JP2002142753A - 動物の受精卵の共培養担体及びこの担体を用いる動物の受精卵の培養方法 - Google Patents
動物の受精卵の共培養担体及びこの担体を用いる動物の受精卵の培養方法Info
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Abstract
観察することができ、かつ、受精卵の接着及び三次元的
な発育を初めて可能にした、動物の受精卵の共培養担体
を提供すること、並びに、当該共培養担体を用いた動物
の受精卵の培養方法を提供すること。 【解決手段】 動物の受精卵と共培養して受精卵の接着
及び三次元的発育を誘導するための担体であって、細胞
組込型三次元組織再構築体からなる、動物の受精卵の共
培養担体の提供、並びに、前記共培養担体を培養容器に
装入して動物の受精卵を培養することを特徴とする、動
物の受精卵の培養方法の提供。
Description
培養担体と、この担体を用いる動物の受精卵の培養方法
とに関する。さらに詳しくは、本発明は、培養系におい
て動物の受精卵の接着及び三次元的発育を誘導するため
の担体であって、細胞組込型三次元組織再構築体からな
る動物の受精卵の共培養担体と、この担体を用いる動物
の受精卵の培養方法に関するものである。
三次元的に発育させることが可能となり、生体内で着床
した受精卵の初期発生胚子との相違点の解明、催奇形性
物質の評価、もしくは受精卵より初期発生した胚子の移
植等に有用である。
外受精させて受精卵(接合子)を作製して、さらに受精
卵を卵割、桑実胚、胞胚の段階を経て、透明帯が変性消
失した後期胞胚の段階まで培養することが可能となり、
この卵割から胞胚の段階にある受精卵を子宮に移植して
産子を得る補助的生殖技術[ assisted reproductive t
echnology(ART)]が、家畜領域のみならずヒトの
不妊医療でも確立されている。
子宮内膜へ着床して、内細胞塊(胚結節)が三層の胚盤
に移行する原腸胚形成過程をはじめ初期胚発生の段階へ
と発育するが、培養系ではこのような発育を可能にする
技術はまだ報告がない。つまり、これまでの培養系で
は、受精卵(後期胞胚)を培養し続けても、二次元的に
単層細胞を増殖するのみであって、原腸胚や神経胚の形
成が起こるような初期胚様構造を有した三次元の構築体
は作製できていない。
ら組織を再構築する組織工学の基盤技術は、ここ10年
間で欧米を中心に著しく進歩して、比較的単純な構造の
臓器では、基本的な再構築方法が確立された[ Ferber,
D., Science 284, 422-425,(1999)]。
成成分を三次元的に組み立てて組織を構築するために、
数多くの素材から様々な形状の支持体が開発されてき
た。本発明の発明者らは、支持体として綿製ガーゼなど
のメッシュ体を利用した組織工学の基盤技術をすでに確
立している(特開平7−298876号公報、特許第3
081130号公報)。
的三段階灌流を施すことで、大多数の当該臓器構成細胞
を分離することなく、臓器を培養バージョンに改変して
器官様構造体(オルガノイド)を再構築する新しい器官
工学の方法を既に確立している(特開平11−1646
84号公報)。また、子宮内膜の再構築技術に関して
は、ヒトの子宮内膜上皮細胞と間質細胞とをコラーゲン
ゲル内に共培養すると、上皮細胞は子宮腺様構造を再構
築することが報告されている[ Akoum, A. ら、J. Repr
od. Med., 41, 555-561, (1996)]。
トリゲル上に子宮内膜上皮細胞を培養した後、その上に
着床直前の胞胚を置いて共培養した報告があり、共培養
後48時間目にトロホブラスト(栄養膜細胞)と上皮細
胞の細胞融合が起こるとの記載はある[富永敏朗,日本
産婦人科学会雑誌,48,591-603,(1996)]が、胞胚
由来の細胞が発育して原腸胚や神経胚の形成が起こるよ
うな初期胚様構造を有した三次元の構築体を形成したと
いうような記載はない。つまり、動物の受精卵を培養し
て、三次元的な発育を誘導するような培養担体もしくは
共培養担体の報告は未だない。
系において動物の受精卵の挙動を容易に観察することが
でき、かつ、受精卵の接着及び三次元的な発育を初めて
可能にした、動物の受精卵の共培養担体を提供すること
にある。また、本発明の目的は、当該共培養担体を用い
て動物の受精卵を培養することにより、動物の受精卵を
三次元的に発育させることが可能となり、生体内で着床
した受精卵の初期発生胚子との相違点の解明、催奇形性
物質の評価、もしくは受精卵より初期発生した胚子の移
植等が可能となる動物の受精卵の培養方法を提供するこ
とにある。
おいて動物の受精卵の挙動を容易に観察することがで
き、かつ、受精卵の接着及び三次元的な発育を可能にす
る動物の受精卵の共培養担体並びに培養方法を開発すべ
く、鋭意検討を重ねた結果、培養担体に予め細胞を組込
んだ形の細胞組込型三次元組織再構築体からなる共培養
担体が、受精卵の接着及び三次元的発育を可能とするこ
とを見出し、この知見に基いて本発明を完成するに到っ
た。
の受精卵と共培養して受精卵の接着及び三次元的発育を
誘導するための担体であって、細胞組込型三次元組織再
構築体からなる、動物の受精卵の共培養担体を提供する
ものである。また、請求項10に係る本発明は、請求項
1乃至9のいずれかに記載の共培養担体を培養容器に装
入して動物の受精卵を培養することを特徴とする、動物
の受精卵の培養方法を提供するものである。
物の受精卵の共培養担体について説明する。請求項1に
係る本発明の動物の受精卵の共培養担体は、動物の受精
卵と共培養して受精卵の接着及び三次元的発育を誘導す
るための担体であって、細胞組込型三次元組織再構築体
からなるものである。
培養担体が対象とする動物の受精卵は、哺乳動物由来の
受精卵であってもよいし、或いはそれ以外の動物由来の
受精卵であってもよい。哺乳動物としては、例えばヒ
ト、サル、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ヒヒ、ブタ、イヌ、モ
ルモット、ラット、マウス等が挙げられる。
割、桑実胚、胞胚のいずれの段階のものでもよいが、着
床のモデルとしては、胞胚の段階まで発育したものが好
ましい。さらに、請求項1に係る本発明の培養系では、
受精卵以外のライフサイクルにある卵子、つまり卵胞内
卵子や排卵卵子など、もしくは、受精途上卵子などの受
精に至るまでの卵細胞を用いてもよい。
培養担体は、上述の動物の受精卵と共培養して受精卵の
接着及び三次元的発育を誘導するための担体である。す
なわち、請求項1に係る本発明の動物の受精卵の共培養
担体は、受精卵の接着に適しているほか、従来のように
受精卵(抱胚)を培養して、二次元的に単層細胞を増殖
させるのみではなく、受精卵由来の三次元の構築体を作
製することができる。このような特質は、請求項1に係
る本発明の動物の受精卵の共培養担体が以下の構成をと
ることに基づく。
培養担体は、細胞組込型三次元組織再構築体からなる。
ここで細胞組込型三次元組織再構築体とは、受精卵由来
の三次元の組織を発育するための足場となるものをい
う。
まれている細胞は、請求項4に記載されているように、
受精卵と同種又は異種の動物由来の細胞である。また、
この細胞は、初代培養細胞であっても、株化細胞であっ
ても、又はそれらに外来性遺伝子を導入した細胞であっ
てもよく、さらに、この細胞は1種類であっても2種類
以上であってもよい。
して細胞組込型三次元組織再構築体を作製する場合は、
この細胞組込型三次元組織再構築体に組込む細胞として
は、請求項5に記載したように、子宮内膜由来の細胞が
好ましく、特に子宮内膜上皮細胞と子宮内膜間質細胞が
好ましい。同様に、培養する卵子のライフサイクルの生
体内環境を反映するように、三次元組織再構築体に組込
む細胞として、卵巣由来細胞もしくは卵管由来細胞など
を用いてもよい。
れる細胞を、予めマイトマイシンCで処理しておくと、
組込まれる細胞の分裂能を失わせることができ、受精卵
の三次元的な発育をより促進しうる三次元組織再構築体
を得ることができることがある。
は、請求項2に記載したように、動物由来の細胞、組織
又は器官のいずれかより再構築され、少なくとも一種類
以上の細胞を含有するものである。すなわち、例えば、
上記した如き細胞を培養液により培養することによって
得ることができる。培養液は、細胞を培養する能力を有
するものであれば特に制限はないが、例えばダルベッコ
改変イーグル(DME)/F12培地(10% 非動化
牛胎児血清、10mM HEPES、100単位/mL
ペニシリン、100μg/mLストレプトマイシン含
有)等が好ましく用いられる。
3に記載したように、細胞外マトリックス構成成分及び
/又はメッシュ体を含有していることが好ましい。これ
らを含有することによって、培養液の通液性が向上する
ので、組込まれた細胞を効率よく培養できると共に、組
込まれた細胞に張力が与えられるので、受精卵の三次元
的な発育をより生体に近い状態で進めることができる。
生体内において細胞を支持し接着する働きをする細胞外
マトリックスの構成成分をいい、具体的には例えばコラ
ーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニ
ン、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン等を挙げ
ることができる。この細胞外マトリックス構成成分は、
細胞組込型三次元組織再構築体に組込む細胞と同種の動
物由来の成分であってもよいし、或いは異種の動物由来
の成分であってもよい。
は、請求項7に記載するように、ゲル化したものである
ことが好ましい。例えば、細胞外マトリックス構成成分
のゲルとしては、コラーゲンゲルやマトリゲルなどを用
いることができる。
の空間形状が形成できる程度の開口部を有する繊維状体
であり、請求項8に記載するように、天然又は合成の糸
及び/又はその織成体からなるものなどが挙げられる。
このメッシュ体としては、例えば、綿、絹等の天然の
糸、もしくはナイロン、アクリル、ポリエステル等の合
成の糸からなるメッシュ体や、これらの糸の織成体から
なるメッシュ体などがある。糸の太さの目安は、径が1
0〜100μm程度であり、複数種の糸を適宜組み合わ
せて用いることができる。このメッシュ体として、より
具体的には、滅菌ガーゼ タイプIII(ケーパイン、川
本繃帯材料(株)製)のような綿ガーゼが挙げられる。
元培養のための空間形状が形成できるようになっていれ
ば特に限定されないので、対象とする細胞やその培養条
件等を考慮して適宜選択することができる。具体的に
は、メッシュ体の開口部の大きさは10〜1000μ
m、好ましくは20〜400μmの範囲である。また、
吸水性の点においては、合成糸及び/又はその織成体よ
りも、天然糸及び/又はその織成体のほうが大きい。こ
の点を考慮して、組込ませる細胞の特性に見合ったもの
を選択すべきである。本発明においては、メッシュ体1
枚のみを用いることもできるが、部分的に開口部の大き
さ等の物理的形状や性質を変えたメッシュ体を用いるこ
ともできるし、開口部の大きさ等の物理的形状や性質の
異なる二枚以上のメッシュ体を適宜組み合わせて用いる
こともできる。
シュ体は、生体吸収性であるものが好ましい。生体吸収
性とは、生体において吸収され消失する性質をいう。生
体内で培養担体を吸収させることができるので、移植用
等として極めて有用である。
上記した如き細胞外マトリックス構成成分、メッシュ
体、もしくは両方を含有しているものであることが好ま
しい。ここでメッシュ体を含有しない場合には、細胞が
組込まれ、受精卵の接着と三次元的発育が可能となるも
のの、細胞組込型三次元組織再構築体が経時的に収縮凝
集しまうため(図1参照)、受精卵の挙動を位相差顕微
鏡で観察することが困難となるおそれがある。これに対
して、メッシュ体を含有することにより、細胞組込型三
次元組織再構築体の収縮が阻害されて、位相差顕微鏡で
受精卵の挙動を良好に観察できるので、好ましい。
形状は、受精卵の接着及び三次元的な発育を支持するこ
とができ、かつ、培養下の受精卵の挙動が位相差顕微鏡
などで容易に観察することができればよいので、直径3
5mmの培養皿に挿入する程度のものであれば、いかな
るサイズや形状であってもよい。
は、前記したように、請求項2に記載した如く、動物由
来の細胞、組織又は器官のいずれかより再構築され、少
なくとも一種類以上の細胞を含有するものであって、例
えば、少なくとも上記した如き細胞を培養液により培養
することによって得ることができる。細胞組込型三次元
組織再構築体の具体的な作製方法としては、例えば温度
感受性ポリマー含有培養基質を用いる多細胞性球状凝集
塊(スフェロイド)の培養法や細胞外マトリックス構成
成分のゲルを用いた培養法、メッシュ体を利用した培養
法(特開平7−298876号公報、特許第30811
30号公報)、連続的三段階灌流による器官工学的方法
(特開平11−164684号公報)等が挙げられる。
リックス構成成分及び/又はメッシュ体を含有する細胞
組込型三次元組織再構築体を作製する場合には、上記方
法のうち、細胞外マトリックス構成成分のゲルを用いた
培養法、メッシュ体を用いた培養法などを利用すること
ができる。
ルを用いた培養法によれば、組込むべき細胞を培養液に
懸濁し、ゾル状態の細胞外マトリックス構成成分と混和
した後に、この細胞懸濁液を培養皿に播種して培養する
ことで細胞をゲル内に包埋する。細胞が包埋されたゲル
を培養皿から離脱させて浮遊培養することにより、細胞
組込型三次元組織再構築体を得ることができる。
98876号公報等)によれば、組込むべき細胞を培養
液に懸濁し、この細胞懸濁液を、ゾル状態の細胞外マト
リックス構成成分と混和した後に、メッシュ体を入れて
おいた培養皿に播種して培養することで、細胞及びメッ
シュ体をゲル内に包埋する。このようにして得られるガ
ーゼと共に細胞が包埋されたコラーゲンゲルを、培養皿
から離脱させて浮遊培養することにより、細胞組込型三
次元組織再構築体を得ることができる。
構築体からなる、請求項1に係る本発明の共培養担体
は、受精卵の培養に用いることができる。このような細
胞組込型三次元組織再構築体からなる、請求項1に係る
本発明の共培養担体を用いて、動物の受精卵を培養する
のが、請求項10に係る本発明である。請求項10に係
る本発明は、請求項1〜9のいずれかに記載の共培養担
体を培養容器に装入して、動物の受精卵を培養すること
を特徴とする、受精卵の培養方法である。
の共培養担体を培養容器に装入し、受精卵を共培養担体
の上に置いて、培養液を受精卵及び共培養担体(細胞組
込型三次元組織再構築体)に組込まれている細胞に供給
しながら培養する。この培養液としては、細胞組込型三
次元組織再構築体を得る際に用いることができるものを
使用してもよい。そのような培養液を、1〜3日おきに
交換する。培養温度は、37.0〜39.0℃、培養期
間は、1〜60日間程度とする。
卵を培養すると、培養途中の受精卵の挙動を位相差顕微
鏡等で観察することができる(図6−10参照)と共
に、受精卵周囲に受精卵由来の細胞が移行し、最終的に
受精卵の三次元的な発育が可能となる(図11−14参
照)。
らなる共培養担体の作製) ウシ子宮より初代培養した後に数回継代した子宮内膜上
皮細胞(以下、上皮細胞という。)と、子宮内膜間質細
胞(以下、間質細胞という。)を、それぞれ終濃度が
8.8×105/mLと6.8×105/mLとなるよう
に、培養液(10%非動化牛胎児血清、10mM HE
PES、100単位/mLペニシリン、100μg/m
Lストレプトマイシン含有のDME/F12培地)に懸
濁した。氷上で、この細胞懸濁液と0.5%I型コラー
ゲン水溶液(CELLGENI−AC、(株)高研製)
とを等量混合した後、直径35mmのポリスチレン製の
疎水性培養皿( Falcon #351008)に2.0mLずつ播
種して、5%CO2/95%空気存在下の37℃の保湿
インキュベータ内で1時間培養して、コラーゲンを完全
にゲル化した。
に、2.0mLの培養液を添加して、さらに1時間培養
後に、細胞が包埋されたコラーゲンゲルを培養皿から離
脱させて浮遊培養した。その後、培養液は1日おきに交
換して7日間培養した。
ルの直径が培養2日目には22mm、5日目には11m
m、7日目には9mmとなった(図1参照)。図1は、
培養5日目のガーゼ含有(図の右側)及びガーゼ非含有
(図の左側)の細胞組込型三次元組織再構築体からなる
共培養担体の実体写真像図である。培養5日目のガーゼ
非含有ゲルの位相差顕微鏡像図を図2に示す。図2上の
10mmは、実際の140μmに相当する。このゲル収
縮のため、図2から明らかなように、培養5日目には、
ゲル内の細胞形態を位相差顕微鏡で観察することは困難
であった。
固定して、定法に従いパラフィン切片を作製し、ゲル内
部の形態をヘマトキシリン・エオシン染色で観察した。
培養7日目におけるヘマトキシリン・エオシン染色後の
切片の様子を図3に示す。図3上の10mmは、実際の
35μmに相当する。また、図3と同じ培養7日目にお
けるヘマトキシリン・エオシン染色後の切片を低倍率で
観察したものを図4に示す。図4上の10mmは、実際
の70μmに相当する。
面では単層の立方上皮の形態を形成する一方、ゲル内で
は子宮腺様構造を形成していることが明らかであり、ゲ
ル内に細胞が組込まれていることが確認できた。このこ
とから、作製例1によれば、細胞組込型三次元組織再構
築体からなる共培養担体を得ることができたことが実証
され、ここに受精卵を培養することにより受精卵の子宮
内膜への着床モデルとなりうる、細胞組込型三次元組織
再構築体からなる共培養担体が作製されたものと推測さ
れる。
次元組織再構築体からなる共培養担体の作製) 直径34mmの円形に切り取った滅菌ガーゼタイプIII
(ケーパイン、川本繃帯材料(株)製)を挿入したこと
以外は作製例1で用いたのと同様の培養皿( Falcon #
351008)に、作製例1と同様に調製した細胞懸濁液を、
氷上で、0.5%I型コラーゲン水溶液(CELLGE
N I−AC、(株)高研製)と等量混合した後、2.
0mLずつ播種して、5%CO2/95%空気存在下の
37℃の保湿インキュベータ内で1時間培養して、コラ
ーゲンを完全にゲル化した。
に2.0mLの培養液を添加して、さらに1時間培養し
た後に、ガーゼと細胞が包埋されたコラーゲンゲルを培
養皿から離脱させて浮遊培養した。その後、培養液は1
日おきに交換して7日間培養した。
m、5日目で29mm、7日目でも28mmであり、ガ
ーゼを含有する本作製例2の共培養担体は、作製例1で
見られるようなゲルの収縮がなかった。このような現象
は、ガーゼによりゲルの収縮が阻害されたためと認めら
れる(図1参照)。培養7日目のコラーゲンゲルの位相
差顕微鏡像図を図5に示す。図5上の10mmは、実際
の140μmに相当する。図5に示される如く、培養7
日目でもガーゼによりゲル収縮が阻害されるため、ゲル
内の細胞形態は位相差顕微鏡で良好に観察することがで
きた。
様に、上皮細胞は、ゲル表面では単層の立方上皮の形態
を形成する一方、ゲル内では子宮腺様構造を形成してい
ることが推測される。このことから、本作製例2によれ
ば、受精卵の子宮内膜への着床モデルとなりうる、細胞
組込型三次元組織再構築体からなる共培養担体が作製さ
れたことが明らかである。
での受精卵の培養) 作製例2で作成した培養7日目のガーゼを含有する細胞
組込型三次元組織再構築体からなる共培養担体の上で、
ウシの体外受精後7日目の受精卵(胞胚)を共培養し
た。培養液は1日おきに交換して12日間共培養した。
し続けた。図6−9は、それぞれ、ガーゼを含有する共
培養担体上で受精卵を共培養後1,2,6,12日目の
位相差顕微鏡像図を示す。各図上の10mmは、実際の
140μmに相当する。また、図9と同じく培養担体上
で受精卵を共培養後12日目の位相差顕微鏡像図(高倍
率)を図10に示す。図10上の10mmは、実際の7
0μmに相当する。
は、受精卵が共培養担体とがまだ接着していないが(図
6,7参照)、受精卵の共培養後6日目には受精卵の共
培養担体への接着が確認でき(図8参照)、また、共培
養後12日目には受精卵周囲に受精卵由来と考えられる
細胞の移行像が確認できた(図9,10参照)。
している共培養担体をホルマリンで固定して、定法に従
い光顕用樹脂切片を作製し、共培養担体内部の形態を、
ヘマトキシリン・エオシン染色で観察した。受精卵を1
2日間共培養した共培養担体のヘマトキシリン・エオシ
ン染色切片の光学顕微鏡像図を図11,図12に示す。
図11,図12上の10mmは、それぞれ実際の35μ
m,70μmに相当する。また、共培養担体の別の部位
についての同様の光学顕微鏡像図を図13,図14に示
す。図13,図14上の10mmは、それぞれ実際の3
5μm,70μmに相当する。
ことにより、単に二次元的に単層細胞が増殖するのみで
はなく、受精卵が発育したと考えられる三次元構築体の
形成が確認できた。以上より、本発明の共培養担体上で
受精卵を培養すると、受精卵の挙動が位相差顕微鏡によ
り容易に観察できると共に、受精卵の接着及び三次元的
な発育が可能であることが実証された。
何ら限定されるものではない。培養対象となる卵子のラ
イフサイクル状況、培養液組成、培養条件はもとより、
細胞組込型三次元組織再構築体の作製に用いる細胞や、
細胞外マトリックス構成成分及び/又はメッシュ体の種
類などについても、様々な態様が可能であることは、多
言を要しない。
込型三次元組織再構築体からなる受精卵の共培養担体が
提供され、その結果、培養系において動物の受精卵の挙
動を容易に観察することができ、かつ、受精卵の接着及
び三次元的な発育が初めて可能となる。また、前記共培
養担体を用いる、請求項10に係る本発明の培養方法に
よれば、動物の受精卵を三次元的に発育させることが可
能となり、生体内で着床した受精卵の初期発生胚子との
相違点の解明、催奇形性物質の評価、もしくは受精卵よ
り初期発生した胚子の移植等が可能となる。
細胞組込型三次元組織再構築体からなる共培養担体の実
体写真像図である。
元組織再構築体からなる共培養担体の位相差顕微鏡像図
である。
元組織再構築体からなる共培養担体のヘマトキシリン・
エオシン染色切片の光学顕微鏡像図である。
元組織再構築体からなる共培養担体のヘマトキシリン・
エオシン染色切片の光学顕微鏡像図(低倍率)である。
組織再構築体からなる共培養担体の位相差顕微鏡像図で
ある。
後1日目の位相差顕微鏡像図を示す。
後2日目の位相差顕微鏡像図を示す。
後6日目の位相差顕微鏡像図を示す。
後12日目の位相差顕微鏡像図を示す。
養後12日目の位相差顕微鏡像図(高倍率)を示す。
ヘマトキシリン・エオシン染色切片の光学顕微鏡像図
(高倍率)である。
ヘマトキシリン・エオシン染色切片の光学顕微鏡像図
(低倍率)である。
別の部位についてのヘマトキシリン・エオシン染色切片
の光学顕微鏡像図(高倍率)である。
別の部位についてのヘマトキシリン・エオシン染色切片
の光学顕微鏡像図(低倍率)である。
Claims (10)
- 【請求項1】 動物の受精卵と共培養して受精卵の接着
及び三次元的発育を誘導するための担体であって、細胞
組込型三次元組織再構築体からなる、動物の受精卵の共
培養担体。 - 【請求項2】 細胞組込型三次元組織再構築体が、動物
由来の細胞、組織又は器官のいずれかより再構築され、
少なくとも一種類以上の細胞を含有するものである請求
項1記載の共培養担体。 - 【請求項3】 細胞組込型三次元組織再構築体が、細胞
が組込まれている他に、細胞外マトリックス構成成分及
び/又はメッシュ体を含有していることを特徴とする請
求項1又は2記載の共培養担体。 - 【請求項4】 細胞組込型三次元組織再構築体に組込ま
れている細胞が、受精卵と同種又は異種の動物由来の細
胞であることを特徴とする請求項1乃至請求項3記載の
共培養担体。 - 【請求項5】 細胞組込型三次元組織再構築体に組込ま
れている細胞が、子宮内膜由来の細胞であることを特徴
とする請求項1乃至請求項4記載の共培養担体。 - 【請求項6】 細胞組込型三次元組織再構築体に組込ま
れている細胞が、予めマイトマイシンCで処理されてい
ることを特徴とする請求項1乃至請求項5記載の共培養
担体。 - 【請求項7】 細胞外マトリックス構成成分が、ゲル化
していることを特徴とする請求項3記載の共培養担体。 - 【請求項8】 メッシュ体が、天然又は合成の糸及び/
又はその織成体からなることを特徴とする請求項3記載
の共培養担体。 - 【請求項9】 メッシュ体が、生体吸収性であることを
特徴とする請求項3又は請求項8記載の共培養担体。 - 【請求項10】 請求項1乃至9のいずれかに記載の共
培養担体を培養容器に装入して動物の受精卵を培養する
ことを特徴とする、動物の受精卵の培養方法。
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