ES2621507T3

ES2621507T3 - Nuevos complejos a base de iridio para EQL

Info

Publication number: ES2621507T3
Application number: ES13750504.6T
Authority: ES
Inventors: Frank Bergmann; Robert CYSEWSKI; Luisa De Cola; Sebastian Dziadek; Jesus Miguel Fernandez Hernandez; Hans-Peter Josel; Christoph Seidel
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2012-08-02
Filing date: 2013-08-02
Publication date: 2017-07-04
Anticipated expiration: 2033-08-02
Also published as: WO2014019709A3; EP2882823A2; HK1212369A1; WO2014019709A2; CA2879221A1; CN104769077B; CN104769077A; US20150147751A1; CA2879221C; US9416150B2; JP2015530979A; EP2882823B1

Abstract

Compuesto quimioluminiscente a base de iridio de fórmula I:**Fórmula** en la que cada R1-R20 es independientemente hidrógeno, haluro, grupo ciano o nitro, amino, amino sustituido, alquilamino, alquilamino sustituido, arilamino, arilamino sustituido, alquilamonio, alquilamonio sustituido, carboxi, carboxilato, éster de ácido carboxílico, carbamoilo, hidroxi, alquiloxi sustituido o no sustituido, ariloxi sustituido o no sustituido, sulfanilo, sulfanilo, alquilsulfonilo sustituido o no sustituido, arilsulfonilo sustituido o no sustituido, sulfo, sulfino, sulfeno, sulfonato, sulfinato, sulfenato, sulfamoilo, sulfóxido, fosfono, hidroxifosfinoilo, hidroxi-alquil-fosfinoilo, fosfonato, fosfinato o R21, en el que R21 es arilo, arilo sustituido, alquilo, alquilo sustituido, alquilo ramificado, alquilo ramificado sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, alquilarilo, alquilarilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, aminoalquilo, aminoalquilo sustituido, aminoalcoxi, aminoalcoxi sustituido, aminoarilo, aminoarilo sustituido, aminoariloxi, aminoariloxi sustituido,en el que, en R1-R12 y/o en R13-R16 y/o en R17-R20, respectivamente, dos R contiguos pueden formar un anillo aromático o un anillo aromático sustituido, en el que el sustituyente se selecciona de entre hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, haluro, grupo ciano o nitro, un grupo hidrofílico, tal como amino, amino sustituido, alquilamino, alquilamino sustituido, alquilamonio, alquilamonio sustituido, carboxi, carboxilato, éster de ácido carboxílico, carbamoilo, hidroxi, alquiloxi sustituido o no sustituido, ariloxi sustituido o no sustituido, sulfanilo, alquilsulfonilo sustituido o no sustituido, arilsulfonilo sustituido o no sustituido, sulfo, sulfino, sulfeno, sulfonato, sulfinato, sulfenato, sulfamoilo, sulfóxido, fosfono, hidroxifosfinoilo, hidroxilalquil- fosfinoilo, fosfonato, fosfinato o,en el que, en R1-R12 y/o en R13-R16 y/o en R17-R20, respectivamente, dos R contiguos pueden formar un anillo alifático o un anillo alifático sustituido, en el que el sustituyente se selecciona de entre hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, haluro, grupo ciano o nitro, un grupo hidrofílico, tal como amino, alquilamino, alquilamino sustituido, alquilamonio, alquilamonio sustituido, carboxi, carboxilato, éster de ácido carboxílico, carbamoilo, hidroxi, alquiloxi sustituido o no sustituido, ariloxi sustituido o no sustituido, sulfanilo, alquilsulfonilo sustituido o no sustituido, arilsulfonilo sustituido o no sustituido, sulfo, sulfino, sulfeno, sulfonato, sulfinato, sulfenato, sulfamoilo, sulfóxido, fosfono, hidroxifosfinoilo, hidroxi-alquil-fosfinoilo, fosfonato, fosfinato,en el que, en el caso de que en cualquier de entre R1 y R21 se encuentre presente una sustitución, cada uno de los sustituyentes en R1- R21 se selecciona independientemente de entre haluro, grupo ciano o nitro, un grupo hidrofílico, tal como amino, alquilamino, alquilamonio, carboxi, carboxilato, éster de ácido carboxílico, carbamoilo, hidroxi, alquiloxi, arilalquiloxi, ariloxi, alquilariloxi, polietilenoxi, polipropilenoxi, sulfanilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfo, sulfino, sulfeno, sulfonato, sulfinato, sulfenato, sulfamoilo, sulfóxido, fosfono, hidroxifosfinoilo, hidroxi-alquil-fosfinoilo, fosfonato, fosfinato,en el que alquilo tal como se utiliza en la presente memoria es una cadena alquilo lineal o ramificada con una longitud de entre 1 y -20 átomos que comprende 1 a 4 heteroátomos seleccionados de entre O, N, P y S, en el que arilo es un sistema de anillos arilo de 5, 6 o 7 elementos, o un sistema de anillos heteroarilo de 5, 6 o 7 elementos que comprende 1 a 3 heteroátomos seleccionados de entre O, S y N, en el que por lo menos no de entre R13 y R20 es -Q-Z, en el que Q es un conector o un enlace covalente, y en el que Z es un grupo funcional y en el que por lo menos uno de entre X e Y es N y el otro de X o Y es independientemente N o C.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

El término "conector" tal como se utiliza en la presente memoria presenta el significado conocido por el experto en la materia y se refiere a una molécula o grupo de moléculas que se utilizan para unir fragmentos de moléculas. Los conectores se caracterizan porque presentan dos o más funcionalidades químicamente ortogonales en un andamiaje

10 flexible o rígido. Un enlace covalente no es un conector en el sentido de la presente invención.

En el compuesto según la presente invención, Q es un enlace covalente o un conector que presenta una longitud del esqueleto de entre 1 y 200 átomos. En otras palabras, en el caso de que la longitud del esqueleto sea de entre 1 y 200 átomos, la conexión más corta entre un anillo aromático del tercer ligando de fórmula I y el grupo funcional Z

15 consiste de 1 a 200 átomos.

En el caso de que se encuentre presente un sistema de anillos, se considera el número más bajo de átomos en el sistema de anillos al evaluar la longitud del conector. A título de ejemplo, un anillo fenilo supone una longitud de cuatro átomos del conector.

20 En una realización, Q es un enlace covalente o un conector que presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C200 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 200 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena tal como se ha indicado anteriormente, conteniendo el

25 esqueleto uno o más sistemas de anillos aromáticos o no aromáticos cíclicos o heterocíclicos.

En una realización, Q es un enlace covalente o un conector y presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C100

5

15

25

35

45

55

65

lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 100 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena tal como se ha indicado anteriormente, conteniendo el esqueleto uno

: o más sistemas de anillos aromáticos o no aromáticos cíclicos o heterocíclicos.

En una realización, Q es un enlace covalente o un conector y presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C50 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 50 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena tal como se ha indicado anteriormente, conteniendo el esqueleto uno

En una realización adicional, Q es un enlace covalente o es un conector y presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C20 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 20 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena tal como se ha indicado anteriormente, conteniendo el esqueleto uno o más sistemas de anillos aromáticos o no aromáticos cíclicos o heterocíclicos.

En una realización, Q, por ejemplo el conector Q, en el complejo electroquimioluminiscente de la presente invención, es una cadena alquilo C1-C20 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena arilalquilo C1-C20 (en la que, por ejemplo, un anillo fenileno supone una longitud de cuatro átomos de carbono) o una cadena de 1 a 20 átomos con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena de 1 a 20 átomos, o con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos que comprenden por lo menos un grupo arilo, heteroarilo, arilo sustituido o heteroarilo sustituido (en el que, por ejemplo, un anillo fenileno supone una longitud de cuatro átomos).

En una realización, Q, por ejemplo el conector Q en un compuesto según la presente invención es una cadena alquilo C1-C12 lineal o ramificada saturada o una cadena arilalquilo C1-C12 o una cadena de 1 a 12 átomos con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena de 1 a 12 átomos con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos que comprenden por lo menos un grupo arilo, heteroarilo, arilo sustituido o heteroarilo sustituido (en el que, por ejemplo, un anillo fenileno supone una longitud de cuatro átomos).

En una realización Q es un enlace covalente. En el caso de que Q sea un enlace covalente, el grupo funcional Z es por lo menos uno de entre R13 y R20. En una realización, uno de entre R13 y R20 es Z.

En una realización, Q-Z es maleimida.

En una realización, el conector Q comprende uno o más aminoácidos.

En una realización, el conector Q comprende uno o más nucleótidos.

En una realización, tanto X como Y en la fórmula I son N.

En una realización, el grupo funcional Z comprendido en el complejo a base de iridio de fórmula I según la presente invención se selecciona de entre el grupo que consiste de aldehído, ácido carboxílico, éster de ácido carboxílico, epóxido, éster de N-hidroxisuccinimida, grupo amino, halógeno, hidrazina, hidroxilo, sulfhidrilo, maleimido, alquinilo, azida, isocianato, isotiocianato y fosforamidita.

En una realización, el grupo funcional Z comprendido en el complejo a base de iridio de fórmula I según la presente invención se selecciona de entre el grupo que consiste de ácido carboxílico, éster de N-hidroxisuccinimida, grupo amino, halógeno, sulfhidrilo, maleimido, alquinilo, azida, isocianato, isotiocianato y fosforamidita.

En una realización preferente particular, el grupo funcional Z comprendido en el complejo a base de iridio de fórmula I según la presente invención se selecciona de entre el grupo que consiste de ácido carbocíclico, éster de Nhidroxisuccinimida y maleimido.

En una realización preferente particular, el grupo funcional Z comprendido en el complejo a base de iridio de fórmula I según la presente invención se selecciona de entre el grupo que consiste de éster de N-hidroxisuccinimida y maleimido.

En una realización, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula I, en la que uno a tres de entre R1 y R12 de los residuos fenilfenantridina son, independientemente, sulfoalquilo, sulfoarilo, sulfoalcoxi, sulfoariloxi, sulfo o una sal de los mismos (=sulfonato), en los que el contraión preferentemente es un catión del grupo de metales

alcalinos y los otros grupos R1 a R12 son hidrógeno, en los que R13 a R20 es -Q-Z, en el que Q es un conector o un enlace covalente, y en el que Z es un grupo funcional y los otros grupos R13 a R20 en la fórmula I son hidrógenos o R21, en el que R21 es alquilo, y en el que X e Y son N.

En una realización, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula I, en la que los residuos fenilfenantridina comprendidos en la fórmula I se seleccionan de entre las fenilfenantridinas sustituidas proporcionadas posteriormente.

imagen7

imagen8

5

15

25

35

45

55

65

la que Q1 es un conector, preferentemente en el que por lo menos uno de entre R13 y R20 en la fórmula I(a) es -Q1-Z y en el que Q1 es un conector, en el que por lo menos uno de entre R13 y R20 en la fórmula I(b) es Q2 y cada Q2 es independientemente un conector o un enlace covalente, en el que (n) es un número entero entre 1 y 50. en la que X e Y son tal como se ha definido para la fórmula I, y en la que Z es un grupo funcional.

En una realización, uno de entre R13 y R20 de fórmula I(a) en la fórmula II es -Q1-Z.

En una realización, uno de entre R13 y R20 en cada uno de fórmula I(b) en la fórmula II es Q2.

En una realización, uno de entre R13 y R20 de fórmula I(a) en la fórmula II es Q1-Z y uno de entre R13 y R20 en cada uno de fórmula I(b) en la fórmula II es Q2.

Un compuesto de fórmula I(a) y de fórmula I(b), respectivamente comprende dos ligandos derivados de fenilfenantridina tal como se define mediante las definiciones proporcionadas anteriormente para la fórmula I y un tercer ligando.

En una realización, R1 a R20 presentan los mismos significados indicados anteriormente para R1 a R20 para los compuestos de fórmula II.

En una realización, las fórmulas I(a) y I(b) son iguales, excepto por Q1-Z en la fórmula I(a) y Q2 en la fórmula I(b), respectivamente.

Tal como apreciará fácilmente el experto en la materia, el conector Q1 de fórmula II comprende n sitios de ramificación en los que se encuentra unido Q2.

En una realización, Q1 de fórmula II presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C200 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 200 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P

: o S sustituidos, o una cadena tal como se ha indicado anteriormente, conteniendo el esqueleto uno o más sistemas de anillos aromáticos o no aromáticos cíclicos o heterocíclicos.

En una realización, Q1 de fórmula II presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C100 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 100 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P

En una realización, el conector Q1 de fórmula II presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C50 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 50 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena tal como se ha indicado anteriormente, conteniendo el esqueleto uno o más sistemas de anillos aromáticos o no aromáticos cíclicos o heterocíclicos.

En una realización adicional, el conector Q1 de fórmula II presenta como esqueleto una cadena alquilo C1-C20 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena de 1 a 20 átomos que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena tal como se ha indicado anteriormente, conteniendo el esqueleto uno o más sistemas de anillos aromáticos o no aromáticos cíclicos o heterocíclicos.

En una realización, el conector Q1 de fórmula II en el complejo electroquimioluminiscente de la presente invención es una cadena alquilo C1-C20 lineal o ramificada, saturada o insaturada, no sustituida o sustituida, o una cadena arilalquilo C1-C20 (en la que, por ejemplo, un anillo fenileno supone una longitud de cuatro átomos de carbono) o una cadena de 1 a 20 átomos con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena de 1 a 20 átomos, o con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos que comprenden por lo menos un grupo arilo, heteroarilo, arilo sustituido o heteroarilo sustituido (en el que, por ejemplo, un anillo fenileno supone una longitud de cuatro átomos).

En una realización, Q1, por ejemplo el conector Q1 en un compuesto según la presente invención es una cadena alquilo C1-C12 saturada o una cadena arilalquilo C1-C12 o una cadena de 1 a 12 átomos con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y/o uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos, o una cadena de 1 a 12 átomos con un esqueleto que consiste de átomos de carbono, átomos de carbono sustituidos y uno o más átomos seleccionados de entre O, N, P y S, o átomos de N, P o S sustituidos que comprenden por lo menos un grupo arilo, heteroarilo, arilo sustituido o heteroarilo sustituido

imagen9

En una realización, en la fórmula II, (n) es 1.

En una realización, en la fórmula II, (n) es 2. 5 En una realización, en la fórmula II, (n) es 3.

En una realización, el grupo funcional Z comprendido en el complejo a base de iridio de fórmula II según la presente invención se selecciona de entre el grupo que consiste de aldehído, ácido carboxílico, éster de ácido carboxílico, 10 epóxido, éster de N-hidroxisuccinimida, grupo amino, halógeno, hidrazina, hidroxilo, sulfhidrilo, maleimido, alquinilo, azida, isocianato, isotiocianato y fosforamidita.

En una realización, el grupo funcional Z comprendido en el complejo a base de iridio de fórmula II según la presente invención se selecciona de entre el grupo que consiste de ácido carboxílico, éster de N-hidroxisuccinimida, grupo 15 amino, halógeno, sulfhidrilo, maleimido, alquinilo, azida, isocianato, isotiocianato y fosforamidita.

En una realización preferente particular, el grupo funcional Z comprendido en el complejo a base de iridio de fórmula II según la presente invención se selecciona de entre el grupo que consiste de éster de N-hidroxisuccinimida y maleimido.

20 Cualesquiera combinaciones de cualesquiera realizaciones de los compuestos de fórmula II tal como se han definido anteriormente se considera que se encuentran comprendidas dentro del alcance de la invención.

Ahora se ha encontrado sorprendente e inesperadamente que determinados complejos quimioluminiscentes a base 25 de iridio de fórmula II resultan adecuados como marcajes para futuros métodos de detección basados en EQL de alta sensibilidad.

Procedimientos para la preparación de compuestos de fórmulas I y II:

30 La invención, en un aspecto, se refiere a nuevos procedimientos para la preparación de compuestos de fórmula I y compuestos de fórmula II, respectivamente.

Los compuestos según la fórmula I pueden sintetizarse, por ejemplo (basado en Lamansky S., Inorg. Chem. 40:1704-1711, 2001) de la manera siguiente: síntesis del complejo dímero fenil-fenantridina iridio sustituido; reacción 35 de dicho dímero con un precursor de Q-Z proporcionando un producto según la fórmula I.

Según dicho procedimiento, los compuestos de fórmula I pueden obtenerse, por ejemplo, tal como se muestra en el Esquema 1, a continuación.

imagen10

El complejo de dímero fenilo-fenantridina iridio sustituido que se utiliza como material de partida puede obtenerse mediante procedimientos tales como se muestran en, por ejemplo, los Ejemplos (ver el Ejemplo 2) y tal como se 5 indica en, por ejemplo, el documento nº EP 12179056.2.

Los compuestos según la fórmula II pueden sintetizarse, por ejemplo (basado en Lamansky S., Inorg. Chem. 40:1704-1711, 2001) de la manera siguiente: síntesis del complejo dímero fenil-fenantridina iridio sustituido; reacción de dicho dímero con un precursor del conector Q que contiene 1 a 50 fracciones de tercer ligando, proporcionando

10 un producto según la fórmula II.

Según dicho procedimiento, los compuestos de fórmula II pueden obtenerse, por ejemplo, tal como se muestra en el Esquema 2, a continuación.

imagen11

imagen12

Conjugados que comprenden los nuevos compuestos de fórmula I o II y aspectos adicionales de la invención

5 En un aspecto, la presente invención se refiere a un conjugado que comprende un compuesto electroquimioluminiscente a base de iridio de fórmula I, o de fórmula II, respectivamente, tal como se da a conocer y se ha definido anteriormente en la presente memoria y covalentemente unido al mismo una sustancia biológica. Son ejemplos de sustancias biológicas adecuadas, células, virus, partículas subcelulares, proteínas, lipoproteínas, glucoproteínas, péptidos, polipéptidos, ácidos nucleicos, ácidos péptido nucleicos (APN), oligosacáridos,

10 polisacáridos, lipopolisacáridos, metabolitos celulares, haptenos, hormonas, sustancias farmacológicas, alcaloides, esteroides, vitaminas, aminoácidos y azúcares.

En una realización, la sustancia biológica de un conjugado según la presente invención, es decir, unida covalentemente a un compuesto según la fórmula I, o de fórmula II, respectivamente, es un agente de unión por 15 afinidad. Un agente de unión por afinidad es una molécula capaz de unión molecular a otra molécula debido a la interacción de atracción entre estas moléculas, resultando en una asociación estable en la que las moléculas se encuentran próximas entre sí. El resultado de la unión molecular es la formación de un complejo molecular. La unión de atracción entre los componentes de un complejo normalmente es más débil que en un enlace covalente. En el presente caso, el agente de unión es un agente de unión por afinidad, lo que implica que es capaz de unión a un 20 complejo de afinidad, es decir, un complejo estable bajo las condiciones respectivas, por ejemplo un medio acuoso bajo condiciones estándares. Entre las moléculas que pueden participar en la unión molecular se incluyen, aunque

imagen13

5

15

25

35

45

55

65

Los análogos de biotina son la aminobiotina, la iminobiotina o la destiobiotina.

El término "oligonucleótido" o "ácido nucleico", tal como se utilizan en la presente memoria, generalmente se refieren a polinucleótidos cortos generalmente de cadena sencilla que comprenden por lo menos 8 nucleótidos y como máximo aproximadamente 1.000 nucleótidos. En una realización preferente, un oligonucleótido presenta una longitud de por lo menos 9, 10, 11, 12, 15, 18, 21, 24, 27 ó 30 nucleótidos. En una realización preferente, un oligonucleótido presenta una longitud de por lo menos 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 45, 40, 35 ó 30 nucleótidos.

El término oligonucleótido debe entenderse ampliamente e incluye ADN y ARN así como análogos y modificaciones de los mismos.

Un análogo de ácido nucleico puede contener, por ejemplo, un nucleótido sustituido que porta un sustituyente en las bases estándares desoxiadenosina (dA), desoxiguanosina (dG), desoxicitosina (dC), desoxitimidina (dT) y desoxiuracilo (dU). Son ejemplos de dichas nucleobases sustituidas: pirimidinas 5-sustituidas, tales como 5-metil-dC, aminoalil-dU o dC, 5-(aminoetil-3-acrilimido)-dU, 5-propinil-dU o -dC, 5-dU o -dC halogenado; pirimidinas Nsustituidas, tales como N4-etil-dC; purinas N-sustituidas, tales como N6-etil-dA, N2-etil-dG; purinas sustituidas en posición 8, tales como 8-[(6-amino)-hex-1-il]-8-amino-dG o -dA, dA o dG halogenado en posición 8, 8-alquil dG o dA y dA sustituido en posición 2, tal como 2-amino-dA.

Un análogo de ácido nucleico puede contener un nucleótido o un análogo de nucleósido, es decir, las nucleobases naturales pueden intercambiarse mediante la utilización de análogos de nucleobase como 5-nitroindol-D-ribosa, 3nitropirrol-D-ribosa, desoxiinosina (dI), desoxixantosina (dX), 7-deaza-dG, -dA, -dI o -dX, 7-deaza-8-aza-dG, -dA, -dI o -dX, 8-aza-dA, -dG, -dI o -dX, d-formicina, pseudo-dU, pseudo-iso-dC, 4-tio-dT, 6-tio-dG, 2-tio-dT, iso-dG, 5-metiliso-dC, 8-aza-7-deaza-dA unido en N8, 5,6-dihidro-5-aza-dC y eteno-dA o pirrolo-dC. Tal como resultará evidente para el experto en la materia, la nucleobase en la cadena complementaria debe seleccionarse de manera que la formación del dúplex sea específica. En el caso de que, por ejemplo se utilice 5-metil-iso-dC en una cadena (por ejemplo (a)), iso-dG debe encontrarse presente en la cadena complementaria (por ejemplo (a')).

En un análogo de ácido nucleico, el esqueleto oligonucleótido puede modificarse para contener residuos sacáridos sustituidos, análogos de azúcar, modificaciones en la fracción fosfato internucleósido y/o puede ser un APN.

Un oligonucleótido puede contener, por ejemplo, un nucleótido con una desoxirribosa sustituida, tal como 2'-metoxi, 2'-fluoro, 2'-metilseleno, 2'-aliloxi, 4'-metil-dN (en el que N es una nucleobase, por ejemplo A, G, C, T o U).

Son análogos de azúcar, por ejemplo, xilosa, ribosa puenteada en 2',4', tal como (2'-O,4'-C-metileno)-(oligómero conocido como ALN) o (2'-O, 4'-C-etileno)-(oligómero conocido como ANE); L-ribosa, L-D-ribosa, hexitol (oligómero conocido como ANH); ciclohexenilo (oligómero conocido como ANCe), altritol (oligómero conocido como ANA); un análogo de ribosa tricíclico en el que los átomos C3' y C5' se encuentran conectados mediante un puente etileno que se encuentra fusionado con un anillo ciclopropano (oligómero conocido como tricicloADN), glicerina (oligómero conocido ANG), glucopiranosa (oligómero conocido como homo-ADN), carbarribosa (con un ciclopentano en lugar de una subunidad tetrahidrofurano), hidroximetil-morfolina (oligómero conocido como morfolino-ADN).

Un gran número de modificaciones de la fracción fosfato internucleosídica también es conocido que no interfiere con las propiedades de hibridación y dichas modificaciones del esqueleto también pueden combinarse con nucleótidos sustituidos o análogos de nucleótido. Son ejemplos los oligonucleótidos fosforotioato, fosforoditioato, fosforamidato y metilfosfonato.

El APN (que presenta un esqueleto sin fosfato ni D-ribosa) también puede utilizarse como un análogo de ADN.

Los nucleótidos modificados y análogos de nucleótido anteriormente indicados, así como las modificaciones del esqueleto oligonucleótido pueden combinarse como se desee en un oligonucleótido en el sentido de la presente invención.

El término "anticuerpo" se utiliza en la presente memoria en el sentido más amplio y cubre específicamente los anticuerpos monoclonales, los anticuerpos policlonales, los anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo los anticuerpos biespecíficos) formados a partir de por lo menos dos anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpos con la condición de que muestren la actividad biológica deseada.

Un anticuerpo “aislado” es uno que ha sido identificado y separado y/o recuperado a partir de un componente de su ambiente natural. Los componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que interferirían con los usos de investigación, diagnósticos o terapéuticos del anticuerpo, y entre ellos pueden incluirse enzimas, hormonas y otros solutos proteicos o no proteicos. En algunas realizaciones, el anticuerpo se purifica (1) a más de 95% en peso de anticuerpo según se determina mediante el método de Lowry y, en algunas realizaciones, a más de 99% en peso, (2) hasta un grado suficiente para obtener por lo menos 15 residuos de secuencia de aminoácidos N-terminal

o interna mediante la utilización de, por ejemplo, un secuenciador de taza giratoria, o (3) hasta la homogeneidad mediante SDS-PAGE bajo condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul de Coomassie o tinción de plata.

imagen14

imagen15

electroquimioluminiscencia en una solución acuosa. Una solución acuosa es cualquier solución que comprende por lo menos 90% de agua (peso:peso). Evidentemente dicha solución acuosa puede contener además ingredientes tales como compuestos tampón, detergentes y, por ejemplo, aminas terciarias tales como tripropilamina como donante de electrones en la reacción de EQL.

5 En un aspecto, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto o de un conjugado, respectivamente, tal como se da a conocer en la presente invención en un método de detección basado en la electroquimioluminiscencia.

10 En un aspecto, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto o de un conjugado, respectivamente, tal como se da a conocer en la presente invención en la detección de un analito.

Un analito según la presente invención puede ser cualquier molécula inorgánica u orgánica, incluyendo cualquier sustancia biológica de interés. Son ejemplos de sustancias biológicas adecuadas que representan un analito en el

15 sentido de la presente invención, células, virus, partículas subcelulares, proteínas, lipoproteínas, glucoproteínas, péptidos, polipéptidos, ácidos nucleicos, oligosacáridos, polisacáridos, lipopolisacáridos, metabolitos celulares, haptenos, hormonas, sustancias farmacológicas, alcaloides, esteroides, vitaminas, aminoácidos y azúcares.

El analito puede seleccionarse de entre el grupo que consiste de un polipéptido, un carbohidrato y una molécula 20 farmacológica inorgánica u orgánica.

Un polipéptido o proteína es una molécula que está compuesta esencialmente de aminoácidos y que presenta por lo menos dos aminoácidos unidos mediante enlace peptídico. En el caso de que el analito de interés deba investigarse en un método dado a conocer en la presente memoria, el polipéptido preferentemente consistirá de entre por lo

25 menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25 y 30 y hasta aproximadamente 10.000 aminoácidos. Preferentemente el polipéptido contiene entre 5 y 2.000, también preferentemente entre 10 y 1.000 aminoácidos.

En el caso de que el analito sea un ácido nucleico, dichos ácidos nucleicos preferentemente son oligonucleótidos de ADN o ARN naturales.

30 En un aspecto, la presente invención se refiere a un método para medir un analito mediante un método in vitro, comprendiendo el método las etapas de: (a) proporcionar una muestra que se sospecha o se conoce que comprende el analito, (b) puesta en contacto de dicha muestra con un conjugado entre un agente de unión por afinidad y un compuesto según la fórmula I o de fórmula II, respectivamente, bajo condiciones apropiadas para la

35 formación de un complejo de conjugado del analito y (c) medición del complejo formado en la etapa (b) y obtención de esta manera de una medición del analito.

En una realización, la medición de un analito se refiere a la detección de la cantidad del analito en una muestra.

40 En una realización, la medición en el método anteriormente indicado para la detección de un analito se lleva a cabo mediante la utilización de un procedimiento de detección basado en electroquimioluminiscencia. También preferentemente el método se pone en práctica en una solución acuosa.

Los ejemplos siguientes se proporcionan con el fin de ayudar a la comprensión de la presente invención, el alcance 45 real de la cual se proporciona en las reivindicaciones adjuntas.

Ejemplos

Ejemplo 1 50 Síntesis de fenil-fenantridinas sustituidas

Ejemplo 1.1

55 Procedimiento general para la síntesis de 2-aminobifenilos sustituidos:

Con la reacción de acoplamiento de Suzuki-Miyaura tal como se describe en Youn S.W., Tetrahedron Lett. 50:45984601, 2009, entre derivados 2-bromoanilina disponibles comercialmente y el ácido arilborónico correspondiente, pueden sintetizarse los 2-aminobifenilos apropiados, los cuales resultan necesarios para reacciones adicionales con

60 fenantridinas.

Procedimiento típico:

imagen16

a: 10% molar de PdCl2(PPh3)2, K2CO3, DMF/H2O (5/1), 80°C, 24 h Otros ejemplos:

imagen17

Ejemplo 1.2

Procedimiento general para la síntesis de fenantridinas sustituidas:

15 A la solución helada de 2-arilanilina 1 (0,01 moles) en cloroformo (20 ml) se añadió cloruro de ácido de arilo 2 (0,01 moles) y se agitó bajo condiciones inertes durante 30 minutos a temperatura ambiente. La mezcla resultante se sometió a reflujo bajo agitación durante las siguientes 2 horas. La mezcla de reacción se trató mediante la adición gota a gota de piridina (0,02 moles en 10 ml de cloroformo) durante un periodo de 60 minutos. Se dejó que la mezcla

20 se enfriase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla se lavó bien con HCl 0,5 M, se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía flash en gel de sílice, hexano/acetato de etilo 3:2, proporcionando producto puro 3 con un rendimiento de 66%.

Se sometió a reflujo benzamido-2-bifenilo 3 (0,01 moles) y POCl3 (5 ml) en 20 ml de tolueno y se agitó bajo

25 nitrógeno durante 18 horas, siguiendo el procedimiento descrito en Lion C., Bull. Soc. Chim. Belg. 98:557-566, 1989. La mezcla de reacción fría se diluyó con CH2Cl2 (30 ml) y se vertió en hielo, se lavó con NH4OH al 25% y agua destilada. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío, seguido de cromatografía flash (gel de sílice, hexano/acetato de etilo 1:1), proporcionando el producto 4,6-fenilfenantridina.

imagen18

Rendimiento: 52%. Sólido blanco. RMN-1H (CDCl3, 400 MHz) δ 7,54-7,85 (m, 9H), 8,10 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,28 (d, J=7,9 Hz, 1H), 8,62 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,67 (d, J=8,4 Hz, 1H).

Utilización de 2-naftalén-2-il-fenilamina en lugar de 2-aril-anilina:

imagen19

RMN-1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,64 (d, J=9,1 Hz, 2H), 8,29 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,16 (d, J=8,92 Hz, 1H), 7,92 (d, J=7,48 Hz, 1H), 7,79-7,75 (m, 2H), 7,69 (t, J=14,0, 8,2 Hz, 1H), 7,63-7,61 (m, 2H), 7,53-7,46 (m, 4H), 7,19 (t, J=14,3, 7,2 Hz, 1H). EM: [M+H]+ 306,3

La utilización de cloruro de naftaleno-carbonilo en lugar de cloruro de ácido de fenilo rindió:

imagen20

10 RMN-1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,74 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,65 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,27 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,15 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,03 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,97-7,94 (m, 2H), 7,90-7,85 (m, 2H), 7,80-7,69 (m, 2H), 7,62 (t, J= 14,2, 7,1 Hz, 1H), 7,59-7,55 (m, 2H). EM: [M+H]+ 306,3

15 Ejemplo 1.3

Procedimiento para la síntesis de 6-(2-sulfofenil)fenantridina

20 La 6-(2-sulfofenil)fenantridina puede sintetizarse mediante calentamiento suave de arilanilina (0,01 moles) con anhídrido cíclico de ácido 2-sulfobenzoico (0,01 moles) en CH3CN durante 6 horas utilizando el procedimiento descrito por Nicolai E., Chem. Pharm. Bull. 42:1617-1630, 1994.

Tras la purificación, el producto puede convertirse en la fenantridina apropiada basándose en el método descrito en 25 el Ejemplo 1.2.

imagen21

La 6-fenil-alquilsulfonil-fenantridina puede sintetizarse mediante calentamiento suave de alquilsulfonil-arilanilina (0,01 moles) con cloruro de ácido benzoico (0,01 moles) en cloroformo utilizando el procedimiento descrito por Lion C., 35 Bull. Soc. Chim. Belg. 98:557-566, 1989; ver el Ejemplo 1.2.

Tras la purificación, el producto puede convertirse en la fenantridina apropiada basándose en el método descrito en el Ejemplo 1.2.

imagen22

40

RMN-1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,92 (d, J=8,7 Hz, 1H), 8,75 (d, J=1,9 Hz, 1H), 8,68 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,35 (dd, J=8,7, 2,0 Hz, 1H), 8,30 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,89 (t, J=15,3, 7,1 Hz, 1H), 7,81-7,73 (m, 3H), 7,64-7,56 (m, 3H) 3,12 (s, 3H). EM: [M+H]+ 334,3

45 La 6-(4-metilsulfofenil)fenantridina también puede prepararse siguiendo el procedimiento descrito por Cymerman J.,

J. Chem. Soc., 703-707, 1949.

imagen23

5

15

25

35

45

55

Síntesis de N-bifenil-2-il-4-(2-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-benzamida:

Procedimiento: A una solución de ácido 4-(2,5,8,11-tetraoxatridecán-13-iloxi)benzoico (3 g, 9,14 mmoles), 0,2 ml de DMF en 30 ml de DCM seco a 0ºC, se añadió cloruro de oxalilo (1,05 ml, 12,34 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h. La solución se concentró a sequedad. El residuo aceitoso se utilizó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Una solución de 2-fenilalanina (1,6 g), piridina (2,4 ml) en cloroformo (80 ml) bajo una atmósfera inerte se enfrió a 0ºC. Se añadió lentamente cloruro de (fenil-4-(2,5,8,11-tetraoxatridecán-13-iloxi)benzoilo (3,1 g, 9,14 mmoles) en 20 ml a la solución y la mezcla final se dejó que alcanzase la temperatura ambiente. La solución se sometió a reflujo durante 2 h y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se extrajo con HCl (1 M, 2x100 ml), NaHCO3 (100 ml) y agua (50 ml). La fase orgánica se secó con MgSO4 y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc/hexano). Rendimiento: 4.1 (90%) RMN:

RMN-1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,49 (dd, J=8,3, 0,9 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,61-7,35 (m, 9H), 7,33-7,25 (m, 1H), 7,19 (m, 1H), 6,91-6,84 (m, 2H), 4,16-4,10 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 3,77-3,58 (m, 10H), 3,56-3,49 (m, 2H), 3,36 (s, 3H). RMN-13C{1H} (101 MHz, CDCl3) δ 164,56 (s), 161,65 (s), 138,18 (s), 135,12 (s), 132,32 (s), 129,97 (s), 129,39 (s), 129,22 (s), 128,66 (s), 128,57 (s), 128,16 (s), 127,13 (s), 124,18 (s), 121,23 (s), 114,57 (s), 71,95 (s), 70,89 (s), 70,64 (s), 70,63 (s), 70,54 (s), 69,54 (s), 67,63 (s), 59,04 (s), 53,51 (s).

EM(+): [M+H]+=calc. 480,2386; observado: 480,2383; [M+Na]+=calc. 502,2200, observado: 502,2204.

Síntesis de 6-[4-(2-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-fenil]-fenantridina:

Procedimiento: se sometió a reflujo durante 20 h N-bifenil-2-il-4-(2-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)benzamida (4 g, 8,34 mmoles), POCl3 (10 ml) en 10 ml de tolueno. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y se añadieron 100 ml de diclorometano. La solución se vertió en hielo y la mezcla se neutralizó con NH4OH (al 20%). Se extrajo la fase orgánica y se lavó sucesivamente con agua destilada y solución hipersalina, y se secó sobre MgSO4. La solución resultante se purificó mediante cromatografía flash (gel de sílice, en acetato de etilo/hexano 1:1, Rf=0,14). Rendimiento: 1 g (25%). RMN:

RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,68 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,59 (dd, J=8,1, 1,4 Hz, 1H), 8,23 (dd, J=8,1, 1,1 Hz, 1H), 8,15 (dd, J=8,3, 0,7 Hz, 1H), 7,84 (ddd, J=8,3, 7,1, 1,3 Hz, 1H), 7,79-7,57 (m, 5H), 7,15-7,03 (m, 2H), 4,29-4,19 (m, 2H), 3,93-3,90 (m, 2H), 3,80-3,60 (m, 12H), 3,59-3,49 (m, 2H), 3,37 (s, 3H).

RMN-13C{1H} (75 MHz, CDCl3) δ 160,92 (s), 159,45 (s), 143,84 (s), 133,59 (s), 131,26 (s), 130,61 (s), 130,26 (s), 129,05 (s), 128,90 (s), 127,19 (s), 126,85 (s), 125,39 (s), 123,70 (s), 122,29 (s), 122,01 (s), 114,68 (s), 72,02 (s), 70,97 (s), 70,74 (s), 70,72 (s), 70,69, 70,62 (s), 69,80 (s), 67,68 (s), 59,15 (s).

EM (+): JM358-F5, [M+H]+ calc.=462,2280, observado: 462,2275.

Síntesis de sal 3-(4-fenantridín-6-il-fenoxi)-propano-1-sulfonato de cesio

imagen24

Se preparó 6-(4-metoxifenil)fenantridina mediante ciclización de la N-(bifenil-2-il)-4-metoxibenzamida (2 g, 6,59 mmoles) siguiendo el procedimiento indicado anteriormente. El compuesto se purificó mediante cromatografía en diclorometano/hexano (gradiente 1:5 a 1:1). Rendimiento: 87%. RMN:

RMN-1H (300 MHz, DMSO) δ 8,94 (d, J=8,2 Hz, 1H), 8,84 (dd, J = 8,2, 1,2 Hz, 1H), 8,18-8,05 (m, 2H), 7,97 (ddd, J=8,3, 7,1, 1,3 Hz, 1H), 7,86-7,62 (m, 5H), 7,23-7,07 (m, 2H), 3,88 (s, 3H). RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,70 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,61 (dd, J=8,1, 1,3 Hz, 1H), 8,28 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,18 (dd, J=8,3, 0,7 Hz, 1H), 7,86 (ddd, J=8,3, 7,1, 1,3 Hz, 1H), 7,81-7,56 (m, 5H), 7,18-7,02 (m, 2H), 3,92 (s, 3H).

RMN-13C (75 MHz, CDCl3) δ 160,95 (s), 160,33 (s), 143,72 (s), 133,67 (s), 132,12 (s), 131,36 (s), 130,71 (s), 130,20 (s), 129,13 (s), 128,97 (s), 127,23 (s), 126,92 (s), 125,40 (s), 123,73 (s), 122,33 (s), 122,03 (s), 114,03 (s), 55,57 (s).

5 EM [IEP-EM (+)]: [M+H+]-observado: 286,1231, calc.: 286,1226

4-Fenantridín-6-il-fenol: la desprotección de la 6-(4-metoxifenil)fenantridina se consiguió mediante la utilización de HBr. Una suspensión de 6-(4-metoxifenil)fenantridina (1 g, 3,5 mmoles) en 15 ml (HBr, al 47%) se sometió a reflujo a 100ºC durante 12 h. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se vertió en agua helada y se neutralizó con

10 Na2CO3. El precipitado resultante se separó mediante filtración y se lavó con agua y Et2O. El sólido se purificó mediante cromatografía de columna utilizando diclorometano/MeOH. Rendimiento: 90%. RMN:

RMN-1H (300 MHz, DMSO) δ 9,84 (s, 1H), 8,92 (d, J=8,2 Hz, 1H), 8,82 (dd, J= 8,2, 1,2 Hz, 1H), 8,20-8,11 (m, 15 1H), 8,08 (dd, J= 8,1, 1,2 Hz, 1H), 8,02-7,88 (m, 1H), 7,84-7,64 (m, 3H), 7,64-7,49 (m, 2H), 7,06-6,89 (m, 2H).

EM [IEP-EM (-)]:

[M+H+]-observado: 270,0922, calc.: 270,0924.

20 A una solución de 4-(fenantridín-6-il)fenol (320 mg, 1,18 mmoles) en DMF (4 ml), se añadió Cs2CO3 (482,2 mg, 1,48 mmoles) y 1,3-propilsulfona (159 mg, 1,30 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a sequedad y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna (sílice) utilizando diclorometano/MeOH (gradiente 10:1 a 5:1).

25 Rendimiento: 72% RMN:

RMN-1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,98-8,87 (m, 1H), 8,83 (dd, J=7,9, 1,6 Hz, 1H), 8,12 (m, 2H), 7,97 (ddd, J=8,3, 7,0, 1,3 Hz, 1H), 7,85-7,69 (m, 3H), 7,67 (d, J=8,6 Hz, 2H), 7,14 (d, J=8,7 Hz, 2H), 4,19 (t, J=6,5 Hz, 2H), 2,6430 2,57 (m, 2H), 2,15-1,97 (m, 2H).

EM [EM-EP (-)]:

[M-Cs+]-calc.: 392,0956; observado: 392,0962. 35 Ejemplo 2

Procedimiento general para la síntesis de complejo dímero entrecruzado con cloro:

40 El procedimiento general ha sido publicado por Nonoyama M., J. Organomet. Chem. 86:263-267, 1975.

Se sintetizaron dímeros de iridio de la manera siguiente: se calentó IrCl3•3H2O y 2,5 equiv. de 6-fenilfenantridina a 120°C durante 18 h bajo nitrógeno en una mezcla de 2-etoxietanol/agua (3:1, v/v). Tras el enfriamiento hasta la temperatura ambiente, se separó el precipitado mediante filtración y se lavó sucesivamente con metanol y Et2O, y se

45 secó, proporcionando el dímero deseado.

Ejemplo 2.1

Complejo con fenilfenantridina no sustituida 50

imagen25

[(6-fenilfenantridina)2IrCl]2.

55 Rendimiento: 71%. Sólido marrón. RMN-1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 6,45 (d, J=6,8, 4H), 6,58 (t, J=7,1, 13,9 Hz, 4H), 6,95 (t, J=7,1, 14,2 Hz, 4H), 7,56 (t, J=7,4, 16,0 Hz, 4H), 7,68 (t, J=8,1, 16,2 Hz, 4H), 7,93 (t, J=8,0, 14,6 Hz, 4H), 8,07-8,13 (m, 8H), 8,80 (d, J=7,3 Hz, 4H), 8,93-9,01 (m, 12H).

imagen26

imagen27

Una mezcla del dímero [(6-fenilfenantridina)2IrCl]2 (163 mg, 0,110 mmoles), ácido 4-(4-metil-2,2-bipiridín-4'-il)-butírico (60 mg, 0,232 mmoles) en 2-etoxietanol (15 ml) se calentó bajo reflujo bajo una atmósfera de nitrógeno durante la

5 noche. El producto se precipitó con agua y se separó mediante filtración. Se lavó el residuo con Et2O. El complejo presentaba una Rf=0,57 en la CCF (diclorometano/MeOH 10:1). El producto se purificó mediante cromatografía de columna (sílice) utilizando diclorometano/MeOH (gradiente 10:1 a 5:1). Rendimiento: 25% RMN:

10 RMN-1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,22-89,17 (t, J=6,0 Hz, 2H), 8,86-8,80 (t, J=9,0 Hz, 2H), 8,66-8,60 (t, J=6,0 Hz, 2H), 8,53-8,48 (m, 2H), 8,40-8,38 (m, 2H), 8,11-7,99 (m, 6H), 7,62-7,59 (d, J=9,0 Hz, 2 H), 7,52-7,46 (t, J=9,0 Hz, 2H), 7,38-7,34(t, J=6,0 Hz, 2H), 7,29-7,24(t, J=9,0 Hz, 2H),7,13-7,09 (m, 2H), 6,90-6,85 (m, 2H), 6,90-6,85 (m, 2H), 6,88-6,75 (t, J=9,0 Hz, 2H), 2,21-2,17 (m, 2H), 1,83-1,77 (m, 2H), 1,55-1,42 (m, 2H).

15 EM [IEP-EM (+)]:

[M]+ calc.: 957,27936; observado: 957,27754.

20

Claims

imagen1

imagen2

imagen3