JPWO2007052653A1 - 培養容器および培養装置 - Google Patents
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Abstract
Description
該上底および該下底が、酸素および二酸化炭素透過性であり、そして、
一対の対向する側壁には、該培養容器を一軸水平方向に伸展させる伸展装置に係合させるための係合部がそれぞれ形成されている。
密閉空間を有し、変形可能な材料で形成される培養容器を準備する工程;
該密閉空間に培養液を満たす工程;
該密閉空間の下底に哺乳動物由来の体細胞を播種して該体細胞を培養する工程;および
該培養した体細胞上に受精卵を配置して培養する工程;
を含み、
該体細胞の培養工程および該受精卵の培養工程において、該培養容器が周期的に一軸水平方向に伸展される。
また、上記培養容器は、上底、下底、および該下底の全周縁から立設する側壁を備え、該上下底と該側壁とから矩形箱状密閉空間が形成され、該上底および該下底が、酸素および二酸化炭素透過性であり、そして、一対の対向する側壁には、該培養容器を一軸水平方向に伸展させる伸展装置に係合させるための係合部がそれぞれ形成されているものとすることが好ましい。
100 上底
120 下底
130(130a、130b、130c、130d) 側壁
140 矩形箱状密閉空間
150(150a、150b、150c、150d) 係合部
160 チューブ
170 キャップ
200 伸展装置
210 固定プレート
220 可動プレート
230 ステップモーター
240 制御装置
250 連結器
260(260a、260b) 係合ピン
270(270a、270b) 係合ピン
300 培養装置
400 受精卵
500 体細胞
本発明の培養容器の一つの実施態様である培養容器を、図1に示す断面模式図に基づいて説明する。培養容器100は、変形可能な材料で形成される矩形箱状である。培養容器100は、上底110、下底120、および下底120の全周縁から立設する側壁130を備え、上底110、下底120および側壁130から矩形箱状密閉空間140が形成されている。そして、一対の対向する側壁130(130aおよび130b)には、培養容器100を水平方向に伸展させる後述の伸展装置200に係合させるための係合部150がそれぞれ形成されている。
本発明の培養装置は、上記培養容器100を伸展装置200に係合することにより、構成される。図4に本発明の培養装置300を示す。
本発明の受精卵の培養方法は、変形可能な材料で形成される密閉空間を有する培養容器を用いて、培養容器を周期的に一軸水平方向に伸展させつつ、受精卵を体細胞と共培養することにより行われる。必要に応じて、密閉空間内の培養液が潅流可能な培養容器を用いてもよい。ここで用いられる培養容器としては、上記の条件を満たすものであれば、特に限定されないが、上記の本発明の培養容器が好適に用いられる。
図1に示す培養容器100を用いて、マウス生殖器官由来細胞であるマウス子宮内膜細胞(MEC)およびマウス2細胞期卵子(受精卵)を共培養した。この培養容器は、PDMSエラストマ一で形成されている。
カルチャーディッシュ(コ一ニング社製)上に上記実施例1と同じ培養液2mlを入れ、共培養用のMECを播種し、次いでマウス2細胞期卵子(受精卵)を配置し、静置状態で96時間共培養した。培養後、胚盤胞を、受胚雌マウス子宮内に移植した。胚盤胞への発生率、総細胞数およびICM数、ならびに妊娠率および産仔生産率を、それぞれ図5〜7に示す。
躯体の底部に膜構造を有するセルカルチャーインサート(CCI)(コ一ニング社製)を用い、このCCI底部の膜上に上記実施例1と同じ培養液2mlを入れ、共培養用のMECを播種し、次いでマウス2細胞期卵子(受精卵)を配置し、静置状態で96時間共培養した。培養後、胚盤胞を、受胚雌マウス子宮内に移植した。胚盤胞への発生率、総細胞数およびICM数、ならびに妊娠率および産仔生産率を、それぞれ図5〜7に示す。
上記実施例1で用いたものと同じ培養装置を用いて、体細胞と共培養することなく、マウス2細胞期卵子(受精卵)のみを培養した。すなわち、37℃のインキュベータ内に、図2に示す培養装置300を設置し、注射針を培養容器100に穿刺して密閉空間140を気相が残らないように培養液で満たした。培養液は、実施例1と同じものを使用した。上記実施例1で用いたものと同じ受精卵10〜15個を、注射針を用いて下底120上に配置した。次いで、伸展装置200を駆動させて、一軸周期的伸展(20%、1Hz)を与えながら96時間培養した。24時間毎に96時間までの卵子の発生を観察・記録した。胚盤胞への発生率の経時変化を図8に示す。また、二重蛍光染色法によりマウス胚盤胞を構成する総細胞数およびICM数を計測した。この結果を図9に示す。
力ルチャ一ディッシュ(NUNC社製)上に上記実施例1と同じ培養液2mlを入れ、マウス2細胞期卵子(受精卵)を配置し、静直状態で96時間培養した。培養後、胚盤胞を、受胚雌マウス子宮内に移植した。胚盤胞への発生率、総細胞数および内部細胞塊(ICM)数、ならびに妊娠率および産仔生産率を、それぞれ図8〜10に示す。
躯体の底部に膜構造を有するセルカルチャーインサート(CCI)(コ一ニング社製)を用い、このCCI底部の膜上に上記実施例1と同じ培養液2mlを入れ、このCCI底部の膜上にマウス2細胞期卵子(受精卵)を静置し、静置状態で96時間培養した。培養後、胚盤胞を、受胚雌マウス子宮内に移植した。胚盤胞への発生率、総細胞数およびICM数、ならびに妊娠率およぴ産仔生産率を、それぞれ図8〜10に示す。
Claims (8)
- 変形可能な材料で形成される矩形箱状の培養容器であって、
上底、下底、および該下底の全周縁から立設する側壁を備え、該上下底と該側壁とから矩形箱状密閉空間が形成され、
該上底および該下底が、酸素および二酸化炭素透過性であり、そして、
一対の対向する側壁には、該培養容器を一軸水平方向に伸展させる伸展装置に係合させるための係合部がそれぞれ形成されている、培養容器。 - 前記矩形箱状密閉空間に細胞を導入しかつ培養液を潅流し得るように、該矩形箱状密閉空間と外部とを連通するチューブを備え、そして該連通を遮断するための手段を備える請求項1に記載の培養容器。
- 前記矩形箱状密閉空間の高さが250μm〜1cmである、請求項1または2に記載の培養容器。
- 請求項1から3のいずれかの項に記載の培養容器、および該培養容器の係合部と係合する保持部を備えた伸展装置を備える、培養装置。
- 受精卵の培養方法であって、
密閉空間を有し、変形可能な材料で形成きれる培養容器を準備する工程;
該密閉空間に培養液を満たす工程;
該密閉空間の下底に哺乳動物由来の体細胞を播種して該体細胞を培養する工程;および
該培養した体細胞上に受精卵を配置して培養する工程;
を含み、
該体細胞の培養工程および該受精卵の培養工程において、該培養容器が周期的に一軸水平方向に伸展される、培養方法。 - 前記培養容器が、前記密閉空間と外部とを連通し得るチューブを備え、そして前記体細胞の培養工程および前記受精卵の培養工程において、該チューブを介して前記培養液を該密閉空間に潅流させる、請求項5に記載の方法。
- 前記哺乳動物の体細胞が子宮内膜細胞である、請求項5または6に記載の方法。
- 前記培養容器が、請求項1から3のいずれかの項に記載の培養容器であり、そして該培養容器の係合部と係合する保持部を備えた伸展装置に保持されている、請求項5から7のいずれかの項に記載の方法。
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