JP2001519412A - Ｃｃ−１０６５およびデュオカルマイシンのイソ−ｃｂｉおよびイソ−ｃｉ類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 (+)-CC-1065(1)およびデュオカルマイシン2および3の、一連の生活性類似体を合成する。これら生活性類似体は、DNAアルキル化サブユニットとして、イソ-CIまたはイソ-CBI(6および7)の何れかを含む。このDNAアルキル化サブユニットと結合するのは、種々のDNA結合サブユニットである。これら生活性類似体は、そのDNA選択性を保持し、かつ高い反応性を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【技術分野】

本発明は、抗-腫瘍性抗生物質に関する。より詳しくは、本発明はDNAアルキル
化および抗-腫瘍性抗生物質活性を持つCC-1065およびデュオカルマイシンの類似
体に関するものである。

【０００２】

【背景技術】

図1に示した、(+)-CC-1065(1)およびデュオカルマイシン(duocarmycins) 2お よび3は、DNAのアルキル化を介する抗-腫瘍性抗生物質活性を持つ天然産物であ る(Hanka, L.J.,等, J. Antibiot., 1978, 31, 1211; Yasuzawa, T.等, Chem. P
harm. Bull., 1995, 43, 378;およびTakahashi, I.等, J. Antibiot., 1991, 44
, 1045)。以前の研究により、これら天然産物が、アルキル化サブユニットに関 する大幅な構造上の変性に耐えることができ、しかもその利益を享受することが
でき、また得られる薬物が、その特徴的な配列選択的なDNAアルキル化反応に関 与する能力を維持することが示された(Boger, D.L.等, Chem. Rev., 1997, 97,
787)。これら構造上の変性、およびその作用の定義は、上記1〜3による該DNAア ルキル化反応に対する触媒作用の起源に関する理解を高める上で役立っている(H
arper, D.E.等, J.Am.Chem.Soc., 1994, 116, 7573;およびWarpehoski, M.A.等,
J.Am.Chem.Soc., 1995, 117, 2951)。

【０００３】 これら構造上の変性は、また上記1〜3のDNA配列選択性の起源に関する理解を 高める上で役立っている(Warpehoski, M.A., DNA配列特異的試薬における進歩(I
n Advances in DNA Sequence Specific Agents); Hurley, L.H.編; JAI: Greenw
ich, CT, 1992; Vol. 1, p217; Hurley, L.H.＆Draves, P., 抗癌剤-DNA相互作 用の分子的局面(In Molecular Aspects of Anticancer Drug-DNA Interactions)
; Neidle, S. & Waring, M.編, CRC: Ann Arbor, 1993; Vol. 1, p89; Aristoff
, P.A., 医薬化学における進歩(In Advances in Medicinal Chemistry); JAI: G
reenwich, CT, 1993; Vol. 2, p67)。上記1〜3の該DNA配列選択性のメカニズム を説明するために、2つのモデルが提案されている。Bogerによって提案された該
モデルの一つは、上記化合物1〜3のDNA配列選択性が、これら試薬のAT-に富む非
共有結合性の結合選択性およびアデニンN3アルキル化サイトに対する、その立体
的な利用可能性によって、決定されることを主張している。(Boger, D.L.等, An
gew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, 35:1439; およびBoger, D.L.等, Biorg. Me
d. Chem., 1997, 5:263)。この非共有結合性結合モデルは、上記物質1の天然お よびそれ以外のエナンショマー(Boger, D.L.等, J.Am.Chem.Soc., 1990, 112:46
23;およびBoger, D.L.等, Bioorg.Med.Chem., 1994,2:115)および上記物質2〜3 の天然およびそれ以外のエナンショマー(Boger, D.L.等, J.Am.Chem.Soc., 1993
, 115:9872;およびBoger, D.L.等, J.Am.Chem.Soc., 1994, 116:1635)の、逆お よびオフセット(offset) 5または3.5塩基対のAT-に富むアデニンN3アルキル化選
択性と調和し、かつこれを説明している。

【０００４】 これら非共有結合性結合モデルは、また該アルキル化サブユニットの簡単な誘
導体が、該天然生成物とは明確に異なる、アルキル化選択性を示すことをも必要
としている。これは、またこのような簡単な誘導体(5'-AA>5'-TA)の両エナンシ ョマーの、この同一のアルキル化選択性に関する説明を与え、また該物質1〜3の
進展された類似体の、より拡張されたAT-に富む選択性は、該薬物の長さおよび 該アルキル化サイトを取り巻く該所定の結合領域のサイズとうまく対応している
。このモデルは、更にこれら薬物の立証されたAT-に富む非共有結合性結合によ り支持される。(Boger, D.L.等, Chem.-Biol. Interactions, 1990, 73:29およ びBoger, D.L.等, J. Org. Chem., 1992, 57:1277)。このモデルは、また観測さ
れた選択的非共有結合性の結合およびこれら薬物の観測されたDNAアルキル化に よっても支持されている。Boger, D.L.等, Bioorg. Med. Chem., 1996, 4:859) 。これら薬物の該特徴的なDNAアルキル化選択性が、該C-4カルボニルまたは更に
活性化されたシクロプロパンの存在を必要としないという観測は、このモデルに
対する更なる指示を与える。(Boger, D.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1991, 113:3
980;およびBoger, D.L.等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88:1431)。こ のモデルの正確性は、更に固有のエナンショマー性DNAアルキル化選択性におけ る、完全なスイッチの証拠であり、該選択性は、該デュオカルマイシンの伸長さ
れた類似体に対して逆の、該DNA結合サブユニットの配向の逆転をもたらす。(Bo
ger, D.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1997, 119:4977; Boger, D.L.等, J. Am. Ch
em. Soc., 1997, 119:4987;およびBoger, D.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1995, 1
17:1443)。

【０００５】 上記のATに富む非共有結合性結合モデルは、別の提案と対照をなす。該別の提
案では、該C-４カルボニルの配列-依存性骨格燐酸プロトン化が、DNAアルキル化
用の該薬剤を活性化し、かつその配列選択性を調節する。(Hurley, L.H., J. Am
. Chem. Soc., 1995, 117:2371)。 DNA-薬物付加生成物の構造的研究^17-19によれば、該天然産物のC-4カルボニル
は、該燐酸骨格にとって潜在的に利用可能な、該複合体の外面に横たわる、副溝
から突出している。(Lin, C.H.等, J. Mol. Biol., 1995, 248:162およびSmith,
J.A. 等,J. Mol. Biol., 1997, 272:237)。しかし、これら薬物の特性に対する
、該C-4カルボニル一の相対的な重要性は、未だ決定されていない。

【０００６】 必要とされるものは、該ATに富む非共有結合性結合モデルを利用し、かつその
DNA結合およびアルキル化活性並びに選択性を保持する、(+)-CC-1065 (1)および
該デュオカルマイシン2および3の、一連の類似体である。必要なのは、イソ-CI およびイソ-CBI(6および7)と一体となった、(+)-CC-1065 (1)および該デュオカ ルマイシン2および3の一連の類似体である。イソ-CIおよびイソ-CBI(6および7) は、CIおよびCBIアルキル化サブユニット4および5の類似体であり、該サブユニ ットにおいて、該重要なC-4カルボニルは、図2に示したように、異性化的にC-6 またはC-8位置に、即ちシクロプロパンに対してオルト位に移される。このATに 富む非共有結合性結合モデルが、正しく、類似のアデニンN3アルキル化反応に関
与しない場合には、イソ-CIおよびイソ-CBI (6および7)の該移されたカルボニル
は、該燐酸骨格にとって利用できない副溝に突き出しているであろう。

【０００７】

【発明の開示】 (+)-CC-1065(1)およびデュオカルマイシン2および3の、一連の生活性類似体を
合成する。これら類似体各々は、DNAアルキル化サブユニットとしてのイソ-CIま
たはイソ-CBI(6および7)を含む。次に、これら新規なDNAアルキル化サブユニッ トを、既知のDNA結合サブユニットと複合化して、(+)-CC-1065(1)およびデュオ カルマイシン2および3の生活性類似体を形成する。好ましいDNA結合サブユニッ トは、本明細書および米国特許出願No. 09/051,264に記載される。この特許出願
を本発明の参考とする。 2-(t-ブトキシカルボニル)-1,2,9,9a-テトラヒドロシクロ-プロパ[c]ベンゾ[f
]-インドール-8-オン(31、N-BOC-イソ-CBI)および1-(t-ブトキシカルボニル)-4-
ヒドロキシ-3-[[(メタンスルホニル)オキシ]メチル]-2,3-ジヒドロインドール(1
9、セコ(seco)-N-BOC-イソ-CI)は、該DNAアルキル化サブユニット、即ちイソ-CI
またはイソ-CBI(6および7)に対する、プレコンジュゲート(preconjugate)形とし
て機能する。化合物31および19を合成する方法は、適当に官能化されたベンゼン
(13)またはナフタレン(24)先駆体を、意図的にオルトメタレーションに掛けて、
ヨウ素を該C-2位置に、位置特異的に据えることに基づいていた。これら各中間 体の該ジヒドロインドール骨格への転化は、活性化されていないアルケンへの確
立された5-エキソ-トリグ(trig)アリールラジカル環化、これに引き続くTEMPOト
ラップまたはより最近の、直前の先駆体の直接的な合成のための、塩化ビニルへ
の、5-エキソ-トリグアリールラジカル環化を利用した。該活性化されたシクロ プロパンの環化による、該イソ-CBI核の完成は、選択的なオルトスピロ環化によ
り達成された。

【０００８】 完全な組の天然産物類似体の分割および合成、並びにこれに続くそのDNAアル キル化特性の評価は、該イソ-CBI類似体が、比較に耐える速度で反応し、かつCC
-1065および該デュオカルマイシンの同等なかつ特徴的な選択性を維持している ことを明らかにした。この観測は、公知技術の提案、即ち戦略的に配置されたDN
A骨格燐酸による、配列依存性のC-4カルボニルのプロトン化は、該DNAアルキル 化選択性を制御するという提案とは矛盾するが、これが該薬物のATに富む非共有
結合性の結合選択性および該N3アルキル化サイトの立体的な利用可能性により決
定されるという提案と一致する。 ソルボリシスの研究は、該イソ-CBIに基づく薬物が、CC-1065およびデュオカ ルマイシンAに匹敵する安定性およびデュオカルマイシンSA(6-7x)よりも高い反 応性をもつことを示している。ソルボリシスの研究は、また該イソ-CBIに基づく
薬物が、対応するCBIに基づく薬物(5x)よりも反応性が高いことを示している。 該DNAアルキル化反応が、該活性化されたシクロプロパンの最も置換度の低い 炭素への、アデニンN3付加により誘導されることの確認およびその定量(95％)は
、脱プリン化アデニンN3付加生成物の単離および特徴付けにより、確立された。
過去の研究との一致および該アルキル化サブユニットにおける根深い構造的変化
にも拘らず、該薬物は、その固有の反応性と関連した、有力な細胞毒生活性を示
すことが分かった。

【０００９】 本発明の一局面は、DNAアルキル化サブユニットおよびこれと共有結合により 結合したDNA結合サブユニットを含むDNAアルキル化化合物を提供することを目的
とする。該DNAアルキル化化合物は、以下の構造によって表される:

【００１０】

【化３１】 好ましいDNA結合サブユニットは、以下の構造により表されるラジカルである:

【００１１】

【化３２】

【００１２】 上記構造において、AはNHおよびOからなる群から選択される基であり、BはCおよ
びNからなる群から選択され、R₂は水素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-
アルキル(C1-C6)₃、および第一のN-置換ピロリジン環からなる群から選択され、
R₃は水素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃、および該 第一のN-置換ピロリジン環からなる群から選択され、R₄は水素、ヒドロキシル、
O-アルキル(C1-C6)およびN-アルキル(C1-C6)₃からなる群から選択され、R₅は水 素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)およびN-アルキル(C1-C6)₃からなる群か ら選択され、およびV₁はR₂とR₃との間の、第一のビニレン基を表す。しかし、種
々の条件がある。即ち、R₂が該第一のN-置換ピロリジン環に関与している場合に
は、R₃も該第一のN-置換ピロリジン環に関与しており、R₃が該第一のN-置換ピロ
リジン環に関与している場合には、R₂も該第一のN-置換ピロリジン環に関与して
おり、R₂およびR₃が該第一のN-置換ピロリジン環に関与している場合、R₄および
R₅は水素であり、R₂が水素である場合には、R₄およびR₅は水素であり、かつR₃は N-アルキル(C1-C6)₃である。該第一のN-置換ピロリジン環は、R₂とR₃との間で 、該第一のビニレン基と融合しており、かつ以下の構造で表される:

【００１３】

【化３３】

【００１４】 この構造において、V₁はR₂とR₃との間の、該第一のビニレン基を表し、R₆は-CH₂ CH₃(アルキル)、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-NH₂、-NHNH₂、-NH
NHCO₂ ^tBu、および以下の構造で表される基からなる群から選択され:

【００１５】

【化３４】

【００１６】 この構造において、CはNHおよびOからなる群から選択され、DはCおよびNからな る群から選択され、R₇は水素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(
C1-C6)₃および第二のN-置換ピロリジン環からなる群から選択され、R₈は水素、 ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃および該第二のN-置換 ピロリジン環からなる群から選択され、V₂はR₇とR₈との間の、該第二のビニレン
基を表す。しかし、以下のような条件が関与する。R₇が該N-置換ピロリジン環に
関与している場合には、R₈も該N-置換ピロリジン環に関与しており、R₈が該N-置
換ピロリジン環に関与している場合にのみ、R₇も該N-置換ピロリジン環に関与し
ている。該第二のN-置換ピロリジン環は、R₇とR₈との間で、該第二のビニレン基
と融合しており、かつ以下の構造により表される:

【００１７】

【化３５】

【００１８】 この構造において、V₂はR₇とR₈との間の、該第二のビニレン基を表し、R₉は-CH₂ CH₃(アルキル)、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-NH₂、-NHNH₂およ び-NHNHCO₂ ^tBuからなる群から選択される基を表す。 その好ましい例は、以下の構造によって表されるDNAアルキル化化合物を包含 する:

【００１９】

【化３６】

【化３７】

【００２０】 本発明のもう一つの局面は、以下の構造によって表される、DNAアルキル化化 合物を提供することを目的とする:

【００２１】

【化３８】

【００２２】 上記構造において、R₁は、-C1-C6アルキル、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-ア ルキル)、-NH₂、-NHNH₂、-NHNHCO₂ ^tBuおよび以下の構造により表される基からな
る群から選択される基を表す:

【００２３】

【化３９】

【００２４】 本発明のこの局面の好ましい態様は、以下の構造により表されるものである:

【００２５】

【化４０】

【００２６】 本発明の更なる局面は、以下の構造により表される化学的中間体を目的とする
:

【００２７】

【化４１】

【００２８】 本発明の更に別の局面は、DNAアルキル化サブユニットと、これに共有結合的 に結合したDNA結合サブユニットとを含むDNAアルキル化化合物を目的とし、ここ
で該DNAアルキル化化合物は、以下の構造によって表される:

【００２９】

【化４２】

【００３０】 好ましいDNA結合サブユニットは、上記のイソ-CBI化合物について上記した如 きものである。本発明のこの局面の好ましい例は、以下の構造により表されるDN
Aアルキル化化合物を含む:

【００３１】

【化４３】

【００３２】 本発明の他の局面は、以下の構造により表されるDNAアルキル化化合物を意図 する:

【００３３】

【化４４】

【００３４】 上記構造において、R₁は、-C1-C6アルキル、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-ア ルキル)、-NH₂、-NHNH₂、-NHNHCO₂ ^tBuおよび以下の構造により表される基からな
る群から選択される基を表す:

【００３５】

【化４５】

【００３６】 この好ましい態様の一例は、以下の構造によって表されるものである:

【００３７】

【化４６】

【００３８】 更なる本発明の局面は、以下の構造によって表される化学的中間体を目的とす
る:

【００３９】

【化４７】

【００４０】

【発明を実施するための最良の形態】

Sundbergおよびその共同研究者は、上記天然生成物に対して異性体である薬物
の合成を、最初に報告した。(Sundberg, R.J.等, Tetrahedron Lett., 1983, 24
:4773およびSundberg, R.J.等, J. Org Chem., 1991, 56:3048)。CC-1065のアル
キル化サブユニットに対して異性体である薬物を、束縛されたアルケン上にo-キ
ノンアジドの分子間カルベン挿入を利用して調製した。恐らくこの研究の時点に
おける、信頼すべきアルキル化サブユニットの、認識された固有の特性のために
、その化学的挙動、生物学的特徴およびDNAアルキル化特性は、検討されなかっ た。

【００４１】

【化４８】

【００４２】 上記反応式１に示したように、該異性体CI類似体(Boger, D.L.等, J. Am. Che
m. Soc., 1990, 112:5230)およびCBI類似体(Boger, D.L.等, J. Org. Chem., 19
95, 60:1271; Boger, D.L.等, J. Org. Chem., 1992, 57:2873; Boger, D.L.等,
J. Am. Chem. Soc., 1989, 111:6461; Boger, D.L.等, J. Org. Chem., 1990,
55:5823; Boger, D.L.等, Tetrahedron Lett., 1990, 31:793; Boger, D.L.等,
Bioorg. Med. Chem. Lett., 1991, 1:55; Boger, D.L.等, Bioorg. Med. Chem.
Lett., 1991, 1:115; Boger, D.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1992, 114:5487;お よびBoger, D.L.等, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1995, 3:611)を合成するため の、もう一つの経路が、その後工夫された。この方法は、我々のCBI合成にとっ て補足的なものであり、そこで該ジヒドロインドール骨格は、束縛されたアルケ
ン上でのアリール基の5-エキソ-トリグラジカルの環化および該キーハロゲン化 工程におけるC2対C4位置制御に必要とされる、その異性体類似体への伸長により
溝築される。CIおよびCBIの合成において、位置選択的親電子ハロゲン化反応は 、該フェノールエーテルのパラ位にヨウ素または臭素を据えるのに役立った。

【００４３】 該異性化剤に関連して、オルトハロゲン化法が必要とされ、また協同的指向性オ
ルトメタレーション²³が、該C2ハライドを溝築するために実施された。(Sniecku
s, V., Chem. Rev., 1990, 90:879)。その採用は、2つの容易に除去できる協働 的指向性メタレーション基: OMOM (Winkle, M.R.等, J. Org. Chem., 1982, 47:
2101)およびNHBOC (Muchkowski, J.M. 等, J. Org. Chem., 1980, 45:4798)の使
用を必要とした。更に、該CIおよびCBI合成における、該シクロプロパンの閉環 のために利用される、ウインシュタイン(Winstein)のパラAr-3'スピロ環化(Bair
d, R.等, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85:567; 1962, 84:788; 1957, 79:756)は 、今回は、競合的なO-アルキル化およびジヒドロフラン形成ではなく、寧ろシク
ロプロパン形成を伴う、C-アルキル化を必要とするオルトスピロ環化(Brown, R.
F.C.等, Tetrahedron Lett., 1981, 22:2915; Smith III, A.B.等, Tetrahedron
Lett., 1987, 28:3659; およびKigoshi, H.等, Tetrahedron Lett., 1997, 38:
3235)によって取って代わられる。 この方法は、まず市販品として入手できる3-ニトロフェノール(10)を使用して
、イソ-CIについて検討された(反応式2):

【００４４】

【化４９】

【００４５】 該MOMエーテル11としての該フェノールの保護(NaH、MOMCl、Bu₄NI、89％)、Al-H
gアマルガムによる該ニトロ基の還元(Et₂O-H₂O、89％) (Meyers, A.I.等, J. Or
g. Chem., 1975, 40:2021)および遊離アミン12のBOC保護(BOC₂O、>95％)は、キ ー中間体である化合物13を与え、該意図されたオルトメタレーションについての
検討はこの化合物について行われる。この化合物13を、THF中で、-20℃ (2時間)
にて3.5当量のn-BuLiおよびTMEDAによる処理および該アリールリチウム中間体の
、1-クロロ-2-ヨードエタンとの反応は、回収される出発物質(41％)と共に、化 合物14を与える(46％)。深く検討することはなかったが、この転化は、長い反応
時間、種々の反応温度または溶媒、あるいは付随的な量のn-BuLiの使用により改
善されることはなかった。しかし、この転化は、この合成の進行を可能とし、か
つ詳しく述べたように、該イソ-CBI系においてより一層効果的であることが立証
されており、ここで該系は一層注意深く最適化された。臭化アリルによるN-アル
キル化(NaH、>95％)に引き続き、Bu₃SnHによって促進される、該生成した一級ラ
ジカルのその場でのTEMPOトラップによる、化合物15の、5-エキソ-トリグ遊離基
環化が行われ、これによって化合物16 (91％)が得られる。該MOMエーテルまたは
該N-BOC保護基の競合的脱保護を伴うことなしに、該N-O結合のその後の還元は、
優れた全体としての収率で、遊離のアルコール17を与えた。該一級アルコールの
活性化は(MsCl、Et₃N、94％)は、以下で更に詳細に説明される該キー中間体18を
与えた。

【００４６】 従来の薬物と直接比較するための、N-BOC-イソ-CIを合成するためには、該BOC
基の存在下で、該MOM基を選択的に除去する必要がある。温和な酸で触媒された 脱保護(HCl、i-PrOH/THF、48%)は、セコ-N-BOC-イソ-CI (19)を与え、これに伴 って41％の出発物質が回収された。最適化されてはいないが、この選択的な脱保
護は、一層厳密に検討された、N-BOC-イソ-CBIの合成において極めてうまくいく
ことが分かった。該MOMエーテルおよび該BOC基の徹底的な脱保護(3.6M HCl/EtOA
c)およびこれに続く5,6,7-トリメトキシインドール-2-カルボン酸(TMI-COOH)に よる、EDCIで促進されたカップリング^10,31は、化合物20 (総収率 55％)を与え た。(EDCI = 1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩; B
oger, D.L.等, J. Org. Chem., 1990, 55:4499)。予想通り、化合物19のN-BOC- イソ-CI (21)へのスピロ環化は、DBUによる処理によって実施できるが、その例 外的な反応性は、該薬物の単離および特徴付けの試みを阻んだ(式1):

【００４７】

【化５０】

【００４８】 (化合物21に関する特徴的¹H NMR (CD₃CN、400 MHz)シグナルは、本来の位置に発
生した: δ 2.79 (dt, J=5.4, 7.8Hz、1H)、1.75 (dd, J=3.1, 7.8Hz、1H)。我 々の考察にとって十分な、これらの研究は、N-BOC-イソ-CIが、そのかたわれのN
-BOC-CIよりも一層反応性が高いことを明らかにした。後者は、例外的に反応性 が高いが、迅速カラムクロマトグラフィーによって単離することができる。該セ
コ薬物は、生物学的アッセイおよびDNAアルキル化研究において、その閉環され た片割れであるシクロプロパンと類似の挙動を行うものと予想され、また該より
安定なイソ-CBIを主成分とする薬物との、注意深い比較を行うことができたので
、更なるその単離および特徴付けは行わなかった。

【００４９】

【化５１】

【００５０】 該融合ベンゼンリングによって与えられる、付随的な安定性のために、該CBI 類似体は実質的により安定であり、かつ該CI系よりも生物学的により有力である
。この方法の、該イソ-CBIアルキル化サブユニットの調製への拡張は、上記反応
式3により詳しく記載されており、この根深い構造上の変化の効果を正確に実証 する機会を与えた。市販品として入手できる1,3-ジヒドロキシナフタレンから2 段階で得る(70％)ことのできる、化合物22から出発して、該MOMエーテルとして の該フェノールの保護(MOMCl、NaH、Bu₄NI、78％)は、意図したオルトメタレー ション基質23を与えた。3.5当量のn-BuLiおよびTMEDAによる、THF中での-25℃に
おける2時間の、化合物23の処理および該アリールリチウム中間体と1-クロロ-2-
ヨードエタンとの反応は、該イソ-CI指向性メタレーションを越える実質的に改 善された、80％の収率で、該C2沃化物を与えた。N-アルキル化(NaH、臭化アリル
、94％)、化合物25によるその場でのTEMPOトラップによる、5-エキソ-トリグ遊 離基環化(Bu₃SnH、TEMPO、94％)、および化合物26のN-O結合の還元(Zn、HOAc、8
7％)は、優れた全体としての収率にて、一級アルコール27を与えた。ミツノブ(M
itsunobu)条件下(Ph₃P、CCl₄、90％)で、該一級アルコールを活性化する際の、 該塩化物28への転化は、全ての類似体に対する、最後から2番目の先駆体として 機能する、分割可能な中間体を与える。

【００５１】 束縛された塩化ビニル上での、5-エキソ-トリグ遊離基環化が、既に所定の位 置にある適当な脱離基をもつ５-員環を与えることが示された。この簡潔な方法 を、イソ-CBI(式2)の合成のために採用した。かくして、化合物25の1,3-ジクロ ロプロペンによるN-アルキル化は、96%の収率で進行して、キーラジカル環化先 駆体(29)を生成した。触媒AIBN (0.1当量)およびBu₃SnH (1.1当量)による80℃ (
C₆H₆)による処理は、96%なる収率で、イソ-CBI 28)の三員環核を生成した。この
改良された方法は、元の合成法を2段階だけ短縮し、該TEMPO基の還元による除去
および化合物28への転化を防止する。この改良によって、該化合物28の調製は、
4段階を必要とし、全収率58%で進行した。競合的N-BOC脱保護なしに、該MOMエー
テルの除去(HCl、i-PrOH/THF、90%)は、セコ-N-BOC-イソ-CBI (30)を、最上級の
収率で与えた。オルトスピロ環化(DBU、CH₃CN、96%)は、N-BOC-イソ-CBI (31)を
与え、これは標準的なクロマトグラフィーで精製することができた。同様に、化
合物28の徹底的な脱保護(3.6N HCl/EtOAc)およびこれに続くメチルクロロホルメ
ートによるN-アシル化は、化合物32 (65%)を与え、またスピロ環化(DBU、CH₃CN 、91%)は、化合物33を与えた。

【００５２】

【化５２】

【００５３】 徹底的な脱保護(3.6M HCl/EtOAc)およびそれに続く閉環(5%水性NaHCO₃溶液/TH
F)による、イソ-CBI (34)を合成する初期の試みは空気の存在下で行われ、キノ ン35 (反応式4)の単離をもたらした。恐らく、スピロ環化に続く、該中間体イソ
-CBIの付随的な酸化は、化合物35および該イソ-CBIアルキル化サブユニットの興
味ある更なる変性をもたらす。(このような薬物は、還元による活性化に付すこ とができる)。これと一致して、不活性雰囲気下で、非プロトン系溶媒中で行っ たスピロ環化(2.2当量のDBU、CH₃CN、25℃、20分間、Ar)は、不安定なイソ-CBI(
34、55%)を与え、次いで化合物34を空気に暴露することによって、化合物35に転
化した。

【００５４】

【化５３】

【００５５】 シクロプロパン形成を伴う排他的なスピロ環化が観測され、化合物36に導く競
合的なO-アルキル化は、全く観測されなかった。しかしながら、25℃にて、純粋
な化合物31を周囲の光に長時間(48時間)暴露することにより、カルボニル-シク ロプロパン再配列が生じて、化合物36が形成される(式3)。(Wong, H.N.C.等, Ch
em. Rev., 1989, 89:165)。箔により光から保護した、化合物31の同等な純粋な サンプルは、48時間後にも無変化のままであった。かくして、該イソ-CBIを主成
分とする薬物の取り扱いおよび保存は、典型的には、氷点下の温度にて、光に対
する暴露を最小化するように行われた。長時間に及ぶこれら化合物の観測は、こ
れらの保存条件下で、認識できるほどの分解または転位を示さなかった。

【００５６】

【化５４】

【００５７】 分離：該イソ-CBIを主成分とする薬物の両エナンショマーの諸特性を評価するた
めに、半分取キラルセル(ChiralCel) ODカラム(2×25cm、3% i-PrOH/ヘキサン、
α= 1.24)上での、化合物28の直接的クロマトグラフィー分離を利用した。(Boge
r, D.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1994, 116:7996)。この手順は、進展された中 間体の両エナンショマーを与え(>99% ee)、またジアステレオマーの誘導、分離 および脱誘導体化を回避した。絶対配置の割り振りは、化合物28のより遅く溶出
するエナンショマー(t_R = 35.8分)の、化合物32への転化およびその後の単結晶X
-線構造決定に基づくものであり、これは非天然の(3R)-構造を明らかにした(反 応式3)。(この構造の原子配座は、ケンブリッジクリスタログラフィックデータ センター(Cambridge Crystallographic Data Centre)に寄託されており、またUK
、CB2 1EZ、ケンブリッジ、12ユニオンロードの、ケンブリッジクリスタログラ フィックデータセンターの長官から要望があった際に、得ることができる。この
割り振りに矛盾することなく、天然の生成物1〜3に見られる該絶対的立体化学に
対して類似する、該(3S)-エナンショマーから誘導された該薬物は、より有力な 生物学的活性、より効果的なDNAアルキル化特性を示し、また該天然産物と同等 なDNAアルキル化選択性を呈していた。

【００５８】

【化５５】

【００５９】 デュオカルマイシンおよびCC-1065類似体の合成：該イソ-CBIサブユニットは、 上記反応式5に詳細に示したように、CC-1065およびデュオカルマイシンに組み込
まれた。化合物28の徹底的な脱保護(3.6M HCl/EtOAc、30分)、およびこれに続く
該アミン塩酸塩の5,6,7-トリメトキシインドール-2-カルボン酸(37、3時間、91 ％)、化合物38(3時間、95％)、化合物39(3時間、87％)、インドール₂(40、3時間
、74％)、CDPI₁ (41、9時間、80％)、およびCDPI₂ (42、12時間、32％) による 迅速なカップリング(3当量のEDCI、DMF、25℃)は、夫々化合物43、45、47、49、
51および53を与えた。(Boger, D.L.等, Bioorg. Med. Chem., 1995, 3:1429; Bo
ger, D.L.等, J. Org. Chem., 1987, 52:1521; およびBoger, D.L.等, J. Org.
Chem., 1984, 49:2240)。CDPI₂の低い溶解度は、効果的な単離およびカップリン
グを阻み、結果として収率を低下した。化合物43(CH₃CN、30分、94％)、化合物4
5(CH₃CN、30分、85％)、化合物47(CH₃CN、30分、83％)、化合物49(DMF、30分、8
8％)、化合物51(DMF、60分、81％)、および化合物53(DMF、60分、59％)のDBU(1.
5当量、25℃)スピロ環化は、優れた転化率で、夫々化合物44、46、48、50、52お
よび54を与えた。

【００６０】 ソルボリシス反応性および位置選択性：該アルキル化サブユニットの２つの基本
的な特徴は、過去の研究において重要であることが立証されている。(Boger, D.
L.等, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, 35:1439)。その第一の特徴は、該 活性化されたシクロプロパンの、立体電子的に制御された酸触媒による開環であ
り、これは求核試薬の、少なくとも置換されたシクロプロパン炭素への優先的な
付加を指示する。該第二の特徴は、酸により触媒されるソルボリシスの相対的速
度であり、これは該薬物の官能基の反応性を正確に反映し、かつソルボリシスの
安定性と、インビトロ細胞毒性との間の、直接的関連性を帰結することが分かっ
ている。N-BOC-イソ-CBIは、N-BOC-CBIの構造的特徴の多くを維持しているが、 ビニロガス(vinylogous)アミド複合体を分解する可能性のある、この異性化によ
る変性は、該薬物のソルボリシス安定性を減じるものと予想された。しかし、こ
の効果の大きさがどの程度のものか、あるいはソルボリシスが、依然として同一
の高い位置選択性を伴って起こっているかについては、明らかではなかった。

【００６１】 N-BOC-イソ-CBI (31、t_1/2=27.6 h、k=6.97×10^-6s^-1)およびN-CO₂Me-イソ-CB
I(33、t_1/2=30.1 h、k=6.40×10^-6s^-1)は、pH 3において化学的ソルボリシスに 対して妥当な安定性を示示すことが明らかにされており、このことは、該CC-106
5アルキル化サブユニット(N-BOC-CPI、55、t_1/2=36.7 h)に匹敵する反応性を示 すが、該デュオカルマイシンAアルキル化サブユニット(N-BOC-DA、56、t_1/2=11
h)よりも高い安定性を示した(表1)。

【００６２】

【表１】 表1：ソルボリシス反応性および位置選択性

【００６３】

【化５６】

【００６４】

【００６５】 しかし、N-BOC-イソ-CBIは、N-BOC-DSA (57、t_1/2= 177h)およびN-BOC-CBI (5
8、t_1/2= 133h)よりも著しく不安定であった。かくして、N-BOC-イソ-CBI (31) は、直接的比較において、類似体N-BOC-CBIよりも5x反応性が高いことが立証さ れた。このソルボリシスは、UVによる分光光度法により、図3に示すように、該 イソ-CBI発色団の長波長吸収バンド(397nm)の消失によって追跡した。該キノン3
5の反応性も、pH3において検討し(t_1/2= 5.1 h、k= 3.80×10^-5 s^-1)化合物31ま
たは33よりも5-6x反応性が高いことが立証された。 CH₃OHの化合物31への、酸触媒による求核付加を、予備的尺度で行い、付加の 位置選択性を確立し、かつ最も置感度の低いシクロプロパン炭素への求核付加に
より誘導される、予想される生成物62の合成により確認した。N-BOC-イソ-CBIを
、0.1当量のCF₃SO₃H(CH₃OH溶液)で処理して、明確なソルボリシスを行い、化合 物62と63との40:1混合物を得た(反応式6)。結局、該酸により触媒された、CH₃OH
の化合物31への付加は、N-BOC-CBI (58、>20:1)²²に類似する、殆ど排他的な位 置選択性(40:1)で起こる。該N-BOC-CBIは、天然のアルキル化サブユニット自体(
6-1.5:1)よりも極めて選択性が高い。(Boger, D.L.等, Bioorg. Med. Chem. Let
t., 1996, 16:1955; Boger, D.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1997, 119:311)。

【００６６】

【化５７】

【００６７】 N-CO₂Me-イソ-CBI (33)のX-線構造：ソルボリシス位置選択性および反応性との 構造的相関。N-CO₂Me-イソ-CBI (33)の単結晶X-線構造決定を行い、N-CO₂Me-CBI ⁴² のX-線構造との直接的な比較により、観測された諸特性(図4)に関する構造上 の基礎を確立した。(Boger, D.L., Turnbull, P. J. Org. Chem., 1997, 62:000
0)。これら2つの系の第一の顕著な類似性は、最も置換度の低いC9シクロプロパ ン炭素まで延びた、該シクロプロパン結合の撓み軌道の垂直配向である。該ソル
ボリシス生成物としてのフェノールの発達したπ-系をもつ、この理想化された 立体電子配置は、該最も置換度の低いC9シクロプロパン炭素に、求核付加に対す
る優先性を付与する。これとは対照的に、第三C9a炭素まで延びた該シクロプロ パン結合は、該シクロヘキサジエノンのπ-系に対してほぼ直交しており、しか もこの炭素へのS_N2付加は、立体電子的に並びに立体的に好ましくないものとな っている。イソ-CBIの相対的なシクロプロパン結合の長さは、この配向およびπ
共役を反映しており、ここで破壊されるC9-C8aシクロプロパン結合(1.531 A)は 、より置換度の高い炭素まで延びた、該C9a-C8a結合(1.513 A)よりも長く、従っ
てこれよりも弱い。このリング拡張ソルボリシスは、発生した正の電荷を、一級
炭素よりも好ましい二級炭素上に配置するが、この固有の優先性は、該反応の位
置選択性並びにより置換度の低い中心で優先的に攻撃されるS_N2反応の特徴を立 体電子的に制御することによって、取り消される。

【００６８】 更に、該X-線構造は、CBIとイソ-CBIとの間の、安定性における差違の源に関 する知見を与える。CC-1065、該デュオカルマイシンおよびその類似体の安定性 は、少なくとも以下のような3つの構造に関する特徴の結果である: 即ち融合芳 香族系により与えられる共役的安定性、該シクロプロパンの非理想的な配列およ
び該ビニロガスアミドにより与えられる強力な交叉共役的安定性である。これら
特徴中の第一のもの、即ち該融合芳香族リングは、該CBIおよびイソ-CBI両者に 存在する。該CI/CBIの比較と同様に、該イソ-CI/イソ-CBI活性の比較によれば、
イソ-CIに相対的なイソ-CBIに対する低下された芳香族性の駆動力は、該安定性 に対して大きな寄与をもつ。更に、N-CO₂Me-イソ-CBIおよび N-CO₂Me-CBIにおけ
る、該π-系をもつ該シクロプロパン配列は類似している。これら両者は、該シ クロヘキサジエノンの面によって、ほぼ等しい部分に二分(イソ-CBIに対して41 °/15°およびCBIに対して41°/16°)されている。これら両者において、該シク
ロプロパンは、該融合5-員環の束縛によって、下方に引き下げられるのみならず
、脇に押しやられる(イソ-CBIに対して9°およびCBIに対して12°)。

【００６９】 かくして、これら両者は、該シクロプロパンの非理想的な配列および共役に起
因して、安定性における利益を被り、この利益は、該融合５-員環により与えら れる。これら２つの系同士の重要な違いは、該ビニロガスアミドにより、該活性
化されたシクロプロパンにより与えられる、直接的な交叉共役安定性である。こ
のビニロガスアミド共役の特徴は、この共鳴安定化を反映している、該N²-C^2a結
合の短い長さである。この交叉共役的ビニロガスアミド安定性が減少した場合、
該シクロプロパンの該共役性および固有の反応性は、それに応じて増大する。こ
れと矛盾なしに、N-CO₂Me-イソ-CBIは、N-CO₂Me-CBI(セコN-CO₂Me-CBIに関する1
.416 Aに対して、1.390 A)に相対的な、低いが排除されてはいないビニロガスア
ミド共役を示すN²-C^2a結合長さ(化合物32の1.426 Aに対して、1.400 A)を示し⁴² 、また最近の研究で確立された傾向に従う(表2)。

【００７０】

【表２】

【００７１】 DNAアルキル化選択性および効率：これら薬物のDNAアルキル化特性を、関連する
薬物について比較用の結果が利用できる、w794およびw836二重螺旋DNA内で検討 した。(Boger, D.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1994, 116:6461;およびBoger, D.L
.等, J. Am. Chem. Soc., 1995, 117:11647)。該アルキル化サイトの同定および
該利用可能なサイトの相対的な選択性の評価は、該薬物に暴露した後に、該単に
5'-末端標識した二重螺旋DNAのストランドランド開列を熱的に誘発することによ
って達成される。この末端標識した二重螺旋DNAを、暗所で、ある範囲の薬物濃 度および温度により処理した後、未結合の該薬物を、該DNAのEtOH沈殿によって 除去した。このDNAの水性緩衝液への再溶解、DNAのアルキル化サイトにおけるス
トランドの開裂を誘発するための、熱分解(100℃、30分間)、サンガージデオキ シヌクレオチド配列決定標準に近い、変性高分解能ポリアクリルアミドゲル電気
泳動(PAGE)、およびオートラジオグラフィーは、該DNA開裂およびアルキル化サ イトの同定に導く。この手順の完全なる詳細は、至るところに記載されている。
(Boger, D.L.等, Tetrahedron, 1991, 47:2661)。

【００７２】 (-)-イソ-CBI-TMI (44)並びに(+)-デュオカルマイシンSAおよび(+)-CBI-TMIに
よる、DNAアルキル化の代表的な比較は、図5に示されている。これら比較から導
くことのできる重要な結論が３つある。第一に、(-)-イソ-CBI-TMIは、同一の配
列選択性を示す、(+)-デュオカルマイシンSAおよび(+)-CBI-TMIと同様な様式で 、DNAをアルキル化する。新たなアルキル化サイトは検出されず、またアデニンN
3アルキル化のみが、限られた薬物および過剰のDNAなる条件下で、検出された。
特に、このような配列決定研究は、より高いアフィニティーをもつアルキル化サ
イトおよび匹敵するアフィニティー(1-0.01x)をもつ少量のサイトのみを検出す る。これら条件の下で、これらの研究は、デュオカルマイシンSAおよびCBI-TMI と同様に、イソ-CBI-TMIは、グアニンN3アルキル化に比して、アデニンに対して
排他的選択性を示す。

【００７３】 しかし、イソ-CBI-TMIの反応性が与えられれば、少量のグアニンのアルキル化
は、CC-1065 (Park, H.-J.等, J. Am. Chem. Soc., 1997, 119:629)およびデュ オカルマイシンA⁴⁶を含有する、より反応性の高い薬物について観測されたもの と類似する、高い薬物-塩基対比において実施したインキュベーションにおいて 予想されるものと考えられる。(Sugiyama, H.等, Tetrahedron Lett., 1993, 34
:2179; Yamamoto, K.等, Biochemistry, 1993, 32:1059; およびAsai, A.等, J.
Am. Chem. Soc., 1994, 116:4171)。重要なことに、(-)-イソ-CBI-TMIおよび(+
)-イソ-CBI-TMIの理想的な挙動は、該C-4カルボニルの位置が、該DNAアルキル化
の配列選択性に影響を与えないことを示している。このことは、該配列選択性を
調節する、DNAアルキル化用の薬物を活性化するための、該C-4カルボニルの、配
列依存性燐酸骨格プロトン化に関する提案とは一致していない。しかし、このこ
とは、該配列選択性が、該薬物の該ATに富む非共有結合性結合選択性および該ア
デニンN3アルキル化サイトに対するその立体的な利用性によって調節される、上
記モデルと完全に一致している。

【００７４】 第二に、該配列選択性に明確な区別はないが、DNAのアルキル化の相対的な効 率におけるかなりの差違が存在する。その相対的な反応性および細胞毒性の効力
と矛盾なしに、(-)-イソ-CBI-TMIによりアルキル化されたDNAは、(+)-CBI-TMIお
よび(+)-デュオカルマイシンSAと比較して、50-100x倍も有効性が低い。従って 、(-)-イソ-CBI-TMIは、デュオカルマイシンAよりも約10x有効性が低いことが示
されている、デュオカルマイシンAに匹敵する有効性で、DNAをアルキル化するこ
とが分かった^10,11。デュオカルマイシンAを含有する、より反応性の高いアルキ
ル化サブユニットを含む該薬物を使用して行われた観測に加えて、かつ該観測と
同様に、しかしより安定な薬物とは異なり、(-)-イソ-CBI-TMIのアルキル化効率
は、該インキュベーション温度が、25℃から4℃に減少するにつれて増大するこ とが分かった。このことは、これらの違いが、イソ-CBI-TMIの非生産性のソルボ
リシスに部分的に寄与している可能性があり、該薬物がアルキル化と競合し、か
つDNAの全体的アルキル化効率を下げていることを示唆している。

【００７５】 第三に、化合物44によるDNAアルキル化速度は、正確には定量化されていない が、該速度は、CBI-TMIおよびデュオカルマイシンSAの速度と定性的に類似し、 かつ我々が検討した、実質的に低下した速度を示す(例えば、デュオカルマイシ ンSAの逆類似体)薬物の速度よりも、かなり速いものである。従って、該C-4カル
ボニルの転移は、DNAアルキル化の速度を、該アルキル化サイトモデルにおける 触媒作用に必要とされる、燐酸骨格プロトン化(またはカチオン性ルイス酸複合)
化と一致する様式で、影響を与えることはなかった。 同様な結果は、w836 DNAについて得られた(図6)。天然のエナンショマーであ る(-)-イソ-CBI-TMIは、(+)-デュオカルマイシンSAと同一のサイトをアルキル化
するが、そのアルキル化の効率は50-100倍低かった。図示したセグメント内にお
いて、これら2つの天然のエナンショマーは、配列5'-AAAAAAにおける初めの3つ の3'アデニン、およびアルキル化に対応して、より低効率で、第四の3'アデニン
および3-4塩基対のATに富むサイトに跨る3'-5'結合サイト(即ち、5'-AAAA > 5'-
CAAA)をアルキル化した。

【００７６】 CBI-TMIの天然以外のエナンショマーと同様に、天然以外のエナンショマーであ る(+)-イソ-CBI-TMIは、該天然のエナンショマーよりも、50-100x倍低い効率で 、DNAをアルキル化し、このアルキル化を、ent-(-)-デュオカルマイシンSAと同 等の選択性で行った。w836において、これは、配列5'-AAAAAA内の中心のアデニ ンを構成し、また逆の5'-3'方向に結合する、3-4塩基対のATに富むサイトのアル
キル化に対応する。この付加生成物のジアステレオマー特性のために、該天然以
外のエナンショマーは、該配列内の第二の5'塩基(アデニン)をアルキル化する( 即ち、5-AAAA > 5'-CAAAA)。このことは、いたるところで⁴詳細に論じられ、か つ例示されており、イソ-CBI-TMIの両エナンショマーはこのモデルとうまく一致
している。従って、該燐酸には利用できない副溝の深部位置に結合した、潜在的
に該燐酸骨格に隣接する、複合体の外面からの、該C-4カルボニルの転移は、こ れら何れかのエナンショマーのDNAアルキル化選択性に何等影響を与えない。

【００７７】 更に、化合物20、即ちセコイソ-CI-TMIの、該DNAアルキル化特性を、(+)-デュ
オカルマイシンSAと共に検討し、また代表的な比較を、w794DNAについて、図7に
示す。過去の研究において、このようなセコ薬物は、同等なDNAアルキル化選択 性、効率および細胞毒生活性を示す、そのシクロプロパンリングが閉じられた片
割れとは、識別不可能な様式で挙動し、このことは閉環がこのアッセイ条件下で
制限されていないことを示す。例外的に高い反応性のために、我々は該閉環され
たイソ-CI薬物を単離できなかったが、この実験は、該セコ先駆体20を使用して 行った。イソ-CBI-TMIを使用して行った観測と同様に、化合物44は、アデニンの
みをアルキル化し、かつ同一の配列選択性を示す、デュオカルマイシンSAと同様
な方法で、DNAをアルキル化した。新たなアルキル化サイトは検出されなかった が、該利用可能なサイトの相対的な選択性は、化合物20において僅かに低かった
。このことは、図7に首尾良く例示されており、該図において、化合物20は(+)- デュオカルマイシンSAよりも顕著に、該小さなサイトをアルキル化する。興味深
くしかも重要なことに、化合物20は、明らかにされている該閉環イソ-CI-TMIよ りも一層効果的である、(+)-デュオカルマイシンSAよりも、僅かに10x倍低い効 率で、DNAをアルキル化した。

【００７８】 これまで、この観測は、該イソ-CI系に固有のものであり、また依然として該イ ソ-CBI系または変性アルキル化サブユニットを組み込んだ他の類似体には、観測
されていない。このことが化合物20に対するクロロセコ先駆体に対して、該メシ
レートの使用により起こるものか、あるいは該イソ-CI系に固有のものであるか は、確立すべきこととして残されている。しかし、選択された例において、該セ
コ先駆体は、特により反応性の薬物による、該対応するシクロプロパン閉環物質
の特性を越える、産性特性を示す可能性があることを示唆している。容易にシク
ロプロパンの閉環を起こす該より安定な薬物とは異なり、化合物20のイソ-CI-TM
Iの、該アッセイ条件下での閉環は起こりそうにない。寧ろ、このDNAのアルキル
化は、該遊離シクロプロパン型薬物の中間体を生成することなしに、化合物20に
より直接起こる可能性が高い。従って、該C-4カルボニルの転移は、該DNAアルキ
ル化の選択性を変更しないばかりか、その完全な除去は、その親電子特性に依存
して、匹敵するDNAアルキル化選択性、効率および速度をも示す、一群の薬物を 与える可能性がある。このことは、閉環して活性化されたシクロプロパンを形成
できる能力に欠ける、関連する親電子試薬が、対応する天然産物と同等なDNAア ルキル化選択性を示すという、初期の観測と一致する。

【００７９】

【表３】 表３：ウシ胸腺DNAのアルキル化 a: 分析スケール、HPLC分離およびUVによる定量。 b: 分離スケール、単離および重量定量。c: nd = 検出せず。

【００８０】 該(-)-イソ-CBI-TMIアデニン付加生成物の定量、単離および特徴付け: 上記初期
のアルキル化の研究は、(-)-イソ-CBI-TMIが、(+)-デュオカルマイシンSAに等価
な様式で、副溝内のアデニンをアルキル化することを確立した。これら研究にお
いてアルキル化サイトを同定するのに使用した、DNAの熱的開裂は、熱的なグリ コシド結合の開裂(アデニンN3、グアニンN3、またはグアニンN7アルキル化)に敏
感な付加生成物のみを検出し、またDNAにおける他の求核中心を含む、有力なア ルキル化事象は、このアッセイでは検出できない。(-)-イソ-CBI-TMIが、(+)-デ
ュオカルマイシンSAと同様な様式で、DNAをアルキル化することを確認するため に、またその他のアルキル化事象に対するアデニンN3の相対的な程度を確立する
努力において、該アデニンN3アルキル化反応の定量および該反応による生成物の
構造の確認は、熱的に放出されたアデニン付加生成物の単離および特徴付けを通
して達成された。

【００８１】 これは、ウシ胸腺DNAのアルキル化の研究によって扱った。このアルキル化を 実施するための最適の条件は、分析的スケールで(100μgの薬物)、(-)-44につい
て確立した。この目的のために、該薬物および付加生成物の長波長UV吸収が、該
アデニン付加生成物、未反応出発物質および任意の副反応生成物(ソルボリシス または転位)の、有用な定量手段を与える。表3参照。分析用HPLC解析を利用して
、滞留時間およびUVスペクトルデータと、信頼すべき物質との相関を介して、該
生成物の同一性を確認した。予備的なDNAアルキル化反応およびその後の(+)-66 の単離は、大過剰のDNAの存在下で、該薬物の完全な消費をもたらすように決定 された条件下で行われた。かくして、アルキル化(4℃、72時間、150bp)後に、ウ
シ胸腺DNAを含有する水性緩衝溶液の抽出(EtOAc)は、如何なる化合物(-)-44の回
収をもたらさず、かつ少量の(<5％)転位生成物65のみを与えた。大過剰のDNAの 存在下における、4℃でのこの反応の実施は、競合的なソルボリシスを阻んだ。 該アルキル化されたDNAを、10mMの水性燐酸ナトリウム緩衝液中で熱処理(100℃ 、30分、pH7.0)し、次いでEtOAcで抽出することにより、90-95％の転化率、≧95
％の純度(HPLCによる)で、化合物66を得た。この熱処理を繰り返しても、殆どま
たは全く付随的な付加生成物は得られなかった。痕跡量の競合するグアニン付加
生成物さえも検出されなかった。単一の付加生成物へのこの高い転化率は、化合
物44が、検討した条件下での、該アデニンN3アルキル化反応に、排他的に関与し
ていることが、立証された。

【００８２】 化合物66の十分な特徴付けは、明確にその構造を確立し、かつそのスペクトル
特性は、該デュオカルマイシンSA¹¹およびA-アデニンN3付加生成物およびN3メチ
ルアデニン(図10)に対する高い相同性を示した。¹H NMRにおいて、付加生成物66
のC3-Hは、特性化学シフト4.36-4.37における、単一のプロトン(1H)として観測 される。より置換度の高いシクロプロパン炭素に対する、別のアデニンN3付加に
起因する、該ベンジル中心に対するこのC3-H NMRシグナルは、大きなジェムカッ
プリング定数(19.5Hz)を有する、容易に識別できる2つのプロトン(3.5-3.6 ppm,
2H)として現れる。該構造の付随的な特徴は、C2-H₂およびC4-H₂に対する化学シ
フトおよびカップリング定数であった。アデニンN3アルキル化生成物に特徴的な
、該アデニンC2-HおよびC8-Hは、容易に識別できた。該プロトン化塩基の¹H NMR
は、DMSO/1%TFA中で測定され、この場合にも、該デュオカルマイシンSAについて
観測されたスペクトルデータとの高い相関性が観測された。該２つのアデニンC6
-NH₂プロトンは、別々のシグナルとして観測され、このことは、プロトン化N-メ
チルアデニン中に存在するような、⁶C=NH₂ ⁺結合の回りの回転が制限されている ことを示す。

【００８３】 更に、該アデニンC８-HおよびアデニンC２-H両者のプロトン化の結果としての、
低磁場側へのシフトも、観測された。化合物66の¹³C NMRも、該デュオカルマイ シンSAおよびA付加生成物のものとよく一致していることが分かった。(Boger, D
.L.等, J. Am. Chem. Soc., 1991, 113:6645)。これらキーとなる識別シグナル は、融合6-員環に対して、融合5-員環内にまたはその近傍に見られ、化合物66で
は、後者のみと一致する化学シフト、即ちδ39.7におけるC3は、デュオカルマイ
シンSA(δ41.1)と一致し、デュオカルマイシンB₁/C₁ (δ33-34)中の6-員環とは 一致しない。従って、(+)-デュオカルマイシンSAと同様に、(-)-イソ-CBI-TMIの
、該最小の置換度のシクロプロパン炭素に対する、該アデニンN3の付加は、二重
螺旋DNAの存在下での、該薬物の90-100%の消費を引き起こし、また該C-4カルボ ニルの転移にも拘らず、該天然産物と等価な様式で、DNAと結合しかつこれをア ルキル化することが分かった。

【００８４】

【化５８】

【００８５】 インビトロ細胞毒性活性: この種の薬物を使用した過去の研究は、ソルボリシス
安定性と、細胞毒性の効力との間の直接的な相関関係を規定した。これら相対的
な反応性と一致して、該イソ-CBIを主成分とする薬物は、深遠な構造上の変性に
も拘らず、この関係に厳密に従う、細胞毒性活性を呈した(表5、図8)。同様に該
DNAのアルキル化の研究において確立された傾向に従う、これら結果は、天然生 成物に類似する(S)-構造を持つ類似体の、(-)-エナンショマーは、10-50x倍だけ
、更に有力なエナンショマーであることを立証している。この一般化に対する例
外は、N-BOC-イソ-CBIであり、ここでは該２つのエナンショマーは、容易に識別
できず、しかも該天然以外のエナンショマーは、首尾一貫して僅かに高い効力(1
-2x)を示した。該予め形成されるシクロプロパンに欠けるが、閉環能力を有する
該セコ先駆体は、細胞毒性を持つことが見出され、該活性は最終的な閉環試薬か
ら識別することは不可能であった。

【００８６】 該デュオカルマイシンにおけるC５メトキシ基の固有の重要性と一致して、イソ-
CBI-TMI(44)および46は、同等な効力を持つことが分かっており、このことは、 化合物44のC6およびC7メトキシ基が、その細胞毒性能に寄与していないことを示
している。該桂皮酸誘導体48は、実質的に低効力(40-50x)を持つことが分かって
おり、このことは剛性のN² DNA結合サブユニットの必要性を示唆している。最後
に、これら薬物は、該DNA結合サブユニットのサイズおよび長さが増大するにつ れて、細胞毒性効力を増大する、滑らかな傾向を示し、イソ-CBI-CDPI₁およびイ
ソ-CBI-CDPI₂は、夫々IC₅₀値200および50pMを示す、この群において、最も効力 の高い細胞毒生活性を示した。(我々は、N-BOC-イソ-CI(21)および直接的比較の
ためのイソ-CI-TMIを、単離することはできなかったが、そのセコ先駆体(±)-19
および(±)-20は、驚くほどに強力な、細胞毒性を示し(IC₅₀、夫々L1210 = 10μ
Mおよび6nM)示し、これは該閉環物質自体の値を越えるものと思われる)。

【００８７】 発見: イソ-CIおよびイソ-CBIを設計して、該デュオカルマイシンおよびCC-1065
による、該DNAアルキル化配列の起源に関する種々の提案の、キー要素をテスト した。これら薬物は、CIおよびCBIについて報告された合成反応式に対して、補 足的な改良された合成反応における、指向性オルトメタレーションおよびオルト
スピロ環化を適用することによって調製した。イソ-CBIは、CBIよりも5x倍不安 定であることが分かっており、またCC-1065およびデュオカルマイシンAに匹敵す
る反応性を持つ。更に、求核付加反応が、最も置換度の低いシクロプロパン炭素
において起こり、位置選択性(40:1)は、CBIの値に匹敵するが、その天然生成物 自体の値(6-15.:1)を越えるものである。イソ-CBIおよびCBIのX-線構造の比較は
、ほぼ同等な該シクロプロパンの非理想的な共役および該開裂されたシクロプロ
パン結合の排他的な立体電子配列を明らかにした。

【００８８】 最近の観測と一致して、CBI自体に相対的な、イソ-CBIのこの低い安定性は、低 下された交叉共役ビニロガスアミド安定化に起因するものとすることができ、該
N²-C^2a結合長さが、該安定性の特徴である^7,42。イソ-CBIの分離および完全な組
のデュオカルマイシンおよびCC-1065類似体への組込みは、これら諸特性の比較 および該DNAアルキル化配列選択性の起源に関する、更なる識別実験を可能とし た。該イソ-CBI類似体は、極めて有力な細胞毒性薬物であり、ピコモル程度のIC ₅₀ 値を示し、これはその相対的な安定性と相関関係にあった。滑らかにこの関係
に従うことに加えて、これら類似体は、該DNA結合サブユニット長さの増加に伴 って、細胞毒性効力が増大するという、滑らかな傾向を示した。該天然生成物と
同様に、化合物1〜3の絶対構造を持つ(S)-エナンショマーは、その(R)-エナンシ
ョマーよりもより強力である(10-50x)ことが立証されている。

【００８９】 DNAのアルキル化に関する研究は、(-)-イソ-CBI-TMIが、(+)-CBI-TMIおよび(+)-
デュオカルマイシンSAよりも約50-100x倍も効率が低いので、DNAアルキル化と細
胞毒性との間の高い相関関係を明らかにした。更に、転移したC-4カルボニルを 有する、イソ-CIおよびイソ-CBI類似体両者は、同一の配列選択性を示し、かつ 最も置換度の低いシクロプロパン炭素に対する、アデニンN3付加反応により誘導
される、CBI-TMIおよびデュオカルマイシンSAと同様なサイトを、匹敵する反応 速度でアルキル化した。このことは、該DNAアルキル化選択性がアルキル化を活 性化するための、該C-4カルボニルの、配列依存性DNA骨格燐酸プロトン化により
制御されるという提案とは矛盾するが、該非共有結合性の結合並びに立体的利用
性モデルとは矛盾しない。最後に、この群の異性化類似体は、これまでの該アル
キル化サブユニットに対する、最も重大な構造上の変性を含み、しかも有効なDN
Aアルキル化薬物のままであり、天然生成物自体に匹敵する性質を有している。

【００９０】物質の合成 ： 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-4-ヒドロキシ-3-[[(メタンスルフォニル)オキシ
]メチル]-2,3-ジヒドロインドール(19): 化合物18 (22mg、0.057mM)を2mLの1:1
i-PrOH/THFに溶解した溶液を、12N HCl (33μL、0.4 mM)で処理し、25℃にて48 時間攪拌した。この反応溶液を、減圧下で濃縮した。これをフラッシュクロマト
グラフィー(SiO₂、1.5×10cm、40％EtOAc/ヘキサン)にかけることにより、化合 物18 (8mg、41％)および19 (9.5mg、48％)を、白色のフィルムとして回収した： ¹ H NMR (CDCl₃、400MHz): δ 7.43 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.39 (d, J = 8.6H
z, 1H), 5.44 (br s, 1H), 4.55 (dd, J = 4.5, 9.8Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 8.
1, 9.8Hz, 1H), 4.00 (m, 2H), 3.79 (m, 1H); IR (フィルム), ν_max: 3347, 2
977, 1682, 1622, 1602, 1467, 1394, 1172, 1145, 948 cm^-1; FABHRMS (NBA/Cs
I) m/z: 476.0156 (C₁₅H₂₁NO₆S+Cs⁺ は、476.0144)。

【００９１】 4-ヒドロキシ-3-[[(メタンスルフォニル)オキシ]メチル]-1-[5,6,7-トリメトキ シインドール-2-イル]カルボニル]-2,3-ジヒドロインドール(20): 化合物18 (9.
0 mg、0.023mM)のサンプルを、3.6N HCl/EtOAc (2 mL)に溶解し、得られた溶液 を25℃にて、30分間攪拌した。該溶媒をN₂ガス気流で除去し、残留する塩を、高
真空下で十分に乾燥した。この塩を、無水DMF (1.2 mL)に溶解し、化合物37 (7
mg、0.028 mM)およびEDCI (13 mg、0.07 mM)で処理した。得られたこの溶液を、
Ar雰囲気下で、25℃にて3時間攪拌した。次いで、この反応混合物を、H₂O (5 mL
)で希釈し、EtOAc (3×5 mL)で抽出した。併合した有機相を乾燥し(Na₂SO₄)、減
圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、50％EtOAc/
ヘキサン)により、化合物20 (6.0 mg、55％)を、白色のフィルムとして回収した
：¹H NMR (CDCl₃、400MHz): δ9.33 (br s, 1H), 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7
.19 (m, 1H), 6.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.52 (dd, J = 0.5,
8.0 Hz, 1H), 4.65 (dd, J = 4.3, 10.1 Hz, 1H), 4.58 (dd, J = 9.2, 10.8 Hz
, 1H), 4.51 (dd, J = 3.9, 10.8 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 8.4 10.1 Hz, 1H),
4.05 (s, 3H), 4.01 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 2.95 (s, 3H); IR
(フィルム)ν_max: 3261, 2938, 1659, 1611, 1462, 1352, 1306, 1282, 1174,
1107 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 609.0319 (C₂₂H₂₄N₂O₈S+Cs⁺は、609.0308 であることを要する)。

【００９２】 N-(t-ブトキシカルボニル)-４-(メトキシメトキシ)-２-ナフチルアミン(23): 化
合物22²²(6.67 g、25.0 mM)を、0℃にて無水DMF125 mLに溶解した溶液を、幾つ かの部分のNaH (1.13 g、28.0 mM)で、5分間に渡り処理した。10分後に、Bu₄NI
(0.925 g、2.5 mM)を添加し、次いでClCH₂OCH₃(2.9 mL、38 mM)を滴下した。こ の反応混合物を、25℃にて5時間攪拌した後、この反応を、100 mLの水を徐々に 添加することにより停止させた。水性相をEtOAc (3×100mL)で抽出した。得られ
た有機相を併合し、NaHCO₃の10%水性溶液(100 mL)、水(4×50 mL)で洗浄し、乾 燥(Na₂SO₄)し、かつ減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、4
×15cm、0-15％EtOAc/ヘキサン勾配)は、化合物23 (6.0 g、78％)を、桃色の固 体として与えた。m.p. 64-66℃。 ¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 8.15(d、J=7.
8 Hz, 1H), 7.67 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.05 (d, J = 1.9 Hz, 1), 6.87 (br
s, 1H), 5.34 (s, 2H), 3.51 (s, 3H), 1.54 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 M
Hz) δ 153.3, 152.8, 136.0, 134.8, 127.0, 126.9, 123.7, 122.5, 121.6, 10
8.0, 101.8, 94.6, 80.5, 56.1, 28.2; IR (フィルム) ν_max 3334, 2977, 1713
, 1634, 1538, 1392, 1367, 1248, 1160, 1057 cm^-1; FABHRMS (NBA) m/z 303.1
463 (C₁₇H₂₁NO₄ は303.1471であることを要する)。 元素分析: C₁₇H₂₁NO₄としての計算値: C, 67.31; H, 6.98; N, 4.62; 実測値:
C, 67.13; H, 7.18; N, 4.89。

【００９３】 N-(t-ブチルオキシカルボニル)-3-ヨード-4-(メトキシメトキシ)-2-ナフチルア ミン (24): 化合物23 (0.435 g、1.43 mM)の無水THF (5.7 mL)溶液を、-25℃に 冷却し、TMEDA (0.758 mL、5.0 mM)で処理し、次いでn-BuLi (2.5Mヘキサン溶液
2.29 mL、5.0 mM)をゆっくりと滴下した。得られた金色の溶液を、-25℃にて2時
間攪拌した。この反応混合物を、1-クロロ-2-ヨードエタン (0.37 mL、5.0 mM) で処理し、25℃にて15分間攪拌した。この反応液を水(40 mL)で希釈し、Et₂O (3
×20mL)で抽出し、併合した有機抽出液を飽和NaCl水性溶液で洗浄し、乾燥(Na₂S
O₄)し、かつ減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、2.5×15c
m、0-7％EtOAc/ヘキサン勾配)は、化合物24 (490 mg、80％)を、黄色オイルとし
て与えた。¹H NMR (CDCl₃、400 MHz): δ8.35 (s, 1H), 8.03 (d、J=12.8 Hz, 1
H), 7.78 (d、J=12.5 Hz, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.14 (br s, 1H), 5.20 (s, 2H)
, 3.74 (s, 3H), 1.56 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ: 154.7, 152.6,
135.1, 134.8, 127.6, 127.4, 125.1, 125.0, 122.2, 113.0, 100.5, 87.7, 81
.1, 58.5, 28.4; IR (フィルム) ν_max 3391, 2977, 2933, 1732, 1524, 1367,
1340, 1276, 1228, 1157 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 430.0507 (C₁₇H₂₀INO₄ +H⁺ は、430.0515であることを要する)。

【００９４】 2-[[N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-(2-プロペン-1-イル)アミノ]-3-ヨード-4
-(メトキシメトキシ)ナフタレン (25): 化合物24 (0.490 g、1.1 mM)の無水DMF
(36 mL)溶液を、-10℃に冷却し、少量づつのNaH (69 mg、1.7 mM)で処理した。 この得られた懸濁液を、15分間攪拌し、純粋な臭化アリル(0.49 mL、5.7 mM)で 、これをゆっくり滴下することにより処理した。この反応混合物を、25℃に加温
し、1時間攪拌した。この反応混合物を、5% NaHCO₃ (50 mL)の添加により反応停
止させ、その水性相をEtOAc (3×20 mL)で抽出した。併合した有機抽出液を、水
(5×10 mL)で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、かつ減圧下で濃縮して、黄色オイルとし
ての2:1アミド回転異性体混合物として、化合物25を得た。フラッシュクロマト グラフィー(SiO₂、2.5×15cm、10％EtOAc/ヘキサン)は、化合物25 (503 mg、94 ％)を、無色オイルとして与えた。¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 8.16 (m, 1H)
, 7.77 (m, 1H), 7.50 (m, 3H), 5.97 (m, 1H), 5.23 (m, 2H), 5.07 (m, 2H),
4.56 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 1.55および1.33 (s, 9H); ¹³C NM
R (CDCl₃, 100 MHz) δ: 155.6および155.4, 154.1および153.9, 141.3および14
1.1, 133.8および133.5, 127.7および127.6, 127.1, 126.8, 125.2, 124.5, 122
.4, 117.8および117.3, 100.6, 95.7, 80.6および80.3, 58.3, 53.6, 52.4, 28.
3および28.2; IR (フィルム) ν_max 2975, 2930, 1703, 1581, 1566, 1385, 136
6, 1159, 1047 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 601.9825 (C₂₀H₂₄INO₄+Cs⁺ は、
601.9804であることを要する)。

【００９５】 １-(t-ブチルオキシカルボニル)-４-(メトキシメトキシ)-3-[[(2',2',6',6'-テ トラメチルピペリジノ)オキシ]メチル]-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(
26): 化合物25 (470 mg、1.00 mM)およびTEMPO (468 mg、3.0 mM)の無水ベンゼ ン(43 mL)溶液を、Bu₃SnH (0.283 mL、1.05 mM)で処理した。この溶液を50℃に 加温し、その後の30分間の内に、追加の1.05当量のBu₃SnH (0.283 mL、1.05 mM)
を二度添加した。更に、3.0当量のTEMPO (468 mg、3.0 mM)を、10mLの無水ベン ゼンに添加し、これと共に、次の45分間の内に、追加の1.05当量のBu₃SnHを二度
添加した。全体で1.5時間の経過後に、この溶液を25℃に冷却し、揮発性物質を 、減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、2.5×15cm、0-12%E
tOAc/ヘキサン勾配)は、化合物26 (470 mg、94％)を、黄色オイルとして与えた 。¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 8.05 (br s, 1H), 7.97 (d, J = 8.0Hz, 1H),
7.74 (d, J = 7.7Hz, 1H), 7.36 (m, 2H), 5.24 (d, J = 5.9Hz, 1H), 5.16 (d
, J = 5.9Hz, 1H), 4.26 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.81 (m, 2H)
, 3.63 (s, 3H), 1.61 (s, 9H), 1.23 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.04 (s, 3H),
1.04 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 1.48-0.89 (m, 6H); ¹³C NMR (CDCl₃, 62.5 MHz)
δ: 152.0, 149.3, 141.1, 135.3, 127.2, 125.7, 124.4, 123.4, 122.6, 121.
0, 107.0, 99.1, 80.2, 76.0, 59.3, 57.1, 51.2, 39.1, 32.6, 27.9, 19.6, 16
.6; IR (フィルム) ν_max 2974, 2931, 1709, 1634, 1446, 1374, 1352, 1332,
1147 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 631.2168 (C₂₉H₄₂N₂O₅+Cs⁺ は、631.2148 であることを要する)。

【００９６】 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-3-(ヒドロキシメチル)-4-(メトキシメトキシ)-2
,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(27): 化合物26 (220 mg、0.44 mM)の3:1:
1 HOAc/H₂O/THF(15 mL)溶液を、Zn粉末(1.15 g、17.6 mM)で処理し、得られた懸
濁液を、還流冷却器で処理し、1時間激しく攪拌しつつ、70℃に加温した。この 反応混合物を、25℃に冷却し、セライトを介して濾過することにより、該Znを除
去し、25 mLのCH₂Cl₂で洗浄した。揮発性成分を減圧下で除去し、得られた残さ を25 mLのEtOAcに溶解し、これを濾過した。この溶液を減圧下で濃縮した。フラ
ッシュクロマトグラフィー(SiO₂、2.5×10cm、30-40%EtOAc/ヘキサン勾配)は、 化合物27 (138 mg、87％)を、無色オイルとして与えた。¹H NMR (CDCl₃、250 MH
z): δ: 8.05 (br s, 1H), 7.91 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.5Hz, 1H
), 7.36 (m, 2H), 5.23 (d, J = 6.0Hz, 1H), 5.16 (d, J = 6.0Hz, 1H), 4.10
(m, 1H), 3.94-3.78 (m, 4H), 3.63 (s, 3H), 2.04 (d, J = 8.4Hz, 1H), 1.58
(s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ: 152.5, 149.7, 142.0, 136.0, 127.9,
126.4, 124.6, 124.1, 123.1, 121.3, 107.8, 100.0, 81.1, 65.1, 57.8, 51.3
, 40.7, 28.3; IR (フィルム) ν_max 3447, 2975, 1704, 1634, 1447, 1353, 13
36, 1149 cm^-1; FABHRMS (NBA) m/z: 360.1821 (C₂₀H₂₅NO₅+H⁺ は、360.1811で あることを要する)。

【００９７】 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-3-クロロメチル-4-(メトキシメトキシ)-2,3-ジ ヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(28)(化合物27由来のもの): 化合物27 (55 mg、
0.16 mM)の無水CH₂Cl₂(3 mL)溶液を、CCl₄ (155μL、1.6 mM)およびPh₃P(212 mg
、0.81 mM)で処理し、この混合物を25℃にて2時間攪拌した。この溶液を真空下 で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、0-12% EtOAc/ヘ
キサン勾配)は、化合物28 (52 mg、90％)を、白色固体として与えた。m.p: 99-1
01℃; ¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 8.03 (br s, 1H), 7.89 (d, J = 8.1Hz,
1H), 7.72 (d, J = 7.6Hz, 1H), 7.37 (m, 2H), 5.24 (d, J = 6.1Hz, 1H), 5.1
5 (d, J = 6.1Hz, 1H), 4.06 (m, 4H), 3.65 (s, 3H), 3.51 (app t, J = 10.1H
z, 1H), 1.59 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ: 152.3, 150.5, 141.1,
136.2, 127.9, 126.6, 124.6, 124.1, 122.4, 121.4, 107.7, 100.0, 81.2, 57.
5, 52.1, 45.9, 40.8, 28.4; IR (フィルム) ν_max 2976, 1704, 1634, 1449, 1
336, 1147, 1055, 983 cm^-1; FABHRMS (NBA) m/z: 378.1463 (C₂₀H₂₄ClNO₄+H⁺ は、378.1472であることを要する)。 元素分析(C₂₀H₂₄lNO₄として) 計算値: C, 63.75; H, 6.40; N, 3.71; 実測値:
C, 63.42; H, 6.11; N, 3.41。

【００９８】 化合物29から調製: 化合物29 (500 mg、1.0 mM)の無水ベンゼン(10 mL)溶液を、
AIBN(15.7 mg、0.1 mM)およびBu₃SnH (295 μL、1.1 mM)で処理し、80℃に2時間
加温した。この反応混合物を、減圧下で濃縮した。そのフラッシュクロマトグラ
フィー(SiO₂、2.5×15cm、0-20% EtOAc/ヘキサン勾配)は、化合物28 (360 mg、9
6％)を、上記と同様な白色固体として与えた。 化合物28の分割: サンプル、即ち化合物28 (4.0 mg)の5% i-PrOH/ヘキサン(0.9
mL)溶液を、半分取型ダイセルキラルセル(Daicel Chiralcel) ODカラム(10μm、
2×25cm、7.0 mL/分の流量、3% i-PrOH/ヘキサン)上で分割した。その流出液を2
54nmで追跡したところ、これらエナンショマーは、滞留時間29.0および35.8分( α= 1.25)で溶出した。第一のエナンショマー(S)は、エナンショマーとして>99%
純粋であることが分かった。第二の画分(R)は、>99% eeのサンプルを得るために
、再度注入した。分離されたエナンショマーを含むこれら画分を集め、(+)およ び(-)-28を得た。(+)-(3S)-28: [α]_D ²⁵ +29 (c 0.50、CH₂Cl₂); (-)-(3R)-28:
[α]_D ²⁵ 30 (c 0.50、CH₂Cl₂)。

【００９９】 2-[[N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-(3-クロロ-2-プロペン-1-イル)]アミノ-3
-ヨード-4-(メトキシメトキシ)ナフタレン(29): 化合物24 (0.480 g、1.1 mM)の
無水DMF(11 mL)溶液を、0℃に冷却し、少量ずつのNaH (67 mg、2.2 mM)で処理し
た。この得られた懸濁液を、15分間攪拌し、純粋な1,3-ジクロロプロペン(0.52
mL、5.5 mM)で、ゆっくり滴下することにより処理し、次いで触媒量のBu₄NI (40
mg、0.1 mM)で処理した。この反応混合物を25℃に加温し、12時間攪拌した。こ
の反応混合物を、5%の水性NaHCO₃ (50 mL)の添加により反応停止させ、その水性
相をEtOAc (3×20 mL)で抽出した。併合した有機抽出液を水(5×10 mL)で洗浄し
、乾燥(Na₂SO₄)し、減圧下で濃縮して、黄色オイル状態で、回転異性体およびE およびZアルケンの混合物として、化合物29を得た。フラッシュクロマトグラフ ィー(SiO₂、2.5×15cm、0-20% EtOAc/ヘキサン勾配)は、化合物29 (540 mg、96 ％)を、黄色オイルとして与えた。¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 8.16 (m, 1H)
, 7.80 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.44 (s, 1H), 6.11 (m, 2H), 5.25 (d, J = 5
.6Hz, 1H), 5.20 (d, J = 5.6Hz, 1H), 4.51 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.73 (s,
3H), 1.55および1.31 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃, 62.5 MHz) δ: 156.2, 153.9
, 140.7, 134.0, 128.7, 127.9, 127.7, 127.4, 127.1, 124.7, 122.5, 121.7,
100.7, 80.8, 77.2, 58.5, 49.5, 28.2; IR (フィルム) ν_max 2975, 1699, 156
5, 1387, 1366, 1328, 1294, 1254, 1162 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 504.0
424 (C₂₀H₂₃ClINO₄+H⁺ は、504.0439であることを要する)。

【０１００】 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-3-クロロメチル-4-ヒドロキシ-2,3-ジヒドロ-1H
-ベンゾ[f]インドール(30): 化合物28 (18 mg、47.5μM)の1:1 i-PrOH/THF(1.5
mL)溶液を、12N HCl (0.20 mL、0.38 mM)で処理し、この混合物を25℃にて6時間
攪拌し、次いで揮発性物質を真空下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー
(SiO₂、1.5×15cm、0-20% EtOAc/ヘキサン勾配)は、化合物30 (14.5 mg、90％) を、淡黄色オイルとして与えた。¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 7.85 (d, J =
8.0Hz, 1H), 7.71 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.43-7.30 (m, 2H), 5.67 (s, 1H), 4
.09-3.86 (m, 4H), 3.65 (dd, J = 8.0, 10.0Hz, 1H), 1.59 (s, 9H); ¹³C NMR
(CDCl₃, 62.5 MHz) δ:147.9, 135.8, 132.7, 128.8, 128.0, 126.6, 123.7, 12
1.2, 119.5, 119.5, 104.4, 77.2, 52.6, 46.4, 34.7, 28.5; IR (フィルム) ν _max 3368, 2976, 1668, 1477, 1450, 1369, 1145, 978, 746 cm^-1; FABHRMS (NB
A/CsI) m/z: 466.0197 (C₁₈H₂₀ClNO₃+Cs⁺ は、466.0186であることを要する)。(
-)-(3S)-30: [α]_D ²⁵ -54 (c 0.25、CH₃OH); (+)-(3R)-30: [α]_D ²⁵ +51 (c 0.3
0、CH₃OH)。

【０１０１】 2-(t-ブチルオキシカルボニル)-1,2,9,9a-テトラヒドロシクロプロパ[c]ベンゾ[
f]インドール-8-オン(N-BOC-イソ-CBI, 31): 化合物30 (5.0 mg、0.015 mM)のCH ₃ CN(0.6mL)溶液を、DBU(2.7μL、0.018mM)で処理し、この混合物を25℃にて15分
間攪拌した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、10% EtOAc/ヘキ
サン)は、化合物31 (4.3 mg、96％)を、淡黄金色オイルとして与えた。¹H NMR (
CDCl₃、400 MHz): δ: 7.98 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.50 (dt, J = 1,4, 7.8Hz,
1H), 7.28 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.21 (dt, J = 1.1, 7.8Hz, 1H), 6.97 (br s,
1H), 3.88 (br d, J = 11.2Hz, 1H), 3.81 (dd, J = 4.9, 11.1Hz, 1H), 2.88
(dt, J = 5.5, 7.8Hz), 1.87 (dd, J = 3.2, 7.8Hz, 1H), 1.53 (s, 9H), 1.41
(dd, J = 3.2, 5.5Hz, 1H); ¹H NMR (C₆D₆, 400 MHz):δ: 8.34 (dd, J = 0.6,
7.8Hz, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.92 (m, 1H), 3.18 (br m, 1H), 2.32 (m, 1H), 1
.49 (dd, J = 3.1, 7.8Hz, 1H), 1.39 (s, 9H), 0.66 (dd, J = 3.1, 5.4 Hz, 1
H); ¹³C NMR (CDCl₃, 62.5 MHz) δ: 194.7, 154.3, 142.0, 134.3, 127.7, 127
.3, 125.9, 125.2, 103.2, 77.2, 51.5, 46.1, 32.0, 28.2, 25.7; IR (フィル ム) ν_max 2973, 2927, 1716, 1670, 1635, 1472, 1410, 1324, 1143, 1009 cm^{- 1} ; UV (THF) λ_max(ε) 387(2700), 302(6000 sh), 293(6900), 250(20400) nm;
FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 298.1450 (C₁₈H₁₉NO₃+H⁺ は、298.1443であることを 要する)。(-)-(8aS,9aS)-31: [α]_D ²⁵ -172 (c 0.08、CH₃OH); (+)-(8aR,9aR)-3
1: [α]_D ²⁵ +179 (c 0.12、CH₃OH)。

【０１０２】 3-クロロ-4-ヒドロキシ-1-(メトキシカルボニル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]イ
ンドール(32): 化合物28 (11mg、29.1μM)を、3.6N HCl/EtOAc溶液 (1.0mL)で処
理し、得られた溶液を25℃にて30分間攪拌した。該溶媒をN₂気流で除去し、残留
する塩を真空下で乾燥した。この塩を、0.6mLの無水THF中に懸濁し、NaHCO₃(5.4
mg、64.1μM、2.2当量)およびClCO₂CH₃(4.5μL、58.2μM、2.0当量)で処理し、 この混合物を25℃にて3時間攪拌した。攪拌が完了した際に、該反応混合物を、1
0mLの水で希釈し、EtOAc(3×10mL)で抽出し、乾燥(Na₂SO₄)し、真空下で濃縮し た。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、0-40% EtOAc/ヘキサン勾
配)は、純粋な化合物32 (5.5 mg、65%)を、白色固体として与えた。¹H NMR (CDC
l₃、400 MHz): δ: 7.86 (d, J = 8.2Hz, 1H), 7.86 (br s, 1H), 7.73 (d, J
= 8.0Hz, 1H), 7.42 (m, 1H), 7.35 (m, 1H), 5.80 (s, 1H), 4.11 (m, 2H), 4.
01-3.87 (m, 5H), 3.63 (app t, J = 9.4Hz, 1H); IR (フィルム) ν_max 3379,
2956, 1673, 1435, 1372, 1283, 1218 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 291.0656
(M⁺, C₁₅H₁₄ClNO₃は、291.0662であることを要する)。 化合物28の溶出の遅いエナンショマー由来の(3R)-32 (t_R=35.8分、[α]_D ²⁵ -9
(c 0.10、CH₃OH)の構造および絶対形状は、EtOAc/ヘキサンから成長させた柱状
結晶について行った、単結晶X-線構造決定から得た。

【０１０３】 2-(メトキシカルボニル)-1,2,9,9a-テトラヒドロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]イン
ドール-8-オン(N-CO₂Me-イソ-CBI、33): 化合物32(5.0mg、0.017mM)のCH₃CN(0.5
mL)溶液を、DBU(3.9μL、0.025mM)で処理し、この混合物を25℃にて15分間攪拌 した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、0-40% EtOAc/ヘキサン
勾配)は、化合物33 (4.0 mg、91％)を、淡黄色固体として与えた。¹H NMR (C₆D₆ 、400 MHz): δ: 8.33 (d, J = 6.0Hz, 1H), 7.40 (br s, 1H), 7.10 (app t, J
= 6.0Hz, 1H), 7.03 (d, J = 6.0Hz, 1H), 6.91 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.17
(m, 1H), 2.93 (m, 1H), 2.30 (dt, J = 4.0, 6.0Hz, 1H), 1.49 (dd, J = 2.4
, 6.4Hz, 1H), 0.64 (dd, J = 2.8, 4.4Hz, 1H); IR (フィルム) ν_max 2954, 1
731, 1633, 1445, 1323, 1196, 1018 cm^-1; UV(THF) λ_max(ε) 386(2300), 302
(4500 sh), 293 (5100), 250 (18000) nm; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 255.0901
(M⁺, C₁₅H₁₃NO₃は、255.0895であることを要する)。(+)-(8aR,9aR)-33: [α]_D ²⁵ +31 (c 0.07、CH₃OH)。 化合物33の構造は、EtOAc/ヘキサンから成長させた板状晶について行った、単
結晶X-線構造決定により確認した。³⁷

【０１０４】 1,2,9,9a-テトラヒドロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]インドール-8-オン(イソ-CBI 、34): 化合物28(10.6mg、28.1μM)の溶液を、3.6M HCl/EtOAcで処理し、この混
合物を、25℃にて30分間攪拌した。揮発性物質を、N₂ガス流で除去し、残留する
塩を、1.0mLの脱気したCH₃CN1.0mL中に懸濁した。この懸濁液を、DBU(9.3μL、6
1.8μM、2.2当量)で処理し、Ar雰囲気下で、暗所にて、25℃にて20分間攪拌した
。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、40% EtOAc/ヘキサン)は、 純粋な化合物34 (3.0 mg、55%)を、不安定な光沢のある黄色オイルとして与えた
。¹H NMR (C₆D₆、400 MHz): δ: 8.38 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.18 (m, 1H), 6.9
9 (d, J = 8.0Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 5.27 (s, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.52 (m,
1H), 2.45 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.00 (m, 1H); IR (フィルム) ν_max 3358
, 1682, 1594, 1470, 1284, 1262, 1223 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 198.09
26 (C₁₃H₁₁NO+H⁺は、198.0919であることを要する)。

【０１０５】 9,9a-1H-ジヒドロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]インドール-3,8-ジオン(35): 化合 物28(10.6mg、28.1μM)の溶液を、4M HCl/EtOAcで処理し、この混合物を、25℃ にて30分間攪拌した。揮発性物質をN₂ガス流で除去し、残留する塩を、1.0mLのT
HFに懸濁させた。この懸濁液を、1.0mLの5%水性NaHCO₃で処理し、攪拌し、25℃ にて2時間空気に暴露した。光沢のあるオレンジ色の溶液を、EtOAc(3×5mL)で抽
出し、水(2×5mL)で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、真空下で濃縮した。フラッシュク
ロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、60% EtOAc/ヘキサン)は、純粋な化合物35
(3.5 mg、63％)を、オレンジ色のフィルムとして与えた。¹H NMR (C₆D₆、400 MH
z): δ: 8.14 (m, 1H), 8.05 (m, 1H), 7.00 (m, 2H), 3.62 (dd, J = 6.2, 19.
4Hz, 1H), 3.52 (ddt, J= 0.6, 2.2, 19.4Hz, 1H), 2.55 (ddt, J= 2.2, 6.0, 8
.3Hz, 1H), 1.54 (ddd, J= 0.6, 3.3, 8.4Hz, 1H), 0.30 (dd, J = 3.3, 5.8Hz,
1H); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ: 191.6, 182.0, 168.9, 135.8, 135.6, 13
5.0, 134.6, 128.4, 127.0, 63.8, 49.7, 35.0, 30.4; IR (フィルム) ν_max 29
23, 1692, 1680, 1585, 1361, 1262, 1223, 1082 cm^-1; UV (CH₃OH) λ_max(ε)
271 (5200), 239 (13300) nm; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 212.0715 (C₁₃H₉NO₂+H⁺ は、212.0712であることを要する)。

【０１０６】 4-(t-ブチルオキシカルボニル)-1,2,2a,3-テトラヒドロフラノ[4,3,2-c,d]ベン ゾ[f]インドール(36): 化合物31(6.0mg、16μM)の純粋なサンプルを、25℃にて4
8時間室内光の照射下に放置して、化合物36(6.0mg、100%)を得た。¹H NMR (CD₃C
N、500 MHz): δ: 7.80 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.67 (d, J = 7.7Hz, 1H), 7.35
(m, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.05 (br s, 1H), 5.22 (dd, J = 8.0,8.5Hz, 1H), 4
.64 (dd, J = 9.0,11.0Hz, 1H), 4.40 (dd, J = 8.5, 10.5Hz, 1H), 4.22 (m, 1
H), 3.88 (m, 1H), 1.55 (br s, 9H); IR (フィルム) ν_max 2975, 2932, 1699,
1475, 1456, 1418, 1353, 1166, 1132 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 297.145
1 (M⁺, C₁₈H₁₉NO₃は、297.1365であることを要する)。

【０１０７】 3-クロロメチル-4-ヒドロキシ-1-[(5,6,7-トリメトキシインドール-2-イル)カル
ボニル]-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(43): 化合物28のサンプル(8.4m
g、0.022mM)を、1.0mLの3.6N HCl/EtOAcで処理し、得られた溶液を25℃にて30分
間攪拌した。該溶媒を、N₂ガス流で除去し、残留する塩を、真空下で乾燥した。
この塩を、0.9mLの無水DMFに溶解し、5,6,7-トリメトキシインドール-2-カルボ ン酸¹⁰(6.8mg、0.026mM)およびEDCI(12.7mg、0.067mM)で処理し、この混合物を2
5℃にて3時間攪拌した。乾燥が完了した際に、この反応混合物を、20mLのEtOAc で希釈し、水(5×3mL)で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、真空下で濃縮した。フラッシ
ュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、0-40% EtOAc/ヘキサン勾配)は、化合 物43 (11.2 mg、91％)を、白色固体として与えた。¹H NMR (CDCl₃、400 MHz): δ: 9.41 (s, 1H), 8.35 (s， 1H), 7.88 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7
.8Hz, 1H), 7.45 (m, 1H), 7.41 (m, 1H), 6.96 (d, J = 2.3Hz, 1H), 6.85 (s,
1H), 5.95 (br s, 1H), 4.58 (m, 2H), 4.07 (m, 2H), 4.07 (s, 3H), 3.94 (s
, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.64 (dd, J = 10.3, 12.0Hz, 1H); ¹³C NMR(アセトン-d ₆ , 400 MHz) δ: 193.6, 161.1, 151.0, 149.7, 143.4, 141.5, 136.7, 131.6,
128.8, 127.3, 126.5, 124.7, 124.5, 124.0, 121.9, 115.3, 107.6, 107.2, 99
.0, 61.44, 61.37, 56.4, 54.9, 46.6, 41.7; IR (フィルム) ν_max 3405, 3301
, 2937, 1594, 1446, 1312, 1228, 1106 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 467.13
58 (C₂₅H₂₃ClN₂O₅+H⁺は、467.1374であることを要する)。(-)-(3S)-43: [α]_D ²⁵ -4 (c 0.22、CHCl₃); (+)-(3R)-43: [α]_D ²⁵ +4 (c 0.35、CHCl₃)。

【０１０８】 2-[(5,6,7-トリメトキシインドール-2-イル)カルボニル]-1,2,9,9a-テトラヒド ロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]インドール-8-オン(イソ-CBI-TMI, 44): 化合物43(
5.7mg、0.012mM)のCH₃CN(0.5mL)溶液を、DBU(2.2μL、0.015mM)で処理し、25℃ にて15分間攪拌した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、50% Et
OAc/ヘキサン)は、純粋な化合物44 (4.2 mg、94％)を、淡黄金色オイルとして与
えた。¹H NMR (C₆D₆、400 MHz): δ: 9.65 (s、1H), 8.36 (m, 1H), 7.76 (s, 1
H), 7.10 (m, 1H), 7.03 (m, 1H), 6.94 (m, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.45 (d, J =
2.2Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.54 (s, 3H), 3.52 (d, J = 9.9H
z, 1H), 3.26 (dd, J= 5.2, 9.9Hz, 1H), 2.43 (m, 1H), 1.57 (dd, J= 3.3, 7.
8Hz, 1H), 0.70 (dd, J = 3.3, 5.4Hz, 1H); ¹³C NMR (アセトン-d₆, 400 MHz)
δ: 194.5, 191.8, 161.7, 151.4, 147.1, 143.1, 142.0, 140.4, 135.6, 131.3
, 129.4, 128.9, 127.3, 126.9, 126.7, 125.0, 112.7, 108.1, 107.6, 99.3, 6
3.7, 63.6, 57.0, 54.3, 40.6; IR (フィルム) ν_max 3295, 2934, 1667, 1651,
1409, 1306, 1279, 1109 cm^-1; UV (CH₃OH) λ_max 390 (ε7100), 332 (ε1410
0), 245 nm (ε19100); FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 431.1615 (C₂₅H₂₂N₂O₅+H⁺ は 、431.1607であることを要する)。(-)-(8aS,9aS)-44: [α]_D ²⁵ -41 (c 0.13、CH ₃ OH); (+)-(8aR,9aR)-44: [α]_D ²⁵ +38 (c 0.08、CH₃OH)。

【０１０９】 3-クロロメチル-4-ヒドロキシ-1-[(5-メトキシインドール-2-イル)カルボニル]-
2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(45): フラッシュクロマトグラフィー(Si
O₂、1.5×10cm、0-40% EtOAc/ヘキサン勾配)は、純粋な化合物45 (95%)を、透明
なオイルとして与えた。¹H NMR (CDCl₃、400 MHz): δ: 9.38 (br s, 1H), 8.35
(s, 1H), 7.93 (d, J = 7.6Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.9Hz, 1H), 7.41 (m, 2H)
, 7.36 (d, J = 9.0Hz, 1H), 7.11 (d, J = 2.2Hz, 1H), 7.01 (m, 2H), 6.43 (
s, 1H), 4.63 (d, J = 5.4Hz, 2H), 4.11 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.64 (m, 1H
); IR (フィルム) ν_max 3287, 2927, 1665, 1596, 1518, 1445, 1402, 1389, 1
290, 1231, 1167 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 406.1071 (C₂₅H₁₉ClN₂O₃は、4
06.1084であることを要する)。(-)-(3S)-45: [α]_D ²⁵ -26 (c 0.07、CH₃OH); (+
)-(3R)-45: [α]_D ²⁵ +25 (c 0.04、CH₃OH)。

【０１１０】 2-[(5-メトキシインドール-2-イル)カルボニル]-1,2,9,9a-テトラヒドロシクロ プロパ[c]ベンゾ[f]インドール-8-オン(46): フラッシュクロマトグラフィー(Si
O₂、1.5×5cm、40% EtOAc/ヘキサン)は、化合物46 (85％)を、淡黄金色オイルと
して与えた。¹H NMR (C₆D₆、400 MHz): δ: 9.15 (s、1H), 8.38 (m, 1H), 7.80
(s, 1H), 7.12-7.05 (m, 4H), 6.94 (ddd, J = 1.6, 6.8,8.3Hz, 1H), 6.85 (a
pp dt, J = 0.8,8.6Hz, 1H), 6.39 (d, J = 1.6Hz, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.48 (
d, J = 10.0Hz, 1H), 3.21 (dd, J= 5.2, 10.0Hz, 1H), 2.42 (dt, J = 5.3,7.8
Hz, 1H), 1.56 (dd, J= 3.3, 7.8Hz, 1H), 0.68 (dd, J = 3.3, 5.3Hz, 1H); IR
(フィルム) ν_max 3303, 2927, 1667, 1643, 1597, 1518, 1408, 1277, 1030,
1013 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 371.1388 (C₂₃H₁₈N₂O₃+H⁺ は、371.1396で
あることを要する)。(-)-(8aS,9aS)-46: [α]_D ²⁵ -66 (c 0.04、CH₃OH); (+)-(8
aR,9aR)-46: [α]_D ²⁵ +71 (c 0.03、CH₃OH)。

【０１１１】 3-クロロメチル-4-ヒドロキシ-1-[((E)-3-(2-メトキシフェニル)プロペニル)カ ルボニル]-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(47): フラッシュクロマトグ ラフィー(SiO₂、1.5×10cm、1-40% EtOAc/ヘキサン勾配)は、化合物47 (87%)を 、淡黄色固体として与えた。¹H NMR (CDCl₃、400 MHz): δ: 8.40 (br s, 1H),
7.87 (m, 3H), 7.40 (m, 2H), 7.31 (m, 1H), 7.22 (m, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.
93 (m, 2H), 5.81 (m, 1H), 4.36 (m, 2H), 4.09 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.65
(m, 1H); IR (フィルム) ν_max 3266, 2963, 1659, 1598, 1445, 1377, 1269,
1158, 1048 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 394.1217 (C₂₅H₂₀ClNO₃+H⁺ は、394
.1210であることを要する)。(-)-(3S)-47: [α]_D ²⁵ -18 (c 0.15、CH₃OH); (+)-
(3R)-47: [α]_D ²⁵ +22 (c 0.04、CH₃OH)。

【０１１２】 2-[((E)-3-(2-メトキシフェニル)プロペニル)カルボニル]-1,2,9,9a-テトラヒド
ロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]インドール-8-オン(48): フラッシュクロマトグラ フィー(SiO₂、1.5×5cm、40% EtOAc/ヘキサン)は、化合物48 (83%)を、淡黄金色
オイルとして与えた。¹H NMR (C₆D₆、400 MHz)回転異性体: δ: 8.39 (d, J = 7
.5Hz, 1H), 8.09 (d, J = 15.4Hz, 1H), 7.15-6.95 (m、8H), 6.76 (ddd, J = 1
.0,2.5,8.1Hz, 1H), 3.70-3.50 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 3.00-2.80 (m, 1H), 2
.35 (m, 1H), 1.63 (m, 1H), 0.73 (m, 1H); IR (フィルム) ν_max 2926, 1673, 1626, 1471, 1408, 1383, 1265, 1156, 1092, 1044, 1009 cm^-1; FABHRMS (NBA
/NaI) m/z: 357.1360 (M⁺, C₂₅H₁₉NO₃は、357.1365であることを要する)。(-)-(
8aS,9aS)-48: [α]_D ²⁵ -21 (c 0.08、CH₃OH); (+)-(8aR,9aR)-48: [α]_D ²⁵ +23
(c 0.03、CH₃OH)。

【０１１３】 3-クロロメチル-4-ヒドロキシ-1-[[5-[N-(インドール-2-イル)カルボニル]アミ ノインドール-2-イル]カルボニル]-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(49):
フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、40-80% EtOAc/ヘキサン勾配
)は、化合物49 (74％)を、淡褐色固体として与えた。¹H NMR (CMF-d₇、400 MHz)
: δ: 11.76 (s, 2H), 10.30 (s, 1H), 10.28 (s, 1H), 8.41 (s、1H), 8.29 (s
, 1H), 8.25 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 2
.8,9.2Hz, 1H), 7.69 (d, J = 9.6Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.6Hz, 2H), 7.52 (s
, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.30 (d, J = 1.6Hz, 1H), 7.25 (m, 1H)
, 7.09 (m, 1H), 4.83 (m, 1H), 4.70 (dd, J = 2.4, 10.4Hz, 1H), 4.30 (m, 1
H), 4.16 (dd, J = 2.8,11.2Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 8.8,11.2Hz, 1H); IR (フ
ィルム) ν_max 3280, 2929, 1660, 1650, 1594, 1519, 1443, 1389, 1314, 1250
, 1098, 749 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 667.0529 (C₃₁H₂₃ClN₄O₃+Cs⁺ は、
667.0513であることを要する)。(-)-(3S)-49: [α]_D ²⁵ -18 (c 0.10、CH₃OH); (
+)-(3R)-49: [α]_D ²⁵ +21 (c 0.06、CH₃OH)。

【０１１４】 2-[[5-[N-(インドール-2-イル)カルボニル]アミノインドール-2-イル]カルボニ ル]-1,2,9,9a-テトラヒドロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]インドール-8-オン(イソ-
CBI-インドール₂、50): フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、10%
DMF/トルエン)は、化合物50 (88％)を、淡黄金色固体として与えた。¹H NMR (DM
F-d₇、400 MHz): δ: 11.75 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.28 (s, 1H), 8.37 (s
, 1H), 7.96 (d, J = 7.9Hz, 1H), 7.73-7.64 (m, 3H), 7.58 (t, J = 8.1Hz, 1
H), 7.50 (m, 2H), 7.35 (m, 2H), 7.23 (m, 2H), 7.08 (t, J = 7.3Hz, 1H), 4
.57 (m, 2H), 3.09 (dt, J = 5.5,7.7Hz, 1H), 1.86 (dd, J= 3.1, 7.7Hz, 1H),
1.77 (dd, J= 3.2, 5.5Hz, 1H); IR (フィルム) ν_max 3289, 2927, 1668, 165
2, 1557, 1520, 1409, 1313 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 499.1752 (C₃₁H₂₂N ₄ O₃+H⁺ は、499.1770であることを要する)。(-)-(8aS,9aS)-50: [α]_D ²⁵ -21 (c
0.10、DMF); (+)-(8aR,9aR)-50: [α]_D ²⁵ +21 (c 0.06、DMF)。

【０１１５】 1-[(3-カルバモイル-1,2-ジヒドロ-3H-ピロロ[3,2-e]インドール-7-イル)カルボ
ニル]-3-クロロメチル-4-ヒドロキシ-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(51
): フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、10-50% DMF/トルエン勾配
)は、純粋な化合物51 (80%)を、黄色固体として与えた。¹H NMR (CMF-d₇、400 M
Hz): δ: 11.64 (s, 2H), 10.32 (s, 1H), 8.28 (s、1H), 8.25 (d, J = 8.4Hz,
1H), 8.16 (d, J = 8.9Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.1Hz, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.
39 (m, 2H), 7.15 (d, J = 1.7Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 4.82 (m, 1H), 4.68 (d
d, J = 2.7, 10.8Hz, 1H), 4.30 (m, 1H), 4.15 (m, 3H), 3.97 (dd, J = 8.3,1
0.8Hz, 1H), 3.39 (m, 2H); IR (フィルム) ν_max 3337, 2924, 1662, 1652, 15
13, 1456, 1441, 1400, 1344, 1272 cm^-1; ESIMS m/z: 461 (M+H⁺, C₂₅H₂₁ClN₄O ₃ は、461であることを要する)。(-)-(3S)-51: [α]_D ²⁵ -21 (c 0.18、DMF); (+)
-(3R)-51: [α]_D ²⁵ +22 (c 0.13、DMF)。

【０１１６】 2-[(3-カルバモイル-1,2-ジヒドロ-3H-ピロロ[3,2-e]インドール-7-イル)カルボ
ニル]-1,2,9,9a-テトラヒドロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]インドール-8-オン(イ ソ-CBI-CDPI₁, 52): フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、30-50%
DMF/トルエン勾配)は、化合物52 (81％)を、褐色固体として与えた。¹H NMR (DM
F-d₇、400 MHz): δ: 11.60 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.8Hz, 1H), 7.95 (d, J =
7.6Hz, 1H), 7.66 (t, J = 7.4Hz, 1H), 7.49 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.35 (m,
3H), 7.10 (s, 1H), 6.13 (s, 2H), 4.55 (m, 2H), 4.13 (t, J = 8.8Hz, 2H),
3.36 (t, J = 9.1Hz, 2H), 3.09 (m, 1H), 1.85 (dd, J= 2.9, 7.6Hz, 1H), 1.7
6 (dd, J= 3.3, 5.4Hz, 1H); IR (フィルム) ν_max 3346, 2927, 1667, 1651, 1
505, 1435, 1408, 1343, 1279, 1098 cm^-1; ESIMS m/z: 425 (M+H⁺, C₂₅H₂₀N₄O₃ は、425であることを要する)。(-)-(8aS,9aS)-52: [α]_D ²⁵ -13 (c 0.06、DMF);
(+)-(8aR,9aR)-52: [α]_D ²⁵ +12 (c 0.07、DMF)。

【０１１７】 1-[[3-[N-(3-カルバモイル-1,2-ジヒドロ-3H-ピロロ[3,2-e]インドール-7-イル)
カルボニル]-1,2-ジヒドロ-3H-ピロロ[3,2-e]インドール-7-イル]カルボニル]-3
-クロロメチル-4-ヒドロキシ-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(53): フラ
ッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、10-50% DMF/トルエン勾配)は、純
粋な化合物53 (32%)を、赤色固体として与えた。¹H NMR (CMF-d₇、400 MHz): δ
: 11.85 (s, 1H), 11.54 (s, 1H), 10.33 (s, 1H), 8.39 (m, 1H), 8.30 (s、1H
), 8.26 (d, J = 8.4Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.9Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.0Hz,
1H), 7.48 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.10 (s, 2
H), 4.86 (m, 1H), 4.73 (m, 3H), 4.31 (m, 1H), 4.15 (m, 3H), 3.99 (dd, J
= 8.2,10.7Hz, 1H), 3.55 (m, 2H), 3.39 (m, 2H); IR (フィルム) ν_max 3338,
2956, 2927, 1727, 1659, 1650, 1604, 1510, 1402, 1365, 1286 cm^-1; ESIMS
m/z: 645/647 (M+H⁺, C₃₆H₂₉ClN₆O₄は、645/647であることを要する)。(-)-(3S)
-53: [α]_D ²⁵ -19 (c 0.10、DMF); (+)-(3R)-53: [α]_D ²⁵ +21 (c 0.08、DMF)。

【０１１８】 2-[[3-[N-(3-カルバモイル-1,2-ジヒドロ-3H-ピロロ[3,2-e]インドール-7-イル)
カルボニル]-1,2-ジヒドロ-3H-ピロロ[3,2-e]インドール-7-イル]カルボニル]-1
,2,9,9a-テトラヒドロシクロプロパ[c]ベンゾ[f]インドール-8-オン(イソ-CBI-C
DPI₂, 54): フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×10cm、50% DMF/トルエ ン)は、化合物53 (59％)を、褐色固体として与えた。¹H NMR (DMF-d₇、400 MHz)
: δ: 11.80 (s, 1H), 11.53 (s, 1H), 8.37 (m, 1H), 8.13 (d, J = 8.9Hz, 2H
), 7.65 (m, 1H), 7.49 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.47 (t, J = 9.1Hz, 1H), 7.36
(m, 3H), 7.24 (d, J = 1.5Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.12 (s, 2H), 4.74 (t, J
= 8.4Hz, 2H), 4.58 (m, 2H), 4.14 (t, J = 8.9Hz, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.38
(t, J = 8.8Hz, 2H), 3.11 (m, 1H), 1.87 (dd, J= 3.1, 7.8Hz, 1H), 1.78 (d
d, J= 3.1, 5.5Hz, 1H); IR (フィルム) ν_max 3293, 2926, 1665, 1612, 1581,
1503, 1431, 1409, 1363, 1344, 1278, 1185 cm^-1; ESIMS m/z: 607 (M-H⁺, C_{3 6} H₂₈N₆O₄は、607であることを要する)。 (-)-(8aS,9aS)-54: [α]_D ²⁵ -34 (c 0.
05、DMF); (+)-(8aR,9aR)-54: [α]_D ²⁵ +33 (c 0.03、DMF)。

【０１１９】 ソルボリシス位置選択性: 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-4-ヒドロキシ-3-(メ トキシメチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[f]インドール(62): 化合物31(7.7mg、0
.026mM)のCH₃OH(2.5mL)溶液を、0℃に冷却し、CF₃SO₃HのCH₃OH(311μL、0.01N、
0.12当量)溶液を添加した。17時間かけて、徐々に25℃まで加温した後、この反 応を、NaHCO₃(2.1mg)の添加により停止し、セライトを通して濾過し、減圧下に て濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、0-40% EtOAc/ヘ
キサン勾配)は、主異性体62 (8.0mg、94%)を、白色フィルムとして与えた。¹H N
MR (CDCl₃、400 MHz): δ: 9.05 (s, 1H), 8.12 (d, J = 6.4Hz, 1H), 7.80 (m,
1H), 7.65 (s, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.83 (m, 1
H), 3.77 (dd, J = 2.8,6.4Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 6.8,8.8Hz, 1H), 3.54 (s
, 3H), 3.49 (m, 1H), 1.56 (s, 9H); IR (フィルム) ν_max 3233, 2975, 1704,
1644, 1435, 1348, 1148, 1026, 956 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 352.1535
(C₁₉H₂₃NO₄+Na⁺ は、352.1525であることを要する)。 少量の異性体63(粗反応混合物の¹H NMRによれば、<2%): ¹H NMR (CDCl₂、500
MHz): δ: 8.10 (m, 1H), 7.95 (d, J = 6.5Hz, 1H), 7.73 (m, 1H), 7.38 (m,
1H), 7.33 (m, 1H), 7.24 (m, 1H), 4.13 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.92 (m, 1H
), 3.81 (m, 2H), 3.50 (m, 1H), 1.57 (s, 9H); FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 352.
1534 (C₁₉H₂₃NO₄+Na⁺ は、352.1525であることを要する)。

【０１２０】 信頼すべき化合物62の調製: 化合物27(17.3mg、0.05mM)の無水DMF(1.6mL)溶液を
、少量ずつのNaH(4.3mg、0.14mM)で処理し、得られたこの懸濁液を、0℃にて15 分間攪拌した。沃化メチル(18μL、0.29mM)を純粋状態で添加し、得られた混合 物を、2時間に渡り25℃に加温した。この反応混合物を、5%の水性NaHCO₃(10mL) の添加により反応停止し、その水性相をEtOAc(3×5mL)で抽出した。併合した該 有機抽出液を水(5×5mL)で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、かつ減圧下で濃縮した。こ
の粗製混合物を、フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、1.5×15cm、10% EtOAc/
ヘキサン)にかけて、無色オイルとして、中間体メチルエーテル64(14.0mg、78%)
を得た。化合物64を、化合物30について詳しく示したように、選択的MOM脱保護 反応および精製にかけ、全ての面において同等な、主ソルボリシス生成物62を得
た。

【０１２１】 ソルボリシス反応性: N-BOC-イソ-CBI(31、0.2mg)を、CH₃OH(1.5mL)に溶解し、p
H 3の水性バッファー(1.5mL)と混合した。このバッファーは、4:1:20(v/v/v)で 、0.1M クエン酸、0.2M Na₂HPO₄、および水を含んでいた。このソルボリシス溶 液を封止し、光から保護した状態で、25℃にて維持した。そのUVを、最初の24時
間中は、各1時間の規則的な間隔で、次の72時間中は、各4時間の一定の時間間隔
で、また更に1週間に渡り、各12時間の間隔で、測定した。397nmにおける、長波
長光の吸収における減少を、追跡して、図3に示した。このソルボリシスの速度 定数(k = 6.98×10^-6s^-1)およびその半減期(t_1/2 = 28h)を、時間対ln[(A_t-A_I)/
(A_t-A)]のプロットの傾き(図9)の最小二乗処理(r=0.99)により、該長波長におい
て記録されたデータから計算した。

【０１２２】 同様に、N-CO₂Me-イソ-CBI(33、0.2mg)を、CH₃OH(1.5mL)に溶解し、pH 3の水 性バッファー(1.5mL)と混合した。このソルボリシス溶液を、封止し、光から保 護した状態で、25℃に維持した。そのUVスペクトルを、最初の24時間中は、各1 時間の規則的な間隔で、次の72時間中は、各4時間の一定の時間間隔で、また更 に1週間に渡り、各12時間の間隔で、測定した。395nmにおける、長波長光の吸収
における減少を、追跡して、図3に示した。このソルボリシスの速度定数(k = 6.
40×10^-6s^-1)およびその半減期(t_1/2 = 30h)を、上記のように測定した(r = 0.9
9)。 同様に、化合物35(0.2mg)を、CH₃OH(1.5mL)に溶解し、pH 3の水性バッファー(
1.5mL)と混合した。このソルボリシス溶液を封止し、光から保護した状態で、25
℃に維持した。そのUVスペクトルを、最初の12時間中は、各1時間の規則的な間 隔で、次の24時間中は、各2時間の一定の時間間隔で、また追加の1日間は各4時 間の間隔で、測定した。239nmにおける、短波長光の吸収における減少を、追跡 して、図9に示した。このソルボリシスの速度定数(k = 3.80×10^-5s^-1)およびそ
の半減期(t_1/2 = 5h)を、上記のように測定した(r = 0.99)。

【０１２３】 熱的に遊離された(-)-イソ-CBI-TMIアデニン付加生成物66の単離、特徴付けおよ
び定量: (-)-イソ-CBI-TMI(44、1.0mg、2.32μM)のDMSO(500μL)溶液を、ウシ胸
腺DNA(シグマ(Sigma)社、220mg、約150bp)の10mM燐酸ナトリウムバッファー(13m
L、pH 7.0)溶液に、50mLの遠沈管内で添加した。この混合物を、4℃にて72時間 冷却し、次いでEtOAc(3×10mL)で抽出して、加水分解され、転移された(65)また
は未反応(44)の物質を除去した。該EtOAc抽出物のUVおよびHPLCアッセイは、未 反応物質44を含まず(0%)、また<5%の転移物質65を含むことを明らかにした。該 水性DNA層を含む該遠沈管を、テフロンテープで封止し、100℃にて30分間加温し
た。得られたこの溶液を25℃に冷却し、EtOAc(3×10mL)で抽出した。併合した有
機相を乾燥(Na₂SO₄)し、減圧下で濃縮して、黄色固体を得た。クロマトグラフィ
ー(SiO₂、0.5×3cm、0-7% CH₃OH/CHCl₃勾配溶出)は、少量の不純物(HPLCによれ ば、<5%)を含む、淡黄色固体として、(+)-66 (1.25mg、1.31mg(理論値)、95%、4
回の実験において90-95%)を与えた。

【０１２４】 化合物66：[α]_D ²³ +28 (c 0.06, CH₃OH); R_f = 0.3 (SiO₂, 10% CH₃OH/CHCl₃);
¹H NMR (アセトン-d₆, 400MHz):δ: 10.37 (s, 1H, N1'-H), 8.58 (s, 1H, ArO
H), 8.31 (d, J = 7.9Hz, 1H, Ar-H), 8.22 (s, 1H, Ade-C8-H), 8.07 (s, 1H,
Ade-C2-H), 7.78 (d, J = 7.9Hz, Ar-H), 7.49 (br s, 1H, Ar-H), 7.45 (ddd,
J = 1.3,6.8,7.9Hz, 1H, Ar-H), 7.38 (ddd, J = 1.3,6.8,7.9Hz, 1H, Ar-H), 7
.10 (d, J = 2.3Hz, 1H, C3'-H), 6.93 (s, 1H, C5'-H), 4.92 (dd, J = 10.6,1
.9Hz, 1H, CHH-Ade), 4.89 (dd, J = 14.5,7.0Hz, 1H, CHHNCO), 4.74 (dd, J =
14.5,7.6Hz, 1H, CHHNCO), 4.73 (dd, J = 10.8,2.2Hz, 1H, CHH-Ade), 4.37 (
m, 1H, CH₂CHCH₂), 4.04 (s, 3H, OCH₃), 3.87 (s, 3H, OCH₃), 3.86 (s, 3H, O
CH₃); ¹H NMR (DMSO-d₆+1%d-TFA, 400MHz):δ: 11.40 (s, 1H, N1'-H), 9.28 (b
r s, 1H, NHH), 8.78 (br s, 1H, NHH), 8.45 (s, 1H, Ade-C8-H), 8.40 (s, 1H
, Ade-C2-H), 8.07 (d, J = 7.2Hz, 1H, Ar-H), 8.05 (br s, 1H, ArOH), 7.76
(d, J = 7.2Hz, 1H, Ar-H), 7.43 (dd, J = 6.4,6.4Hz, 1H, Ar-H), 7.35 (dd,
J = 6.4,6.4Hz, 1H, Ar-H), 6.95 (s, 1H, C3'-H), 6.90 (s, 1H, C5'-H), 4.72
(dd, J = 10.8,5.6Hz, 1H, CHH-Ade), 4.68 (dd, J = 10.8,5.6Hz, 1H, CHH-Ad
e), 4.55 (dd, J = 9.0,9.0Hz, 1H, CHHNCO), 4.54 (br d, J = 9.0Hz, 1H, CHH
NCO), 4.36 (m, 1H), 3.93 (s, 3H, OCH₃), 3.80 (s, 3H, OCH₃), 3.79 (s, 3H,
OCH₃); ¹³C NMR (150MHz, アセトン-d₆): δ: 170.5, 161.0, 156.9, 152.2, 1
51.2, 151.0, 150.0, 143.9, 142.9, 141.4, 140.0, 136.7, 131.8, 128.4, 127
.2, 126.4, 124.7, 124.6, 124.1, 123.0, 114.2, 107.3, 106.1, 98.9, 61.5,
61.4, 57.5, 56.5, 56.4, 39.8; IR (フィルム) ν_max: 3251, 2911, 2850, 168
4, 1647, 1458, 1312, 1200, 1024 cm^-1; UV (CH₃OH) λ_max: 331 (ε12400), 3
00 (ε12600), 240nm (ε17700); FABHRMS (NBA) m/z: 566.2074 (M+H⁺, C₃₀H₂₇ N₇O₅は、566.2083であることを要する)。 HPLCｔ_R (4x250nmカラム、1.0mL/分、35% CH₃CN/0.05N水性HCO₂NH₄)は、化合 物44(21.6分)、化合物65(39.0分)、ソルボリシス生成物(24.0分)および化合物66
(17.5分)であった。

【０１２５】 メトキシメチル3-ニトロフェニルエーテル(11): 0℃にある、3-ニトロフェノー ル(5.00g、36mM)の無水DMF(100mL)溶液を、幾つかの部分に分けたNAH(2.16g、54
mM)で、5分間に渡り処理した。10分後に、Bu₄NI(1.33、3.6mM)を添加し、次いで
ClCH₂OCH₃(4.1mL、54mM)を滴下した。この反応混合物を、25℃で21時間攪拌し、
その後100mLの水を、徐々に添加することにより、反応を停止させた。その水性 相を、EtOAc(3×100mL)で抽出した。得られた有機相を併合し、10%の水性NaHCO₃ 溶液(100mL)、水(4×50mL)で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、減圧下で濃縮した。フラ
ッシュクロマトグラフィー(SiO₂、4×15cm、10% EtOAc/ヘキサン)は、化合物11
(5.83g、89%)を、淡黄色固体として与えた。¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 7.8
6 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 5.22 (s, 2H), 3.46 (s, 3H); ¹³C NMR (CDCl₃、62.
5MHz): δ: 157.5, 148.9, 129.9, 122.6, 116.5, 110.9, 94.4, 56.1; IR (フ ィルム) ν_max 3099, 2959, 2829, 1619, 1584, 1537, 1349, 1237, 1153, 1081
cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 206.0430 (C₈H₉NO₄+Na⁺ は、206.0429であるこ
とを要する)。元素分析(C₈H₉NO₄としての)計算値: C, 52.46; H, 4.95; N, 7.65
; 実測値: C, 52.37; H, 4.89; N, 7.61。

【０１２６】 3-アミノフェニルメトキシメチルエーテル(12): 化合物11(5.68g、31mM)の含水 エーテル(8:2:1 Et₂O/EtOH/H₂O; 310mL)溶液を、0℃に冷却し、1×1cmの小片状 の、新たに調製したAl-Hg(5.2g Al、217mM)で処理した。この反応混合物を、0℃
にて0.5時間、および25℃にて1時間激しく攪拌した。この反応混合物を、セライ
トを介して濾過し、該セライトを、Et₂O (5×50mL)で十分に洗浄した。この濾液
を飽和水性NaCl溶液(300mL)で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、減圧下で濃縮して、金 色のオイルとして化合物12(4.23g、89%)を得、これを、更に精製することなしに
使用して、即座に次の段階を実施した。化合物12: ¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 7.05 (t, J = 8.0Hz, 1H), 6.38 (m, 3H), 5.12 (s, 2H), 3.70 (br s, 2H)
, 3.46 (s, 3H); ¹³C NMR (CDCl₃、250MHz): δ: 158.2, 147.7, 129.9, 108.7,
106.0, 102.9, 94.0, 55.7; IR (フィルム) ν_max 3452, 3367, 2955, 2900, 1
623, 1601, 1494, 1287, 1147, 1074, 1009 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 153
.0786 (C₈H₁₁NO₂は、153.0790であることを要する)。

【０１２７】 [N-(t-ブチルオキシカルボニル)アミノ]-3-(メトキシメトキシ)ベンゼン(13): 粗製化合物12(4.13g、27mM)の無水THF(135mL)溶液を、BOC₂O(12.14g、54mM)で処
理し、この反応混合物を、18時間還流(65℃)加熱した。該溶媒を減圧下で除去し
、フラッシュクロマトグラフィー処理(SiO₂、4×15cm、20% EtOAc/ヘキサン)に より、純粋な化合物13(6.83g、100%)を、黄色オイルとして得た: ¹H NMR (CDCl₃ 、250 MHz): δ: 7.15 (m, 2H), 6.94 (m, 1H), 6.68 (m, 1H), 6.58 (br s, 1H
), 5.13 (s, 2H), 3.44 (s, 3H), 1.50 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃、62.5MHz): δ: 157.7, 152.5, 139.5, 129.6, 111.9, 110.7, 106.6, 94.2, 80.5, 55.9, 2
8.2; IR (フィルム) ν_max 3337, 2977, 1728, 1605, 1537, 1236, 1153, 1015
cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 276.1203 (C₁₃H₁₉NO₄+Na⁺ は、276.1212である ことを要する)。

【０１２８】 [N-(t-ブチルオキシカルボニル)アミノ]-2-ヨード-3-(メトキシメトキシ)ベンゼ
ン(14): 化合物13(124mg、0.49mM)の無水THF(2.0mL)溶液を、-20℃に冷却し、TM
EDA(0.26mL、1.71mM)で、次にゆっくりと滴下することにより添加される、n-BuL
i(0.69mLの2.5Mヘキサン溶液、1.71mM)で処理した。得られた金色の溶液を-20℃
にて4時間攪拌した。この反応混合物を、1-クロロ-2-ヨードエタン(0.126mL、1.
71mM)で処理し、25℃にて15分間攪拌した。この反応系を水(30mL)で希釈し、EtO ₂ (3×20mL)で抽出し、併合した有機抽出物を飽和水性NaCl溶液で洗浄し、乾燥(N
a₂SO₄)し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー処理(SiO₂、2.5×
10cm、0-10% EtOAc/ヘキサン勾配)により、化合物13(51.8mg、41%)および化合物
14(85.5mg、46%)を、白色固体として得、回収した。m.p 82-84℃: ¹H NMR (CDCl ₃ 、400 MHz): δ: 7.72 (d, J = 8.2Hz, 1H), 7.21 (t, J = 6.0Hz, 1H), 7.01
(br s, 1H), 6.72 (dd, J = 1.2,8.2Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 3.47 (s, 3H), 1.
49 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃、100MHz): δ: 156.0, 152.5, 140.1, 129.5, 113
.4, 108.9, 94.8, 82.4, 80.9, 54.4, 28.3; IR (フィルム) ν_max 3388, 2977,
1736, 1592, 1515, 1465, 1406, 1252, 1226, 1153, 1005 cm^-1; FABHRMS (NBA
/CsI) m/z: 511.9351 (C₁₃H₁₈INO₄+Cs⁺ は、511.9335であることを要する)。元 素分析: (C₁₃H₁₈INO₄に対する)計算値: C, 41.18; H, 4.78; N, 3.69; 実測値:
C, 41.19; H, 5.11; N, 3.79

【０１２９】 [N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-(2-プロペン-1-イル)アミノ]-2-ヨード-3-( メトキシメトキシ)ベンゼン(15): 化合物14(141mg、0.37mM)の無水DMF(12mL)溶 液を、-10℃に冷却し、少量ずつのNaH(22.3mg、0.55mM)で処理した。得られた懸
濁液を15分間攪拌し、純粋な臭化アリル(0.16mL、1.56mM)を徐々に滴下して処理
した。この反応混合物を、25℃に加温し、1時間攪拌した。この反応混合物を、5
%の水性NaHCO₃(20mL)の添加により反応停止させ、その水性相をEtOAc(3×10mL) で抽出した。併合した有機抽出物を、水(5×10mL)で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、 減圧下で濃縮して、黄色オイル状態で、2:1アミド回転異性体混合物として、化 合物15を得た。フラッシュクロマトグラフィー処理(SiO₂、2.5×10cm、10% EtOA
c/ヘキサン)により、化合物15(149mg、96%)を、無色オイルとして得た: ¹H NMR
(CDCl₃、250 MHz): δ: 7.17 (m, 1H), 6.95-6.78 (m, 2H), 5.98-5.84 (m, 1H)
, 5.21 (s, 2H), 5.09-5.03 (m, 2H), 4.46 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 1.50およ び1.31 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃、100MHz): δ: 157.5および157.0, 153.7, 14
6.1および145.7, 133.8および133.6, 129.5および129.0, 123.6および123.5, 11
7.6および117.1, 113.5および113.2, 95.0および94.1, 80.5および80.1, 56.4,
53.1, 51.9, 28.3および28.1; IR (フィルム) ν_max 2975, 1688, 1582, 1463,
1381, 1253, 1154, 1065, 990 cm^-1; FABHRMS (NBA/NaI) m/z: 420.0663 (C₁₆H_{2 2} INO₄+H⁺ は、420.0672であることを要する)。

【０１３０】 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-4-(メトキシメトキシ)-3-[[(2',2',6',6'-テト ラメチルピペリジノ)オキシ]メチル]-2,3-ジヒドロインドール(16): 化合物15(1
42mg、0.33mM)およびTEMPO(160mg、1.0mM)の、無水ベンゼン(14.3mL)溶液を、Bu ₃ SnH(96μL、0.35mM)で処理した。この溶液を50℃に加温し、追加の1.05当量のB
u₃SnH(96μL、0.35mM)を、次の30分間に２度添加した。更に、3.0当量のTEMPO(1
60mg、1.0mM)を、3mLの無水ベンゼンに添加し、追加の1.05当量のBu₃SnHを、次 の45分間に2度添加した。全体で1.5時間の経過後に、この溶液を25℃に冷却し、
減圧下で揮発性物質を除去した。フラッシュクロマトグラフィー処理(SiO₂、2.5
×10cm、0-8% EtOAc/ヘキサン勾配)により、化合物16(138mg、91%)を、黄色オイ
ルとして得た: ¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 7.51 (br s, 1H), 7.11 (m, 1H)
, 6.67 (d, J = 8.7Hz, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.13 (dd, J = 3.3,11.4Hz, 1H),
4.07 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.54 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 1.
55 (s, 9H), 1.47-0.76 (m, 18H); ¹³C NMR (C₆D₆、100MHz): δ: 154.2, 152.2
, 145.4, 129.8, 119.0, 109.6, 108.1, 94.4, 79.8, 77.3, 60.0, 55.7, 52.4,
39.9, 33.3, 28.3, 20.1, 17.4; IR (フィルム) ν_max 2974, 2931, 1707, 160
9, 1462, 1389, 1250, 1154, 1009 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 581.1977 (C ₂₅ H₄₀N₂O₅+H⁺ は、581.1992であることを要する)。

【０１３１】 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-3-(ヒドロキシメチル)-4-(メトキシメトキシ)-2
,3-ジヒドロインドール(17): 化合物16(135mg、0.30mM)の3:1:1 HOAc/H₂O/THF(1
0mL)溶液を、Zn粉末(780mg、12.0mM)で処理し、得られたこの懸濁液を、2時間、
還流冷却器で、激しく攪拌しつつ、70℃に加温した。この反応混合物を25℃に冷
却し、セライト(CH₂Cl₂洗浄)を通して濾過することにより、該Znを除去した。揮
発性物質を減圧下で除去し、得られた残留物を15mLのEtOAcに溶解し、濾過した 。この溶液を減圧下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー処理(SiO₂、2.5×
10cm、30-40% EtOAc/ヘキサン勾配)にかけて、化合物16(84mg、87%)を、無色オ イルとして得た: ¹H NMR (CDCl₃、400 MHz): δ: 7.53 (br s, 1H), 7.11 (m, 1
H), 6.67 (d, J = 8.8Hz, 1H), 5.18 (d, J = 8.6Hz, 1H), 5.16 (d, J = 8.6Hz
, 1H), 4.02 (dd, J = 10.1,11.5Hz, 1H), 3.84 (m, 2H), 3.71 (dd, J = 5.9,1
0.4Hz, 1H), 3.61 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 1.53 (s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃、10
0MHz): δ: 153.6, 152.3, 129.7, 110.9, 110.0, 109.0, 107.8, 106.6, 94.2,
64.7, 56.2, 51.3, 41.0, 28.3; IR (フィルム) ν_max 3444, 2975, 1704, 160
8, 1463, 1392, 1252, 1153, 1004 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 442.0642 (C ₁₆ H₂₃NO₅+Cs⁺ は、442.0631であることを要する)。

【０１３２】 1-(t-ブチルオキシカルボニル)-4-(メトキシメトキシ)-3-[[(メタンスルフォニ ル) オキシ]メチル]-2,3-ジヒドロインドール(18): 化合物17(80mg、0.26mM)の 無水CH₂Cl₂(5mL)溶液を、0℃に冷却し、Et₃N(79μL、0.57mM)で処理した。10分 後に、MsCl(40μL、0.52mM)を添加し、この反応混合物を、引き続き25℃に加温 し、3時間攪拌した。この反応溶液を減圧下にて濃縮した。フラッシュクロマト グラフィー処理(SiO₂、2.5×10cm、30% EtOAc/ヘキサン)にかけて、化合物18(94
mg、94%)を、無色オイルとして得た: ¹H NMR (CDCl₃、250 MHz): δ: 7.49 (m,
1H), 7.15 (m, 1H), 6.68 (d, J = 9.0Hz, 1H), 5.19 (d, J = 8.8Hz, 1H), 5.1
7 (d, J = 8.8Hz, 1H), 4.58 (dd, J = 3.6,9.7Hz, 1H), 4.21 (app t, J = 8.9
,Hz, 1H), 4.00 (m, 2H), 3.79 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 1.54 (
s, 9H); ¹³C NMR (CDCl₃、100MHz): δ: 153.9, 152.1, 130.5, 110.2, 108.8,
107.7, 103.9, 94.4, 81.0, 69.9, 56.2, 51.1, 37.9, 37.2, 28.2; IR (フィル
ム) ν_max 2976, 1703, 1610, 1479, 1463, 1391, 1355, 1254, 1175, 1154, 10
61, 952 cm^-1; FABHRMS (NBA/CsI) m/z: 520.0388 (C₁₇H₂₅NO₇S+Cs⁺ は、520.04
06であることを要する)。

【０１３３】 DNAのアルキル化に関する研究: 選択性および効率: TEバッファー(10mMトリス(T
ris)、1mM EDTA、pH 7.5)中に、³²P5'-末端標識二本鎖DNA(9μL) (Boger, D.L. 等, Tetrahedron, 1991, 47:2661)のみを含むエッペンドルフ管を、DMSO中に溶 解または分散した上記薬物(1μL、指定された濃度で)で処理した。これら溶液を
、攪拌および簡略化した遠心処理により混合し、引き続き4℃、25℃または37℃ にて、24-72時間インキュベートした。共有結合的に変成されたDNAを、該DNAのE
tOH沈殿法により、未結合薬物から分離した。該EtOH沈殿法は、担体としてt-RNA
(1μL、10μg/μL)、3MのNaOAc(0.1容)および-20℃のEtOH(2.5容)を添加するこ とにより実施した。これら溶液を混合し、REVCOフリーザーで、1時間またはそれ
以上、-78℃に冷却した。該DNAを、4℃にて15分間遠心処理することによりペレ ットにし、-20℃の70%EtOH(0.2M NaCl含有TE中)で洗浄した。このペレットをサ バンスピードバク(Savant Speed Vac)濃縮機で乾燥し、TEバッファー(10μL)に 再懸濁した。これらのアルキル化DNA溶液を、100℃にて30分間加温して、該アデ
ニンN3アルキル化サイトでの開裂を誘発させた。簡単に遠心処理した後、ホルム
アミド染料溶液(5μL)を添加した。電気泳動前に、該サンプルを、100℃にて5分
間加温し、氷浴に入れ、手短に遠心処理することによって変性し、補充液(2.8μ
L)をゲル上に重層した。サンガー(Sanger)のジデオキシヌクレオチド配列決定反
応を、薬物処理DNA反応サンプルに近い標準として実施した。ポリアクリルアミ ドゲル電気泳動法(PAGE)を、TBEバッファー(100mMトリス、100mM硼酸、0.2mM Na ₂ EDTA)中で、変性条件(19:1アクリルアミド:N,N-メチレンビスアクリルアミド、
8M尿素)下にある、8%配列決定ゲル上で行った。該サンプルを重層する前に、PAG
Eを30分間、ホルムアミド染料溶液を使用して、予備的に稼動させた。乾燥ゲル のオートラジオグラフィーを、コダック(Kodak) O-オーマット(Omat) AR フィル
ムおよびピッカースペクトラ(Picker Spectra^TM) 増強スクリーンを使用して、-
78℃で実施した。

【図面の簡単な説明】

【図１】 (+)-CC-1065(1)およびその未変性天然生成物である、デュオカルマイシン2お よび3を示す。

【図２】 図2のAは、公知技術のDNAアルキル化薬物CI、CBIおよびCPI並びに新規な類似 体DNAアルキル化薬物イソ-CBIおよびイソ-CPIを示し、図2のBは、CBI-TMIおよび
イソ-CBI-TMIと、DNAの副溝との相互作用を示す。

【図３】 図3のAは、50%CH₃OH-水性バッファー(pH 3.0、4:1:20(v/v/v) 0.1Mクエン酸、
0.2M NaH₂PO₄、および水)中の、N-BOC-イソ-CBI(31)の、ソルボリシス研究(UVス
ペクトル)から得たデータを示す。該スペクトルは、0、10、20、28、56および84
時間において記録された。図3のBは、50%CH₃OH-水性バッファー(pH 3.0、4:1:20
(v/v/v) 0.1Mクエン酸、0.2M NaH₂PO₄、および水)中の、N-CO₂Me-イソ-CBI(33、
中央)の、ソルボリシス研究(UVスペクトル)から得たデータを示す。該スペクト ルは、0、10、21、29、57および86時間において記録された。図3のCは、50%CH₃O
H-水性バッファー(pH 3.0、4:1:20(v/v/v) 0.1Mクエン酸、0.2M NaH₂PO₄、およ び水)中の、化合物35の、ソルボリシス研究(UVスペクトル)から得たデータを示 す。該スペクトルは、0、1、3、5、10および16時間において記録された。

【図４】 図4のAおよびBは、N-CO₂Me-イソ-CBIおよびN-CO₂Me-CBIの、活性化されたシク
ロプロパンの側面図および90°回転させた図の、スティックモデルを示し、デー
タはX-線結晶構造解析から得たものであり、および該シクロプロパンのπ-電子 系を持つ、該シクロプロパンの立体電子および幾何学的配列を際立たせた。

【図５】 w794 DNA(SV40 DNAセグメント、144bp、ヌクレオチドNo. 138-5238)の熱的に 誘発されたストランドの開裂を示し、25℃にて24時間、DNA-薬物インキュベーシ
ョン、未結合薬物の除去および30分間の熱分解(100℃)、次いで変性8%PAGEおよ びオートラジオグラフィー。レーン1: コントロールDNA; レーン2-5: サンガーG
、C、AおよびT配列決定反応; レーン6-7: (-)-イソ-CBI-TMI(1×10^-3および1×1
0^-4M); レーン8-9: (+)-CBI-TMI(1×10^-5および1×10^-6M); レーン10-11: (+)- デュオカルマイシンSA(1×10^-5および1×10^-6)。

【図６】 w836 DNA(146bp、ヌクレオチドNo. 5189-91)の熱的に誘発されたストランドの
開裂を示し、25℃にて24時間((-)-イソ-CBI-TMI)、DNA-薬物インキュベーション
、未結合薬物の除去および30分間の熱分解(100℃)、次いで変性8%PAGEおよびオ ートラジオグラフィー。レーン1: コントロールDNA; レーン2-5: サンガーG、C 、AおよびT配列決定反応; レーン6-8: (-)-イソ-CBI-TMI(1×10³〜1×10^-5M); レーン9-10: (+)-デュオカルマイシンSA (1×10^-5〜1×10^-6M); レーン11-12: (
+)-イソ-CBI-TMI (1×10^-2および1×10^-3)。

【図７】 w794 DNA(SV40 DNAセグメント、144bp、ヌクレオチドNo. 138-5238)の熱的に 誘発されたストランドの開裂を示し、25℃にて24時間、DNA-薬物インキュベーシ
ョン、未結合薬物の除去および30分間の熱分解(100℃)、次いで変性8%PAGEおよ びオートラジオグラフィー。レーン1: コントロールDNA; レーン2-5: サンガーG
、C、AおよびT配列決定反応; レーン6-8: (+)-デュオカルマイシンSA (1×10^-4 〜1×10^-6M); レーン9-11: セコ-イソ-CI-TMI(1×10^-3〜1×10^-5M)。

【図８】 図8のA〜Eは、DNAアルキル化薬物の指定された群の、IC₅₀値を示す。

【図９】 図9のA〜Cは、指定された化合物のソルボリシスデータを示す。

【図１０】 種々のアデニン付加生成物の、¹Hおよび¹³C NMRデータを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 209/94 Ｃ０７Ｄ 209/94 487/04 １３７ 487/04 １３７ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C050 AA01 AA08 BB04 CC04 EE02 FF03 GG01 HH04 4C086 AA01 AA03 BC10 BC13 CB03 GA07 MA04 NA14 ZB26 ZB33 ZB35 4C204 BB01 CB03 CB13 CB26 DB30 EB02 FB17 FB20 GB25 GB26 GB28

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 DNAアルキル化サブユニットおよび共有結合により該DNA結合サ ブユニットと結合したDNA結合サブユニットを含み、以下の構造によって表され るものであることを特徴とする、DNAアルキル化化合物: 【化１】
2. 【請求項２】 該DNA結合サブユニットが、以下の構造により表されるラジカル
   である、請求項1記載のDNAアルキル化化合物： 【化２】 ここで、AはNHおよびOからなる群から選択される基であり、BはCおよびNからな る群から選択され、R₂は水素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(
   C1-C6)₃、および第一のN-置換ピロリジン環からなる群から選択され、R₃は水素 、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃、および該第一のN- 置換ピロリジン環からなる群から選択され、R₄は水素、ヒドロキシル、O-アルキ
   ル(C1-C6)およびN-アルキル(C1-C6)₃からなる群から選択され、R₅は水素、ヒド ロキシル、O-アルキル(C1-C6)およびN-アルキル(C1-C6)₃からなる群から選択さ れ、およびV₁はR₂とR₃との間の、第一のビニレン基を表し、但しR₂が該第一のN-
   置換ピロリジン環に関与している場合には、R₃も該第一のN-置換ピロリジン環に
   関与しており、R₃が該第一のN-置換ピロリジン環に関与している場合には、R₂も
   該第一のN-置換ピロリジン環に関与しており、R₂およびR₃が該第一のN-置換ピロ
   リジン環に関与している場合、R₄およびR₅は水素であり、R₂が水素である場合に
   は、R₄およびR₅は水素であり、かつR₃は N-アルキル(C1-C6)₃であり、また 該第一のN-置換ピロリジン環が、R₂とR₃との間で、該第一のビニレン基と融合
   しており、かつ以下の構造で表され: 【化３】 ここで、V₁はR₂とR₃との間の、該第一のビニレン基を表し、R₆は-CH₂CH₃(アルキ
   ル)、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-NH₂、-NHNH₂、-NHNHCO₂ ^tBu、
   および以下の構造で表される基からなる群から選択され: 【化４】 ここで、CはNHおよびOからなる群から選択され、DはCおよびNからなる群から選 択され、R₇は水素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃お よび第二のN-置換ピロリジン環からなる群から選択され、R₈は水素、ヒドロキシ
   ル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃および該第二のN-置換ピロリジン 環からなる群から選択され、V₂はR₇とR₈との間の、該第二のビニレン基を表し、
   但しR₇が該N-置換ピロリジン環に関与している場合には、R₈も該N-置換ピロリジ
   ン環に関与しており、R₈が該N-置換ピロリジン環に関与している場合にのみ、R₇ も該N-置換ピロリジン環に関与しており、また 該第二のN-置換ピロリジン環は、R₇とR₈との間で、該第二のビニレン基と融合
   しており、かつ以下の構造により表され: 【化５】 ここで、V₂はR₇とR₈との間の、該第二のビニレン基を表し、R₉は-CH₂CH₃(アルキ
   ル)、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-NH₂、-NHNH₂および-NHNHCO₂ ^t Buからなる群から選択される基を表す。
3. 【請求項３】 以下の構造によって表される、請求項2記載のDNAアルキル化化 合物: 【化６】
4. 【請求項４】 以下の構造によって表される、請求項2記載のDNAアルキル化化 合物: 【化７】
5. 【請求項５】 以下の構造によって表される、請求項2記載のDNAアルキル化化 合物: 【化８】
6. 【請求項６】 以下の構造によって表される、請求項2記載のDNAアルキル化化 合物: 【化９】
7. 【請求項７】 以下の構造によって表される、請求項2記載のDNAアルキル化化 合物: 【化１０】
8. 【請求項８】 以下の構造によって表される、DNAアルキル化化合物: 【化１１】 ここで、R₁は、-C1-C6アルキル、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-N
   H₂、-NHNH₂、-NHNHCO₂ ^tBuおよび以下の構造により表される基からなる群から選 択される基を表す: 【化１２】
9. 【請求項９】 以下の構造によって表される、請求項8記載のDNAアルキル化化 合物: 【化１３】
10. 【請求項１０】 以下の構造式により表される化学的中間体: 【化１４】
11. 【請求項１１】 以下の構造式により表される化学的中間体: 【化１５】
12. 【請求項１２】 DNAアルキル化サブユニットおよび共有結合により該DNAアル キル化サブユニットと結合したDNA結合サブユニットを含み、以下の構造によっ て表されるものであることを特徴とする、DNAアルキル化化合物: 【化１６】
13. 【請求項１３】 該DNA結合サブユニットが、以下の構造により表される基であ
    る、請求項12記載のDNAアルキル化化合物： 【化１７】 ここで、AはNHおよびOからなる群から選択される基であり、BはCおよびNからな る群から選択され、R₂は水素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(
    C1-C6)₃および第一のN-置換ピロリジン環からなる群から選択され、R₃は水素、 ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃、および該第一のN-置 換ピロリジン環からなる群から選択され、R₄は水素、ヒドロキシル、O-アルキル
    (C1-C6)およびN-アルキル(C1-C6)₃からなる群から選択され、R₅は水素、ヒドロ キシル、O-アルキル(C1-C6)およびN-アルキル(C1-C6)₃からなる群から選択され 、およびV₁はR₂とR₃との間の、第一のビニレン基を表し、但しR₂が該第一のN-置
    換ピロリジン環に関与している場合には、R₃も該第一のN-置換ピロリジン環に関
    与しており、R₃が該第一のN-置換ピロリジン環に関与している場合には、R₂も該
    第一のN-置換ピロリジン環に関与しており、R₂およびR₃が該第一のN-置換ピロリ
    ジン環に関与している場合、R₄およびR₅は水素であり、R₂が水素である場合には
    、R₄およびR₅は水素であり、かつR₃は N-アルキル(C1-C6)₃であり、また 該第一のN-置換ピロリジン環が、R₂とR₃との間で、該第一のビニレン基と融合
    しており、かつ以下の構造で表され: 【化１８】 ここで、V₁はR₂とR₃との間の、該第一のビニレン基を表し、R₆は-CH₂CH₃(アルキ
    ル)、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-NH₂、-NHNH₂、-NHNHCO₂ ^tBu、
    および以下の構造で表される基からなる群から選択され: 【化１９】 ここで、CはNHおよびOからなる群から選択され、DはCおよびNからなる群から選 択され、R₇は水素、ヒドロキシル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃お よび第二のN-置換ピロリジン環からなる群から選択され、R₈は水素、ヒドロキシ
    ル、O-アルキル(C1-C6)、N-アルキル(C1-C6)₃および該第二のN-置換ピロリジン 環からなる群から選択され、V₂はR₇とR₈との間の、該第二のビニレン基を表し、
    但しR₇が該N-置換ピロリジン環に関与している場合には、R₈も該N-置換ピロリジ
    ン環に関与しており、R₈が該N-置換ピロリジン環に関与している場合にのみ、R₇ も該N-置換ピロリジン環に関与しており、また 該第二のN-置換ピロリジン環は、R₇とR₈との間で、該第二のビニレン基融合し
    ており、かつ以下の構造により表され: 【化２０】 ここで、V₂はR₇とR₈との間の、該第二のビニレン基を表し、R₉は-CH₂CH₃(アルキ
    ル)、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-NH₂、-NHNH₂および-NHNHCO₂ ^t Buからなる群から選択される基を表す。
14. 【請求項１４】 以下の構造によって表される、請求項13記載のDNAアルキル化
    化合物: 【化２１】
15. 【請求項１５】 以下の構造によって表される、請求項13記載のDNAアルキル化
    化合物: 【化２２】
16. 【請求項１６】 以下の構造によって表される、請求項13記載のDNAアルキル化
    化合物: 【化２３】
17. 【請求項１７】以下の構造によって表される、請求項13記載のDNAアルキル化 化合物: 【化２４】
18. 【請求項１８】 以下の構造によって表される、請求項13記載のDNAアルキル化
    化合物: 【化２５】
19. 【請求項１９】 以下の構造によって表される、DNAアルキル化化合物: 【化２６】 ここで、R₁は、-C1-C6アルキル、-NHCH₃(-N-アルキル)、-OCH₃(O-アルキル)、-N
    H₂、-NHNH₂、-NHNHCO₂ ^tBuおよび以下の構造により表される基からなる群から選 択される基を表す: 【化２７】
20. 【請求項２０】 以下の構造によって表される、請求項19記載のDNAアルキル化
    化合物: 【化２８】
21. 【請求項２１】 以下の構造式により表される化学的中間体: 【化２９】
22. 【請求項２２】 以下の構造式により表される化学的中間体: 【化３０】