JP2001526887A

JP2001526887A - マトリクス顆粒

Info

Publication number: JP2001526887A
Application number: JP2000525532A
Authority: JP
Inventors: ティーベッカー，ナサニエル; アイジュニアクリステンセン，ロバート; エスグリーン，トーマス
Original assignee: ジェネンコアインターナショナルインコーポレーテッド
Priority date: 1997-12-20
Filing date: 1998-12-18
Publication date: 2001-12-25
Also published as: CA2313168A1; NZ505300A; ATE341619T1; CN1282370A; KR20010040305A; DE69836098D1; CZ302332B6; EP1037968B2; BR9813766A; AU752879B2; PL342710A1; DE69836098T3; CN1242060C; AU2006199A; WO1999032613A1; DE69836098T2; DK1037968T4; EP1037968A1; EP1037968B1; CZ20002307A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、タンパク質コアを有する顆粒に関する。このタンパク質コアは、糖または糖アルコール、および多糖類またはポリペプチドなどの構造剤の混合物と混合されたタンパク質を含有するタンパク質マトリクスを有する。このタンパク質マトリクスは、種粒子のまわりに層として設けられるか、またはタンパク質顆粒は均質なものから形成されてもよい。タンパク質は、酵素またはホルモンなどの治療用タンパク質であってよい。本発明はさらに、そのような顆粒の製造方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の背景ホルモンのような薬学的に重要なタンパク質や、酵素のような工業的に重要な
タンパク質などのタンパク質は広く利用されつつある。酵素は、例えばでんぷん
産業、酪農産業、洗剤産業のようないくつかの産業分野で使用される。洗剤産業
において、酵素、特にタンパク質分解酵素の使用にともない、洗剤工場の労働者
の間に工場衛生に対する意識が芽生えたということはよく知られている。これは
特に、現在出回っている酵素は粉塵を生じるため、それが原因で健康が損なわれ
る恐れがあるためである。

【０００２】洗剤産業に酵素が導入されて以来、酵素を粒状化しコーティングする技術につ
いては業界で多くの開発がなされてきた。

【０００３】米国特許第４，１０６，９９１号は、酵素顆粒を製造するための改善された方
法を記載している。この方法では、粒状化した組成物内に、この組成物全体の乾
燥重量に対して２〜４０重量パーセントの量の細かく切断されたセルロース繊維
を含ませる。この米国特許はさらに、この顆粒の粒子をコーティングするのにろ
う製の物質を使用できると記載している。

【０００４】米国特許第４，６８９，２９７号は粒子を含有する酵素を記載している。この
粒子は、最長部分の長さが１５０〜２０００ミクロンである粒状の水分散性コア
を有する。コア粒子のまわりには、コア粒子の重量に対して１０〜３５重量パー
セントの酵素の均一な層が形成されている。また、この酵素層のまわりには、高
分子の薄膜形成水溶性または水分散性コーティング剤の層が均一に形成されてい
る。酵素およびコーティング剤の混合物は、コア粒子に対して２５〜５５重量パ
ーセントである。この特許に記載のコアの材料は、粘土、コーンスターチの層で
包みさらにその上からデキストリンでコーティングされた糖結晶、凝集化ジャガ
イモでんぷん、粒状塩、凝集化クエン酸三ナトリウム、パン結晶化塩化ナトリウ
ム薄片、ベントナイト顆粒または小球、ベントナイト含有顆粒、カオリンおよび
ケイソウ土またはクエン酸ナトリウム結晶などである。薄膜形成材料は、脂肪酸
エステル、アルコキシル化アルコール、ポリビニルアルコールまたはエトキシル
化アルキルフェノールなどである。

【０００５】米国特許第４，７４０，４６９号は酵素顆粒組成物を記載している。この酵素
顆粒組成物は、１〜３５重量パーセントの酵素と、長さが平均１００〜５００ミ
クロンで繊度が０．０５〜０．７デニールである０．５〜３０重量パーセントの
合成繊維材と、残りの量の増量剤または充填剤とから実質的になる。この顆粒組
成物はさらに、ポリエチレングリコールなどの溶融ろう製材料、および必要に応
じて二酸化チタンなどの着色料を含有する。

【０００６】米国特許第５，３２４，６４９号は、コア、酵素層および外側コーティング層
を有する酵素含有顆粒を記載している。酵素層、および必要に応じてコアおよび
外側コーティング層はビニルポリマーを含有する。

【０００７】国際特許出願公開第ＷＯ９１／０９９４１号は、製剤を含有する酵素を記載し
ている。製剤を含有することにより、酵素活量の少なくとも５０パーセントが酵
素結晶として製剤中に存在する。製剤はスラリーまたは粒状である。

【０００８】国際特許出願公開第ＷＯ９７／１２９５８号は、微粒子酵素組成物を記載して
いる。顆粒は流動層凝集により形成され、その結果酵素によってコーティングさ
れ結合剤によって互いに結合された、多数の担体または種粒子を有する顆粒とな
る。

【０００９】流動層コータで粒状酵素を調製する公知の方法の２つの例として、流動層凝集
法および流動層スプレーコーティング法がある。流動層凝集法では、１種類以上
の酵素および結合剤を微細な粉末状担体固体にスプレーする。この粉末状担体固
体は担体粒子を凝集することによって大きくなる。これらの凝集体において、結
合剤および酵素は、複数の担体粒子を不揃いな寸法および形状の顆粒に付着させ
るのに役立つ。流動層スプレーコーティング法では、酵素は均一なコア粒子のま
わりに、必要に応じて結合剤とともに層を形成する。

【００１０】特に漂白剤含有洗剤に使用された場合、高温多湿下で安定性のより高い酵素顆
粒を製造することが望まれている。従来の流動層スプレーコーティングされた酵
素顆粒は、顆粒表面付近に比較的薄い層として形成された酵素を含有する。この
ような形態では酵素はより脆弱になるため、取扱いおよび輸送作業中に顆粒から
剥離して濃縮層となる。その結果、作業環境中に酵素エアゾールが飛散し易くな
りまた飛散レベルも高くなる。またこのような形態では酵素はより脆弱になるた
め、湿気の浸透や不活性化物質によって侵食されてしまう。

【００１１】しかしながら、（上述のように）業界においてなされたこのような開発を考慮
しても、さらに有利な特性を有する粉塵の少ない酵素顆粒は相変わらず必要とさ
れ続けている。酵素粒状化産業においてさらに要求される有利な特性とは、残滓
の少ない顆粒配合（ここで残滓が少ないとは、衣服または他の素材に著しい未溶
解残滓が残りにくいと定義される）、および例えば過ホウ酸ナトリウムまたは過
塩素酸ナトリウムなどの過酸化漂白剤を含有するような、漂白剤含有洗剤製剤に
貯蔵した場合の安定性がより高いことである。これら所望の特徴をすべて同時に
達成することは特に困難である。なぜなら、例えば繊維状セルロースまたはカオ
リンなどの多くの遅延放出剤または低粉塵剤のために不溶解性残滓が後に残るか
らである。

【００１２】このような状況において、例えば、粉塵となりにくく、洗剤中に貯蔵された時
に安定であり、サイズ分布を制御して容易に製造できるという要件を同時に満た
す洗剤酵素顆粒が必要とされている。取扱いや洗剤に混合するための良好な流動
性、および一旦洗剤に配合されたあとの凝離および沈殿に対する耐性を与えるた
めに、サイズ分布を制御した顆粒が望ましい。制御された粒子サイズ分布および
均一な粒子形状もまた、粉塵の少ない顆粒を得るには重要な要素である。

【００１３】従って本発明の目的は、粉塵が少なく、残滓が少なくかつ可溶性の高い、特に
漂白剤含有洗剤において高い安定性を有する酵素顆粒を提供することにある。本
発明の目的は又、そのような改善された顆粒の製造方法に関する。

【００１４】発明の概要本発明は、タンパク質マトリクスを有するタンパク質コアを含む顆粒を提供す
る。このタンパク質マトリクスは、糖または糖アルコールおよび構造剤の混合物
と混合されたタンパク質を含有する。必要に応じて、このタンパク質コアのまわ
りにバリア層を形成するか、またはタンパク質コアにバリア材料を含ませてもよ
い。さらに必要に応じて、種粒子、タンパク質マトリクスおよび／またはバリア
層のまわりにコーティングを施してもよい。構造剤は好ましくは多糖類またはポ
リペプチドである。

【００１５】本発明はまた、種粒子のまわりに層として形成されたタンパク質マトリクスを
有するタンパク質コアを含む顆粒を提供する。このタンパク質マトリクスは、糖
または糖アルコールおよび構造剤の混合物と混合されたタンパク質を含有する。
必要に応じて、タンパク質コアのまわりにバリア層を設けるか、バリア材料をタ
ンパク質コアに含ませてもよい。さらに必要に応じて、種粒子、タンパク質マト
リクスおよび／またはバリア層のまわりにコーティングを施してもよい。構造剤
は好ましくは多糖類またはポリペプチドである。

【００１６】本発明はまた、酵素マトリクスを有する酵素コアを含む顆粒を提供する。この
酵素マトリクスは、糖または糖アルコールおよび構造剤の混合物と混合された酵
素を含有する。必要に応じて、酵素コアのまわりにバリア層を設けるか、または
バリア材料を酵素コアに含ませてもよい。さらに必要に応じて、種粒子、酵素マ
トリクスおよび／またはバリア層のまわりにコーティングを施してもよい。構造
剤は好ましくは多糖類またはポリペプチドである。

【００１７】本発明はさらに、種粒子のまわりに層として形成された酵素マトリクス有する
構想コアを含む顆粒を提供する。この酵素マトリクスは、糖または糖アルコール
および構造剤の混合物と混合された酵素を含有する。必要に応じて、酵素コアの
まわりにバリア層を設けるか、バリア材料を酵素コアに含有させてもよい。さら
に必要に応じて、種粒子、酵素マトリクスおよび／またはバリア層のまわりにコ
ーティングを施してもよい。構造剤は好ましくは多糖類またはポリペプチドであ
る。

【００１８】本発明はさらに、上述の顆粒の製造方法を提供する。この方法は、種粒子を製
造する工程、糖または糖アルコールおよび構造剤と混合されたタンパク質を含有
するタンパク質マトリクスで種粒子をコーティングする工程を有する。必要に応
じて、バリア層をタンパク質コアのまわりに設けてもよい。さらに必要に応じて
種粒子、タンパク質マトリクスおよび／またはバリア層にコーティングを施して
もよい。

【００１９】本発明はさらに、上述の顆粒を製造する方法を提供する。この方法は、糖また
は糖アルコールおよび構造剤と混合されたタンパク質を含有する均質タンパク質
マトリクスコアを製造する工程を有する。必要に応じて、タンパク質コアのまわ
りにバリア層を設けるか、タンパク質コアにバリア材料を含有させてもよい。さ
らに必要に応じて、種粒子、タンパク質マトリクスおよび／またはバリア層にコ
ーティングを施してもよい。

【００２０】発明の詳細な説明本発明の１つの実施の形態は、タンパク質マトリクスを有するタンパク質コア
を含有する顆粒に関する。このタンパク質マトリクスは糖または糖アルコールお
よび構造剤の混合物と混合されたタンパク質を含有する。必要に応じて、酵素コ
アのまわりにバリア層を設けるか、酵素コアにバリア材料を含有させてもよい。
さらに必要に応じて、種粒子、酵素マトリクスおよび／またはバリア層のまわり
にコーティングを施してもよい。構造剤は好ましくは多糖類またはポリペプチド
である。

【００２１】本発明の他の実施の形態は、種粒子のまわりに層として形成されたタンパク質
マトリクスを有するタンパク質コアを含有する顆粒に関する。このタンパク質マ
トリクスは糖または糖アルコールおよび構造剤の混合物と混合されたタンパク質
を含有する。必要に応じて、酵素コアのまわりにバリア層を設けるか、酵素コア
にバリア材料を含有させてもよい。さらに必要に応じて、種粒子、酵素マトリク
スおよび／またはバリア層のまわりにコーティングを施してもよい。構造剤は好
ましくは多糖類またはポリペプチドである。

【００２２】本発明のさらに他の実施の形態は、酵素マトリクスを有する酵素コアを含有す
る顆粒に関する。この酵素マトリクスは糖または糖アルコールおよび構造剤の混
合物と混合された酵素を含有する。必要に応じて、酵素コアのまわりにバリア層
を設けるか、または酵素コアにバリア材料を含有させてもよい。さらに必要に応
じて、種粒子、酵素マトリクスおよび／またはバリア層のまわりにコーティング
を施してもよい。構造剤は好ましくは多糖類またはポリペプチドである。

【００２３】本発明のさらに他の実施の形態は、種粒子のまわりに層として形成された酵素
マトリクスを有する酵素コアを含有する顆粒に関する。この酵素マトリクスは、
糖または糖アルコールおよび構造剤の混合物と混合された酵素を含有する。必要
に応じて、酵素コアのまわりにバリア層を設けるか、または酵素コアにバリア材
料を含ませてもよい。さらに必要に応じて、種粒子、酵素マトリクスおよび／ま
たはバリア層にコーティングを施してもよい。構造剤は好ましくは多糖類または
ポリペプチドである。

【００２４】「タンパク質コア」「酵素コア」または「コア」はタンパク質マトリクスを有
し、例えば酵素コアの場合は酵素マトリクスを有する。マトリクスはコア全体に
ついて均質なものから形成されているか、または種粒子のまわりに層として形成
されている。種粒子とマトリクスとの間またはマトリクスとバリア層との間には
、例えばポリビニルアルコール（ＰＶＡ）のコーティングなどの１つ以上の層が
存在する。

【００２５】酵素マトリクスが層として上に形成される種粒子は不活性粒子であり、無機塩
、糖、糖アルコール、有機酸または塩などの有機小分子、粘土または珪酸塩など
のミネラル、またはこれらを２つ以上組み合わせたものである。種粒子に添加す
るのに適した可溶性成分としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸アンモ
ニウム、硫酸ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、尿素、クエン酸、クエン酸塩
、ソルビトール、マンニトール、オレイン酸、サッカロース、ラクトースなどが
あげられる。可溶性成分は、タルク、カオリンまたはベントナイトなどの分散性
成分と混合してもよい。種粒子はさまざまな造粒技術によって製造でき、例えば
結晶化法、沈殿法、パンコーティング法、流動層コーティング法、流動層凝集法
、回転霧化法、押出し法、噴射造粒法、球状化法（spheronization）、ドラム造
粒法、および高せん断凝集法などがあげられる。本発明の顆粒において種粒子を
使用する場合、種粒子と顆粒との割合は１対１である。

【００２６】「タンパク質マトリクス」「酵素マトリクス」または「マトリクス」とは、酵
素などの１種類以上のタンパク質、糖または糖アルコールおよび構造剤を混和し
たものである。タンパク質、糖または糖アルコール、および構造剤は、例えば溶
液の中で混合されるかまたはスラリーとして混合される。タンパク質は溶液から
添加するかまたは結晶または沈降タンパク質の懸濁液としてスラリーの形状で添
加できる。本発明のマトリクスは、顆粒の重量の約２０〜８０パーセントである
。

【００２７】タンパク質をマトリクスに埋め込むことによって、タンパク質の摩滅および活
性損失という２つの問題点をより確実に防止することができる。しかしながら、
従来は酵素を糖または糖アルコールマトリクス内で粒状化することが不可能であ
った。なぜなら、糖または糖アルコールは「結合剤」特性を有するからである。
すなわち、糖または糖アルコールは粘着質であるため、（凝集法による粒状化で
意図的に行われるごとく）粒子同士を付着させるからである。

【００２８】また、低粉塵粒状タンパク質製品を得るためには、顆粒の形状およびサイズ分
布を制御する必要がある。また、均一かつ再現性のあるサイズおよび形状とする
ことで顆粒が安定する。なぜなら、粒子が分散および再凝集することによってあ
る程度のタンパク質が顆粒表面付近に運ばれるからである。

【００２９】驚くべきことに、糖マトリクス製剤に構造剤を添加することによって、タンパ
ク質を凝集や付着することなく迅速にそれぞれの種粒子に均一に施すことができ
る。得られた粒子のサイズ分布は、最初の種子サイズおよび添加する固体の量を
知りそれに基づいて正確に制御することができる。得られた粒子はほぼ球状で粘
着力が強く、摩耗しにくく湿気および不活性物質に侵食されにくい。

【００３０】適切な糖としては、サッカロース、グルコース、フルクトース、ラフィノース
、トレハロース、ラクトースおよびマルトースなどの糖があげられる。適切な糖
アルコールとしては、ソルビトール、マンニトール、およびイノシトールがあげ
られる。マトリクスにおける糖または糖マトリクスの量は、好ましくはタンパク
質マトリクスの０．１〜９０重量パーセントである。マトリクスにおける糖また
は糖アルコールはタンパク質に添加される糖または糖アルコールであるか、タン
パク質が存在する発酵培養地に由来するものである。

【００３１】構造剤としては多糖類またはポリペプチドを使用できる。これらの種類の化合
物は高分子量および高い水溶性という望ましい特性を同時に満たすものである。
理論にとらわれることなく、構造剤は高分子量であるため糖または糖アルコール
マトリクス単独では欠けている重要な２つの特性をもたらすと思われる。すなわ
ち、（１）粒子に粘着力と強度を与えるため、粒子が非常に粉塵となりにくくな
る、（２）マトリクス構造全体に渡って高分子網状構造または「おり」を形成し
、水および小分子に対する拡散バリアとして作用するため、顆粒の安定性が格段
に向上する。

【００３２】選択された特定の構造剤である多糖類およびポリペプチドはまた、典型的には
非粘着特性を有する。この非粘着特性は、糖または糖アルコールの結合剤特性を
低減するのに役立ち、また凝集することなく迅速にマトリクス層を、例えば流動
層コーティングに形成することを可能とする。

【００３３】糖および糖アルコール、および構造剤はまた、高い水可溶性または水分散性を
有する。糖または糖アルコール、構造剤、および酵素を含有し、総固体濃度の高
い溶液またはスラリーとしてのマトリクス製剤を容易に製造することができる。
総固体濃度が２０〜５０重量パーセント以上の溶液またはスラリーを容易に製造
することができる。これらの濃縮混合物は、顆粒に形成するときに水分を蒸発さ
せる必要が最小限であり、またどのような造粒および乾燥方法を適用してもよい
という利点を有するため非常に望ましい。

【００３４】好ましい構造剤としては、でんぷん、改質でんぷん、カラゲナン、セルロース
、改質セルロース、アラビアゴム、ガーゴム、アカシアゴム、キサンタンガム、
ハリエンジュガム、キトサン、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、ポリアスパラ
ギン酸およびポリグルタミン酸があげられる。好ましくは構造剤は低アレルゲン
性である。本発明の顆粒には２種類以上の構造剤を組み合わせて使用することも
できる。

【００３５】本発明の範囲に含まれるタンパク質としては、ホルモンなどの薬学的に重要な
タンパク質、またはその他の治療用タンパク質、および酵素などの工業的に重要
なタンパク質があげられる。

【００３６】本発明においては、任意の酵素または複数の酵素を組み合わせて使用すること
ができる。好ましい酵素としては、例えばしみなどの基質を加水分解することの
できる酵素があげられる。これらの酵素は加水分解酵素として知られており、そ
の例としては、ただしそれらに限定されるわけではないが、（細菌性、菌性、酸
性、中性またはアルカリ性）プロテアーゼ、（アルファまたはベータ）アミラー
ゼ、リパーゼ、セルラーゼおよびこれらの混合物があげられる。特に好ましい酵
素はスブチリシンおよびセルラーゼである。最も好ましくは、本願において引例
とする米国特許第４，７６０，０２５号、欧州特許第１３０７５６Ｂ１号、
および国際特許出願公開第ＷＯ９１／０６６３７号に記載されているようなスブ
チリシン、および市販されているジェネンコアインターナショナル社製マルチフ
ェクトＬ２５０（商標）およびプラダックス（商標）などのセルラーゼである。
本発明において使用できるその他の酵素としては、オキシダーゼ、トランスフェ
ラーゼ、デヒドラターゼ、レダクターゼ、ヘミセルラーゼおよびイソメラーゼが
あげられる。

【００３７】本発明の顆粒のマトリクスは、さらに１種類以上の合成ポリマーまたは当業者
にとって公知であるような他の腑形剤を含有してよい。適切な合成ポリマーとし
ては、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、
ポリエチレングリコールおよびポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシド
があげられる。

【００３８】本発明のマトリクスはまた、可塑剤および凝集防止剤をさらに含有してよい。
本発明において使用できる適切な可塑剤としては、グリセリン、プロピレングリ
コール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、尿素などのポリオール、またはク
エン酸トリエチル、ジブチルまたはジメチルフタレートまたは水などの他の公知
の可塑剤があげられる。適切な凝集防止剤としては、タルク、二酸化チタン（Ｔ
ｉＯ_２）、粘土、アモルファスシリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン
酸および炭酸カルシウムなどの微細な不溶解性または低溶解性物質があげられる
。

【００３９】本発明の顆粒はさらにバリア層を有していてもよい。バリア層は、タンパク質
または酵素に悪影響を及ぼす物質がマトリクス内に拡散するのを遅らせるかまた
は防止するために使用される。バリア層はバリア材料でできており、タンパク質
コアのまわりにコーティングするか、またはバリア材料をタンパク質コアに含有
させてもよい。好ましいバリア材料としては、例えば無機塩、有機塩または塩が
あげられる。タンパク質をもたないマトリクスをバリア層として使用してもよい
。

【００４０】本発明の顆粒はさらに、１つ以上のコーティング層を有していてもよい。例え
ばこのようなコーティング層は１つ以上の中間コーティング層であるか、１つ以
上の外側コーティング層であるか、またはこれらの組合せである。コーティング
層は、顆粒組成物において多くの役割のうちいずれかを果たすが、どのような役
割を果たすかは酵素顆粒の最終用途に依存する。例えばコーティング層により、
酵素が漂白による酸化に強くなったり、顆粒を水性媒体に導入した場合、所望の
溶解速度が得られたり、周囲の湿気に対するバリアとなって酵素の貯蔵時安定性
を向上させ、顆粒内で微生物が繁殖する可能性を抑制したりする。

【００４１】適切なコーティングとしては、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニル
ピロリドン（ＰＶＰ）などの水可溶性または水分散性薄膜形成ポリマー、メチル
セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシセルロース、エ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース
などのセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ア
ラビアゴム、キサンタン、カラゲナン、キトサン、ラテックスポリマー、および
腸溶コーティングがあげられる。さらにコーティング剤を他の同じまたは異なる
種類の他の活性剤とともに使用してもよい。

【００４２】顆粒の（単数または複数の）コーティング層に混入するのに適切なポリビニル
アルコール（ＰＶＡ）としては、部分的に加水分解されるか、全体が加水分解さ
れるか、または中間が加水分解されたポリビニルアルコールがあげられ、その粘
度は低い粘度から高い粘度にまで渡る。好ましくは、外側コーティングは部分的
に加水分解された、低粘度のポリビニルアルコールからなる。その他の使用可能
なビニルポリマーとしてはポリビニルアセテートおよびポリビニルピロリドンが
あげられる。使用できるコポリマーとしては、例えばポリビニルアルコール（Ｐ
ＶＡ）−メチルメタクレートコポリマーおよびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）
−ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）コポリマーがあげられる。

【００４３】本発明のコーティング層は、可塑剤、増量剤、潤滑剤、顔料、および必要であ
れば他の種類の酵素のうち１つ以上をさらに含有してよい。本発明のコーティン
グ層に使用するのに適切な可塑剤としては、例えば糖、糖アルコールまたはポリ
エチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリオール、尿素、グリコール、プロピレ
ングリコールなどの可塑剤、またはクエン酸トリエチル、ジブチルまたはジメチ
ルフタレートなどの他の公知の可塑剤、または水があげられる。本発明のコーテ
ィング層に使用するのに適切な顔料としては、ただしそれらに限定されるわけで
はないが、二酸化チタン、炭酸カルシウムなどの超微粒子漂白剤、または着色顔
料および染料、またはこれらの組合せがあげられる。これらの顔料は、溶解時の
残留が少ないものが好ましい。適切な増粘剤としては、サッカロースなどの糖、
マルトデキストリンおよびコーンシロップ固体などのでんぷん加水分解物、カオ
リンおよびベントナイトなどの粘土、およびタルクがあげられる。適切な潤滑剤
としては、ネオドールなどの非イオン界面活性剤、獣脂アルコール、脂肪酸、ス
テアリン酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、および脂肪酸エステルがあげられる。

【００４４】本発明の酵素顆粒には添加剤を添加してもよい。この場合の添加剤としては以
下のものがあげられる。すなわち、金属塩；可溶化剤；活性剤；酸化防止剤；染
料；抑制剤；結合剤；香料；硫酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム、尿素、
塩酸グアニジン、炭酸グアニジン、スルファミン酸グアジニン、二酸化チオ尿酸
、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、グリシ
ンやグルタミン酸ナトリウムなどのアミノ酸、ウシ血清アルブミンやカゼインの
ようなタンパク質などの酵素保護剤／スカベンジャー；アニオン界面活性剤、両
性界面活性剤、ノニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤および長鎖脂肪酸塩な
どの界面活性剤；ビルダー；アルカリ性または無機電解質；漂白剤；青味剤およ
び蛍光染料および漂白剤；および固化防止剤である。

【００４５】本願に記載の顆粒は、酵素造粒分野の当業者にとって公知の方法によって製造
することができ、例えばパンコーティング法、流動層コーティング、噴射造粒法
、円板造粒法、噴霧乾燥法、押出し法、遠心押出し法、球状化法（spheronizati
on）、ドラム造粒法、高せん断凝集法、およびこれらを組み合わせたものなどが
あげられる。

【００４６】以下の実施例は例示的なものであり本発明を制限するものではない。当業者で
あれば、本願に記載の技術に基づいて他の酵素、マトリクス、種粒子、方法およ
びコーティング剤を選ぶことは可能であろう。

【００４７】実施例実施例１アルカリ性プロテアーゼの流動層スプレーコーティング実験１１１９グラムの非パレイル（pareil）粒子（サッカロースおよびコーンスタ
ーチのコロイド状混合物をサッカロース結晶にスプレーしたあと、ポリビニルア
ルコールおよびコーンスターチをスプレーして最終コーティングを施し、２０〜
５０メッシュのふるいにかけることによって製造した）をベクトルＦＬ１流動層
コータに充填し流動化した。１５重量パーセントのエルバノール５１−０５（ダ
ウケミカル社製ポリビニルアルコール）を含有する水溶液１５９グラムを、総量
が１９．７パーセントの乾燥固体および８．４重量パーセントの活性プロテアー
ゼを含む１１２８グラムのプロテアーゼ水溶液に添加した。プロテアーゼ／ポリ
ビニルアルコール溶液を、以下の条件下で非パレイル粒子にスプレーした。

【００４８】流体供給速度１８ｇ／分噴霧圧力５４ｐｓｉ（３．７×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定１００℃ 出口空気温度範囲５５〜５８℃ 入口空気率８１ｃｆｍ次に、コーティングした粒子を、４４４グラム（４０重量パーセント）の硫酸
マグネシウム七水塩を含有する水溶液でコーティングした。このコーティングは
以下の条件下でおこなった。

【００４９】流体供給速度２３ｇ／分噴霧圧力５４ｐｓｉ（３．７×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定１００℃ 出口空気温度範囲５５〜５８℃ 入口空気率８０ｃｆｍ次に、硫酸マグネシウムでコーティングした粒子を、１４６グラム（６．２重
量パーセント）の二酸化チタン、１１８グラム（５重量パーセント）のメチルセ
ルロース（ダウケミカル社製メトセルＡ１５−ＬＶ）、２４グラム（１重量パー
セント）のネオドール２３／６．５（シェルケミカル社製）、および分子量６０
０のポリエチレングリコール３９グラム（１．６７重量パーセント）を含有する
２３５６グラムの水溶液で化粧コーティングした。この化粧コーティングは以下
の条件下でおこなった。

【００５０】流体供給速度２４ｇ／分噴霧圧力５４ｐｓｉ（３．７×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定１００℃ 出口空気温度範囲５１〜５８℃ 入口空気率８８ｃｆｍ酵素顆粒１９１２グラムを全部、ロットＡとして採取した。この実験の全体の
マスバランスは７８パーセントであった。

【００５１】実施例２アルカリ性プロテアーゼ／サッカロースでんぷんマトリクスの流動層スプレーコ
ーティング実験５０〜７０メッシュのふるいにかけた４０４グラムの無水硫酸ナトリウム結晶
を、ベクトルＦＬ１流動層コータに充填し流動化した。総量１９．７パーセント
の乾燥固体および８．４重量パーセントの活性プロテアーゼを含む７８１グラム
のプロテアーゼ水溶液を、６７０グラムのサッカロース、１８６グラムの通常の
黄色デントスターチ、および１９０°Ｆ（８８℃）で１５分間「加熱」すること
によって完全に水和された７４グラムのエチレックス２０１５（Ａ．Ｅ．スター
レー社、ディケータ、イリノイ州）を含有する１６０５グラムの水溶液に添加し
た。混合溶液中、他の固体に対する酵素固体の割合は実施例１と同じ値に維持し
たが、実施例２においては実施例１にはない工程があるためそれを考慮して酵素
固体および他の固体の量を少なくした。混合した溶液を以下の条件下で硫酸ナト
リウムにスプレーした。

【００５２】流体供給速度２７ｇ／分噴霧圧力５４ｐｓｉ（３．７×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定１００℃ 出口空気温度範囲５６〜６１℃ 入口空気率８０ｃｆｍ次に、コーティングした粒子を４４４グラム（４０重量パーセント）の硫酸マ
グネシウム七水塩を含有する水溶液でコーティングした。このコーティングは、
以下の条件下でおこなった。

【００５３】流体供給速度２７ｇ／分噴霧圧力５０ｐｓｉ（３．４×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定１００℃ 出口空気温度範囲５４〜５７℃ 入口空気率７９ｃｆｍ次に、硫酸マグネシウムでコーティングした粒子を、１４６グラム（６．２重量
パーセント）の二酸化チタン、１１８グラム（５重量パーセント）のメチルセル
ロース、２４グラム（１重量パーセント）のネオドール２３／６．５および分子
量６００のポリエチレングリコール３９グラム（１．６７重量パーセント）を含
有する、２３５６グラムの水溶液で化粧コーティングした。化粧コーティングは
、以下の条件下でおこなった。

【００５４】流体供給速度２３ｇ／分噴霧圧力５６ｐｓｉ（３．９×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定１００℃ 出口空気温度範囲５３〜５８℃ 入口空気率８３ｃｆｍ酵素顆粒２０５０グラムを全部、ロットＢとして採取した。この実験の全体の
マスバランスは８８．６パーセントであった。

【００５５】実施例３ロットの分析実施例１および２で得た顆粒を分析し、３日間応力をかけた安定性試験を行っ
てそれらの安定性および生じる粉塵の量を調べた。試験方法は以下の通りであり
、結果を表１に示す。

【００５６】短時間安定性試験漂白剤含有洗剤に配合された数多くの酵素顆粒の安定性はほぼ良好であり、３
０〜３７℃および７０〜８０パーセントの相対湿度で６週間貯蔵した後も活性損
失が約１０〜２０パーセントにすぎなかった。しかしながら、顆粒製剤の開発お
よびスクリーニングを促進するため、相対的な顆粒安定性を短時間で決定できる
方法が望まれている。短時間安定性試験（ＡＳＴ）の条件は、酵素顆粒や洗剤が
実際に貯蔵されたり輸送されたりする場合にさらされる条件よりも非常に厳しい
ものとされる。短時間安定性試験は、試験を行わなければ数週間または数ヶ月も
明らかにはされないような製剤同士の違いを識別するように設定された「応力試
験」である。

【００５７】この試験では、試験用洗剤の主成分は以下の材料から製造した。

【００５８】７２パーセント：ＷＦＫ−１洗剤主成分（ＷＦＫ、Forschunginstitut fuer
Reinigungstechnologie e.V.、Krefeld、ドイツ）２５パーセント：過ホウ酸ナトリウム一水塩（デグッサ社、Allendale Park
、ニュージャージ）３パーセント：ＴＡＥＤ（テトラアセチルエチレンジアミン）漂白活性剤（
ワーリックインターナショナル社、モスチン、イギリス）試験対象とした酵素サンプルのそれぞれについて、１グラムの試験主成分およ
び３０ミリグラムの酵素顆粒を１５ミリリットルの円錐型試験管に添加し、試験
管にふたをして５〜８回手で逆転させて混合させることによって、３本の同一の
試験管を用意した。１／１６インチのドリルピットで試験管のふたに穴を開けた
。３本の試験管のうち１本を直ちに分析し、残りの２本は５０℃および７０パー
セント相対湿度とした湿度室に貯蔵した。貯蔵した２本の試験管の内１本は、貯
蔵して１日後に分析した。残りの１本は貯蔵して３日後に分析した。貯蔵安定性
は、１日目と３日目に残っている活性を初日の元々の活性で割り算し、パーセン
テージで表した。

【００５９】それぞれの試験管に２０μｌのカタラーゼＨＰＬ５０００（ジェネンコアイ
ンターナショナル社製、ロチェスター、ニューヨーク）を含有するｐＨ５．５か
つモル濃度０．２５Ｍの２−（Ｎ−モルフォリン）エタンスルフォン酸（ＭＥＳ
）緩衝剤３０ｍｌを添加し、４０分間インキュベートして過ホウ酸塩を不活性化
することによって酵素活性を決定した。その後、試験管内の混合物１０μｌおよ
びｓＡＡＰＦプロテアーゼ基質１０μｌをｐＨ８．６かつモル濃度０．１Ｍのト
リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）９８０μｌに添加し、２５
℃で３分間インキュベートして４１０ｎｍで光学的吸収率を測定することによっ
て酵素を分析した。吸収率対時間の傾斜に、特定のプロテアーゼの希釈係数およ
び公知の吸光係数を掛け算することによって、ミリグラム／ミリリットル（ｍｇ
／ｍｌ）の濃度として酵素の活性を得た。

【００６０】ヒューバッハ摩耗およびエルトリエーション粉塵試験酵素顆粒粉塵の測定に一般に適用される２つの方法として、ヒューバッハ（He
ubach）摩耗試験およびエルトリエーション粉塵試験がある。これらの試験は、洗剤工場の労働者にアレルギー性反応を引き起こす可能性のある空中タンパク質
エアゾールを酵素顆粒が発生させる傾向を定量化することを目的とする。これら
の試験は典型的には、工業規模で酵素顆粒を洗剤に混合するときに行われる取扱
い、輸送および混合作業などの特定の機械的動作を再現するように設定されてい
る。

【００６１】エルトリエーション試験では、高さ１７５ｃｍで直径３．５４ｃｍのガラス管
内に設置されたガラスフリットの上に６０グラムの酵素顆粒をのせ、０．８メー
トル／秒の速度で４０分間、一定の乾燥空気によって流動化させた。

【００６２】ヒューバッハ摩耗試験では、１３．５グラムの顆粒を回転パドルおよび４つの
鋼球が設けられた小さな円筒状チャンバ内に入れる。２０ｌｐｍの速度で２０分
間乾燥空気をチャンバ内に通しながら、顆粒をパドルおよび鋼球によってかき混
ぜた。

【００６３】両方の試験において、空気によって顆粒から剥離した粉塵を１５ｃｍの風袋ガ
ラス繊維フィルタに捕捉し、その後重量を測定して上述のｓＡＡＰＦ法によって
活性を決定した。ヒューバッハ試験における酵素粉塵は顆粒１グラムに対するナ
ノグラム（ｎｇ）酵素として報告した。エルトリエーション試験における酵素粉
塵は、酵素−特定変換係数を使って、活性から顆粒６０グラムあたりのゴールド
ブラット位（ＧＵ）に変換した。

【００６４】

【表１】実施例４試験規模での、アルカリ性プロテアーゼ／サッカロース−でんぷんマトリクスの
流動層スプレーコーティング試験３５〜５０メッシュのふるいにかけられたサッカロース結晶７３．４ｋｇを改
質グラットＷＳＧ−１２０流動層コータに充填し、流動化した。サッカロースを
３６．２５ｋｇ、一般的な黄色デントスターチ２９ｋｇ、および１９０°Ｆ（８
８℃）で１５分間「加熱」することによって完全に水和されたエチレックス２０
１５を７．２５ｋｇ含有する１１７ｋｇの水溶液に、総量が１９．９８パーセン
トの乾燥固体および６．３６５重量パーセントの活性プロテアーゼを含有するプ
ロテアーゼ水溶液１７４．６７ｋｇを添加した。混合溶液を、以下の条件下でサ
ッカロースにスプレーした。

【００６５】流体供給速度１．０Ｌ／分噴霧圧力７５ｐｓｉ（５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず出口空気温度範囲７０℃ 入口空気率７０立方メートル／分次に、コーティングされた粒子を７５ｋｇ（４０．３重量パーセント）の硫酸
マグネシウム七水塩を含有する水溶液でコーティングした。コーティングは以下
の条件下でおこなった。

【００６６】流体供給速度２．３Ｌ／分噴霧圧力５０ｐｓｉ（３．４×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず出口空気温度範囲７０℃ 入口空気率７０立方メートル／分次に、硫酸マグネシウムでコーティングされた粒子に、１２．９７ｋｇ（６．
２重量パーセント）の二酸化チタン、１０．５９ｋｇ（５重量パーセント）のメ
チルセルロース、２．１２ｋｇ（１重量パーセント）のネオドール２３／６．５
、および分子量６００のポリエチレングリコール３．５７ｋｇ（１．６７重量パ
ーセント）を含有する２０８．９３ｋｇの水溶液で化粧コーティングを施した。
化粧コーティングは以下の条件下でおこなった。

【００６７】流体供給速度１．１Ｌ／分噴霧圧力７５ｐｓｉ（５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定７５℃ 入口空気率７０立方メートル／分１９９．３５ｋｇの酵素顆粒を全部、ロットＤとして採取した。この試験の全
体のマスバランスは８３．８４パーセントであった。

【００６８】実施例５試験規模での、アルカリ性プロテアーゼ／サッカロース−でんぷんマトリクスの
流動層スプレーコーティング手順Ａ３５〜５０メッシュのふるいにかけられたサッカロース結晶６５．７５ｋｇを
改質グラットＷＳＧ−１２０流動層コータに充填し、流動化した。サッカロース
を３７．５７ｋｇ、一般的な黄色デントスターチ２９．９４ｋｇ、および華氏１
９０℃で１５分間「加熱」することによって完全に水和されたエチレックス２０
１５を７．６２ｋｇ含有する１４５．１３ｋｇの水溶液に、総量が２０．７４パ
ーセントの乾燥固体および６．７１重量パーセントの活性プロテアーゼを含有す
るプロテアーゼ水溶液１８０．４２ｋｇを添加した。混合溶液を、以下の条件下
でサッカロースにスプレーした。

【００６９】

【表２】手順Ｂ次に、コーティングされた粒子を８６．９５ｋｇ（４０．３重量パーセント）
の硫酸マグネシウム七水和物を含有する水溶液でコーティングした。コーティン
グは以下の条件下でおこなった。

【００７０】

【表３】次に、１６．９７ｋｇ（６．２重量パーセント）の二酸化チタン、６．８４ｋ
ｇ（２．５重量パーセント）のメチルセルロース、６．８４ｋｇ（２．５重量パ
ーセント）のマルトデキシトリンＭ１５０（ＤＥ＝１５、グレインプロセッシン
グ社製、Muscatine、アイオワ）、２．７４ｋｇ（１重量パーセント）のネオドール２３／６．５および分子量６００のポリエチレングリコールを４．５７ｋｇ
（１．６７重量パーセント）含有する水溶液２４０．７９ｋｇによって、硫酸マ
グネシウムでコーティングされた粒子を化粧コーティングした。化粧コーティン
グは以下の条件下で行った。

【００７１】流体供給速度１．２Ｌ／分噴霧圧力７５ｐｓｉ（５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定６０℃ 入口空気率５８立方メートル／分１９９．３５ｋｇの酵素顆粒を全部、ロットＥとして採取した。全体の物質収
支は９７．１３パーセントであった。

【００７２】実施例６試験規模での、アルカリ性プロテアーゼ／サッカロース−でんぷんのマトリクス
流動層スプレーコーティング実施例５の手順Ａと同様の手順で酵素コアを製造した。

【００７３】以下の三種類の顆粒において、硫酸マグネシウム七水塩を５０パーセント溶液
として施し、最終的な顆粒重量を１５重量パーセントとした。コーティングは以
下の条件下でおこなった。

【００７４】噴霧圧力５０ｐｓｉ（３．４×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定４７〜５４℃ 入口空気率５８立方メートル／分コーティングポリマーを、可溶性固体の１５重量パーセント溶液として施し、
バッチ化して以下に記載のコーティング組成物を得た。表２にコーティング組成
物を、最終顆粒に対する重量パーセントで表す。コーティングは以下の条件下で
施した。

【００７５】噴霧圧力５０ｐｓｉ（３．４×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定４６〜５５℃ 入口空気率５８立方メートル／分

【表４】実施例３と同様の手順で顆粒を分析した。表３に分析結果を示す。

【００７６】

【表５】実施例７改質グラットＷＳＧ１２０流動層スプレーコータで三種類の大規模マトリクス
顆粒を製造した。ロットＪでは５０．５ｋｇの−３５／＋５０メッシュでふるい
わけられたサッカロース種子をコータに充填し流動化した。上の実施例で行った
ように、０．４ｋｇのエチレックス２０１５でんぷんを加熱し、４６．７ｋｇの
サッカロースおよび２３．４ｋｇの乾燥黄色デントコーンスターチを水とともに
添加し、最終溶液重量を３３７．４ｋｇとすることによってマトリクス担体溶液
を調製した。このマトリクス担体溶液を、５１．８９グラム／リットル（ｇ／Ｌ
）のＧＧ３６スブチリシンおよび総量１９パーセントの固形分を含有する２４３
．２ｋｇのプロテアーゼ水溶液と混合し、その結果、酵素マトリクス溶液を得た
。得られた酵素マトリクス溶液を、以下の条件下でサッカロース種子にスプレー
した。

【００７７】床温６０℃ 流動空気４８ｓｃｆｍ（１．３ｍ³／分）スプレー速度勾配２４０分間で０．３〜１．０ｌ／分噴霧空気２４０分間で５０〜７５ｐｓｉｇ（３．４〜５．２×１０⁵Ｐａ・ｇ）１３５．９ｋｇの水に５８．３ｋｇの硫酸アンモニウムを溶解させることによ
って硫酸アンモニウム溶液を調製し、この硫酸アンモニウム溶液をマトリクスコ
ーティングされた種子に以下の条件下でスプレーした。

【００７８】床温７０℃ 流動空気４８〜５７ｓｃｆｍ（１．３〜１．５ｍ³／分）スプレー速度１．５ｌ／分噴霧空気７５ｐｓｉｇ（５．２×１０⁵Ｐａ・ｇ）最後に、１７．９ｋｇのエルバノール５１−０５ポリビニルアルコール、２２
．４ｋｇの二酸化チタン、および４．５ｋｇのネオドール２３．５−６Ｔノニオ
ン界面活性剤を水に溶解または懸濁することによって正味重量２２４．１ｋｇの
コーティング溶液を調製した。このコーティング溶液を以下の条件下で塗布した
。

【００７９】床温７２℃ 流動空気５６ｓｃｆｍ（１．５ｍ³／分）スプレー速度３００分間で０．５〜１．２ｌ／分噴霧空気７５ｐｓｉｇ（５．２×１０⁵Ｐａ・ｇ）コーティング完了後、コータから２５５．５ｋｇの顆粒を採取し、−１６／＋
５０メッシュの大きさになるようふるいわけた。４．５４重量パーセントの活性
サブチリシンで分析し、粉塵および安定性を測定した。分析および測定結果を下
の表に示す。

【００８０】以下の表に記載のように配合を変更した以外は実質的に同様の手順によって、
改質グラットＷＳＧ１２０コータでさらにマトリクス顆粒の２つのバッチを製造
し、ロットＫおよびＬとした。顆粒の層を実施例１と同様に製造した。

【００８１】下記の表４は４つの製剤を示し、それぞれのサンプルの安定性および粉塵を報
告したものである。

【００８２】

【表６】実施例８試験規模での、アミラーゼ／でんぷんマトリクスの流動層スプレーコーティング２６ｋｇのサッカロース結晶を３５〜５０メッシュでふるい分け、デセレット
６０流動層コータに充填し流動化した。２３．５ｋｇのコーンスターチを含有す
る４３．５ｋｇの水溶液に、総量３１パーセントの乾燥固体および１２．５重量
パーセントの活性アミラーゼを含有するアミラーゼ水溶液１５．３ｋｇを添加し
た。混合した溶液を、以下の条件下でサッカロースにスプレーした。

【００８３】顆粒供給速度０．８ｋｇ／分噴霧圧力７５ｐｓｉ（５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定４５℃ 入口空気率１３００ｃｆｍ（３５ｍ³／分）次に、コーティングされた粒子を、６６．７ｋｇ（４０重量パーセント）の硫
酸マグネシウム七水和物を含有する水溶液でさらにコーティングした。このコー
ティングは以下の条件下でおこなった。

【００８４】顆粒供給速度１．１ｋｇ／分噴霧圧力６０ｐｓｉ（４．１×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定４７℃ 入口空気率１８００ｃｆｍ（４９ｍ³／分）次に、７．１ｋｇ（６．２重量パーセント）の二酸化チタン、２．９ｋｇ（２
．５重量パーセント）のメチルセルロース、２．９ｋｇ（２．５パーセント）の
ピュアコートＢ７９０、１．２ｋｇ（１．５重量パーセント）のネオドール２３
／６．５、および分子量６００のポリエチレングリコール２．０ｋｇ（１．６７
重量パーセント）を含有する水溶液９２．６ｋｇによって、硫酸マグネシウムで
コーティングされた粒子を化粧コーティングした。化粧コーティングは以下の条
件下でおこなった。

【００８５】顆粒供給速度０．５ｋｇ／分噴霧圧力７５ｐｓｉ（５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定４７℃ 入口空気率１８００ｃｆｍ（４９ｍ³／分）実施例９試験規模での、アミラーゼ／サッカロース−でんぷんマトリクス流動層スプレ
ーコーティング２６ｋｇのサッカロース結晶を３５〜５０メッシュでふるい分け、デセレット
６０流動層コータに充填し流動化した。７．８ｋｇのサッカロースおよび２３．
５ｋｇのコーンスターチを含有する５９．３ｋｇの水溶液に、総量３１パーセン
トの乾燥固体および１２．５重量パーセントの活性アミラーゼを含有するアミラ
ーゼ水溶液１５．３ｋｇを添加した。混合した溶液を、以下の条件下でサッカロ
ースにスプレーした。

【００８６】顆粒供給速度０．８ｋｇ／分噴霧圧力７５ｐｓｉ（５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定適用せず製品温度設定４５℃ 入口空気率１３００ｃｆｍ（３５ｍ³／分）硫酸マグネシウムおよび化粧コーティングは、実施例８と同様の手順で行った
。

【００８７】実施例１０改質グラットＷＳＧ１２０流動層スプレーコータに、３０〜５０メッシュでふ
るいわけられた４７．３７ｋｇのサッカロース結晶をいれ、４０〜６０立方メー
トル／分の速度および４５℃で流動化した。３０，０００ＴＡＵ／ｇの活性また
は８５．７ｍｇ／ｇのアミラーゼを有し、かつ発酵および再生工程によって得ら
れた２４．２ｍｇ／ｍｌの糖を含有する、１０５ｋｇのアミラーゼ限外濾過濃縮
液（ＬＡＴ）で６７．７２ｋｇの一般的な黄色デントコーンスターチをスラリー
化することによって調製した。酵素懸濁液を、以下の条件下でサッカロース種子
にコーティングした（範囲を示す部分は、値がランプ時間に伴って直線的に上昇
している。）ランプ時間９０分顆粒供給速度０．９〜１．３５リットル／分噴霧圧力４５〜７５ｐｓｉ（３．１〜５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定出口空気温度を維持するように調整出口空気温度４５℃ 流動空気率４０〜６０立方メートル／分サッカロース結晶に酵素懸濁液をコーティングした後、５０パーセント硫酸マ
グネシウム七水和物の溶液８０ｋｇを、流動化した顆粒に以下の条件下でスプレ
ーした。

【００８８】ランプ時間３０分顆粒供給速度１．１２〜２．１５リットル／分噴霧圧力６０ｐｓｉ（４．１×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定出口空気温度を維持するように調整出口空気温度４５℃ 流動空気率６０立方メートル／分最後に、１７４．９１ｋｇの加熱した水に、５．２９ｋｇのメトセルＡ−１５
メチルセルロース（ダウケミカル社製）、１２．７１ｋｇの二酸化チタン（デュ
ポン社製）、５．２９ｋｇのピュアコートＢ−７９０改質でんぷん（グレインプ
ロセッシング社製）、２．１２ｋｇのネオドール２３−６．５Ｔ（シェル社製）
、および分子量６００のポリエチレングリコール（ユニオンカーバイド社製）３
．５４ｋｇを添加し、約２０℃にまで冷却してポリマーを完全に溶解することに
よってコーティング溶液を調製した。コーティング溶液は以下の条件下で施した
。

【００８９】ランプ時間６０分顆粒供給速度０．７５〜１．３リットル／分噴霧圧力７５ｐｓｉ（５．２×１０⁵Ｐａ）入口空気温度設定出口空気温度を維持するように調整出口空気温度４５℃ 流動空気率６０立方メートル／分その結果得られた、１８０ｋｇのコーティングされたアミラーゼマトリクス顆
粒をコータから採取した。酵素の収量は８５パーセントであった。

【００９０】当業者にとって、本願の開示を読んだ後に本発明の精神および範囲から逸脱す
ることなく以上の記述および実施例のさまざまな他の実施例および改変を行い得
ることは明白である。そのような実施例および改変は添付の請求の範囲に含まれ
る。本願において参照した発行物および特許はその全体を本願の引例とする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者クリステンセン，ロバートアイジュニアアメリカ合衆国カリフォルニア州 94564 ピノールブルージェイサークル 2156 (72)発明者グリーン，トーマスエスアメリカ合衆国カリフォルニア州 94307 モンターラピーオーボックス 371302 Ｆターム(参考） 4B050 CC07 JJ02 KK07 KK09 KK15 KK16 KK17 KK18

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】タンパク質マトリクスを有するタンパク質コアを含有し、該
タンパク質マトリクスが糖および構造剤の混合物と混合されたタンパク質を含有
することを特徴とする顆粒。
【請求項２】前記構造剤が、多糖類またはポリペプチドからなる群より選
択されることを特徴とする請求項１記載の顆粒。
【請求項３】前記構造剤が、でんぷん、改質でんぷん、セルロース、改質
セルロース、カラゲナン、アラビアゴム、アカシアゴム、キサンタンガム、イナ
ゴマメガム、およびガーゴムからなる群より選択されることを特徴とする請求項
２記載の顆粒。
【請求項４】前記構造剤が、キトサン、ゼラチン、カゼイン、コラーゲン
、ポリアスパラギン酸およびポリグルタミン酸からなる群より選択されることを
特徴とする請求項２記載の顆粒。
【請求項５】前記糖が、グルコース、フラクトース、ラフィノース、マル
トース、ラクトース、トレハロース、およびサッカロースからなる群より選択さ
れることを特徴とする請求項１記載の顆粒。
【請求項６】合成ポリマーをさらに含有し、該合成ポリマーがポリエチレ
ンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリ
コール、およびポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドからなる群より
選択されることを特徴とする請求項１記載の顆粒。
【請求項７】前記タンパク質コアが、種粒子のまわりに層として形成され
た前記タンパク質マトリクスを有することを特徴とする請求項１記載の顆粒。
【請求項８】さらにコーティング層を有することを特徴とする請求項１記
載の顆粒。
【請求項９】前記コーティング層が前記種粒子のまわりに形成されること
を特徴とする請求項８記載の顆粒。
【請求項１０】前記コーティング層が前記タンパク質マトリクスのまわり
に形成されることを特徴とする請求項８記載の顆粒。
【請求項１１】前記コーティングが、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロ
キシセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ
プロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリエ
チレンオキシド、キトサン、アラビアゴム、キサンタンおよびカラゲナンからな
る群より選択されることを特徴とする請求項８記載の顆粒。
【請求項１２】タンパク質マトリクスを有するタンパク質コアを含有する
顆粒であって、該タンパク質マトリクスが糖アルコールおよび構造剤の混合物と
混合されたタンパク質を含有することを特徴とする顆粒。
【請求項１３】前記構造剤が、多糖類およびポリペプチドからなる群より
選択されることを特徴とする請求項１２記載の顆粒。
【請求項１４】前記構造剤が、でんぷん、改質でんぷん、カラゲナン、セ
ルロース、改質セルロース、アラビアゴム、アカシアゴム、キサンタンガム、イ
ナゴマメガム、およびガーゴムからなる群より選択されることを特徴とする請求
項１３記載の顆粒。
【請求項１５】前記構造剤が、キトサン、ゼラチン、カゼイン、コラーゲ
ン、ポリアスパラギン酸、およびポリグルタミン酸からなる群より選択されるこ
とを特徴とする請求項１３記載の顆粒。
【請求項１６】前記糖アルコールが、マンニトール、ソルビトール、およ
びイノシトールからなる群より選択されることを特徴とする請求項１２記載の顆
粒。
【請求項１７】さらに合成ポリマーを含有し、該合成ポリマーが、ポリエ
チレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレン
グリコール、およびポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドからなる群
より選択されることを特徴とする請求項１２記載の顆粒。
【請求項１８】前記タンパク質コアが、種粒子のまわりに層として形成さ
れた前記タンパク質マトリクスを有することを特徴とする請求項１２記載の顆粒
。
【請求項１９】さらにコーティング層を有することを特徴とする請求項１
２記載の顆粒。
【請求項２０】前記コーティング層が前記種粒子のまわりに形成されるこ
とを特徴とする請求項１９記載の顆粒。
【請求項２１】前記コーティング層が前記タンパク質マトリクスのまわり
に形成されることを特徴とする請求項１９記載の顆粒。
【請求項２２】前記コーティングが、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロ
キシセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ
プロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリエ
チレンオキシド、キトサン、アラビアゴム、キサンタン、およびカラゲナンから
なる群より選択されることを特徴とする請求項１９記載の顆粒。
【請求項２３】酵素マトリクスを有する酵素コアを含有する顆粒であって
、該酵素マトリクスは、糖および構造剤の混合物と混合された酵素を含有するこ
とを特徴とする顆粒。
【請求項２４】前記構造剤が、多糖類およびポリペプチドからなる群より
選択されることを特徴とする請求項２３記載の顆粒。
【請求項２５】前記構造剤が、でんぷん、改質でんぷん、カラゲナン、セ
ルロース、改質セルロース、アラビアゴム、アカシアゴム、キサンタンガム、イ
ナゴマメガム、およびガーゴムからなる群より選択されることを特徴とする請求
項２４記載の顆粒。
【請求項２６】前記構造剤が、キトサン、ゼラチン、カゼイン、コラーゲ
ン、ポリアスパラギン酸およびポリグルタミン酸からなる群より選択されること
を特徴とする請求項２４記載の顆粒。
【請求項２７】前記糖が、グルコース、フラクトース、ラフィノース、マ
ルトース、ラクトース、トレハロース、およびサッカロースからなる群より選択
されることを特徴とする請求項２３記載の顆粒。
【請求項２８】合成ポリマーをさらに含有し、該合成ポリマーが、ポリエ
チレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレン
グリコール、およびポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドからなる群
より選択されることを特徴とする請求項２３記載の顆粒。
【請求項２９】前記タンパク質コアが、種粒子のまわりに層として形成さ
れた前記酵素マトリクスを有することを特徴とする請求項２３記載の顆粒。
【請求項３０】コーティング層をさらに有することを特徴とする請求項２
３記載の顆粒。
【請求項３１】前記コーティング層が、前記種粒子のまわりに形成される
ことを特徴とする請求項３０記載の顆粒。
【請求項３２】前記コーティング層が、前記酵素マトリクスのまわりに形
成されることを特徴とする請求項３０記載の顆粒。
【請求項３３】前記コーティングが、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロ
キシセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ
プロピルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、キトサ
ン、アラビアゴム、キサンタンおよびカラゲナンからなる群より選択されること
を特徴とする請求項３０記載の顆粒。
【請求項３４】酵素マトリクスを有する酵素コアを含有し、該酵素マトリ
クスが、糖アルコールおよび構造剤の混合物と混合された酵素を含有することを
特徴とする顆粒。
【請求項３５】前記構造剤が、多糖類およびポリペプチドからなる群より
選択されることを特徴とする請求項３４記載の顆粒。
【請求項３６】前記構造剤が、でんぷん、改質でんぷん、カラゲナン、セ
ルロース、改質セルロース、アラビアゴム、アカシアゴム、キサンタンガム、ハ
リエンジュガム、およびガーゴムからなる群より選択されることを特徴とする請
求項３５記載の顆粒。
【請求項３７】前記構造剤が、キトサン、ゼラチン、カゼイン、コラーゲ
ン、ポリアスパラギン酸、およびポリグルタミン酸からなる群より選択されるこ
とを特徴とする請求項３５記載の顆粒。
【請求項３８】前記糖アルコールが、マンニトール、ソルビトール、およ
びイノシトールからなる群より選択されることを特徴とする請求項３４記載の顆
粒。
【請求項３９】さらに合成ポリマーを含有し、該合成ポリマーが、ポリエ
チレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレン
グリコールおよびポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドからなる群よ
り選択されることを特徴とする請求項３３記載の顆粒。
【請求項４０】前記タンパク質コアが、種粒子のまわりに層として形成さ
れた前記酵素マトリクスを有することを特徴とする請求項３３記載の顆粒。
【請求項４１】コーティング層をさらに有することを特徴とする請求項３
３記載の顆粒。
【請求項４２】前記コーティング層が前記種粒子のまわりに形成されるこ
とを特徴とする請求項４１記載の顆粒。
【請求項４３】前記コーティング層が前記酵素マトリクスのまわりに形成
されることを特徴とする請求項４１記載の顆粒。
【請求項４４】前記コーティングが、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロ
キシセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシ
プロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリエ
チレンオキシド、キトサン、アラビアゴム、キサンタンおよびカラゲナンからな
る群より選択されることを特徴とする請求項４１記載の顆粒。
【請求項４５】ａ）種粒子を提供し、ｂ）糖または糖アルコールおよび構造剤と混合されたタンパク質を含有するタン
パク質マトリクスで、工程ａ）の種粒子をコーティングする各工程を含むことを特徴とする顆粒の製造方法。
【請求項４６】バリア材料を施す工程をさらに含むことを特徴とする請求
項４５記載の方法。
【請求項４７】コーティング層を形成する工程をさらに含むことを特徴と
する請求項４５記載の方法。
【請求項４８】前記コーティング層を前記種粒子のまわりに形成すること
を特徴とする請求項４７記載の方法。
【請求項４９】前記コーティング層を、前記タンパク質マトリクスのまわ
りに形成することを特徴とする請求項４７記載の方法。
【請求項５０】前記コーティングが、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロ
キシセルロース、エチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリエチレングリ
コール、ポリエチレンオキシド、キトサン、アラビアゴム、キサンタンおよびカ
ラゲナンからなる群より選択されることを特徴とする請求項４７記載の方法。
【請求項５１】ａ）糖または糖アルコールおよび構造剤と混合されたタン
パク質を含有する均質なタンパク質マトリクスを形成する工程を含むことを特徴
とする顆粒の製造方法。
【請求項５２】バリア材料を施す工程をさらに含むことを特徴とする請求
項５１記載の方法。
【請求項５３】コーティング層を形成する工程をさらに含むことを特徴と
する請求項５１記載の方法。
【請求項５４】前記コーティング層を前記バリア材料のまわりに形成する
ことを特徴とする請求項５３記載の方法。
【請求項５５】前記コーティング層を前記タンパク質マトリクスのまわり
に形成することを特徴とする請求項５３記載の方法。
【請求項５６】前記コーティングが、ポリビニルアルコール、ポリビニル
ピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロ
キシセルロース、エチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリエチレングリ
コール、ポリエチレンオキシド、キトサン、アラビアゴム、キサンタンおよびカ
ラゲナンからなる群より選択されることを特徴とする請求項５３記載の方法。