JP2001519384A

JP2001519384A - 骨の構築と維持のための方法

Info

Publication number: JP2001519384A
Application number: JP2000515580A
Authority: JP
Inventors: マサヒコ・サトウ
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1997-10-14
Filing date: 1998-10-05
Publication date: 2001-10-23
Also published as: AU9682098A; ZA989207B; WO1999018945A1; CA2306344A1; US20020025929A1; EP1030658A1

Abstract

(57)【要約】治療上有効量の上皮小体ホルモンと式（１）【化１】［式中、Ｒ¹およびＲ²は独立に、水素および炭素原子１〜６のアルキルからなる群から選択される］で示される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を共投与することを含む、骨損失を処置する方法。該共投与は、２つの化合物の同時的、併用的または逐次的投与の態様をとり得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は、医学的処置方法に関する。より具体的には、本発明は、ミネラル化
組織が欠乏している患者の処置のための、ある種の３−（置換フェノキシ）ベン
ゾ［ｂ］チオフェン化合物の、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）と組み合せた使用に
関する。

【０００２】（発明の背景）骨粗鬆症は、通常６５歳以上の閉経後の女性、および８０歳以上の男性にみら
れる状態である。女性においては、骨粗鬆症は、４５歳ぐらいで卵巣機能の低下
とともに最初に観察される。男性および女性においては、骨粗鬆症は、免疫抑制
剤、ステロイド（グルココルチコイド、コルチコステロイド）による処置、糖尿
病、性機能低下、上皮小体亢進、関節炎（リウマチおよび骨関節症）、および選
択的行動（喫煙、飲酒、食事）の結果生じ得る。

【０００３】その状態は低い骨量によって特徴付けられ、過剰な骨吸収または骨形成活性の
低下に起因する。いずれの機構も骨量と骨密度の正味の減少ともたらし、それに
伴って患者の骨折の危険性が増加する。

【０００４】現在行われている骨粗鬆症の処置は、主として食事中のカルシウム摂取量を増
加することにより骨量の損失を阻止することおよび／または骨吸収細胞（破骨細
胞）の活性を阻止することを目的としている。特に、エストロゲン置換治療、カ
ルシトニン、またはビスホスホネートを含む現在の処置の態様はすべて、破骨細
胞の活性または分化を阻害することにより骨吸収を阻害するものである。

【０００５】上皮小体ホルモン（ＰＴＨ、配列番号１）は、８４アミノ酸残基を含む線状ポ
リペプチド（Ｍr ９５００）であり、血清中の低いＣa⁺⁺レベルに応答して上皮小体から排出される。排出されたペプチドは８４アミノ酸残基の長さであるが、
そのホルモンの同化活性は、Ｎ末端の３１または３４残基のフラグメントによっ
て発揮される。生理学的には、ＰＴＨは、骨、腎臓およびインテスチン（間接的
にビタミンＤアクシスを経て）と相互作用することにより、血清カルシウム濃度
の正常なレベルを維持する。

【０００６】上皮小体亢進においてみられるＰＴＨレベルの慢性的な上昇は、骨の損失をも
たらし、しばしば腎臓結石や軟組織におけるリン酸カルシウムの沈着をもたらす
。しかしながら、臨床データによってｈＰＴＨ（１−３４）の毎日の断続的皮下
注射によって高カルシウム血症を起こすことなく骨量が増加することが示された
（D. Dempster et.al., Endocrine Rev., 14: 690-709 (1993); R. Lindsay et.
al., Lancet, 350: 550 ff., 1997; F. Cosman および R. Lindsay, Calcif. Ti
ssue Int., 62: 475-480 (1998)を参照）。

【０００７】米国特許第５,１１８,６６７号（Adamsら）は、骨成長因子および骨吸収の阻害剤としてのＰＴＨの使用を開示している。

【０００８】全長８４残基ｈＰＴＨの、より短いフラグメントも骨形成を刺激することが示
されている。これには、１−３１Ｎ末端フラグメント、（ｈＰＴＨ（１−３１）
ＮＨ₂、オスタボリン）（J. F. Whitfield, et.al., J. Bone & Min. Res., 12
(8): 1246-1252 (1997)によって報告）; および１−３４Ｎ末端フラグメント（G
. W. Tregear, Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 355: 415-421; R. Lindsay
et.al., op. cit.によって報告）が含まれる。

【０００９】米国特許第５,５１０,３７０号（Hock）は、骨量を増加させるために、ラロキ
シフェンとして一般に知られている化合物とともに上皮小体ホルモンを使用する
ことを開示している。

【００１０】（発明の要約）第１の態様において、本発明は、治療上効果的な量の式（１）：

【化３】［式中、Ｒ¹およびＲ²は独立に、水素または炭素原子１〜４のアルキルである］
で示される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を、ＰＴＨまたはその薬学的
に許容し得る塩と組み合せて投与することを含む、そのような処置を必要とする
患者において骨量を構築する方法を提供する。

【００１１】（詳細な記載）本発明によれば、ＰＴＨと式（１）の化合物の両方の投与は、いずれか一方の
化合物単独の投与よりも骨損失を効果的に処置することがわかった。

【００１２】本明細書および添付した請求の範囲に用いられる、式（１）の化合物のＰＴＨ
との「共投与」、または式（１）の化合物のＰＴＨ「との」「投与」は、骨不足
によって特徴付けられる状態を処置するための、２つの化合物の同時的、併用的
または逐次的投与を意味する。

【００１３】「同時的投与」は、単一の投与形態のＰＴＨと式（１）の化合物の、治療上効
果的な量の投与を意味する。

【００１４】「併用的投与」は、分離した投与形態のＰＴＨと式（１）の化合物の、治療上効
果的な量を、お互い短い時間内に投与することを意味し、本質的には、２つの薬
物を「同時に」ではあるが分離した投与形態で投与することを意味する。この投
与の態様は、イオン泳動性経皮パッチ、経口、肺または鼻スプレー、皮下、非経
口、バッカルまたは舌下、または坐剤の剤型などの１つの投与形態のＰＴＨの投
与、および前記の剤型のいずれかまたは錠剤、カプセル、シロップまたはエリキ
シルなどの経口投与の剤型、または坐剤などによる、もう１つの投与形態の式（
１）の化合物の投与が可能である。

【００１５】「逐次的投与」は、ＰＴＨまたは式（１）の化合物各々単独の治療上効果的な
量の投与であり、一方の化合物の投与を終えたのち、他方の化合物の投与を始め
ることを意味する。逐次的投与はまた、２つの薬剤の同時的または併用的投与、
次いでその２つの薬剤の同時的または併用的投与の終止、そしていずれか一方の
化合物単独での投与の継続、という形態も取り得る。

【００１６】本明細書および請求の範囲に用いられる「ＰＴＨ」または「上皮小体ホルモン
」なる用語は、ヒトの体内で骨を構築するためのカルシウムおよびリン酸代謝の
制御においてヒト上皮小体ホルモン（１−８４）の活性を模擬することが可能な
いずれかのポリペプチド、タンパク質、タンパク質フラグメント、または修飾タ
ンパク質フラグメントを意味する。この定義には、ヒトの上皮小体ホルモンの全
長８４のアミノ酸配列（ｈＰＴＨ、配列番号１）；ヒト上皮小体ホルモンの１−
３１残基Ｎ末端フラグメント（ｈＰＴＨ１−３１、配列番号２）；ヒト上皮小体ホルモンの１−３４残基Ｎ末端フラグメント（ｈＰＴＨ１−３４、配列番号３）；ヒト上皮小体ホルモンの１−３８残基Ｎ末端フラグメント（ｈＰＴＨ１−
３８、配列番号４）；ＰＴＨ関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ１−３４、配列番号５）；［Ｇlu²²、Ｌeu²³、Ｇlu²⁵、Ｌys²⁶、Ｌeu²⁸、Ｇlu²⁹、Ｌys³⁰、Ｌeu³¹、ホ
モ−Ｓer³⁴（ラクタム）］ＰＴＨｒＰ（配列番号６）；［Ａla²¹、Ｇlu²²、Ｌeu ²³ 、Ｇlu²⁵、Ｌys²⁶、Ｌeu²⁸、Ｇlu²⁹、Ｌys³⁰、Ｌeu³¹］ＰＴＨｒＰ（配列番号
７）；［Ｇlu²²、Ｌeu²³、Ｇlu²⁵、Ｌys²⁶、Ｌeu²⁸、Ｇlu²⁹、Ｌys³⁰、Ｈis³¹、
Ｔhr³²、Ａla³⁴、デス−Ａla³⁴］ＰＴＨｒＰ（配列番号８）；［Ｌeu²⁷ シクロ（Ｇlu²²−Ｌys²⁶）］ｈＰＴＨ（１−３４）（配列番号９）；［Ｌeu²⁷ シクロ（Ｌys²⁶−Ａsp³⁰）］ｈＰＴＨ（１−３１）（配列番号１０）；［Ｌeu⁸、Ａsp¹ ⁰ 、Ｌys¹¹、Ａla¹⁶、Ｇln¹⁸、Ｔhr³³、Ａla³⁴］ｈＰＴＨ（１−３４）（配列番号１１）；およびＰＴＨｒＰ１−３６（配列番号１２）が含まれる。

【００１７】本発明の方法において使用するために好ましい「ＰＴＨ」は、ヒト上皮小体ホ
ルモンのＮ末端１−３４フラグメント、ｈＰＴＨ（１−３４、配列番号３）であ
る。「アルキル」なる語は、メタン、エタンまたは分岐鎖または直鎖の炭素原子
３または４の飽和炭化水素から水素原子１個が脱離したことにより誘導される一
価の基を意味する。

【００１８】本発明の方法において使用するための、式（１）の好ましい化合物は、式中、
Ｒ¹が水素であり、Ｒ²がメトキシである化合物、即ち、６−ヒドロキシ−２−（
４−メトキシフェニル）−３−［４−（２−ピペリジン−１−イルエトキシ）フ
ェノキシ］−ベンゾ［ｂ］チオフェン、式（１ａ）：

【化４】および式中Ｒ¹およびＲ²が水素である化合物、即ち、６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−［４−（２−ピペリジン−１−イルエトキシ）
フェノキシ］ベンゾ［ｂ］チオフェン、式（１ｂ）：

【化５】である。

【００１９】式（１ａ）および式（１ｂ）の化合物並びにそれらの薬学的に許容し得る塩の
製造方法は、米国特許第５,５１０,３５７号（１９９６年４月２３日発行）およ
び米国特許（ＵＳＳＮ０８／５５２６３６（１９９５年１１月３日出願））に記載されている。好ましい塩は塩酸塩である。

【００２０】全長ｈＰＴＨ１−８４および種々のＮ末端フラグメント（修飾されていないか
またはそのフラグメントにおける１またはそれ以上のアミノアシル残基の置換に
より修飾された）を、当業者によく知られた技術により、合成または組換えによ
って製造することができる。合成の例には、いわゆる「固相」ペプチド合成や液
相化学反応の一般的方法が含まれる。利用可能な固相ペプチド合成法の要旨は、
J. M. Stewart and J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, W. H. Free
man Co., San Francisco, 1963 および J. Meinhofer, Hormonal Proteins and
Peptides, Vol. 2, Academic Press., New York, 1973で見ることができる。古典的な溶液合成法は、G. Schroeder and K. Lupke, The Peptides, Vol. 1, Aca
demic Press, New York, 1965に記載されている。

【００２１】一般に、これらの合成方法は、１またはそれ以上のアミノ酸または適当に保護
されたアミノ酸の、合成樹脂に結合した伸長中のペプチド鎖への逐次的な添加を
含んでなる。出発物質のアミノ酸は、商業的に入手可能である。

【００２２】通常、最初のアミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基を適当な保護基により
保護する。次に、保護されたまたは誘導されたアミノ酸は、不活性な固相（樹脂
）に結合するか、または、適当に保護した相補的な（アミノまたはカルボキシル
）基を有するその配列の次のアミノ酸を、アミド（ペプチド）結合の形成に資す
る条件下で加えることにより液相での合成に使用する。次いで、保護基を、この
新たに加えたアミノ酸残基から除去し、次の（適当に保護した）アミノ酸を加え
ゆく。

【００２３】所望のアミノ酸すべてを適切な順序で連結させた後、残存する保護基をすべて
逐次的または同時に除去し、固相法により合成した場合にはそのペプチド鎖を固
相から開裂させて、最終のポリペプチドを得る。この一般的方法の単純な修飾に
より、例えば、保護したトリペプチドと適当に保護したジペプチドとを（キラル
中心をラセミ化しない条件下で）カップリングし、脱保護した後、ペンタペプチ
ドを形成することにより、合成中の鎖に１以上のアミノ酸を加えることが可能で
ある。

【００２４】特に好ましいペプチドの製造方法には、固相ペプチド合成が含まれる。この方
法では、アミノ酸のα−アミノ基を、酸または塩基感受性の基で保護する。その
ような保護基は、ペプチド結合の形成条件に対して安定な特性を有するが、伸長
中のペプチド鎖を破壊することなく、且つそのペプチド鎖におけるキラル中心が
いずれもラセミ化を起こすことなく、容易に脱離することができるものである。

【００２５】適当な保護基は、tert−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカル
ボニル（Ｃｂｚ）、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、tert-アミールオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、α,α-ジメチル−３,５− ジメトキシベンジルオキシカルボニル、オルト−ニトロフェニルスルフェニル、
２−シアノ−tert−ブトキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボ
ニルなどである。tert−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）保護基が好ましい。

【００２６】特に好ましい側鎖保護基は、リシンおよびアルギニンには、ニトロ、パラ−ト
ルエンスルホニル、４−メトキシベンゼンスルホニル、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、および
アダマンチル−オキシカルボニルであり；チロシンには、ベンジル、オルト−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル、２,６−ジクロロベンジル、イソプロピル、シクロヘキシル、シクロペンチル、およびアセチルであり；セリンには、ベンジル
およびテトラヒドロピラニルであり；ヒスチジンには、ＣＢｚ、パラ−トルエン
スルホニルおよび２,４−ジニトロフェニルであり；トリプトファンには、ホルミルである。

【００２７】固相法では、適当に保護されたＣ末端のアミノ酸を固体の支持体に結合する。
この方法に有用な適当な固体の支持体は、段階的な保護／脱保護反応の試薬と反
応条件に対して不活性であるとともに、使用する溶媒中で不溶性である材料であ
る。適当な固体の支持体は、P. Rivaille et.al., Helv. Chim. Acta, 54: 2772
(1971)に記載された、クロロメチル−ポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体およびベンズヒドリルアミノ−ポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体であ
る。クロロメチル−ポリスチレン−１％−ジビニルベンゼン共重合体が特に好ま
しい。

【００２８】最初の、保護されたアミノ酸残基の、クロロメチル共重合体へのカップリング
は、そのアミノ酸の、セシウム、テトラメチルアンモニウム、１,５−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−５−エンまたは同様の塩と、ポリマー樹脂との反
応によって行う。この反応は、典型的には、エタノール、アセトニトリル、Ｎ，
Ｎ−ジメチル−ホルムアミドなどの溶媒中で、上昇させた温度、典型的には４０
〜６０℃で、約１２〜約４８時間行う。好ましい反応条件には、約５０℃約２４
時間の、ジメチルホルムアミド中での保護したアミノ酸と樹脂とのカップリング
が含まれる。

【００２９】最初の保護されたアミノ酸を、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（Ｄ
ＣＣ）またはＮ,Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）等のカップリン
グ試薬の存在下、１−ヒドロキシブンゾトリアゾール（ＨＯＢt）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−tris−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフル
オロホスフェート（ＢＯＰ）またはビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル
）ホスフィンクロリド（ＢＯＰＣl）有りでまたはなしでベンズヒドリルアミン共重合体樹脂へ結合させる。反応は、約１０℃〜５０℃の範囲、最も好ましくは
約２５℃の温度で、ジクロロメタンまたはＤＭＦ等の溶媒中、１〜２４時間行う
。

【００３０】連続的な保護されたアミノ酸のカップリングは、手作業で行うか、商業的に入
可能な自動化されたペプチド合成装置で行うことができる。α−Ｎ−保護基の脱
離は、例えば塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸、ジオキサン中の塩化水素、酢
酸中の塩化水素の溶液、または他の強酸溶液、好ましくはジクロロメタン中の５
０％トリフルオロ酢酸の存在下で、室温で行うことができる。

【００３１】保護されたアミノ酸はそれぞれ、好ましくは０.４Ｍ濃度で約３.５モル過剰で
導入し、カップリングをジクロロメタン、ジクロロメタン／ＤＭＦ混合物、ＤＭ
Ｆ等、好ましくはジクロロメタン中、室温にて行う。カップリング試薬は、通常
ジクロロメタン中のＤＣＣであるが、ＤＩＣまたは他のカルボジイミドでもよく
、これらを単独で、またはこれとＨＯＢt、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドまたは他のＮ−ヒドロキシイミドもしくはオキシムと組み合せても良い。あるいは、
保護されたアミノ酸は、カルボキシル基が、パラニトロフェノール、ペンタフル
オロフェノール等による反応により活性なエステルへ変換することにより活性化
されている。

【００３２】さらに、完全長のｈＰＴＨ１−８４および種々のＮ−末端フラグメントは、米
国特許第５,６０５,８１５号（１９９７年２月２５日発行）；米国特許第５,４２０,２４２号（１９９５年５月３０日発行）；ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９６／３６７２１（１９９６年１１月２１日公開）；欧州特許出願公開第０４９９９９
０Ａ２（１９９２年８月２６日発行）；欧州特許出願公開第０４８３５０９
Ａ１（１９９２年５月６日）；J. Paulsen et.al., J. Biotech. 39, 126-131 （1995)；Y. Suzuki et.al., Appl. Environ. Microbiol. 64（2), 526-529 （1
988)；H. Gramm et.al., Bio/Technology 12, 1017-1023 （1994)にしたがって、組換えにより作製することができる。

【００３３】医薬製剤本発明はまた、１またはそれ以上の非毒性の薬学的に許容し得る担体および／
または賦形剤と一緒に本発明の化合物を含有する医薬組成物を提供する。製剤は
、イオン泳動性パッチによる経皮投与用、経口投与用、固体または液体の形態で
、非経口注射用、または坐剤による直腸または膣投与用に特別に製剤化すること
ができる。

【００３４】本発明の医薬組成物を、ヒトまたは他の哺乳類へ、（粉末剤、軟膏、クリーム
、ドロップまたはパッチによる）経口投与、直腸投与、膣内投与、非経口投与、
局所投与、バッカル投与または舌下投与、または経口、経肺、もしくは経鼻スプ
レーとして投与することができる。「非経口投与」なる語は、本明細書では、静
脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、または動脈内の注射または点滴を含む投
与の形態を意味する。

【００３５】非経口投与のための本発明の医薬組成物には、無菌の水性または非水性溶液、
分散液、懸濁液、またはエマルジョン、並びに使用する直前に無菌溶液または懸
濁液に再構成する滅菌粉末が含まれる。適当な無菌の水性および非水性の担体、
希釈剤、溶媒またはビークルの例には、水、生理食塩水、エタノール、多価アル
コール（グリセリン、プロピレングリコール、ポリ（エチレングリコール）のよ
うな）、およびそれらの適当な混合物、植物油（オリーブオイル等）、およびオ
レイン酸エチルのような注射可能な有機エステルが含まれる。例えばレシチン等
のコーティング物質の使用により、分散液および懸濁液の場合は適当な粒径を維
持することにより、および界面活性剤の使用により適当な流動性を維持する。

【００３６】非経口組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤等の添加剤も含
むことができる。微生物の作用の阻止は、抗細菌剤および抗真菌剤、例えばパラ
ベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等の含有により保証される。糖、塩化ナトリウム等の等張剤を含有することも望ましいであろう。注射可能な
製剤の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収を
遅延する試薬の含有により成し得る。

【００３７】いくつかの場合においては、薬物の作用を長引かせるために、経皮または筋肉
内投与後の薬物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、液体の懸濁液または
低水溶性の結晶性もしくは非晶質物質の使用によって、または油性のビークル中
に薬物を溶解または懸濁することによって達成することができる。水溶性の低い
薬物の形態を含有する懸濁液の皮下または筋肉内注射の場合には、薬物の吸収速
度は、その溶解速度に依存する。

【００３８】本発明の化合物の注射可能な「デポット」製剤は、薬物のマトリックスを、生
分解性ポリマー、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、乳酸とグリコー
ル酸の共重合体、ポリ（オルトエステル）、およびポリ（無水物）等の当分野に
おいて記載されている材料のマイクロカプセルに入れて形成することにより製造
する。ポリマーに対する薬物の比率と、使用する特定のポリマーの特性によって
、薬物の放出の速度を制御することができる。

【００３９】注射可能な製剤は、例えば細菌を捕捉するフィルターでろ化するか、または、
混合物の成分を、混合する前に予め滅菌することにより、製造時にまたは（二室
式注射器パッケージの例にあるように）投与の直前に滅菌する。

【００４０】経口投与のための固体の投与形態には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤、お
よび顆粒剤が含まれる。そのような固体の投与形態では、活性成分を少なくとも
１つの不活性な、薬学的に許容し得る担体、例えばクエン酸ナトリウムまたはリ
ン酸二カルシウム、および／または（a）デンプン、ラクトース、グルコース、マンニトールおよび珪酸等の充填剤または増量剤、（b）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリ（ビニルピロリドン）、スクロースおよ
びアラビアゴム等の結合剤、（c）グリセリン等の湿潤剤、（d）寒天、炭酸カル
シウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、珪酸塩およ
び炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（e）パラフィン等の溶解遅延剤、（f）四級アン
モニウム化合物等の吸収促進剤、（g）セチルアルコールおよびグリセリンモノステアリン酸塩等の湿潤剤、（h）カオリンおよびベンとナイト土などの吸湿剤、および（i）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリ（エチレングリコール）、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合
物等の滑沢剤と混合する。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、その投与形態に
は緩衝剤も含むことができる。

【００４１】同様のタイプの固形の組成物は、ラクトース等の賦形剤並びに高分子量ポリ（
エチレングリコール）等を用い、軟質または硬質ゼラチンカプセル内に内容量を
含む。

【００４２】錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤等の固形の投与形態はまた、医
薬製剤の分野でよく知られた腸溶コーティングまたはその他のコーティングのよ
うなコーティングまたはシェルを施して調製することができる。コーティングに
は、不透過剤または消化管の特定の部分で活性成分を放出する試薬、例えば胃で
活性成分を放出させるための酸溶解性コーティング、または腸管で活性成分を放
出させるための塩基溶解性コーティングを含むことができる。

【００４３】活性成分はまた、徐放性コーティング内でマイクロカプセル封入することがで
きる。マイクロカプセルは、カプセル製剤の粒の部分を構成する。

【００４４】本発明の化合物の経口投与のための液体の投与形態には、溶液、エマルジョン
懸濁液、シロップおよびエリキシルが含まれる。活性成分に加え、液体の製剤に
は、当分野において一般的に使用されている不活性な希釈剤、例えば水または他
の薬学的に許容し得る溶媒、溶解剤および乳化剤等例えばエタノール、イソプロ
パノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエー
ト、プロピレングリコール、１,３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油脂（特に、綿実、アメリカホドイモ、コーン、胚芽、オリーブ、トウゴマ
、およびゴマ油）、グリセリン、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリ（エ
チレングリコール）、ソルビトールの脂肪酸エステルおよびそれらの混合物を含
むことができる。

【００４５】不活性な希釈剤以外に、液体の経口製剤はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤
、並びに甘味料、香味料および香料等の添加剤を含むことができる。

【００４６】活性成分のほかに、液体の懸濁剤は、エトキシ化されたイソステアリルアルコ
ール、ポリオオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微晶性
セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト土、寒天、およびトラガカ
ントおよびそれらの混合物等の懸濁剤を含むことができる。

【００４７】直腸または膣内投与のための組成物は、１またはそれ以上の本発明の化合物を
適当な非刺激性の賦形剤、例えばココアバター、ポリエチレングリコール、また
は室温で固体であるが体温では液体であるため直腸腔または膣腔において融解し
て活性成分を放出するいずれかの坐剤用ワックスと混合することにより製造する
。化合物は融解したワックスに溶解し、所望の形に形成し、固めて坐剤の製剤に
仕上げる。

【００４８】本発明の化合物はまた、リポソームの形態で投与することもできる。当分野に
おいて知られているように、リポソームは、通常、リン脂質またはその他の脂質
物質から得られる。リポソーム製剤は、水性媒体に分散した単膜または多重膜の
水和した液晶によって形成される。リポソームを形成することが可能ないずれか
の非毒性の薬学的に許容し得る、代謝可能な液体を使用することができる。リポ
ソーム形態の本発明組成物は、本発明の１またはそれ以上の活性化合物以外に、
安定化剤、賦形剤、保存剤などを含むことができる。好ましい脂質は、リン脂質
およびホスファチジルコリン（レシチン）であり、天然物でも合成物でもよい。

【００４９】リポソームを形成する方法は、例えばPrescott編, Method in Cell Biology,
Volume XIV, Academic Press, New York, N. Y. (1976)（P.33以下参照）に記載
されているように、当分野において知られている。

【００５０】本発明の化合物の局所投与のための投与形態には、粉末剤、スプレー剤、軟膏
、クリーム、および吸入薬が含まれる。活性成分を、無菌条件下で適当な薬学的
に許容し得る担体および保存剤、緩衝剤または必要ならばプロペラントと混合す
る。眼病用製剤、眼用軟膏、および溶液剤もまた本発明の範囲に入るものと企図
する。

【００５１】本発明の化合物の実際の投与レベルは、所望の治療作用を達成するに有効な化
合物の量を投与するように変更する。所定の患者に必要な用量は、その患者の処
置する状態の重篤度、年齢、体重および性別、並びにその患者の健康状態に依存
して変わる。但し、患者を用量滴定すること、即ち所望の治療効果を達成するに
必要な量を下回る既知の用量で投与を始め、所望の効果が達成されるまで用量を
徐々に増加させることは、当業者の範囲内である。

【００５２】一般的に、エストロゲン関連障害の処置について、本発明の化合物を、１日に
約１０μg／kg体重〜約１０ｍg／kg体重の投与レベルで投与する。所望であれば
、日用量を投与目的のために複数の用量に分けてもよい。例えば１日に２回〜４
回分に分ける。

【００５３】投与の態様ＰＴＨは、ＰＴＨ約５μｇ〜約２００μｇの範囲の総日用量で、本発明の方法
に従って式（１）の化合物とともに共投与する。式（１）、好ましくは式（１a ）の化合物の日用量は、１日に約１ｍg〜約１００ｍgの範囲、好ましくは１日に
約３ｍg〜約１０ｍgの範囲である。

【００５４】ＰＴＨは、典型的には非経口的に、最も慣用的には、皮下投与により投与する
。ＰＴＨの別の非経口投与経路には、筋肉内または腹腔内注射が含まれる。筋肉
内投与は、そのタンパク質を投入する、当分野において知られているタイプの「
デポット」製剤の形態でもよく、筋肉組織において生分解されるミクロスフェア
内にカプセル封入される。

【００５５】ＰＴＨと式（１）の化合物の同時的投与に便利な態様は、Pawelkaらの米国特許第５,５８４,８１５号に記載されているタイプの、多重カートリッジ投薬注射
器具に入った２つの化合物の個々の溶液を皮下注射することによるものである。

【００５６】ＰＴＨおよび式（１）の化合物はまた、例えば非経口投与によりまたは頬で溶
解するトローチによる患者へのバッカル投与により、または舌下に置くトローチ
もしくは液状ドロップにより舌下から、併用的に投与することができる。併用的
投与のこれらの例においてそれぞれ、式（１）、好ましくは式（１ａ）の化合物
を分離した投与形態で投与する。

【００５７】逐次投与の好ましい形態には、ＰＴＨと式（１ａ）との組み合せを、同時的ま
たは併用的手段により、患者の骨量および骨密度を正常値の標準偏差１以内に高
めるのに十分な期間投与することを含んでなる。これには、典型的には、６〜２
４ヶ月、通常約１２ヶ月にわたる共投与の期間を必要とする。骨量または骨密度
が正常値の許容し得るこの範囲内にあると測定されたら、両化合物の共投与を停
止し、化合物（１）、好ましくは化合物（１ａ）の「維持管理」レジメによって
患者を維持管理する。もし、その環境によって引き続き骨密度または骨量の損失
が検出される事態がその患者において生じれば、ＰＴＨと式（１）の化合物の共
投与およびその後の式（１）の化合物の単独投与を繰り返す。

【００５８】上記の投与の態様のいずれかにおいて、治療の進み具合は、当分野において知
られている手段によって骨量と骨密度を定期的に調べることにより主治医が容易
に追跡することができ、用量または投与レジメをしかるべく調整することができ
る。

【００５９】骨量および骨密度の一般的な測定方法およびこれらパラメータの標準は、Prim
er on the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism, 第２版, M. J. Favus編, Raven Press, New York の第２６章、C. C. Johnson ら、"Bone Density Measurement and the Management of Osteoporosis,"に記載
されている。

【００６０】生物学的試験一般的方法論薬物投与経口投与は、１ｍL／ｋg体重の２０％ヒドロキシプロピル−β−シクロデキス
トリン水溶液を含むビークル中で、胃管栄養法によりおこなった。化合物（１ａ
）を、１ｍL／ｋg体重の２０％シクロデキストリン水溶液のビークル中で胃管栄
養法により投与した。エストロゲン処置された対照動物に、０.１ｍg／ｋｇ／日
の１７α−エチニルエストラジオールを胃管栄養法により投与した。

【００６１】ＰＴＨ（１−３４）の皮下投与を、酸性化した食塩水ビークル（０.００１Ｎ
ＨＣlおよび生理食塩水中の２％熱不活化ラット血清（Butler Co., Columbus, O
hio, USA））の注射によって行った。

【００６２】組織の採取試験化合物で処置したのち、ラットを麻酔して心臓穿刺に付し、ＣＯ₂吸入により安楽死させた。子宮を切除し、湿重量をMettler天秤により測定し、子宮切除とエストロゲンによる処置の効力を評価した。血液試料を４℃にて２時間凝固
させた後、２０００gで１０分間遠心した。血清を集め、分析前に−７０℃で保存した。血清コレステロールを高性能比色分析（Boehringer Mannheim Biochemi
cals, Indianapolis, IN）を用いて分析した。脛骨および大腿骨を摘出し、軟組
織を洗い、５０％エタノール／食塩水中で固定し、４℃で保存した。椎骨Ｌ１−
６を摘出し、ＱＣＴ、組織形態計測、および生体力学により解析した。

【００６３】摘出したラット骨のＸ線骨密度測定 Dichte ソフトウェアバージョン５.２（Norland/Stratec, Ft. Atkinson, WI ）を読みこんだ９６０ＡｐＱＣＴを用い、Sato et.al., 1995, JPET 272: 1252-
1259; Sato 1998, Bone 17: 157S-162Sに記載された方法を用いて近位脛骨の骨幹端をベースラインから縦方向にスキャンした。容積分析による骨ミネラル密度
測定（BMD,ｍg／kg）、断面積（X−Area）、ボクセル数、およびミネラル含量（
ＢＭＣ、ｍg）を骨幹端の断面全体について定量した。摘出した骨の部位を、マイクロＣＴ（Stratec）を用いて高分解能で解析した。具体的には、遠位大腿骨（顆状突起の下、Sato et.al., 1995参照）およびＬ−３推骨（中部の断面、Hel
terbrand et.al., 1997, Bone 21:401-409）を、それぞれ５０×５０×１０００
μｍおよび７０×７０×１０００μｍのボクセル寸法を用いて解析した。

【００６４】組織形態計測組織形態計測のために、低速ダイヤモンド鋸（Buehler Ltd., Lake Bluff, IL
）を用いてＬ−１推骨を削り、７０％エタノール中で固定した。標本をVillanue
va骨色素骨染料（Polysciences Inc., Warrington, PA）中で４日間染色し、脱色し、特級アルコール中で脱水し、アセトン中で脱脂した。次いで、Ｌ−１推骨
にメチルメタクリレートを浸透させ（Schenk et.al., 1984に記載のとおり）、７５ｍL：１９ｍL：２.５gのメチルメタクリレート：ジブチルフタレート：ベン
ゾイルペルオキシド（Kodak, Rochester, NY）の混合物に包埋し、室温で重合化
した。縦方向の切片（４および８μｍ）を、Reichert-Jung 2065 マイクロト− ム（Magee Scientific Inc., Dexter, MI）で切り出した。４μｍの切片を６％硝酸銀（Von Kossaステイン）で染色し、カバーガラスで覆った。厚さ８μｍの切片は、動的な測定のために染色せずに据付けた。切片を０.５％ゼラチンを塗布したスライドガラスに接着し、一晩乾燥させ、Eukittを用いてカバーガラスで
覆った。

【００６５】組織形態計測は、Optiphot-２蛍光顕微鏡（Nikon, Melville, NY）および Pow
erPC7100/66（Apple Computer, Cupertino, CA）と組み合せたセミオートマティ
ックデジタル化システム（SummaSketch III, Summagraphics Co., Seymour, CT;
KSS Image Analysis, KSS Scientific Consultants, Magna UT）を用い、ＮＩＨ Imege １.５９（NIH, Bethesda, MD）の画像取り込み機能を使用して行った。Ｌ−１については、皮質性外殻内の全骨髄領域を測定して小柱骨パラメータを
求めた。具体的には、測定値は、以前に記載されたように、海綿骨質容積（ＢＶ
／ＴＶ、％）、小柱の厚さ（Ｔｂ、Ｔｈ、μｍ）、数（Ｔｂ、Ｎ、＃／ｍｍ）お
よび分離（Ｔｂ、Ｓｐ、μｍ）、ミネラル化表面、ミネラル吸収速度および骨形
成速度からなる（Frost 1983; Jee et.al., 1985; Parfitt et.al., 1987）。

【００６６】生体力学的解析大腿骨頚部、中部骨幹およびＬ−６推骨について骨強度を測定した。大腿骨を
試験前に解凍し、３点曲げ試験を用いて無損傷の大腿骨の骨強度を測定した。負
荷を、１５ｍｍ離れた２つの支持点の中間で与えた。大腿骨は、負荷点が遠位の
膝窩から７.５ｍｍの位置になるように置き、曲げを中央−側方軸に生じさせた。標本は３７℃の食塩水浴中で試験した。各標本は、試験の３分前に食塩水に浸
し、温度を平衡させた。サーボ油圧式材料試験装置（MTS Corp., Minneapolis,
MN）とｘ−ｙレコーダー（Hewlett Packard 7090A, Palo Alto, CA）を使用し、
クロスヘッドスピード１ｍｍ／秒で負荷−変位曲線を記録した。測定項目は、以
下のとおりである：横断面慣性モーメント（Ｉ）、皮質厚さ（ｔ）、終極負荷（
Ｆ_u）、極限応力（σ_u）、ヤング率（Ｅ）、および靭性（ｕ）。これらの値を以
前に記載されたとおりに計算した（Turner and Burr 1993; Turner et.al. 1996
）。

【００６７】大腿骨頚部強度は、大腿骨の真中付近をチャックに垂直方向に設置し、大腿骨
頭部に１mm／秒の速度で下向きの力を、頚部が破壊するまで与えることにより測
定した。終極負荷を、大腿骨頚部が耐えた最大の力として計算した。試験はすべ
て、ＭＴＳシステムを用いて室温で行った。

【００６８】Ｌ−６推骨の骨強度は、ダイヤモンド薄片鋸（Buehler Isomet, Evanston, IL
）を使用して、背面の突起を取り除き、椎体の端をまっすぐにしてから測定した
。各推骨の極限応力（σ_u）、ヤング率（Ｅ）、および靭性（ｕ）をＭＴＳ装置を用い、５０Ｎ／秒の負荷速度で圧縮して測定した。ピボット圧盤により圧縮負
荷をかけ、推体の面の平行でないアラインメントを矯正した（Turner and Burr,
1993）。

【００６９】標本は、３７℃の食塩水溶液中で試験した。極限応力は、総断面積πＡＢ／４
（ＡおよびＢは推骨の前後および中央部横方向の幅である）で割った終極負荷と
して計算した。ヤング率は、剛性に４Ｔ／πＡＢを掛けることにより計算した（
Ｔは、標本の厚さである）。靭性は、負荷−変位曲線の下の面積をπＡＢＴ／４
で割ることにより計算した。

【００７０】統計的方法データは、平均の平均±標準誤差で示す。精度は、特定のラットについての標
準偏差／平均で定義した分散率（変動性）を平均することにより計算した。群の
差異は、主としてFisherの保護された最小有意差（ＰＬＳＤ）を用いて試験した
一対ごとの差異を分散試験（ＡＮＯＶＡ）（全ＡＮＯＶＡの有意レベルはｐ＜０
.０５である）によって評価した。

【００７１】試験最初の試験において、６ヶ月齢の未受精Sprague-Dawley雌性ラット（体重約３
００g）をそれぞれ、１２時間照明／１２時間消灯のサイクルで２２℃にて、自由飲食で飼育した（０.５％カルシウムおよび０.４％リンを含むＴＤ８９２２２
食餌、Teklad, Medison, WI, USA）。Ｓｈａｍ処置対照ラット以外は、試験動物
に対し両方の卵巣除去を行った。Ｓｈａｍ処置ラットの場合は、外科的な卵巣除
去術を後に行ったが卵巣はそそままに残し、外科的外傷による可能性のある影響
を評価するための対照とした。

【００７２】卵巣除去した（ＯＶＸ）ラットをランダム化し、３ヵ月の処置を開始する前の
１ヶ月間、骨を損失させた。

【００７３】ラット群は、Ｓｈａｍ処置ラット（ＳＨＡＭ、ｎ＝８）；両側の卵巣を切除し
たラット（ＯＶＸ、ｎ＝７）；１７−αエチニルエストラジオール（Sigma Fine
Chemicals, St. Louis, Missouri, USA）を０.１ｍg／ｋg／日のレベルで経口投与することにより処置した両側の卵巣を除去したラット（ｎ＝７）；および０
.００３、０.０３、０.３または３ｍg／ｋg／日のレベルで１ａによりそれぞれ経口投与により処置した両側の卵巣を切除したラット（各群ｎ＝８）であった。

【００７４】ＳＨＡＭおよびＯＶＸ対照ラットに、ビークルまたは１ｍL／ｋg体重の２０％
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（Aldrich Chemical Co., Milwau
kee, Wisconsin, USA）を胃管栄養法により経口投与した。エストロゲン処置した対照動物に０.１ｍg／kg／日の１７α−エチニルエストラジオールを胃管栄養
法で投与した。種々の用量の１ａで処置したラットは、適当な用量を胃管栄養法
により１ｍL／kg体重の２０％シクロデキストリンで投与した。

【００７５】もうひとつの試験では、未受精のSprague-Dawleyラットの両側の卵巣を切除し
た（ｓｈａｍ処置群以外）、卵巣切除したラットをランダム化にし、前記と同じ
ようにして処置の前の１ヶ月間骨を損失させた。各群それぞれ７〜８匹のラット
を含み、ｓｈａｍ処置ラット（ＳＨＡＭ）；両側の卵巣を切除したラット（ＯＶ
Ｘ）；０.０１、０.３または１ｍg／ｋｇ／日の化合物（１ａ）でそれぞれ３ヵ月間処置した両側の卵巣を切除したラット；１０μｇ／ｋｇ／日の用量のＰＴＨ
（１−３４）で３ヵ月間皮下処置した両側の卵巣を切除したラット；ＰＴＨ（１
−３４）を１０μｇ／ｋｇ／日の用量で皮下的におよび化合物（１ａ）を０.３ｍg／ｋｇ／日の用量で経口的に３ヵ月間投与して処置した、両側の卵巣を切除したラット；ＰＴＨ（１−３４）を１０μｇ／ｋｇ／日の用量で４５日間皮下処
置したのちビークルを４５日間胃管投与した、両側の卵巣を切除したラット；Ｐ
ＴＨ（１−３４）を１０μｇ／ｋｇ／日の用量で４５日間皮下処置したのち、化
合物（１ａ）のみを０.３ｍg／ｋｇ／日の用量で経口投与した、両側の卵巣を切
除したラット；０.１ｍg／ｋｇ／日の用量の１７α−エチニルエストラジオール
を経口投与で処置した、両側の卵巣を切除したラット。

【００７６】結果体重および子宮重量に対する化合物（１ａ）の効果最初の試験では、卵巣切除は、Ｓｈａｍを有意に上回る程度まで体重を増加す
ることが確認された。０.０３〜３ｍg／ｋｇの化合物（１ａ）での処置は、ＯＶ
Ｘとの比較では体重に対する影響はないが、Ｓｈａｍよりも有意に大きかった。
対照的に、ＥＥ２は、ＯＶＸよりも低くＳｈａｍのレベルにまで体重を減少させ
た。単独でまたは化合物（１ａ）と組み合せた１０μｇ／ｋｇのＰＴＨ（１−３
４）での処置も、ＯＶＸと比較してほとんど影響がなく、Ｓｈａｍよりも大きか
った。ＰＴＨ（１−３４）、その後化合物（１ａ）の逐次的な組み合せについて
は、体重はＯＶＸよりも有意に小さかったが、Ｓｈａｍよりも大きかった。

【００７７】卵巣切除によって子宮湿重量がＳｈａｍと比較して減少することが確認された
。０.００３〜３ｍg／ｋｇでの化合物（１ａ）のラットの処置は、子宮の重量に
対して影響はなかったが、０.１ｍg／ｋｇの１７α−エチニルエストラジオール
は子宮重量をＯＶＸを上回りＳｈａｍのレベルまで増加させた。

【００７８】骨障害性卵巣切除ラットにおける化合物（１ａ）の効果の縦方向の解析第２実験では、ラットの近位脛骨骨幹端をｐＱＣＴによりベースラインから縦
にスキャンした。図１に示すように、卵巣切除により、術後１ヶ月までに容積分
析によるＢＭＤがＳｈａｍと比較してそれぞれ２０および２５％有意に減少した
（ｐ＜０.０００１、Fisher's PLSD）（図１参照）。

【００７９】示すように、処置は卵巣切除から１ヶ月後に開始し、その後３ヵ月継続した。
具体的には、化合物（１ａ）単独（黒の三角）、ＰＴＨ（１−３４）単独（白の
三角）、組合せ（黒の四角）、または逐次（白の三角）の投与を、ＯＶＸ（白の
丸）、Ｓｈａｍ（黒の丸）、およびエストロゲン（ＥＥ２、白のひし形）の対照
と比較した。

【００８０】化合物（１ａ）の３種類の用量（０.０１、０.３、１.０ｍg／ｋｇ）はすべて
、１７α−エチニルエストラジオール（０.１ｍg／ｋｇ、ＥＥ２）と同様、さら
なる骨損失を阻止し、終了時ではＢＭＤはＯＶＸよりも有意に大きかった。これ
らのデータは、１ａが、エストロゲンと同様、卵巣切除によって誘発されるさら
なる骨の減少を阻止することが可能であることを示している。

【００８１】ＰＴＨ（１−３４）を４５日間投与したラットは、ＢＭＤがＳｈａｍのレベル
まで再び増加した（図１、白の四角）。しかしながら、ＰＴＨ（１−３４）を中
止した場合、ＢＭＤはＳｈａｍを有意に下回るまで減少した。ラットにＰＴＨ（
１−３４）を４５日間投与した後、試験期間の残りを化合物（１ａ）に切り替え
た逐次的試験は、化合物（１ａ）がＰＴＨ（１−３４）の中止の後のＢＭＤの損
失を阻止したことを示した。即ち、終了時点でＢＭＤとＳｈａｍレベルとの相違
はなかった（図１、黒のひし形）。

【００８２】ＰＴＨ（１−３４）および化合物（１ａ）（１０μｇ／ｋｇ）で９０日間継続
的に処置した他のラットでは、ＢＭＤが、ＯＶＸ、Ｓｈａｍおよびベースライン
のレベルを有意に上回り、直線的に増加した（図１、黒の四角）。化合物（１ａ
）（０.３ｍg／ｋｇ）とＰＴＨ（１−３４）の組合せは、ＢＭＤを他のいずれの
群よりも有意に高いレベルまで増加させた（ｐ＜０.０００１７ Fisher's PLSD ）。この組合せは、ＰＴＨ（１−３４）を含めて、いずれの薬剤単独と比較して
も、有意により迅速に且つより高いレベルまでＢＭＤを増加させた。

【００８３】大腿骨および推骨のマイクロＣＴ解析骨障害性ラットにおける遠位大腿骨骨幹端に対するＬＹ３５３３８１.ＨＣlの
効果を、マイクロＣＴにより、解像度５０×５０μｍピクセルで調べた。マイク
ロＣＴにより、長期間インビボで得られた観察結果がおおむね確認された。特に
、０.０１〜１ｍg／ｋｇの化合物（１ａ）は、０.１ｍg／ｋｇの１７α−エチニ
ルエストラジオールと同じように、さらなる骨損失を阻止した。ラットにＰＴＨ
（１−３４）を４５日間投与した後、化合物（１ａ）に切り替えた逐次的試験で
は、、ＰＴＨ／０.３が、ＰＴＨ（１−３４）の中止後（ＰＴＨ／０）のＢＭＤのさらなる損失を阻止した。ＰＴＨ（１−３４）で継続的に処置した他のラット
では、ＯＶＸ、Ｓｈａｍおよびベースラインレベルを有意に上回るレベルまで増
加したＢＭＤが観察された。化合物（１ａ）（０.３ｍg／ｋｇ）とＰＴＨ（１−
３４）の組合せは、ＰＴＨ（１−３４）を含む他のいずれの群と比較しても有意
に高いレベルまでＢＭＤを増加させた（ｐ＜０.０００１、Fisher's PLSD（図２
））。

【００８４】Ｌ−３推骨の、解像度７０×７０μｍピクセルでのマイクロＣＴ解析は、ＯＶ
Ｘと比較して、０.０１〜１ｍg／ｋｇでの化合物（１ａ）および０.１ｍg／ｋｇ
の１７α−エチニルエストラジオールの脊髄ＢＭＤまたはＢＭＣに対する限界的
効果を示した。しかしながら、ＰＴＨ（１−３４）の継続的投与により、ＢＭＤ
がＯＶＸを有意に上回るまで改善され、一方、化合物（１ａ）（０.３ｍg／ｋｇ
）とＰＴＨ（１−３４）の組合せは、ＢＭＤとＢＭＣをＯＶＸおよびＳｈａｍの
両方を有意に上回るまで増加させた。これらのデータは、化合物（１ａ）／ＰＴ
Ｈ（１−３４）の組合せが、いずれの処置を単独で行うよりも、体肢および中軸
骨格において骨を増加させたことを示している（図３）。

【００８５】ＬＹ３５３３８１.ＨＣl効果の静的および動的組織形態計測第２の試験については、Ｌ−１推骨に関する、より解像度の高い化合物（１ａ
）の効果の解析を組織形態計測により行った。卵巣切除により、小柱骨容積（Ｂ
Ｖ／ＴＶ）、小柱の厚さ、および小柱の数が、Ｓｈａｍとの比較において減少し
た。化合物（１ａ）およびＥＥ２は、ＢＶ／ＴＶ、小柱の厚さ、または小柱の数
に対して、ＯＶＸとの相違はなくほとんど効果がなかった。しかしながら、ＰＴ
Ｈ（１−３４）は、ＢＶ／ＴＶおよび小柱の厚さをＯＶＸを上回るほど改善し、
化合物（１ａ）（０.３ｍg／ｋｇ）＋ＰＴＨ（１−３４）は、ＢＶ／ＴＶを有意
に増加させ、ＳｈａｍおよびＰＴＨ（１−３４）単独を上回った。

【００８６】ＰＴＨ（１−３４）の中止により、ＢＶ／ＴＶおよび小柱の厚さがＳｈａｍを
下回るまで減少したが、４５日目で化合物（１ａ）に切り替えると、この損失は
阻止された。

【００８７】

【表１】

【００８８】動的パラメーターの試験により、ミネラル化表面（ＭＳ／ＢＳ）と骨形成速度（
ＢＦＲ／ＢＳ）の卵巣切除刺激が確認された化合物（１ａ）は、ＭＳ／ＢＳおよびＢＦＲを用量依存的に、Ｓｈａｍおよび
ＥＥ２レベルまで減少させた。しかしながら，化合物（１ａ）０.０１〜１ｍg／
ｋｇについてのＭＡＲは、ＯＶＸとの差異はなく、一方、ＥＥ２はＭＡＲを減少
させ、ＯＶＸ、Ｓｈａｍ、および化合物（１ａ）（０.０１〜１ｍg／ｋｇ）を下
回った。ＰＴＨ（１−３４）は、ＭＳ／ＢＳ、ＭＡＲ、ＢＦＲ／ＢＳおよびＢＦ
Ｒ／ＴＶを増加させ、ＳｈａｍおよびＯＶＸを有意に上回った。ＰＴＨ（１−３
４）と化合物（１ａ）の組み合せは、ＭＳ／ＢＳ、ＢＦＲ／ＢＳ、およびＢＦＲ
／ＴＶを増加させ、ＰＴＨ（１−３４）単独を上回った。４５日目でのＰＴＨ（
１−３４）の中止（ＰＴＨ／ｖ）は、ＭＳ／ＢＳ、ＢＦＲ／ＢＳおよびＢＦＲ／
ＴＶをＯＶＸレベルまで低下させた。４５日目に化合物（１ａ）に切り替えると
（ＰＴＨ／０.３）、ＭＡＲ、ＢＦＲ／ＢＳおよびＢＦＲ／ＴＶがＰＴＨ／ｖ群のレベルまで減少した。

【００８９】これらのデータは、化合物（１ａ）が骨回転率をＥＥ２と同様に減少させるが
、骨形成（ＢＡＲ）をＥＥ２よりも低い程度に抑制することを示している。さら
に、ＰＴＨ（１−３４）と化合物（１ａ）とを逐次的に投与した群は、単独での
いずれの処置と比較しても、骨形成とミネラル化の活性が高かった。

【００９０】骨質の生体力学的解析中部骨幹の３点曲げ解析により大腿骨骨幹を調べた。化合物（１ａ）は、破壊
するまでの負荷（Ｆｕ）および靭性を、ＯＶＸを上回る程度に用量依存的に改善
したが、１ｍg／ｋｇでは、０.１ｍg／ｋｇのＥＥ２と同様、Ｓｈａｍとの差異はなかった。４５日間および９０日間のＰＴＨ（１−３４）処置は、Ｆｕを改善
し、ＯＶＸを上回ったが、化合物（１ａ）／ＰＴＨ（１−３４）の組合せのみが
、Ｓｈａｍを上回る程度にＦｕを有意に増大させた。群の間でヤング率の差異は
観察されなかった。

【００９１】化合物（１ａ）およびＥＥ２処置した動物についての皮質の厚さの測定値は、
両者とも厚さがＳｈａｍとＯＶＸの間にあった。興味深いことに、９０日間のＰ
ＴＨ処置は、皮質の厚さをＯＶＸを上回る程度に増加させたが、化合物（１ａ）
／ＰＴＨ（１−３４）の組合せだけは、Ｓｈａｍを上回る程度に皮質の厚さを増
加させた。４５日後のＰＴＨ（１−３４）の中止により、皮質の厚さが減少して
Ｓｈａｍを下回ったが、処置を化合物（１ａ）に切り替えるとこの減少は阻止さ
れた。

【００９２】

【表２】

【００９３】大腿骨頚部せん断および圧縮試験により、近位大腿骨とＬ−６推骨の質をそれ
ぞれ調べた。ＯＶＸおよびＳｈａｍの両者よりも高かったＰＴＨ（１−３４）単
独およびこれと化合物（１ａ）の組み合せを除いて、大腿骨頚部に与えた終極負
荷は群の間で差異がなかった。ＯＶＸ推骨はＳｈａｍ（Ｓｕ）と比較して有意に
弱かった。化合物（１ａ）は、推骨の強度（Ｓｕ）および靭性を、ＯＶＸを上回
る程度まで用量依存的に改善し、ＥＥ２またはＳｈａｍとの差異はなかった。９
０日間のＰＴＨ処置は、単独または化合物（１ａ）との組合せのいずれも、Ｓｕ
および靭性をＯＶＸおよびＳｈａｍのレベルを超える程度まで増大させた。４５
日後のＰＴＨ（１−３４）の中止により、ＳｕはＳｈａｍを下回る程度に減少し
たが、処置を化合物（１ａ）に切り替えることによりこの減少は阻止された。

【００９４】

【表３】

【００９５】これらのデータは、化合物（１ａ）が骨の損失を阻止することを示しており、
さらに、化合物（１ａ）とＰＴＨ（１−３４）の組合せおよび逐次的使用の、皮
質および小柱骨の部位に対する有用性を示している。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】対照実験との比較において、卵巣切除ラットモデルの近位脛骨に
対する本発明の方法による処置の効果を示すグラフである。

【図２】対照実験との比較において、骨減少症ラットの遠位大腿骨骨幹端
に対する本発明の方法による処置の効果を示す一連のグラフである。

【図３】対照実験との比較において、骨減少症ラットのＬ−３推骨に対す
る本発明の方法による処置の効果を示す一連のグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 1/04 Ｃ０７Ｋ 1/36 1/36 14/635 14/635 Ｃ０７Ｄ 333/64 Ｃ１２Ｎ 15/09 Ａ６１Ｋ 31:4535） // Ｃ０７Ｄ 333/64 37/24 (Ａ６１Ｋ 38/22 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 31:4535）Ａ６１Ｋ 31:4535） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷＦターム(参考） 4B024 AA01 BA01 GA11 4C084 AA02 BA19 BA20 BA23 CA53 CA59 DB32 MA02 MA52 MA56 MA60 MA63 MA66 NA05 ZA972 ZC752 4C086 AA01 AA02 BC21 GA04 GA12 MA02 MA04 NA05 ZA97 ZC75 4H045 AA30 BA18 BA19 BA21 CA40 DA30 EA20 FA33 FA74 HA03 HA04

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】治療上有効量の、上皮小体ホルモンおよび式（１）【化１】［式中、Ｒ¹およびＲ²は独立に、水素および炭素原子１〜６のアルキルからなる
群から選択される］で示される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を患者へ共投与することを含
む、そのような処置を必要とする患者において骨を構築する方法。
【請求項２】式中、Ｒ¹およびＲ²が独立に、水素およびメチルから選択さ
れる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】式中、Ｒ¹およびＲ²が共に水素である、請求項１に記載の方
法。
【請求項４】式中、Ｒ¹が水素であり、Ｒ²がメチルである、請求項２に記
載の方法。
【請求項５】前記上皮小体ホルモンがヒト上皮小体ホルモン（１−８４）
（配列番号１）である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】前記上皮小体ホルモンがヒト上皮小体ホルモン（ｈＰＴＨ１
−３１）（配列番号２）である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】前記上皮小体ホルモンがヒト上皮小体ホルモン（ｈＰＴＨ１
−３４）（配列番号３）である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】前記上皮小体ホルモンがヒト上皮小体ホルモン（ｈＰＴＨ１
−３８）（配列番号４）である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】前記上皮小体ホルモンがヒト上皮小体ホルモン（ＰＴＨｒＰ
１−３４）（配列番号５）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】前記上皮小体ホルモンが、［Ｇlu²²、Ｌeu²³、Ｇlu²⁵、Ｌ
ys²⁶、Ｌeu²⁸、Ｇlu²⁹、Ｌys³⁰、Ｌeu³¹、ホモ−Ｓer³⁴（ラクタム）］ＰＴＨｒ
Ｐ（配列番号６）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】前記上皮小体ホルモンが、［Ａla²¹、Ｇlu²²、Ｌeu²³、Ｇ
lu²⁵、Ｌys²⁶、Ｌeu²⁸、Ｇlu²⁹、Ｌys³⁰、Ｌeu³¹］ＰＴＨｒＰ（配列番号７）で
ある、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】前記上皮小体ホルモンが、［Ｇlu²²、Ｌeu²³、Ｇlu²⁵、Ｌ
ys²⁶、Ｌeu²⁸、Ｇlu²⁹、Ｌys³⁰、Ｈis³¹、Ｔhr³²、Ａla³⁴、デス−Ａla³⁴］ＰＴ
ＨｒＰ（配列番号８）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】前記上皮小体ホルモンが、［Ｌeu²⁷ シクロ（Ｇlu²²−Ｌy
s²⁶）］ｈＰＴＨ（１−３４）（配列番号９）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】前記上皮小体ホルモンが、［Ｌeu²⁷ シクロ（Ｌys²⁶−Ａs
p³⁰）］ｈＰＴＨ（１−３１）（配列番号１０）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】前記上皮小体ホルモンが、［Ｌeu⁸、Ａsp¹⁰、Ｌys¹¹、Ａl
a¹⁶、Ｇln¹⁸、Ｔhr³³、Ａla³⁴］ｈＰＴＨ（１−３４）（配列番号１１）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】前記共投与が同時的である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】前記共投与が併用的である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】前記共投与が逐次的である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】治療上有効量の、上皮小体ホルモンおよび式（１ａ）【化２】で示される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を、その患者における骨量を
正常値の標準偏差１以内まで増加させるのに十分な期間患者へ共投与し、次いで
上皮小体ホルモンの投与を中止することを含む、そのような処置を必要とする患
者において骨を構築する方法。
【請求項２０】前記上皮小体ホルモンがヒト上皮小体ホルモン（ｈＰＴＨ
１−３４）（配列番号３）である、請求項２０に記載の方法。