JP2002136297A - 単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン - Google Patents

単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン

Info

Publication number
JP2002136297A
JP2002136297A JP2001274335A JP2001274335A JP2002136297A JP 2002136297 A JP2002136297 A JP 2002136297A JP 2001274335 A JP2001274335 A JP 2001274335A JP 2001274335 A JP2001274335 A JP 2001274335A JP 2002136297 A JP2002136297 A JP 2002136297A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
hsv
polypeptide
sequence
immunogenic
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2001274335A
Other languages
English (en)
Inventor
Rae Lyn Burke
リン バーク レイ
Rose E Sekulovich
イー． セクロビッチ ローズ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis Vaccines and Diagnostics Inc
Original Assignee
Chiron Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chiron Corp filed Critical Chiron Corp
Publication of JP2002136297A publication Critical patent/JP2002136297A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
    • C12N2710/16622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＨＳＶ感染を予防するためのヒトに対して安
全で有効なポリペプチドを含むワクチン、および感染が
起きたときの疾患の治療方法を提供すること。 【解決手段】 ＨＳＶ−２ ＶＰ１６の免疫原性エピト
ープを含む、ＨＳＶ感染を処置および／または予防する
ために細胞性免疫応答を誘発し得る免疫原性の切型ＨＳ
Ｖ−２ポリペプチド、ならびにそのポリペプチドをコー
ドする組換えポリヌクレオチドが提供される。このポリ
ヌクレオチドを含む組換え発現ベクター、およびこの組
換え発現ベクターにより形質転換された宿主細胞もまた
提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヘルペスウイルス
感染を軽減する物質および方法に関する。より詳細に
は、本発明は、ＶＰ１６およびそのフラグメントを含む
ＶＰ１６の免疫原性エピトープを含むポリペプチドを含
有する組成物、およびその組成物に使用するポリペプチ
ドの調製方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヘルペスウイルスには単純ヘルペスウイ
ルス（ＨＳＶ）が含まれ、このＨＳＶには非常に近縁の
変異体である１型（ＨＳＶ−１）および２型（ＨＳＶ−
２）がある。単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）はヒトの
性器感染症の流行の原因であり、１年間に新しく発生す
る推定件数は６００，０００件にのぼり、１千万〜２千
万人が症候性の慢性的な回帰発症を経験している。無症
候性の不顕性感染の比率はさらに高い。型特異的血清学
的アッセイを用いることにより、研究者は、アトランタ
の健康維持組織の診療所に通う無作為抽出の女性集団の
うちの３５％にＨＳＶ２型（ＨＳＶ−２）に対する抗体
を確認した。アシクロビルのような抗ウイルス剤を連続
投与すると急性のＨＳＶ疾患の重症度が改善し、再発が
起こる頻度と期間が減少するが、このような化学療法を
介在させると潜伏の定着を抑えこめず、この潜伏性ウイ
ルスの状態も変化させ得ない。その結果、薬剤治療を中
止すると、回帰発症のパターンがただちに復活する。ウ
イルス伝播の主たる源は再発性疾患からのものであるた
め、感染率に影響を与えるいかなる方法も結局ワクチン
法を必要とする。したがって、ＨＳＶ感染を予防するた
めのヒトに対して安全で有効なワクチン、および感染が
起きたときの疾患の治療法を提供することは、医学およ
び科学の両面からの大きな関心事である。
【０００３】ＨＳＶは、２本鎖ＤＮＡウイルスであり、
メンブレンエンベロープで囲まれた正二十面体のカプシ
ド内に約１５０〜１６０Ｋｂｐのゲノムを有している。
そのウイルスエンベロープは、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＥ
およびｇＧを含む少なくとも７種のウイルス特異的糖タ
ンパク質を含有し、そのうちｇＢとｇＤは１型と２型に
対し交差反応性である。ワクチン治療の１つの方法は、
単離した糖タンパク質を使用する方法であるが、この糖
タンパク質は、マウスに注射し、続いてこのマウスに生
きたウイルスを感染させたときに防御が生じることが分
かっている。
【０００４】ＶＰ１６遺伝子産物は、カプシドとエンベ
ロープの間に位置するビリオンテグメントと結合してい
る（図１参照）。ＶＰ１６は、ビリオン刺激因子である
が、１ビリオン当り約５００〜１０００コピー生じる豊
富なタンパク質である。それは、別名１ＣＰ２５、Ｖｍ
Ｗ６５およびα−トランス誘発因子（αＴＩＦ）とも呼
ばれてきた。ＶＰ１６の研究の大部分は、ＨＳＶが複製
する際の「即時型遺伝子（immediate early gene）」の
トランス活性化におけるＶＰ１６の役割を探求してい
る。ＶＰ１６がビリオン内部に位置していることと、Ｈ
ＳＶの複製モードに関する現在の知見に基づくと、ＶＰ
１６は、ＨＳＶ感染の治療に用いられる優れた候補とは
考えられない。
【０００５】関連文献ＳｐｅａｒおよびＲｏｉｚｍａｎ
（１９７２）は、精製ＨＳＶ１中のタンパク質の電気泳
動分離を開示している。ＭｃＬｅａｎら（１９８２）
は、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２由来のＶＰ１６との相互作
用が推定されるモノクローナル抗体を開示している。
【０００６】Ｅｂｅｒｌｅら（１９８４）は、初回時お
よび再発時のＨＳＶ−２による性器感染症罹患中の、Ｈ
ＳＶ成分に対する抗体応答についての研究を開示してい
る。
【０００７】Ｃａｍｐｂｅｌｌら（１９８４）は、ＨＳ
Ｖ１のＶｍＷ６５をコードするＤＮＡ配列を推定的に開
示し、およびＨＳＶ即時型（ＩＥ）転写をトランス活性
化する主たるテグメントビリオン成分としてのＶｍＷ６
５を同定している。
【０００８】Ｐｅｌｌｅｔｔら（１９８５）は、一過性
の発現系中での、クローニングされたＨＳＶ１α−ＴＩ
Ｆコーディング配列の発現を開示している。
【０００９】Ｔｒｉｅｚｅｎｂｅｒｇら（１９８８）
は、ＨＳＶ１ＶＰ１６の推定アミノ酸配列およびその欠
失変異体を開示している。
【００１０】ＭｃＧｅｏｃｈら（１９８８）は、ＨＳＶ
−１株１７の長いユニーク領域（ＵL）のＤＮＡ配列を
提示している。この領域は、遺伝子ＵＬ４８中の、主た
るテグメントタンパク質（これは、新たに感染された細
胞中でのＩＥ遺伝子の転写のアクチベーターである）を
コードすると推定されるセグメントを含む。
【００１１】参考文献 Ｂａｒｒら（１９８６）、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
４：４２８． ＢｅａｃｈおよびＮｕｒｓｅ（１９８１）、Ｎａｔｕｒ
ｅ３００：７０６． Ｂｒｏａｃｈ（１９８１）：ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏ
ｌｏｇｙｏｆｔｈｅＹｅａｓｔＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ、Ｖｏｌ．１、ｐ．４４５、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ
ＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ． Ｂｒｏａｃｈら（１９８３）、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．１０
１：３０７． Ｃａｍｐｂｅｌｌら（１９８４）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．１８０：１． Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉら（１９８５）、Ｍｏｌ．Ｃｅ
ｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３４０３． Ｃｈａｎｇら（１９７７）、Ｎａｔｕｒｅ１９８：１０
５６． Ｃｌｅｗｅｌｌら（１９６９）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ６２：１１５９． Ｃｌｅｗｅｌｌ（１９７２）、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌ．１１０：６６７． Ｃｏｈｅｎ（１９７２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ６９：２１１０． Ｃｒｅｇｇら（１９８５）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．５：３３７６． Ｄａｓら（１９８４）、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５
８：１１６５． Ｄａｖｉｄｏｗら（１９８５）、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ
ｔ．１０：３９． ＤｅＬｏｕｖｅｎｃｏｕｒｔら（１９８３）、Ｊ．Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ．１５４：７３７． ｄｅＢｏｅｒら（１９８３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０：２１． Ｅｂｅｒｌｅら（１９８４）、Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉｏｌ．
６５：１８３９． Ｇｌｅｅｓｏｎら（１９８６）、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ１３２：３４５９． ＧｒａｈａｍおよびＶａｎｄｅｒＥｂ（１９７８）、Ｖ
ｉｒｏｌｏｇｙ５２：５４６． Ｇｏｅｄｄｅｌら（１９８０）、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．８：４０５７． Ｈｅｓｓら（１９６８）、Ｊ．Ａｄｖ．ＥｎｚｙｍｅＲ
ｅｇ．７：１４９． Ｈｏｌｌａｎｄ（１９８１）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２５６：１３８５． Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８）、Ｊ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍ
ｅＲｅｇ．７：１９２９． Ｊｕ（１９８７）、ＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＥＲＶＥＣＴ
ＯＲＳＦＯＲＭＡＭＭＡＬＩＡＮＣＥＬＬＳ（Ｍｉｌｌ
ｅｒおよびＣａｌｏｓ編、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒ
ｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．） Ｋｕｎｚｅら（１９８５）、Ｊ．ＢａｓｉｃＭｉｃｒｏ
ｂｉｏ１２５：１４１． Ｋｕｒｔｚら（１９８６）、Ｍｏ１．ＣｅｌｌＢｉｏｌ
６：１４２． ＬｕｃｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８９）、Ｖｉ
ｒｏｌｏｇｙ１７：３１． Ｍａｃｋｅｔｔら（１９８４）、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４
９：８５７． Ｍａｃｋｅｔｔら（１９８７）、”ＤＮＡＣｌｏｎｉｎ
ｇ”，Ｖｏｌ．ＩＩ．ＩＲＬＰｒｅｓｓ、ｐ．１９１． Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８９）、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＣＬＯＮＩＮＧ；ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡ
Ｌ、ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎ
ｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａ
ｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）． Ｍｅｓｓｉｎｇら（１９８１）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉ
ｄｓ．Ｒｅｓ．９：３０９． ＭｃＧｅｏｃｈら（１９８８）、Ｊ．ｇｅｎＶｉｒｏ
ｌ．６９：１５３１． ＭｃＬｅａｎら（１９８２）、Ｊ．ｇｅｎＶｉｒｏｌ．
６３：２９７． Ｍｉｃｈｅｌｌｅら、Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍｏｎ
ＶｉｒａｌＨｅｐａｔｉｔｉｓ． Ｍｏｓｓ（１９８７）、ＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＥＲＶＥ
ＣＴＯＲＳＦＯＲＭＡＭＭＡＬＩＡＮＣＥＬＬＳ（Ｍｉ
ｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ編、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）ｐ．１０． Ｎｅｕｒａｔｈら（１９８４）、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２
４：３９２． Ｐｅｌｌｅｔｔら（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔl．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：５８７０． Ｓａｎｇｅｒら（１９７７）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ７４：５４６３． Ｓｈｉｍａｔａｋｅら（１９８１）、Ｎａｔｕｒｅ２９
２：１２８． Ｓｍｉｔｈら（１９８３）、Ｍｏl．＆ＣｅｌｌＢｉｏ
l．３：２１５６． ＳｐｅａｒおよびＲｏｉｚｍａｎ（１９７２）、Ｊ．Ｖ
ｉｒｏｌ．９：１４３． Ｔｒｉｅｚｅｎｂｅｒｇら（１９８８）、Ｇｅｎｅｓａ
ｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ２：７１８． Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａら（１９８２）、Ｎａｔｕｒｅ２
９８：３４４． Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａら（１９８４）、ＨＥＰＡＴＩＴ
ＩＳＢ（Ｍｉｌｌｍａｎ、Ｉ．ら編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐ
ｒｅｓｓ）ｐ２２５． Ｗａｒｎｅｒ（１９８４）、ＤＮＡ３：４０１． Ｗａｔｓｏｎら（１９８２）、Ｓｃｉｅｎｃｅ２１８：
３８１． Ｗｅｉｓｓｍａｎ（１９８１）、”Ｔｈｅｃｌｏｎｉｎ
ｇｏｆｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｍｉｓｔ
ａｋｅｓ．”Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ３（Ｉ．Ｇｒｅｓｓ
ｅｒ編）． Ｚｏｌｌｅｒ（１９８２）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１０：６４８７．
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】ＨＳＶ感染を予防する
ためのヒトに対して安全で有効なワクチン、および感染
が起きたときの疾患の治療法を提供する。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明は、ＨＳＶ−２Ｖ
Ｐ１６の免疫原性エピトープを含む、ＨＳＶに対して防
御を与える免疫原性ポリペプチドをコードする、組換え
ポリヌクレオチドに関する。好適には、上記免疫原性ポ
リペプチドは、ＨＳＶ−２ＶＰ１６、切型のＨＳＶ−２
ＶＰ１６、およびその変異体から選択され得る。
【００１４】本発明は、１つの局面で、上記免疫原性ポ
リペプチドをコードする、組換えポリヌクレオチドを含
む組換え発現ベクターに関する。好適には、この発現ベ
クターは、ＨＳＶ−２ＶＰ１６、切型のＨＳＶ−２ＶＰ
１６、およびその変異体から選択される免疫原性ポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドを含み得る。
【００１５】本発明はまた、ＨＳＶ−２ＶＰ１６の免疫
原性エピトープを含む、ＨＳＶに対して防御を与える免
疫原性ポリペプチドをコードするＤＮＡのオープンリー
ディングフレーム(ＯＲＦ)を含む組換え発現ベクターに
関し、このＯＲＦは所望の宿主と適合する制御配列に作
動可能に連結され得る。
【００１６】好適には、上記ＯＲＦは、ＨＳＶ−２ＶＰ
１６、切型のＨＳＶ−２ＶＰ１６、およびその変異体か
ら選択される、ＨＳＶに対して防御を与える免疫原性ポ
リペプチドをコードし得る。
【００１７】好適には、上記発現ベクターは、ワクシニ
アウイルスであり得る。
【００１８】本発明はまた、１つの局面で、ＨＳＶ−２
ＶＰ１６の免疫原性エピトープを含む、ＨＳＶに対して
防御を与える免疫原性ポリペプチドをコードするＤＮＡ
のオープンリーディングフレーム(ＯＲＦ)を含む組換え
発現ベクターであって、このＯＲＦが所望の宿主と適合
する制御配列に作動可能に連結されている、組換え発現
ベクターにより形質転換された宿主細胞に関する。上記
ＯＲＦは、ＨＳＶ−２ＶＰ１６、切型のＨＳＶ−２ＶＰ
１６、およびその変異体から選択され得る。
【００１９】本発明はまた、１つの局面で、ＨＳＶ感染
の治療に用いられる、ＨＳＶ−２ＶＰ１６のエピトープ
を含み、かつＨＳＶに対して防御を与える免疫原性ポリ
ペプチドを生産する方法に関し、この方法は、(a)請求
項８に記載の宿主細胞を提供する工程；(b)該ポリペプ
チドを発現させる条件下で、該宿主細胞をインキュベー
トする工程；および(c)該宿主細胞から発現したポリペ
プチドを単離する工程を包含する。
【００２０】本発明はまた、１つの局面で、ＨＳＶ感染
の治療に用いられる、ＨＳＶ−２ＶＰ１６のエピトープ
を含み、かつＨＳＶに対して防御を与える免疫原性ポリ
ペプチドを生産する方法に関し、この方法は、(a)ＨＳ
Ｖ−２ＶＰ１６の免疫原性エピトープを含む、ＨＳＶに
対して防御を与える免疫原性ポリペプチドをコードする
ＤＮＡのオープンリーディングフレーム(ＯＲＦ)を含む
組換え発現ベクターであって、このＯＲＦが所望の宿主
と適合する制御配列に作動可能に連結されており、この
ＯＲＦがＨＳＶ−２ＶＰ１６、切型のＨＳＶ−２ＶＰ１
６、およびその変異体から選択される組換え発現ベクタ
ーにより形質転換された宿主細胞を提供する工程；(b)
上記ポリペプチドを発現させる条件下で、上記宿主細胞
をインキュベートする工程；および(c)上記宿主細胞か
ら発現したポリペプチドを単離する工程を包含する。
【００２１】本発明はまた、１つの局面で、上記の方法
により生産される、ＨＳＶ感染の治療に用いられる、Ｈ
ＳＶ−２ＶＰ１６のエピトープを含み、かつＨＳＶに対
して防御を与える免疫原性ポリペプチドに関する。
【００２２】本発明は、ＨＳＶのテグメントポリペプチ
ドであるＶＰ１６が免疫原性であり、ＨＳＶの感染によ
って起こる疾患を改善させた発見に基づく。したがっ
て、本発明には、ＨＳＶ感染症の治療に有用なＨＳＶＶ
Ｐ１６の免疫原性エピトープを含有する組成物、これら
の組成物に用いるポリペプチド、これらの組成物を用い
るＨＳＶ感染の治療法、ならびにこれらの組成物および
これらの組成物に用いる免疫原性ポリペプチドの調製方
法が含まれ、さらにこれらのポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチド配列を含むベクターおよび該ベクター
で形質転換された細胞も含まれる。
【００２３】したがって、本発明の１つの局面は、ＨＳ
ＶＶＰ１６の免疫原性エピトープを含有する単離された
免疫原性ポリペプチドを含み、該ポリペプチドが製薬的
に受容可能な賦形剤中に薬学的に有効な用量で存在して
いる、個体の単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を治
療するために用いる組成物である。
【００２４】本発明の他の局面は、ウイルスが、ＨＳＶ
ＶＰ１６、切型のＨＳＶＶＰ１６およびその変異体から
選択される免疫原性ポリペプチドをコードする配列を含
有し、該免疫原性ポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドが制御配列に作動可能に連結されている組換えワ
クシニアウイルスを含む組成物である。
【００２５】本発明のさらに他の局面は、（ａ）ＨＳＶ
ＶＰ１６の免疫原性エピトープを含む免疫原性ポリペプ
チドを提供し；（ｂ）そのポリペプチドを製薬的に受容
可能な賦形剤で製剤する；ことからなるＨＳＶ感染の治
療に用いる組成物の調製方法である。本発明の他の局面
は上記の方法により調製される組成物である。
【００２６】本発明のさらに他の局面は、上記組成物を
個体に投与することからなる、ＨＳＶ感染に対して個体
を治療する方法である。
【００２７】本発明の別の局面は、ＨＳＶ−２ＶＰ１６
の免疫原性エピトープを含むポリペプチドをコードする
組換えポリヌクレオチドである。
【００２８】本発明のさらに他の局面は、上記のポリヌ
クレオチドを含有する組換えベクターである。
【００２９】本発明のさらに他の局面は、ＨＳＶ−２Ｖ
Ｐ１６の免疫原性エピトープを含むポリペプチドをコー
ドするＤＮＡのオープンリーディングフレーム（ＯＲ
Ｆ）を含み、そのＯＲＦが所望の宿主と適合性の制御配
列と作動可能に連結されている組換え発現系である。
【００３０】本発明の他の局面は、ＨＳＶ−２ＶＰ１６
の免疫原性エピトープを含むポリペプチドをコードする
ＤＮＡのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含
む組換え発現ベクターであって、このＯＲＦが所望の宿
主と適合する制御配列に作動可能に連結されている組換
え発現ベクターにより形質転換された宿主細胞である。
【００３１】本発明のさらに他の局面は、（ａ）上記宿
主細胞を提供し；（ｂ）該宿主細胞を、ポリペプチドを
発現できる条件下でインキュベートし；および（ｃ）発
現されたポリペプチドを宿主細胞から単離する；ことか
らなる、ＨＳＶ感染の治療に用いる免疫原性ポリペプチ
ドの調製方法である。
【００３２】本発明のさらに他の局面は、上記の方法で
調製される、ＨＳＶ感染の治療に用いる免疫原性ポリペ
プチドである。
【００３３】
【発明の実施の形態】下記の用語が本願で用いられる。
【００３４】「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸
のポリマーを意味し、特定の長さの生成物を意味しな
い。したがって、ペプチド、オリゴペプチドおよびタン
パク質はポリペプチドの定義に含まれる。またこの用語
は、ポリペプチドの発現後の修飾物、例えばグリコシル
化物、アセチル化物、リン酸化物などを意味せず、すな
わち除外する。この定義に含まれるものとして、例えば
１つ以上のアミノ酸類似体（例えば非天然のアミノ酸な
どを含む）を含有するポリペプチド、置換された連鎖を
有するポリペプチド、ならびに当該技術分野で知られて
いる天然および非天然の他の修飾物がある。
【００３５】「単離されたポリペプチド」という用語
は、ＨＳＶウイルスのその他の成分、特にポリヌクレオ
チドを実質的に含有していないポリペプチドを意味す
る。組成物中のポリペプチドの重量がそのポリペプチド
および混合されている他の成分の重量の少なくとも７０
％、好ましくは少なくとも約８０％、さらに好ましくは
約９０％および最も好ましくは９５％以上である場合、
そのポリペプチドの組成物は他の成分を「実質的に含有
していない」。例えば１００μｇ／ｍｌのＶＰ１６とわ
ずか３μｇ／母液のＨＳＶ成分（例えばＤＮＡ、脂質な
ど）を含有する組成物は、「ＨＳＶウイルスのその他の
成分」を実質的に含有していないので、この定義の適用
範囲内にある単離されたポリペプチドの組成物である。
同様に、本発明のいくつかの組成物は、単離されたＶＰ
１６ポリペプチドを、１つ以上の単離されたＨＳＶ糖タ
ンパク質、例えばｇＢ、ｇＣ、ｇＤなどと組合わせて含
有している。
【００３６】「組換えポリヌクレオチド」は、ゲノム
の、ｃＤＮＡの半合成の、もしくは合成の起源のポリヌ
クレオチドを意味し、その起源または操作によって、
（１）それが天然では会合するポリペプチドのすべても
しくは一部と会合しない、（２）天然では連結するのと
異なるポリヌクレオチドと連結する、または（３）天然
には生成しない、ポリペプチドである。
【００３７】「ポリヌクレオチド」は、任意の長さのヌ
クレオチドのポリマー形態であり、リボヌクレオチドま
たはデオキシリボヌクレオチドのいずれかである。この
用語は、その分子の一次構造のみを意味する。したがっ
てこの用語には、二本鎖および一本鎖のＤＮＡならびに
ＲＮＡが含まれる。またこの用語には、公知の種類の修
飾物：例えば当該技術分野で公知の標識、メチル化物、
「ｃａｐｓ」、１つ以上の天然ヌクレオチドの類似体に
よる置換物、介在ヌクレオチド修飾物、例えば電荷のな
い連鎖（例えばチオリン酸、ジチオリン酸などの連鎖）
を有するもの、例えばタンパク質（例えばヌクレアー
ゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リシン
などを含む）のようなペンダント部分を有するもの、挿
入物（例えばアクリジン、プソラレンなど）を有するも
の、キレート化剤（例えば金属、放射性金属など）を含
有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾連鎖
（例えばαアノマー核酸など）を有するもの；ならびに
未修飾形のポリヌクレオチドが含まれる。
【００３８】「組換え宿主細胞」、「宿主細胞」、「細
胞」、「細胞系」、「細胞培養物」などのような単細胞
生物として培養される微生物もしくは高等真核細胞系を
示す用語は、組換えベクターなどの運搬ポリヌクレオチ
ド用の受容生物として使用し得るか、または使用されて
いる細胞を意味し、トランスフェクトされた元の細胞の
子孫が含まれる。単一の親細胞の子孫が、その形態また
はゲノム相補体もしくは全ＤＮＡ相補体において、天然
の、偶発的な、または意図的な変異のために、元の親と
必ずしも完全に同一でなくてもよい。
【００３９】「レプリコン」は遺伝子のエレメント、例
えばプラスミド、染色体、ウイルス、コスミドなどであ
り、ポリヌクレオチドの複製の自律単位として細胞内で
挙動する。すなわちそれ自体の制御下で複製することが
できる。
【００４０】「ベクター」は、さらにオープンリーディ
ングフレームの複製および／または発現を行う配列を有
するレプリコンである。
【００４１】「制御配列」は、連結されているコーディ
ング配列の発現を行うのに必要なポリヌクレオチド配列
を意味する。このような制御配列の性質は宿主生物によ
って異なる。すなわち原核生物では、そのような制御配
列は一般にプロモーター、リボソーム結合部位およびタ
ーミネーターを含んでおり、真核生物では一般に、その
ような制御配列はプロモーター、ターミネーター、およ
びいくつかの例ではエンハンサーを含んでいる。「制御
配列」という用語は、最小限、発現のために存在するこ
とが必要なすべての要素を含み、および存在することが
有利な追加の要素、例えば分泌を支配するリーダー配列
も含み得ることを意味する。
【００４２】「プロモーター」は、隣接する構造遺伝子
に対する正常転写開始部位でｍＲＮＡ産生が始まる様式
で、ＲＮＡポリメラーゼをＤＮＡ鋳型に結合させるコン
センサス配列で構成されているヌクレオチド配列であ
る。
【００４３】「作動可能に連結された」という用語は、
このように記載された要素を、意図する形態に機能でき
る関係に並列させることである。コーディング配列に
「作動可能に連結された」制御配列は、そのような並列
がなされるために、コーディング配列の発現が制御配列
と適合性の条件下で達成される方式で連結されている。
【００４４】「オープンリーディングフレーム（ＯＲ
Ｆ）」はポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配
列の領域である。この領域はコーディング配列の一部、
または全コーディング配列を表し得る。
【００４５】「コーディング配列」は、適切な調節配列
の制御下におかれた場合にｍＲＮＡに転写される、およ
び／またはポリペプチドに翻訳されるポリヌクレオチド
配列である。コーディング配列の境界は、５’未満にお
ける翻訳開始コドンおよび３’末端における翻訳停止コ
ドンによって決定される。コーディング配列にはｍＲＮ
Ａ、ＤＮＡ（ｃＤＮＡを含む）、および組換えポリヌク
レオチド配列が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】「エピトープ」という用語は、本願で用い
られる場合、ポリペプチドの抗原決定基を意味する。エ
ピトープは、そのエピトープ固有の立体コンホメーショ
ンに３個のアミノ酸を含有し得る。一般にエピトープは
このようなアミノ酸の少なくとも５個で構成され、通常
はこのようなアミノ酸８〜１０個で構成される。このよ
うなアミノ酸の立体コンホメーションを決定する方法
は、当該技術分野で公知であり、例えばＸ線結晶学法お
よび二次元核磁気共鳴法がある。
【００４７】「免疫原性エピトープ」は、細胞性免疫お
よび／または液性免疫応答を誘発するポリペプチド中の
エピトープであり、その応答はこのポリペプチド単独で
も誘発し得、または、アジュバントが存在するか存在し
ないかにかかわらずキャリアーを必要とし得る。
【００４８】エピトープが、指定のポリペプチド中のエ
ピトープに免疫学的に結合する複数の抗体と交差反応を
行わせるアミノ酸配列およびコンホメーションを有して
いるとき、そのエピトープは、指定のポリペプチド中の
他のエピトープの「免疫学的に当量」のエピトープであ
る。
【００４９】指定のポリペプチドのエピトープという用
語は、本願で用いる場合、指定のポリペプチド中のエピ
トープおよびその免疫学的当量物と同じアミノ酸配列を
有するエピトープを意味する。
【００５０】「ＨＳＶＶＰ１６の免疫原性エピトープを
含む」ポリペプチドは、少なくとも免疫原性エピトープ
を形成する数のＨＳＶＶＰ１６のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドであり、通常少なくとも約５個のアミノ酸
を含有し、より通常的には少なくとも約８個のアミノ酸
を含有し、さらに一層通常的には約１０個以上のアミノ
酸を含有し、最大の大きさは決定的ではない。ＨＳＶＶ
Ｐ１６由来のアミノ酸配列は、そのアミノ末端および／
またはカルボキシ末端に、他のポリペプチド（例えばキ
ャリアータンパク質）を共有結合させるか、または融合
ポリヌクレオチドを発現させて融合するタンパク質を形
成させることによって連結し得る。所望により、エピト
ープの多数の反復物を挿入もしくは結合するか、および
／または各種のエピトープを組み込み得る。キャリアー
タンパク質はどのようなソースからでも誘導することが
できるが、一般に、ＢＳＡ、ＫＬＨなどのような比較的
大きな免疫原性タンパク質である。所望により、キャリ
アーとして実質的に全長のＶＰ１６タンパク質を用い
て、免疫原性エピトープの数を増やすことができる。あ
るいは、ＨＳＶＶＰ１６由来のアミノ酸配列は、アミノ
末端および／またはカルボキシ末端で、非ＨＳＶＶＰ１
６アミノ酸配列に連結し得、その場合このポリペプチド
は融合ポリペプチドである。類似のタイプのポリペプチ
ドが、他の指定のウイルスタンパク質由来のエピトープ
を使って構築し得る。
【００５１】指定のポリペプチドの「変異体」とは、そ
の指定されたポリペプチドのアミノ酸配列が、その配列
の１つ以上のアミノ酸の欠失もしくは置換によって、ま
たはその配列に１つ以上のアミノ酸を付加することによ
って改変されたポリペプチドを意味する。変異体を生成
させる（例えば組換え法によって）または作製する（例
えば部位突異的変異誘発法によって）方法は当該技術分
野で公知である。
【００５２】「形質転換」は、挿入に使用した方法、例
えば直接取込み、形質導入（ウイルス感染、ｆ交配もし
くはエレクトロポレーションを含む）に関わらず、宿主
細胞に外来性ポリヌクレオチドを挿入することを意味す
る。その外来性ポリヌクレオチドは、非組込みベクタ
ー、例えばプラスミドもしくはウイルスゲノムとして保
持させるか、またあるいは、宿主ゲノム中に組込んでも
よい。
【００５３】「個体」は、脊推動物、特に哺乳類の種の
メンバーを意味し、家畜、競技用動物、およびヒトを含
む霊長類が含まれるがこれらに限定されない。
【００５４】「治療」という用語は、本願で用いる場
合、（ｉ）従来のワクチンと同様に感染もしくは再感染
の防止、（ｉｉ）症状の軽減もしくは除去、および（ｉ
ｉｉ）ウイルスの実質的な除去のいずれかを意味する。
治療は、予防的に（感染前に）または治療的に（感染中
もしくは感染後に）行われ得る。
【００５５】「有効量」という用語は、投与された被験
体に免疫応答を誘発するのに充分なエピトープ含有ポリ
ペプチドの量を意味する。その免疫応答は、制限なし
に、細胞性免疫および／または液性免疫の誘発を含み得
る。有効量は、好ましくは上記のような治療を行うのに
充分な量である。正確な必要量は、被験体の種、年齢お
よび一般症状、治療される症状の重症度、選択される特
定のポリペプチドおよびその投与形態などによって、被
験体ごとに変わる。したがって正確な有効量を指定する
ことは不可能である。しかし適切な有効量は、単なるル
ーチンの試験法を用いて当業者により決定し得る。
【００５６】「ＨＳＶ糖タンパク質」という用語は、Ｈ
ＳＶ−１、ＨＳＶ−２および近縁のヘルペスウイルスの
膜領域に見出されるあらゆる糖タンパク質を意味する。
本発明において好ましいＨＳＶ糖タンパク質はｇＢ、ｇ
Ｃ、ｇＤおよびｇＥである。この定義には、天然のウイ
ルス（例えば感染した血清または細胞培養物由来のウイ
ルス）から抽出される糖クンパク質、および組換え法に
よって生成される糖タンパク質が含まれる。このような
糖タンパク質は、化学的もしくは酵素的な手段（例えば
タンパク質分解による開裂、脱グリコシル化など）、ま
たは突然変異、または組換えＤＮＡ法（例えばＨＳＶ糖
タンパク質遺伝子を他の遺伝子と融合させて融合タンパ
ク質を生成させるか、もしくはＤＮＡ配列の一部を欠失
もしくは置換することによる方法）によって修飾し得
る。
【００５７】本発明の実施には、特別に他に指定しない
ない限り、当該技術分野の範囲に含まれる分子生物学、
微生物学、生化学および免疫学の通常の方法を利用す
る。このような方法は文献に充分説明されている〔例え
ば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＭａｎｉａｔｉｓおよびＦｉｔ
ｓｃｈ、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ、ＡＬＡＢ
ＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ、第２版、１９８９年；Ｄ
ＮＡＣＬＯＮＩＮＧ．Ｉ巻およびII巻（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏ
ｖｅｒ編集、１９８５年）；ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴ
ＩＤＥＳＹＮＴＨＥＳＩＳ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編集、１
９８４年）；ＮＵＣＬＥＩＣＡＣＩＤＨＹＢＲＩＤＩＺ
ＡＴＩＯＮ（Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇ
ｇｉｎｓ編集、１９８４年）ＡＮＩＭＡＬＣＥＬＬＣＵ
ＬＴＵＲＥ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編集、１９８６
年）；ＩＭＭＯＢＩＬＩＺＥＤＣＥＬＬＳＡＮＤＥＮＺ
ＹＭＥＳ（ＩＲＬＰｒｅｓｓ、１９８６年）；Ｂ．Ｐｅ
ｒｂａｌ、ＡＰＲＡＣＴＩＣＡＬＧＵＩＤＥＴＯＭＯＬ
ＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ、１９８４年；シリーズの
ＭＥＴＨＯＤＳＩＮＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ａｃａｄｅ
ｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）特に１５４巻と１５５巻
（それぞれＷｕとＧｒｏｓｓｍａｎ、およびＷｕが編
集）；ＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＥＲＶＥＣＴＯＲＳＦＯＲ
ＭＡＭＭＡＬＩＡＮＣＥＬＬＳ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ
およびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編集、１９８７年、Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｉ
ＭＭＵＮＯＣＨＥＭＩＣＡＬＭＥＴＨＯＤＳＩＮＣＥＬ
ＬＡＮＤＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹ（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ），Ｓｃｏｐｅｓ、
１９８７年；ＰＲＯＴＥＩＮＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯ
Ｎ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳＡＮＤＰＲＡＣＴＩＣＥ、第
２版（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．）；
およびＨＡＮＤＢＯＯＫＯＦＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ
ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、Ｉ−ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ
およびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編集、１９８６年）
参照〕。上記および下記で述べられている全ての特許、
特許出願および刊行物は、本明細書中で参考として援用
される。本発明の組成物は、ＨＳＶに感染した個体を治
療するために用いられるもので、ＨＳＶＶＰ１６の免疫
原性エピトープを１つ以上含有するポリペプチドを含有
している。ＨＳＶＶＰ１６が免疫原性かつ防御性である
という驚くべき結果は、後記の実施例４および５に明示
されている。したがって、ＨＳＶＨＶ１６の少なくとも
１つの免疫原性エピトープを含むポリペプチドを含有す
る組成物は、ＨＳＶ感染症に付随する疾患の症状を予防
もしくは軽減するための個体の治療に使用し得る。さら
に試験結果は、ＨＳＶＶＰ１６を含むワクチンにＨＳＶ
糖タンパク質を添加すると、免疫原性作用と防御作用の
両方を増大させることも示している。それ故に、好まし
い態様では、ワクチンは、さらにＨＳＶ糖タンパク質の
少なくとも１つの免疫原性エピトープを含有している。
その糖タンパク質のエピトープはＶＰ１６のエピトープ
と同じポリペプチド上に存在し得、または別のポリペプ
チド上に存在し得る。より好ましい態様では、この糖タ
ンパク質エピトープはＨＳＶｇＢもしくはＨＳＶｇＤ由
来のものである。
【００５８】ワクチンを調製するために、１つ以上のＨ
ＳＶＶＰ１６の免疫原性エピトープを含むポリペプチド
が提供される。ＨＳＶ糖タンパク質の免疫原性エピトー
プもワクチンに含ませたい場合は、ＨＳＶＶＰ１６エピ
トープを含むポリペプチド中に含ませてもよく、あるい
は別のポリペプチド中に含ませてもよい。
【００５９】提供されるポリペプチドは、全長のＨＳＶ
ＶＰ１６および／またはＨＳＶ糖タンパク質であり得
る。提供されるペプチドが全長の場合、ウイルスから単
離することができる。単離とその後の精製は当該技術分
野で公知の方法で達成し得る（例えばＭｅｔｈｏｄｓｉ
ｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、ａｎｄＳｃｏｐｅｓ、ＰＲＯ
ＴＥＩＮＰＵＲＦＩＣＡＴ１ＯＮ参照。この文献は、タ
ンパク質の各種の精製法について考察している）。
【００６０】あるいは、全長のポリペプチドは、組換え
ＤＮＡ法ならびに、糖タンパク質およびＨＳＶ−１ＶＰ
１６をコードする公知の配列または本願で提供されるＨ
ＳＶ−２ＶＰ１６の配列を用いて合成し得る。その全長
ポリペプチドは、指定されたポリペプチドの免疫原性が
明白である限り、アミノ酸配列に１つ以上の置換基を有
し得る。
【００６１】本発明はまた、切型のＨＳＶＶＰ１６およ
び／または糖タンパク質のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドを用いる。切型のＨＳＶＶＰ１６の配列または糖
タンパク質の配列を含有するポリペプチドの大きさは大
幅に変えることができ、最小の大きさは所望の免疫性原
性エピトープを提供するのに充分な大きさの配列であ
り、一方最大の大きさは決定的ではない。便宜上、最大
の大きさは、通常もし存在する場合、実質的に異種配列
の所望のエピトープおよび機能を提供するのに必要な程
度までの大きさである。一般に上記の切型のＨＳＶのア
ミノ酸配列は、長さが約５〜約４００個のアミノ酸の範
囲内である。しかしさらに一般には、免疫原性エピトー
プを含有するウイルス配列は、長さが最大で約１００個
のアミノ酸であり、好ましくは最大約５０個のアミノ酸
である。
【００６２】切型の、ＨＳＶＶＰ１６もしくはＨＳＶ糖
タンパク質のアミノ酸配列で免疫原性のものは、いくつ
かの方法で同定することができる。例えばウイルスタン
パク質の全配列は、タンパク質の全配列にわたる一連の
短いペプチドを調製することによってスクリーニングす
ることができる。例えば１００量体のポリペプチドから
出発することによって、所望の反応性を示すエピトープ
が存在するか否かについて各ポリペプチドを試験し、次
いで固定された１００量体由来の次第に小さくて重複し
ているフラグメントを試験して対象のエピトープの地図
を描くのが通常の方法である。このようなペプチドをイ
ムノアッセイでスクリーニングすることは、当該技術分
野の範囲内にあり、免疫原性についての適切なイムノア
ッセイは本願の実施例に記載してある。タンパク質の配
列をコンピューターで分析して潜在的なエピトープを同
定する方法もまた公知である。例えば、ＨＳＶ−２ＶＰ
１６の推定エピトープは、基準として、ＨＳＶ−２ＶＰ
１６ポリペプチド領域の、表面プロバビリティー、抗原
指数、親水性、電荷、または明白な構造の欠如を用い
て、図２に示す推定アミノ酸配列から決定した。これら
の推定エピトープは、ほぼアミノ酸（ａａ）１５〜ほぼ
ａａ３４；ほぼａａ１９３〜ほぼａａ２２０；ほぼａａ
３２０〜ほぼａａ３３０；ほぼａａ３６０〜ほぼａａ３
７１；ほぼａａ３７８〜ほぼａａ３９０；ほぼａａ４０
０〜ほぼａａ４１０；およびほぼａａ４８０〜約ａａ４
９０に位置している。推定エピトープを同定した後、同
定された領域を含むオリゴヌクレオチドをスクリーニン
グ用に調製できる。
【００６３】所望により、単一のポリペプチドは、免疫
原性エピトープを含有する切型のＨＳＶＶＰ１６配列を
少なくとも１つ、および免疫原性エピトープを含有する
切型のＨＳＶ糖タンパク質の配列を少なくとも１つ有し
得る。あるいは、切型のＨＳＶＶＰ１６とＨＳＶ糖タン
パク質の配列は別個のポリペプチド上にあり得る。切型
の配列は、被験体の未変性ウイルスタンパク質を種々の
公知の方法で処理して調製し得るが、所望の免疫原性エ
ピトープを含む合成ポリペプチドまたは組換えポリペプ
チドを調製することが一般に好ましい。
【００６４】切型のＨＳＶＶＰ１６配列を含む組換えポ
リペプチドはすべて、ＶＰ１６の配列（連続的もしくは
非連続的な１つ以上のエピトープ）または融合タンパク
質中の単一もしくは複数のＶＰ１６配列で調製し得る。
同様に、切型のＨＳＶ糖タンパク質の配列を含むポリペ
プチドはすべて、糖タンパク質の配列（連続的もしくは
非連続的な１つ以上のエピトープ）、または融合タンパ
ク質中の単一もしくは複数の糖タンパク質の配列で調製
し得る。
【００６５】融合タンパク質中では、有用な異種配列
は、組換え宿主からの分泌を行い、ＶＰ１６もしくは糖
タンパク質のエピトープ（単数または複数）の免疫反応
性を増大し、またはポリペプチドを支持体もしくはワク
チンキャリアーへ容易に結合させる配列を含んでいる
（例えばヨーロッパ特許出願公開第１１６，２０１号；
米国特許第４，７２２，８０４号；ヨーロッパ特許出願
公開第２５９，１４９号；米国特許第４，６２９，７８
３号を参照。これら文献の開示事項は本明細書中に参考
として援用される。）切型のＨＳＶＶＰ１６および／ま
たはＨＳＶ糖タンパク質の配列を含む全長のポリペプチ
ド、およびその変異体は、組換え法で調製することがで
きる。ＨＳＶ−１ＶＰ１６をコードすると推定されるＤ
ＮＡ配列（ＶｍＷ６５としても知られている）はＣａｍ
ｐｂｅｌｌら（１９８４年）の文献に開示されている。
その開示事項は本明細書中に参考として援用される。本
願の発明者らが発見し、実施例１に記載している、ＨＣ
Ｖ−２ＶＰ１６をコードするＤＮＡの配列は下記の図３
に示す。図３中、矢印で示すＭｅｔは推定の開始メチオ
ニンである。ＨＳＶ−２ＶＰ１６の配列を提供する方法
は、単に歴史的に重要なだけである。というのは、配列
データの情報は、図３およびＡＴＣＣ受託番号６８，３
７２の両方より入手可能だからである。なお、このＡＴ
ＣＣの情報は本明細書中に参考として援用される。ｇＢ
とｇＤを含むいくつかのＨＳＶ糖タンパク質をコードす
る配列は既知である。例えば、ＨＳＶ−１とＨＳＶ−２
のｇＢをコードする配列は米国特許第４，６４２，３３
３号に示されており、ＨＳＶｇＤをコードする配列はＷ
ａｔｓｏｎら（１９８２年）の文献に記載されている。
ｇＢおよびｇＤならびにそのフラグメントを発現する方
法は、ＷＯ８８／０２６３４に開示されている。これら
の配列は入手可能なため、ＨＳＶＶＰ１６ポリペプチド
およびＨＳＶ糖タンパク質の免疫原性領域をコードする
ポリヌクレオチドを構築し得る。
【００６６】１つ以上の免疫原性ＨＳＶＶＰ１６エピト
ープおよび／または１つ以上の免疫原性糖タンパク質エ
ピトープを含む所望のポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドは、化学的に合成もしくは単離し、および発
現ベクター中に挿入することができる。そのベクター
は、β−ガラクトシダーゼもしくはスーパーオキシドジ
スムターゼ（ＳＯＤ）のような融合配列の一部分を含有
し得、または含有し得ない。ＳＯＤの融合配列を含有す
るポリペプチドを産生するのに有用な方法とベクター
は、１９８６年１０月１日に公開されたヨーロッパ特許
出願公開第０１９６０５６号に記載されている。
【００６７】所望のポリペプチドをコードするＤＮＡ
は、融合形もしくは成熟形であっても、および分泌を可
能にするシグナル配列を含有するか、または含有しない
かに関わらず、好都合な宿主に適した発現ベクター中に
連結することができる。次いでその宿主はその発現ベク
ターで形質転換される。真核および原核の宿主系の両方
が、組換えポリペプチドの作製に現在使用されており、
より一般的な制御系および宿主細胞系のいくつかの要約
を下記で示す。その宿主細胞は、所望のポリペプチドを
発現させる条件下でインキュベートされる。次に、その
ポリペプチドは、溶解された細胞もしくは培養培地から
単離され、その目的とする用途に必要な程度まで精製さ
れる。
【００６８】ウイルスからゲノムを抽出し、ＤＮＡライ
ブラリーを作製およびプローブし、クローンの配列を決
定し、発現ベクターを構築し、細胞を形質転換し、培養
中に増殖する細胞についてラジオイムノアッセイおよび
ＥＬＩＳＡアッセイのようなイムノアッセイを実施する
などに用いる一般的な方法は当該技術分野で公知であ
り、これらの方法を記載してある実験マニュアルは入手
可能である。しかし、一般的な案内として、そのような
方法およびそれらの方法を実施するのに有用な材料を得
るため現在利用できるいくつかのソースについて以下に
説明する。
【００６９】合成のオリゴヌクレオチドは、Ｗａｒｎｅ
ｒ（１９８４年）の文献に記載されている自動オリゴヌ
クレオチド合成機を用いて調製し得る。所望により、反
応のための標準条件を用いて、32Ｐ−ＡＴＰの存在下ポ
リヌクレオチドキナーゼで処理することにより、合スト
ランドは32Ｐで標識し得る。
【００７０】変異体を作製する、または所望の機能配列
（例えば制限酵素部位）を作製、もしくは除去するため
に、クローンから単離されたものを含むＤＮＡ配列は、
例えばＺｏｌｌｅｒ（１９８２年）の文献に記載されて
いるような部位特異的変異誘発法を含む公知の方法で修
飾し得る。簡単にいえば、修飾すべきＤＮＡを一本鎖配
列としてファージ中に包み込み、修飾すべきＤＮＡの一
部分に相補的な合成オリゴヌクレオチドをプライマーと
して、ＤＮＡポリメラーゼにより二本鎖ＤＮＡに変換
し、こうしてそれ自体の配列中に所望の修飾を含有させ
る。得られた二本鎖ＤＮＡにより、ファージを保持する
宿主細菌を形質転換させる。形質転換された細菌の培養
物は、ファージの各ストランドの複製物を含んでおり、
寒天中にプレートされてプラークを得る。理論的には、
新しいプラークの５０％が変異された配列を有するファ
ージを含有し、残りの５０％はもとの配列を有してい
る。そのプラークのレプリカを、正しいストランドとは
ハイブリダイズできるが未修飾の配列とはハイブリダイ
ズできない温度と条件下で、標識した合成プローブとハ
イブリダイズさせる。ハイブリダイゼーションによって
同定された配列を回収しクローニングする。
【００７１】一般に、ハイブリダイゼーション分析を行
う際に、プロープすべきＤＮＡは、ニトロセルロースフ
ィルター上に固定化し、変性し、次いで０〜５０％のホ
ルムアミド、０．７５ＭのＮａＣｌ，７５ｍＭのクエン
酸ナトリウム、各々０．０２％（Ｗｔ／ｖ）のウシ血清
アルブミンとポリビニルピロリドンとフィコール、５０
ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．５）、０．１％ＳＤ
Ｓ、および１００μｇ／ｍｌのキャリアーで変性された
ＤＮＡを含有するバッファーでプレハイブリダイズさせ
る。バッファー中のホルムアミドの百分率、ならびに上
記のハイブリダイゼーションとその後の工程および洗浄
の時間と温度条件は、必要な緊縮性によって決まる。低
い緊縮条件を要するオリゴマープローブは、一般に、ホ
ルムアミドの百分率が低く、低温でかつハイブリダイゼ
ーション時間が長い場合に用いられる。クローニングさ
れたＤＮＡ由来のプローブのような３０もしくは４０個
を越えるヌクレオチドを含有するプローブは、一般に、
例えば約４０〜４２℃のような高温と、例えば５０％の
ような高い百分率のホルムアミドを利用する。プレハイ
ブリダイゼーションの後、標識プローブを、前記バッフ
ァーに添加し、次いでフィルターを、ハイブリダイゼー
ション条件下で上記の混合物中でインキュベートする。
洗浄後、処理されたフィルターをオートラジオグラフィ
ーに付してハイブリダイズされたプローブの位置を知
り、もとの寒天プレート上の対応する位置のＤＮＡを所
望のＤＮＡの起源として用いる。
【００７２】ベクターの構築には当該技術分野で公知の
方法を用いる。部位特異的ＤＮＡ開裂は、適切な制限酵
素で処理することによって行われるが、その処理はこれ
らの市販されている酵素の製造者が一般に指定する条件
下で行われる。一般に、約１μｇのプラスミドもしくは
ＤＮＡ配列が、約２０μｌのバッファー中の１単位酵素
を用いて、１〜２時間３７℃でインキュベートすること
によって開裂される。制限酵素とともにインキュベート
した後、タンパク質を抽出（例えばフェノール／クロロ
ホルムを用いる）して除去し、ＤＮＡを回収する（例え
ばエタノールで沈澱させる）。開裂されたフラグメント
は、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｅｌｏｇｙ、６５
巻，４９９〜５６０頁，１９８０年に見られる一般的な
方法によって、例えばゲル電気泳動法または沈降法を用
いて分離し得る。
【００７３】付着末端を有する開裂フラグメントは、混
合物中に存在する適切なデオキシヌクレオチド三リン酸
（ｄＮＴＰ）の存在下、Ｅ．ｃｏｌｉのＤＮＡポリメラ
ーゼI（クレノウ）を用いて、平滑末端にし得る。一本
鎖ヌクレアーゼ（例えばＳ１ヌクレアーゼ）による処理
も一本鎖ＤＮＡ部分を加水分解するために使用し得る。
【００７４】連結反応は、Ｔ４ＤＮＡリガーゼとＡＴＰ
を用い、標準のバッファーと温度の条件を利用して実施
し得る。ベクターフラグメントを連結混合物の一部とし
て使用する場合、そのベクターフラグメントは、５’−
リン酸を除去してベクターが再連結するのを防止するた
めに、細菌アルカリ性ホスファターゼ（ＢＡＰ）または
仔ウシ腸アルカリ性ホスファターゼで処理される。ある
いは、連結を防止するために望ましくないフラグメント
の制御酵素による消化を利用し得る。
【００７５】連結混合物は、当該技術分野で知られてい
る適切なクローニング宿主、例えばＥ．ｃｏｌｉを形質
転換するのに用いられ、次いで成功した形質転換細胞
は、適切なマーカー、例えば抗生物耐性によって選択さ
れ、そして正しい構築についてスクリーニングされる。
【００７６】構築を確認するために、連結混合物によっ
て適切な宿主、例えばＥ．ｃｏｌｉのＨＢ１０１中に形
質転換され、次に成功した形質転換細胞が抗生物質耐性
などのマーカーにより選択される。その形質転換細胞由
来のプラスミドは通常、クロラムフェニコールによる増
幅（ＣｌｅＷｅｌｌの１９７２年の文献）の後、Ｃｌｅ
Ｗｅｌｌらの方法（１９６９年の文献）にしたがって調
製される。そのＤＮＡは通常、制限酵素分析法および／
または配列決定法によって、単離され分析される。配列
決定法は、Ｓａｎｇｅｒらのジデオキシ法（１９７７年
の文献）（さらにＭｅｓｓｉｎｇらの１９８１年の文献
に記載されている）、またはＭａｘａｍらの方法（Ｍａ
ｘａｍらの１９８０年の文献）による方法で行われ得
る。バンド圧縮の問題は、ＧＣが豊富な領域で時々観察
されるが、Ｂａｒｒらの１９８６年の文献に記載の方法
にしたがい、Ｔ−デアゾグアノシンを用いることにより
克服し得る。
【００７７】所望の配列を含有するベクターによる適切
な宿主の形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導
入するいずれかの公知の方法で行われ、例えばポリヌク
レオチドをウイルスに包み込み、次に宿主細胞を該ウイ
ルスで形質導入するか、または該ポリヌクレオチドを直
接取込むことによって行い得る。利用される形質転換法
は形質転換される宿主によって決まる。例えばＨＳＶ−
２ ＶＰ１６をコードするポリヌクレオチドの形質転換
媒体としてワクシニアウイルスを用いるインビボでの形
質転換法は、下記のいくつかの実施例に記述されてい
る。形質転換は、インビトロの系でも達成し得る。直接
取込みによる細菌の形質転換には、一般に塩化カルシウ
ムもしくは塩化ルビジウムによる処理が利用される（Ｃ
ｏｈｅｎ，１９７２年とＳａｍｂｒｏｏｋ、１９８９年
の文献）。直接取込みによる酵母の形質転換は、Ｈｉｎ
ｎｅｎらの１９７８年の文献の方法を用いて実施し得
る。直接取込みによる哺乳類の形質転換は、Ｇｒａｈａ
ｍおよびＶａｎｄｅｒＥｂのリン酸カルシウム沈澱法ま
たはその種々の公知の改変法を用いて実施し得る。組換
えポリヌクレオチドを細胞中、特に哺乳類の細胞中に導
入する他の方法は、当該技術分野で公知であり、デキス
トランによるトランスフェクション法、リン酸カルシウ
ムによるトランスフェクション法、ポリブレンによるト
ランスフェクション法、プロトプラスト融合法、エレク
トロポレーション法、ポリヌクレオチドのリポソームに
よる被包法、およびポリヌクレオチドの核内への直接マ
イクロインジェクション法がある。
【００７８】所望のコーディング配列の発現を得るため
に、宿主細胞はポリヌクレオチド（発現ベクターで有り
得る）で形質転換されるが、そのポリヌクレオチドは所
望のコーディング配列に作動可能に連結された制御配列
を含有している。その制御配列は指定の宿主と適合性で
ある。原核宿主の中でＥ．ｃｏｌｉが最も多く用いられ
る。原核宿主のための発現制御配列はプロモーターを含
有し、任意にオペレーター部分およびリボソーム結合部
位を含有している。原核宿主と適合性の転移ベクター
は、通常、例えばアンピシリンおよびテトラサイクリン
に対する耐性を与えるオペロンを含有するプラスミドで
あるｐＢＲ３２２、および抗生物耐性のマーカーを与え
る配列を含有する種々のｐＵＣベクターから誘導し得
る。プロモーター配列は天然のもの、例えばβ−ラクタ
マーゼ（ペニシリナーゼ）（Ｗｅｉｓｓｍａｎの１９８
１年の文献）、ラクトース（ｌａｃ）（Ｃｈａｎｇらの
１９７７年の文献）およびトリプトファン（ｔｒｐ）
（Ｇｏｅｄｄｅｌらの１９８０年の文献）、ならびにλ
由来ＰLプロモーター系およびＮ遺伝子リボソーム結合
部位（Ｓｈｉｍａｔａｋｅらの１９８１年の文献）であ
り得る。さらに、天然には産しない合成のプロモーター
も細菌のプロモーターとして機能する。例えば、１つの
プロモーターの転写活性化配列は、他のプロモーターの
オペロン配列と結合させて合成のハイブリッドプロモー
ターを形成させ得る〔例えばｔａｃプロモーターは、ｔ
ｒｐプロモーターおよびｌａｃプロモーターの配列に由
来する（ＤｅＢｏｅｒらの１９８３年の文献）〕。上記
の系は特にＥ．ｃｏｌｉと適合性であるが、所望によ
り、バシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）またはシュードモ
ナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の菌株のような他の
原核宿主が、対応する制御配列とともに使用し得る。
【００７９】真核宿主には培養系中の酵母と哺乳類の細
胞が含まれ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃａｒｌｓ
ｂｅｒｇｅｎｓｉｓが最も普通に用いられる酵母の宿主
であり、便利な真菌の宿主である。酵母と適合性のベク
ターは、栄養素要求性突然変異体に原栄養性を与える
か、または野生型菌株に重金属に対する抵抗性を与える
ことによって、成功した形質転換細胞を選択できるマー
カーを有している。酵母と適合性のベクターは、２ミク
ロンの複製起点（Ｂｒｏａｃｈらの１９８３年の文
献）、ＣＥＮ３およびＡＲＳ１の組合せ、あるいは適切
なフラグメントを宿主細胞ゲノムに組込む配列のような
複製を保証する他の手段を利用し得る。酵母ベクターの
制御配列は、当該技術分野で公知であり、解糖酵素（Ｈ
ｅｓｓらの１９６８年の文献）、例えばアルコールデヒ
ドロゲナーゼ（ＡＤＨ）（ヨーロッパ特許出願公開第２
８４０４４号）、エノラーゼ、グルコキナーゼ、グルコ
ース６−リン酸イソメラーゼ、グリセルアルデヒド−３
−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰもしくはＧＡＰＤ
Ｈ）、ヘキソキナーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、３−
グリセロリン酸ムターゼ、およびピルビン酸キナーゼ
（ＰｙＫ）（ヨーロッパ特許出願公開第３２９２０３
号）を合成するためのプロモーターが含まれる。酵母Ｐ
Ｈ０５遺伝子は、酵性ホスファターゼをコードしてお
り、有用なプロモーター配列をも与える（Ｍｉｙａｎｏ
ｈａｒａらの１９８３年の文献）。さらに、天然に産し
ない合成プロモーターも酵母プロモーターとして機能す
る。例えば、１つの酵母プロモーターの上流の活性化配
列（ＵＡＳ）は、他の酵母プロモーターの転写活性化領
域と結合させて合成のハイブリッドプロモーターを作製
し得る。このようなハイブリッドプロモーターの例に
は、ＧＡＰ転写活性化領域に連結したＡＤＨ調節配列
（米国特許第４，８７６，１９７号および同第４，８８
０，７３４号）がある。ハイブリッドプロモーターの他
の例としては、ＧＡＰまたはＰｙＫのような糖解酵素遺
伝子の転写活性化領域と組合わせた、ＡＤＨ２、ＧＡＬ
４、ＧＡＬ１０もしくはＰＨ０５の遺伝子の調節配列で
構成されたプロモーター（ヨーロッパ特許出願公開第１
６４５５６号）がある。さらに酵母プロモーターは、転
写を適切に開始させるために酵母ＲＮＡポリメラーゼを
結合させる性能を有する、非酵母起源の天然産プロモー
ターを含有し得る。
【００８０】酵母発現ベクターに含有させる他の制御要
素は、ターミネーター（例えばＧＡＰＤＨ由来のもの、
およびエノラーゼ遺伝子由来のもの（Ｈｏｌｌａｎｄら
の１９８１年の文献））およびリーダー配列である。リ
ーダー配列のフラグメントは一般に、細胞からタンパク
質を分泌させる疎水性アミノ酸を含むシグナルペプチド
をコードしている。適切なシグナル配列をコードするＤ
ＮＡは、酵母インベルターゼ遺伝子（ヨーロッパ特許出
願公開第１２，８７３号）およびα−因子遺伝子（米国
特許第４，５８８，６８４号）のような分泌される酵母
タンパク質の遺伝子から誘導し得る。インターフェロン
リーダーのような非酵母起源のリーダーも、酵母に分泌
を起こさせる（ヨーロッパ特許出願公開第６００５７
号）。好ましい種類の分泌リーダーは、「プレ」シグナ
ル配列および「プロ」領域の両方を含有する酵母α因子
遺伝子のフラグメントを利用するリーダーである。利用
することができるタイプのα因子のフラグメントには、
全長のプレ−プロα因子リーダーおよび切型のα因子リ
ーダーが含まれる。（米国特許第４，５４６，０８３号
および同第４，８７０，００８号；ヨーロッパ特許出願
公開第３２４２７４号）。分泌を行うα因子リーダーフ
ラグメントを用いる別のリーダーには、第１の酵母のプ
レ配列と、第２の酵母のα因子からのプロ領域とで作製
されるハイブリッドα因子リーダーがある（例えばＰ．
Ｃ．Ｔ．ＷＯ８９／０２４６３参照）。
【００８１】発現ベクターである、染色体外レプリコン
もしくは組込みベクターが、多くの酵母を形質転換させ
るために開発されている。例えば、発現ベクターとし
て、次の各種のもの：Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ
（Ｋｕｒｔｚら１９８６年の文献）；Ｃａｎｄｉｄａｍ
ａｌｔｏｓａ（Ｋｕｎｚｅら１９８５年の文献）；Ｈａ
ｎｚｅｎｕｌａ pｏｌｙｍｏｒｐｈａ（Ｇｌｅｅｓｏｎ
ら１９８６年の文献）；Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｆ
ｒａｇｉｌｉｓ（Ｄａｓら１９８４年の文献）；Ｋｌｕ
ｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ（ＤｅＬｏｕｖｅｎ
ｃｏｕｒｔら１９８３年の文献）；Ｐｉｃｈｉａｑｕｉ
ｌｌｅｒｉｍｏｎｄｉｉ（Ｋｕｎｚｅら１９８５年の文
献）；Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ（Ｃｒｅｇｇら１
９８５年の文献、米国特許第４，８３７，１４８号およ
び同第４，９２９，５５５号）；Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ（ＢｅａｃｈとＮｕｒｓ
ｅの１９８１年の文献）；およびＹａｒｒｏｗｉａｌｉ
ｐｏｌｙｔｉｃａ（Ｄａｖｉｄｏｗら１９８５年の文
献）が開発されている。
【００８２】発現用の宿主として利用可能な哺乳類の細
胞系は当該技術分野で公知であり、アメリカンタイプカ
ルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な多く
の永代化細胞系があり、例えばＨｅＬａ細胞、チャイニ
ーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、仔ハムスター腎臓
（ＢＨＫ）細胞、ＣＯＳサル細胞などの多数の細胞系が
含まれる。哺乳類細胞に対し適切なプロモーターも当該
技術分野で公知であり、シミアンウイルス４０（ＳＶ４
０）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、アデノウイルス
（ＡＤＶ）、およびウシ乳頭腫ウイルス（ＢＰＶ）由来
のプロモーターのようなウイルスプロモーターが含まれ
る（適切なプロモーターの例としてＳａｍｂｒｏｏｋの
１９８９年の文献参照）。また哺乳類細胞は、ターミネ
ーター配列とポリＡ付加配列も必要であり、発現を増大
させるエンハンサー配列も含まれ、遺伝子の増幅を起こ
す配列も必要とされ得る。これらの配列は当該技術分野
で公知である。
【００８３】哺乳類細胞中での複製に適したベクターは
当該技術分野で公知であり、ウイルスのレプリコン、ま
たは所望のポリペプチドをコードする適切な配列を宿主
ゲノムに組込むことを保証する配列が含まれ得る。
【００８４】外来性ＤＮＡを発現させるのに使用されか
つワクチン調製に利用し得るベクターはワクシニアウイ
ルスである。この場合、異種ＤＮＡがワクシニアのゲノ
ムに挿入される。外来性ＤＮＡをワクシニアウイルスの
ゲノムに挿入する技術は当該技術分野で公知であり、例
えば相同組換え法を利用する。異種ＤＮＡの挿入は一般
に、自然では必須ではない遺伝子、例えばチミジンキナ
ーゼ遺伝子（ｔｋ）になされるが、この遺伝子も選択可
能なマーカーを提供する。組換えウイルスの構築を著し
く容易にするプラスミドベクターは従来報告されている
（例えばＭａｃｋｅｔｔらの１９８４年の文献；Ｃｈａ
ｋｒａｂａｒｔｉらの１９８５年の文献；Ｍｏｓｓの１
９８７年の文献参照）。このようにして免疫原性領域を
含む所望のポリペプチドの発現が、生きている組換えワ
クシニアウイルスに感染しているかおよび／または免疫
化されている細胞もしくは個体に起こる。
【００８５】ポリペプチドを発現させる他の系として
は、昆虫細胞と、これらの細胞内で使用するのに適した
ベクターがある。これらの系は当該技術分野では公知で
あり、例えばバキュロウイルスのＡｕｔｏｇｒａｈａｃ
ａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多面性ウイルス（ＡｃＮＰＶ）
由来の昆虫発現転移ベクターがある。これはヘルパー非
依存性のウイルス発現ベクターである。この系由来の発
現ベクターは、異種遺伝子を発現させるために、ウイル
スの強力なポリヘドリン遺伝子のプロモーターを通常使
用する。外来性遺伝子をＡｃＮＰＶに導入するのに現在
最も一般に使用されている転移ベクターは、図４に示す
ｐＡｃ３７３である。また、当業者に周知の多くの他の
ベクターも発現を改良するように工夫されている。これ
らのベクターには例えばｐＶＬ９８５が含まれる（この
ベクターはポリヘドリンの開始コドンをＡＴＧからＡＴ
Ｔに変更し、ＢａｍＨＩクローニング部位をＡＴＴから
３２塩基対下流に導入している；ＬｕｃｋｏｗおよびＳ
ｕｍｍｅｒｓの１９８９年の文献参照）。非融合外来性
タンパク質を高レベルで発現するＡｃＮＰＶ転移ベクタ
ーを図４に示す。図４において、数字は未変性遺伝子内
の位置を示し、未変性遺伝子内でＡＴＧコドンのＡの位
置は＋１である。また図４は転移ベクターｐＡｃ３７３
の制限エンドヌクレアーゼ地図を示す。この地図は、唯
一のＢａｍＨＩ部位が、ポリヘドリン遺伝子の翻訳開始
コドンＡＴＧに関する−８の位置の後に位置することを
示している。ＳｍａＩ、ＰｓｔＩ、ＢｇｌＩ、ＸｂａＩ
またはＳｓｔＩの開裂部位は全く存在しない。非融合の
外来性タンパク質を良好に発現するには通常、理想的に
はＡＴＧ開始シグナルに先立って適切な翻訳開始シグナ
ルを含有する短いリーダー配列を有している外来性遺伝
子を必要とする。またそのプラスミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ
内で選択および増殖を行うために、ポリヘドリンのポリ
アデニル化シグナル、アンピシリン耐性（ａｍｐ）遺伝
子および複製起点を有している。
【００８６】異種ＤＮＡを、バキュロウイルスの所望の
部位に導入する方法は当該技術分野で公知である（Ｓｕ
ｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ、ＴｅｘａｓＡｇｒｉｃｕ
ｌｔｕｒａｌＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔＳｔａｔｉｏｎＢｕ
ｌｌｅｔｉｎＮｏ．１５５５；ＪＵらの１９８７年の文
献；Ｓｍｉｔｈらの１９８３年の文献；ならびにＬｕｃ
ｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓの１９８９年の文献参
照）。例えば、挿入は、相同組換え法によって、ポリヘ
ドリン遺伝子のような遺伝子に行い得、また挿入は、所
望のバキュロウイルス遺伝子中に作製した制限酵素部位
にも実施し得る。挿入される配列は、ＨＳＶＶＰ１６お
よび／またはＨＳＶ糖タンパク質のすべてもしくは種々
のセグメントをコードする配列で有り得る。
【００８７】シグナルペプチドの開裂、タンパク質分解
による開裂およびリン酸化のような翻訳後修飾のシグナ
ルは、昆虫細胞によって認識されるようである。分泌と
核蓄積に必要なシグナルも、無脊椎動物と脊椎動物の細
胞間に保存されるようである。無脊椎動物細胞内で有効
な脊椎動物細胞由来のシグナル配列の例は当該技術分野
で公知であり、例えば、ヒトインターロイキン２（ＩＬ
２ｓ）のシグナルがあり、それは脊椎動物細胞が昆虫細
胞内で認識され適切に除去される場合の外部への輸送の
シグナルである。
【００８８】上記の宿主細胞とベクターを用いて調製さ
れるポリペプチドは融合ポリペプチドであることが望ま
しいことが多い。非融合ポリペプチドの場合のように、
融合ポリペプチドは発現後に細胞内に残留し得る。ある
いは、融合タンパク質は、それがリーダー配列フラグメ
ントを含有している場合、細胞から増殖培地に分泌され
得る。リーダーフラグメントと、インビボもしくはイン
ビトロで開裂することができる外来性遺伝子の残りの部
分との間に、プロセッシング部位があるのが好ましい。
【００８９】合成されたポリペプチドが正しいエピトー
プを与えるように正しく形成されているが小さすぎて免
疫原性でない場合、そのポリペプチドは適切なキャリア
ーに連結される。このような結合を行ういくつかの方法
は当該技術分野で公知であり、Ｎ−スクシンイミジル−
３−（２−ピリジル−チオ）プロピオナート（ＳＰＤ
Ｐ）およびスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチ
ル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣ
Ｃ）を用いてジスルフィド結合を生成させる方法がある
（ペプチドにスルフヒドリル基がない場合、この結合は
システイン残基を付加することによって行うことができ
る）。これらの試薬は、それ自体と１つのタンパク質の
ペプチドシステイン残基との間のジスルフィド結合；お
よびリシンのε−アミノ基または他のアミノ酸の他の遊
離アミノ基によるアミド結合を形成する。このようなジ
スルフィド／アミド形成薬剤は各種知られている（例え
ばＩｍｍｕｎ．Ｒｅｖ．、６２巻、１８５頁，１９８２
年参照）。ジスルフィド結合ではなくてチオエーテル結
合を生成する他の二官能性カップリング剤がある。これ
らのチオエーテル形成剤は多数市販されており、６−マ
レイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸、２−ヨード酢
酸、４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン−
１−カルボン酸などの反応性エステルが含まれる。その
カルボキシル基は、それをスクシンイミド、または１−
ヒドロキシ−２−ニトロ−４−スルホン酸のナトリウム
塩と結合させることによって活性化し得る。抗原をカッ
プリングする別の方法は、ヨーロッパ特許出願公開第２
５９，１４９号に記載されているロタウイルス／”結合
ペプチド”系を利用する。上記化合物のリストで余すこ
となく示された訳ではなく、示された化合物の修飾物も
明らかに使用し得る。
【００９０】キャリアーとしては、それ自体が宿主に対
して有害な抗体を産生しないものはいずれも使用し得
る。適切なキャリアーは、タンパク質のような一般に大
きくて徐々に代謝される巨大分子；ラテックスで官能基
化されたセファロース、アガロース、セルロース、セル
ロースビーズなどのような多糖類；ポリグルタミン酸、
ポリリシンなどのような高分子アミノ酸；アミノ酸コポ
リマー；および不活性のウイルス粒子である（後記説明
参照）。特に有用なタンパク質基質は、血清アルブミ
ン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリ
ン分子、サイログロブリン、オボアルブミン、破傷風ト
キソイド、および当業者によく知られている他のタンパ
ク質である。
【００９１】ＨＳＶＶＰ１６特にＨＳＶ−２ＶＰ１６の
エピトープ、およびＨＳＶの糖タンパク質特にＨＳＶｇ
Ｂおよび／またはＨＳＶｇＤのエピトープの免疫原性も
また、例えばＢ型肝炎表面抗原に関連するような粒子形
成タンパク質と融合させるかまたは組合せて、真核系中
でこれらエピトープを作製することにより増大させるこ
とができる（例えば米国特許第４，７２２，８４０号参
照）。ＨＳＶＶＰ１６もしくは糖タンパク質のエピトー
プが粒子形成タンパク質をコードする配列に直接連結さ
れている構築物は、ＨＳＶエピトープに対して免疫原性
であるハイブリッドを生成する。さらに、作製されたベ
クターはすべて、例えばプレ−Ｓペプチドのように種々
の免疫原性を有する、ＨＢＶに対する特異的なエピトー
プを含んでいる。したがって、ＨＳＶ配列を含有する粒
子形成タンパク質で構築された粒子は、ＨＳＶおよびＨ
ＢＶに対して免疫原性である。
【００９２】肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ）は、Ｓ．ｃｅ
ｒｅｖｉｓｉａｅ（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａらの１９８２
年の文献）および例えば哺乳類の細胞（Ｖａｌｅｎｚｕ
ｅｌａらの１９８４年の文献）中で生成して粒子に形成
されることが分かっている。このような粒子が生成する
と、モノマーサブユニットの免疫原性を増大することが
分かっている。またその構築物はＨＢＳＡｇの免疫原性
エピトープを含有し、これはプレ表面（プレＳ）領域の
５５アミノ酸を含有している（Ｎｅｕｒａｔｈらの１９
８４年の文献）。酵母内で発現可能なプレ−Ｓ−ＨＢＳ
Ａｇ粒子の構築物はヨーロッパ特許出願公開第１７４，
４４４号に開示されており；酵母で発現する異種のウイ
ルス配列を有するハイブリッドがヨーロッパ特許出願公
開第１７５，２６１号に開示されている。またこれらの
構築物は、ＳＶ４０−ジヒドロ葉酸レダクターゼベクタ
ーを用いて、ＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞内で発現さ
せ得る（Ｍｉｃｈｅｌｌｅらの１９８４年の文献）。
【００９３】さらに、粒子形成タンパク質をコードする
配列の各部分を、ＨＳＶＶＰ１６もしくはＨＳＶ糖タン
パク質のエピトープをコードするコドンで置換し得る。
この置換反応において、酵母もしくは哺乳類中に免疫原
性粒子を形成させるためのユニットの凝集を介在させる
必要がない領域は、欠失させることができ、したがっ
て、それ以外のＨＢＶ抗原部位がＨＳＶエピトープ（単
数または複数）と競合することがないようにすることが
できる。
【００９４】活性成分として免疫原性ポリペプチドを含
有するワクチンの製剤は当業者に公知である。典型的
に、このようなワクチンは注射用として、すなわち液体
の水剤もしくは懸濁剤として調製され、注射する前に液
体の水剤もしくは懸濁剤中に入れるのに適した固体の形
態としても調製され得る。またその製剤は、乳化しても
よく、またはリポソーム内に被包されるポリペプチドで
もよい。活性な免疫原性成分は、製薬的に受容可能で、
活性成分と適合性の賦形剤と混合することが多い。適切
な賦形剤としては例えば水、生理食塩水、デキストロー
ス、グリセリン、エタノールなど、およびその混合物が
ある。さらに、所望により、ワクチンは、湿潤剤もしく
は乳化剤、ｐＨ緩衝剤および／またはワクチンの有効性
を高めるアジュバントのような補助物質を少量含有して
いてもよい。有効なアジュバントの例としては、水酸化
アルミニウム、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニ
ル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセ
チル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタ
ミン（ＣＧＰ１１６３７、ノル−ＭＤＰと呼ばれる）、
Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタ
ミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミト
イル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホスホリル
オキシ）−エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ、ＭＴＰ
−ＰＥと呼ばれる）、およびＲＩＢＩ（細菌から抽出さ
れた次の３成分：モノホスホリルリピドＡ、トレハロー
スジミコール酸、および細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋
ＣＷＳ）を、２％スクワレン／Ｔｗｅｅｎ８０乳懸濁中
に含有している）が挙げられるが限定するものではな
い。アジュバントの有効性は、ＨＳＶ−ＶＰ１６のエピ
トープおよび／またはＨＳＶ糖タンパク質のエピトープ
を含有する免疫原性ポリペプチドに特異的な抗体の量を
測定することによって測定することができ、その抗体
は、種々のアジュバントも含有するワクチン中の上記ポ
リペプチドを投与することによって生成する。
【００９５】そのタンパク質は、ワクチンに、中性すな
わち塩の形態で処方してもよい。製薬的に受容可能な塩
としては酸付加塩（ペプチドの遊離のアミノ基で形成さ
れる）があり、この塩は例えば塩酸もしくはリン酸のよ
うな無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン
酸などのような有機酸で形成される。また遊離のカルボ
キシル基で形成される塩は、例えば水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウ
ムもしくは水酸化第二鉄のような無機塩基、およびイソ
プロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノ
エタノール、ヒスチジン、プロカインなどのような有機
塩基から誘導される。
【００９６】ワクチンは通常、例えば皮下もしくは筋肉
内に注射することによって非経口的に投与される。他の
投与方法に対して適切なその他の製剤としては坐剤があ
り、また場合によっては経口の製剤が用いられる。坐剤
については、慣習的な結合剤とキャリアーには、例えば
ポリアルキレングリコール類もしくはトリグリセド類が
含有されており、このような坐剤は、活性成分を、０．
５％〜１０％、好ましくは１％〜２％の範囲内で含有す
る混合物から形成することができる。経口製剤には、通
常利用される賦形剤が含有されているが、その賦形剤と
しては、例えば製剤グレードの、マンニトール、ラクト
ース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリ
ンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどがあ
る。これらの組成物は、水剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カ
プセル剤、徐放性製剤、または散剤、の形態を有し、活
性成分を１０％〜９５％、好ましくは２５％〜７０％含
有している。
【００９７】上記の他に、ＨＳＶＶＰ１６および／また
はＨＳＶ糖タンパク質のエピトープを含む１つ以上の組
換えポリペプチドを発現する弱毒化微生物の生ワクチン
を調製することができる。適切な弱毒化微生物は当該技
術分野で知られており、例えばウイルス（例えばワクシ
ニアウイルス）と細菌がある。
【００９８】ワクチンは、投薬製剤に適合した方法で、
かつ予防上および／または治療上有効な量で投与され
る。投与量は、一般に１回用量当り抗原が５μｇ〜２５
０μｇの範囲内であり、治療される被験体、被験体の免
疫系の抗体を合成する能力、および所望の防御の程度に
よってきまる。投与される活性成分の正確な必要量は、
医師の判断によって決まり、各個体に特有なものであ
る。
【００９９】ワクチンは一回投与計画で投与してもよい
が、多数回投与計画で投与する方が好ましい。多数回投
与計画は、ワクチン注射の一次コースが１〜１０回の別
個の投与で行われ、次いで時間間隔をとって、免疫応答
を維持および／または再強化するのに必要な別の投与
を、例えば１〜４ケ月間第２の投与として行い、次いで
必要に応じて、数ケ月後にその次の投与を行う。また投
与の計画は、少なくとも一部は、個体の必要性で決ま
り、医師の判断に依存している。
【０１００】さらに、免疫原性のＨＳＶＶＰ１６エピト
ープを含むポリペプチドを含有するワクチンは、他の免
疫調節薬剤、例えば免疫グロブリンとともに投与しても
よい。
【０１０１】
【実施例】（実施例１）ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードす
る遺伝子の単離および配列決定 ＨＳＶ−２Ｇ株のＥｃｏＲＩ「Ｌ」フラグメントをｐＵ
Ｃ１９に挿入することにより、ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコ
ードするポリヌクレオチド源であるｐＨ２Ｇ５１２を生
産した。ＨＳＶ−１ＶＰ１６をコードする配列を含むｐ
ＲＢ３４５８の１つのセグメントをプローブとして用い
た、サザンブロット分析により、ＨＳＶ−２ポリヌクレ
オチドをコードする配列を同定した。プラスミドｐＨ２
Ｇ５１２およびｐＲＢ３４５８を各々、Ｄｒ．Ｐ．Ｐｅ
ｌｌｅｔｔ（ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎ
ｔｒｏｌ、Ａｔｌａｎｔａ、Ｇａ．）およびＤｒ．Ｂ．
Ｒｏｉｚｍａｎ（ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｃａ
ｇｏ、Ｃｈｉｃａｇｏ、Ｉ１１．）より入手した。ｐＲ
Ｂ３４５８の構築は、Ｐｅｌｌｅｔらにより記載されて
いる（１９８５）。
【０１０２】より具体的には、ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコ
ードするポリヌクレオチドであるｐＨ２Ｇ５１２を、Ｅ
ｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＩとＳａｃＩ、ＳａｃＩＩ、Ｂａｍ
ＨＩ、ＮｃｏＩ、そしてＳｍａＩにより各々消化した。
消化されたプラスミドのフラグメントを、トリスアセテ
ートバッファー中の１％アガロースゲル上での電気泳動
により分離した。電気泳動後、ゲル中のＤＮＡをアルカ
リで変性させ、中和し、そしてＳａｍｂｒｏｏｋらが記
載している転移プロトコール（１９８９）を用いて、
「ＧｅｎｅＳｃｒｅｅｎＰｌｕｓ」膜に移した。膜上の
ＤＮＡを、製造者の指示を用いて、一晩プローブとハイ
ブリダイズした。プローブは、ｐＲＢ３４５８から単離
した、ニックトランスレーションされた２．９Ｋｂ Ｅ
ｃｏＲＩ−ＨｉｎｄＩＩＩフラグメントであった。ハイ
ブリダイゼーションの結果は、ＨＳＶ−２ＶＰ１６が、
ｐＨ２Ｇ５１２の３．５ＫｂＥｃｏＲＩ−ＳａｃＩフラ
グメント中でコードされていることを示した。続いて、
ＶＰ１６をコードするＥｃｏＲＩ−ＳａｃＩフラグメン
トを１％アガロースゲル上で単離し、ＧｅｎｅＣｌｅａ
ｎ（Ｂｉｏ１０１）を用いてゲルから抽出した。上記フ
ラグメントの配列決定を、ジデオキシ法を用いて行っ
た。ＨＳＶＤＮＡはＧ−Ｃに富んでいる（すなわち、＞
７０％Ｇ−Ｃ）ため、配列決定ゲル中の圧縮領域中の配
列は、６５℃でＴａｑポリメラーゼにより配列決定する
ことによって解明した。上記フラグメントのコーディン
グストランドの配列、およびそれによりコードされたア
ミノ酸を図３に示す。図において、推定される開始のメ
チオニンコドンの第１ヌクレオチドを矢印で示す。
【０１０３】ＨＳＶ−１ＶＰ１６の推定されるアミノ酸
配列とＨＳＶ−２ＶＰ１６の推定されるアミノ酸配列と
の間の相同性を図２に示す。
【０１０４】（実施例２）ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコード
する配列を含むワクシニアウイルス発現ベクターの構築 ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードする配列を含むワクシニア
ベクターを以下のように構築した。まず、ＶＰ１６をコ
ードする配列を、ワクシニア発現ベクターであるｐＳＣ
１１にサブクローニングすることにより、プラスミドｐ
ＨＳ２２５（部分地図を図５に示す）を生産した。ベク
ターｐＳＣ１１は、Ｄｒ．ＢｅｒｎａｒｄＭｏｓｓ、Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔ
ｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍａｒｙｌａｎｄから入手し
た。ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードする配列を導入する前
に、ＨｉｎｄＩＩＩによる消化によってｐＳＣ１１中の
ＨｉｎｄＩＩＩ部位を欠失することにより、ｐＳＣ１１
ベクターを改変し、続いて、ＤＮＡポリメラーゼIのク
レノウフラグメントによる処理および連結を行った。そ
の後、ＳｍａＩ、ＫｐｎＩ、ＢｇｌＩＩ、およびＨｉｎ
ｄＩＩＩに対する制限酵素部位を含むポリリンカーを、
ＳｍａＩ部位に導入することにより、ｐＳＣ１１ベクタ
ーをさらに改変した。ＶＰ１６を含むフラグメントを、
ｐＨ２Ｇ５１２から、２．１ＫｂのＸｈｏＩ−ＳｐｈＩ
フラグメントとして単離した。ＤＮＡポリメラーゼIの
クレノウフラグメントを用いてＸｈｏ部位を満たし、Ｔ
４ＤＮＡポリメラーゼを用いてＳｐｈＩ部位を平滑末端
化した。その後、平滑末端フラグメントを、改変された
ｐＳＣ１１のＳｍａＩ部位に連結した。ＶＰ１６をコー
ドする配列を含むベクターを、クローニングにより得
た。上記ベクターをＤＨ５αに形質転換し、Ａｐr選択
を用いて形質転換細胞を選択した。制限酵素分析の後、
適切なサイズのフラグメントの存在に基づいて、陽性の
クローンを選択した。上記陽性のクローンの１つをｐＨ
Ｓ２２５と命名した。ｐＨＳ２２５の重要な特徴のいく
つかを示す地図を図５に示す。個体中でＶＰ１６を発現
するために適した組換えワクシニアウイルスを得るため
に、リポフェクチンの製造会社(ＢＲＬＬａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓ)が記載しているリポフェクチントランスフ
ェクションプロトコールを用いた組換えにより、ｐＨＳ
２２５の、ＶＰ１６をコードする配列を、野生型のワク
シニア株であるＷＲのＴＫ座に挿入した。組換えＴＫ-
ウイルスを、ＢｕＤＲ選択により単離し、Ｍａｃｋｅｔ
ｔらのプロトコール（１９８７）を用いてプラーク精製
した。ＤＮＡドットブロットハイブリダイゼーションに
より、ワクシニア／ＶＰ１６組換えクローンを選択し
た。ＶＰ１６の発現を、ウェスターンブロットおよび放
射線免疫沈降により確認し、続いて組換えクローンを精
製した。この処置の詳細は以下の通りである。
【０１０５】ワクシニアＷＲを用いてｐＨＳ２２５の組
換え体を得るために、Ｔ−２５フラスコ中のＢＳＣ４０
細胞のコンフルエントな単層を、０．０５という感染の
多重度(ｍｏｉ)でＷＲに感染させた。室温で２時間振り
ながら吸着を行った。3つのｐＨＳ２２５溶液を、リポ
フェクチン（ＢＲＬＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用い
て以下のように調製した：１、１０、または１００μｇ
のｐＨＳ２２５を含む５０μｌのＤＮＡ水溶液を、３０
μｇのリポフェクチンおよび２０μｌの水と混合した。
得られた溶液を室温で１５分間インキュベートした。感
染した細胞を、血清を含まない媒体中で２回洗浄し、３
ｍｌの血清を含まない媒体を各フラスコに添加した。そ
の後、１００μ1のＤＮＡ−リポフェクチン複合体を各
フラスコに渦を巻くように攪拌しながら滴下した。３７
℃で５時間、７％ＣＯ2を含む雰囲気下でトランスフェ
クションされたものをインキュベートした。その後、２
０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含む３ｍｌｓのＤＭＥを
各フラスコに添加し(最終ＦＣＳ濃度は１０％であっ
た)、トランスフェクションされたものを４８−７２時
間インキュベートした。インキュベーションの後、上記
媒体中に細胞をかき集めることにより、組換えウイルス
を得た。上記細胞を３回凍結解凍することにより、細胞
からウイルスを放出した。
【０１０６】ＶＰ１６を含む組換えウイルスを、Ｍａｃ
ｋｅｔｔらの技術（１９８７）を用いて選択した。簡単
に述べると、各トランスフェクションにより生産したウ
イルスのストックを解凍し、音波破砕し、そして、０．
１容量の０．２５％トリプシンの存在下において、３７
℃で３０分間インキュベートした。ＴＫ−１４３細胞の
単層を、トリプシン処理したストックを１０倍に連続希
釈したものに感染させた。吸着後、１％低融点アガロー
ス、５％ＦＣＳ、および２５μｇＢＵＤＲ（Ｓｉｇｍａ
ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）を含むＤＭＥで細胞を覆っ
た。感染から（ｐ．ｉ．）４８時間後、０．１％中性赤
を含む１％アガロースで細胞を着色した。３から５時間
後、細胞叢中の透明な点（ｃｌｅａｒｉｎｇ）として、
ウイルスのプラークが観察された。プラークを取り出
し、ＢＵＤＲを用いたプラーク精製をさらに2回行っ
た。
【０１０７】選択された組換え体がＶＰ１６をコードす
る配列を含んでいたということを、ドットブロットハイ
ブリダイゼーションを用いて確認した。ドットブロット
技術は、ＶＰ１６をコードするフラグメントを用いて検
出を行ったこと以外は、実質的にＭａｃｋｅｔｔら（１
９８７）の技術によった。簡単に述べると、推定される
組換え体に感染した細胞を、ドットブロットを複数回行
うことによりニトロセルロース上に散在させ、溶解し、
そして変性させた。フィルターを８０℃で２時間減圧下
で焼き、ハイブリダイゼーションの前に、６０％ホルム
アミド、１％硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）、１Ｍ
ＮａＣｌ、１０％硫酸デキストランを含む溶液で処理
し、１０6ｃｍｐ／ｍｌの32Ｐ標識ＶＰ１６とハイブリ
ダイズした。ハイブリダイゼーションは、４２℃で一
晩、６０％ホルムアミド、１％硫酸ドデシルナトリウム
（ＳＤＳ）、１ＭＮａＣｌ、１０％硫酸デキストラン、
１０ｍｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ、１０ｍｇ／ｍｌポリＡ
+ＤＮＡ、および５０ｍｇ／ｍｌ酵母ｔＲＮＡを含む溶
液中で行った。ハイブリダイゼ−ションの後、フィルタ
ーを室温で５分間、２×のＳＳＣを用いて４回洗浄し、
６５℃で３０分間、２×のＳＳＣ、０．１％ＳＤＳを用
いて１回洗浄し、６５℃で３０分間、０．１×のＳＳ
Ｃ、０．１％ＳＤＳを用いて１回洗浄した。ハイブリダ
イゼーションの結果は１２の単離体のうち６体が、ＨＳ
Ｖ−２ＶＰ１６をコードする配列について陽性であり、
１２の単離体のうち２体は極度に陽性であったことを示
した。上記のように調製した６体の単離体を、ＶＰ１６
の発現のさらなる分析のために選択した。
【０１０８】（実施例３）組換えｖｖ−ＶＰ１６ベクタ
ーからのＶＰ１６の発現 実施例２に記載されるｖｖ−ＶＰ１６クローンからのＶ
Ｐ１６の発現を、高力価陽性ヒト血清を用いる、
［35Ｓ］で標識された感染細胞溶解産物を放射線免疫沈
降させ、次いで沈降した産物をＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動にかけ、オートラジオグラフィーによ
り浮かび上がった［35Ｓ］で標識されたＶＰ１６により
検出した。さらに詳細に説明すると、試料を、８％の厚
さ１．５ｍｍのポリアクリアミドゲル（ＮｏｖｅｘＣｏ
ｒｐ．）で、４０ｍＡで９０分間電気泳動にかけた。電
気泳動後、ゲルを固定し、「増強（「ｅｎｈａｎｃｅ
ｄ」）」し、フィルムに露光する前に乾燥させた。組換
えＶＰ１６（Ｖｍｗ６５）の見かけの分子量は、６５ｋ
Ｄである。ＶＰ１６の同定は、ＶＰ１６に特異的なモノ
クローナル抗体ＬＰ１を沈降のために用いて、ＨＳＶ−
２に感染したＶｅｒｏ細胞からのタンパク質を放射線免
疫沈降させることにより確認した。ＭｃＬｅａｎら（１
９８２）に記載されているＬＰ１を、Ａ．Ｍｉｎｓｏ
ｎ，ＣａｍｂｒｉｄｇｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙから入手
した。ｖｖ−ＶＰ１６に感染した細胞からの標識された
沈降産物は、Ｖｅｒｏ細胞からの標識された沈降産物と
電気泳動中に共移動した。Ｖｅｒｏ細胞において発現し
たＶＰ１６、および組換えワクシニアウイルス−ＶＰ１
６（ｖｖ−ＶＰ１６）細胞からのＶＰ１６の、電気泳動
中のこの共移動は、ｖｖ−ＶＰ１６産物が全長であるこ
とを示している。
【０１０９】抗体ＬＰ１は、ｖｖ−ＶＰ１６細胞におい
て発現したＶＰ１６を認識しないが、ＨＳＶに感染した
Ｖｅｒｏ細胞において発現したＶＰ１６を認識すること
は、興味深いことである。ｖｖ−ＶＰ１６産物での抗体
認識における変化は、組換えにより生産されたポリペプ
チドのリン酸化の欠如、またはタンパク質プロセッシン
グにおける他の相違に起因すると思われる。なぜなら、
ワクシニアウイルスは、感染細胞の細胞質において複製
するからである。
【０１１０】（実施例４）ＶＰ１６またはｇＢ２による
免疫の免疫原性および防御効果 ＨＳＶ−２により引き起こされた疾病に対する免疫原性
および防御に関して、ＶＰ１６による免疫効果とｇＢ２
による免疫効果とを比較するために、各ポリペプチドを
コードするワクシニアウイルス組換え体を用いてモルモ
ットを免疫した。ＶＰ１６をコードする遺伝子を含む使
用したワクシニア組換え体は、実施例２において記載さ
れたもの、すなわち、ｖｖ−ＶＰ１６（ｖｖ−ＶＰ１６
−ＴＫ-とも呼ばれる）であった。ｇＢ組換え体は、ｇ
Ｂ２をコードするポリヌクレオチドをｐＵＣ１３ベクタ
ーにサブクローニングすることにより調製した。３．２
ｋｂのＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩフラグメントであ
る、ｇＢ２をコードするポリヌクレオチドは、ＷＯ８８
／０２６３４の図４に示されるように、−１３６位から
３０８８位までのヌクレオチドを含んでいた。この図面
は、本明細書では、図６として採用している。得られる
ベクターｐＨＳ２１８の主な特徴を図７に示す。Ｂ２を
コードするワクシニアウイルス発現ベクターを生産する
ために、ｐＨＳ２１８から切り出した３．２ＫｂのＨｉ
ｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩフラグメントを平滑末端化し、
ベクタ−ｐＶＡＣＣ−ｇＢ２-を産生するｐＣＢ０７の
ＨｉｎｃＩＩ部位に連結した。ベクターｐＣＢ０７およ
びｐＶＡＣＣ−ｇＢ２の主な特徴を、それぞれ図８およ
び図９に示す。ｖｖ−ＶＰ１６構築物と同様に、ワクシ
ニアプロモーター７．５が遺伝子の上流に配置され、隣
接するチミジンキナーゼ（ＴＫ）配列が、野生型ウイル
スにこの遺伝子座において組換えを行わせる。ｐＨＳ２
１８からのｐＶＡＣＣ−ｇＢ２の構築は、Ｄｒ．Ｉａｎ
Ｒａｍｓｈａｗ、ＴｈｅＪｏｈｎＣｕｒｔｉｎＳｃｈｏ
ｏｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ、ＴｈｅＡｕ
ｓｔｒａｌｉａｎＮａｔｉｏｎａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ
ｙ、Ｃａｎｂｅｒｒａ、Ａｕｓｔｒａｌｉａにより行わ
れた。野生型ワクシニアウイルスからのワクシニア発現
ベクターｖｖ−ｇＢ２の生産方法は、組換えがｐＶＡＣ
Ｃ−ｇＢ２を用いて行われ、陽性クローンの選択が、ｇ
Ｂ２をコードする放射能標識されたフラグメントとのハ
イブリダイゼーションにより行われたこと以外は、ｖｖ
−ＶＰ１６の生産方法と同様であった。
【０１１１】雌のモルモットを、皮内（分岐針を用いて
右肋間縁の下の皮膚を乱刺）、腹膜腔内、または経静脈
的に（３０ゲージの針を用いた耳静脈への注射）免疫し
た。研究対象の各グループにおけるプロトコールは、以
下の表に示す。
【０１１２】
【表１】 免疫と免疫との間を１ヵ月おいて、動物を２回免疫し
た。ＨＳＶ特異的およびワクシニア特異的中和抗体を測
定するために、２回目の免疫後３週間目および６週間目
に動物から採血した。グループ１から６の動物を、３×
１０5ｐｆｕのＨＳＶ−２ＭＳ株で誘発した。この誘発
は、２回目の追加免疫後６４日目、６週間目に行った。
誘発は、ＨＳＶ−２の膣内接種により行った。誘発後最
初の１４日間、動物に急性疾患があるか否かを調べた。
【０１１３】ＶＰ１６およびｇＢ２の免疫原性を測定す
るために、補体依存性および補体非依存性免疫の結果得
られた中和抗体の力価を以下のように決定した。１０％
のウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含む１５ｍｌ培地当り１×
１０6個のＶｅｒｏ細胞１５０μｌの懸濁液を、２つの
９６ウェル平底プレート（Ｆａｌｃｏｎから入手した組
織培養プレート「Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ III」に蒔き、Ｃ
Ｏ2インキュベータ−中３７℃で一晩インキュベートし
た。翌日、試料を３番目の９６ウェルプレートで調製し
た。ウェルの内容は、図１０に示す。この図では、培地
は、ＤＭＥ−Ｈ２１組織培養培地であり、熱不活性化し
たウシ胎児血清（ＨＩＦＣＳ）は、ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏ
ｎｅＣｏｒｐ．）を５６℃で３０分間インキュベートす
ることにより調製し、モルモットの補体は、再水和した
モルモットの補体（ＧｉｂｃｏＣｏｒｐ．，製造者の指
導に従って調製した）の１：１２５希釈物であった。４
番目のプレートも調製した。４番目のプレートは３番目
のプレートと類似していたが、モルモットの補体は省か
れていた。両プレートを２時間インキュベートした。プ
レート１および２の細胞単層から培地を吸引することに
より、ウイルスの吸収および複製を行った。プレート３
および４のそれぞれのウェルの内容物を、プレート１お
よび２にそれぞれ移し、プレートを、ＣＯ2インキュベ
ーター中に３７℃で３日間維持した。ウイルスの複製に
よる細胞溶解を検出するために、インキュベーションの
３日後、培地を細胞から吸引し、１０％のホルムアルデ
ヒド溶液および０．０９％のクリスタルバイオレットを
含むリン酸緩衝化生理食塩水１００μｌを、各ウェルに
加えた。プレートを室温で１５分間インキュベートし、
クリスタルバイオレット溶液を除去し、ウェルを水で３
回洗浄し、プレートを風乾した。補体依存性および補体
非依存性試料の、それぞれのウイルス力価は、３（２
n）および２（２n）であった。ｎは、細胞単層の細胞溶
解を５０％阻害する血清希釈倍数に等しい。
【０１１４】ＨＳＶ特異的補体依存性中和抗体力価の、
採血１および２において見いだされた平均中和力価とし
て表現される、抗体滴定の結果を図１１に示す。図から
理解されるように、３週間目(採血１)において、ｖｖ−
ＶＰ１６のＩ．Ｖ．投与は、補対依存性中和抗体をｖｖ
−ｇＢ２の約５倍に増加させた。
【０１１５】採血１のＨＳＶ特異的補体非依存性中和抗
体力価は、以下の表に示す。表から理解されるように、
ｖｖ−ＶＰ１６のＩ．Ｖ．投与は、ｖｖ−ｇＢ２組換え
体により誘導されたＨＳＶ特異的力価を＞１０倍上回る
抗体の力価を生じた。中和を、プラーク形成の５０％減
少として測定した。野生型非組換えワクシニアＷＲによ
り免疫した動物は、測定可能な中和抗体を誘発しない。
【０１１６】
【表２】 病巣において示される、防御に対するｖｖ−ＶＰ１６お
よびｖｖ−ｇＢ２による免疫の効果、および急性疾患の
重篤度もまた比較した。主要な性器のＨＳＶ−２感染の
臨床的推移は、一般に以下の通りである。まず、病巣
は、ウイルス接種後３から４日目に、すべての動物の外
性器に現れる。病巣は、紅斑基部を有する個別の小胞と
して発生し、５から８日目までには、急速に多数の小胞
性潰瘍の病巣に発達する。出血性痂皮は、８から１０日
目までには、潰瘍性病巣を覆う。１３から１５日目まで
には、外性器の皮膚が完全に治癒して痂皮がなくなる。
大抵の動物は、５日目から１０日目の間に尿閉を起こす
が、この症状は、１０から１５日目までに消散する。７
から１０日目までには、動物の０％から２０％におい
て、後脚の麻痺が起こり得るが、この症状は、１５から
２０日目までに消散する。感染および外性器病巣は、接
種を受けた動物の８０から１００％において発生し、そ
の死亡率は、０から５０％である。研究のための病巣の
測定は、以下の尺度に従った。
【０１１７】０．５＝発赤、腫脹； １．０＝１から２個の小胞、または発赤および腫脹を伴
った１個の小胞； １．５＝２から４個の小さな小胞（直径１から２ｍ
ｍ）、または腫脹および発赤を伴った２個の小胞； ２．０＝４から６個の小胞； ２．５＝腫脹および発赤を伴った４から６個の大きな小
胞（直径２ｍｍより大きい）； ３．０＝６個より多くの大きな小胞； ３．５＝付加的な小さな小胞を伴った、６個より多くの
大きな小胞４．０＝会陰の２分の１より多くを覆う融合
性の小胞； ４．５＝潰瘍を伴った極端な小胞。
【０１１８】病巣の発生および重篤性により示される、
疾病の防御および死亡率に対する、ｖｖ−ＶＰ１６によ
る免疫効果と、ｖｖ−ｇＢ２による免疫効果とを比較し
た結果を以下の表に示す。この研究では、すべての動物
において、病巣は発達し、免疫していないコントロール
グループの病巣スコアは、３．１０であった。
【０１１９】
【表３】 ｖｖ−ｇＢ２およびｖｖ−ＶＰ１６による異なる免疫経
路での防御の時間経過を、それぞれ図１２および図１３
に示す。
【０１２０】（実施例５）ＶＰ１６およびｇＢ２による
免疫の免疫原性および防御効果 ＨＳＶ−２により引き起こされた疾病に対する、ｖｖ−
ＶＰ１６およびｖｖ−ｇＢ２の免疫原性および防御効果
を、ワクチンの投与がＩ．Ｖ．であり、ＨＳＶ−２ＭＳ
株による誘発投与が、６×１０4ｐｆｕであったこと以
外は実施例４と同様のプロトコールを用いて調べた。ワ
クチンを、以下のように４つのグループに投与した：グ
ループ１、非処理；グループ２、ｖｖ−ＶＰ１６−ｖｖ
−ｇＢ２；グループ３、ｖｖ−ｇＢ２のみ；およびグル
ープ４、ｖｖ−ＶＰ１６のみ。
【０１２１】生じる補体依存性中和抗体力価に関する研
究の結果を以下の表に示す。この研究では、中和をプラ
ーク形成の５０％減少として測定した。ワクシニアＷＲ
で免疫した動物は、測定可能な中和抗体（＜１６）を誘
発しない。これらの結果から以下のことが示される。免
疫後３週間目には、ｖｖ−ＶＰ１６およびｖｖ−ｇＢ２
を含むワクチンによる処理では、ｖｖ−ｇＢ２またはｖ
ｖ−ＶＰ１６のみの場合と比較してより高い中和抗体力
価を生じ、６週間目には、ｖｖ−ＶＰ１６による免疫
は、抗体力価に関して、ｖｖ−ＶＰ１６およびｖｖ−ｇ
Ｂ２による免疫とほとんど同様であった。
【０１２２】
【表４】 ｖｖ−ＶＰ１６およびｖｖ−ｇＢ２を含む混合ワクチン
の、単一サブユニットワクチンと比較した場合の防御効
果もまた、実施例４に記載される手法（上記のように改
変を加えて）およびスコアを用いてモニターした。この
研究では、すべての動物が病巣を示した。しかし、以下
の表に示される結果は、急性疾患がワクチンにより改善
され、かつ混合ワクチンの防御効果が、ｖｖ−ｇＢ２ま
たはｖｖ−ＶＰ１６のみと比較して向上しているのが示
された。防御効果の時間経過を図１４に示す。
【０１２３】
【表５】 以下に示す物質は、ブタペスト条約に基づいて、アメリ
カンタイプカルチャーコレンクション（ＡＴＣＣ）、１
２３０１ＰａｒｋｌａｗｎＤｒ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌ
ｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ２０８５２に寄託され、以下の受
託番号を与えられている。
【０１２４】 物質 寄託日 ＡＴＣＣＮｏ． Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α １９９０年７月１５日 ６８３７２ におけるｐＨＳ２２６ 本出願が米国特許として許可および発行されると、これ
らの寄託物の入手に対するすべての制限が確実に取り除
かれ、指定の寄託物は、米国特許法施行規則第１．１４
条および米国特許法第１．２２条に基づき、本出願の係
属中、長官により決定されるすべての有資格者に入手可
能となる。さらに、指定の寄託物は、寄託日から３０年
間もしくは最後の寄託請求日から５年間、または米国特
許の有効期間のうち、いずれか長い期間保存される。本
明細書に記載の寄託物質は便宜上記載したもので、本明
細書の説明を考慮して本発明の実施に必要なものではな
い。さらに、これらの物質は、本願では参考のために援
用している。
【０１２５】（産業上の応用）ＨＳＶＶＰ１６のエピト
ープを含む免疫原性ポリペプチドを含む、本明細書に記
載の組成物は、単純ヘルペスウイルス感染から生じる症
状の緩和に有用である。組換えベクター、発現系、およ
びこれらのベクターにより形質転換された宿主細胞は、
免疫原性ポリペプチドの調製に有用であり、この免疫原
性ポリペプチドは、上記のワクチンを調製するのに有用
である。
【０１２６】
【発明の効果】ＨＳＶ感染を予防するためのヒトに対し
て安全で有効なワクチン、および感染が起きたときの疾
患の治療法が提供される。図の説明
【図面の簡単な説明】
【図１】ＨＳＶビリオンの概略を示す図である。
【図２】ＨＳＶ−１ＶＰ１６およびＨＳＶ−２ＶＰ１６
の推定アミノ酸配列を示す図である。
【図３Ａ】ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードするヌクレオチ
ド配列およびそのヌクレオチドにコードされたアミノ酸
を示す図である。
【図３Ｂ】ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードするヌクレオチ
ド配列およびそのヌクレオチドにコードされたアミノ酸
を示す図である。図３Ａに示される配列の続きの配列を
示す図である。
【図３Ｃ】ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードするヌクレオチ
ド配列およびそのヌクレオチドにコードされたアミノ酸
を示す図である。図３Ｂに示される配列の続きの配列を
示す図である。
【図３Ｄ】ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードするヌクレオチ
ド配列およびそのヌクレオチドにコードされたアミノ酸
を示す図である。
【図３Ｅ】ＨＳＶ−２ＶＰ１６をコードするヌクレオチ
ド配列およびそのヌクレオチドにコードされたアミノ酸
を示す図である。図３Ｄに示される配列の続きの配列を
示す図である。
【図４Ａ】ベクターのｐＡＣ３７３およびｐＶＬ９８５
のいくつかの重要な特徴と、そのポリヘドリン遺伝子の
Ｎ末端アミノ酸をコードする配列を示す地図を示す図で
ある。
【図４Ｂ】ベクターのｐＡＣ３７３およびｐＶＬ９８５
のいくつかの重要な特徴と、そのポリヘドリン遺伝子の
Ｎ末端アミノ酸をコードする配列を示す地図を示す図で
ある。
【図５】ベクターｐＨＳ２２５のいくつかの重要な特徴
を示す地図を示した図である。
【図６Ａ】ＨＳＶｇＢ２をコードするヌクレオチド配
列、およびその配列にコードされたアミノ酸を示す図で
ある。
【図６Ｂ】ＨＳＶｇＢ２をコードするヌクレオチド配
列、およびその配列にコードされたアミノ酸を示す図で
ある。図６Ａに示される配列の続きの配列を示す図であ
る。
【図６Ｃ】ＨＳＶｇＢ２をコードするヌクレオチド配
列、およびその配列にコードされたアミノ酸を示す図で
ある。図６Ｂに示される配列の続きの配列を示す図であ
る。
【図６Ｄ】ＨＳＶｇＢ２をコードするヌクレオチド配
列、およびその配列にコードされたアミノ酸を示す図で
ある。図６Ｃに示される配列の続きの配列を示す図であ
る。
【図７】ベクターｐＨＳ２１８のいくつかの重要な特徴
を示す地図を示す図である。
【図８】ベクターｐＢＣＢ０７のいくつかの重要な特徴
を示す地図でを示す図である。
【図９】ベクターｐＶＡＣＣ−ｇＢ２のいくつかの重要
な特徴を示す地図を示す図である。
【図１０】抗体の力価試験におけるウェル含有量を示す
図である。
【図１１】ｖｖ−ｇＢ２およびｖｖ−ＶＰ１６による免
疫化により生じるＨＳＶ特異的補体依存性中和抗体の力
価を示す棒グラフを示す図である。
【図１２】ｖｖ−ｇＢ２による免疫化により生じる防御
の時間的経過を示すグラフを示す図である。
【図１３】ｖｖ−ＶＰ１６による免疫化により生じる防
御の時間的経過を示すグラフを示す図である。
【図１４】ｖｖ−ｇＢ２、ｖｖ−ＶＰ１６、およびｖｖ
−ｇＢ２＋ｖｖ−ＶＰ１６による免疫化により生じる防
御の時間的経過を示すグラフを示す図である。
フロントページの続き (72)発明者 ローズ イー． セクロビッチ アメリカ合衆国 カリフォルニア 94702 バークレー， サクラメント ストリー ト 1564 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA32 CA03 GA11 4C084 AA02 BA01 BA08 BA18 BA19 CA01 MA01 NA14 ZB332 4C085 AA03 AA13 BA78 CC32 EE01 GG01 4H045 AA10 BA16 BA17 BA18 CA03 DA86 EA31

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＨＳＶ感染を処置および／または予防す
    るために細胞性免疫応答を誘発し得る免疫原性の切型Ｈ
    ＳＶ−２ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオ
    チドであって、ここで該ポリペプチドが、 （ａ）以下のアミノ酸配列の１５位〜３４位由来のアミ
    ノ酸配列を含むポリペプチド、 （ｂ）以下のアミノ酸配列の１９３位〜２２０位由来の
    アミノ酸配列を含むポリペプチド、 （ｃ）以下のアミノ酸配列の３２０位〜３３０位由来の
    アミノ酸配列を含むポリペプチド、 （ｄ）以下のアミノ酸配列の３６０位〜３７１位由来の
    アミノ酸配列を含むポリペプチド、 （ｅ）以下のアミノ酸配列の３７８位〜３９０位由来の
    アミノ酸配列を含むポリペプチド、 （ｆ）以下のアミノ酸配列の４００位〜４１０位由来の
    アミノ酸配列を含むポリペプチド、および （ｇ）以下のアミノ酸配列の４８０位〜４９０位由来の
    アミノ酸配列を含むポリペプチド、 【化１】 からなる群から選択される、組換えポリヌクレオチド。
JP2001274335A 1990-08-02 2001-09-10 単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン Withdrawn JP2002136297A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US56152890A 1990-08-02 1990-08-02
US561.528 1990-08-02

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP11078661A Division JPH11308998A (ja) 1990-08-02 1999-03-23 単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2002136297A true JP2002136297A (ja) 2002-05-14

Family

ID=24242345

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP3514486A Expired - Fee Related JP3005292B2 (ja) 1990-08-02 1991-07-30 単純ヘルペスウィルスのｖｐ１６のワクチン
JP11078661A Withdrawn JPH11308998A (ja) 1990-08-02 1999-03-23 単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン
JP2001274335A Withdrawn JP2002136297A (ja) 1990-08-02 2001-09-10 単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP3514486A Expired - Fee Related JP3005292B2 (ja) 1990-08-02 1991-07-30 単純ヘルペスウィルスのｖｐ１６のワクチン
JP11078661A Withdrawn JPH11308998A (ja) 1990-08-02 1999-03-23 単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン

Country Status (12)

Country Link
US (2) US5714152A (ja)
EP (1) EP0541692B1 (ja)
JP (3) JP3005292B2 (ja)
AT (1) ATE179614T1 (ja)
CA (1) CA2088600C (ja)
DE (1) DE69131200T2 (ja)
DK (1) DK0541692T3 (ja)
ES (1) ES2134197T3 (ja)
GR (1) GR3030834T3 (ja)
IE (1) IE912744A1 (ja)
PT (1) PT98565B (ja)
WO (1) WO1992002251A1 (ja)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9105992D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9119940D0 (en) * 1991-09-18 1991-10-30 Hare Peter F J O Polypeptide inhibitor of viral replication
US5965354A (en) * 1995-07-28 1999-10-12 Chiron Corporation Herpes simplex virus diagnostics
US5980912A (en) * 1997-03-25 1999-11-09 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
JP2002503251A (ja) 1997-06-02 2002-01-29 カイロン コーポレイション 単純ヘルペスウイルスｖｐ２２ワクチンおよび使用の方法
US6087166A (en) * 1997-07-03 2000-07-11 Basf Aktiengesellschaft Transcriptional activators with graded transactivation potential
BR9908599A (pt) * 1998-03-09 2000-11-14 Smithkline Beecham Biolog Composições combinadas de vacina
NZ509974A (en) 1998-08-07 2003-10-31 Univ Washington Immunological herpes simplex virus antigens and methods for use thereof
US6857757B2 (en) * 1999-01-06 2005-02-22 Armament Systems And Procedures, Inc. LED flashlight with side panels inside structure
US6569616B1 (en) 1999-07-29 2003-05-27 Wisconsin Alumni Research Foundation Human cytomegalovirus glycoprotein O as a new drug target and subunit vaccine candidate
CN1376201A (zh) 1999-09-30 2002-10-23 华盛顿大学 免疫学上重要的单纯疱疹病毒抗原
EP1420821B8 (en) 2001-07-31 2011-02-02 University of Washington Immunologically significant herpes simplex virus antigens and methods for using same
KR100420501B1 (ko) * 2001-09-26 2004-03-02 한국지질자원연구원 벤토나이트로부터 몬모릴로나이트 광물의 분리·회수 방법
US20040258716A1 (en) * 2002-06-17 2004-12-23 Shen Gao Ibuprofen suspension
EP2289547B1 (en) 2003-09-12 2015-12-16 Agenus Inc. Vaccine for treatment and prevention of herpes simplex virus infection
US8460674B2 (en) 2009-02-07 2013-06-11 University Of Washington HSV-1 epitopes and methods for using same
WO2010115172A2 (en) 2009-04-03 2010-10-07 University Of Washington Antigenic peptide of hsv-2 and methods for using same
WO2010135747A1 (en) 2009-05-22 2010-11-25 Genocea Biosciences Inc. Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
CA2856697A1 (en) 2010-11-24 2012-06-07 Genocea Biosciences, Inc. Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
AU2012340712B2 (en) 2011-11-23 2017-09-14 Genocea Biosciences, Inc. Nucleic acid vaccines against Herpes Simplex Virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
EP3519427A4 (en) 2016-09-28 2020-03-11 Genocea Biosciences Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF HERPES
US10745931B1 (en) 2019-08-14 2020-08-18 Premises Innovations Llc Self-rightening post system

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4891315A (en) * 1982-10-25 1990-01-02 American Cyanamid Company Production of herpes simplex viral porteins
AU1678783A (en) * 1982-07-20 1984-01-26 Molecular Genetics, Inc. Production of herpes simplex viral proteins
US4818694A (en) * 1982-07-20 1989-04-04 American Cyanamid Company Production of herpes simplex viral protein
EP0133063B1 (en) * 1983-06-23 1987-01-07 Stanley Dr. Person Immunologically reactive non-glycosylated amino acid chains of glycoprotein b of herpes virus types 1 and 2
NZ209308A (en) * 1983-08-30 1991-08-27 Genentech Inc Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein
JPS6051120A (ja) * 1983-08-31 1985-03-22 Chemo Sero Therapeut Res Inst 単純ヘルペスサブユニットワクチン
US4642333A (en) * 1983-09-16 1987-02-10 Stanley Person Immunologically reactive non-glycosylated amino acid chains of glycoprotein B of herpes virus types 1 and 2
US4855224A (en) * 1984-03-09 1989-08-08 Genentech, Inc. Molecularly cloned diagnostic product and method of use
US4618578A (en) * 1984-07-17 1986-10-21 Chiron Corporation Expression of glycoprotein D of herpes simplex virus
EP0628633B1 (en) * 1984-04-06 2003-01-08 Chiron Corporation Recombinant herpes simplex gB-gD vaccine
US5171568A (en) * 1984-04-06 1992-12-15 Chiron Corporation Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine
FR2563434B1 (fr) * 1984-04-25 1986-07-25 Transgene Sa Vaccin contre la rage et procede pour sa preparation
US4859587A (en) * 1984-06-04 1989-08-22 Institut Merieux Recombinant herpes simplex viruses, vaccines and methods
JPH0668B2 (ja) * 1985-08-30 1994-01-05 財団法人化学及血清療法研究所 単純ヘルペスウイルス遺伝子が組込まれた組換えプラスミド
CA1337395C (en) * 1986-10-20 1995-10-24 Rae Lyn Burke Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine
GB8917029D0 (en) * 1989-07-25 1989-09-13 Marie Curie Memorial Foundatio Polypeptide inhibitor of viral replication

Also Published As

Publication number Publication date
CA2088600C (en) 1999-11-16
DK0541692T3 (da) 1999-11-01
US5714152A (en) 1998-02-03
ES2134197T3 (es) 1999-10-01
EP0541692A1 (en) 1993-05-19
US5795579A (en) 1998-08-18
DE69131200T2 (de) 1999-12-09
JPH06502989A (ja) 1994-04-07
PT98565A (pt) 1992-06-30
IE912744A1 (en) 1992-02-12
GR3030834T3 (en) 1999-11-30
CA2088600A1 (en) 1992-02-03
PT98565B (pt) 1999-01-29
EP0541692B1 (en) 1999-05-06
DE69131200D1 (en) 1999-06-10
JP3005292B2 (ja) 2000-01-31
EP0541692A4 (en) 1993-12-08
WO1992002251A1 (en) 1992-02-20
JPH11308998A (ja) 1999-11-09
ATE179614T1 (de) 1999-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2002136297A (ja) 単純ヘルペスウイルスのｖｐ１６のワクチン
US5851533A (en) Vaccine based on membrane bound proteins and process for making them
US5294548A (en) Recombianant Hepatitis a virus
JP3506683B2 (ja) Ｈｃｍｖの糖タンパク質
KR0166585B1 (ko) 앵커-결여 vzv 당단백질, 이를 제조하는 방법 및 이의 면역보호적 용도
JPH03503478A (ja) 組換えｃｍｖ中和タンパク
US5612041A (en) Recombinant herpes simplex gD vaccine
EP0802979B1 (en) Secreted viral cmv proteins useful for vaccines and diagnostics
EP0272858A2 (en) Recombinant HIV envelope proteins produced in insect cells
US7264817B1 (en) Immunogenic composition based on a truncated derivative of a membrane bound protein and process for making it
US6054130A (en) Non-splicing variants of gp350/220
WO1990001546A1 (en) Equine herpesvirus-1 vaccine
US20130064844A1 (en) Non-splicing variants of gp350/220
JP2007246531A (ja) Ｈｓｖの治療的処置に用いるワクチン
WO1995029991A1 (en) A novel vzv gene, mutant vzv and immunogenic compositions
AU672870B2 (en) Vaccines against varicella-zoster virus (VZV)

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20040420

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20040921

A761 Written withdrawal of application

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761

Effective date: 20041213