骨格部分）〔一般式 [11]で示される化合物に対して 0. 5〜10倍モル、好ましく は 1〜5倍モル〕を、塩基性触媒 (例えばピリジン、トリェチルァミン、 Ν,Ν-ジメチルァ 二リン、ピぺリジン、ピリジン、 4-ジメチルァミノピリジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ -5-ェン、 1,8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥンデ力- 7-ェン、トリ- η-ブチルァミン等の有機ァ ミン類、例えば水素化ナトリウム等の金属水素化物類、例えば η-プチルリチウム等の 塩基性アルカリ金属化合物類等)の存在下、脱水縮合剤〔例えば濃硫酸、五酸化二 リン、無水塩化亜鉛等の無機脱水剤類、例えばジシクロへキシルカルポジイミド、ジィ ソプロピルカルボジイミド、 1-ェチル -3-(3-ジメチルァミノプロピルカルボジイミド)塩酸 塩等のカルボジイミド類、無水酢酸、ポリリン酸、カルボ-ルジイミダゾール、 Ρ-トルェ ンスルホ-ルクロライド等〕を用いて、必要ならば溶媒（例えば Ν,Ν-ジメチルホルムァ ミド（DMF)、 Ν,Ν-ジメチルァセトアミド（DMA)、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等 のアミド類、例えばァセトニトリル、プロピオ-トリル、 n-ブチ口-トリル等の-トリル類、 例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ェチレ ングリコール、 1,4-ブタンジオール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジォ キサン、ァ-ソール、エチレングリコールモノェチルエーテル等のエーテル類、例え ばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類）中で 0〜 150°C (好ましくは 40〜 120°C )で 0. 1〜24時間（好ましくは 0. 5〜12、より好ましくは 1〜8時間）で反応させ、 目的 物である一般式 [ 1 ]で示される化合物が得られる。
[0134] 1 - 2- 2.本発明の反応活性基 (本発明の反応性基を活性化させた基)を含有する 本発明の化合物の合成
本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入する方法を、一般式 [1]で示さ れる化合物のうち、一般式 [22]で示される化合物 (即ち、一般式 [1]に於ける R1が 一般式 [2]で示される基を置換基として有するアルキル基である化合物に相当）を用 いた場合を例にとって以下に説明する。
Figure imgf000031_0001
[0135] (式中、 T はアルキレン基を表し、 Αはテトラフルォロボレート又はへキサフルォロホ
12
スフエートを表し、 qは 2〜10の整数を表し、 〜 1、 R12A及び nは前記に同じ。 ) [0136] 尚、一般式 [22]で示される化合物は、一般式 [1]で示される化合物のうち、 R1がー 般式 [2]で示される基を置換基として有するアルキル基 (即ち、 T COOR12基
12
に相当 )である場合の化合物に相当する。
[0137] 一般式 [22]〜 [24]に於いて、 T で示されるアルキレン基としては、直鎖状又は
12
分枝状でもよぐ好ましくは直鎖状のものであり、通常炭素数 1〜6、好ましくは 1〜4 のものであり、具体的には、例えばメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチ レン基、テトラメチレン基、へキサメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばェチリ デン基、プロピレン基、イソプロピリデン基、ェチルエチレン基、 1,2-ジメチルエチレン 基、 1,2-ジェチルエチレン基、 1,2-ジ- n-プロピルエチレン基、 1,2-ジ- n-ブチルェチ レン基等の分枝状アルキレン基等が挙げられ、中でも直鎖状アルキレン基が好ましく 、就中、エチレン基、ペンタメチレン基等がより好ましい。
[0138] 即ち、一般式 [22]で示される化合物 (本発明の反応性基を有する化合物)を、例え ば一般式 [62]で示される化合物等のスクシンイミドィ匕試薬 (一般式 [22]で示される 化合物に対して 1〜10倍モル）と塩基性触媒 (例えば N-ェチルジイソプロピルアミン 、ピリジン、トリエチルァミン、 Ν,Ν-ジメチルァニリン、ピぺリジン、 4-ジメチルァミノピリ ジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ- 5-ェン、 1,8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥンデ力- 7- ェン、トリ- η-プチルァミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒 (例えば DMF 、 DMA,ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、 0〜40°Cで 0. 1〜12 時間反応させ、一般式 [23]で示される化合物 (本発明の反応活性基であるスクシン イミド基を有する化合物）が得られる。
[0139] 一般式 [23]で示される化合物は、例えば一般式 [68]で示される化合物等のマレ イミドィ匕試薬 (一般式 [23]で示される化合物に対して 1〜10倍モル)と塩基性触媒（ 例えばトリェチルァミン、 N-ェチルジイソプロピルァミン、ピリジン、 Ν,Ν-ジメチルァ- リン、ピぺリジン、 4-ジメチルァミノピリジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ- 5-ェン、 1, 8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥンデ力- 7-ェン、トリ -η-ブチルァミン等の有機アミン類等） の存在下、適当な溶媒（例えば DMF、 DMA、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等の アミド類等）中、 0〜40°Cで 0. 1〜12時間反応させ、一般式 [24]で示される化合物（ 本発明の反応活性基であるマレイミド基を有する化合物）が得られる。
[0140] 本発明に係るスクシンイミドィ匕試薬としては、上記一般式 [62]で示される化合物に 限らず、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる力 具体的には、例えばジ (N-スクシンィミジル）カルボネート（DSC)、 2-スクシンイミド -1,1, 3, 3-テトラメチルゥ口 ユウムテトラフルォロボレート（TSTU)、 2- (5-ノルボルネン- 2, 3-ジカルボキシミド） -1 ,1,3,3-テトラメチルゥ口-ゥムテトラフルォロボレート（TNTU)等が挙げられる。
[0141] 上記の如き反応活性基以外の本発明の反応活性基を導入する方法としては、対 応する原料を用いて上記に準じて適宜合成することにより得られる。
[0142] 1 2— 3.インドレニン化合物の合成
一般式 [8]で示される化合物 (インドレニン骨格部分)の合成法を以下に説明する。
Figure imgf000032_0001
11 31 [15] [8]
[0143] (式中、 Xはハロゲン原子を表し、
Figure imgf000032_0002
R4及び R7〜R1C)は前記に同じ。 )
[0144] 一般式 [16]に於いて、 Xで示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩 素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
[0145] 即ち、一般式 [13]で示されるケトン化合物及び一般式 [14]で示される化合物を適 当な溶媒中（例えば酢酸、プロピオン酸等のカルボン酸類、例えばエチレングリコー ル、 1,4-ブタンジオール等のアルコール類等）で、 40〜250°Cで 0. 1〜24時間反応 させることにより一般式 [21]で示される化合物が得られる（例えば Journal of Organic Chemistry, 42(14), 2474^80, I977等）。
[0146] 次いで、一般式 [15]で示される化合物を一般式 [16]で示されるハロゲン化化合 物）又は一般式 [17]で示されるトシレートイ匕合物とを、適当な溶媒中（例えばクロ口べ ンゼン、 1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例えば 1,2-ジクロ ロェタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼン等の芳香 族炭化水素類、例えば DMA、 DMF、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類 等）に溶解し、 40〜200°Cで 1〜24時間反応させることにより一般式 [8]で示される インドレニン化合物が得られる（例えば J. Chem. Soc, Perkin Trans.1. 947〜952. 198 4等)。
[0147] 一般式 [13]で示されるケトンィ匕合物は、市販品（例えば 3-メチル -2-ブタノン、 3-メ チル- 2-ペンタノン、 3-メチル -2-へキサノン、 1-シクロプロピルエタノン、 1-シクロプチ ルエタノン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよぐ具体 的には、例えば 2-メチルァセト酢酸ェチルと脱離基 (例えばハロゲン原子、トシレート 基等)を有する化合物を塩基性触媒 (例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の 金属水素化物類、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金 属炭酸塩、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert-ブトキシド等 のアルカリ金属アルコキシド類等、例えば n-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属 化合物類、例えばリチウムジイソプロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下 、適当な溶媒 (例えば DMF、 DMA,ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類、 例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ェチレ ングリコール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジォキサン、エチレングリコ ールモノェチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキ シド類等）中、 80〜100°Cで 0. 1〜24時間反応させ、次いで、得られた溶液を酸 触媒を用い脱炭酸を行う方法（例えば Modern Synthetic Reactions, California, 2 nd ed.,p.492, 510, 756 (1972)等参照）等が挙げられる。 [0148] 一般式 [14]で示される化合物は、市販品を用いてもよいし、常法により適宜合成さ れたものを用いてもよい。
[0149] 1 - 2-4.ピラゾール化合物の合成
一般式 [12]で示される化合物 (ピラゾール骨格部分)の合成法を以下に説明する
Figure imgf000034_0001
[0150] (式中、 R2、 R5〜R°、 R11及び Xは前記に同じ。 )
即ち、一般式 [18]で示されるジケトン化合物とヒドラジンを、適当な溶媒 (例えばメ タノ一ノレ、エタノーノレ、プロパノーノレ、イソプロパノーノレ、ブタノーノレ、エチレングリコー ル等のアルコール類等）中、 60〜100°Cで 1〜4時間脱水反応させ、一般式 [26]で 示される 4H—ピラゾール化合物が得られる（例えば Adv. Heterocycle. Chem. Vol.34 . 53〜78. 1983等）。
[0151] 次 、で、一般式 [19]で示される 4H—ピラゾールイヒ合物を一般式 [20]で示される ハロゲンィ匕化合物又は一般式 [21]で示されるトシレートイ匕合物とを、適当な溶媒 (例 えばクロ口ベンゼン、 1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例え ば 1,2-ジクロロェタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼ ン等の芳香族炭化水素類、例えば DMF、 DMA,ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等 のアミド類等）中、 80〜140°Cで 1〜12時間で N-アルキル化反応させ、一般式 [12] で示される化合物が得られる（例えば J. Chem. Soc, Perkin Trans.1. 947^952. 1984 等)。
[0152] 一般式 [18]で示されるジケトンィ匕合物は、市販品（例えば 3,3-ジメチル -2,4-ペンタ ンジオン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよぐ具体 的には、例えば 3-メチル -2,4-ペンタンジオンや 4-ァセチル- 5-ォキソへキサン酸ェ チルエステルを脱離基 (例えばハロゲン原子、トシレート基等)を有する化合物を塩 基性触媒 (例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化物類、例えば炭 酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えばナトリウムメ トキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert-ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類 、例えば n-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類、例えばリチウムジイソ プロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下、適当な溶媒 (例えば DMF、 D MA、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類、例えばメタノール、エタノール、 プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類、 例えばテトラヒドロフラン、ジォキサン、エチレングリコールモノェチルエーテル等のェ 一テル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類等）中、 80〜100°Cで 0. 1〜24時間反応させる方法（例えば Modern Synthic Reactions, California, 2 nd e d.,p.492, 510, 756 (1972)等）等が挙げられる。
[0153] 1 3.本発明の化合物 [1]の性質
このようにして得られた本発明の化合物 [1]は、例えば核酸抽出法、ィムノアッセィ 法等の蛍光標識物質としての用途が期待されている。
[0154] 2.本発明の標識化合物及び標識方法
2- 1.本発明の標識化合物 (本発明の化合物 [1]で標識された化合物）
本発明の標識ィ匕合物としては、本発明の化合物 (標識物質)と被標識物質を直接 又は間接的に結合されたものが挙げられ、具体的には、本発明の化合物中に含有さ れる一般式 [2]で示される基 (例えばカルボキシル基等）、一般式 [3]で示される基（ 例えばスルホ基等）、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基が被標識物質と 直接又は間接的に結合されたものが挙げられる。
[0155] 被標識物質と結合される本発明の化合物中の一般式 [2]で示される基 (例えば力 ルポキシル基等）、一般式 [3]で示される基 (例えばスルホ基等）、アミノ基、水酸基、 チオール基又はホルミル基 (以下、「本発明の反応性基」と略記する場合がある。）は 、通常一般式 [1]に於ける！^〜尺11、好ましくは 〜 、より好ましくは R1又は R6に含 有されるものが好ましい。
[0156] 本発明の化合物により標識される被標識物質としては、例えば通常この分野で被 標識物質として用いられるものが全て挙げられる力 具体的には、例えばピオチン、 アビジン、ストレプトアビジン、抗体若しくはその分解産物（例えば Fab、 Fab，、 F (ab ' ) 等）、アミノ酸、蛋白、ペプチド、酵素基質、ホルモン、リンフォカイン、代謝産物、
2
レセプタ、リガンド、ァゴ-スト、アンタゴ-スト、抗原、ハプテン、デンドリマー、レクチ ン、トキシン、炭水化物、例えば果糖類、多糖類等の糖類、ヌクレオシド (例えばリボヌ クレオシド、デォキシリボヌクレオシド等）、ヌクレオチド (例えばリボヌクレオチド、デォ キシリボヌクレオチド等）、核酸 (オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド）〔例えばデォキ シリボ核酸 (DNA)、リボ核酸 (RNA)等〕、核酸誘導体 (例えば DNAフラグメント、 R NAフラグメント等）、天然薬物、ウィルス、ウィルス成分、イースト成分、血液細胞、血 液細胞成分、生物細胞、非細胞血液成分、バクテリア、バクテリア成分、天然及び合 成脂質嚢、合成及び天然薬物、毒薬、環境汚染物質、重合体、重合体粒子、ガラス 粒子、ガラス表面材、プラスチック粒子、プラスチック表面材、重合体膜、導体及び半 導体等が挙げられ、中でも、例えばヌクレオチド、抗体若しくはその分解産物等が好 ましい。
[0157] ヌクレオシドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントースカもなり、具 体的には、例えば糖部分が D-リボースであるリボヌクレオシド、例えば糖部分が D-2- デォキシリボースであるデォキシリボヌクレオシド等が挙げられる。
[0158] ヌクレオチドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントース、及びリン 酸からなり、具体的には、例えば糖部分が D-リボースであるリボヌクレオチド、例えば 糖部分が D-2-デォキシリボースであるデォキシリボヌクレオチド等が挙げられる。
[0159] また、当該ヌクレオシド及びヌクレオチドには、例えばヌクレオシド抗生物質のように 、その基本となる塩基部分がプリン構造又はピリミジン構造でないもの、これらの構造 が修飾されているもの、糖部分が D-リボース又はデォキシ- D-リボースでないもの、こ れらが修飾されているもの、リン酸部分（一 OPO一）が他の元素〔例えば硫黄原子（
3
-OPO s_)等〕で置換されたもの、リン酸部分が修飾されたもの等も含まれる。
2
[0160] 核酸は、当該ヌクレオチドを基本単位とし、このリン酸が各ヌクレオチド間で糖の 3' と 5'位炭素の間のジエステル結合により結合された鎖状のオリゴ又はポリヌクレオチ ドであり、具体的には、例えば糖部分がリボースであるリボ核酸 (RNA)、例えば糖部 分が D-2-デォキシリボースであるデォキシリボ核酸 (DNA)等が挙げられる。
[0161] これらヌクレオチド、核酸及び誘導核酸は 1本鎖でも、 2本鎖乃至これ以上の複数 の核酸鎖力もなるものであってもよい。また、これらは本発明の目的を達成し得る範 囲であれば、適当なもので適宜修飾等されて 、てもよ！/、。
[0162] 本発明の化合物と被標識物質が直接的に結合されるとは、例えば本発明の化合物
(要すれば本発明の反応性基)が被標識物質中の官能基 (例えばアミノ基、カルボキ シル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）と、例えばイオン結合、共有結 合等で結合されることを意味する。また、本発明の化合物と被標識物質が間接的に 結合されるとは、例えば本発明の反応性基が被標識物質中の当該官能基とリンカ一 等を介して結合 (例えばイオン結合、共有結合等)されることを意味する。間接的結 合で使用されるリンカ一としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
[0163] 2- 2.本発明の標識方法
本発明の化合物 [1]を用いて被標識物質を標識する方法としては、自体公知の方 法に従い適宜選択して行えばよいが、例えば本発明の反応性基 (即ち、一般式 [1] に於ける尺1〜!^11のうち少なくとも 1つに含有される、一般式 [2]で示される基 (例えば カルボキシル基等）、一般式 [3]で示される基 (例えばスルホ基等）、アミノ基、水酸基 、チオール基又はホルミル基）と、被標識物質中の官能基 (例えばアミノ基、カルボキ シル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標識物質の官能基」
)とが例えばイオン結合、共有結合等で直接結合されるか、或いは被標識物質の一 部に導入されたリンカ一を介して結合されることにより容易に行うことができる。
[0164] また、ヌクレオチド (被標識物質)を標識する方法としては、上記の化学反応を用い た標識方法の他に、酵素を用いた方法でも容易に標識することができ、ここで使用さ れる酵素としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
[0165] 本発明の反応性基は、被標識物質の官能基との反応性を高めるような基 (以下、「 反応活性基」と略記する場合がある。 )が更に導入されて 、てもよ 、。
[0166] 尚、このような反応活性基も、本発明の反応性基に含まれ、当該反応活性基を含 有する化合物も本発明の化合物に含有される。
[0167] 本発明の化合物を用いて被標識物質を標識する方法の具体例としては、例えば（1 )本発明の反応性基に更に本発明の反応活性基を導入した後、これと被標識物質の 官能基 (以下、単に「官能基」の略記する場合がある。）と結合させることにより標識す る方法、（2)被標識物質の官能基に本発明の反応活性基を導入した後、これと本発 明の反応性基と結合させることにより標識する方法、（3)本発明の反応性基と被標識 物質の官能基に、通常この分野で使用される多価反応性リンカ一試薬を結合させる ことにより標識する方法、（4)本発明の反応性基及び被標識物質の官能基に同一又 は異なる反応活性基を導入した後、これらと通常この分野で使用されるリンカ一を結 合させることにより標識する方法等が挙げられる。
[0168] 本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるもの であれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例え ばァミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「ァミノ基に対する反応活性基」）、 チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基
」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」 )、 ホルミル基との反応性を活性ィ匕させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」
)等が挙げられる。これら反応活性基の好まし 、具体例は前述した通りである。
[0169] また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反 応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被 標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様 のものが挙げられる。
[0170] 本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド (Su)基、マレイミド (Ma)基等 が好ましい。
[0171] 本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、 例えば— COOSu基、—CONH (CH ) Ma基等が挙げられる。このような本発明の
2 4
反応活性基を含有する化合物も一般式 [1]で示される本発明の化合物に含まれる。
[0172] 本発明の反応性基が一般式 [2]で示される基 (以下、「本発明のカルボキシル基」 と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はこれ に導入されたリンカ一の官能基 (以下、単に「被標識物質」と略記する場合がある。 ) であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましぐその方法としては 、 ( 例えば N-ヒドロキシスクシンイミドとカルポジイミド等の縮合試薬を用いて反応さ せる方法、 (ii)本発明のカルボキシル基に塩ィ匕チォ-ルを作用させカルボキシクロリ ドを形成させ、これと被標識物質のァミノ基とを反応させる方法、（iii)本発明のカルボ キシル基に塩酸とメタノールを加えて反応させた後ヒドラジンをカ卩ぇ反応させ、ヒドラ ジドを形成させ、更に、これに亜硝酸ナトリウムと塩酸を加えァシルアジドィ匕することで 活性化させた後、これと被標識物質のアミノ基、チオール基、水酸基と反応させる方 法、（iv)本発明のカルボキシル基力 無水物を形成させ、これを被標識物質のァミノ 基と反応 (脱水縮合)させる方法等が挙げられる。
[0173] また、本発明の反応性基が一般式 [3]で示される基 (以下、「本発明のスルホ基」と 略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質のアミノ基、 イミダゾール基、チオール基又はフエノール基と結合させるのが好ましぐその方法と しては、例えば (i)本発明のスルホ基に塩化スルホン酸を反応させスルホクロライドを 形成させ、これと被標識物質のアミノ基、イミダゾール基、チオール基又はフエノール 基と反応させる方法等が挙げられる。
[0174] 本発明の反応性基がアミノ基 (以下、「本発明のアミノ基」と略記する。）であり、これ と被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基である力 ルポキシル基、アミノ基、フエノール基又はチオール基と結合させるのが好ましぐそ の方法としては、例えば (i)N-ヒドロキシスクシンイミド、カルボキシジイミド等の縮合試 薬を用いて、本発明のァミノ基と被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基と結合させる 方法、 GO本発明のァミノ基にフォスゲンを作用させイソシァネートイ匕した後、被標識物 質又はそのリンカ一のアミノ基と結合させる方法、（iii)本発明のァミノ基にダルタルァ ルデヒドを反応させ、これと被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基又はフエノール基 と反応させる方法、 Gv)被標識物質又はそのリンカ一が糖、糖蛋白由来のものである 場合は、予めこれを過ヨウ素酸と反応させた後、本発明のァミノ基と反応させ、更に水 素化ホウ素ナトリウム等で還元させる方法、（V)本発明のアミノ基をマレイミド基を有す る 2官能性スぺーサー（例えば m-マレイミドベンゾィル N-ヒドロキシサクシンイミド エステル)又はピリジルジチォスルフイド基を有する 2官能性スぺーサー（例えば 4-サ クシンィミジルォキシカルボ-ル- a -(2-ピリジルジチォ)トルエン等）でマレイミド化或 いはピリジルジチォスルフイド化した後、これと被標識物質又はそのリンカ一のチォー ル基とを反応させる方法等が挙げられる。 [0175] 本発明の反応性基が水酸基 (以下、「本発明の水酸基」と略記する。）であり、これと 被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基であるアミ ノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましぐその方法としては、例えば (0 本発明の水酸基に塩ィ匕シァヌル基を作用させトリアジ-ル誘導体を形成させ、被標 識物質又はそのリンカ一のアミノ基と反応させる方法、 GO本発明の水酸基をァセチル ィ匕した後臭素化し、ヨウ化ナトリウムで臭素—ヨウ素置換した後、被標識物質又はそ のリンカ一のアミノ基、チオール基又は水酸基と反応させる方法、（m)本発明の水酸 基に臭化シアンを作用させ活性化させた後、被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基 と反応させる方法等が挙げられる。
[0176] 本発明の反応性基がチオール基 (以下、「本発明のチオール基」と略記する。）であ り、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基 であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましぐその方法としては
、例えば (0被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基を、マレイミド基を有する 2官能性 スぺーサー（例えば m-マレイミドベンゾィル N-ヒドロキシサクシンイミド エステル）又 はピリジルジチォスルフイド基を有する 2官能性スぺーサー（例えば 4_サクシンイミジ ルォキシカルボ-ル- (X -(2-ピリジルジチォ)トルエン等）でマレイミド化或いはピリジ ルジチォスルフイドィ匕した後、これと本発明のチオール基とを反応させる方法、 GOビス マレイミドへキサン、 1,4-ジ- [3し 2'-ピリジルジチォ（プロピオンアミド）]ブタン等の 2官 能性スぺーサーを用いて、本発明のチオール基と被標識物質又はそのリンカ一のチ オール基を反応させる方法等が挙げられる。
[0177] 本発明の反応性基がホルミル基 (以下、「本発明のホルミル基」と略記する。 )であり 、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基で あるアミノ基等と結合させるのが好ましぐその方法としては、例えば (0被標識物質又 はそのリンカ一のアミノ基と本発明のホルミル基を直接反応させた後、水素化ホウ素 ナトリウム等で還元させる方法等が挙げられる。
[0178] 多価反応性リンカ一試薬としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ るが、具体的には、例えば本発明の反応性基及び被標識物質の官能基の一方がァ ミノ基であり他方がチオール基である場合の二価性試薬 (以下、「ァミノ基とチオール 基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一方がアミノ基であり他 方が一般式 [2]で示される基 (カルボキシル基等)である場合の二価性試薬 (以下、「 ァミノ基とカルボキシル基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一 方がチオール基であり他方が水酸基である場合の二価性試薬 (以下、「チオール基 と水酸基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基が共にアミノ基である 場合の二価性試薬 (以下、「ァミノ基とアミノ基の二価性試薬」と略記する。）、当該反 応性基と官能基が共にチオール基である場合の二価性試薬 (以下、「チオール基と チオール基の二価性試薬」と略記する。 )等が挙げられる。
[0179] ァミノ基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えば N-( a -マレイミドアセ トキシ)スクシンイミド、 Ν-[ γ -マレイミドブチリルォキシ]スクシンイミド、 Ν- (6-マレイミド 力プロィルォキシ)スクシンイミド、 Ν- (8-マレイミドカプリルォキシ)スクシンイミド、 Ν- (11 -マレイミドウンデカノィルォキシ)スクシンイミド、 m-マレイミドベンゾィル -Ν-ヒドロキシ スクシンイミド、スクシンィミジル 4_[p-マレイミドフエ-ル]ブチレート、スクシンイミジ ル 4- [N-マレイミドメチル]シクロへキサン- 1-カルボキシレート、スクシンィミジル- 6-[ β -マレイミドプロピオンアミド]へキサノエート、 Ν-スクシンィミジル 3- (2-ピリジルジチ ォ)プロピオネート等が挙げられる。
[0180] ァミノ基とカルボキシル基類の二価性試薬の具体例としては、例えば 3-[(2-アミノエ チル)ジチォ]プロピオン酸 ·塩酸塩、 1-ェチル -3-[3-ジメチルァミノプロピル]カルボジ イミド 塩酸塩等が挙げられる。
[0181] チオール基と水酸基の二価性試薬の具体例としては、例えば Ν-[ρ-マレイミドフエ ニル]イソシァネート等が挙げられる。
[0182] ァミノ基とアミノ基の二価性試薬の具体例としては、例えばメチル Ν-スクシンイミジ ノレ アジペート、ジスクシンイミジノレ グノレタレート、ジスクシンイミジノレ スべレート、ェ チレン グリコール ビス [スクシンイミジルスクシネート]、ジチォビス [スクシンィミジル プロピオネート]、ジスクシンイミジノレ タータレート、ビス [2- (スクシンイミドォキシカノレ ボ -ルォキシ)ェチル]スルホン、 1,5-ジフルォロ- 2,4-ジニトロベンゼン等が挙げられ る。
[0183] チオール基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えばビス-マレイミドエ タン、 1,4 -ビス-マレイミドブタン、ビス-マレイミドへキサン、 1,4 ビス-マレイミジル- 2,3 -ジヒドロキシブタン、ジチォ -ビス-マレイミドエタン、 1,6-へキサン-ビス-ビニルスルホ ン、 1,8 -ビス-マレイミドジエチレングリコール、 1,11 -ビス-マレイミドトリエチレングリコ ール、 1,4-ジ- [3'-(2'-ピリジルジチォ) -プロピオンアミド]ブタン等が挙げられる。
[0184] 2- 3.本発明の化合物を用いた標識ヌクレオチドの調製
本発明の化合物 [1]を用いて被標識物質を標識する方法の具体例として、ヌクレオ チド (被標識物質)を標識する場合を例にとって以下に説明する。
[0185] 即ち、その塩基上にアミノ基を有するヌクレオチド (例えばシチジン，アデニン，グァ ニン等)を標識する場合は、本発明の化合物中の反応性基を直接結合させても本発 明の反応性基を活性化させた基 (反応活性基)を直接結合させてもよぐ中でも活性 エステル基又はカルボキシル基と結合させるのが好ましぐ特に活性エステル基と結 合させるのがより好ましい。
[0186] また、本発明の化合物とヌクレオチドが間接的に結合される場合は、先ず、ヌクレオ チドの塩基上又は水酸基に、例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基等の官 能基を有するリンカ一を導入した誘導体 (以下、「ヌクレオチド誘導体」と略記する。 ) を合成し、次いで、例えばヌクレオチド誘導体中のアミノ基と結合させる場合は本発 明の化合物中の活性エステル基又はカルボキシル基と結合させればよぐ例えばヌ クレオチド誘導体中のカルボキシル基と結合させる場合は本発明の化合物中のアミ ノ基と結合させればよぐ例えばヌクレオチド誘導体中のチオール基と結合させる場 合は本発明の化合物中のマレイミド基 (反応活性基)と結合させればよい。使用され るリンカ一としては、通常この分野で用いられるものであれば何れでもよぐ当該リンカ 一中にエステル結合、エーテル結合又は z及びアミド結合を含んで 、てもよ 、。
[0187] 本発明の化合物 [1]を用いた標識方法を、本発明の化合物のうち、 R1に含有され るカルボキシアルキル基 (即ち、 R1が一般式 [2]で示される基を置換基として有する アルキル基である場合に相当）がリンカ一等を介してヌクレオチド残基に間接的に結 合したものを一例として以下に説明する。
[0188] 上記において、リンカ一としては、通常この分野で用いられるものが全て使用できる 1S 具体的には、下記一般式 (A)で示される構造のリンカ一が挙げられる。 — E ~ X— T10— Y—— NH—— (A)
[0189] (式中、 Eは— CH = CH または— C≡C—を表し、 X及び Yは夫々独立してアルキ レン基を表し、 T10は Ο または NH— CO—を表す。 )
[0190] 上記一般式 (Α)に於 、て、 Xで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或 いは環状でもよぐ好ましくは直鎖状のものがよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1 〜6、より好ましくは 1〜3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，ェチレ ン基，トリメチレン基，テトラメチレン基，ペンタメチレン基，へキサメチレン基，ヘプタメ チレン基，オタタメチレン基，ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン 基、例えばェチリデン基，プロピレン基，イソプロピリデン基， 1-メチルトリメチレン基， 2-メチルトリメチレン基， 1,1-ジメチルエチレン基， 1,2-ジメチルエチレン基，ェチルェ チレン基， 1-メチルテトラメチレン基， U-ジメチルトリメチレン基， 2,2-ジメチルトリメチ レン基， 2-ェチルトリメチレン基， 1-メチルペンタメチレン基， 1-メチルへキサメチレン 基， 1-メチルヘプタメチレン基， 1,4-ジェチルテトラメチレン基， 2,4-ジメチルヘプタメ チレン基， 1-メチルオタタメチレン基， 1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン 基、例えばシクロプロピレン基， 1,3-シクロブチレン基， 1,3-シクロペンチレン基， 1,4- シクロへキシレン基， 1,5 -シクロへプチレン基， 1,5 -シク口才クチレン基， 1,5 -シクロノ 二レン基， 1,6-シクロデカレン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
[0191] Υで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよぐ好ましく は直鎖状のものがよぐ通常炭素数 1〜： LO、好ましくは 2〜8、より好ましくは 2〜6のも のが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，ヱチレン基，トリメチレン基，テトラメ チレン基，ペンタメチレン基，へキサメチレン基，ヘプタメチレン基，オタタメチレン基 ,ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばェチリデン基，プ ロピレン基，イソプロピリデン基， 1-メチルトリメチレン基， 2-メチルトリメチレン基， 1,1- ジメチルエチレン基， 1,2-ジメチルエチレン基，ェチルエチレン基， 1-メチルテトラメ チレン基， 1,1-ジメチルトリメチレン基， 2,2-ジメチルトリメチレン基， 2-ェチルトリメチレ ン基， 1-メチルペンタメチレン基， 1-メチルへキサメチレン基， 1-メチルヘプタメチレン 基， 1,4-ジェチルテトラメチレン基， 2,4-ジメチルヘプタメチレン基， 1-メチルオタタメ チレン基， 1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン 基， 1,3-シクロブチレン基， 1,3-シクロペンチレン基， 1,4-シクロへキシレン基， 1,5-シ クロへプチレン基， 1,5-シクロオタチレン基， 1,5-シクロノ-レン基， 1,6-シクロデカレ ン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
[0192] 本発明に係る標識ヌクレオチドとしては、本発明の化合物 [1]で直接またはリンカ 一等を介して間接的に標識されたヌクレオチド残基が挙げられ、具体的には、例えば 下記一般式 [22]で示されるヌクレオチド残基を含むものが挙げられる。
Q1—— V1— W1 [22]
[0193] 〔式中、 Q1はヌクレオチド残基を表し、 VIはリンカ一を表し、 W1は下記一般式 [1 ' ] を表す。
Figure imgf000044_0001
[0194] (式中、 Z1は VIと結合する結合手を表し、 〜 1、 T 及び nは前記に同じ。 )
12
[0195] 尚、一般式 [1 ' ]で示される化合物は、一般式 [1]で示される化合物のうち、 R1がー 般式 [2]で示される基を置換基として有するアルキル基 (即ち、 T COOR12基
12
に相当）である場合の化合物誘導体に相当する。
[0196] 一般式 [22]において Q1で示されるヌクレオチド残基としては、例えばリボヌクレオ チド残基、 2' デォキシリボヌクレオチド残基、 3' デォキシリボヌクレオチド残基、 5' デォキシリボヌクレオチド残基、 2'、 3'—ジデォキシリボヌクレオチド残基等が 挙げられる。
[0197] 具体的には、このようなヌクレオチド残基としては、例えば一般式 (0、（ii)、（v)、 (vi)、 ( vii)、（viii)、（xii)および (xiii)で示されるプリンヌクレオチド残基、または一般式 (iii)、（iv)、 (x)および (xi)で示されるピリミジンヌクレオチド残基が挙げられる。
Figure imgf000045_0001
[0199] 上記一般式において、 Z3は VIと結合する結合手を、 R25及び R26は夫々独立して H 、 OHまたは O—を表し、 R27は一 PO H—、 -PO H 、 一 P O H 、 一 P O H又は
2 3 2 2 6 3 3 9 4 その塩を表す。尚、塩の具体例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩 等のアルカリ金属塩、例えばバリウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばアンモ-ゥ ム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、ピリジン塩等の有機アミン塩等が挙げられる。
[0200] 一般式 [22]において VIで示されるリンカ一は、 Q1で示されるヌクレオチド残基と、 Wl〔一般式 [1 ' ]〕で示される本発明の化合物誘導体 (蛍光標識)とを結合するため のリンカ一である。
[0201] 即ち、当該リンカ一の一方の末端力 前述した Q1で示されるヌクレオチド残基のう ち、ピリミジンヌクレオチド残基についてはそのピリミジン環の 5位〔一般式 ( )、 Gv)の 場合〕またはそのリン酸残基のリン原子〔一般式 (x)、（xi)の場合〕に結合し、また、プリ ンヌクレオチド残基についてはその 7—デァザ（7—デァザ)プリン環の 7位〔一般式 (0 、（ii)、（v)、（vi)の場合〕またはそのプリン環 (又は 7—デァザプリン環）のリン酸残基のリ ン原子〔一般式 (vii)、（viii)、（ix)、（xii)、（xiii)の場合〕に結合している。
[0202] 更に、当該リンカ一の他方の末端が、 W1〔一般式 [1 ' ]〕で示される本発明の化合 物誘導体 (標識物質)のカルボニル基〔一般式 [ ]に於ける T に結合するカルボ二
12
ル基〕に結合している。
[0203] このようなリンカ一としては、 W1〔一般式 [1 ' ]〕で示される本発明の化合物誘導体（ 標識物質)のカルボニル基〔一般式 [ ]に於ける T に結合するカルボニル基〕と
12 Q 1 で示されるヌクレオチド残基とを結合し得るものであれば全て使用でき、具体的には 、下記一般式 (A)で示される構造のリンカ一が挙げられる。
—— E ~ X ~ T10-Y—— NH—— （A)
[0204] (式中、 E、 X、 T10及び Yは前記と同じであり、これらの具体例、好ましい例等も前述 の通りである。 )
[0205] 従って、一般式 [22]で示されるヌクレオチド残基としては、それぞれ下記一般式 [2
2' ]で示されるものが好ましぐ下記一般式 [22"]で示されるものがより好ましい。
Q1一 E1 ~ X1 ~ T1 1-Y1一 NH— W1 [22 ']
[0206] (式中、 E1は— CH = CH または— C≡C—を表し、 XI及び Y1は夫々独立してァ ルキレン基を表し、 T11は O または NH— CO—を表す。また、 Q1及び W1は 前記と同じ。 )
[0207] 尚、上記において、 XIで示されるアルキレン基は前述の Xで示されるアルキレン基 と同じであり、その具体例、好ましい例等も同様である。また、 Y1で示されるアルキレ ン基は前述の Yで示されるアルキレン基と同じであり、その具体例、好ましい例等も同 様である。 Q1一 E1一 (CH2)r ~ T1 1— (CH2)S ~ NH一 W1 [22"]
[0208] (式中、 rは 1〜10、好ましくは 1〜6、より好ましくは 1〜4の整数を、 sは 1〜10、好ま しくは 2〜8、より好ましくは 2〜4の整数を表す。また、 Ql、 Wl、 Elおよび Ti lは前 記と同じ。 )
[0209] また、！^〜 1は前記と同じであり、その具体例、好ま 、例等も前記した通りである
[0210] このような W1〔一般式 [1 ' ]〕で示される本発明の化合物誘導体 (標識物質)として は、前記した如き本発明の化合物 [1]に由来するものであり、これらの好ましい具体 例も前記した如き本発明の化合物 [1]と同様である。
[0211] 上記した如きヌクレオチドを本発明に係る化合物 [1] (標識物質)で標識する方法と しては、自体公知の直接標識法や間接標識法〔例えば W096/17628号パンフレット（ 特開 2002-12782号公報）、米国特許第 6974873号、特開 2002-193991号公報、 W09 9/12544号パンフレット、特開平 11-80189号公報等に記載された方法等〕が挙げられ る。
[0212] また、ヌクレオチドを本発明に係る化合物 [1] (標識物質)で標識するに際しては、 本発明に係る化合物 [1]を用いる以外は、上記した如き標識法に基づく市販の標識 キットを使用すればより簡便である。
[0213] 尚、本発明において、これらの方法を利用するには、本発明に係る化合物 [1] (標 識物質)が結合した標識モノヌクレオチドが必要であるが、これら標識ヌクレオチドは 自体公知の方法 (例えば上記の標識方法等）により調製することができる。
[0214] 具体的には、例えば特開 2002-193991号公報（[0102]〜[0121]段落）に記載の方 法に準じて調製することができ、また、例えば以下のように調製することができる。
[0215] 即ち、例えば下記一般式 (a)で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式 (b)で示 される本発明に係る化合物 [1] (標識物質）〔スクシンィミジルエステル体〕とを反応さ せることにより容易に得られる。
Q― E ~ X ~ T10— Y—— NH2 (a)
[0216] (式中、 Qは Q1を示す。 Ql、 E、 X、 T10および Yは前記と同じ。 )
W— OSu (b) [0217] (式中、 Wは Wlを示し、 Suはスクシンイミド基を示す。 W1は前記と同じ。 )
[0218] また、前述した如き一般式（a)で示されるリンカ一部分の T10がー NH— CO であ る場合には、例えば以下のように調製することもできる。
[0219] 即ち、例えば、先ず下記一般式 (c)で示されるリンカ一の一部分 (部分リンカ一 A) を導入し、更に残りのリンカ一部分 (部分リンカ一 B)のスクシンィミジルエステル体と を反応させて、リンカ一が導入された下記一般式 (d)で示されるヌクレオチド誘導体 を調製する。更に、この下記一般式 (d)で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式（ b)で示される本発明の化合物 [1] (標識物質）〔スクシンィミジルエステル体〕とを反応 させること〖こより容易〖こ得られる。
—— E ~ X—— NH2 (
[0220] (式中、 Eおよび Xは前記と同じ。 )
Q—— E ~ X—— NH— CO— Y—— NH2 (d)
[0221] (式中、 Q、 E、 Xおよび Yは前記と同じ。 )
W— OSu (b)
[0222] (式中、 Wおよび Suは前記と同じ。 )
[0223] より具体的には、上記した如き本発明の化合物 [1] (標識物質)が結合した標識モ ノヌクレオチドのうち、蛍光標識 2' デォキシシチジン 5' トリホスフェート誘導体 および蛍光標識 2' デォキシゥリジン— 5' -トリホスフェート誘導体は、例えば以下 の如き合成経路に準じて合成することができる。
[0224] 尚、下記合成経路において使用される略称正式名は下記の通りである。
• MeOTfa：トリフルォロ酢酸メチル
•一 Tf a:トリフルォロアセチル基
•Bu SnH :水素化トリ（n—ブチル）スズ
3
• AIBN：ァゾイソブチロニトリル
•Et N :トリェチルァミン
3
• HO— Su： N ヒドロキシコハク酸イミド
•DMF:N, N ジメチルホルムアミド
•TMS— Acetamide :N, O ビス（トリメチルシリル）ァセトアミド •PdCl (CH CN) ：ビス（ァセトニトリル）ジクロロパラジウム（II)
2 3 2
•tris(TBAPP)：トリス（トリ— n—ブチルアンモ-ゥム）ピロホスフェート
•(EtO) PO :リン酸トリェチル
3
• TFP：トリー 2—フリルホスフィン
•Pd (dba) ：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0)
2 3
[0225] (1)部分リンカ一 (A)の合成。
尚、この化合物は、上記一般式 (A)で示されるリンカ一（― E— X— T10— Y— NH ―)において、 T10が一 NH— CO である場合の、 E— X— NH—に相当するィ匕 合物であって、 Eがー CH = CH および X力メチレン基である化合物である。
Bu3SnH
MeOTfa - AIBN
NH2 NHTfa ^ « Bu3Sn NHTfa
' Benzene
(51) reflux, 1.5h
} (52) (〜53)
(2)部分リンカ一 Bの合成。
尚、この化合物は、上記一般式 (A)で示されるリンカ一（― E— X— T10— Y— NH 一）において、 T10が一 NH— CO である場合の、 CO— Y— NH—に相当する 化合物であって、 Yがペンタメチレン基である化合物である。
Figure imgf000049_0001
[0227] (3) 2' デォキシシチジン— 5' -トリホスフェート誘導体〔一般式 (d)の化合物〕の合 成。
尚、この化合物は、ー般式[22 ] (Q1—E1—X1—T11 Y1—NH—W1)のQ1 -E1 -X1 -T11— Y1— NH に相当する化合物であって、 <31が2'—デォキシシ チジン、 E ^S CH = CH— XI力 Sメチレン基、 T11が一 NH— CO— Y1がペンタ メチレン基である化合物である。
Figure imgf000050_0001
Figure imgf000050_0002
S^C^, overnight O οη
NH4OH
8°Csoveriiight
HO (61)
(4)蛍光標識 2' デォキシシチジン 5' トリホスフェート誘導体〔本発明の化合物 [ 1] (標識物質)で標識されたモノヌクレオチド〕の合成。
尚、当該化合物は、一般式 [22' ] (Q1— El— XI— Ti l— Yl— NH— W1)にお ける Q1が 2'—デォキシシチジン、 E1が一 CH = CH―、 XIがメチレン基、 T11が一 NH— CO—、 Y1がペンタメチレン基であって、 W1が下記化合物 (14)又は (25)である 化合物である。
Figure imgf000051_0001
[0229]
Figure imgf000051_0002
[0230] 尚、上記以外の標識ヌクレオチドについても同様に、対応する原料を用いて上記に 準じて適宜合成することができる。
[0231] 本発明のピラゾール系シァニン色素は、ピラゾール骨格とインドール骨格がポリメチ ン鎖で結合された構造を有して 、ることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特 性を有するため、エネルギー効率の高い短波長領域の光源が使用可能となる、また これを標識剤 (標識物質)として用いて測定対象物を検出する場合、従来のシァニン 色素誘導体が有していた例えば水溶性が低い、色素同士の会合に起因する消光に より検出感度が低下する等の問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で 検出することが可能となる。
[0232] 3— 1.本発明の化合物 [51]
一般式 [50]で示される化合物のうち、 R1，と R2，、 R4'と ，、 R1，と R6，及び R2， R4 ，の何れかが、 O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示され る基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成する化合 物としては、例えば下記一般式 [51]で示されるものが挙げられる。
Figure imgf000052_0001
[0233] 〔式中、 "〜 "は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7"〜R1G"は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
[0234] (式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
[0235] (式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11" は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及 び R2"と R4"の何れかが、—O 基、—S 基、—COO 基及び一般式 [52]〜[54 ]
？ [52] ί ？ [53] ί ？ [54]
— S-N—
I I
0
[0236] (式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成する。また、 R1"^11",並びに R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される 基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する o ]
[0237] 一般式 [51]に於いて、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかは、
O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜 [54] [52] ？ [53] ^ ？ [54]
— S-N—
I I
O
(式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで
2価の基を形成しており、このような一般式 [51]で示される化合物としては、例えば 下記一般式 [55]〜[58]で示される化合物等が挙げられる。
Figure imgf000053_0001
(式中、 Tは—O 基、—S 基、 COO 基及び一般式 [4]〜 [6]で示される基か ら選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成し、 R3"〜RU"及 び nは前記に同じ。但し、 R3"〜RU"並びに Tで示される 2価の基のうち少なくとも 1つ は一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基 又はホルミル基を有する。 )
[56]
Figure imgf000054_0001
[0242] (式中、 R1"〜 "、 "〜 1"、 T及び nは前記に同じ。但し、 R1"〜 "、 "〜 R11" 並びに Tで示される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。 )
Figure imgf000054_0002
[0244] (式中、 R2"〜R5"、 ，，〜 1"、 T及び nは前記に同じ。但し、 R2"〜R5"、
並びに Tで示される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。 )
Figure imgf000054_0003
, 11»
[0246] (式中、 R1", "、 "〜 1"、 T及び nは前記に同じ。但し、 R1", "、 "〜 IT 並びに Tで示される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。 )
[0247] これらの化合物の中でも、例えば一般式 [55]で示される化合物、一般式 [57]で示 される化合物等が好ましい。
[0248] 一般式 [51]及び [55]〜[58]に於いて、 nは、通常 0〜3の整数、好ましくは 1又は 2、より好ましくは 2である。
[0249] 一般式 [51]及び [55]〜[58]に於いて、 "〜 "で示される、アミド結合を有して いてもよい、置換又は無置換アルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或 いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜5のものが挙げられ、具 体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、 イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n-ペンチル基、イソペンチル基、 sec— ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 se c-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基 、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec -ノニル基、 tert-ノニル基、ネオノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基 、 tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル 基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シクロ デシル基等が挙げられ、中でも、直鎖状のものが好ましぐ就中、例えばメチル基、ェ チル基、 n-プロピル基、 n-ブチル基、 n-ペンチル基等がより好ましい。
[0250] "〜 "で示される、アミド結合を有して 、てもよ 、、置換又は無置換アルキル基 としては、アミド結合を有さない、置換又は無置換アルキル基、或いは置換又は無置 換アルキル基のアルキル鎖中にアミド結合を通常 1〜： LO個、好ましくは 1〜3個、より 好ましくは 1個含有しているものが挙げられる。
[0251] アミド結合を有して 、てもよ 、無置換アルキル基の好ま 、具体例としては、例えば 下記一般式 [59]
—— Tj— (CONH-T2)— R"1 [59]
[0252] (式中、 R21は水素原子又はアルキル基を表し、 T及び m個の Tはアルキレン基を表
1 2
し、 mは 0〜 10の整数を表す。）で示される基が挙げられる。
[0253] 一般式 [59]に於いて、 R21で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは 環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体的 には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソ ブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、ネオブチル基、 n_ペンチル基、イソペンチ ル基、 sec-ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキ シル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへ プチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソ ォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ -ル基、 sec-ノニル基、 tert-ノニル基、ネオノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 se c-デシル基、 tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シク 口ペンチル基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノニル 基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0254] T及び m個の Tで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の
1 2
何れでもよぐ通常炭素数 2〜 10、好ましくは 2〜8のものが挙げられ、具体的には、 例えばメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、 へキサメチレン基、ヘプタメチレン基、オタタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン 基等の直鎖状アルキレン基、例えばェチリデン基、プロピレン基、イソプロピリデン基 、 1-メチルトリメチレン基、 2-メチルトリメチレン基、 1,1-ジメチルエチレン基、 1,2-ジメ チルエチレン基、ェチルエチレン基、 1-メチルテトラメチレン基、 1,1-ジメチルトリメチ レン基、 2, 2-ジメチルトリメチレン基、 2-ェチルトリメチレン基、 1-メチルペンタメチレン 基、 2-メチルペンタメチレン、 1,3-ジメチルテトラメチレン、 3-ェチルテトラメチレン、 1- メチルへキサメチレン基、 1-メチルヘプタメチレン基、 1,4-ジェチルテトラメチレン基、 2,4-ジメチルヘプタメチレン基、 1-メチルオタタメチレン基、 1-メチルノナメチレン基等 の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基， 1,3-シクロブチレン基、 1,3-シク 口ペンチレン基、 1,4-シクロへキシレン基、 1,5-シクロへプチレン基、 1,5-シクロォクチ レン基、 1,5-シクロノ-レン基、 1,6-シクロデシレン基等の環状アルキレン基等が挙げ られる。
[0255] mは、通常 0〜10の整数、好ましくは 0〜3の整数、より好ましくは 0又は 1である。
[0256] 一般式 [51]及び [55]〜[58]に於いて、 "〜 "で示される、アミド結合を有して いてもよい、置換アルキル基の置換基としては、当該アミド結合を有していてもよいァ ルキル基中の水素原子の一部が置換基で置換されているものが挙げられ、当該置 換基としては、例えば一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、水酸基、 シァノ基、ホルミル基、チオール基等が挙げられ、中でも一般式 [2]で示される基又 は一般式 [3]で示される基が好ましい。 [0257] "〜 "で示される、アミド結合を有する置換アルキル基としては、例えば上記一 般式 [59]で示されるアミド結合を有する無置換アルキル基の水素原子の一部が上 記一般式 [2]で示される基又は一般式 [3]で示される基で置換されたものが好ましく 挙げられる。
[0258] 一般式 [2]及び [3]に於いて、 R12及び R13で示されるアルカリ金属原子としては、 例えばリチウム原子、ナトリウム原子、カリウム原子、ルビジウム原子等が挙げられ、中 でもナトリウム原子又はカリウム原子が好ましぐ就中ナトリウム原子がより好ましい。
[0259] R12及び R13で示される有機アンモ-ゥムイオンとしては、例えばトリアルキルアンモ -ゥムイオン等が挙げられる。当該トリアルキルアンモ-ゥムイオンとしては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10のもの、好ましくは 1〜6のもの が挙げられ、具体的には、例えばトリメチルアンモ -ゥムイオン、トリェチルアンモ-ゥ ムイオン、トリ n-プロピルアンモ-ゥムイオン、トリイソプロピルアンモ-ゥムイオン、トリ ブチルアンモ -ゥムイオン、トリペンチルアンモ -ゥムイオン、トリへキシルアンモ-ゥ ムイオン、トリへプチルアンモ -ゥムイオン、トリオクチルアンモ -ゥムイオン、トリノニル アンモ-ゥムイオン、トリデシルアンモ -ゥムイオン、トリシクロプロピルアンモ-ゥムィ オン、トリシクロプチルアンモ -ゥムイオン、トリシクロペンチルアンモ -ゥムイオン、トリ シクロへキシルアンモ -ゥムイオン、トリシクロへプチルアンモ -ゥムイオン、トリシクロ ォクチルアンモ -ゥムイオン、トリシクロノ-ルアンモ -ゥムイオン、トリシクロデシルァ ンモ -ゥムイオン等が挙げられ、中でもトリメチルアンモ -ゥムイオン又はトリェチルァ ンモ -ゥムイオンが好ましぐ就中、トリェチルアンモ -ゥムイオンがより好ましい。
[0260] 一般式 [2]に於いて、 R12で示される炭素数 1〜： LOのアルキル基としては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6、より好まし くは 1〜3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基 、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n-ペン チノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペンチノレ基、ネオペンチノレ基、 n-へ キシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n- ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基 、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基 、 n-ノニル基、イソノニル基、 sec-ノニル基、 tert-ノニル基、イソノニル基、 n-デシル基
、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シ クロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチ ル基、シクロノ-ル基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0261] 一般式 [2]で示される基の好ましい具体例としては、例えばカルボキシル基（一 CO OH)、そのァ-オン〔カルボキシレート（— COO_)〕、そのアルカリ金属塩（例えばリ チウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモ-ゥム塩、その有機 アンモ-ゥム塩（例えばトリメチルアンモ -ゥム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、トリプロ ピルアンモ-ゥム塩等）等が挙げられ、中でも、例えばカルボキシル基、カルボキシレ ート基、これらのナトリウム塩等が好ましい。以下、これらを総称して「カルボキシル基 等」と略記する場合がある。
[0262] 一般式 [3]で示される基の好ましい具体例としては、例えばスルホ基（一 SO H)、
3 そのァ-オン〔スルホネート（一 SO―)〕、そのアルカリ金属塩 (例えばリチウム塩、ナト
3
リウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモ-ゥム塩、その有機アンモ-ゥム 塩（例えばトリメチルアンモ -ゥム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、トリプロピルアンモ- ゥム塩等）等が挙げられ、中でも、例えばスルホ基、スルホネート基、これらのナトリウ ム塩等が好ましい。以下、これらを総称して「スルホ基等」と略記する場合がある。
[0263] 尚、一般式 [51]及び [55]〜 [58]に於ける "〜 "で示される、アミド結合を有し ていてもよい、置換アルキル基の置換基 (即ち、一般式 [2]で示される基、一般式 [3 ]で示される基、水酸基、シァノ基、ホルミル基又はチオール基）は、当該アルキル基 の末端の水素原子と置換されて 、るものが好ま 、。
[0264] 一般式 [51]及び [56]〜 [58]に於ける R1"及び R2"の好ましい具体例としては、例 えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、 n-ブチル基、 n-ペンチル基、 n-へキシル基 等の炭素数 1〜6の直鎖状アルキル基の末端の水素原子が上記置換基 (即ち、一般 式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、水酸基、シァノ基、ホルミル基又はチ オール基)で置換されたものが挙げられ、中でも一般式 [2]で示される基又は一般式 [3]で示される基で置換されたものが好ましい。
[0265] また、一般式 [51]、 [55]、 [57]及び [58]に於ける、 R3"と R4"の好ましい組み合 わせ又は/及び R5"と R6"の好ましい組み合わせとしては、何れか一方 (即ち、 R3"と R4"の何れか一方及び R5"と R6"の何れか一方）が炭素数 1〜6のアルキル基 (例え ばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 s ec-ブチノレ基、 tert-ブチノレ基、 n-ペンチノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert -ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 te rt-へキシル基、ネオへキシル基等)であり、他方が、一般式 [2]で示される基、一般 式 [3]で示される基、水酸基、シァノ基、ホルミル基又はチオール基を置換基として 有する炭素数 1〜6のアルキル基（中でも、一般式 [2]で示される基又は一般式 [3] で示される基を置換基として有するものが好まし 、。 )であるものが挙げられる。
[0266] 更にまた、一般式 [51]及び [56]〜[58]に於ける R3"と R4"又は R5"と R6"の一方 が Tで示される 2価の基を形成する場合は、その他方 (即ち、一般式 [56]に於ける R3 "及び R6"、一般式 [57]に於ける R5、一般式 [58]に於ける R3")が、炭素数 1〜6の アルキル基（例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基 、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n_ペンチル基、イソペンチル基、 sec -ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 s ec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基等）であるのが好ましい。
[0267] 一般式 [51]及び [55]〜 [58]に於いて、 R7"〜R1C>"で示される置換又は無置換の アルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常 炭素数 1〜6、好ましくは 1〜3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェ チル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチノレ基、 n-ペンチノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペンチノレ基、 ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基 、ネオへキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキ シル基等が挙げられる。
[0268] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のァルケ-ル基のァルケ-ル基としては、直 鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 2〜6、好ましくは 2〜4のもの が挙げられ、具体的には、例えばビュル基、ァリル基、 1-プロぺニル基、イソプロべ- ル基、 3-ブテニル基、 2-ブテニル基、 1-ブテニル基、 1 ,3-ブタジェニル基、 4-ペンテ -ル基、 3-ペンテ-ル基、 2-ペンテ-ル基、 1-ペンテ-ル基、 1,3-ペンタジェ -ル基 、 2,4-ペンタジェ-ル基、 1,1-ジメチル -2-プロぺ-ル基、 1-ェチル -2-プロぺ-ル基 、 1,2-ジメチル- 1-プロべ-ル基、 1-メチル -1-ブテュル基、 5-へキセ-ル基、 4-へキ セ-ル基、 3-へキセ-ル基、 2-へキセ-ル基、 1-へキセ-ル基、 1-シクロプロぺ-ル 基、 2-シクロペンテ-ル基、 2,4-シクロペンタンジェ -ル基、 1-シクロへキセ-ル基、 2 -シクロへキセ-ル基、 3-シクロへキセ -ル基等が挙げられる。
[0269] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のアルキ-ル基のアルキ-ル基としては、通 常炭素数 2〜6、好ましくは 2〜4のものが挙げられ、具体的には、例えばェチニル基 、 2-プロピ-ル基、 3-プチ-ル基、 1-メチル -2-プロピ-ル基、 4-ペンチ-ル基、 2-メ チル -4-ペンチニル基、 5-へキシュル基等が挙げられる。
[0270] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のァリール基のァリール基としては、通常炭 素数 6〜10のものが挙げられ、具体的には、例えばフエ-ル基、ナフチル基等が挙 げられる。
[0271] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のアルコキシ基のアルコキシ基としては、直 鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜6、好ましくは 1〜3のもの が挙げられ、具体的には、例えばメトキシ基、エトキシ基、 n_プロポキシ基、イソプロボ キシ基、 n-ブトキシ基、イソブトキシ基、 sec-ブトキシ基、 tert-ブトキシ基、 n-ペンチル ォキシ基、イソペンチルォキシ基、 sec-ペンチルォキシ基、 tert-ペンチルォキシ基、 ネオペンチルォキシ基、 n-へキシルォキシ基、イソへキシルォキシ基、 sec-へキシル ォキシ基、 tert-へキシルォキシ基、ネオへキシルォキシ基、シクロプロポキシ基、シク 口ペンチルォキシ基、シクロへキシルォキシ基等が挙げられる。
[0272] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のァリールォキシ基のァリールォキシ基とし ては、通常炭素数 6〜10のものが挙げられ、具体的には、例えばフエニルォキシ基、 ナフトキシ基等が挙げられる。
[0273] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のアルキルチオ基のアルキルチオ基として は、アルコキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、直鎖状、分枝状 或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜6、好ましくは 1〜3のものが挙げられ、 具体的には、例えばメチルチオ基、ェチルチオ基、 n-プロピルチオ基、イソプロピル チォ基、 n-ブチルチオ基、イソブチルチオ基、 sec-ブチルチオ基、 tert-ブチルチオ 基、 n-ペンチルチオ基、イソペンチルチオ基、 sec-ペンチルチオ基、 tert-ペンチル チォ基、ネオペンチルチオ基、 n-へキシルチオ基、イソへキシルチオ基、 sec-へキシ ルチオ基、 tert-へキシルチオ基、ネオへキシルチオ基、シクロプロピルチオ基、シク ロブチルチオ基、シクロペンチルチオ基、シクロへキシルチオ基等が挙げられる。
[0274] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のァリールチオ基のァリールチオ基としては 、ァリールォキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、通常炭素数 6〜 10のものが挙げられ、具体的には、例えばフエ-ルチオ基、ナフチルチオ基等が挙 げられる。
[0275] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のアルキルスルホ-ル基のアルキルスルホ -ル基としては、スルホ基（ SO OH)の OH基がアルキル基で置換されたものが
2
挙げられ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜6のものが挙 げられ、具体的には、例えばメチルスルホ -ル基、ェチルスルホ -ル基、 n-プロピル スルホ-ル基、イソプロピルスルホ-ル基、 n-ブチルスルホ -ル基、イソブチルスルホ 二ノレ基、 sec-ブチノレスノレホ-ノレ基、 tert-ブチノレスノレホ-ノレ基、 n-ペンチノレスノレホ- ル基、イソペンチルスルホ -ル基、 sec-ペンチルスルホ -ル基、 tert-ペンチルスルホ -ル基、ネオペンチルスルホ -ル基、 n-へキシルスルホ -ル基、イソへキシルスルホ ニル基、 sec-へキシルスルホ -ル基、 tert-へキシルスルホ -ル基、ネオへキシルスル ホ-ル基、シクロプロピルスルホ-ル基、シクロプチルスルホ -ル基、シクロペンチル スルホ-ル基、シクロへキシルスルホ -ル基等が挙げられる。
[0276] R7"〜R1G"で示される置換又は無置換のァリールスルホ-ル基のァリールスルホ- ル基としては、スルホ基（ SO OH)の OH基がァリール基で置換されたものが挙
2
げられ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 6〜10のものが挙 げられ、具体的には、例えばフエ-ルスルホ-ル基、ナフチルスルホ -ル基等が挙げ られる。
[0277] R7"〜R1G"で示される置換力ルバモイル基としては、例えば力ルバモイル（ CON H )基の水素原子 1〜2個が炭素数 1〜6のアルキル基又は炭素数 6〜10のァリー
2
ル基で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えば N-メチルカルバモイル基、 N -ェチルカルバモイル基、 N-n-プロピル力ルバモイル基、 N-イソプロピル力ルバモイ ル基、 N-n-ブチルカルバモイル基、 N-tert-ブチルカルバモイル基、 N- n-へキシル 力ルバモイル基、 N-シクロへキシルカルバモイル基、 N-メチルェチルカルバモイル基 、 N-ジシクロへキシルカルバモイル基等の N-アルキル力ルバモイル基、例えば N-フ ェ-ルカルバモイル基、 N-ジフエ-ルカルバモイル基等の N-ァリール力ルバモイル 基等が挙げられる。
[0278] R7"〜R1G"で示される置換スルファモイル基としては、例えばスルファモイル（― SO
NH )基の水素原子 1〜2個が炭素数 1〜6のアルキル基又は炭素数 6〜10のァリ
2 2
ール基で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えば N-メチルスルファモイル 基、 N-ェチルスルファモイル基、 N-n-プロピルスルファモイル基、 N-イソプロピルス ルファモイル基、 N-n-ブチルスルファモイル基、 N-tert-ブチルスルファモイル基、 N- n-へキシルスルファモイル基、 N-シクロへキシルスルファモイル基、 N-メチルェチル スルファモイル基、 N-ジシクロへキシルスルファモイル基等の N-アルキルスルファモ ィル基、例えば N-フエ-ルスルファモイル基、 N-ジフエ-ルスルファモイル基等の N- ァリールスルファモイル基等が挙げられる。
[0279] R^ R10"で示される置換ウレイド基としては、ウレイド基（一 NHCONH )の水素
2 原子 1〜3個が置換されたものが挙げられ、例えば一般式 [4]〜[7]
H O H O
— N-C— NHR14 [4] — N— C-NR 4R15 [6]
R16 0 R16 0
— N— C-NHR14 [5] — N— C-NR14R15 [7]
[0280] (式中、 R14〜R16は夫々独立して、ハロゲン原子、アルキル基、スルホアミド基、カル ボアミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基又はアミノ基を表す 。）で示される基が挙げられる。
[0281] 一般式 [4]〜 [7]に於いて、 R14〜R16で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ 素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
[0282] R14〜R16で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよ ぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体的には、例えばメチ ル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブ チノレ基、 tert-ブチノレ基、 n-ペンチノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペン チル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へ キシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert- ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert -ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec-ノ-ル基、 tert-ノ-ル 基、イソノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデ シル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シ クロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0283] R14〜R16で示されるスルホアミド基（一 NHSO R)としては、ァミノ基の水素原子が
2
アルキルスルホ-ル基で置換されたもの（アルキルスルホアミド基）又はァリールスル ホ-ル基で置換されたもの（ァリールスルホアミド基）が挙げられる。
[0284] 当該アルキルスルホアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ 通常炭素数 1〜10のもの、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体的には、例えばメ チルスルホアミド基、ェチルスルホアミド基、 n-プロピルスルホアミド基、イソプロピルス ルホアミド基、 n-ブチルスルホアミド基、イソブチルスルホアミド基、 sec-ブチルスルホ アミド基、 tert-ブチルスルホアミド基、 n-ペンチルスルホアミド基、イソペンチルスルホ アミド基、 sec-ペンチルスルホアミド基、 tert-ペンチルスルホアミド基、ネオペンチル スルホアミド基、 n-へキシルスルホアミド基、イソへキシルスルホアミド基、 sec-へキシ ルスルホアミド基、 tert-へキシルスルホアミド基、ネオへキシルスルホアミド基、シクロ プロピルスルホアミド基、シクロプチルスルホアミド基、シクロペンチルスルホアミド基、 シクロへキシルスルホアミド基、 n-へプチルスルホアミド基、イソへプチルスルホアミド 基、 sec-へプチルスルホアミド基、 tert-へプチルスルホアミド基、ネオへプチルスルホ アミド基、 n-ォクチルスルホアミド基、イソォクチルスルホアミド基、 sec-ォクチルスルホ アミド基、 tert-ォクチルスルホアミド基、ネオォクチルスルホアミド基、 n-ノニルスルホ アミド基、イソノニルスルホアミド基、 sec-ノニルスルホアミド基、 tert-ノニルスルホアミ ド基、イソノニルスルホアミド基、 n-デシルスルホアミド基、イソデシルスルホアミド基、 s ec-デシルスルホアミド基、 tert-デシルスルホアミド基、ネオデシルスルホアミド基、シ クロへプチルスルホアミド基、シクロォクチルスルホアミド基、シクロノ-ルスルホアミド 基、シクロデシルスルホアミド基等挙げられる。
[0285] 当該ァリールスルホアミド基としては、通常炭素数 6〜10のものが挙げられ、具体的 には、例えばフエニルスルホアミド基、ナフチルスルホアミド基等が挙げられる。
[0286] R14〜R16で示されるカルボアミド基（一 NHCOR)としては、ァミノ基の水素原子が ァシル基で置換されたものが挙げられる。当該ァシル基としては、例えば脂肪族カル ボン酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。
[0287] 脂肪族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でも よぐまた更に鎖中に二重結合を有していてもよぐ通常炭素数 2〜20、好ましくは炭 素数 2〜15、より好ましくは 2〜10、更に好ましくは 2〜6のものが挙げられ、具体的 には、例えばァセチルアミド基、プロピオ-ルアミド基、ブチリルアミド基、イソブチリル アミド基、バレリルアミド基、イソバレリルアミド基、ビバロイルアミド基、へキサノィルアミ ド基、ヘプタノィルアミド基、オタタノィルアミド基、デカノィルアミド基、ラウロイルアミド 基、ミリストイルアミド基、ノルミトイルアミド基、ステアロイルアミド基、ィコサノィルアミド 基、アタリロイルアミド基、メタクリロイルアミド基、クロトノィルアミド基、ォレオイルアミド 基等が挙げられる。
[0288] 芳香族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、通常炭素数 7〜15、好ましくは 7 〜： L 1のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾィルアミド基、ナフトイルアミド基 、アントイルアミド基等が挙げられる。
[0289] R7"〜R1C)"で示される置換アミノ基としては、ァミノ基の水素原子 1〜2個が置換基 で置換されたものが挙げられ、これら置換基としては、例えばアルキル基、アルコキシ カルボニル基、ァシル基、スルホ基等が挙げられる。
[0290] 置換アミノ基の置換基として挙げられるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或 ヽ は環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体 的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、ィ ソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n-ペンチル基、イソペンチル基、 sec-ぺ ンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec- へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 se c-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec- ノニル基、 tert-ノニル基、イソノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 t ert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基 、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シクロデ シル基等が挙げられる。
[0291] 置換アミノ基の置換基として挙げられるアルコキシカルボ-ル基としては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙 げられ、具体的には、例えばメトキシカルボ-ル基、エトキシカルボ-ル基、 n-プロボ キシカルボ-ル基、イソプロポキシカルボ-ル基、 n-ブトキシカルボ-ル基、イソブト キシカルボ-ル基、 sec-ブトキシカルボ-ル基、 tert-ブトキシカルボ-ル基、 n-ペン チルォキシカルボ-ル基、イソペンチルォキシカルボ-ル基、 sec-ペンチルォキシカ ルボニル基、 tert-ペンチルォキシカルボ-ル基、ネオペンチルォキシカルボ-ル基 、 n-へキシルォキシカルボ-ル基、イソへキシルカルボ-ル基、 sec-へキシルォキシ カルボ-ル基、 tert-へキシルォキシカルボ-ル基、ネオへキシルォキシカルボ-ル 基、 n-ヘプチルォキシカルボニル基、イソへプチルォキシカルボニル基、 sec-へプチ ルォキシカルボ-ル基、 tert-ヘプチルォキシカルボ-ル基、ネオへプチルォキシカ ルボニル基、 n-ォクチルォキシカルボ-ル基、イソォクチルォキシカルボ-ル基、 sec -ォクチルォキシカルボ-ル基、 tert-ォクチルォキシカルボ-ル基、ネオォクチルォ キシカルボ-ル基、 n-ノ-ルォキシカルボ-ル基、イソノ-ルォキシカルボ-ル基、 se c-ノ-ルォキシカルボ-ル基、 tert-ノ-ルォキシカルボ-ル基、ネオノ-ルォキシカ ルボニル基、 n-デシルォキシカルボ-ル基、イソデシルォキシカルボ-ル基、 sec-デ シルォキシカルボ-ル基、 tert-デシルォキシカルボ-ル基、ネオデシルォキシカル ボ-ル基、シクロプロポキシカルボ-ル基、シクロブトキシカルボニル基、シクロペン チルォキシカルボ-ル基、シクロへキシルォキシカルボニル基、シクロへプチルォキ シカルボニル基、シクロォクチルォキシカルボ-ル基、シクロノ-ルォキシカルボ-ル 基、シクロデシルォキシカルボ-ル基等が挙げられる。
[0292] 置換アミノ基の置換基として挙げられるァシル基としては、例えば脂肪族カルボン 酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。 [0293] 当該脂肪族カルボン酸由来のァシル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でも よぐまた更に鎖中に二重結合を有していてもよぐ通常炭素数 2〜20、好ましくは炭 素数 2〜15、より好ましくは 2〜10、更に好ましくは 2〜6のものが挙げられ、具体的 には、例えばァセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、 イソバレリル基、ビバロイル基、へキサノィル基、ヘプタノィル基、オタタノィル基、デカ ノィル基、ラウロイル基、ミリストイル基、ノ レミトイル基、ステアロイル基、ィコサノィル 基、アタリロイル基、メタクリロイル基、クロトノィル基、ォレオイル基等が挙げられる。
[0294] 当該芳香族カルボン酸由来のァシル基としては、通常炭素数 7〜15、好ましくは 7 〜： L 1のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾィル基、ナフトイル基、アントイル 基等が挙げられる。
[0295] R7"〜R1C>"で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素 原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
[0296] R7"〜R1C>"で示される芳香族へテロ環チォ基としては、チオール基（-SH)の水素 原子が芳香族へテロ環基で置換されたものである。当該芳香族へテロ環基としては、 例えば 5員環又は 6員環であり、異性原子として 1〜3個の例えば窒素原子、酸素原 子、硫黄原子等のへテロ原子を含んでいるもの等が好ましぐ具体的には、例えばフ リル基、ピロリル基、インドリル基、プリ-ル基、キノリル基、ピリジル基、ビラジル基、ピ リミジル基、ォキサゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、ビラ-ル基等が挙げられ る。
[0297] 一般式 [51]及び [55]〜 [58]に於いて、 R7"〜R1C)"で示される、置換アルキル基、 置換アルケニル基、置換アルキニル基、置換ァリール基、置換アルコキシ基、置換ァ リールォキシ基、置換アルキルチオ基、置換ァリールチオ基、置換アルキルスルホ二 ル基又は置換ァリールスルホ-ル基の置換基としては、例えばハロゲン原子、スルホ アミド基、カルボアミド基、ホスホ基 (リン酸基）、上記一般式 [2]で示される基、上記 一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基、ホルミル基等が挙げられる
[0298] 置換基として挙げられる、ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体 例としては、一般式 [4]〜 [7]に於ける R14〜R16で示されるハロゲン原子、スルホアミ ド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
[0299] 一般式 [51]及び [55]〜[58]に於ける R7"〜R1G"の好ましい例としては、 "〜!^1
"中の 3つが水素原子であり、残りの 1つが一般式 [3]で示されるスルホン酸由来の 基であるものが挙げられ、当該スルホン酸由来の基の中でも、例えばスルホ基、その ァ-オン (スルホネート）、そのアルカリ金属塩、有機アンモ-ゥム塩等が好ましぐ就 中、例えばスルホ基、スルホネート、そのアルカリ金属塩 (例えばナトリウム塩等）等が より好ましぐ特に、 R8"が一般式 [3]で示される基であるものが好ましい。
[0300] 一般式 [51]及び [55]〜 [58]に於いて、 R11"で示される置換又は無置換のアルキ ル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素 数 1〜10、好ましくは 1〜10のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェチ ル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 ter t-ブチル基、 n-ペンチル基、イソペンチル基、 sec-ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネ ォペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、 ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル 基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチ ル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec-ノ-ル基、 tert-ノ-ル基、イソ ノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデシル基 、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロへ プチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0301] R11"で示される置換又は無置換のァルケ-ル基のァルケ-ル基としては、直鎖状、 分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 2〜6、好ましくは 2〜4のものが挙げ られ、具体的には、例えばビュル基、ァリル基、 1-プロべ-ル基、イソプロべ-ル基、 3-ブテュル基、 2-ブテュル基、 1-ブテュル基、 1,3-ブタジェ-ル基、 4-ペンテ-ル基 、 3-ペンテ-ル基、 2-ペンテ-ル基、 1-ペンテ-ル基、 1,3-ペンタジェ-ル基、 2,4- ペンタジェ-ル基、 1,1-ジメチル- 2-プロぺ-ル基、 1-ェチル -2-プロぺ-ル基、 1,2- ジメチル- 1-プロぺ-ル基、 1-メチル -1-ブテュル基、 5-へキセ-ル基、 4-へキセ-ル 基、 3-へキセ-ル基、 2-へキセ-ル基、 1-へキセ-ル基、 1-シクロプロぺ-ル基、 2- シクロペンテ-ル基、 2,4-シクロペンタンジェ -ル基、 1-シクロへキセ-ル基、 2-シク 口へキセ -ル基、 3-シクロへキセ -ル基等が挙げられる。
[0302] R11"で示される置換又は無置換のアルキニル基のアルキ-ル基としては、通常炭 素数 2〜6、好ましくは 2〜4のものが挙げられ、具体的には、例えばェチュル基、 2- プロピ-ル基、 3-プチ-ル基、 1-メチル -2-プロピ-ル基、 4-ペンチ-ル基、 2-メチル
-4-ペンチニル基、 5-へキシュル基等が挙げられる。
[0303] R11"で示される置換又は無置換のァリール基のァリール基としては、通常炭素数 6
〜10のものが挙げられ、具体的には、例えばフ -ル基、ナフチル基等が挙げられ る。
[0304] R11"で示される、置換アルキル基、置換アルケニル基、置換アルキ-ル基又は置 換ァリール基の置換基としては、例えばノヽロゲン原子、スルホアミド基、カルボアミド 基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基、アミノ基等が挙げられ、当 該ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体例は、一般式 [14]〜 [17 ]に於ける R14〜R16で示されるハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例 示と同様のものが挙げられる。
[0305] R11"の中でも、無置換アルキル基が好ましぐ就中、例えばメチル基、ェチル基、 n- プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、 n-ペンチル基、 n-へキシル基等がより好ま しい。
[0306] 一般式 [51]に於いて、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで 形成される 2価の基、即ち、— O—基、— S—基、— COO—基及び一般式 [52]〜[ 54] [52] 1 ？ [53] 1 ？ [54]
— Ν— — C-N— — S-N—
I I
Ο
[0307] (式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 形成される 2価の基、詳しくは、一般式 [55]〜 [58]に於ける Tで示される 2価の基と しては、例えば一般式 [60]
R20
— T3- 18-(CH)p-R19-T5- [60] [0308] 〔式中、 R18及び R19は夫々独立して— O—基、— S—基、— COO—基又は一般式 [ 52]〜 [54]で示される基を表し、 R2は下記一般式 [70]〜 [72]
D50 n R50 n R50
I 51 [70] ? 51 [71] i? ? 51 [72]
— N-R51 — C-N-R51 — S-N-R51
I I
0
[0309] (式中、 R51は、水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァ リール基を表し、 R5は前記に同じ。）で示される基、水素原子、一般式 [2]で示され る基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を表し 、 T及び Tは夫々独立してアルキレン基を表し、 pは 1〜20の整数を表す。〕で示さ
3 5
れる基が挙げられる。
[0310] 一般式 [52]〜 [54]及び [70]〜 [72]に於いて、 R51で示される置換又は無置換の アルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよぐ通常 炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、ェ チル基、 n-プロピル基、イソピロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 t ert-ブチノレ基、 n-ペンチノレ基、イソペンチノレ基、 sec-ペンチノレ基、 tert-ペンチノレ基、 ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基
、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル 基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチ ル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec-ノ-ル基、 tert-ノ-ル基、ネ オノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基、ネオデシル 基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロ ヘプチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シクロデシル基等が挙げられる。
[0311] R51で示される置換又は無置換のァルケ-ル基としては、直鎖状、分枝状或いは環 状の何れでもよぐ通常炭素数 2〜10、好ましくは 2〜6のものが挙げられる、具体的 には、例えばビュル基、ァリル基、 1-プロべ-ル基、イソプロべ-ル基、 3-ブテュル基 、 2-ブテュル基、 1-ブテュル基、 1,3-ブタジェ-ル基、 4-ペンテ-ル基、 3-ペンテ- ル基、 2-ペンテ-ル基、 1-ペンテ-ル基、 1,3-ペンタジェ-ル基、 2,4-ペンタジェ- ル基、 1,1-ジメチル- 2-プロべ-ル基、 1-ェチル -2-プロべ-ル基、 1,2-ジメチル-1- プロぺ-ル基、 1-メチル -1-ブテュル基、 5-へキセ-ル基、 4-へキセ-ル基、 3-へキ セ-ル基、 2-へキセ-ル基、 1-へキセ-ル基、ヘプテュル基、オタテュル基、ノネ- ル基、デセ-ル基、 1-シクロプロべ-ル基、 2-シクロペンテ-ル基、 2,4-シクロペンタ ンジェ-ル基、 1-シクロへキセ-ル基、 2-シクロへキセ-ル基、 3-シクロへキセ-ル 基、シクロヘプテニル基、シクロオタテニル基、シクロノネ-ル基、シクロデセニル基等 が挙げられる。
[0312] R51で示される置換又は無置換のァリール基としては、通常炭素数 6〜10のものが 挙げられ、具体的には、例えばフエニル基、ナフチル基等が挙げられる。
[0313] R51で示される置換アルキル基、置換アルケニル基又は置換ァリール基の置換基と しては、例えば炭素数 1〜10のアルキル基、ハロゲン原子、スルホアミド基、カルボア ミド基、ホスホ基 (リン酸基)、上記一般式 [2]で示される基、上記一般式 [3]で示され る基、アミノ基、水酸基、チオール基、ホルミル基等が挙げられる。
[0314] 置換基として挙げられる炭素数 1〜10のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或い は環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜6であり、具体的には、例 えばメチル基、ェチル基、 n_プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル基、イソブチル基 、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基、 sec-へキシル基、 t ert-へキシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル基、 sec-ヘプチル基 、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチル基、 sec-ォクチル 基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基、 sec-ノ-ル基、 tert -ノニル基、ネオノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシル基、 tert-デシル基 、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシ ル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シクロデシル基等が挙 げられる。
[0315] 置換基として挙げられる、ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体 例としては、一般式 [4]〜 [7]に於ける R14〜R16で示されるハロゲン原子、スルホアミ ド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
[0316] 一般式 [60]に於いて、 T及び Tで示されるアルキレン基としては、直鎖状又は分
3 5
枝状でもよぐ好ましくは直鎖状のものであり、通常炭素数 1〜6のものであり、具体的 には、例えばメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、テトラメチレン 基、へキサメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばェチリデン基、プロピレン基、 イソプロピリデン基、ェチルエチレン基、 1,2-ジメチルエチレン基、 1,2-ジェチルェチ レン基、 1,2-ジ- n-プロピルエチレン基、 1,2-ジ- n-ブチルエチレン基等の分枝状アル キレン基等が挙げられ、中でも直鎖状アルキレン基が好ましぐ就中、エチレン基、ぺ ンタメチレン基等がより好まし 、。
[0317] pは、通常 1〜20の整数、好ましくは 1〜10の整数、より好ましくは 1〜6の整数であ る。
[0318] p個の R2Gのうち少なくとも 1つは、一般式 [70]〜[72]、一般式 [2]で示される基、 一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基であるものが 好ましぐ中でも一般式 [2]で示される基、一般式 [71]で示される基であるものがより 好ましい。
[0319] 一般式 [71]で示される基の中でも、特に下記一般式 [73]
— CONH— T4— COOR 12 [73]
[0320] (式中、 Τはアルキレン基を表し、 R12は前記に同じ。）で示される基が好ましい。
4
[0321] 一般式 [73]に於いて、 Τで示されるアルキレン基としては、一般式 [60]に於ける
4
Τ及び Τで示されるアルキレン基と同様のものが挙げられる。
3 5
[0322] 一般式 [51]及び [55]〜[58]に於ける "〜!^11"中に少なくとも 1つ含有される一 般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又は ホルミル基の中でも、一般式 [2]で示される基又は一般式 [3]で示される基が好まし い。
[0323] 本発明の化合物中に含有される一般式 [3]で示される基 (スルホ基等）は、水溶性 を高め、該色素分子間での会合による蛍光消光を抑制し、蛍光強度を高めるため多 く導入されている方が好ましぐ本発明の化合物中に通常 1〜4個、好ましくは 2〜4 個含有される。
[0324] また、本発明の化合物中に含有される一般式 [2]で示される基 (カルボキシル基等 )は、被標識物質と結合し得る基 (例えばスクシンイミド基、ノルボルネン基等の反応 活性基)を容易に導入することができるため、本発明の化合物中に通常 1〜3個、好 ましくは 1〜2個含有される。 [0325] ，，〜 1，，、或 、は R1，，と R2，，、 R4，，と R5，，、 R1，，と R6，，及び R2，，と R4，，の何れかで形成 される 2価の基 (即ち、一般式 [55]〜 [58]に於ける Tで示される 2価の基）に少なくと も 1つ含有される一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸 基、チオール基又はホルミル基 (以下、「本発明の反応性基」と略記する場合がある。 )が、 "〜!^11"に含有される場合は、これら本発明の反応性基力 1"〜!^11"として 存在するもの (即ちピラゾール骨格若しくはインドール骨格に当該反応性基が直接結 合するもの）又は R R11"に置換基として含有されるもののどちらでもよいが、当該 反応性基が R11"に含有される場合には、置換基として含有されるのが好ましい。
[0326] また、本発明の反応性基力 と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れか で形成される 2価の基 (即ち、一般式 [55]〜 [58]に於ける Tで示される 2価の基）に 含有される場合は、例えば上記一般式 [60]に於ける R2に含有されるのが好ましい
[0327] 上記一般式 [55]〜[58]で示される化合物の中でも nが 1又は 2であるものが好まし ぐ就中、 nが 2であるものがより好ましい。
[0328] また、本発明の化合物 [51]の中でも、例えば下記一般式 [51 ' ]
[0329]
Figure imgf000072_0001
していてもよいアルキル基を表し、 R8"bは一般式 [3]で示される基を表し、 R11' はァ ルキル基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、 R1' と R2"b、 R4"bと R5"b、 R1' と R6"b 及び R2"bと R4"bの何れかが、— O—基、— S—基、— COO—基及び一般式 [52]〜 [54]で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を 形成する。また、！^， 〜!^11， 、並びに R1' と R2，，b、 R4，，bと R5，，b、 R1' と R6，，b及び R2，，b と R4"bの何れかで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基 又は一般式 [3]で示される基を有する。〕で示されるものが好ましい。
[0330] 一般式 [51 ' ]に於いて、
Figure imgf000072_0002
置換基として有していてもよいアルキル基のアルキル基としては、前記一般式 [51] に於ける "〜 "で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アル キル基のアルキル基の例示と同様のものが挙げられる。
[0331] R3a及び R4aは夫々独立して一般式 [2]又は [3]で示される基を置換基として有して V、てもよ 、アルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式 [2]又は [3]で示さ れる基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ま しい。
[0332] R5a及び R6aは夫々独立して一般式 [2]又は [3]で示される基を置換基として有して V、てもよ 、アルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式 [2]又は [3]で示さ れる基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ま しい。
[0333] R11' で示されるアルキル基としては、前記一般式 [51]に於ける R11で示されるアル キル基の例示と同様のものが挙げられる。
[0334] 一般式 [55]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 9〜12で 示されるもの等が挙げられる。尚、表 9〜12に於いて、一般式 [55]で示される R3"、 R5"及び R11"は— CH基であり、 R7"、 R9"及び R1G"は水素原子であり、 R8"は— SO
3 3
Na基である。
[0335] [表 9]
s〔〕^0336s
Figure imgf000074_0001
Figure imgf000075_0001
Figure imgf000075_0002
ZULSO/LOOZdT/lDd εζ 86CMl/.00Z OAV
Figure imgf000076_0001
12]
Figure imgf000077_0001
[0339] 一般式 [56]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 13〜16 で示されるもの等が挙げられる。尚、表 13〜16に於いて、一般式 [56]に於ける R3" 、 R6"及び R11"は— CH基であり、 R7"、 R9"及び R1G"は水素原子であり、 R8"は— S
3
O Na基である。
3
[0340] [表 13]
//:/ OsoLooaTI£ΪAV :
Figure imgf000078_0001
Figure imgf000079_0001
15]
Figure imgf000080_0001
16]
Figure imgf000081_0001
[0344] 一般式 [57]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 17〜20 で示されるもの等が挙げられる。尚、表 17〜20に於いて、一般式 [57]に於ける R3" 、 R5"及び R11"は— CH基であり、 R7"、 R9"及び R1C>"は水素原子であり、 R8"は— S
3
O Na基である。
3
[0345] [表 17]
Figure imgf000082_0001
18]
Figure imgf000083_0001
19]
Figure imgf000084_0001
20]
Figure imgf000085_0001
[0349] 一般式 [58]で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表 21〜24 で示されるもの等が挙げられる。尚、表 21〜24に於いて、一般式 [58]に於ける R3" 、 R5"及び R11"は— CH基であり、 R7"、 R9"及び R1C>"は水素原子であり、 R8"は— S
3
O Na基である。
3
[0350] [表 21]
Figure imgf000086_0001
22]
Figure imgf000087_0001
23]
Figure imgf000088_0001
24]
Figure imgf000089_0001
[0354] また、本発明の化合物中に含有される本発明の反応性基を、例えば被標識物質等 と結合させる場合には、当該反応性基に、被標識物質に含有される官能基 (例えば アミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標 識物質の官能基」と略記する場合がある。 )との結合性を高める (活性化させる)ような 基 (以下、「本発明の反応活性基」と略記する場合がある。）が更に導入されていても よい。
[0355] 尚、このような本発明の反応活性基、即ち、本発明の反応性基に被標識物質の官 能基との結合性を高めるような基を導入したものも、本発明の反応性基に含まれる。
[0356] このような反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるもの であれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
[0357] 本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるもの であれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例え ばァミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「ァミノ基に対する反応活性基」）、 チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基
」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」 )、 ホルミル基との反応性を活性ィ匕させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」 )等が挙げられる。
[0358] アミノ基に対する反応活性基の好ま 、具体例としては、例えばスクシンイミド基、ス ルホスクシンイミド基、ノルボルネン基、 4--トロフエノキシ基、カルボン酸無水物由来 の基（例えばァセトキシカルボ-ルメチル基、プロピオ-ルォキシカルボ-ルェチル 基、ベンゾィルォキシベンジル基等）、炭素数 1〜3のハロスルホ -ルアルキル基（例 えばフルォロスルホ-ルメチル基、フルォロスルホ-ルェチル基、フルォロスルホ- ノレプロピノレ基、クロロスノレホニノレメチノレ基、クロロスノレホニノレェチノレ基、クロロスノレホニ ノレプロピノレ基、ブロモスノレホニノレメチノレ基、ブロモスノレホニノレェチノレ基、ブロモスノレホ 二ノレプロピノレ基、ョードスノレホニノレメチノレ基、ョードスノレホニノレェチノレ基、ョードスノレ ホ-ルプロピル基等）、ハロスルホ -ルァリール基（例えばフルォロスルホ-ルフエ- ノレ基、クロロスノレホ-ノレフエ-ノレ基、ブロモスノレホニノレフエ-ノレ基、ョードスノレホ-ノレ フエ-ル基等）、炭素数 1〜3のハロカルボ-ルアルキル基（例えばフルォロカルボ- ルメチル基、フルォロカルボ-ルェチル基、フルォロカルボ-ルプロピル基、クロロカ ルポ-ルメチル基、クロ口カルボ-ルェチル基、クロ口カルボ-ルプロピル基、ブロモ カルボ-ルメチル基、ブロモカルボ-ルェチル基、ブロモカルボ-ルプロピル基、ョ ードカルボ-ルメチル基、ョードカルボ-ルェチル基、ョードカルボ-ルプロピル基等 )、ハロカルボ-ルァリール基（例えばフルォロカルボ-ルフエ-ル基、クロ口カルボ- ルフヱ-ル基、ブロモカルボ-ルフヱ-ル基、ョードカルボ-ルフヱ-ル基等）、ホス ファアミダイト基、イソチオシァネート基、イソシァネート基、モノハロゲン（例えば F、 C1 、 Br、 I等）置換トリアジノ基、ジノヽロゲン (例えば F、 Cl、 Br、 I等）置換トリアジノ基、モ ノハロゲン（例えば F、 Cl、 Br、 I等）置換ピリミジノ基、ジハロゲン（例えば F、 Cl、 Br、 I 等)置換ピリミジノ基、モノハロゲン (例えば F、 Cl、 Br、 I等)置換ピリジノ基、ジハロゲ ン（例えば F、 Cl、 Br、 I等）置換ピリジノ基、ホスホリルノヽライド（例えば F、 Cl、 Br、 I等 )等が挙げられる。
[0359] チオール基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばカルボン酸無 水物由来の基（例えばァセトキシカルボ-ルメチル基、プロピオ-ルォキシカルボ- ルェチル基、ベンゾィルォキシベンジル基等）、マレイミド基、スルホマレイミド基、ス ルホ-ルノヽライド基 (例えば F、 Cl、 Br、 I等）、 α -ノヽロゲノ（例えば F、 Cl、 Br、 I等）ァ セタミド基、炭素数 1〜3のハロカルボ-ルアルキル基（例えばフルォロカルボ-ルメ チル基、フルォロカルボ-ルェチル基、フルォロカルボ-ルプロピル基、クロ口カルボ -ルメチル基、クロ口カルボ-ルェチル基、クロ口カルボ-ルプロピル基、ブロモカル ボ-ルメチル基、ブロモカルボ-ルェチル基、ブロモカルボ-ルプロピル基、ョード力 ルポ-ルメチル基、ョードカルボ-ルェチル基、ョードカルボ-ルプロピル基等）、ノヽ 口カルボ-ルァリール基（例えばフルォロカルボ-ルフヱ-ル基、クロ口カルボ-ルフ ェ-ル基、ブロモカルボ-ルフエ-ル基、ョードカルボ-ルフエ-ル基等）、イソチォ シァネート基、イソシァネート基、 2-ピリジルジチォ基等が挙げられる。
[0360] 水酸基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばカルボン酸無水物 由来の基（例えばァセトキシカルボ-ルメチル基、プロピオ-ルォキシカルボ-ルェ チル基、ベンゾィルォキシベンジル基等）、炭素数 1〜3のハロスルホ -ルアルキル 基（例えばフルォロスルホ-ルメチル基、フルォロスルホ-ルェチル基、フルォロスル ホ-ノレプロピノレ基、クロロスノレホニノレメチノレ基、クロロスノレホ-ノレェチノレ基、クロロスノレ ホニノレプロピノレ基、ブロモスノレホニノレメチノレ基、ブロモスノレホニノレェチノレ基、ブロモス ルホ-ルプロピル基、ョードスルホ -ルメチル基、ョードスルホ -ルェチル基、ョード スルホ-ルプロピル基等）、ハロスルホ -ルァリール基（例えばフルォロスルホ -ルフ ェニノレ基、クロロスノレホニノレフエ-ノレ基、ブロモスノレホ-ノレフエ-ノレ基、ョードスノレホニ ルフエ-ル基等）、ホスファアミダイト基、炭素数 1〜3のハロカルボ-ルアルキル基（ 例えばフルォロカルボ-ルメチル基、フルォロカルボ-ルェチル基、フルォロカルボ 二ノレプロピノレ基、クロロカノレボニノレメチノレ基、クロロカノレボニノレェチノレ基、クロロカノレ ボ-ルプロピル基、ブロモカルボ-ルメチル基、ブロモカルボ-ルェチル基、ブロモ カルボ-ルプロピル基、ョードカルボ-ルメチル基、ョードカルボ-ルェチル基、ョー ドカルボ-ルプロピル基等）、ハロカルボ-ルァリール基（例えばフルォロカルボ-ル フエ-ル基、クロ口カルボ-ルフエ-ル基、ブロモカルボ-ルフエ-ル基、ョードカル ボユルフェ-ル基等）、イソチオシァネート基、イソシァネート基、ホスホリルノヽライド（ 例えば F、 Cl、 Br、 I等)基等が挙げられる。
[0361] ホルミル基に対する反応活性基の好ま 、具体例としては、例えばヒドラジド基等が 挙げられる。
[0362] また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反 応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被 標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様 のものが挙げられる。
[0363] 本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド (Su)基、マレイミド (Ma)基等 が好ましい。
[0364] 本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、 例えば COOSu基、—CONH (CH ) Ma基等が挙げられる。このような本発明の
2 4
反応活性基を含有する化合物も一般式 [51]で示される本発明の化合物に含まれる
[0365] このような本発明の反応活性基を含有する本発明の化合物の具体例としては、本 発明の化合物中の本発明の反応性基に上記の如き本発明の反応活性基が更に導 入された化合物が全て挙げられるが、例えば一般式 [55]〜[58]に於ける Tで示さ れる 2価の基に当該反応活性基を含有するものが挙げられ、中でも一般式 [60]に於 ける R2で示される本発明の反応性基に当該反応活性基が導入されたものが好まし い。
[0366] このような本発明の反応活性基が導入された本発明の化合物の一例を以下に示す
[0367] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [55]で示される化合物の好ましい具体例 としては、例えば下記表 25で示されるもの等が挙げられる。尚、表 25に於いて、一般 式 [55]で示される R3"、 R5"及び R11"は— CH基であり、 R7"、 R9"及び R1C>"は水素
3
原子であり、 R8"は SO Na基である。
3
[0368] [表 25]
Figure imgf000092_0001
[0369] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [56]で示される化合物の好ましい具体例 としては、例えば下記表 26で示されるもの等が挙げられる。尚、表 26に於いて、一般 式 [56]に於ける R3" R6"及び R11"は— CH基であり、 R7" R9"及び R1G"は水素原
3
子であり、 R8"は— SO Na基である。
3
[表 26]
Figure imgf000093_0001
[0371] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [57]で示される化合物の好ましい具体例 としては、例えば下記表 27で示されるもの等が挙げられる。尚、表 27に於いて、一般 式 [57]に於ける R3" R5"及び R11"は— CH基であり、 R7" R9"及び R1C>"は水素原
3
子であり、 R8"は— SO Na基である。
3
[0372] [表 27]
Figure imgf000093_0002
[0373] 本発明の反応活性基を含有する一般式 [58]で示される化合物の好ましい具体例 としては、例えば下記表 28で示されるもの等が挙げられる。尚、表 28に於いて、一般 式 [58]に於ける R3" R5"及び R11"は CH基であり、 R7" R9"及び R1C>"は水素原
3
子であり、 R8"は— SO Na基である。
3
[0374] [表 28]
Figure imgf000093_0003
[0375] このように本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入した化合物も、本発明 の化合物に含まれる。
[0376] 3- 2.本発明の化合物 [51]の合成法
3- 2- 1.インドレニン化合物 ピラゾール化合物複合体 (本発明の一般式 [ 51 ]で 示される化合物に相当）の合成
一般式 [51]で示される化合物は、例えば下記方法によって合成し得る。
[0377] 一般式 [51]で示される化合物 (詳しくは、一般式 [55] [58]で示される化合物） の合成法を、一般式 [55]で示される化合物 (即ち、一般式 [51]に於ける R1"と R2"と が Tで示される 2価の基を形成するものに相当）を用いた場合を例にとって以下に説 明する。
Figure imgf000094_0001
[0378] 〔式中、 Aはテトラフルォロボレート又はへキサフルォロホスフェートを表し、 R3" R6"
R^ R11" R12" R2°" T T η及び ρは前記に同じ。〕
3 5
[0379] 尚、一般式 [61]で示される化合物は、一般式 [51]で示される化合物のうち、 R1" が一般式 [2]で示される基を置換基として有するアルキル基 (即ち、 -Τ -COOR12
3 基)、 R2"が一般式 [2]で示される基を置換基として有するアルキル基 (即ち T -C
5
OOR12基)である場合の化合物に相当する。
[0380] また、一般式 [65]で示される化合物は、一般式 [55]で示される化合物のうち、丁が 一般式 [63]で示される基 (式中、 R18及び R19は CONH 基である。）である場合 に相当する。
[0381] 即ち、一般式 [61]で示される化合物 (本発明の反応性基を有する化合物)を、 般式 [62]で示される化合物又はジスクシィミジルカルボネート (DSC) (—般式 [61] で示される化合物に対して 2 20倍モル）と塩基性触媒 (例えば Ν-ェチルジイソプロ ピルァミン、ピリジン、トリエチルァミン、 Ν,Ν-ジメチルァニリン、ピぺリジン、 4-ジメチル アミノビリジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ- 5-ェン、 1,8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥン デ力- 7-ェン、トリ- η-プチルァミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒 (例え ば Ν,Ν-ジメチルホルムアミド（DMF)、 Ν,Ν-ジメチルァセトアミド（DMA)、ァセトアミド N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、 0 40°Cで 0. 1 12時間反応させ、一般式 [63]で示される化合物が得られる。
[0382] 次いで、一般式 [63]で示される化合物と一般式 [64]で示される化合物を、塩基性 触媒 (例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸水素アルカリ金属塩、 例えば N-ェチルジイソプロピルァミン、ピリジン、トリエチルァミン、 Ν,Ν-ジメチルァ- リン、ピぺリジン、 4-ジメチルァミノピリジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ- 5-ェン、 1, 8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥンデ力- 7-ェン、トリ -η-ブチルァミン等の有機アミン類等） の存在下、適当な溶媒（例えば DMF、 DMA、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等の アミド類、水等）中、 0〜40°C、 0. 1〜12時間反応させ、 目的物である一般式 [65]で 示される化合物が得られる。
[0383] その他の一般式 [51]で示される化合物も対応する原料を用いて上記に準じて適 宜合成することにより得られる。
[0384] 3- 2- 2.本発明の反応活性基 (本発明の反応性基を活性化させた基)を含有する 本発明の化合物の合成
本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入する方法を、一般式 [51]で示さ れる化合物のうち、一般式 [55]で示される化合物 (即ち、一般式 [51]に於ける R1"と R2"とが Tで示される 2価の基を形成するものに相当）、更には、上記一般式 [65]で 示される化合物のうち Pが 5であり 5個の R2のうちの 1つが一般式 [2]で示される基で ある化合物（下記一般式 [66]で示される化合物に相当）を用!、た場合を例にとつて 以下に説明する。
Figure imgf000096_0001
basic catalyst
solvent
CNH— CH(CH2)4- NHC^ /CNH-CH(CH2)4- NHC¾i
O, I O
COOR
0、
,.o
66】 [67]
Figure imgf000096_0002
12
[0385] (式中、 qは 2〜10の整数を表し、 R3"〜RU"、 RL T、 T、 A及び nは前記に同じ。 )
3 5
[0386] 尚、一般式 [66]で示される化合物は、一般式 [65]で示される化合物のうち、 pが 5 であり、 5個の R2Gのうちの 1つが一般式 [2]で示される基であり、それ以外の R2Gが水 素原子である場合の化合物に相当する。
[0387] 一般式 [68]及び [69]に於いて、 qは 2〜10の整数を表す。
[0388] 即ち、一般式 [66]で示される化合物 (本発明の反応性基を有する化合物)を、例え ば一般式 [62]で示される化合物等のスクシンイミドィ匕試薬 (一般式 [66]で示される 化合物に対して 1〜10倍モル）と塩基性触媒 (例えば N-ェチルジイソプロピルアミン 、ピリジン、トリエチルァミン、 Ν,Ν-ジメチルァニリン、ピぺリジン、 4-ジメチルァミノピリ ジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ- 5-ェン、 1,8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥンデ力- 7- ェン、トリ- η-プチルァミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒 (例えば DMF 、 DMA,ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、 0〜40°Cで 0. 1〜12 時間反応させ、一般式 [67]で示される化合物 (本発明の反応活性基であるスクシン イミド基を有する化合物）が得られる。
[0389] 一般式 [67]で示される化合物は、例えば一般式 [68]で示される化合物等のマレ イミドィ匕試薬 (一般式 [67]で示される化合物に対して 1〜10倍モル)と塩基性触媒（ 例えばトリェチルァミン、 N-ェチルジイソプロピルァミン、ピリジン、 Ν,Ν-ジメチルァ- リン、ピぺリジン、 4-ジメチルァミノピリジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ- 5-ェン、 1, 8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥンデ力- 7-ェン、トリ -η-ブチルァミン等の有機アミン類等） の存在下、適当な溶媒（例えば DMF、 DMA、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等の アミド類等）中、 0〜40°Cで 0. 1〜12時間反応させ、一般式 [69]で示される化合物（ 本発明の反応活性基であるマレイミド基を有する化合物）が得られる。
[0390] 本発明に係るスクシンイミドィ匕試薬としては、上記一般式 [62]で示される化合物に 限らず、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる力 具体的には、例えばジ (N-スクシンィミジル）カルボネート（DSC)、 2-スクシンイミド -1,1, 3, 3-テトラメチルゥ口 ユウムテトラフルォロボレート（TSTU)、 2- (5-ノルボルネン- 2, 3-ジカルボキシミド） -1 ,1,3,3-テトラメチルゥ口-ゥムテトラフルォロボレート（TNTU)等が挙げられる。
[0391] 上記の如き反応活性基以外の本発明の反応活性基を導入する方法としては、対 応する原料を用いて上記に準じて適宜合成することにより得られる。
[0392] 3- 2- 3.インドレ-ンィ匕合物ーピラゾールイ匕合物複合体 (一般式 [75]で示される 化合物）の合成
一般式 [75]で示される化合物 (インドレ-ンィ匕合物ーピラゾールイ匕合物複合体)の 合成法を以下に説明する。
Figure imgf000097_0001
[0393] (式中、 R17はアルキル基又はァリール基を表し、 "〜 "、 1"、 n及びその他の定 義は前記に同じ。但し、 R1", R3"及び R4"のうち少なくとは 1つは一般式 [2]で示され る基を置換基として含有し、 R2"、 R5"及び R6"のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示 される基を含有する。 )
[0394] 一般式 [72]及び [73]に於いて、 R17で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝 状或いは環状の何れでもよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1〜3のものが挙げられ 、具体的には、例えばメチル基、ェチル基、 n-プロピル基、イソプロピル基、 n-ブチル 基、イソブチル基、 sec-ブチル基、 tert-ブチル基、 n_ペンチル基、イソペンチル基、 s ec-ペンチル基、 tert-ペンチル基、ネオペンチル基、 n-へキシル基、イソへキシル基 、 sec-へキシル基、 tert-へキシル基、ネオへキシル基、 n-ヘプチル基、イソへプチル 基、 sec-ヘプチル基、 tert-ヘプチル基、ネオへプチル基、 n-ォクチル基、イソォクチ ル基、 sec-ォクチル基、 tert-ォクチル基、ネオォクチル基、 n-ノ-ル基、イソノ-ル基 、 sec-ノニル基、 tert-ノニル基、ネオノニル基、 n-デシル基、イソデシル基、 sec-デシ ル基、 tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペン チル基、シクロへキシル基、シクロへプチル基、シクロォクチル基、シクロノ-ル基、シ クロデシル基等が挙げられる。
[0395] R17で示されるァリール基としては、通常炭素数 6〜10のものが挙げられ、具体的に は、例えばフエ-ル基、ナフチル基等が挙げられる。
[0396] 即ち、先ず、一般式 [70]で示されるインドレニン化合物 (インドレニン骨格部分)、 一般式 [71 ]で示される化合物〔一般式 [70]で示される化合物に対して 1〜2倍モル 〕及び一般式 [72]で示される酸無水物〔一般式 [70]で示される化合物に対して 1〜 20倍モル〕（例えば無水酢酸、無水プロピオン酸、無水酪酸、安息香酸無水物等）を 、必要ならば溶媒 (例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸等のカルボン酸類、例えばァ セトニトリル、プロピオ-トリル、 n-ブチ口-トリル等の-トリル類等）に溶解し、 0〜150
°C (好ましくは 40〜120°C)で 0. 1〜24時間（好ましくは 0. 5〜12時間、より好ましく は 1〜8時間）で反応させることにより一般式 [73]で示される化合物が得られた。
[0397] 次いで、一般式 [73]で示される化合物及び一般式 [74]で示される化合物（ビラゾ ール骨格部分）〔一般式 [73]で示される化合物に対して 0. 5〜10倍モル、好ましく は 1〜5倍モル〕を、塩基性触媒 (例えばピリジン、トリェチルァミン、 Ν,Ν-ジメチルァ 二リン、ピぺリジン、ピリジン、 4-ジメチルァミノピリジン、 1,5-ジァザビシクロ [4.3.0]ノナ -5-ェン、 1,8-ジァザビシクロ [5.4.0]ゥンデ力- 7-ェン、トリ- η-ブチルァミン等の有機ァ ミン類、例えば水素化ナトリウム等の金属水素化物類、例えば η-プチルリチウム等の 塩基性アルカリ金属化合物類等)の存在下、脱水縮合剤〔例えば濃硫酸、五酸化二 リン、無水塩化亜鉛等の無機脱水剤類、例えばジシクロへキシルカルポジイミド、ジィ ソプロピルカルボジイミド、 1-ェチル -3-(3-ジメチルァミノプロピルカルボジイミド)塩酸 塩等のカルボジイミド類、無水酢酸、ポリリン酸、カルボ-ルジイミダゾール、 P-トルェ ンスルホ-ルクロライド等〕を用いて、必要ならば溶媒（例えば Ν,Ν-ジメチルホルムァ ミド（DMF)、 Ν,Ν-ジメチルァセトアミド（DMA)、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等 のアミド類、例えばァセトニトリル、プロピオ-トリル、 n-ブチ口-トリル等の-トリル類、 例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ェチレ ングリコール、 1,4-ブタンジオール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジォ キサン、ァ-ソール、エチレングリコールモノェチルエーテル等のエーテル類、例え ばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類）中で 0〜 150°C (好ましくは 40〜 120°C )で 0. 1〜24時間（好ましくは 0. 5〜12時間、より好ましくは 1〜8時間）で反応させ、 一般式 [75]で示される化合物が得られる。
3- 2-4.インドレニン骨格部分 (一般式 [70]で示される化合物）の合成
一般式 [70]で示される化合物 (インドレニン骨格部分)の合成法を以下に説明する
Figure imgf000099_0001
[0399] (式中、 Xはハロゲン原子を表し、 R1", R°'\ R4"及び R7"〜R1G"は前記に同じ。 )
[0400] 一般式 [79]に於いて、 Xで示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩 素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
[0401] 即ち、一般式 [76]で示されるケトン化合物及び一般式 [77]で示される化合物を適 当な溶媒中（例えば酢酸、プロピオン酸等のカルボン酸類、例えばエチレングリコー ル、 1,4-ブタンジオール等のアルコール類等）で、 40〜250°Cで 0. 1〜24時間反応 させることにより一般式 [78]で示される化合物が得られる（例えば Journal of Organic Chemistry, 42(14), 2474^80, I977等）。
[0402] 次いで、一般式 [78]で示される化合物を一般式 [79]で示されるハロゲン化化合 物）又は一般式 [80]で示されるトシレートイ匕合物とを、適当な溶媒中（例えばクロ口べ ンゼン、 1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例えば 1,2-ジクロ ロェタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼン等の芳香 族炭化水素類、例えば DMA、 DMF、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類 等）に溶解し、 40〜200°Cで 1〜24時間反応させることにより一般式 [70]で示される インドレニン化合物が得られる（例えば J. Chem. Soc, Perkin Trans.1. 947〜952. 198 4等)。
[0403] 一般式 [76]で示されるケトンィ匕合物は、市販品（例えば 3-メチル -2-ブタノン、 3-メ チル- 2-ペンタノン、 3-メチル -2-へキサノン、 1-シクロプロピルエタノン、 1-シクロプチ ルエタノン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよぐ具体 的には、例えば 2-メチルァセト酢酸ェチルと脱離基 (例えばハロゲン原子、トシレート 基等)を有する化合物を塩基性触媒 (例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の 金属水素化物類、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金 属炭酸塩、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert-ブトキシド等 のアルカリ金属アルコキシド類等、例えば n-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属 化合物類、例えばリチウムジイソプロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下 、適当な溶媒 (例えば DMF、 DMA,ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類、 例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ェチレ ングリコール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジォキサン、エチレングリコ ールモノェチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキ シド類等）中、 80〜100°Cで 0. 1〜24時間反応させ、次いで、得られた溶液を酸 触媒を用い脱炭酸を行う方法（例えば Modern Synthetic Reactions, California, 2 nd ed.,p.492, 510, 756 (1972)等参照）等が挙げられる。
[0404] 一般式 [77]で示される化合物は、市販品を用いてもよいし、常法により適宜合成さ れたものを用いてもよい。
[0405] 3- 2- 5.ピラゾール骨格部分 (一般式 [74]で示される化合物）の合成
一般式 [74]で示される化合物 (ピラゾール骨格部分)の合成法を以下に説明する 2"X [83]
Figure imgf000101_0001
[0406] (式中、 R2"、 R5"、 R6"、 R11"及び Xは前記に同じ。 )
[0407] 即ち、一般式 [81]で示されるジケトン化合物とヒドラジンを、適当な溶媒 (例えばメ タノ一ノレ、エタノーノレ、プロパノーノレ、イソプロパノーノレ、ブタノーノレ、エチレングリコー ル等のアルコール類等）中、 60〜100°Cで 1〜4時間脱水反応させ、一般式 [82]で 示される 4H—ピラゾール化合物が得られる（例えば Adv. Heterocycle. Chem. Vol.34 . 53〜78. 1983等）。
[0408] 次いで、一般式 [82]で示される 4H—ピラゾールイヒ合物を一般式 [83]で示される ハロゲンィ匕化合物又は一般式 [84]で示されるトシレートイ匕合物とを、適当な溶媒 (例 えばクロ口ベンゼン、 1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例え ば 1,2-ジクロロェタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼ ン等の芳香族炭化水素類、例えば DMF、 DMA,ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等 のアミド類等）中、 80〜140°Cで 1〜12時間で N-アルキル化反応させ、一般式 [74] で示される化合物が得られる（例えば J. Chem. Soc, Perkin Trans.1. 947^952. 1984 等)。
[0409] 一般式 [81]で示されるジケトンィ匕合物は、市販品（例えば 3,3-ジメチル -2,4-ペンタ ンジオン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよぐ具体 的には、例えば 3-メチル -2,4-ペンタンジオンや 4-ァセチル- 5-ォキソへキサン酸ェ チルエステルを脱離基 (例えばハロゲン原子、トシレート基等)を有する化合物を塩 基性触媒 (例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化物類、例えば炭 酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えばナトリウムメ トキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert-ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類 、例えば n-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類、例えばリチウムジイソ プロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下、適当な溶媒 (例えば DMF、 D MA、ァセトアミド、 N-メチルピロリドン等のアミド類、例えばメタノール、エタノール、 プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類、 例えばテトラヒドロフラン、ジォキサン、エチレングリコールモノェチルエーテル等のェ 一テル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類等）中、 80〜100°Cで 0. 1〜24時間反応させる方法（例えば Modern Synthic Reactions, California, 2 nd e d.,p.492, 510, 756 (1972)等）等が挙げられる。
[0410] 3 - 3.本発明の化合物 [51]の性質
このようにして得られた本発明の化合物 [51]は、例えば核酸抽出法、ィムノアッセ ィ法等の蛍光標識物質としての用途が期待されている。
[0411] 4.本発明の標識化合物及び標識方法
4- 1.本発明の標識化合物 (本発明の化合物 [51]で標識された化合物）
本発明の標識ィ匕合物としては、本発明の化合物 (標識物質)と被標識物質を直接 又は間接的に結合されたものが挙げられ、具体的には、本発明の化合物中に含有さ れる一般式 [2]で示される基 (カルボキシル基等）、一般式 [3]で示される基 (スルホ 基等)、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基が被標識物質と直接又は間接 的に結合されたものが挙げられる。
[0412] 被標識物質と結合される本発明の化合物中の一般式 [2]で示される基 (カルボキシ ル基等)、一般式 [3]で示される基 (スルホ基等)、アミノ基、水酸基、チオール基又は ホルミル基 (以下、「本発明の反応性基」と略記する場合がある。）は、通常一般式 [1 ]に於ける "〜!^11"、或いは R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れ かで形成される 2価の基 (即ち、一般式 [7]〜 [10]に於ける Tで示される 2価の基）に 、好ましくは一般式 [7]〜[10]に於ける Tで示される 2価の基 (例えば一般式 [36]で 示される 2価の基）に、より好ましくは一般式 [36]に於ける R2に含有されるものが好 ましい。
[0413] 本発明の化合物により標識される被標識物質としては、例えば通常この分野で被 標識物質として用いられるものが全て挙げられる力 具体的には、例えばピオチン、 アビジン、ストレプトアビジン、アミノ酸、蛋白、ペプチド、酵素基質、ホルモン、リンフ ォカイン、代謝産物、レセプタ、リガンド、ァゴ-スト、アンタゴニスト、抗原、ノ、プテン、 デンドリマー、レクチン、トキシン、炭水化物、例えば果糖類、多糖類等の糖類、ヌク レオシド (例えばリボヌクレオシド、デォキシリボヌクレオシド等）、ヌクレオチド (例えば リボヌクレオチド、デォキシリボヌクレオチド等）、核酸 (オリゴヌクレオチド、ポリヌクレ ォチド）〔例えばデォキシリボ核酸 (DNA)、リボ核酸 (RNA)等〕、核酸誘導体 (例え ば DNAフラグメント、 RNAフラグメント等）、天然薬物、ウィルス、ウィルス成分、ィー スト成分、血液細胞、血液細胞成分、生物細胞、非細胞血液成分、バクテリア、バタ テリア成分、天然及び合成脂質嚢、合成及び天然薬物、毒薬、環境汚染物質、重合 体、重合体粒子、ガラス粒子、ガラス表面材、プラスチック粒子、プラスチック表面材、 重合体膜、導体及び半導体、並びにこれらに対する抗体及びその分解産物 (例えば Fab, Fab'、 F (ab' ) 等)等が挙げられ、中でも、例えばヌクレオチド、抗体若しくは
2
その分解産物等が好まし 、。
[0414] ヌクレオシドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントースカもなり、具 体的には、例えば糖部分が D-リボースであるリボヌクレオシド、例えば糖部分が D-2- デォキシリボースであるデォキシリボヌクレオシド等が挙げられる。
[0415] ヌクレオチドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントース、及びリン 酸からなり、具体的には、例えば糖部分が D-リボースであるリボヌクレオチド、例えば 糖部分が D-2-デォキシリボースであるデォキシリボヌクレオチド等が挙げられる。
[0416] また、当該ヌクレオシド及びヌクレオチドには、例えばヌクレオシド抗生物質のように 、その基本となる塩基部分がプリン構造又はピリミジン構造でないもの、これらの構造 が修飾されているもの、糖部分が D-リボース又はデォキシ- D-リボースでないもの、こ れらが修飾されているもの、リン酸部分（一 OPO一）が他の元素〔例えば硫黄原子（
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-OPO s_)等〕で置換されたもの、リン酸部分が修飾されたもの等も含まれる。
2
[0417] 核酸は、当該ヌクレオチドを基本単位とし、このリン酸が各ヌクレオチド間で糖の 3' と 5'位炭素の間のジエステル結合により結合された鎖状のオリゴ又はポリヌクレオチ ドであり、具体的には、例えば糖部分がリボースであるリボ核酸 (RNA)、例えば糖部 分が D-2-デォキシリボースであるデォキシリボ核酸 (DNA)等が挙げられる。
[0418] これらヌクレオチド、核酸及び誘導核酸は 1本鎖でも、 2本鎖乃至これ以上の複数 の核酸鎖力もなるものであってもよい。また、これらは本発明の目的を達成し得る範 囲であれば、適当なもので適宜修飾等されて 、てもよ！/、。 [0419] 本発明の化合物と被標識物質が直接的に結合されるとは、例えば本発明の化合物
(要すれば本発明の反応性基)が被標識物質中の官能基 (例えばアミノ基、カルボキ シル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）と、例えばイオン結合、共有結 合等で結合されることを意味する。また、本発明の化合物と被標識物質が間接的に 結合されるとは、例えば本発明の反応性基が被標識物質中の当該官能基とリンカ一 等を介して結合 (例えばイオン結合、共有結合等)されることを意味する。間接的結 合で使用されるリンカ一としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
[0420] 4 2.本発明の標識方法
本発明の化合物 [51]を用いて被標識物質を標識する方法としては、自体公知の 方法に従い適宜選択して行えばよいが、例えば本発明の反応性基 (即ち、一般式 [5 1]に於ける尺1"〜!^11"、或いは R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れ かで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つに含有される、一般式 [2]で示される基（ カルボキシル基等）、一般式 [3]で示される基 (スルホ基等）、アミノ基、水酸基、チォ ール基又はホルミル基）と、被標識物質中の官能基 (例えばアミノ基、カルボキシル 基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標識物質の官能基」と略 記する場合がある）とが例えばイオン結合、共有結合等で直接結合されるか、或いは 被標識物質の一部に導入されたリンカ一を介して結合されることにより容易に行うこと ができる。
[0421] また、ヌクレオチド (被標識物質)を標識する方法としては、上記の化学反応を用い た標識方法の他に、酵素を用いた方法でも容易に標識することができ、ここで使用さ れる酵素としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
[0422] 本発明の反応性基は、被標識物質の官能基との反応性を高めるような基 (本発明 の反応活性基)が更に導入されていてもよい。
[0423] 尚、このような反応活性基も、本発明の反応性基に含まれ、当該反応活性基を含 有する化合物も本発明の化合物に含有される。
[0424] 本発明の化合物を用いて被標識物質を標識する方法の具体例としては、例えば（1 )本発明の反応性基に更に本発明の反応活性基を導入した後、これと被標識物質の 官能基 (以下、単に「官能基」の略記する場合がある。）と結合させることにより標識す る方法、（2)被標識物質の官能基に本発明の反応活性基を導入した後、これと本発 明の反応性基と結合させることにより標識する方法、（3)本発明の反応性基と被標識 物質の官能基に、通常この分野で使用される多価反応性リンカ一試薬を結合させる ことにより標識する方法、（4)本発明の反応性基及び被標識物質の官能基に同一又 は異なる反応活性基を導入した後、これらと通常この分野で使用されるリンカ一を結 合させることにより標識する方法等が挙げられる。
[0425] 本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるもの であれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例え ばァミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「ァミノ基に対する反応活性基」）、 チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基
」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」 )、 ホルミル基との反応性を活性ィ匕させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」
)等が挙げられる。これら反応活性基の好まし 、具体例は前述した通りである。
[0426] また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反 応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被 標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様 のものが挙げられる。
[0427] 本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド (Su)基、マレイミド (Ma)基等 が好ましい。
[0428] 本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、 例えば— COOSu基、—CONH (CH ) Ma基等が挙げられる。このような本発明の
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反応活性基を含有する化合物も一般式 [1]で示される本発明の化合物に含まれる。
[0429] 本発明の反応性基が一般式 [2]で示される基 (以下、「本発明のカルボキシル基」 と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はこれ に導入されたリンカ一の官能基 (以下、単に「被標識物質」と略記する場合がある。 ) であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましぐその方法としては 、 ( 例えば N-ヒドロキシスクシンイミドとカルポジイミド等の縮合試薬を用いて反応さ せる方法、 (ii)本発明のカルボキシル基に塩ィ匕チォ-ルを作用させカルボキシクロリ ドを形成させ、これと被標識物質のァミノ基とを反応させる方法、（iii)本発明のカルボ キシル基に塩酸とメタノールを加えて反応させた後ヒドラジンをカ卩ぇ反応させ、ヒドラ ジドを形成させ、更に、これに亜硝酸ナトリウムと塩酸を加えァシルアジドィ匕することで 活性化させた後、これと被標識物質のアミノ基、チオール基、水酸基と反応させる方 法、（iv)本発明のカルボキシル基力 無水物を形成させ、これを被標識物質のァミノ 基と反応 (脱水縮合)させる方法等が挙げられる。
[0430] また、本発明の反応性基が一般式 [3]で示される基 (以下、「本発明のスルホ基」と 略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質のアミノ基、 イミダゾール基、チオール基又はフエノール基と結合させるのが好ましぐその方法と しては、例えば (i)本発明のスルホ基に塩化スルホン酸を反応させスルホクロライドを 形成させ、これと被標識物質のアミノ基、イミダゾール基、チオール基又はフエノール 基と反応させる方法等が挙げられる。
[0431] 本発明の反応性基がアミノ基 (以下、「本発明のアミノ基」と略記する。）であり、これ と被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基である力 ルポキシル基、アミノ基、フエノール基又はチオール基と結合させるのが好ましぐそ の方法としては、例えば (i)N-ヒドロキシスクシンイミド、カルボキシジイミド等の縮合試 薬を用いて、本発明のァミノ基と被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基と結合させる 方法、 GO本発明のァミノ基にフォスゲンを作用させイソシァネートイ匕した後、被標識物 質又はそのリンカ一のアミノ基と結合させる方法、（iii)本発明のァミノ基にダルタルァ ルデヒドを反応させ、これと被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基又はフエノール基 と反応させる方法、 Gv)被標識物質又はそのリンカ一が糖、糖蛋白由来のものである 場合は、予めこれを過ヨウ素酸と反応させた後、本発明のァミノ基と反応させ、更に水 素化ホウ素ナトリウム等で還元させる方法、（V)本発明のアミノ基をマレイミド基を有す る 2官能性スぺーサー（例えば m-マレイミドベンゾィル N-ヒドロキシサクシンイミド エステル)又はピリジルジチォスルフイド基を有する 2官能性スぺーサー（例えば 4-サ クシンィミジルォキシカルボ-ル- a -(2-ピリジルジチォ)トルエン等）でマレイミド化或 いはピリジルジチォスルフイド化した後、これと被標識物質又はそのリンカ一のチォー ル基とを反応させる方法等が挙げられる。 [0432] 本発明の反応性基が水酸基 (以下、「本発明の水酸基」と略記する。）であり、これと 被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基であるアミ ノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましぐその方法としては、例えば (0 本発明の水酸基に塩ィ匕シァヌル基を作用させトリアジ-ル誘導体を形成させ、被標 識物質又はそのリンカ一のアミノ基と反応させる方法、 GO本発明の水酸基をァセチル ィ匕した後臭素化し、ヨウ化ナトリウムで臭素—ヨウ素置換した後、被標識物質又はそ のリンカ一のアミノ基、チオール基又は水酸基と反応させる方法、（m)本発明の水酸 基に臭化シアンを作用させ活性化させた後、被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基 と反応させる方法等が挙げられる。
[0433] 本発明の反応性基がチオール基 (以下、「本発明のチオール基」と略記する。 )であ り、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基 であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましぐその方法としては 、例えば (0被標識物質又はそのリンカ一のアミノ基を、マレイミド基を有する 2官能性 スぺーサー（例えば m-マレイミドベンゾィル N-ヒドロキシサクシンイミド エステル）又 はピリジルジチォスルフイド基を有する 2官能性スぺーサー（例えば 4_サクシンイミジ ルォキシカルボ-ル- (X -(2-ピリジルジチォ)トルエン等）でマレイミド化或いはピリジ ルジチォスルフイドィ匕した後、これと本発明のチオール基とを反応させる方法、 GOビス マレイミドへキサン、 1,4-ジ- [3し 2'-ピリジルジチォ（プロピオンアミド）]ブタン等の 2官 能性スぺーサーを用いて、本発明のチオール基と被標識物質又はそのリンカ一のチ オール基を反応させる方法等が挙げられる。
[0434] 本発明の反応性基がホルミル基 (以下、「本発明のホルミル基」と略記する。 )であり 、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカ一の官能基で あるアミノ基等と結合させるのが好ましぐその方法としては、例えば (0被標識物質又 はそのリンカ一のアミノ基と本発明のホルミル基を直接反応させた後、水素化ホウ素 ナトリウム等で還元させる方法等が挙げられる。
[0435] 多価反応性リンカ一試薬としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ るが、具体的には、例えば本発明の反応性基及び被標識物質の官能基の一方がァ ミノ基であり他方がチオール基である場合の二価性試薬 (以下、「ァミノ基とチオール 基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一方がアミノ基であり他 方が一般式 [2]で示される基 (カルボキシル基等)である場合の二価性試薬 (以下、「 ァミノ基とカルボキシル基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一 方がチオール基であり他方が水酸基である場合の二価性試薬 (以下、「チオール基 と水酸基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基が共にアミノ基である 場合の二価性試薬 (以下、「ァミノ基とアミノ基の二価性試薬」と略記する。）、当該反 応性基と官能基が共にチオール基である場合の二価性試薬 (以下、「チオール基と チオール基の二価性試薬」と略記する。 )等が挙げられる。
[0436] ァミノ基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えば N-( a -マレイミドアセ トキシ)スクシンイミド、 Ν-[ γ -マレイミドブチリルォキシ]スクシンイミド、 Ν- (6-マレイミド 力プロィルォキシ)スクシンイミド、 Ν- (8-マレイミドカプリルォキシ)スクシンイミド、 Ν- (11 -マレイミドウンデカノィルォキシ)スクシンイミド、 m-マレイミドベンゾィル -Ν-ヒドロキシ スクシンイミド、スクシンィミジル 4-[p-マレイミドフエ-ル]ブチレート、スクシンイミジ ル 4- [N-マレイミドメチル]シクロへキサン- 1-カルボキシレート、スクシンィミジル- 6-[ β -マレイミドプロピオンアミド]へキサノエート、 Ν-スクシンィミジル 3- (2-ピリジルジチ ォ)プロピオネート等が挙げられる。
[0437] ァミノ基とカルボキシル基類の二価性試薬の具体例としては、例えば 3-[(2-アミノエ チル)ジチォ]プロピオン酸 ·塩酸塩、 1-ェチル -3-[3-ジメチルァミノプロピル]カルボジ イミド 塩酸塩等が挙げられる。
[0438] チオール基と水酸基の二価性試薬の具体例としては、例えば Ν-[ρ-マレイミドフエ ニル]イソシァネート等が挙げられる。
[0439] ァミノ基とアミノ基の二価性試薬の具体例としては、例えばメチル Ν-スクシンイミジ ノレ アジペート、ジスクシンイミジノレ グノレタレート、ジスクシンイミジノレ スべレート、ェ チレン グリコール ビス [スクシンイミジルスクシネート]、ジチォビス [スクシンィミジル プロピオネート]、ジスクシンイミジノレ タータレート、ビス [2- (スクシンイミドォキシカノレ ボ -ルォキシ)ェチル]スルホン、 1,5-ジフルォロ- 2,4-ジニトロベンゼン等が挙げられ る。
[0440] チオール基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えばビス-マレイミドエ タン、 1,4 -ビス-マレイミドブタン、ビス-マレイミドへキサン、 1,4 ビス-マレイミジル- 2,3 -ジヒドロキシブタン、ジチォ -ビス-マレイミドエタン、 1,6-へキサン-ビス-ビニルスルホ ン、 1,8 -ビス-マレイミドジエチレングリコール、 1,11 -ビス-マレイミドトリエチレングリコ ール、 1,4-ジ- [3'-(2'-ピリジルジチォ) -プロピオンアミド]ブタン等が挙げられる。
[0441] 4- 3.本発明の化合物を用いた標識ヌクレオチドの調製
本発明の化合物 [51]を用いて被標識物質を標識する方法の具体例として、ヌクレ ォチド (被標識物質)を標識する場合を例にとって以下に説明する。
[0442] 即ち、その塩基上にアミノ基を有するヌクレオチド (例えばシチジン，アデニン，グァ ニン等)を標識する場合は、本発明の化合物中の反応性基を直接結合させても本発 明の反応性基を活性化させた基 (反応活性基)を結合させてもよぐ中でも一般式 [2 ]で示される基又はこれに反応活性基を導入させた基 (活性エステル基)と結合させ るのが好ましぐ特に活性エステル基と結合させるのがより好ましい。
[0443] また、本発明の化合物とヌクレオチドが間接的に結合される場合は、先ず、ヌクレオ チドの塩基上又は水酸基に、例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基等の官 能基を有するリンカ一を導入した誘導体 (以下、「ヌクレオチド誘導体」と略記する。 ) を合成し、次いで、例えばヌクレオチド誘導体中のアミノ基と結合させる場合は本発 明の化合物中の反応性基又は反応活性基（中でもカルボキシル基又は活性エステ ル基が好ましい）と結合させればよぐ例えばヌクレオチド誘導体中のカルボキシル基 と結合させる場合は本発明の化合物中の反応性基であるアミノ基と結合させればよく 、例えばヌクレオチド誘導体中のチオール基と結合させる場合は本発明の化合物中 のマレイミド基 (反応活性基)と結合させればよい。使用されるリンカ一としては、通常 この分野で用いられるものであれば何れでもよぐ当該リンカ一中にエステル結合、 エーテル結合又は Z及びアミド結合を含んで 、てもよ 、。
[0444] 本発明の化合物 [51]を用いた標識方法を、本発明の化合物のうち、 R1"に含有さ れるカルボキシアルキル基 (即ち、 R1"が一般式 [2]で示される基を置換基として有 するアルキル基である場合に相当）がリンカ一等を介してヌクレオチド残基に間接的 に結合したものを一例として以下に説明する。
[0445] 上記において、リンカ一としては、通常この分野で用いられるものが全て使用できる 力 具体的には、下記一般式 (A)で示される構造のリンカ一が挙げられる。
—— E ~ X— T10— Y—— NH—— (A)
[0446] (式中、 Eは— CH = CH または— C≡C—を表し、 X及び Yは夫々独立してアルキ レン基を表し、 T10は O または NH— CO—を表す。 )
[0447] 上記一般式 (A)に於 、て、 Xで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或 いは環状でもよぐ好ましくは直鎖状のものがよぐ通常炭素数 1〜10、好ましくは 1 〜6、より好ましくは 1〜3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，ェチレ ン基，トリメチレン基，テトラメチレン基，ペンタメチレン基，へキサメチレン基，ヘプタメ チレン基，オタタメチレン基，ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン 基、例えばェチリデン基，プロピレン基，イソプロピリデン基， 1-メチルトリメチレン基， 2-メチルトリメチレン基， 1,1-ジメチルエチレン基， 1,2-ジメチルエチレン基，ェチルェ チレン基， 1-メチルテトラメチレン基， U-ジメチルトリメチレン基， 2,2-ジメチルトリメチ レン基， 2-ェチルトリメチレン基， 1-メチルペンタメチレン基， 1-メチルへキサメチレン 基， 1-メチルヘプタメチレン基， 1,4-ジェチルテトラメチレン基， 2,4-ジメチルヘプタメ チレン基， 1-メチルオタタメチレン基， 1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン 基、例えばシクロプロピレン基， 1,3-シクロブチレン基， 1,3-シクロペンチレン基， 1,4- シクロへキシレン基， 1,5 -シクロへプチレン基， 1,5 -シク口才クチレン基， 1,5 -シクロノ 二レン基， 1,6-シクロデカレン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
[0448] Yで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或！ヽは環状でもよぐ好ましく は直鎖状のものがよぐ通常炭素数 1〜： LO、好ましくは 2〜8、より好ましくは 2〜6のも のが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，ヱチレン基，トリメチレン基，テトラメ チレン基，ペンタメチレン基，へキサメチレン基，ヘプタメチレン基，オタタメチレン基 ,ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばェチリデン基，プ ロピレン基，イソプロピリデン基， 1-メチルトリメチレン基， 2-メチルトリメチレン基， 1,1- ジメチルエチレン基， 1,2-ジメチルエチレン基，ェチルエチレン基， 1-メチルテトラメ チレン基， 1,1-ジメチルトリメチレン基， 2,2-ジメチルトリメチレン基， 2-ェチルトリメチレ ン基， 1-メチルペンタメチレン基， 1-メチルへキサメチレン基， 1-メチルヘプタメチレン 基， 1,4-ジェチルテトラメチレン基， 2,4-ジメチルヘプタメチレン基， 1-メチルオタタメ チレン基， 1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン 基， 1,3-シクロブチレン基， 1,3-シクロペンチレン基， 1,4-シクロへキシレン基， 1,5-シ クロへプチレン基， 1,5-シクロオタチレン基， 1,5-シクロノ-レン基， 1,6-シクロデカレ ン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
[0449] 本発明に係る標識ヌクレオチドとしては、本発明の化合物 [51]で直接またはリンカ 一等を介して間接的に標識されたヌクレオチド残基が挙げられ、具体的には、例えば 下記一般式 [74]で示されるヌクレオチド残基を含むものが挙げられる。
Q1一 V1— W2 [74]
[0450] 〔式中、 Q1はヌクレオチド残基を表し、 VIはリンカ一を表し、 W2は下記一般式 [51 ' ]を表す。
Figure imgf000111_0001
[0451] (式中、 Z1は VIと結合する結合手を表し、 p'は 1〜19の整数を表し、 R3"〜R""、 R1 8〜R19、 T 前記に同じ。 )
3〜Τは
5
[0452] 尚、一般式 [51 ' ]で示される化合物は、一般式 [51]で示される化合物のうち、 R1" と R2"で形成される 2価の基が一般式 [60]で示される基 (式中、 R2が一般式 [73]で 示される基である）である場合の化合物誘導体に相当する。
[0453] 一般式 [74]において Q1で示されるヌクレオチド残基としては、例えばリボヌクレオ チド残基、 2' デォキシリボヌクレオチド残基、 3' デォキシリボヌクレオチド残基、 5' デォキシリボヌクレオチド残基、 2'、 3'—ジデォキシリボヌクレオチド残基等が 挙げられる。
[0454] 具体的には、このようなヌクレオチド残基としては、例えば一般式 (0、（ii)、（v)、 (vi)、 ( vii)、（viii)、（xii)および (xiii)で示されるプリンヌクレオチド残基、または一般式 (iii)、（iv)、 (X)および (xi)で示されるピリミジンヌクレオチド残基が挙げられる。
Figure imgf000112_0001
[0456] 上記一般式において、 Z3は VIと結合する結合手を、 R25及び R26は夫々独立して H 、 OHまたは O—を表し、 R27は一 PO H—、 -PO H 、 一 P O H 、 一 P O H又は
2 3 2 2 6 3 3 9 4 その塩を表す。尚、塩の具体例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩 等のアルカリ金属塩、例えばバリウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばアンモ-ゥ ム塩、トリェチルアンモ -ゥム塩、ピリジン塩等の有機アミン塩等が挙げられる。 [0457] 一般式 [74]において VIで示されるリンカ一は、 Q1で示されるヌクレオチド残基と、 W2〔一般式 [51 ' ]〕で示される本発明の化合物誘導体 (蛍光標識)とを結合するた めのリンカ一である。
[0458] 即ち、当該リンカ一の一方の末端力 前述した Q1で示されるヌクレオチド残基のう ち、ピリミジンヌクレオチド残基についてはそのピリミジン環の 5位〔一般式 (iii)、 Gv)の 場合〕またはそのリン酸残基のリン原子〔一般式 (x)、（xi)の場合〕に結合し、また、プリ ンヌクレオチド残基についてはその 7—デァザ（7—デァザ)プリン環の 7位〔一般式 (0 、（ii)、（v)、（vi)の場合〕またはそのプリン環 (又は 7—デァザプリン環）のリン酸残基のリ ン原子〔一般式 (vii)、（viii)、（ix)、（xii)、（xiii)の場合〕に結合している。
[0459] 更に、当該リンカ一の他方の末端が、 W2〔一般式 [51 ' ]〕で示される本発明の化合 物誘導体 (標識物質)のカルボニル基〔一般式 [51 ' ]に於ける Tに結合するカルボ
4
-ル基〕に結合している。
[0460] このようなリンカ一としては、 W2〔一般式 [51 ' ]〕で示される本発明の化合物誘導体
(標識物質)のカルボニル基〔一般式 [51 ' ]に於ける Tに結合するカルボニル基〕と
4
Q1で示されるヌクレオチド残基とを結合し得るものであれば全て使用でき、具体的に は、下記一般式 (A)で示される構造のリンカ一が挙げられる。
—— E ~ X ~ T 1 0-Y—— NH—— （A)
[0461] (式中、 E、 X、 T10及び Yは前記と同じであり、これらの具体例、好ましい例等も前述 の通りである。 )
[0462] 従って、一般式 [74]で示されるヌクレオチド残基としては、それぞれ下記一般式 [7
4' ]で示されるものが好ましぐ下記一般式 [74"]で示されるものがより好ましい。
Q1一 E1 ~ X1 ~ T 1 1-Y1一 NH— W2 [7 ']
[0463] (式中、 E1は— CH = CH または— C≡C—を表し、 XI及び Y1は夫々独立してァ ルキレン基を表し、 T11は O または NH— CO—を表す。また、 Q1及び W2は 前記と同じ。 )
[0464] 尚、上記において、 XIで示されるアルキレン基は前述の Xで示されるアルキレン基 と同じであり、その具体例、好ましい例等も同様である。また、 Y1で示されるアルキレ ン基は前述の Yで示されるアルキレン基と同じであり、その具体例、好ましい例等も同 様である。
Q1一 E1一 (CH2)r ~ T1 1— (C H2)S ~ NH一 W2 [74"]
[0465] (式中、 rは 1〜10、好ましくは 1〜6、より好ましくは 1〜4の整数を、 sは 1〜10、好ま しくは 2〜8、より好ましくは 2〜4の整数を表す。また、 Ql、 W2、 Elおよび Ti lは前 記と同じ。 )
[0466] 一般式 [51 ' ]に於いて、 R3"〜RU"、 R18〜R19、 T〜Tは前記と同じであり、その
3 5
具体例、好ましい例等も前記した通りである。
[0467] このような W2〔一般式 [51 ' ]〕で示される本発明の化合物誘導体 (標識物質)として は、前記した如き本発明の化合物 [51]に由来するものであり、これらの好ましい具体 例も前記した如き本発明の化合物 [51]と同様である。
[0468] 上記した如きヌクレオチドを本発明に係る化合物 [51] (標識物質)で標識する方法 としては、自体公知の直接標識法や間接標識法〔例えば W096/17628号パンフレット
(特開 2002-12782号公報）、米国特許第 6974873号、特開 2002-193991号公報、 WO
99/12544号パンフレット、特開平 11-80189号公報等に記載された方法等〕が挙げら れる。
[0469] また、ヌクレオチドを本発明に係る化合物 [51] (標識物質)で標識するに際しては、 本発明に係る化合物 [51]を用いる以外は、上記した如き標識法に基づく市販の標 識キットを使用すればより簡便である。
[0470] 尚、本発明において、これらの方法を利用するには、本発明に係る化合物 [51] (標 識物質)が結合した標識モノヌクレオチドが必要であるが、これら標識ヌクレオチドは 自体公知の方法 (例えば上記の標識方法等）により調製することができる。
[0471] 具体的には、例えば特開 2002-193991号公報（[0102]〜[0121]段落）に記載の方 法に準じて調製することができ、また、例えば以下のように調製することができる。
[0472] 即ち、例えば下記一般式 (a)で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式 (b ' )で示 される本発明に係る化合物 [51] (標識物質）〔スクシンィミジルエステル体〕とを反応 させること〖こより容易〖こ得られる。
Q― E ~ X ~ T1 0— Y—— NH 2 (a)
[0473] (式中、 Qは Q1を示す。 Ql、 E、 X、 T10および Yは前記と同じ。 ) W— OSu ')
[0474] (式中、 W，は W2を示し、 Suはスクシンイミド基を示す。 W2は前記と同じ。 )
また、前述した如き一般式 (a)で示されるリンカ一部分の T10が NH— CO であ る場合には、例えば以下のように調製することもできる。
[0475] 即ち、例えば、先ず下記一般式 (c)で示されるリンカ一の一部分 (部分リンカ一 A) を導入し、更に残りのリンカ一部分 (部分リンカ一 B)のスクシンィミジルエステル体と を反応させて、リンカ一が導入された下記一般式 (d)で示されるヌクレオチド誘導体 を調製する。更に、この下記一般式 (d)で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式（ b' )で示される本発明の化合物 [51] (標識物質）〔スクシンィミジルエステル体〕とを 反応させることにより容易に得られる。
—— E ~ X—— NH2 (
[0476] (式中、 Eおよび Xは前記と同じ。 )
Q—— E ~ X—— NH— CO— Y—— NH2 (d)
[0477] (式中、 Q、 E、 Xおよび Yは前記と同じ。 )
W— OSu ')
[0478] (式中、 W'及び Suは前記と同じ。 )
[0479] より具体的には、上記した如き本発明の化合物 [51] (標識物質)が結合した標識モ ノヌクレオチドのうち、蛍光標識 2' デォキシシチジン 5' トリホスフェート誘導体 および蛍光標識 2' デォキシゥリジン— 5' -トリホスフェート誘導体は、例えば以下 の如き合成経路に準じて合成することができる。
[0480] 尚、下記合成経路において使用される略称正式名は下記の通りである。
• MeOTfa：トリフルォロ酢酸メチル
•一 Tf a:トリフルォロアセチル基
•Bu SnH :水素化トリ（n—ブチル）スズ
3
• AIBN：ァゾイソブチロニトリル
•Et N :トリェチルァミン
3
• HO— Su： N ヒドロキシコハク酸イミド
•DMF:N, N ジメチルホルムアミド •TMS— Acetamide :N, O ビス（トリメチルシリル）ァセトアミド
•PdCl (CH CN) ：ビス（ァセトニトリル）ジクロロパラジウム（II)
2 3 2
•tris(TBAPP)：トリス（トリ— n—ブチルアンモ-ゥム）ピロホスフェート
•(EtO) PO :リン酸トリェチル
3
• TFP：トリー 2—フリルホスフィン
•Pd (dba) ：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0)
2 3
[0481] (1)部分リンカ一 (A)の合成。
尚、この化合物は、上記一般式 (A)で示されるリンカ一（― E— X— T10— Y— NH ―)において、 T10が一 NH— CO である場合の、 E— X— NH—に相当するィ匕 合物であって、 Eがー CH = CH および X力メチレン基である化合物である。
Bu3SnH
MeOTfa - AIBN
NH2 NHTfa ^ « Bu3Sn NH fa
" Benzene
(51) reflux, 1.5h
y } (52) (53、)
[0482] (2)部分リンカ一 Bの合成。
尚、この化合物は、上記一般式 (A)で示されるリンカ一（― E— X— T10— Y— NH 一）において、 T10が一 NH— CO である場合の、 CO— Y— NH—に相当する 化合物であって、 Yがペンタメチレン基である化合物である。
„ HO-Su
O Ε¾Ν O WSC O
HO v N¾ CHC1S fa rt., 2days rt., overnight
(54) (55) (56)
[0483] (3) 2' デォキシシチジン— 5' -トリホスフェート誘導体〔一般式 (d)の化合物〕の 合成。
尚、この化合物は、ー般式[74 ] (Q1—E1—X1—T11 Y1—NH—W2)のQ1 -E1 -X1 -T11— Y1— NH に相当する化合物であって、 <31が2'—デォキシシ チジン、 E ^S CH = CH— XI力 Sメチレン基、 T11が一 NH— CO— Y1がペンタ メチレン基である化合物である。
Figure imgf000117_0001
Figure imgf000117_0002
S^C^, overnight O οη
NH4OH
8°Csoveriiight
HO (61)
(4)蛍光標識 2' デォキシシチジン 5' トリホスフェート誘導体〔本発明の化合 物 [51] (標識物質)で標識されたモノヌクレオチド〕の合成。
尚、当該化合物は、ー般式[74' ] (Q1—E1—X1—T11 Y1—NH—W2)にお ける Q1が 2'—デォキシシチジン、 E1が一 CH = CH―、 XIがメチレン基、 T11が一 NH— CO—、 Y1がペンタメチレン基であって、 W2が下記化合物 (14)又は (25)である 化合物である。
Figure imgf000118_0001
Figure imgf000118_0002
[0485] 尚、上記以外の標識ヌクレオチドについても同様に、対応する原料を用いて上記に 準じて適宜合成することができる。
[0486] 本発明の新規なピラゾール系シァニン色素（特に本発明の化合物 [51])は、ピラゾ ール骨格とインドール骨格がポリメチン鎖で結合され、更に架橋された構造を有して いることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特性を有するため、エネルギー効 率の高い短波長領域の光源が使用可能となる、またこれを標識剤 (標識物質)として 用いて測定対象物を検出する場合、従来のシァニン色素誘導体が有していた例え ば水溶性が低い、色素同士の会合に起因する消光により検出感度が低下する等の 問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で検出することが可能となる。
[0487] 以下に実施例及び比較例を挙げて本発明を更に具体的に説明する力 本発明は これらにより何等限定されるものではない。
実施例
[0488] 実施例 1.本発明の化合物 (13)〜(15)の合成
Figure imgf000119_0001
Figure imgf000119_0002
[0491] 〔化合物 (2)の合成〕
Ν,Ν-ジメチルホルムアミド（DMF) (80ml)中に、ェチル -2-メチルァセトアセテート (1 ) (25.0g、 0.173mol)、 1, 3—プロパンスルトン（23.3g、 0.190mol)及び水素化ナトリウム (8.5g、 0.208mol)を添加し、 90°Cで終夜攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減 圧留去し、水（200ml)、ジェチルエーテル（200ml)を加え 2回洗浄を行った。その後 水層部分を減圧留去し、化合物 (2)を得た (42.1g、収率 91%)。
[0492] 〔化合物 (3)の合成〕
化合物 (2) (40.5g、 0.152mol)を濃塩酸 (60ml)中、 100°Cで 3時間攪拌反応を行った 。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出液:メタノ ール)を用いて精製し、化合物 (3)を得た（16.6g、収率 56%)。
[0493] 〔化合物 (5)の合成〕 化合物 (3) (10.0g、 0.051mol)及び化合物 (4) (12.9g、 0.066mol)を酢酸（50ml)中、 12 0°Cで 4時間加熱還流を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマト グラフィー (溶出液:水）を用いて精製し、化合物 (5)を得た（11.5g、収率 65%)。
物性データ： IR(KBr) (cm-1) : 3450, 1196
[0494] 〔化合物 (6)の合成〕
化合物(5) (11.5§、 0.033mol)を水（50ml)及びエタノール（50ml)中に溶解し、室温 下で 4時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマト グラフィー (溶出液:水）を用いて精製し、化合物 (6)を得た（10.3g、収率 80%)。
物性テータ： Mass (nega=346)
IR(KBr) (cm-1) : 3444, 1193
[0495] 〔化合物 (7)の合成〕
化合物 (6) (10.0g、 0.026mol)及び 6—ブロモへキサン酸（9.97g、 0.052mol)を 1, 2— ジクロロベンゼン（100ml)中に溶解し、 120°Cで終夜攪拌反応を行った。反応終了後 、溶媒を減圧留去し、酢酸ェチルを用いて 3回洗浄し、化合物 (7)を得た（11.5g、収率 89%) o
物性テータ： Mass (nega=460)
IR(KBr) (cm-1) : 3446, 1723, 1194
[0496] 〔化合物 (8)の合成〕
化合物 (7) (1.5g、 2.967mmol)及びマロン酸アルデヒドァ -リド塩酸塩（0.77g、 2.967 mmol)を無水酢酸 (20ml)中に溶解し、 120°Cで 1時間攪拌反応を行った。反応終了 後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液： 10%ァセトニトリル水 溶液)を用いて精製し、インドレ-ンィ匕合物 (8)を得た (0.18g、収率 10%)。
物性データ： Mass (nega:posi=631:633)
IR(KBr) (cm"1) : 3443, 1716, 1574, 1465, 1189
[0497] (2)ピラゾール化合物 (12)の合成
Figure imgf000121_0001
[0498] 〔化合物 (10)の合成〕
DMF (lOOml)中、 3—メチルー 2,4—ペンタンジオン（ィ匕合物 (9)) (15.0g、 0.13mol) 、 1, 3—プロパンスルトン（16.1g、 0.13mol)及び水素化ナトリウム（5.0g、 0.208mol)を 用いて、 50°Cで 16時間攪拌反応を行った。反応終了後、 1N水酸ィ匕ナトリウムで中 和し、溶媒を減圧留去し、水（200ml)及びジェチルエーテル（200ml)を加え 2回洗浄 を行った。その後水層部分を減圧留去し、ピラゾールイ匕合物 (10)を得た (32.2g、収率 96%) o
物性データ： IR(KBr) (cm-1) : 3474, 1695, 1665, 1191
[0499] 〔化合物 (11)の合成〕
化合物 (10) (10.0g、 0.042mol)及びヒドラジン一水和物（2.1g、 0.042mol)をエタノー ル (EtOH) (150ml)中に溶解し、 80°Cで 3時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶 媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出液:メタノール/クロ口ホル ム =1/1)を用いて精製し、化合物 (11)を得た (9.0g、収率 92%)。
物性データ： IR(KBr) (cm-1) : 3421, 1195
[0500] 〔化合物 (12)の合成〕
化合物 (ll) (4.8g、 0.019mol)及び 1, 3—プロパンスルトン（2.5g、 0.02mol)をジメチ ルァセトアミド (30ml)中に溶解し、 140°Cで 4時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸 ェチル (200ml)を加え、析出した結晶を濾過し、ピラゾールイ匕合物 (12)を得た (5.3g、 収率 76%)。
物'性データ： Mass (nega=352)
IR(KBr) (cm-1) : 3446, 1194
[0501] (3)インドレ-ンィ匕合物—ピラゾールイ匕合物複合体 (本発明の化合物) (13)〜(15)の 合成
Figure imgf000122_0001
[0502] 〔化合物 (13)の合成〕（本発明のマレイミド体）
実施例 1の（1)で得られたインドレ-ンィ匕合物 (8) (0. lg、 0.158mmol)及び実施例 1 の（2)で得られたピラゾール化合物 (12) (0.17g、 0.474mmol)を DMF (2ml)中に溶解 し、ピリジン（lml)及び無水酢酸 (0.5ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反応終 了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液： 10%メタノール水 溶液）及び Sephadex LH— 20〔GEヘルスケアバイオサイエンス（株）（旧アマシャム ノィォサイエンス (株)）社製〕（溶出液:メタノール)を用いて精製し、化合物 (13)を得 た（15mg、収率 12%)。
物性テータ： Mass (nega=850)
蛍光特性を以下に示す。
Figure imgf000122_0002
[0504] 〔化合物 (14)の合成〕
化合物 (13) (13mg、 0.015mmol)をDMF (0.6ml)中に溶解し、 2—スクシンイミド一 1 , 1 , 3, 3—テトラメチルゥ口-ゥムテトラフルォロボレート（TSTU) (46mg)及び N—ェ チルジイソプロピルアミン ((i-Pr) NEt) (600 1)をカ卩え、室温で 1時間攪拌を行った。
2
反応終了後、酢酸ェチル（15ml)を加えて晶析させた後、遠心分離により、化合物 (14 )を得た（13mg、収率 90%)。
物性テータ： Mass (nega=947)
[0505] 〔化合物 (15)の合成〕
マレイミドィ匕試薬 (N— (4-アミノブチル)マレイミド塩酸塩）（6mg)、トリェチルアミン（ Et N) (10 1)に DMF (lml)をカ卩え、 10分間攪拌を行った。その後に化合物 (14) (7mg
3
、 0.007mmol)を DMF (lml)に溶かしたものをゆっくり添カ卩し、室温で 1時間攪拌を行つ た。反応終了後、溶媒を減圧留去し、分取逆相 HPLCを用いて精製することで化合 物 (15)を得た（l.lmg、収率 15%)。
物'性データ： Mass (nega=1000)
[0506] 実施例 2.本発明の化合物 (20)〜(22)の合成
Figure imgf000123_0001
[0507] (1)ピラゾール化合物 (19)の合成
Figure imgf000123_0002
[0508] 〔化合物 (17)の合成〕
テトラヒドロフラン（THF) (100ml)中に、 4 ァセチルー 5—ォキソへキサン酸ェチ ルエステル（ィ匕合物 (16)) (lO.Ogゝ 49.94mmol)、ヨウ化工チル（10.6g、 74.91mmol)及 び炭酸カリウム（17.3g、 0.125mol)を添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後 、 1N塩酸で中和し、水（100ml)及び酢酸ェチル（100ml)を加え 2回洗浄を行った。そ の後、酢酸ェチル層を飽和重曹水（ 100ml)及び飽和食塩水（ 100ml)で 2回ずつ洗浄 し、得られた酢酸ェチル層を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出液 ：酢酸ェチル /へキサン =1/3)を用いて精製し、化合物 (17)を得た（10.0g、収率 93% [0509] 〔化合物 (18)の合成〕
化合物 (17) (10.0g、 46.7mmol)及びヒドラジン一水和物（2.6g、 51.4mmol)をエタノー ル (150ml)中に溶解し、 80°Cで 2時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去 し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液:メタノール/クロ口ホルム =1/1)を用い て精製し、化合物 (18)を得た (9.3g、収率 95%)。
[0510] 〔ピラゾール化合物 (19)の合成〕
化合物 (18) (9.3g、 44.2mmol)及び 1, 3—プロパンスルトン（5.9g、 44.9mmol)をトル ェン（150ml)中に溶解し、 120°Cで 5時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸ェチル (2 00ml)を加え、得られた晶析物を濾過し、ピラゾールイ匕合物 (19)を得た（10.6g、収率 7 2%)。
物性データ： Mass (nega=331)
IR(KBr) (cm-1) : 3436, 1726, 1211
[0511] (2)インドレ-ンィ匕合物—ピラゾールイ匕合物複合体 (本発明の化合物) (20)〜(22)の 合成
Figure imgf000124_0001
22
〔化合物 (20)の合成〕
実施例 1の（1)で得られたインドレ-ンィ匕合物 (8) (0.15g、 0.237mmol)及び実施例 2 の（1)で得られたピラゾール化合物 (19) (0.24g、 0.711mmol)を DMF (2ml)中に溶解 し、ピリジン（lml)及び無水酢酸 (0.5ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反応終 了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液： 10%メタノール水 溶液)及び Sephadex LH— 20〔GEヘルスケアバイオサイエンス社製〕（溶出液:メタノ ール)を用いて精製し、化合物 (20)を得た (52mg、収率 26%)。
物性データ： Mass (nega=828)
[0513] 〔化合物 (21)の合成〕
化合物 (20) (53mg、 0.064mmol)をメタノール（MeOH) (3ml)中に溶解し、 1N水酸ィ匕 ナトリウム水溶液（lml)を加え、 40°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了後、 Sephadex LH— 20 (溶出液:メタノール)を用いて精製し、化合物 (21)を得た（15mg、収率 29%) 物'性データ： Mass (nega=800)
蛍光特性を以下に示す。
Figure imgf000125_0002
[0515] 〔化合物 (22)の合成〕
化合物 (21) (15mg、 0.019mmol)を DMF (lml)中に溶解し、 2—スクシンイミド一 1, 1 , 3, 3—テトラメチルゥ口-ゥムテトラフルォロボレート（TSTU) (113mg、 0.337mmol) 及び N—ェチルジイソプロピルアミン（120 /z l)を加え、室温で 3時間攪拌を行った。反 応終了後、酢酸ェチル（15ml)を加えて結晶化した後、遠心分離を行い、化合物 (22) を得た（15mg、収率 81%)。
物性データ： (nega=995)
[0516] 実施例 3.本発明の化合物 (24)〜(25)の合成
Figure imgf000125_0001
[0517] (1)インドレ-ンィ匕合物（23)の合成
Figure imgf000126_0001
[0518] 〔化合物 (23)の合成〕
実施例 1の（1)で得られた化合物 (7) (5.0g、 9.89mmol)及び N, N'—ジフエ-ルホル ムアミジン（2.1g、 9.89mmol)を無水酢酸（50ml)中に溶解し、 120°Cで 1時間攪拌を 行った。反応終了後、反応液に酢酸ェチル (200ml)を加え、析出した結晶を濾過し、 インドレ-ンィ匕合物 (23)を得た (4.8g、収率 74%)。
[0519] (2)インドレ-ンィ匕合物—ピラゾールイ匕合物複合体 (本発明の化合物) (24)〜(25)の 合成
Figure imgf000126_0002
[0520] 〔化合物 (24)の合成〕
実施例 3の（1)で得られたインドレ-ンィ匕合物 (23) (60mg、 0.092mmol)及び実施例 1 の（2)で得られたピラゾール化合物 (12) (87mg、 0.231mmol)を DMF (2ml)中に溶解 し、ピリジン (0.5ml)及び無水酢酸 (0.2ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反応 終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液:水)及び Sephade X LH— 20 (溶出液:メタノール)を用いて精製し、化合物 (24)を得た (8mg、収率 10%
) o
物性データ： Mass (nega/posi=824/826)
[0521] 〔化合物 (25)の合成〕
化合物 (24) (6mg、 0.007mmol)を DMF ^OO /z l)中に溶解し、 2—スクシンイミド一 1, 1, 3, 3—テトラメチルゥ口-ゥムテトラフルォロボレート（TSTU) (20mg、 0.07mmol) 及び N—ェチルジイソプロピルアミン (30 1)を加え、室温で 3時間攪拌を行った。反 応終了後、酢酸ェチル (20ml)を加えて結晶化及び遠心分離を行うことでィ匕合物 (25) を得た（5mg、収率 81%)。
物'性データ： Mass (nega=922)
実施例 4.本発明の化合物 (32)及び (42)の合成
Figure imgf000127_0001
[0523] (1)インドレニン化合物（30)の合成
Figure imgf000127_0002
[0524] 〔化合物 (27)の合成〕
出発原料として 4-ヒドラジノベンゼンスルホン酸 0.5水和物〔ィ匕合物 (26)〕（50.0g、 0.2 53mol)及び 3-メチル - 2-ブタノン（65.5g、 0.759mol)を用い、酢酸（200ml)中、 120°C で 3時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を冷却し、ジェチルエーテル (300ml)をカロ え 2回洗浄することにより、化合物 (27)を得た (52.0g、収率 86%)。
物'性データ： Mass (nega=238)
[0525] 〔化合物 (28)の合成〕
化合物 (27) (10.0g、 0.042mol)及び水酸化ナトリウム（1.67g、 0.042mol)をエタノール (30ml) Z2-プロパノール（10ml)混合溶媒中、室温下で 4時間攪拌を行った。反応終 了後、溶媒を減圧留去し、 2-プロパノール（100ml)を加え 2回洗浄することでィ匕合物 (
28)を得た (4.2g、収率 39%)。
物性データ： IR(cm- 1) : 3206,
[0526] 〔化合物 (29)の合成〕
化合物 (28) (3.5g、 0.013mol)、 3-ブロモプロピオン酸（2.5g、 0.016mol)をトルエン（5 0ml)中、 110°Cで終夜加熱還流を行った。反応終了後、酢酸ェチル（100ml)をカロえ 3回洗浄し、化合物 (29)を得た（1.7g、収率 41%)。
物性テータ： Mass (nega=310)
[0527] 〔化合物 (30)の合成〕
化合物 (29) (1.5g、 4.50mmol)及びマロンアルデヒドジァ -リド塩酸塩（1.16g、 4.50m mol)を無水酢酸 (20ml)に溶解し、 120°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸 ェチル（50ml)をカ卩ぇ 2回洗浄し、インドレニン化合物 (30)を得た（1.59g、収率 70%)。 物性テータ： Mass (nega=481 )
[0528] (2)ピラゾール化合物 (31)の合成
Figure imgf000128_0001
[0529] 〔化合物 (31)の合成〕
実施例 1の（2)で得られた化合物 (10) (0.59g、 2.32mmol)及び 3—ブロモプロピオン 酸 (0.39g、 2.55mmol)を無溶媒で攪拌しながら、終夜攪拌を行った。反応終了後、酢 酸ェチル（30ml)をカ卩ぇ 2回洗浄し、化合物 (31)を得た（0.73g、収率 96%)。
物'性データ： Mass (nega=303)
[0530] (3)インドレ-ンーピラゾール複合体 (32)の合成
Figure imgf000129_0001
〔化合物 (32)の合成〕
実施例 4の（1)で得られたインドレ-ンィ匕合物 (30) (70mg、 0.139mmol)及び実施例 4 の（2)で得られたピラゾール化合物 (31) (45mg、 0.139mmol)を DMF (5ml)中に溶解 し、更にピリジン（lml)及び無水酢酸 (0.5ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反 応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液： 10%メタノー ル水溶液)及び Sephadex LH— 20 (溶出液:メタノール)を用いて精製し、化合物 (32) を得た（llmg、収率 12%)。
物性テータ： Mass (nega=649)
蛍光特性を以下に示す。
Figure imgf000129_0002
〔化合物 (42)の合成〕
化合物 (32) (10mg、 0.019mmol)を DMF (lml)に溶解し、ジスクシィミジルカルボネ ート（DSC) (113mgゝ 0.37mmol)、ピリジン（120 μ 1)を加え、 40°Cで 4時間攪拌を行つ た。反応終了後、酢酸ェチル（15ml)をカ卩えて結晶化及び洗浄を行うことでィ匕合物 (4 2)を得た（10mg、収率 79%)。
物性テータ： Mass nega=846) [0534] 実施例 5.本発明の化合物（33)〜(34)の合成
Figure imgf000130_0001
[0536] 〔化合物 (33)の合成〕
実施例 2の（1)で得られたインドレ-ンィ匕合物 (19) (47mg、 0.139mmol)及び実施例 4 の（1)で得られたピラゾール化合物 (30) (72mg、 0. 143mmol)を DMF(5ml)中に溶解 し、更にピリジン（lml)及び無水酢酸 (0.5ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反 応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液： 10%メタノー ル水溶液)を用いて精製し、化合物 (33)を得た（15mg、収率 15%)。
物性データ： Mass (nega=677)
[0537] 〔化合物 (34)の合成〕
化合物 (33) (10mg、 0.014mmol)をメタノール lml中に溶解し、 1N水酸化ナトリウム 水溶液 (0. 5ml)をカ卩え、 40°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了後、 Sephadex LH— 2 0 (溶出液:メタノール)を用いて精製し、化合物 (34)を得た (3.5mg、収率 37%)。 物性テータ： Mass (nega=649)
蛍光特性を以下に示す。 最大吸収波長（λ max) 630nm
最大励起波長〔Ex(max)〕 632nm
最大蛍光波長〔Em(max)〕 658nm
[0539] 実施例 6.本発明の化合物 (37)〜(39)の合成
Figure imgf000131_0001
[0540] (1)インドレ-ンィ匕合物 (36)の合成
Figure imgf000131_0002
[0541] 〔化合物 (35)の合成〕
実施例 4の（1)で得られた化合物 (28) (4.9g、 18.7mmol)をスルホラン（25mL)に溶解 し、次いでェチルトルエンスルホン酸（11.3g、 56.1mmol)をカ卩え、 140°Cで 18時間反 応を行った。反応終了後、反応溶液を酢酸ェチル（lOOmL)に加え、析出物を濾取し た。得られた晶析物を酢酸ェチルで洗浄し、減圧乾燥することにより化合物 (35) (4.04 g、収率 74.4%)を得た。
物性データ： Mass (nega=267)
[0542] 〔化合物 (36)の合成〕
化合物 (35) (3g、 lOmmol)及びマロンアルデヒドジァ -リド塩酸塩（2.67g、 lOmmol)を 無水酢酸 (30ml)に溶解し、 120°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸ェチル（ 100ml)を加え、析出物を濾取した。得られた晶析物を酢酸ェチル（lOOmL)で 2回洗 浄し、減圧乾燥することによりインドレ-ンィ匕合物 (36)を得た (2.4g、収率 52.1%)。 物性テータ： Mass (nega=436) [0543] (2)インドレ-ンィ匕合物一ピラゾールイ匕合物複合体 (本発明の化合物) (37)〜(39)
Figure imgf000132_0001
[0544] 〔化合物 (37)の合成〕
実施例 6の（1)で得られたインドレ-ンィ匕合物 (36) (lg、 2.17mmol)及び実施例 2の（ 1)で得られたピラゾール化合物 (19) (1.8g、 5.41mmol)を DMF (20ml)中に溶解し、更 にピリジン (8ml)及び無水酢酸 (4ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了 後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液: 20%CH OHaq.)及び
3
Sephadex LH— 20 (溶出液:メタノール）を用いて精製し、化合物 (37)を得た（130mg 、収率 9.5%)。
物性テータ： Mass (nega=634)
[0545] 〔化合物 (38)の合成〕
化合物 (37) (130mg、 0.21mmol)にメタノール（15mL)と 5%水酸化リチウム水溶液（5 mL)を加え、 20°Cで 1時間反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラ ムクロマトグラフィー (溶出液:水）により精製を行うことでィ匕合物 (38)を得た（12mg、収 率 9.7%)。
物性データ： Mass (nega=606)
蛍光特性を以下に示す。
最大吸収波長（λ max) 6ύ 1 nm
モル吸光係数（Ε ) Ι θδ,ΟΟΟΜ^ θΓη"1
最大励起波長〔Ex(max)〕 ο31 nm
最大蛍光波長〔Em(max)〕 652nm [0547] 〔化合物 (39)の合成〕
化合物 (38) (12mg、 0.019mmol)の DMF (600 μ L)溶液中に溶解し、 TSTU (57mg、
0.19mmol)及び N-ェチルジイソプロピルアミン（74 μ L)を加え、室温で 3時間撹拌反 応を行った。反応終了後、酢酸ェチル (40mL)を加えて結晶化及び遠心分離を行い
、化合物 (39)を（10.7mg、収率 80%)得た。
物'性データ： Mass (nega=703)
[0548] 実施例 7.本発明の標識化合物〔蛍光標識 2' デォキシシチジン 5' トリホスフエ ート誘導体〕の合成。
本発明の化合物 [1]で標識されたモノヌクレオチド（2' デォキシシチジン 5' ト リホスフェート）を前記した合成経路に従って、以下のように合成した。
(1)部分リンカ一 (A)の合成
[0549] (0トリフルォロアセチル (Tfa)化 (第 1工程）
21gの Propagylamine〔前記合成経路中の (51)の化合物〕（東京化成 (株)製）に、氷冷 下でトリフルォロ酢酸メチル（MeOTfa) (54g)及びトリェチルァミン (Et N)(25mL)を添
3
加した後、室温で 2日間攪拌した。反応終了後、減圧蒸留で精製を行い、 56gの化合 物 (52)〔前記合成経路中の (52)の化合物〕を得た (収率； 98.1%)。
[0550] (ii)トリ（n -プチル)スズ (Bu Sn)化 (第 2工程）
3
15gの化合物 (52)〔前記合成経路中の (52)の化合物〕をベンゼン (300mL)に溶解し、 水素化トリ（n-ブチル)スズ（Bu SnH) (35mL)及びァゾビスイソブチ口-トリル (AIBN) (2.
3
lg)を添加した後、還流下で 1.5時間攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮した。 残渣をシリカゲルカラム (溶離液; AcOEt:Hexane=l:20で精製し、 11.4gの化合物 (53) ( 部分リンカ一 A)〔前記合成経路中の (53)の化合物〕を得た (収率; 25.8%)。
[0551] (2)部分リンカ一 Bの合成
(i)Tfa化 (第 3工程）
10gの 6-Aminohexanoic add〔前記合成経路中の (54)の化合物〕（和光純薬工業 (株） 製）を懸濁し、トリフルォロ酢酸メチル (25g),トリェチルァミン (Et N) (25mL)を添カロし
3
た後、室温で 2日間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去し、水より結晶化を行うことで 、 8.4gの化合物 (55)〔前記合成経路中の (55)の化合物〕を得た (収率; 48.6%)。 [0552] GO活性エステルイ匕 (第 4工程）
2.3gの化合物 (55)〔前述合成経路中の (55)の化合物〕を Ν,Ν-ジメチルホルムアミド（ DMF) (50mL)に溶解し、 N-ヒドロキシコハク酸（HO- Su) (1.4g), WSC(2.3g)を添カ卩した 後、室温で終夜攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、酢酸ェチルで分液洗 浄した。有機層を減圧濃縮することで、 3.6gの化合物 (56) (部分リンカ一 B)〔前記合成 経路中の (56)の化合物〕を得た (収率；定量的)。
[0553] (3)部分リンカ一の導入
(0部分リンカ一 Aの導入 (第 5工程）
l.Ogの 5—ョードー 2'—デォキシシチジン〔上記合成経路中の (57)の化合物〕（和光 純薬工業 (株)製)をァセトニトリル (30mL)に懸濁し、 Arガス置換下で 0-ビス (トリメチル シリル)ァセトアミド (TMS-Acetamide) (3mL)を添カ卩した後、還流下で 2時間攪拌した。 反応液を室温に冷却した後、ビス (ァセトニトリル)ジクロロパラジウム (II) [PdCl (CH C
2 3
N) ](40mg),及び 2gの部分リンカ一 A〔前記合成経路中の (53)の化合物〕を添加し、
2
更に 50〜60°Cで 20時間攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮した。残渣をシリ 力ゲルカラム (溶離液; CHC1： MeOH=9:l)で精製を行い、ジェチルエーテルより結晶
3
化することで、 720mgの 2'-デォキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の (58)の化合 物〕を得た (収率; 67.3%)。
[0554] (ii)脱トリフルォロアセチル (Tfa)化 (第 6工程）
500mgの 2'-デォキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の (58)の化合物〕をエタノー ル（EtOH) (10mL)に溶解し、 25% -アンモニア水 (25mL)を添カ卩した後、室温で 4時間攪 拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮した。残渣を ODSカラムクロマト (溶離液; 5%- MeOH)で精製することで、 190mgの 2'-デォキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の ( 59)の化合物〕を得た (収率； 50.9%)。
[0555] (iii)部分リンカ一 Bの導入 (第 7工程）
190mgの 2'-デォキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の (59)の化合物〕を Ν,Ν-ジ メチルホルムアミド（DMF) (4mL)に溶解し、 330mgの部分リンカ一 B〔前記合成経路中 の (56)の化合物〕を添加した後、室温で終夜攪拌した。反応終了後、反応液を減圧 濃縮し、残渣をシリカゲルカラム (溶離液; CHC1： MeOH:AcOH=80:20:5)で精製を行 つた。更に、 ODSカラムクロマト (溶離液； 20%-MeOH)で精製することで、 169mgの 2'- デォキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の (60)の化合物〕を得た (収率 ;51.2%)。
[0556] (4)モノヌクレオシドのトリリン酸化'脱 Tfeィ匕 (第 8工程）
(0トリリン酸化試薬 0.5M- tris(TBAPP)の調製
100cm3の再生済 Dowex50WX 8(H+Form)を φ 2.5cmカラムに投入し、イオン交換水 で洗浄した。ピロリン酸ナトリウム · 10水和物水溶液 (6.7g/100mL)をチャージし、溶出 液 (ピロリン酸溶液)を 10.6mLのトリブチルァミンを含む EtOH(50mL)溶液に直接滴下 した。溶出液の pHが中性になるまで滴下した後、 10分間攪拌した。攪拌後、減圧濃 縮し、残渣に EtOH(30mL X 2回)，トルエン (30mL X 3回)， DMF(20mL X 2)を順次添カロ し、減圧濃縮を繰り返した。 DMFで 30mLにメスアップした後、 MS4Aを添カ卩し、終夜脱 水することで、 0.5M- tris(TBAPP)溶液を得た。
[0557] (ii)トリリン酸ィ匕
147mg(0.3mmol)の 2'-デォキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の (60)の化合物〕 をリン酸トリェチル [(EtO) PO](1.4mL)に溶解し、ォキシ塩化リン (27 u L + 24 u L)を添
3
加した後、低温室で 4時間攪拌することでモノリン酸ィ匕を行った。これに 4mLの 0.5M-t ris(TBAPP)を投入し、低温室で 2時間攪拌することで、トリリン酸ィ匕を行った (HPLCェ 程検査；生成率 37.8%)。反応後、 7%-トリェチルァミン水溶液 (7mL)で反応液を中和し 、更に終夜攪拌した。反応後、反応液をジェチルエーテルで洗浄し、水層を DEAE- TOYOPEARLカラム (溶離液；水→0.2M- TEABグラジェント)による精製を行った。溶 出分画を減圧濃縮し、中間体を得た。次いで、中間体を 25%-アンモニア水 (30mL)に 溶解し、低温室で終夜攪拌した。反応終了後、アンモニアを減圧留去し、残渣を凍 結乾燥することで、 130mgの 2'- dCTP-ァミノリンカ一誘導体〔前記合成経路中の (61) の化合物〕を得た。
[0558] 本品の工程検査を行った結果、 HPLC純度； 95.8%,含量； 77.3%であった。
[0559] (5)モノヌクレオチドの標識 (第 9工程）
6.5mgの 2'- dCTP-ァミノリンカ一誘導体〔前記合成経路中の (61)の化合物〕をイオン 交換水 (150 L)に溶解し、本発明の化合物 (標識物質）〔前記合成経路中の (25)の 化合物〕の DMF溶液 (lmg/100 L)を 7回添加した後、室温で終夜攪拌した (HPLCェ 程検査;生成率 60.0%)。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、ヮコーシル C カラム (溶
50 18 離液； 5%- MeOH),次いで DEAE- TOYOPEARL 650Mカラムで精製を行った (Fr検査； HPLC)o残渣を凍結乾燥することで 3.4mgの蛍光標識 2'- dCTP誘導体〔前記合成経 路中の (25a)の化合物:本発明の化合物 (標識物質)で標識されたモノヌクレオチド〕 を得た。
[0560] 実施例 8.本発明の化合物の新規蛍光強度の測定
従来のシァニン色素である Cy5の蛍光強度を基準に本発明の化合物の相対蛍光 強度を概算した。
先ず、 Cy5の蛍光強度から、 Cy5の 1 μ Μ当りの蛍光強度を測定し、この蛍光強度 値を 100とした場合の、本発明の化合物の相対蛍光強度を概算した。その結果を表 29に示す。
[0561] ( l) Cy5の蛍光強度の測定
蛋白 lmg標識用 Cy5 (GEヘルスケアバイオサイエンスバイオへルス社製)を精製水 lmLに溶解した。本溶液を 50mMりん酸緩衝液 (pH7. 5)で 200倍希釈し、 OD値を 測定した（0. 1020)。
[0562] この OD値及びモル吸光係数（ ε = 250, 000)〔GEヘルスケアバイオサイエンス総 合製品カタログ 2006「7—4」に記載〕から Cy5の溶液濃度を求めた（0. 408 /z M)。 次に、本溶液を用いて蛍光測定を実施した。
蛍光特性を以下に示す。
Figure imgf000136_0001
[0564] (2)本発明の化合物の相対蛍光強度の概算
実施例 8の（1)で得られた Cy5の: L M当りの蛍光強度を 100として、本発明の化 合物 (13)、（21)、（32)及び (38)の相対蛍光強度を概算した。その結果を表 29に示す。
[0565] [表 29] 相対蛍光強度
化合物（蛍光色素）
〔対 Cy5(1 / M)の蛍光強度 1 00)〕
実施例 1 化合物 (13) 145
実施例 2 化合物 (21 ) 120
実施例 4 化合物 (32) 106
実施例 6 化合物 (38) 135
比較例 1 Cy5 100
[0566] 表 29の結果から明らかなように、本発明の化合物と Cy5 (従来のシァニン色素）と 比較した場合、本発明の化合物の方が、 Cy5と同等以上の蛍光強度を示すことが分 つた o
[0567] 実施例 9.新規蛍光色素の実用評価
(1)新規蛍光標識抗 AFP-Fab' (本発明の標識ィ匕合物)の調製
抗 α—フエトプロテイン (AFP)抗体 (和光純薬工業 (株)社製)をペプシン消化した 後、 2—アミノエタンチオールで還元し、ゲル濾過カラム（Superdex200、 GEヘルスケ ァバイオサイエンス社製)で精製することにより抗 AFP- Fab'を得た。
抗 AFP-Fab'溶液（280nmの absで算出した蛋白質量として 2mg)を含有する 50mMリ ン酸緩衝液 (PBS) pH6.0溶液 (0.892mL)に上記実施例 1で得られた化合物 (15)〔本 発明の化合物（マレイミド体)〕の DMF溶液 (4mg/mL) O.lmLを添カ卩し、低温室で終夜 反応させた。得られた反応液を、イオン交換カラム (DEAE_5PW、東ソー (株))及びゲ ル濾過カラムで精製し、本発明の標識化合物である新規蛍光標識抗 AFP- Fab'の 50 mMのリン酸緩衝液 pH6.0溶液（280nmの absで算出した蛋白質量として 0.2mg)を得た
[0568] (2) HPLC蛍光分析法による新規蛍光標識抗 AFP-Fab' (本発明の標識化合物）の 蛍光強度測定
上記実施例 9の（1)で得られた 150nMの蛍光標識抗 AFP-Fab'を含有する 50mMリ ン酸緩衝液 (PBS) pH6.0溶液〔lmMエチレンジァミン四酢酸（EDTA)含有〕 0.05mLに 、各濃度の AFP(0、 0.625、 1.25、 2.5、 5、 10及び 20nM)を含有する 50mMトリス塩酸 p H8.0溶液 0.05mLを添カ卩し、 2時間反応させた。得られた反応液を HPLC (LC-10A、 島津製作所製)、ゲルろ過カラム (Did-200、和光純薬工業 (株)社製)で分析し、新 規蛍光標識抗 AFP-Fab'と AFPとの複合体 (本発明の標識化合物)のピーク面積を蛍 光強度として算出した (以下、「本発明の標識複合体」と略記する。 ) oその結果を下 記表 30に示す。
[0569] 比較例 2. Cy5蛍光標識抗 AFP- Fab'の蛍光強度測定
標識物質として、実施例 9の（1)で用いた本発明の化合物 (15)の代わりに Cy5マレ イミド試薬 (Cy5マレイミド、 GEヘルスケアバイオサイエンス社製)を用いた以外は実施 例 9の（1)と同様の操作を行い、 Cy5蛍光標識抗 AFP- Fab'の 50mMリン酸緩衝液 pH 6.0溶液を得た。
更に、実施例 9の（2)と同様の操作を行い、得られた Cy5蛍光標識抗 AFP-Fab'と A FPとの複合体の蛍光強度を算出した (以下、「Cy5標識複合体」と略記する。 ) 0その 結果を下記表 30に併せて示す。
[0570] [表 30]
Figure imgf000138_0002
[0571] 表 30の結果から明らかなように、本発明の蛍光試薬及び従来の蛍光試薬を使用し た場合を比較すると、本発明の標識複合体の方が約 1.2〜2.0倍程度の蛍光強度を 示すことが分る。
[0572] 実施例 10.新規蛍光色素の実用評価 (標識ヌクレオチドの取り込み）
(1) PCR法による蛍光標識ヌクレオチドの取込み
下記組成で反応液を調製した。
Figure imgf000138_0001
[0573] 「WY-535」は、実施例 3で得られた本発明の化合物 (25)である。
「WY-535-dCTP」は、実施例 3で得られた本発明の化合物 (25)で標識されたモノヌ クレオチド〔蛍光標識 2'—デォキシシチジン— 5'—トリホスフェート誘導体〕である。
Templateは、 Escherichia coli JCM 1649τからリゾチームで溶菌後、フエノーノレクロ口 ホルム法によって精製を行なった。
Primerは、 16Sリボソーム遺伝子の一部を増幅する配列を使用した。
「FowerdPrimer」： (AGAGTTTGATCMTGGCTCAG)
「ReversePrimer」：（CCCACTGCTGCCTCCCGTAG)
Taqは、 TaKaRa社製 ExTaq HSを使用した。
PCR反応の条件は、 95°C 5min反応後、 95°C 30sec、 55°C 20sec、 72°C 30secの 反応を 30回繰り返した後、 72°C 5min反応を行った。
[0574] (2)スピンカラムを用いた標識ゲノム DNA断片の精製
PCR Purification Kit (Qiagen社製)を用いて、上記（1)の反応液中に存在する未反 応の標識ヌクレオチド (WY535- dCTP)及びプライマー、 dNTPの除去を行った。反応 停止後の各チューブに Binding Buffer (Qiagen社製の PCR Purification Kitに含まれて いる Buffer)を 275 Lカ卩え、ピペッティングにより混合した。混合液全量をスピンカラム (Qiagen社製の PCR Purification Kitに含まれているカラム）にアプライし、 6,000r.p.m. (3,500 X g)で 2分遠心分離処理した。フロースルーを捨て、スピンカラム Wash Buffer ( Qiagen社製の PCR Purification Kitに含まれている Buffer) 750 ^ Lを添加し、 6000r.p. m.(3,500 X g)で 2分遠心分離処理した。フロースルーを捨て 12,000r.p.m.(14,000 X g) で 3分遠心分離処理した。新しい 1.5mLのマイクロチューブをスピンカラムにセットし、 カラムの中心に Elution Buffer (Qiagen社製の PCR Purification Kitに含まれている Buff er)を L添加後、遮光下、 5分室温に放置し、 12,000r.p.m.(14,000 X g)で 3分遠心 分離処理した。カラムの中心に Elution Buffer (Qiagen社製の PCR Purification Kitに 含まれている Buffer)を 30 L添加後、遮光下、 5分室温に放置し、 12,000r.p.m.(14,0 00 X g)で 3分遠心分離処理し、精製した WY- 535標識 DNA 80 μ 1を得た。分光光度 計により核酸の合成量および蛍光色素取り込み量を測定した。その結果を表 31に示 す。 [0575] [表 31]
Figure imgf000140_0002
[0576] 表 31の結果から明らかなように、溶液 2の実験力も PCR Purification kitで未反応の標 識物質のコンタミが lpmol程度であることがわかった。このことから PCR Purification kit で未反応の標識物質は、ほぼ完全に除去可能なことがわ力つた。
また、溶液 3〜5の結果から、蛍光標識ヌクレオチドの濃度依存的に蛍光物質取込み 量が増加していることが分力つた。このことから本発明の標識ヌクレオチドを使用して 、酵素的に DNA鎖に取り込む事が可能であることがわ力つた。
[0577] 以上の結果力も明らかなように、本発明の化合物で標識されたヌクレオチドを用い ても
公知の蛍光色素を用いた場合と同様に、測定対象物 (例えば核酸等)を検出するこ とが可能となる。
[0578] 実施例 11.本発明の化合物 (40)の合成
Figure imgf000140_0001
[0579] (1)インドレ-ンィ匕合物 (8)の合成
Figure imgf000141_0001
[0580] 〔化合物 (2)の合成〕
Ν,Ν-ジメチルホルムアミド（DMF) (80ml)中に、ェチル -2-メチルァセトアセテート (1 ) (25.0g、 0.173mol)、 1,3-プロパンスルトン（23.3g、 0.190mol)及び水素化ナトリウム（8 .5g、 0.208mol)を添加し、 90°Cで終夜攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧 留去し、水（200ml)、ジェチルエーテル（200ml)をカ卩ぇ 2回洗浄を行った。その後水 層部分を減圧留去し、化合物 (2)を得た (42.1g、収率 91%)。
[0581] 〔化合物 (3)の合成〕
化合物 (2) (40.5g、 0.152mol)を濃塩酸 (60ml)中、 100°Cで 3時間攪拌反応を行った 。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出液:メタノ ール)を用いて精製し、化合物 (3)を得た（16.6g、収率 56%)。
[0582] 〔化合物 (5)の合成〕
化合物 (3) (10.0g、 0.051mol)及び化合物 (4) (12.9g、 0.066mol)を酢酸（50ml)中、 12 0°Cで 4時間加熱還流を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマト グラフィー (溶出液:水）を用いて精製し、化合物 (5)を得た（11.5g、収率 65%)。
物性データ： IR(KBr) (cm-1) : 3450, 1196
[0583] 〔化合物 (6)の合成〕
化合物(5) (11.5§、 0.033mol)を水（50ml)及びエタノール（50ml)中に溶解し、室温 下で 4時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマト グラフィー (溶出液:水）を用いて精製し、化合物 (6)を得た（10.3g、収率 80%)。
物性テータ： Mass (nega=346)
IR(KBr) (cm-1) : 3444, 1193
[0584] 〔化合物 (7)の合成〕
化合物 (6) (10.0g、 0.026mol)及び 6-ブロモへキサン酸（9.97g、 0.052mol)を 1,2-ジク ロロベンゼン（100ml)中に溶解し、 120°Cで終夜攪拌反応を行った。反応終了後、溶 媒を減圧留去し、酢酸ェチルを用いて 3回洗浄し、化合物 (7)を得た（11.5g、収率 89 %)。
物性テータ： Mass (nega=460)
IR(KBr) (cm-1) : 3446, 1723, 1194
[0585] 〔化合物 (8)の合成〕
化合物 (7) (1.5g、 2.967mmol)及びマロンアルデヒドジァ -リド塩酸塩（0.77g、 2.967m mol)を無水酢酸 (20ml)中に溶解し、 120°Cで 1時間攪拌反応を行った。反応終了後 、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液： 10%ァセトニトリル水溶 液)を用いて精製し、インドレ-ンィ匕合物 (8)を得た (0.18g、収率 10%)。
物性データ： Mass (nega:posi=631:633)
IR(KBr) (cm"1) : 3443, 1716, 1574, 1465, 1189
[0586] (2)ピラゾール化合物 (19)の合成
Figure imgf000142_0001
[0587] 〔化合物 (17)の合成〕
テトラヒドロフラン（THF) (100ml)中に、 4-ァセチル- 5-ォキソへキサン酸ェチルェ ステル (16) (10.0g、 49.94mmol)、ヨウ化工チル（10.6g、 74.91mmol)及び炭酸カリウム（ 17.3g、 0.125mol)を添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、 1N塩酸で中和 し、水（100ml)及び酢酸ェチル（100ml)をカ卩ぇ 2回洗浄を行った。その後、酢酸ェチ ル層を飽和重曹水（100ml)及び飽和食塩水（100ml)で 2回ずつ洗浄し、得られた酢 酸ェチル層を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出液:酢酸ェチル / へキサン =1/3)を用いて精製し、化合物 (17)を得た（10.0g、収率 93%)。
[0588] 〔化合物 (18)の合成〕
化合物 (17) (10.0g、 46.7mmol)及びヒドラジン一水和物（2.6g、 51.4mmol)をエタノー ル (EtOH) (150ml)中に溶解し、 80°Cで 2時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減 圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (溶出液:メタノール/クロ口ホルム =1/1) を用いて精製し、化合物 (18)を得た (9.3g、収率 95%)。
[0589] 〔ピラゾール化合物 (19)の合成〕
化合物 (18) (9.3g、 44.2mmol)及び 1,3-プロパンスルトン（5.9g、 44.9mmol)をトルエン (150ml)中に溶解し、 120°Cで 5時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸ェチル (200m 1)を加え、得られた晶析物を濾過し、ピラゾールイ匕合物 (19)を得た（10.6g、収率 72%
) o
物性データ： Mass (nega=331)
IR(KBr) (cm-1) : 3436, 1726, 1211
[0590] (3)インドレ-ンィ匕合物ーピラゾールイ匕合物複合体 (本発明の化合物) (40)の合成
Figure imgf000143_0001
〔化合物 (20)の合成〕
実施例 11の（1)で得られたインドレ-ンィ匕合物 (8) (0.15g、 0.237mmol)及び実施例 11の（2)で得られたピラゾール化合物 (19) (0.24g、 0.711mmol)を DMF (2ml)中に溶 解し、ピリジン（lml)及び無水酢酸 (0.5ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反応 終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー (溶出液： 10%メタノール 水溶液）及び Sephadex LH— 20〔GEヘルスケアバイオサイエンス社製〕（溶出液:メ タノール)を用いて精製し、化合物 (20)を得た (52mg、収率 26%)。
物性データ： Mass (nega=828)
[0592] 〔化合物 (21)の合成〕
化合物 (20) (53mg、 0.064mmol)をメタノール（3ml)中に溶解し、 1N水酸化ナトリウム 水溶液（lml)を加え、 40°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了後、 Sephadex LH— 20 ( 溶出液:メタノール)を用いて精製し、化合物 (21)を得た（15mg、収率 29%)。
物性データ： Mass (nega=800)
[0593] 〔化合物 (22)の合成〕
化合物 (21) (15mg、 0.019mmol)を DMF (lml)中に溶解し、 2-スクシンイミド -1,1, 3,3 -テトラメチルゥ口-ゥムテトラフルォロボレート（TSTU) (113mg、 0.337mmol)及び N- ェチルジイソプロピルアミン（(i-Pr) NEt) (120 1)を加え、室温で 3時間攪拌を行った
2
。反応終了後、酢酸ェチル (15ml)を加えて結晶化した後、遠心分離を行い、化合物 ( 22)を得た（15mg、収率 81%)。
物性データ： (nega=995)
[0594] 〔化合物 (40)の合成〕
化合物 (22) (6mg、 0.006mmol)を水（12ml)に溶解し、 10分間攪拌を行った。次いで 、得られた反応液に、リジン一塩酸塩 (2.1mg、 O.Ollmmol)と炭酸ナトリウム（0.6mg、 0. 006mmol)を水（6ml)に溶解した溶液をゆっくり添カ卩し、室温で終夜攪拌を行った。反 応終了後、溶媒を減圧留去し、分取逆相 HPLC〔溶出液; A液 (5%ァセトニトリル 0 .1%トリフルォロ酢酸 水溶液)： B液 (95%ァセトニトリル 0.1%トリフルォロ酢酸 水 溶液) = 90:10〕（商品名「WakosiHI 5C18 RS Prep (20.0mmX250mm)」、和光純薬ェ 業 (株)社製)を用いて精製し、化合物 (40)を得た (lmg、収率 18%)。
物性テータ： Mass (nega=955)
[0595] 蛍光特性を以下に示す。
最大吸収波長（え max) 634nm
モル吸光係数（ε ) 235,000M"1 cm"1
最大励起波長〔 Ex(max)] 635nm
最大蛍光波長〔Em(max)〕 659nm [0596] 実施例 12.本発明の化合物 (43)の合成
Figure imgf000145_0001
[0597] (1)インドレ-ンィ匕合物（30)の合成
Figure imgf000145_0002
[0598] 〔化合物 (27)の合成〕
出発原料として 4-ヒドラジノベンゼンスルホン酸 0.5水和物 (26) (50.0g、 0.253mol)及 び 3-メチル - 2-ブタノン（65.5g、 0.759mol)を用い、酢酸（200ml)中、 120°Cで 3時間 攪拌を行った。反応終了後、溶媒を冷却し、ジェチルエーテル (300ml)を加え 2回洗 浄することにより、化合物 (27)を得た (52.0g、収率 86%)。
物'性データ： Mass (nega=238)
[0599] 〔化合物 (28)の合成〕
化合物 (27) (10.0g、 0.042mol)及び水酸化ナトリウム（1.67g、 0.042mol)をエタノール
(30ml) Z2-プロパノール (10ml)混合溶媒中、室温下で 4時間攪拌を行った。反応終 了後、溶媒を減圧留去し、 2-プロパノール（100ml)を加え 2回洗浄することでィ匕合物（
28)を得た (4.2g、収率 39%)。
物性データ： IR(cm- ： ^,
[0600] 〔化合物 (29)の合成〕
化合物 (28) (3.5g、 0.013mol)、 3-ブロモプロピオン酸（2.5g、 0.016mol)をトルエン（5 0ml)中、 110°Cで終夜加熱還流を行った。反応終了後、酢酸ェチル（100ml)をカロえ 3回洗浄し、化合物 (29)を得た（1.7g、収率 41%)。
物性テータ： Mass (nega=310)
[0601] 〔化合物 (30)の合成〕
化合物 (29) (1.5g、 4.50mmol)及びマロンアルデヒドジァ -リド塩酸塩（1.16g、 4.50m mol)を無水酢酸 (20ml)に溶解し、 120°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸 ェチル（50ml)をカ卩ぇ 2回洗浄し、インドレニン化合物 (30)を得た（1.59g、収率 70%)。 物性テータ： Mass (nega=481 )
[0602] (2)ピラゾールイ匕合物 (31)の合成
Figure imgf000146_0001
[0603] 〔化合物 (10)の合成〕
DMF (lOOml)中、 3-メチル - 2,4-ペンタンジオン (9) (15.0g、 0.13mol)、 1,3-プロパン スルトン（16.1g、 0.13mol)及び水素化ナトリウム（5.0g、 0.208mol)を用いて、 50°Cで 1 6時間攪拌反応を行った。反応終了後、 1N水酸ィ匕ナトリウムで中和し、溶媒を減圧 留去し、水（200ml)及びジェチルエーテル（200ml)を加え 2回洗浄を行った。その後 水層部分を減圧留去し、ピラゾールイ匕合物 (10)を得た (32.2g、収率 96%)。
物性データ： IR(KBr) (cm-1) : 3474, 1695, 1665, 1191
[0604] 〔化合物 (11)の合成〕
化合物 (10) (10.0g、 0.042mol)及びヒドラジン一水和物（2.1g、 0.042mol)をエタノー ル（150ml)中に溶解し、 80°Cで 3時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧 留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液:メタノール/クロ口ホルム =1/1)を 用いて精製し、化合物 (11)を得た (9.0g、収率 92%)。 物性データ： IR(KBr) (cm-1) : 3421, 1195
[0605] 〔化合物 (12)の合成〕
化合物 (11) (4.8g、 0.019mol)及び 1,3-プロパンスルトン（2.5g、 0.02mol)をジメチル ァセトアミド (DMA) (30ml)中に溶解し、 140°Cで 4時間攪拌を行った。反応終了後、 酢酸ェチル (200ml)を加え、析出した結晶を濾過し、ピラゾール化合物 (12)を得た (5. 3g、収率 76%)。
物'性データ： Mass (nega=352)
IR(KBr) (cm-1) : 3446, 1194
[0606] 〔化合物 (31)の合成〕
化合物 (12) (0.59g、 2.32mmol)及び 3-ブロモプロピオン酸（0.39g、 2.55mmol)を無溶 媒で攪拌しながら、終夜攪拌を行った。反応終了後、酢酸ェチル (30ml)を加え 2回 洗浄し、化合物 (31)を得た (0.73g、収率 96%)。
物'性データ： Mass (nega=303)
[0607] (3)インドレ-ンィ匕合物—ピラゾールイ匕合物複合体 (本発明の化合物) (43)の合成
Figure imgf000147_0001
〔化合物 (41)の合成〕
実施例 12の（1)で得られたインドレニン化合物 (30) (70mg、 0.139mmol)、実施例 12 の（2)で得られたピラゾール化合物 (31) (91mg、 0.278mmol)を DMF (1ml)に溶解し、 ピリジン (0.1ml)、無水酢酸 (0.1ml)を加え、 80°Cで 1時間攪拌を行った。反応終了後 、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（展開溶媒： 10%メタノール)及び Sephadex LH 20 (溶媒：メタノール)を用いて精製することでィ匕合物 (41)を得た（11 mg、収率 12%)。
物性テータ： Mass (nega=649)
[0609] 〔化合物 (42)の合成〕
化合物 (41) (10mg、 0.019mmol)を DMF (lml)に溶解し、ジスクシィミジルカルボネ ート（DSC) (113mgゝ 0.37mmol)、ピリジン（120 μ 1)を加え、 40°Cで 4時間攪拌を行つ た。反応終了後、酢酸ェチル（15ml)をカ卩えて結晶化及び洗浄を行うことでィ匕合物 (4 2)を得た（10mg、収率 79%)。
物性テータ： Mass (nega=846)
[0610] 〔本発明の化合物 (43)の合成〕
化合物 (42) (10mg、 O.Ollmmol)を水（12ml)に溶解し、 10分間攪拌を行った。次い で、得られた溶液に、リジン一塩酸塩 (4mg、 0.022mmol)と炭酸ナトリウム（l.lmg、 0.0 llmmol)を水（6ml)に溶解した溶液をゆっくり添加し、室温で終夜攪拌を行った。反 応終了後、溶媒を減圧留去し、分取逆相 HPLC〔溶出液; A液 (5%ァセトニトリル 0. 1%トリフルォロ酢酸 水溶液)： B液 (95%ァセトニトリル 0.1%トリフルォロ酢酸 水溶 液) = 90:10〕（商品名「WakosiHI 5C18 RS Prep (20.0mmX250mm)」、和光純薬工業（ 株)社製)を用いて精製することで本発明の化合物 (43)を得た（1.5mg、収率 17%)。 物性テータ： Mass (nega=761)
[0611] 蛍光特性を以下に示す。
Figure imgf000148_0002
[0612] 実施例 13.本発明の化合物 (47)〜(48)の合成
Figure imgf000148_0001
〔化合物 (46)の合成〕
(1)リンカ一化合物 (46)の合成
Figure imgf000149_0001
[0614] ※Boc=tert-ブトキシカルボ-ル基
[0615] 〔化合物 (45)の合成〕
テトラヒドロフラン（THF) (100ml)中に、ジシクロへキシルカルボジイミド (DCC) (2.6g 、 12.6mmol)、（Z- CI)- Lys- Boc (化合物 (44)) (5.0g、 12.1mmol)及び N-ヒドロキシスク シンイミド（1.4g、 12.1mmol)を添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、余分 な尿素を濾過し、 6-ァミノへキサン酸（3.2g、 12.1mmol)をカ卩え、再び室温下で終夜 撹拌を行った。反応終了後、 1N塩酸で中和し、水（200ml)及び酢酸ェチル (200ml) を加え、 2回洗浄を行った。その後、酢酸ェチル層を飽和食塩水（200ml)で 2回洗浄 し、得られた酢酸ェチル層を減圧留去し、化合物 (45)を得た (6.6g、収率 52%)。 物'性データ： Mass (nega:posi=526:528)
[0616] 〔化合物 (46)の合成〕
化合物 (45) (1.0g、 1.9mmol)を 25%臭化水素-酢酸 (5ml)に溶解し、室温下で終夜 撹拌を行った。反応終了後、反応液を濃縮し、酢酸ェチルで 3回洗浄を行うことで化 合物 (46)を得た (0.61g、収率 94%)。
物性データ： Mass (posi=260)
[0617] (2)インドレ-ンーピラゾール複合体 (本発明の化合物) (48)の合成
Figure imgf000150_0001
[0618] 〔化合物 (47)の合成〕
実施例 11で得られた化合物 (22) (22mg、 0.02mmol)を水（25ml)に溶解し、 10分間 攪拌を行った。次いで、得られた反応液に、実施例 13の（1)で得られたリジン誘導体 (化合物 (46)) (llmg、 0.04mmol)と炭酸ナトリウム (Na CO ) (2.2mg、 0.02mmol)を水（10
2 3
ml)に溶解した溶液をゆっくり添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、溶媒 を減圧留去し、分取逆相 HPLC〔溶出液; A液 (5%ァセトニトリル— 0.1%トリフルォロ 酢酸 水溶液)： B液 (95%ァセトニトリル 0.1%トリフルォロ酢酸 水溶液) = 90:10〕（ 商品名「WakosiHI 5C18 RS Prep (20.0mmX250mm)」、和光純薬工業 (株)社製）を用 いて精製し、化合物 (47)を得た (5mg、収率 23%)。
物'性データ： Mass (nega=1068,2Na+)
[0619] 〔化合物 (48)の合成〕
化合物 (47) (5mg、 0.005mmol)を Ν,Ν-ジメチルホルムアミド（DMF) (300 μ 1)中に溶 解し、 2-スクシンイミド -1,1, 3,3-テトラメチルゥ口-ゥムテトラフルォロボレート (TSTU) (14mg、 0.046mmol)及び N-ェチルジイソプロピルアミン（15 1)をカ卩え、室温で 3時間 攪拌を行った。反応終了後、酢酸ェチル (10ml)を加えて結晶化した後、遠心分離を 行い、化合物 (48)を得た (4mg、収率 75%)。
[0620] 実施例 14.本発明の化合物の新規蛍光強度の測定
従来のシァニン色素である Cy5の蛍光強度を基準に本発明の化合物の相対蛍光 強度を概算した。
先ず、 Cy5の蛍光強度から、 Cy5の 1 μ Μ当りの蛍光強度を測定し、この蛍光強度 値を 100とした場合の、本発明の化合物の相対蛍光強度を概算した。
[0621] (l) Cy5の蛍光強度の測定
蛋白 lmg標識用 Cy5 (GEヘルスケアバイオサイエンスバイオへルス社製)を精製水 lmLに溶解した。本溶液を 50mMりん酸緩衝液 (pH7. 5)で 200倍希釈し、 OD値を 測定した（0. 1020)。
この OD値及びモル吸光係数（ ε = 250, 000)〔GEヘルスケアバイオサイエンス総 合製品カタログ 2006「7—4」に記載〕から Cy5の溶液濃度を求めた（0. 408 /z M)。
[0622] 次に、本溶液を用いて Cy5の蛍光測定を実施した。
蛍光特性を以下に示す。
Figure imgf000151_0001
[0623] (2)本発明の化合物の相対蛍光強度の概算
実施例 14の（1)で得られた Cy5の: L M当りの蛍光強度を 100として、実施例 11 により得られた本発明の化合物 (40)及び実施例 12により得られた本発明の化合物 (4
3)の相対蛍光強度を概算した。その結果を表 32に示す。
[0624] [表 32]
Figure imgf000151_0002
[0625] 表 32の結果から明らかなように、本発明の化合物と Cy5 (従来のシァニン色素）と 比較した場合、本発明の化合物の方が、 Cy5より高い蛍光強度を示すことが分った。
[0626] 実施例 15.新規蛍光試薬の実用評価
(1)新規蛍光標識抗 AFP- Fab' (本発明の標識ィ匕合物)の調製 抗 o フ トプロテイン (AFP)抗体 (和光純薬工業 (株)社製)をペプシン消化した後 、 2—アミノエタンチオールで還元し、 SH基を N-ェチルマレイミドでマスキング後、ゲ ル濾過カラム（Superdex200、 GEヘルスケアバイオサイエンス社製）で精製することに より抗 AFP- Fab'を得た。
抗 AFP-Fab' (280nmの absで算出した蛋白質量として l .Omg)を含有するの 0.1M炭 酸ナトリウム緩衝液 PH8. 5溶液 0.43mLに上記実施例 11で得られた化合物 (22)〔本 発明の化合物（活性エステル体）〕のジメチルスルホキシド（DMSO)溶液（1.0mg/mL) lmlを添加し、低温室で終夜反応させた。得られた反応液を、ゲル濾過カラムで精 製し、本発明の標識ィ匕合物である新規蛍光標識抗 AFP- Fab'の 50mMリン酸緩衝液 (PBS) pH6. 0溶液（280nmの absで算出した蛋白質量として 0.23mg)を得た。
[0627] (2) HPLC蛍光分析法による新規蛍光標識抗 AFP- Fab' (本発明の標識化合物）の 蛍光強度測定
上記実施例 15の（1)で得た 150nMの蛍光標識抗 AFP-Fab'を含有するの 50mMリン 酸緩衝液（PBS) pH6. 0溶液〔lmMエチレンジァミン四酢酸（EDTA)含有〕 0.05mlに 、各種濃度の AFP (0、 0.625、 1.25、 2.5、 5、 10及び 20 M)を含有する 50mMトリス塩 酸 pH8. 0溶液 0.05mlを添加し、 2時間反応させた。得られた反応液を HPLC (島津 製作所 LC— 10A,ゲルろ過カラム Diol— 200 (和光純薬製)で分析し、新規蛍光標 識抗 AFP-Fab'と AFPとの複合体のピーク面積を蛍光強度として算出した。
得られた各種標識複合体の蛍光強度を下記表 2に示す。
[0628] 比較例 1. Cy5蛍光標識抗 AFP- Fab'の合成
標識物質として、実施例 15で用いた本発明の化合物 (22)の代わりに Cy5活性エス テル試薬 (Cy5活性エステル； GEヘルスケアバイオサイエンス社製)を用いた以外は 実施例 15と同様の操作を行い、 Cy5蛍光標識抗 AFP-Fab'の 50mMリン酸緩衝液 (P BS) pH6. 0溶液を得た。結果を併せて表 33に示す。
[0629] [表 33]
Figure imgf000153_0001
[0630] 表 33の結果から明らかなように、本発明の蛍光試薬及び従来の蛍光試薬を使用し た場合を比較すると、本発明の標識複合体の方が 1.1〜2.0倍程度の蛍光強度を示 すことが分力つた。
産業上の利用可能性
[0631] 本発明のピラゾール系シァニン色素は、ピラゾール骨格とインドール骨格がポリメチ ン鎖で結合された構造を有して 、ることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特 性を有するため、エネルギー効率の高い短波長領域の光源が使用可能となり、また これを標識剤 (標識物質)として用いて測定対象物を検出する場合、従来のシァニン 色素誘導体が有していた例えば水溶性が低い、色素同士の会合に起因する消光に より検出感度が低下する等の問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で 検出することが可能となる。

Claims

請求の範囲
下記一般式 [50]で示される化合物又はその塩。
Figure imgf000154_0001
〔式中、 R 〜R6，は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7'〜R1G'は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11 ' は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。尚、 R1'と R2'、 R4'と '、 R1'と R6'及び R2，と R4，の何れかが、—O—基、—S—基、—COO—基及び一般式 [52]〜[54]
？ [52] ί ？ [53] ？ ？ [54]
— Ν— — C-N— — S-N—
I I
0
(式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで
2価の基を形成していてもよぐ当該 2価の基を形成する場合は、 R 〜RU '、並びに R1，と R2，、 R4，と R5，、 R1，と R6，及び R2，と R4，の何れかで形成される 2価の基のうち 少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸 基、チオール基又はホルミル基を有し、当該 2価の基を形成しない場合は、 '〜!^1 のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基 、水酸基、 オール基又はホルミル基を有する。〕
[2] 請求項 1の一般式 [50]で示される化合物力 下記一般式 [1]で示されるものである 、請求項 1に記載の化合物。
Figure imgf000155_0001
〔式中、！^〜 は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換ァ ルキル基を表し、 R7〜R1Gは夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ -ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキルチオ 基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバモイル基 、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11は 水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキ-ル基若しくはァ リール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、！^〜 1のうち少なくとも 1つは一般 式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホ ルミル基を有する。〕
請求項 2の一般式 [1]で示される化合物が、下記一般式 [1 1]
Figure imgf000156_0001
(式中、！^〜 1及びその他の定義は前記に同じ。）で示される化合物である、 項 2に記載の化合物。
請求項 2の一般式 [ 1 ]で示される化合物が、下記一般式 [ 1一 2]
Figure imgf000156_0002
項 2に記載の化合物。
請求項 2の一般式 [1]で示される化合物が、下記一般式 [1 ' ]で示されるものである、
Figure imgf000156_0003
(式中、 Rla〜R6aは夫々独立して一般式 [2]又は [3]で示される基を置換基として有 していてもよいアルキル基を表し、 R8aは、一般式 [3]で示される基を表し、 RUaはァ ルキル基を表し、 nは前記に同じ。 )
請求項 1の一般式 [50]で示される化合物が、下記一般式 [51]で示されるものである 、請求項 1に記載の化合物。
Figure imgf000156_0004
〔式中、 "〜 "は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7"〜R1G"は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11" は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及 び R2"と R4"の何れかが、—O—基、—S—基、—COO—基及び一般式 [52]〜[54 ]
I [52] Υ, ？ [53] \ί ？ [54]
— Ν— — C-N— — S-N—
I I
Ο
(式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで
2価の基を形成する。また、 "〜!^11"、並びに R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される 基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する 。〕
請求項 6の一般式 [51]で示される化合物力 下記一般式 [51 ' ]で示されるものであ る、請求項 6に記載の化合物。
Figure imgf000157_0001
〔式中、
Figure imgf000158_0001
していてもよいアルキル基を表し、 R8"bは一般式 [3]で示される基を表し、 Ru"bはァ ルキル基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、 と R2"b、 R4"bと R5"b、 R1' と R6"b 及び R2"bと R4"bの何れかが、 O 基、— S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜 [54]で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を 形成する。また、！^， 〜!^11， 、並びに R1' と R2，，b、 R4，，bと R5，，b、 R1' と R6，，b及び R2，，b と R4"bの何れかで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基 又は一般式 [3]で示される基を有する。〕
請求項 6の一般式 [51]で示される化合物力 下記一般式 [55]で示されるものである 、請求項 6に記載の化合物。
Figure imgf000158_0002
〔式中、 Tは O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示される 基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成し、 "〜!^1 及び nは前記に同じ。但し、 R3"〜RU"並びに Tで示される 2価の基のうち少なくと も 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チォ ール基又はホルミル基を有する。〕
請求項 6の一般式 [51]で示される化合物力 下記一般式 [56]で示されるものである 、請求項 6に記載の化合物。
Figure imgf000158_0003
〔式中、 Tは O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示される 基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成し、 Rlw〜R3 "、 R6"〜RU"及び nは前記に同じ。但し、 "〜 "、 R6"〜RU"並びに Tで示される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、 アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
請求項 6の一般式 [51]で示される化合物力 下記一般式 [57]で示されるものである
Figure imgf000159_0001
〔式中、 Tは O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示される 基力も選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成し、 R2"〜R5 "、 R7"〜RU"及び nは前記に同じ。但し、 R2"〜R5"、 R7"〜RU"並びに Tで示される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、 アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
請求項 6の一般式 [51]で示される化合物力 下記一般式 [58]で示されるものである 、請求項 6に記載の化合物。
Figure imgf000159_0002
〔式中、 Tは O 基、 S 基、 COO 基及び一般式 [52]〜[54]で示される 基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成し、 R1", R3" 、 R5"〜RU"及び nは前記に同じ。但し、 R1", R3"、 R5"〜RU"並びに Tで示される 2 価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、ァ ミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形成される 2価の基が、一 般式 [60]
R20
— T3-R18-(CH)p-R1 -T5- [60]
〔式中、 R18及び R19は夫々独立して— O 基、 S 基、 COO 基又は一般式 [ 52]〜 [54]で示される基を表し、 R2は下記一般式 [70]〜 [72] ι 51 [70] ί? ? 51 [71] ί? ? 51 [72]
— N-R51 — C-N-R51 — S-N-R51
ιι
Ο
(式中、 R51は、水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァ リール基を表し、 R5は前記に同じ。）で示される基、水素原子、一般式 [2]で示され る基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を表し 、 T及び Tは夫々独立してアルキレン基を表し、 pは 1〜20の整数を表す。〕で示さ
3 5
れる基である、請求項 6又は 7に記載の化合物。
[13] Tで示される 2価の基力 一般式 [60]
R20
— T3- 18-(CH)p-R19-T5- [60]
〔式中、 R18及び R19は夫々独立して— O—基、— S—基、— COO—基又は一般式 [ 52]〜 [54]で示される基を表し、 R2は下記一般式 [70]〜 [72]
I 51 [70] ί? ? 51 [71] ί? ? 51 [72]
— N-R51 — C-N-R51 — S-N-R51
ιι
Ο
(式中、 R51は、水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァ リール基を表し、 R5は前記に同じ。）で示される基、水素原子、一般式 [2]で示され る基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を表し 、 T及び Tは夫々独立してアルキレン基を表し、 pは 1〜20の整数を表す。〕で示さ
3 5
れる基である、請求項 8〜： L 1の何れかに記載の化合物。
[14] R2が一般式 [2]で示される基又は一般式 [73]
— CONH— T4— COOR 12 [73]
(式中、 Τはアルキレン基を表し、 R12は前記に同じ。）で示される基である、請求項 1
4
3に記載の化合物。
[15] ηが 2である、請求項 6〜： L 1の何れかに記載の化合物。
[16] 下記一般式 [50]で示される化合物と被標識物質を直接又は間接的に結合させた標 識化合物。
Figure imgf000161_0001
〔式中、 R 〜R6，は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7'〜R1G'は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11 ' は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。尚、 R1'と R2'、 R4'と '、 R1'と R6'及び R2，と R4，の何れかが、—O—基、—S—基、—COO—基及び一般式 [52]〜[54] [52] ？ [53] ^ ？ [54]
— Ν— — C-N— — S-N—
I I
O
(式中、 R5は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成していてもよぐ当該 2価の基を形成する場合は、 R 〜RU '、並びに R1，と R2，、 R4，と R5，、 R1，と R6，及び R2，と R4，の何れかで形成される 2価の基のうち 少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸 基、チオール基又はホルミル基を有し、当該 2価の基を形成しない場合は、 '〜!^1 "のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基 、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
[17] 被標識物質が、ヌクレオチド又は抗体である、請求項 16に記載の標識化合物。
[18] 請求項 16の一般式 [50]で示される化合物力 下記一般式 [1]で示されるものである 、請求項 に記載の標識化合物。
Figure imgf000162_0001
〔式中、 I^〜R。は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換ァ ルキル基を表し、 R7〜R1Gは夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ -ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキルチオ 基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバモイル基 、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11は 水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキ-ル基若しくはァ リール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、！^〜 1のうち少なくとも 1つは一般 式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホ ルミル基を有する。〕
[19] 一般式 [1]で示される化合物中のカルボキシル基、スルホ基、アミノ基、水酸基、チ オール基又はホルミル基が、直接又は間接的に被標識物質と結合する、請求項 18 に記載の標識化合物。
[20] 一般式 [1]に於ける！^〜 に含まれるカルボキシル基、スルホ基、アミノ基、水酸 基、チオール基又はホルミル基が、直接又は間接的に被標識物質と結合する、請求 項 18に記載の標識ィ匕合物。
[21] 一般式 [1]に於ける、 R1又は R6に含まれるカルボキシル基、スルホ基、アミノ基、水 酸基、チオール基又はホルミル基が、直接又は間接的に被標識物質と結合する、請 求項 18に記載の標識化合物。
[22] 請求項 16の一般式 [50]で示される化合物力 下記一般式 [51]で示されるものであ る、請求項 16に記載の化合物。
Figure imgf000163_0001
〔式中、 R "'〜 "は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7"〜R1G"は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11" は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及 び R2"と R4"の何れかが、—O—基、—S—基、—COO—基及び一般式 [52]〜[54 ] [52] W ？ [53] ^ ？ [54]
— N— — C-N— — S-N—
I I
O
(式中、 R5は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成する。また、 R1"^11",並びに R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される 基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する o ]
[23] 一般式 [51]で示される化合物中の一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される 基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基が、直接又は間接的に被標識物 質と結合する、請求項 22に記載の標識化合物。
[24] 一般式 [51]に於ける、 ，，〜 "、或いは R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形成される 2価の基に含まれる一般式 [2]で示される基、一般式 [3] で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基力 直接又は間接的に 被標識物質と結合する、請求項 22に記載の標識化合物。
[25] 一般式 [51]に於ける、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形 成される 2価の基に含まれる一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミ ノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基が、直接又は間接的に被標識物質と結合 する、請求項 22に記載の標識化合物。
[26] 下記一般式 [50]で示される化合物又はその塩を直接又は間接的に被標識物質と 結合させることを特徴とする、被標識物質の標識方法。
Figure imgf000164_0001
〔式中、 R 〜R6，は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7'〜R1G'は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11 ' は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。尚、 R1'と R2'、 R4'と '、 R1'と R6'及び R2，と R4，の何れかが、—O—基、—S—基、—COO—基及び一般式 [52]〜[54]
I [52] Υ, ? [53] ^ ? [54]
— Ν— — C-N— — S-N—
I I
Ο
(式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで
2価の基を形成していてもよぐ当該 2価の基を形成する場合は、 R 〜RU '、並びに R1，と R2，、 R4，と R5，、 R1，と R6，及び R2，と R4，の何れかで形成される 2価の基のうち 少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸 基、チオール基又はホルミル基を有し、当該 2価の基を形成しない場合は、 '〜!^1 のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基 、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
請求項 26の一般式 [50]で示される化合物が、下記一般式 [1]で示される化合物で ある、請求項 26の標識方法。
Figure imgf000165_0001
〔式中、！^〜 は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換ァ ルキル基を表し、 R7〜R1Gは夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ -ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキルチオ 基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバモイル基 、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2]
(式中、 R12は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11は 水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキ-ル基若しくはァ リール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、！^〜 1のうち少なくとも 1つは一般 式 [2]で示される基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホ ルミル基を有する。〕
[28] 請求項 26の一般式 [50]で示される化合物が、一般式 [51]で示される化合物である 、請求項 26の標識方法。
Figure imgf000166_0001
〔式中、 "〜 "は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換 のアルキル基を表し、 R7"〜R1G"は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、 ァルケ-ル基、アルキ-ル基、ァリール基、アルコキシ基、ァリールォキシ基、アルキ ルチオ基、ァリールチオ基、アルキルスルホ-ル基、ァリールスルホ-ル基、力ルバ モイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式 [2]
— COOR12 [2] (式中、 は水素原子、炭素数 1〜10のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アン モ -ゥムイオン、アンモ-ゥムイオン又はァ-オンを表す。）で示される基、一般式 [3]
— S03R13 [3]
(式中、 R13は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモ-ゥムイオン、アンモ-ゥムィ オン又はァ-オンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族へテロ環チォ基、 水素原子、水酸基、シァノ基、ホルミル基、チオール基若しくは-トロ基を表し、 R11" は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、ァルケ-ル基、アルキニル基若しくは ァリール基を表し、 nは 0〜3の整数を表す。但し、 R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及 び R2"と R4"の何れかが、—O—基、—S—基、—COO—基及び一般式 [52]〜[54 ]
？ [52] ί ？ [53] ？ ？ [54]
— Ν— — C-N— — S-N—
I I
0
(式中、 R∞は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはァリ 一ル基を表す。 )で示される基力 選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで 2価の基を形成する。また、 R1"^11",並びに R1"と R2"、 R4"と R5"、 R1"と R6"及び R2"と R4"の何れかで形成される 2価の基のうち少なくとも 1つは一般式 [2]で示される 基、一般式 [3]で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する 。〕
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