JP2001527544A - 試薬再循環を用いてオリゴマー、特に、ペプトイドを合成するための装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 サブモノマー固相化学合成技術を用いて、固相支持体上でオリゴマーを合成するための方法が提供されている。この方法は、再循環工程を伴い、ここで、未使用試薬は、この試薬を用いて置換工程を行った後、試薬容器に戻され、そして副生成物である汚染物は、必要に応じて、適切な捕捉剤を用いて、再循環した試薬から取り除かれる。また、本発明の方法を行うための装置も提供されており、この装置は、この合成工程および再循環工程を実施するための配管および閉じ込め手段を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】 試薬再循環を用いてオリゴマー、特に、ペプトイドを合成するための装置 技術の分野 本発明は、一般に、固相化学合成に関する。さらに特定すると、本発明は、固 相有機化学を利用した個々のペプトイド(peptoid)およびペプトイドライブラリ の製造用の化学合成技術で使用するための新規な方法および装置に関する。 発明の背景 オリゴマー性N-置換グリシン(NSG)および他の「ペプトイド」は、多様な分子 ライブラリの作成によく適合するポリマーである。これらの分子は、タンパク質 のような他のポリマーの製造用に開発された従来の固相合成技術を用いて、調製 され得る。例えば、Merrifield固相合成スキームを用いて規定ポリペプチドを調 製する際に使用するための方法は、一般に、知られている。Merrifield(1963)J ．Am．Chem．Soc．85：2149〜2154；Tamら（1987）The Peptides，Academic Pre ss(New York)，185〜259頁。固相ペプチド合成を達成するための他の周知の方法 は、これらのアミノ酸上の9-フルオレニルメトキシカルボニル(Fmoc)保護基を使 用する。Meienhoferら（1979）Int．J．Pept．Protein Res．13：35，Atherton ら（1979）Bioorg．Chem．８：351。この技術では、このペプチドは、任意の広 範囲の市販のポリスチレン樹脂に固定化される。Wang，S.（1973）J．Am．Chem ．Soc．95：1328，Merglerら（1988）Tetrahedron Lett．29：4005，Albericio ら（1987）Int．J．Pept．Protein Res．30：206。個々のペプチドオリゴマーの 合成は、上で言及したペプチド合成から適合させた設備および技術を用いて、行 われ得る。Simonら（1992）Proc．Natl．Acad．Sci．USA 89：9367。 薬学的活性および生体活性についてスクリーニングするための多数のポリマー の系統的な合成方法もまた、開発されている。特に、「樹脂分割」技術または「 混合/分割」技術を用いて、多数の分子を含有する組み合わせライブラリが調製 され得る。Furkaら（1991）Int．J．Peptide Protein Res．37：487〜493；Lam ら（1991）Nature 354：82〜84。ペプトイドライブラリを作成するために、樹 脂混合/分割方法論もまた使用され得る。Figliozziら（1996）Methods in Enzym ol．267：437。 これらの合成方法は常套的であり得るものの、それらは、極めて労力がかかる 。このような合成を行うことの困難性は、例えば、組み合わせライブラリの合成 と平行して、多くの特定の分子を調製する必要があるとき、拡大する。従って、 ポリペプチドおよび/またはペプトイドオリゴマーの合成のための多数の自動化 システムが開発されている。Schnorrenbergら（1989）Tetrahedron 45：7759で 記述された１つの自動化システムは、反応容器から溶媒を引き出し、溶媒を添加 し、試薬を洗浄および混合するための数個の自動化アームを用いる、樹脂上での ペプチドの合成に関する。Zuckermannらの米国特許第5,240,680号で記述された 他の自動化システムは、分割容器へのおよびそこからの反応溶液の自動化移動、 分割容器から抽出容器へのペプチド溶液の移動、および抽出容器へのおよびそこ からの抽出溶媒の移動のための構造を有する装置を用いる、ポリペプチドの合成 に関する。これらの自動化システムは、大規模ペプチド合成での使用のために改 良されている(例えば、ソフトウェアの改良)。 合成のオリゴマーおよびポリマーの製造スキームでのこのような自動化システ ムの使用は、多くの操作をなくし、そして合成ポリマーの製造効率を高める。し かしながら、ペプトイドの製造においては、その合成工程において、多量の未使 用試薬が無駄にされている。その理由は、このような試薬が、一般に、この工程 において、(反応速度および全収率を高めるために)繰り返し過剰に使用されてい るからである。 従って、固相合成技術を用いてペプトイドオリゴマーを合成する方法および装 置であって、従来のシステムに付随した無駄をなくした方法および装置が必要と されている。 発明の要旨 本発明の１実施態様では、固相上で行う一連の反応工程を包含する化学合成を 行うための方法が提供されている。さらに特定すると、ペプトイドオリゴマーを 合成するための方法が提供されており、これは、以下の工程を包含する：(a)保 護したアミン基を有する固相を提供する工程；(b)固相上にてアミン基を脱保護 して、反応性アミンを提供する工程；(c)反応性アミンをアシルサブモノマーと 接触させることにより、アミンをアシル化して、脱離基を含むアシル化アミンを 提供する工程；(d)アシル化アミンをアミン試薬と接触させることにより、アシ ル化アミンに由来の脱離基を第一級アミンで置き換えて、N-置換モノマーおよび 脱離基副生成物を提供する工程；および(e)脱離基副生成物と共に、未使用アミ ン試薬を閉じ込め手段に再循環させて、それにより、引き続く置換反応で使用す るのに適切な再生アミン試薬を提供する工程。 他の実施態様では、粒子懸濁液中の固相粒子に固定化したオリゴマーを合成す るための装置が提供されている。この装置は、以下を包含する：反応容器；気体 および/または溶媒を頂部開口部を通って反応容器へと送出するための第一送出 手段；および反応容器の底部開口部を通って以下の操作を行うための第二送出手 段：(i)反応容器に気体を送出して、粒子懸濁液の混合を行うこと；(ii)反応容 器から、流体を除去すること；(iii)付随試薬容器から反応容器に試薬を導入す ること；および(iv)未使用試薬を反応容器から付随試薬容器へと戻すこと。この 第一および第二送出手段に接続された制御手段は、この装置の操作における制御 を行う。 他の実施態様では、粒子懸濁液中の固相粒子に固定化したオリゴマーを合成す るための装置が提供されている。この装置は、以下を包含する：反応容器；反応 容器の頂部開口部と連絡し、そして第一送出手段を通して気体および/または溶 媒の反応容器への送出を可能にする第一送出手段；試薬容器；試薬溶液および反 応容器の底部開口部と連絡し、そして試薬容器の底部開口部を通って以下の操作 を可能にする第二送出手段：(i)反応容器に気体を送出して、粒子懸濁液の混合 を行うこと；(ii)反応容器から、流体を除去すること；(iii)試薬容器から反応 容器に試薬を導入すること；および(iv)未使用試薬を反応容器から試薬容器へと 戻すこと。この第一および第二送出手段に接続された制御手段は、この装置の操 作を制御するために使用され得る。 本発明のさらなる目的、利点および新規な特徴は、一部は、以下の説明で述べ られており、そして一部は、以下を検討すると、当業者に明らかとなるか、また は本発明の実施により習得され得る。図面の簡単な説明 図１は、本発明の方法を実施する際に使用する装置の概略図である。 図２は、本発明による代替装置実施態様の絵図である。 図３は、本発明の合成システムで使用する反応容器の側面図である。 図４は、試薬再循環工程を包含するオリゴマー合成で使用され得る試薬容器の 側面図である。 発明の詳細な説明 本発明の方法の実施は、他に指示がなければ、従来の固相合成技術(これには 、ペプトイド合成、ペプチド合成および当該技術分野の範囲内の他の固相有機化 学が含まれる)を使用する。このような技術は、文献で充分に説明されている。T hompsonら(1996)「Synthesis and Applications of Small Molecule Libraries 」、Chem Rev.96:555〜600；Terrettら(1995)「Combinatorial Synthesis-The D esign of Compound Libraries and Their Application to Drug Discovery」,Te trahedron 51(30):8135〜8173；Kirt-OthmerのEncyclopedia of Chemical Techn ology；HouseのModern Synthetic Reactions；C.S.MarvelおよびG.S.Hiers'text ,ORGANIC SYNTHESIS,Collective第1巻；Oligonucieotide Synthesis(M.J.Gait編 、1984)；国際公開第WO96/40202号参照のこと。 本明細書中で引用した全ての特許、特許出願、刊行物および他の種類の参考文 献は、上記または下記のいずれであれ、その内容全体は、本明細書中で参考とし て援用されている。Ａ．定義 本発明を開示し詳細に記述する前に、本発明は、特定の方法形式、材料または 試薬に限定されず、これらは、もちろん、変えてもよいことが理解されるべきで ある。本明細書中で使用する専門用語は、特定の実施態様を記述する目的のため のみであり、限定する意図はないこともまた理解されるべきである。 本明細書および添付の請求の範囲で使用するように、単数形「a」、「an」お よび「the」は、文脈にて他に明らかに指示がなければ、複数物の指示物を包含 することに注意しなければならない。それゆえ、例えば、「a reaction vessel 」との表示は、２個またはそれ以上のこのような容器を包含し、「a solvent r eservoir」との表示は、２個またはそれ以上のレザバを包含するなど。 本明細書およびそれに続く請求の範囲では、多数の用語に対して参照がなされ 、これらは、以下の意味を有するように定義される： 本明細書中で使用する「モノマー」との用語は、オリゴマーを形成するために １個またはそれ以上の他の要素と共有結合し得る化学要素を意味する。モノマー とは、例えば、アミン、アミノ酸、ヌクレオチド、糖類、アルキレーター(alkyl ators)、求核試薬などを含むサブユニットである。 「オリゴマー」との用語は、国際公開第WO 96/40202号で記述されているよう なポリNSGおよび他のペプトイド(すなわち、N-置換ポリアミド)のようなポリマ ーを包含し、これらは、本発明の方法により生成され、任意の長さのホモポリマ ー、コポリマーおよびインターポリマーを含む。それゆえ、オリゴマーは、単一 の繰り返しモノマー単位、２個の交互のモノマー単位、互いに対してランダムお よび/または故意に間隔を開けた２個またはそれ以上のモノマー単位から構成さ れ得る。本発明を実施する際に生成したオリゴマーは、２個〜100個のモノマー 、さらに好ましくは、２個〜50個のモノマーから構成される。 「アシルサブモノマー」との用語は、反応性カルボニルまたはカルボニル等価 物および脱離基(これは、アミンによる求核置換で置換され得る)を含有するアシ ル化試薬を意味する。「カルボニルまたはカルボニル等価物」には、カルボン酸 、エステル、アミド、無水物、ハロゲン化アシルおよびイソシアネートが挙げら れるが、これらに限定されない。使用されるエステルおよびアミドは、一般に、 「反応性」形状、例えば、DIC付加物などである。このアシルサブモノマーは、 さらに、側鎖を含有し得る。適切なアシルサブモノマーには、ブロモ酢酸(BrAA) 、3-ブロモプロピオン酸、2-ブロモプロピオン酸、2-ブロモエチルイソシアネー ト、2-ブロモエチルクロロホルメート、6-フェニル-3-ブロモヘキサン酸、4-ブ ロモメチル安息香酸、4-ブロモメチル-2-メトキシ安息香酸、5-ブロモメチルピ リジン-2-カルボン酸などが挙げられるが、これらに限定されない。 「固相」との用語は、一連の反応工程が関与する化学合成の反応工程がその上 で実施され得る任意の固体支持体または基材を意図する。それゆえ、この用語は 、粒子状基材(例えば、標準的なFmoc化学合成で伝統的に使用されている樹脂)が 挙 げられ、これには、ポリスチレン樹脂および１％架橋ポリスチレン樹脂、ポリア クリルアミド樹脂、グラフト化ポリ(プロピレン)またはポリ(エチレン)樹脂、PE G-ポリスチレン樹脂などが含まれるが、これらに限定されない。Ｂ．一般方法 本発明は、ペプトイドオリゴマーを調製するための新規な方法および付随した 装置の発見に基づいている。この方法および装置は、その合成プロセス中のアミ ン試薬の再循環のために提供され、この合成プロセスは、試薬の消費を著しく少 なくする。 ペプトイドとは、一般的にタンパク質に類似した構造を有する合成N-置換ポリ アミドバイオポリマーであり、これは、新規分子の化学的に多様なライブラリを 作成するのに使用され得る。代表的なペプトイドには、N-置換グリシンのオリゴ マーが挙げられる。これらのモノマーは、t-ブチルベースの側鎖および9-フルオ レニルメトキシカルボニルα-アミン保護を包含し得る。モノマーのペプトイド オリゴマーへの構築は、現在、例えば、Zuckermannらのサブモノマー方法((1991 )J．Am．Chem．Soc．114：10646)を用いて、固相上にて行われている。また、国 際公開第WO 96/40202号を参照のこと。 ペプトイドを製造するためのサブモノマー方法では、合成は、典型的には、Ri nkアミドポリスチレン樹脂を用いて行われる(Rinkら(1987)Tetrahedron Lett．2 8 ：3787)。樹脂結合アミンは、典型的には、ジイソプロピルカルボジイミドを用 いたハロ酢酸(例えば、ブロモ酢酸)のインサイチュでの活性化により、アセチル 化される。引き続いて、この樹脂結合アセトアミド(例えば、ブロモアセトアミ ド)は、アミンの添加により、置換される。これらのアミンは、例えば、t-ブチ ルベースの保護を用いる追加の酸反応性基の酸不安定性保護を包含し得る。この ２段階サイクルは、所望数のモノマーが付加されるまで、繰り返される。このオ リゴペプトイドは、次いで、95％トリフルオロ酢酸/５％水での処理により、こ の樹脂から解離される。この合成は、自動化装置(例えば、ロボット合成機)を用 いて実施され得る。例えば、Zuckermannら(1992)Pept．Protein Res．40：498を 参照のこと。 このペプトイドを調製するためのサブモノマー方法では、一般に、その反応速 度および全体的な合成収率を高めるために、各反応工程に対して、成長している オリゴペプトイド鎖には、約0.5〜３M、好ましくは、１〜２Mの濃度で、アミン 試薬が添加される。これは、典型的には、約10〜40モル当量、さらに好ましくは 、約20モル当量に換算される。これらの試薬を過剰に使用する必要性により、こ の合成プロセスの各工程と共に、多量の未使用アミン試薬が失われるので、物質 の著しい無駄が生じる。それゆえ、本発明の第一の実施態様では、ペプトイドを 合成するためのサブモノマー方法が提供され、これは、未使用アミン試薬の再循 環および引き続いた再使用を可能にする。ペプトイド合成中に未使用アミン試薬 を再循環する性能は、特に、高分子量ペプトイドの製造において、このような試 薬の消費を著しく低下させる。 さらに特定すると、本発明のサブモノマー方法では、各モノマーの添加は、ア シル化工程(例えば、ブロモ酢酸(BrAA)のようなアシルサブモノマーの添加)およ び置換工程(例えば、アミン試薬の添加)を伴う。このペプトイド合成は、適切な 固相(例えば、アミン樹脂)を含有する粒子懸濁液を用いて、開始する。この樹脂 上のアミン基の脱保護は、適切な有機溶媒(例えば、ピペリジン/ジメチルホルム アミド(DMF))を用いて行われ、反応性アミノ樹脂を提供する。このアミノ樹脂は 、次いで、このアシルサブモノマー試薬でアシル化される。次いで、第一級アミ ンを用いて、このアシルサブモノマー脱離基の求核置換が行われ、例えば、N-置 換グリシン(NSG)モノマーが形成される。置換後、未使用アミン試薬は、引き続 く置換過程で使用するための保存容器に戻される。これらのアシル化工程、置換 工程および再循環工程は、反復様式で行われて、所望のオリゴマーが生成する。 当業者は、アミン樹脂の代わりに、基材結合アシルサブモノマーもまた、この初 期出発物質として使用され得ることを容易に理解する。このアシル脱離基のアミ ンとの引き続く置換は、それゆえ、第一工程であり、それに続いて、第二アシル サブモノマーなどでアシル化される。このサブモノマー方法は、国際公開第WO 9 6/40202号および第WO 94/06541号で記述されており、これらの刊行物の内容全体 は、本明細書中で参考として援用されている。 洗浄溶媒(例えば、ジメチルホルムアミド(DMF)およびジメチルスルホキシド(D MSO))は、一般に、アシル化工程と置換工程の間で使用される。特に、アシル化 工程を行う前に、この固相は、一般に、DMF溶媒で数回洗浄され、そしてジイソ プロピルカルボジイミド(DIC)試薬およびハロ酢酸(例えば、BrAA)試薬の添加前 に、充分に排出される。類似の様式で、各置換工程前に、この固相は、DMFおよ びDMSOで洗浄され、そしてアミン組立ブロック(building block)の添加前に、徹 底的に排出される。 この置換反応中に発生する唯一の副生成物は、１当量の脱離基副生成物(例え ば、HXであり、ここで、Xは、ハロゲン化アシル(例えば、HBr)に由来のハロゲン である)である。従って、本発明の方法では、このアミン試薬の再生は、例えば 、HX汚染物を無機塩基またはイオン交換樹脂で捕捉することにより、保存容器に て行われる。典型的には、この捕捉剤は、中和樹脂また無機塩基(例えば、KOH) を含有する；しかしながら、他の適切な試薬には、K₂CO₃、Na₃PO₄またはCa(OH)₂ ；結合試薬；塩基性アルミナ樹脂；DOWEXアニオン交換樹脂；塩基性アミノ基で 架橋した多糖類樹脂；または類似の材料が挙げられるが、これらに限定されない 。 本発明の他の実施態様では、オリゴマーを合成するための装置が提供される。 この装置は、上記サブモノマー方法を行うために使用され得、試薬(例えば、ア ミン試薬のような)を再循環するための手段を包含する。図１を参照すると、試 薬を再循環するサブモノマー合成装置は、一般に、２で示されている。この装置 は、反応容器４を包含し、この反応容器では、固相粒子で形成した粒子懸濁液６ 中にて、オリゴマーが合成される。この反応容器は、流体(気体を含めて)を受容 するための頂部開口部８、および非粒子状流体が自由に通過し得る適切な濾過手 段12をその中に配置した底部開口部10を有する。 この反応容器は、化学的な不活性および物理的な弾性について選択した任意の 適切な材料から構成され得る。それゆえ、この反応容器は、ホウケイ酸塩(例え適切な材料から構成され得る。ホウケイ酸塩材料が、一般に、好ましい。さらに 、反応容器４は、ネジ付きキャップを用いて、この容器全体にわたる液密および 圧密な流体連絡を促進するために、頂部開口部および/または底部開口部８およ び10の周囲の回りに配置した外部ネジ筋を包含し得る。あるいは、この頂部開口 部 および/または底部開口部には、肩部、蓋、または類似の密封面を設けられ得、 これは適切な蓋または摩擦型接合で適合するための任意のＯリングガスケットを 備えているかまたは備えていない。 濾過手段12は、溶媒、試薬および混合気体または駆動気体(driving gas)の排 出および/または導入を可能にしつつ、この固体支持体(例えば、その上でペプト イドを合成する樹脂)を物理的に保持する。それゆえ、この濾過手段は、その上 で化学合成を行う一般的な固体支持体を保持し得る任意の材料から構成され得る 。この濾過基材材料はまた、この反応容器内で行う化学合成で使用する試薬に対 して、化学的に不活性であるべきであり、複数回の使用にわたって、耐久性で、 再使用可能であり、一般に、変形可能でない。この濾過手段を提供するのに使用 される特定の基材は、一般に、約10μm〜約60μmの範囲のメッシュサイズを有す るが、より大きな支持体を用いる合成での使用には、それよりずっと大きなメッ シュサイズが適切であり得る。ある特定の容器では、濾過手段12は、例えば、40 〜60μmのフィルターサイズを有する粗いガラスフリット(course glass frit)の 形状である。 反応容器４の頂部開口部８には、第一送出手段が連絡しており、そして気体お よび/または１種またはそれ以上の溶媒を、この頂部開口部を経由して、この反 応容器に送出を与える。この第一送出手段は、図１で描写した送出手段のような 複数の要素から構成され得る。具体的には、この第一送出手段は、多位置バルブ 14を包含し得、これは、頂部開口部８を、導管18を経由して付随気体源16と、そ して導管24を経由して付随溶媒容器20および22と切り替え可能に連絡する。バル ブ14の第一位置への作動により、次いで、この付随気体源から反応容器４への駆 動気体の導入が可能となる。 適切な駆動気体には、固相合成で一般的に使用される不活性気体(例えば、窒 素、ヘリウム、アルゴンなど)がある。この気体源とバルブ14との間に配置した 追加バルブ26により、この反応容器への気体の導入、またはこの反応容器からの 気体の排出が可能となる。溶媒容器20および22の間に配置した他のバルブ28、お よびバルブ14により、この反応容器への溶媒および/または試薬の送出(例えば、 アシル化工程中にて、この反応容器へのジイソプロピルカルボジイミド(DIC)お よびBrAAの送出)が可能となる。 図１をさらに参照すると、装置２はまた、第二送出手段を包含し、これは、反 応容器４の底部開口部10を通って、多数の操作を行うのを可能にする。特に、こ の第二送出手段は、(i)この反応容器に気体を送出して、粒子懸濁液６の混合を 行うこと；(ii)反応容器から、溶媒および他の流体を除去すること；(iii)置換 工程中に、反応容器にアミン試薬を導入すること；および(iv)置換工程を行った 後、未使用アミン試薬を付随試薬容器へと戻すことを可能にする。 この第二送出手段は、多数の要素の代替的組み合わせを包含し得る。図１では 、この第二送出手段は、多位置バルブ30を包含し、これは、この反応容器の底部 開口部10を、第一および第二付随試薬容器(それぞれ、32および34で示す)の間で 切り替え可能に連絡する。バルブ30はまた、底部開口部10を適切な廃棄物ポート に切り替え可能に連絡する。 ペプトイドの合成のための操作において、アシル化試薬(例えば、DICおよびBr AA)および洗浄溶媒(例えば、DMFおよびDMSO)は、この反応容器にてアシル化工程 を行った後、この容器から廃棄物へと排出される。この容器の排水は、バルブ30 を第一位置(これは、この反応容器の底部を導管36を経由して廃棄物ポートに連 絡する)へと作動することにより、行われる。望ましいなら、上記のような第一 送出手段を用いて、この反応容器に、その頂部開口部８から、駆動気体が導入さ れ得る。 次いで、第一置換工程のために、バルブ30は、第二位置に作動され、これによ り、第一試薬容器32から反応容器４へのアミン試薬の送出が可能となる。このア ミン試薬は、導管38を通って、バルブ30へと移動し、そこから、濾過手段12を通 って、底部開口部10を経由して、この反応容器へと入る。追加のバルブ手段40は 、第一試薬容器32を加圧して、バルブ26の排出位置への同時の作動と共に、試薬 をこの反応容器へと追いやる。バルブ30の閉鎖位置への作動は、この置換工程の 持続中にて、このアミン試薬をこの反応容器内に保持する。この固相の混合また は攪拌は、バルブ30を他の位置(これは、混合気体源を底部開口部10に連絡する) に作動することにより、行われ得る。この混合気体は、このバルブおよび導管か ら流体を排出するための発泡剤としてだけでなく、この反応容器の内容物 を攪拌または混合するための両方に、使用され得る。 この反応容器の底部を通る試薬の送出は、濾過手段12により保持された固相粒 子のさらなる混合および攪拌を提供する。適切な時間にわたって置換が行われた 後、未使用のアミン試薬は、バルブ30を元の第二位置に作動し、そして試薬を元 の試薬容器に排出させることを可能にすることにより、試薬容器32に戻される。 この未使用試薬をその各個の元の容器に追い出すのを助けるために、この反応容 器には、頂部開口部８を経由して、駆動気体が導入され得る。さらに、試薬容器 32は、バルブ手段40を経由して排気され得、そしてこの反応容器は、バルブ26を 経由して加圧されて、この未使用試薬の戻りを助ける。この固相を、廃棄物ヘと 排出される適切な溶媒(例えば、DMF)で洗浄した後、この固相は、次のアシル化 工程のために準備される。 この試薬容器には、この置換工程中に発生した汚染副生成物(例えば、HBr)を 取り除くための捕捉剤を入れることができる。それゆえ、この試薬は、他の置換 工程での引き続く使用に利用可能である。アシル化を行って溶媒を反応容器から 排出した後、バルブ30は、第三位置(これは、第二試薬容器34から反応容器４へ の第二アミン試薬の送出を可能にする)に作動される。この第二アミン試薬は、 導管42を通ってバルブ30へと移動し、そこから底部開口部10を経由して、この反 応容器へと入る。追加のバルブ手段44は、第二試薬容器34を加圧して、試薬をこ の反応容器へと追いやる。この置換工程を行った後、未使用のアミン試薬は、第 一試薬容器に関して記述したように、第二試薬容器に戻される。本明細書を読ん だ後、当業者により容易に理解されるように、バルブおよび作動工程の類似の組 み合わせを用いて、この反応容器には、任意no数の異なる試薬容器が連絡され得 る。 図１で描写した装置２では、その機器内での流体流れは、加圧した気体送出シ ステムにより、駆動される。他の移動システムは、本発明と共に使用するのが適 切であり、例えば、当該技術分野で公知のポンプ駆動システムまたは真空駆動シ ステムがある。しかしながら、加圧気体駆動システムは、ポンプ駆動システムで 必要とするよりも少ない部品しか必要としないために、好ましい。このように、 バルブ14、28、30、40および42は、一般に有機化学合成で一般的に使用されて いる多位置電磁バルブである。これらのバルブは、さらに、本発明の方法で使用 される溶媒および有機試薬に対する耐性を与えるために、ポリテトラフルオロエ 作動は、この第一および第二送出手段に接続された制御手段の様式によって、行 われ得る。このような制御手段は、種々の多様なオリゴマー合成のためにプログ ラム化された適切なマイクロプロセッサを包含し得、また、温度、圧力および流 体レベルセンサ(これは、合成の自動化モニタリングおよびそこでの小さなエラ ーの補正を可能にする)を制御し得る。あるいは、このバルブ操作の一部または 全部は、手動で行われ得る。 導管24、36、38および42は、適切な耐薬品性の材料(例えば、ポリテトラフル れる。種々の導管、バルブおよび容器間の接合には、一般に、液密または圧密で たはネジ切り栓(これらはまた、適切な化学的に不活性な材料から構成される)が ある。 これらの試薬をこの反応容器内で混合するために提供するだけでなく、装置２ 内で液体を移動させるために、単一の加圧気体源が使用され得る。このシステム で使用される特定の気体は任意であるが、しかしながら、窒素、ヘリウムまたは アルゴンが好ましい。 オリゴマーを合成するための別の装置を、図２で描写する。装置102は、図１ の装置と同じラインに沿って操作するように設計されており、ここで、溶媒、試 薬および気体は、頂部および底部開口部を経由して反応容器に導入され、そして 未使用の試薬は、本明細書中で記述したサブモノマー方法の実施に際して、この 反応容器と保存容器の間で再循環される。 装置102は、上記のように、頂部開口部106および底部開口部108を備えた反応 容器104を有する。この反応容器には、固相粒子を含有する粒子懸濁液が導入さ れ得、例えば、引き続いた反復アシル化および置換工程が行われて、合成ペプト イドオリゴマーを生成し得る。頂部開口部106は、第一送出手段と連絡しており 、これは、気体または溶媒を、この頂部開口部を通って、この反応容器へと送出 す るために提供される。図２で描写したシステムでは、この第一送出手段は、多位 置バルブ110を包含し、これは、付随気体マニホルド(一般に、112で示す)からの 気体または第一および第二溶媒容器114および116からの第一および第二溶媒を、 それぞれこの頂部開口部を経由して、反応容器104と相互連絡するように、使用 され得る。例えば、溶媒容器114および116は、代表的なペプトイド合成における アシル化工程と置換工程の間にて、この反応容器にDMFおよびDMSO洗浄溶媒を供 給するために、使用され得る。この特定のシステム配置では、バルブ110は、こ の反応容器と連絡する共通出口118を備えた４位置電磁バルブであり得る。この 種のバルブは、この反応容器を気体で加圧するかまたは付随溶媒容器からの２種 の溶媒の１種で満たすかどうかにわたって、切り替え可能な制御を与える。 装置102は、さらに、複数の試薬容器120〜134を包含し、これらは、選択的に 、第二送出手段(これは、この反応容器の底部開口部108と流体連絡している)を 経由して、反応容器104と連絡される。各試薬容器は、単一の試薬を収容するの に使用される。この方法で使用するための試薬には、アシル化試薬(例えば、DIC およびBrAA)、および数個の異なる置換試薬(例えば、アミン１〜６)が挙げられ る。 図２で描写した第二送出手段は、３個の多位置バルブの操作可能な組み合わせ から構成される。特に、この反応容器の底部開口部108と連絡している一般的な 入口を備えた多位置バルブ136は、気体マニホルド112からの混合気体流をこの反 応容器の底部開口部を通って泡立たせるか、または試薬容器120〜134の１個から の選択試薬を、第一または第二付随多位置バルブ138および140を経由して送出す るかどうかにわたって、切り替え可能な制御を与える。各付随バルブ138および1 40はまた、それぞれ、ポート142および144を有し、これらは、廃棄物に通じてお り、反応容器104を排水するための２個の代替経路を与える。 装置102の操作は上記のように進行し、ここで、種々の組み合わせのバルブの 作動により、溶媒導入および反応容器からの除去、および試薬(例えば、アミン) の導入、および選択した試薬容器からまたはそれへの未使用試薬の引き続く戻し が可能となる。これらのバルブの作動は、手動であり得、または制御手段(例え ば、マイクロプロセッサ)により制御され得る。 １つの代表的なアシル化および置換系列は、以下のようにして、装置102を用 いて行われる。バルブ110の第一位置への作動および反応容器の排気ポート146を 通る排気により、溶媒容器114からのDMF溶媒が反応容器104に添加されて、この 容器および固相がリンスされ、それにより、この溶媒を反応容器への送出を可能 にする。次いで、バルブ110が第二位置へと移動されて、マニホルド112から気体 の導入を可能にし、バルブ136および138が作動されて、使用した溶媒のための排 水路を与える。 DMF溶媒での充分なリンスに続いて使用済み溶媒の排水を行った後、各試薬を 選択するための２個の異なる位置間でのバルブ140の作動、この反応容器への適 切な送出経路を与えるための第一位置へのバルブ136の作動、および排気ポート1 46を通る反応容器の排気により、それぞれ、試薬容器132および134からのDICお よびBrAAアシル化試薬は、底部開口部108を経由して、反応容器140に導入される 。これらのアシル化試薬を添加した後、バルブ136は第二位置に作動されて、こ の反応容器の底部開口部を通る混合気体と連絡し、この固相の混合および攪拌を 提供し得る。 アシル化が完結した場合、バルブ136は元の第一位置に作動され、そしてバル ブ140は、第三位置に作動されて、廃棄物ポート144を経由した廃棄物への排水経 路を与える。この反応容器、およびその中に含まれるアシル化固体基材は、次い で、上記DMF溶媒の数回の添加により洗浄され、引き続いて、溶媒容器116からの DMSO溶媒で洗浄される。容器116からの溶媒の送出は、バルブ110を第三位置に作 動し、そして排気ポート146の作動(これらの組み合わせにより、この溶媒の反応 容器への送出を可能にする)により、次いで、バルブ110を元の第二位置に作動し てマニホルド112から気体の導入を可能にし、そしてバルブ136および138を作動 して使用済み溶媒のための排水経路を与えることの組み合わせにより、行われる 。 一旦、この固相を洗浄し排出すると、試薬容器120からのアミン試薬を用いた 置換が行われる。特に、このアミン試薬は、バルブ138の第一位置への作動およ びバルブ136の元の第一位置への作動により、この反応容器への送出経路を与え ることによって、底部開口部108を経由して、反応容器104へと導入される。この 試薬の適切な混合は、バルブ136を第二位置に作動してこの混合気体を導入す ることにより、上のように行われ得る。次いで、未使用アミン試薬は、バルブ13 6および138をそれらの第一位置に作動すること、およびこの反応容器を第一送出 手段を用いて加圧することにより、容器120へと戻される。 上記方法を実施するために、多数の異なるバルブの組み合わせが使用され得る 。さらに、所望のペプトイドオリゴマーが得られるまで、１種またはそれ以上の 異なるアミン試薬を用いる追加サイクルが使用され得る。最終の置換反応および 溶媒リンスの後、この固相は、ジクロロメタンで洗浄され、次いで、開裂される か、または真空中にて乾燥され、次いで、開裂前に保存され得る。 装置102で使用する材料の選択は、再度、本発明のサブモノマー方法で使用す る溶媒および試薬と接触する不活性で弾性の表面を与える必要性により、決定さ れる。このシステム全体にわたって流体の移動を方向付けするために、単一の気 体(例えば、加圧窒素)源が使用され得る。気体マニホルド112は、それゆえ、任 階圧力制御器または類似の制御手段によって、このマニホルドに供給され得る。 さらに、このシステムの種々のバルブおよび導管を通って１種またはそれ以上の 溶媒を方向付けして、残留試薬を除去するため、そして下流または引き続く操作 への持ち越しまたは汚染を防止するために、多数の異なるバルブの組み合わせが 使用され得る。 図１および２で描写した合成システムでは、多数の異なる反応容器形状が使用 され得る。しかしながら、１つの好ましい反応容器形状は、図３で描写されてい る。この反応容器は、一般に、202で示され、円筒形上部204、円筒形下部206お よびこの上部および下部を接続する肩部208を有する。上部204は、下部206より も大きな直径を有し、そして肩部208は、脱凝集用肩部を提供し、これは、固相 粒子の凝集物の分散を助け、そしてその底部開口部212を通って反応容器へと入 る混合気体の泡立ちにより引き起こされる発泡を防止する。 この反応容器の底部では、濾過手段214は、底部開口部212を覆っている。濾過 手段214は、この底部開口部を通る非粒子状流体の通過を可能にするが、リンス および排水操作中にて、成長しているオリゴマーをこの反応容器に保持するのに 適切な多孔性を有するように選択される。図３で描写した実施態様では、この 濾過手段は、40mの多孔性を有するガラスフリットから構成され、これは、およ そ100mまたはそれ以上の直径を有する固相樹脂を保持するのに充分である。濾過 手段214はまた、この固相スラリーの急速な排水を促進するのに充分な表面積を 与えるように、選択される。 この反応容器の下部206もまた、底部開口部212で最小に達する低下した直径を 有する拡散部分を含有する。この拡散部分は、この容器の底部を通って泡立つ混 合気体を、このフィルターの中心部のごく一部ではなく、濾過手段214の全表面 にわたって固相と接触し混合することを可能にする。この反応容器の底部開口部 の回りに配置された外部ネジ筋は、導管および/または送出手段との確かな液密 および圧密接合を可能にする。 この反応容器の頂部開口部210は、蓋218により閉じられ、これは、一般に、22 0で示す複数の連絡ポートを包含する。これらのポートは、導管、送出手段、パ ージバルブおよび任意の測定装置(例えば、圧力変換器、温度計など(これらは、 上記のようにして、この容器内の圧力および温度をモニターすることを可能にす る))との液密および圧密接合を可能にする。 蓋218は、噛み合いフランジ222および224(これらは、それぞれ、この図面で示 すように、この容器および蓋上に配置されている)と協同する弾性接合手段によ り、この反応容器に取り付けられ得る。適切な密封ガスケット(例えば、Ｏリン グ)は、圧密シールを与えるのに使用され得る。 一部のオリゴマー合成では、高温にて、１個またはそれ以上の工程を行うのが 望ましくあり得る。従って、本明細書中で上で記述した装置形状のいずれかでは 、この反応容器にて温度変化を起こすために、任意の温度制御装置が使用され得 る。この反応容器の温度の正確な制御を提供するために、例えば、Peltier装置 が反応容器(例えば、４、104または202)の外側に接触し得る。類似の様式で、反 応容器内で100℃までの変化する温度を提供するために、他の温度制御手段(例え ば、加熱コイルまたは要素)が使用され得る。任意の温度モニター設備は、上記 のようにして使用され得、加熱または冷却は、マイクロプロセッサにより、また はこの装置の操作者による手動で、制御され得る。 図１および２で描写した合成システムでは、種々の異なる試薬容器形状もまた 、 使用され得る。本発明の方法および合成システムで使用する１つの好ましい試薬 容器形状は、図４で示されている。試薬容器302は、頂部開口部304を有し、これ には、付随の蓋と連結するために、その外周の回りに、密封面306が設けられて いる。蓋308は、対応する密封面310を含み、これは、この試薬容器の頂部で、密 封面306に対して閉じたとき、圧密シールを与えるように使用される。 蓋308に配置された２個の連絡ポート312および314は、この蓋を、適切な弾性 コネクタ(例えば、バネクリップ、張りつめたクランプなど)により、この試薬容 器に接合したとき、この試薬容器の内容物へのアクセスを提供する。圧密シール を確実にするために、Ｏリングガスケットもまた、設けられ得る。連絡ポート31 2内には、第一導管316が配置されており、これは、そこからの試薬の送出のため にこの容器を加圧するのに使用する気体源への接続のための接合リード(couplin g lead)を提供する。連絡ポート314内には、第二導管318が配置されており、実 質的に、試薬容器302の底部320まで伸長している。導管318は、この試薬容器の 内容物を、図１および２の論述を参照して上で記述した第二送出手段と連絡する 。操作では、この試薬は、試薬容器302を導管316を経由して適切な駆動気体で加 圧することを可能にすることにより、そしてこの試薬を導管318からこのシステ ムへと通すことにより、反応容器への送出のために合成システムへと引き上げら れる。試薬容器302の底部320は、この試薬容器内に含まれる到達不可能な試薬の 容積を最小にするために、実質的にテーパ状形状または円錐形状を有するように 構成され得る。 例えば、アミン試薬を用いて反応(例えば、置換)を行った後、未使用試薬は、 副生成物である汚染物と共に、例えばこの反応容器を導管316を経由して排気し 戻った試薬を集めることにより、逆置換操作を用いて、この容器へと戻される。 一旦、この試薬容器に戻ると、汚染する副生成物(例えば、HBr)は、適切な捕捉 剤を用いて取り除かれ得る。 この捕捉剤は、典型的には、中和樹脂または有機塩基(例えば、KOH)である。 しかしながら、他の適切な試薬には、K₂CO₃、Na₃PO₄またはCa(OH)₂；結合試薬； 塩基性アルミナ樹脂；DOWEXアニオン交換樹脂；塩基性アミノ基を有する架橋し た多糖類樹脂；または類似の材料が挙げられるが、これらに限定されない。 この試薬容器に直接添加され得る。このような場合には、導管318は、適切な試 薬濾過手段322を用いて、その最も下流の部分に取り付けられ得る。このような 濾過手段322は、一般に、10〜50mのフィルターサイズを有する円筒形ステンレは、この装置の配管およびハードウェアの残りの部分(それが、この合成システ ムの残りの部分を汚染および/またはこのシステムの物理的な閉塞を引き起こし 得る場合)へのこの捕捉剤の移動を防止する。 この試薬容器にて、細かい粒子サイズを有する捕捉剤を使用するとき、多数の 代替濾過方法が利用され得る。例えば、捕捉剤の閉鎖パケット(packet)(ここで 、このパケットは、非粒子状流体に対して浸透性である)を設けられ得るが、こ のパケットからの試薬の移動を制限するために、相当に小さな細孔またはメッシ ュサイズを有する。この特定の方法は、濾過手段322の設備と連結し得るか、ま たはその適切な位置で使用され得る。 本発明の方法およびシステムで使用される試薬容器(例えば、容器302)は、使 用する特定の試薬および行うオリゴマー合成に依存して、多数の異なる容量規模 で設けられ得る。１つの好ましい試薬容器は、１リットルの試薬溶液を取り扱う ように設計されている。単一アミノ基を含有する50マーペプトイド分子の合成で は、例えば、ここで、この合成は、１〜３Mアミン試薬溶液を用いて、150mL反応 容器中で行われ、本発明の再循環の特徴を考慮すると、およそ800mLのこのアミ ン溶液が必要である。それゆえ、1000mLのこのアミン試薬を含有するペプトイド 合成に使用するための反応容器の準備により、50マーペプトイドの合成で必要な 試薬の最大算出容量をおよそ25％上回っているので、合成において、ある程度の 融通性を提供する。 本発明は、その好ましい特定の実施態様に関連して記述されているものの、前 述の記述は、本発明を例示することを意図しており、本発明の範囲を限定する意 図ではないことが理解されるべきである。本発明の範囲内の他の局面、利点およ び改良は、本発明が属する当業者に明らかとなる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 トラウング，キート アメリカ合衆国 カリフォルニア 94662 ―8097，エミリービル，ピー．オー．ボッ クス 8097，インテレクチュアル プロパ ーティー―アール440，カイロン コーポ レイション内 (72)発明者 デローズ，セリナ アメリカ合衆国 カリフォルニア 94662 ―8097，エミリービル，ピー．オー．ボッ クス 8097，インテレクチュアル プロパ ーティー―アール440，カイロン コーポ レイション内 (72)発明者 クエイ，ケイティ アメリカ合衆国 カリフォルニア 94662 ―8097，エミリービル，ピー．オー．ボッ クス 8097，インテレクチュアル プロパ ーティー―アール440，カイロン コーポ レイション内 (72)発明者 オウイングズ，マシュー アメリカ合衆国 カリフォルニア 94662 ―8097，エミリービル，ピー．オー．ボッ クス 8097，インテレクチュアル プロパ ーティー―アール440，カイロン コーポ レイション内 (72)発明者 バー ステッグ，ベンジャミン アメリカ合衆国 カリフォルニア 94662 ―8097，エミリービル，ピー．オー．ボッ クス 8097，インテレクチュアル プロパ ーティー―アール440，カイロン コーポ レイション内 (72)発明者 チェン，ヘンリー アメリカ合衆国 カリフォルニア 94662 ―8097，エミリービル，ピー．オー．ボッ クス 8097，インテレクチュアル プロパ ーティー―アール440，カイロン コーポ レイション内

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ペプトイドオリゴマーを合成するための方法であって、該方法は、以下の 工程を包含する： (a)保護したアミノ基を有する固相を提供する工程； (b)該固相上にて該アミノ基を脱保護して、反応性アミンを提供する工程； (c)該反応性アミンをアシルサブモノマーと接触させることにより、該アミン をアシル化して、脱離基を含むアシル化アミンを提供する工程； (d)該アシル化アミンをアミン試薬と接触させることにより、該アシル化アミ ンに由来の該脱離基をアミンで置き換えて、N-置換モノマーおよび脱離基副生成 物を提供する工程；および (e)該脱離基副生成物と共に、未使用アミン試薬を閉じ込め手段に再循環させ て、それにより、引き続いた置換反応で使用するのに適切な再生アミン試薬を提 供する工程。 ２．前記閉じ込め手段が、前記脱離基副生成物を捕捉し得る試薬を含有する、 請求項１に記載の方法。 ３．前記アシルサブモノマーが、ハロ酢酸である、請求項１に記載の方法。 ４．前記ハロ酢酸が、ブロモ酢酸である、請求項３に記載の方法。 ５．工程(d)にて、前記アミンが、第一級アミンである、請求項１に記載の方 法。 ６．工程(d)にて、前記第一級アミンの少なくとも約10倍過剰量が、前記アシ ル化アミンと接触される、請求項５に記載の方法。 ７．前記捕捉剤が、無機塩基またはイオン交換樹脂を含む、請求項２に記載の 方法。 ８．前記捕捉剤が、KOHである、請求項７に記載の方法。 ９．前記ペプトイドが、N-置換グリシンのオリゴマーである、請求項１に記載 の方法。 10．ペプトイドオリゴマーを合成するための方法であって、該方法は、以下の 工程を包含する： (a)そこに結合したアシルサブモノマーを含有する固相を提供する工程であっ て、ここで、該アシルサブモノマーは、脱離基を含有する； (b)該アシルサブモノマーをアミン試薬と接触させることにより、該アシルサ ブモノマーに由来の該脱離基をアミンで置き換えて、該アシルサブモノマーに結 合したアミン基を提供する工程；次いで (c)該脱離基副生成物と共に、未使用アミンを閉じ込め手段に再循環させて、 それにより、引き続いた置換反応で使用するのに適切な再生アミン試薬を提供す る工程。 11．前記閉じ込め手段が、前記脱離基副生成物を捕捉し得る試薬を含有する、 請求項10に記載の方法。 12．粒子懸濁液中の固相粒子に固定化したオリゴマーを合成するための装置で あって、該装置は、以下を包含する： (a)反応容器であって、該反応容器は、流体および気体を受容するための頂部 開口部、および非粒子状流体が自由に通過し得る濾過手段を備えた底部開口部を 有する； (b)気体および/または溶媒を該頂部開口部を通って該反応容器へと送出するた めの第一送出手段； (c)該底部開口部を通って以下の操作を行うための第二送出手段：(i)該反応容 器に気体を送出して、該粒子懸濁液の混合を行うこと；(ii)該反応容器から、流 体を除去すること；(iii)付随試薬容器から該反応容器に試薬を導入すること； および(iv)未使用試薬を該反応容器から該付随試薬容器へと戻すこと；および (d)該第一および第二送出手段の該操作を制御するための制御手段であって、 該制御手段は、該第一および第二送出手段に接続されている。 13．前記第二送出手段が、各個の試薬容器からおよびそこへ試薬を送出および 引き続いて戻すことを可能にするために、２個またはそれ以上の別個の付随試薬 容器間にて、前記反応容器の前記底部開口部と切り替え可能に連絡するように使 用され得る、請求項12に記載の装置。 14．前記第二送出手段が、多位置バルブの操作可能な組み合わせを包含し、該 多位置バルブが、前記反応容器の前記底部開口部を、気体源、廃棄物ポートおよ び２個またはそれ以上の付随試薬容器と連絡する、請求項13に記載の装置。 15．前記第一送出手段が、前記反応容器の前記頂部開口部を２個またはそれ以 上の付随溶媒源と切り替え可能に連絡するように使用され得る、請求項13に記載 の装置。 16．前記第一送出手段が、多位置バルブの操作可能な組み合わせを包含し、該 多位置バルブが、前記反応容器の前記頂部開口部を、気体源および２個またはそ れ以上の付随溶媒源と連絡する、請求項15に記載の装置。 17．前記反応容器濾過手段が、ガラスフリットを含む、請求項12に記載の装置 。 18．前記反応容器が、円筒形上部、円筒形下部、および該上部と該下部とを接 続する肩部を包含する、請求項17に記載の装置。 19．前記反応容器の前記上部が、該容器の前記下部よりも大きな直径を有する 、請求項18に記載の装置。 20．前記反応容器の前記肩部が、前記粒子溶液のための脱凝集面を提供する、 請求項19に記載の装置。 21．前記制御手段が、前記第一および第二送出手段の作動を制御して前記装置 内での気体および流体の運動を方向付けるマイクロプロセッサである、請求項12 に記載の装置。 22．さらに、温度制御手段を包含し、該温度制御手段が、前記反応容器と操作 可能に接触され、そして該反応容器内の前記粒子懸濁液の温度を制御し得る、請 求項12に記載の装置。 23．粒子懸濁液中の固相粒子に固定化したオリゴマーを合成するための装置で あって、該装置は、以下を包含する： (a)反応容器であって、該反応容器は、流体および気体を受容するための頂部 開口部、および非粒子状流体が自由に通過し得る濾過手段を備えた底部開口部を 有する； (b)該反応容器の該頂部開口部と連絡している第一送出手段であって、該手段 は、気体および/または溶媒の該頂部開口部を通って該反応容器への送出を可能 にする； (c)試薬溶液を受容し送出するための試薬容器であって、該試薬容器は、第一 開口部を有する； (d)該試薬容器および該反応容器の該底部開口部と連絡している第二送出手段 であって、該手段は、該底部開口部を通る以下の操作を可能にする：(i)該反応 容器に気体を送出して、該粒子懸濁液の混合を行うこと；(ii)該反応容器から、 流体を除去すること；(iii)該試薬容器から該反応容器に試薬を導入すること； および(iv)未使用試薬を該反応容器から該試薬容器へと戻すこと；ならびに (e)該操作を制御するための制御手段であって、該制御手段は、該第一および 第二送出手段に接続されている。 24．さらに、前記第二送出手段と連絡する２個またはそれ以上の別個の試薬容 器を包含する、請求項23に記載の装置。 25．前記第二送出手段が、各個の試薬容器からおよびそこへ試薬を送出および 引き続いて戻すことを可能にするために、前記２個またはそれ以上の別個の試薬 容器間にて、前記反応容器の前記底部開口部と切り替え可能に連絡するように使 用され得る、請求項24に記載の装置。 26．前記第二送出手段が、多位置バルブの操作可能な組み合わせを包含し、該 多位置バルブが、前記反応容器の前記底部開口部を、気体源、廃棄物ポートおよ び前記２個またはそれ以上の試薬容器と連絡する、請求項25に記載の装置。 27．前記第一送出手段が、前記反応容器の前記頂部開口部を、２個またはそれ 以上の付随溶媒源と切り替え可能に連絡するように使用され得る、請求項23に記 載の装置。 28．前記第一送出手段が、多位置バルブの操作可能な組み合わせを包含し、該 多位置バルブが、前記反応容器の前記頂部開口部を、気体源および２個またはそ れ以上の付随溶媒源と連絡する、請求項27に記載の装置。 29．前記試薬容器が、その中に前記第一開口部を備えた頂端およびテーパ状底 端を有する実質的に円筒形の本体、該頂端の該第一開口部を密封的に覆う蓋、お よび該蓋内に配置され前記反応容器へと伸長している導管を包含し、該導管が、 該反応容器内に配置された第一末端および該反応容器蓋から伸長して前記第二送 出手段と連絡している第二末端を包含する、請求項23に記載の装置。 30．前記試薬容器が、閉じ込め手段内に配置された捕捉剤を含有し、該閉じ込 め手段が、該捕捉剤の前記反応容器導管への通過を防止する、請求項29に記載の 装置。 31．前記試薬容器が、さらに、前記導管の前記第一末端にて、試薬濾過手段を 包含し、非粒子状試薬流体が自由に通過し得る、請求項29に記載の装置。 32．前記試薬容器が、粒子状捕捉剤を含有する、請求項31に記載の装置。 33．前記粒子状捕捉剤が、中和樹脂である、請求項32に記載の装置。 34．前記中和樹脂が、KOHを含む、請求項33に記載の装置。 35．前記試薬濾過手段が、ポリテトラフルオロエチレンフリットを含む、請求 項31に記載の装置。 36．さらに、温度制御手段を包含し、該温度制御手段が、前記反応容器と操作 可能に接触され、そして該反応容器内の前記粒子懸濁液の温度を制御し得る、請 求項23に記載の装置。