JP2001518604A - 表層に標的分子を付加するための試薬及び方法 - Google Patents
表層に標的分子を付加するための試薬及び方法Info
- Publication number
- JP2001518604A JP2001518604A JP2000513975A JP2000513975A JP2001518604A JP 2001518604 A JP2001518604 A JP 2001518604A JP 2000513975 A JP2000513975 A JP 2000513975A JP 2000513975 A JP2000513975 A JP 2000513975A JP 2001518604 A JP2001518604 A JP 2001518604A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- photoreactive
- reagent composition
- groups
- surface layer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y30/00—Nanotechnology for materials or surface science, e.g. nanocomposites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
- C07C45/61—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups
- C07C45/63—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reactions not involving the formation of >C = O groups by introduction of halogen; by substitution of halogen atoms by other halogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
- C07C235/70—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
- C07C235/84—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
- C07C323/39—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton at least one of the nitrogen atoms being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
- C07C323/40—Y being a hydrogen or a carbon atom
- C07C323/42—Y being a carbon atom of a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00277—Apparatus
- B01J2219/00279—Features relating to reactor vessels
- B01J2219/00306—Reactor vessels in a multiple arrangement
- B01J2219/00313—Reactor vessels in a multiple arrangement the reactor vessels being formed by arrays of wells in blocks
- B01J2219/00315—Microtiter plates
- B01J2219/00317—Microwell devices, i.e. having large numbers of wells
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
- B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
- B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
- B01J2219/0061—The surface being organic
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
- B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
- B01J2219/00614—Delimitation of the attachment areas
- B01J2219/00621—Delimitation of the attachment areas by physical means, e.g. trenches, raised areas
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
- B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
- B01J2219/00623—Immobilisation or binding
- B01J2219/00626—Covalent
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
- B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
- B01J2219/00632—Introduction of reactive groups to the surface
- B01J2219/00637—Introduction of reactive groups to the surface by coating it with another layer
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
- B01J2219/00659—Two-dimensional arrays
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00709—Type of synthesis
- B01J2219/00711—Light-directed synthesis
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00709—Type of synthesis
- B01J2219/00716—Heat activated synthesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/11—Compounds covalently bound to a solid support
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B60/00—Apparatus specially adapted for use in combinatorial chemistry or with libraries
- C40B60/14—Apparatus specially adapted for use in combinatorial chemistry or with libraries for creating libraries
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/905—Photochemical activation of reactions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/145555—Hetero-N
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/17—Nitrogen containing
- Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
- Y10T436/174614—Tertiary amine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/18—Sulfur containing
- Y10T436/182—Organic or sulfhydryl containing [e.g., mercaptan, hydrogen, sulfide, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/20—Oxygen containing
- Y10T436/200833—Carbonyl, ether, aldehyde or ketone containing
Abstract
(57)【要約】
基体の表層上に標的分子、例えば核酸を共有付加するための方法及び試薬組成物。この試薬組成物は標的分子を吸引することのできる基、及び一旦吸引されたらこの標的分子を共有結合させることのできる基を含む。任意的に、この組成物はそれを表層に付加するのに利用するための光反応基を含んでよい。
Description
【０００１】 技術分野 本発明は標的分子、例えばオリゴヌクレオチド（オリゴ）を表層に付加させる
ための方法、及びかかる方法において利用するための組成物に関する。別の観点
において、本発明は得られるコーティングされた表層自体に関連する。更なる別
の観点において、本発明は分子を表層に付加させるための光化学及び熱化学手段
の利用に関連する。
ための方法、及びかかる方法において利用するための組成物に関する。別の観点
において、本発明は得られるコーティングされた表層自体に関連する。更なる別
の観点において、本発明は分子を表層に付加させるための光化学及び熱化学手段
の利用に関連する。
【０００２】 発明の背景 支持体の表層上へのデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の固定化はＤＮＡを基礎とす
るアッセイ系の開発、並びにＤＮＡ分析のためのマイクロ集成アレーの開発等の
その他の目的において重要な観点となってきている。例えば、「The Developmen
t of Microfabricated Arrays of DNA Sequencing and Analysis」O'Donnell-Ma
loney ら、TIBTECH 14 : 401-407 (1996) を参照のこと。一般に、かかる手順は
マイクロウェルプレート、チューブ、ビーズ、顕微鏡スライド、シリコンウェー
ハー又は膜の表層上で実施する。特に、一定のアプローチが開発され、合成オリ
ゴの表層への終点付着の可能性を実現又は向上させている。終点付着（即ち、一
方又は他方の末端ヌクレオチドを介する核酸配列の付加による）が所望され、な
ぜなら配列全体が別の核酸配列とのハイブリダイゼーションのために有効となる
からである。これはストリンジェントハイブリダイゼーション条件下での一塩基
対変化の検出のために極めて有利である。
るアッセイ系の開発、並びにＤＮＡ分析のためのマイクロ集成アレーの開発等の
その他の目的において重要な観点となってきている。例えば、「The Developmen
t of Microfabricated Arrays of DNA Sequencing and Analysis」O'Donnell-Ma
loney ら、TIBTECH 14 : 401-407 (1996) を参照のこと。一般に、かかる手順は
マイクロウェルプレート、チューブ、ビーズ、顕微鏡スライド、シリコンウェー
ハー又は膜の表層上で実施する。特に、一定のアプローチが開発され、合成オリ
ゴの表層への終点付着の可能性を実現又は向上させている。終点付着（即ち、一
方又は他方の末端ヌクレオチドを介する核酸配列の付加による）が所望され、な
ぜなら配列全体が別の核酸配列とのハイブリダイゼーションのために有効となる
からである。これはストリンジェントハイブリダイゼーション条件下での一塩基
対変化の検出のために極めて有利である。
【０００３】 ハイブリダイゼーションは固相支持体上に固定化されたプローブに対する塩基
対形成により核酸を測定するための最も日常的に利用されている方法である。増
幅技術、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ
）と組合せると、ハイブリダイゼーションアッセイは診断及び研究のための強力
な手段となる。特にマイクロウェルプレートは比較的大量のサンプルをアッセイ
するために簡便且つ有用である。核酸プローブをマイクロウェルプレートに固定
するためにいくつかの方法が利用されている。そのいくつかは未改質又は改質オ
リゴのポリスチレンプレートへの吸着を包含する。その他は共有固定化を包含す
る。様々な方法がハイブリダイゼーションアッセイの感度を高めるためにも利用
されている。ポリマー捕獲及び検出プローブが合成され、そして１０7 ＤＮＡ分
子／mlまでの感度を得るのに利用されている。別の方法はハイブリダイゼーショ
ンアッセイの感度を高めるために枝分れオリゴを利用する。更なる別の方法はマ
ルチステップ抗体増強方法を利用する。その他のタイプの核酸プローブ、例えば
リボ核酸（ＲＮＡ）、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びペプチド核酸（ＰＮＡ）も
診断用途におけるＰＣＲ産物のハイブリダイゼーションのためにマイクロウェル
に固定化されている。更に、ＰＣＲプライマーが固相ＰＣＲのためにマイクロウ
ェルに固定化されている。
対形成により核酸を測定するための最も日常的に利用されている方法である。増
幅技術、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ
）と組合せると、ハイブリダイゼーションアッセイは診断及び研究のための強力
な手段となる。特にマイクロウェルプレートは比較的大量のサンプルをアッセイ
するために簡便且つ有用である。核酸プローブをマイクロウェルプレートに固定
するためにいくつかの方法が利用されている。そのいくつかは未改質又は改質オ
リゴのポリスチレンプレートへの吸着を包含する。その他は共有固定化を包含す
る。様々な方法がハイブリダイゼーションアッセイの感度を高めるためにも利用
されている。ポリマー捕獲及び検出プローブが合成され、そして１０7 ＤＮＡ分
子／mlまでの感度を得るのに利用されている。別の方法はハイブリダイゼーショ
ンアッセイの感度を高めるために枝分れオリゴを利用する。更なる別の方法はマ
ルチステップ抗体増強方法を利用する。その他のタイプの核酸プローブ、例えば
リボ核酸（ＲＮＡ）、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びペプチド核酸（ＰＮＡ）も
診断用途におけるＰＣＲ産物のハイブリダイゼーションのためにマイクロウェル
に固定化されている。更に、ＰＣＲプライマーが固相ＰＣＲのためにマイクロウ
ェルに固定化されている。
【０００４】 今日まで、商業的製品に至っているＤＮＡを固定化するアプローチはごくわず
かしかない。かかる製品の一つは「ＮｕｃｌｅｏＬｉｎｋ（商標）」として知ら
れ、そしてNalge Nunc Internationalから入手できる（例えば、Nunc Tech Note
Vol. 3, No. 17 参照のこと) 。この製品において、ＤＮＡはカルボジイミドと
反応させて５′リン酸基を活性化させ、次いでそれを表層上の官能基と反応させ
ている。このアプローチの欠点はそれがカルボジイミドの添加という追加の工程
、並びにＤＮＡの固定化のための５時間の反応を要し、そしてそれが単一タイプ
の基体材料に制約される点にある。
かしかない。かかる製品の一つは「ＮｕｃｌｅｏＬｉｎｋ（商標）」として知ら
れ、そしてNalge Nunc Internationalから入手できる（例えば、Nunc Tech Note
Vol. 3, No. 17 参照のこと) 。この製品において、ＤＮＡはカルボジイミドと
反応させて５′リン酸基を活性化させ、次いでそれを表層上の官能基と反応させ
ている。このアプローチの欠点はそれがカルボジイミドの添加という追加の工程
、並びにＤＮＡの固定化のための５時間の反応を要し、そしてそれが単一タイプ
の基体材料に制約される点にある。
【０００５】 別の例として、Ｐｉｅｒｃｅは最近「Ｒｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄ（商標）DNA Co
ating Solutions 」として知られる適当なＤＮＡ固定化製品を紹介している (「
Instructions-Reacti-BindTM DNA Coating Solution 」１／1997参照のこと) 。
この製品はＤＮＡと混合し、そしてポリスチレン又はポリプロピレンの如き表層
を適用するものである。一夜のインキュベーション後、溶液を除去し、表層をバ
ッファーで洗い、そして乾かし、しかる後それはハイブリダイゼーションの用意
が整う。この製品の説明書はそれが研究室において利用される全ての一般的なプ
ラスチック表層に有用であると記載されてはいるものの、実際にはいくつかの制
約がある。例えば、出願人はその製造者の仕様書を利用してポリプロピレンにＤ
ＮＡを固定化するのに有用であることを実証できなかった。更に、この製品は大
量のＤＮＡを必要とする。この仕様書はＤＮＡが０．５〜５μｇ／mlの濃度で使
用すべきことを示唆している。
ating Solutions 」として知られる適当なＤＮＡ固定化製品を紹介している (「
Instructions-Reacti-BindTM DNA Coating Solution 」１／1997参照のこと) 。
この製品はＤＮＡと混合し、そしてポリスチレン又はポリプロピレンの如き表層
を適用するものである。一夜のインキュベーション後、溶液を除去し、表層をバ
ッファーで洗い、そして乾かし、しかる後それはハイブリダイゼーションの用意
が整う。この製品の説明書はそれが研究室において利用される全ての一般的なプ
ラスチック表層に有用であると記載されてはいるものの、実際にはいくつかの制
約がある。例えば、出願人はその製造者の仕様書を利用してポリプロピレンにＤ
ＮＡを固定化するのに有用であることを実証できなかった。更に、この製品は大
量のＤＮＡを必要とする。この仕様書はＤＮＡが０．５〜５μｇ／mlの濃度で使
用すべきことを示唆している。
【０００６】 同様に、Ｃｏｓｔａｒはマイクロウェルプレート内のウェルの表層にＤＮＡを
付加するために利用する「ＤＮＡ−ＢＩＮＤ（商標）」という名の製品を販売し
ている（例えば、DNA-BINDTM「Application Guide 」を参照のこと) 。ＤＮＡ−
ＢＩＮＤ（商標）プレートの表層にはＮ−オキシスクシニミド（ＮＯＳ）反応基
を含む無電荷の非ポリマー性低分子量ヘテロ二価試薬がコーティングされている
。この基は求核基、例えば第一アミンと反応する。このヘテロ二価コーティング
試薬は更にこの反応基をポリスチレンプレートの表層に共有結合させる光化学基
及びスペーサーアームを含む。その後、アミン改質ＤＮＡがＮＯＳ表層に共有カ
ップリングされうる。このＤＮＡは第一アミンを合成プロセスの際に新生オリゴ
マーに付加することにより又は予備成形した配列に酵素的に付加させることによ
り改質されている。ＤＮＡ−ＢＩＮＤ（商標）製品はポリスチレン系であるため
、熱サイクルの如き高温を要する用途への利用は制約される。
付加するために利用する「ＤＮＡ−ＢＩＮＤ（商標）」という名の製品を販売し
ている（例えば、DNA-BINDTM「Application Guide 」を参照のこと) 。ＤＮＡ−
ＢＩＮＤ（商標）プレートの表層にはＮ−オキシスクシニミド（ＮＯＳ）反応基
を含む無電荷の非ポリマー性低分子量ヘテロ二価試薬がコーティングされている
。この基は求核基、例えば第一アミンと反応する。このヘテロ二価コーティング
試薬は更にこの反応基をポリスチレンプレートの表層に共有結合させる光化学基
及びスペーサーアームを含む。その後、アミン改質ＤＮＡがＮＯＳ表層に共有カ
ップリングされうる。このＤＮＡは第一アミンを合成プロセスの際に新生オリゴ
マーに付加することにより又は予備成形した配列に酵素的に付加させることによ
り改質されている。ＤＮＡ−ＢＩＮＤ（商標）製品はポリスチレン系であるため
、熱サイクルの如き高温を要する用途への利用は制約される。
【０００７】 このような様々な製品はいくつかの目的又は所定の環境のもとで有用でありう
るが、全て１又は複数の欠点及び制約に悩される傾向にある。特に、それらは不
適切に高いバックグランドノイズの原因となる大量のオリゴを要する傾向にあり
、及び／又は多様性を欠く。
るが、全て１又は複数の欠点及び制約に悩される傾向にある。特に、それらは不
適切に高いバックグランドノイズの原因となる大量のオリゴを要する傾向にあり
、及び／又は多様性を欠く。
【０００８】 オリゴの如き分子を表層に、このような従来のアプローチの欠点の一部又は全
てを回避しながら付加させることができることが極めて所望されるであろう。
てを回避しながら付加させることができることが極めて所望されるであろう。
【０００９】 発明の概要 本発明は基体、例えばマイクロウェルプレート、チューブ、ビーズ、顕微鏡ス
ライド、シリコンウェーハー又は膜に標的分子を共有付加するための方法及び試
薬組成物を提供する。好適な態様において、この方法及び組成物は核酸プローブ
をプラスチック材料、例えばハイブリダイゼーションアッセイに利用するための
マイクロウェルプレート等に固定化するために利用する。例えば、マイクロウェ
ルプレートは様々な材料、例えば限定することなく、ポリスチレン、ポリカーボ
ネート、ポリビニルクロリド及びポリプロピレンから製造でき、そして本発明の
試薬でコーティングされる。この試薬組成物はかくして核酸を吸引及び共有付加
の双方のために利用でき、これにより核酸はその相補鎖とハイブリダイゼーショ
ンするのに利用できるようになる。
ライド、シリコンウェーハー又は膜に標的分子を共有付加するための方法及び試
薬組成物を提供する。好適な態様において、この方法及び組成物は核酸プローブ
をプラスチック材料、例えばハイブリダイゼーションアッセイに利用するための
マイクロウェルプレート等に固定化するために利用する。例えば、マイクロウェ
ルプレートは様々な材料、例えば限定することなく、ポリスチレン、ポリカーボ
ネート、ポリビニルクロリド及びポリプロピレンから製造でき、そして本発明の
試薬でコーティングされる。この試薬組成物はかくして核酸を吸引及び共有付加
の双方のために利用でき、これにより核酸はその相補鎖とハイブリダイゼーショ
ンするのに利用できるようになる。
【００１０】 本発明の試薬組成物は熱化学反応基（即ち、温度依存性の反応速度を有する基
）及び吸引基を含む。任意的、且つ好適には、この組成物は更に光反応基も含み
うる。更に、この試薬は１又は複数の親水性ポリマーを含んで成ってよく、それ
に熱化学反応性、吸引性及び／又は光反応性の基が懸垂している。この光反応基
（又の名を「光学基」）は、例えば光の如き適当なエネルギー源の適用により試
薬分子を支持体の表層に付加するのに利用できる。かくして、熱化学反応基は標
的分子上の適当且つ相補的な官能基との共有結合を形成するのに利用できうる。
一般に、この試薬分子をまず光学基の活性化を介して表層に付加させ、しかる後
に標的分子（例えばオリゴ）を結合試薬に対し、結合試薬上の吸引（例えばイオ
ン）基と標的上の対立に帯電した基との間でイオン的相互作用をほとんど頼りに
して吸引させる。結合試薬、換言すれば表層に一旦吸引すると、この標的分子は
結合試薬の反応基と標的分子上の適当な官能基との反応により結合試薬に熱化学
的にカップリングされうる。この熱化学反応基及びイオン基は同一のポリマー上
にあるか、又は表層に一緒に固定化されている別々のポリマー上にあってよい。
）及び吸引基を含む。任意的、且つ好適には、この組成物は更に光反応基も含み
うる。更に、この試薬は１又は複数の親水性ポリマーを含んで成ってよく、それ
に熱化学反応性、吸引性及び／又は光反応性の基が懸垂している。この光反応基
（又の名を「光学基」）は、例えば光の如き適当なエネルギー源の適用により試
薬分子を支持体の表層に付加するのに利用できる。かくして、熱化学反応基は標
的分子上の適当且つ相補的な官能基との共有結合を形成するのに利用できうる。
一般に、この試薬分子をまず光学基の活性化を介して表層に付加させ、しかる後
に標的分子（例えばオリゴ）を結合試薬に対し、結合試薬上の吸引（例えばイオ
ン）基と標的上の対立に帯電した基との間でイオン的相互作用をほとんど頼りに
して吸引させる。結合試薬、換言すれば表層に一旦吸引すると、この標的分子は
結合試薬の反応基と標的分子上の適当な官能基との反応により結合試薬に熱化学
的にカップリングされうる。この熱化学反応基及びイオン基は同一のポリマー上
にあるか、又は表層に一緒に固定化されている別々のポリマー上にあってよい。
【００１１】 理論に拘束されるつもりはないが、イオン基、例えば陽イオン基、例えば第四
アンモニウム基又はプロトン化（即ち、酸性化）第三アミンの存在は、静電力及
びその他の力を介して表層に核酸配列を吸引させるのを担うようである。この吸
引は、かくして、核酸配列上の対応の反応基と効率的にカップリングするその反
応基の能力を増強させる。任意的、且つ好適には、この標的分子は当該試薬分子
の反応基で調製されているか、又はその反応基となる官能基が施されている。例
えば、合成の際、オリゴはアミン及びスルフヒドリル基の如き官能基で調製でき
る。
アンモニウム基又はプロトン化（即ち、酸性化）第三アミンの存在は、静電力及
びその他の力を介して表層に核酸配列を吸引させるのを担うようである。この吸
引は、かくして、核酸配列上の対応の反応基と効率的にカップリングするその反
応基の能力を増強させる。任意的、且つ好適には、この標的分子は当該試薬分子
の反応基で調製されているか、又はその反応基となる官能基が施されている。例
えば、合成の際、オリゴはアミン及びスルフヒドリル基の如き官能基で調製でき
る。
【００１２】 本発明は更に標的分子、例えばオリゴを表層に本明細書に記載の試薬を利用し
て付加する方法を提供する。かくして、本発明はかかる試薬を介して付加された
核酸を有する表層、並びにかかる表層を提供する材料（例えばマイクロウェルプ
レート）を提供する。
て付加する方法を提供する。かくして、本発明はかかる試薬を介して付加された
核酸を有する表層、並びにかかる表層を提供する材料（例えばマイクロウェルプ
レート）を提供する。
【００１３】 別の観点において、本発明は本発明の試薬と、この試薬の熱化学反応基と反応
性の１又は複数の官能基を含む標的分子との組合せを含んで成る組成物を提供す
る。
性の１又は複数の官能基を含む標的分子との組合せを含んで成る組成物を提供す
る。
【００１４】 例えば、特に好適な試薬の例は本明細書の中で「フォトポリＱｕａｔ」として
記載されているものであり、それにおいては複数個の光学基及び複数個の陽イオ
ン基（第四アンモニウム基の形態）が親水性ポリマー骨格に付加されている。か
かる試薬は光学ポリＮＯＳに、標的分子の固定化のための最適な濃度及び比で一
緒に固定化されることにより、著しい多様性を供する。
記載されているものであり、それにおいては複数個の光学基及び複数個の陽イオ
ン基（第四アンモニウム基の形態）が親水性ポリマー骨格に付加されている。か
かる試薬は光学ポリＮＯＳに、標的分子の固定化のための最適な濃度及び比で一
緒に固定化されることにより、著しい多様性を供する。
【００１５】 かかる試薬を利用して、出願人は捕獲プローブを様々な表層、例えば本来はプ
ローブを吸着しないであろう表層（例えばポリプロピレン及びポリビニルクロリ
ド）等に共有固定化することができる。得られる表層はポリスチレン又はポリカ
ーボネート上に吸着される改質オリゴで得られるものと同等又はそれより優れた
シグナルを供する。
ローブを吸着しないであろう表層（例えばポリプロピレン及びポリビニルクロリ
ド）等に共有固定化することができる。得られる表層はポリスチレン又はポリカ
ーボネート上に吸着される改質オリゴで得られるものと同等又はそれより優れた
シグナルを供する。
【００１６】 当該固定化試薬及び方法は従来報告されているものよりも簡単な態様で増幅方
法に利用でき、そして求核試薬誘導化核酸の共有固定化のための改良された表層
も提供できる。増幅方法及びハイブリダイゼーションアッセイのための固定化プ
ローブの他に、本発明の試薬はＰＣＲ及びその他の固相配列決定のため及び増幅
技術のための固定化プライマーのための改良された核酸固定化を提供できうる。
法に利用でき、そして求核試薬誘導化核酸の共有固定化のための改良された表層
も提供できる。増幅方法及びハイブリダイゼーションアッセイのための固定化プ
ローブの他に、本発明の試薬はＰＣＲ及びその他の固相配列決定のため及び増幅
技術のための固定化プライマーのための改良された核酸固定化を提供できうる。
【００１７】 詳細な説明 本発明の好適な試薬組成物は対応の標的分子を吸引する能力を有する１又は複
数のイオン基を、表層に当該試薬を付加するのに有用な１又は複数の光反応基及
び当該標的分子の対応の反応基と共有結合を形成するのに有用な１又は複数の熱
化学反応基と共に抱える親水性骨格を含んで成る。任意的、且つ好適には、この
組成物は２種類以上の試薬分子の利用を含むことができ、その第一の試薬分子は
対応の標的分子を吸引する能力を有する１又は複数のイオン基を、表層に当該試
薬を吸引するのに有用な１又は複数の光反応基と共に抱える親水性骨格を含んで
成る。第二の試薬分子は前記標的分子の対応の官能基と共有結合を形成するのに
有用な１又は複数の熱化学反応基を、表層に当該試薬を吸引するのに有用な１又
は複数の光反応基と共に抱える親水性骨格を含んで成る。任意的に、当該試薬分
子の一方が光反応基を有するだけでよく、なぜならこの試薬は光化学架橋を通じ
て第二ポリマーを一緒に固定化できるからである。しかしながら、このような場
合、この試薬分子は表層及び第二ポリマーへのカップリングを供するために２以
上の光反応基を有さなくてはならない。
数のイオン基を、表層に当該試薬を付加するのに有用な１又は複数の光反応基及
び当該標的分子の対応の反応基と共有結合を形成するのに有用な１又は複数の熱
化学反応基と共に抱える親水性骨格を含んで成る。任意的、且つ好適には、この
組成物は２種類以上の試薬分子の利用を含むことができ、その第一の試薬分子は
対応の標的分子を吸引する能力を有する１又は複数のイオン基を、表層に当該試
薬を吸引するのに有用な１又は複数の光反応基と共に抱える親水性骨格を含んで
成る。第二の試薬分子は前記標的分子の対応の官能基と共有結合を形成するのに
有用な１又は複数の熱化学反応基を、表層に当該試薬を吸引するのに有用な１又
は複数の光反応基と共に抱える親水性骨格を含んで成る。任意的に、当該試薬分
子の一方が光反応基を有するだけでよく、なぜならこの試薬は光化学架橋を通じ
て第二ポリマーを一緒に固定化できるからである。しかしながら、このような場
合、この試薬分子は表層及び第二ポリマーへのカップリングを供するために２以
上の光反応基を有さなくてはならない。
【００１８】 本発明の更なる外延において、イオン基及び熱化学反応基の双方が親水性ポリ
マーの一部として組込まれている必要はない。例えば、適当なスペーサーにより
分離された１又は複数の光反応基と１又は複数の熱化学反応基を有する小型のヘ
テロ二価分子をイオン基を有する光反応親水性ポリマーと一緒に核酸配列の固定
化を成し遂げるために利用してよい。反対に、適当なスペーサーにより分離され
た１又は複数の光反応基と１又は複数のイオン基とを有するヘテロ二価分子を熱
化学反応基を有する光反応親水性ポリマーと一緒に利用してよい。好適ではある
が、親水性ポリマー骨格の利用は任意的にすぎず、なぜならイオン基及び熱化学
反応基は共に２つの独立した光反応ヘテロ二価分子として又は双方のタイプの基
を抱える単独の光反応分子として組込むことができるからである。
マーの一部として組込まれている必要はない。例えば、適当なスペーサーにより
分離された１又は複数の光反応基と１又は複数の熱化学反応基を有する小型のヘ
テロ二価分子をイオン基を有する光反応親水性ポリマーと一緒に核酸配列の固定
化を成し遂げるために利用してよい。反対に、適当なスペーサーにより分離され
た１又は複数の光反応基と１又は複数のイオン基とを有するヘテロ二価分子を熱
化学反応基を有する光反応親水性ポリマーと一緒に利用してよい。好適ではある
が、親水性ポリマー骨格の利用は任意的にすぎず、なぜならイオン基及び熱化学
反応基は共に２つの独立した光反応ヘテロ二価分子として又は双方のタイプの基
を抱える単独の光反応分子として組込むことができるからである。
【００１９】 本発明の別の態様において、光反応基を利用することなく核酸配列を固定化す
ることが可能である。例えば、コーティングを施すべき材料の表層に、前述の通
りイオン及び熱化学反応基を有する親水性ポリマーを固定化するのに利用できう
る熱化学反応基を施してよい。例えば、表層をアンモニアプラズマで処理して所
定の数の反応性アミンを材料の表層に導入することができる。この表層を次に第
四アンモニウム基及びＮＯＳ基の双方を有する親水性ポリマーで処理するなら、
このポリマーはそのＮＯＳ基と表層上のアミンとの反応を通じて固定化できる。
好ましくは、このポリマー上のＮＯＳ基は、十分な数の熱化学反応基が固定化の
後に残り、核酸配列のカップリングを可能にすることを確実にするよう、表層上
のアミンに対して過剰量とする。
ることが可能である。例えば、コーティングを施すべき材料の表層に、前述の通
りイオン及び熱化学反応基を有する親水性ポリマーを固定化するのに利用できう
る熱化学反応基を施してよい。例えば、表層をアンモニアプラズマで処理して所
定の数の反応性アミンを材料の表層に導入することができる。この表層を次に第
四アンモニウム基及びＮＯＳ基の双方を有する親水性ポリマーで処理するなら、
このポリマーはそのＮＯＳ基と表層上のアミンとの反応を通じて固定化できる。
好ましくは、このポリマー上のＮＯＳ基は、十分な数の熱化学反応基が固定化の
後に残り、核酸配列のカップリングを可能にすることを確実にするよう、表層上
のアミンに対して過剰量とする。
【００２０】 当業者は、本説明により、注目の標的分子のタイプに依存して適当なイオン基
を特定及び選定できるであろう。標的分子には、限定することなく、プラスミド
ＤＮＡ、コスミドＤＮＡ、バクテリオファージＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ（限定する
ことなく、酵母、ウィルス、細菌、哺乳動物、昆虫等）、ＲＮＡ，ｃＤＮＡ，Ｐ
ＮＡ及びオリゴが挙げられる。
を特定及び選定できるであろう。標的分子には、限定することなく、プラスミド
ＤＮＡ、コスミドＤＮＡ、バクテリオファージＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ（限定する
ことなく、酵母、ウィルス、細菌、哺乳動物、昆虫等）、ＲＮＡ，ｃＤＮＡ，Ｐ
ＮＡ及びオリゴが挙げられる。
【００２１】 適当なイオン基には第四アンモニウム塩、プロトン化第三アミン及びその他の
陽イオン基、例えばホスホニウム化合物が挙げられる。更に含まれるのは、酸性
環境に置かれたときにプロトン化されることのできる第三アミン基である。第四
アンモニウム塩にはアルキル第四アンモニウム化合物、例えば［３−（メタクリ
ロイルアミノ）プロピル］トリメチルアンモニウムクロリド（ＭＡＰＴＡＣ）、
並びに第四アンモニウム群、例えばピリジニウム化合物が挙げられる。ホスホニ
ウム化合物にはトリブチル（４−ビニルベンジル）ホスホニウムクロリドの如き
モノマーから調製され、そしてJ. Appl. Polymer Sci. 53, 1237 (1994)(その開
示内容は引用することで本明細書に組入れる) に記載のポリマーが挙げられる。
陽イオン基、例えばホスホニウム化合物が挙げられる。更に含まれるのは、酸性
環境に置かれたときにプロトン化されることのできる第三アミン基である。第四
アンモニウム塩にはアルキル第四アンモニウム化合物、例えば［３−（メタクリ
ロイルアミノ）プロピル］トリメチルアンモニウムクロリド（ＭＡＰＴＡＣ）、
並びに第四アンモニウム群、例えばピリジニウム化合物が挙げられる。ホスホニ
ウム化合物にはトリブチル（４−ビニルベンジル）ホスホニウムクロリドの如き
モノマーから調製され、そしてJ. Appl. Polymer Sci. 53, 1237 (1994)(その開
示内容は引用することで本明細書に組入れる) に記載のポリマーが挙げられる。
【００２２】 ポリマー骨格は合成又は天然であってよく、そして好ましくはオリゴマー、ホ
モポリマー及び付加又は縮合重合から得られるコポリマーから成る群から選ばれ
る合成ポリマーである。天然ポリマー、例えば多糖類、ポリペプチドも同様に利
用できうる。好適な骨格は、それが記載の態様での利用に適合しない、又は有害
な生物学的機能を供与しない点で生物学的に不活性なものとする。
モポリマー及び付加又は縮合重合から得られるコポリマーから成る群から選ばれ
る合成ポリマーである。天然ポリマー、例えば多糖類、ポリペプチドも同様に利
用できうる。好適な骨格は、それが記載の態様での利用に適合しない、又は有害
な生物学的機能を供与しない点で生物学的に不活性なものとする。
【００２３】 かかるポリマー骨格にはアクリル、例えばヒドロキシエチルアクリレート、ヒ
ドロキシエチルメタクリレート、グリセリルアクリレート、グリセリルメタクリ
レート、アクリルアミド及びメタクリルアミドから重合されたもの、ビニル、例
えばポリビニルピロリドン及びポリビニルアルコール、ナイロン、例えばポリカ
プロラクタム、ポリラウリルラクタム、ポリヘキサメチレンアジパミド及びポリ
ヘキサメチレンドデカンジアミド、ポリウレタン及びポリエチレンオキシドが挙
げられうる。
ドロキシエチルメタクリレート、グリセリルアクリレート、グリセリルメタクリ
レート、アクリルアミド及びメタクリルアミドから重合されたもの、ビニル、例
えばポリビニルピロリドン及びポリビニルアルコール、ナイロン、例えばポリカ
プロラクタム、ポリラウリルラクタム、ポリヘキサメチレンアジパミド及びポリ
ヘキサメチレンドデカンジアミド、ポリウレタン及びポリエチレンオキシドが挙
げられうる。
【００２４】 本発明のポリマー骨格は所望の数及びタイプのイオン基、光学基及び熱化学反
応基を抱えることのできる親水性骨格を供与するよう選定され、その組合せは選
定の試薬に依存する。このポリマー骨格は表層と、様々なイオン基及び熱化学反
応基との間のスペーサーを供するよう選定する。このようにして、この試薬は最
適活性を発揮する十分な運動自由度を有するその他の基を供すよう、表層又は隣
りの試薬分子に結合させることができる。このポリマー骨格は好ましくは親水性
（例えば水溶性）であり、ポリアクリルアミド及びポリビニルピロリドンが特に
好適なポリマーである。
応基を抱えることのできる親水性骨格を供与するよう選定され、その組合せは選
定の試薬に依存する。このポリマー骨格は表層と、様々なイオン基及び熱化学反
応基との間のスペーサーを供するよう選定する。このようにして、この試薬は最
適活性を発揮する十分な運動自由度を有するその他の基を供すよう、表層又は隣
りの試薬分子に結合させることができる。このポリマー骨格は好ましくは親水性
（例えば水溶性）であり、ポリアクリルアミド及びポリビニルピロリドンが特に
好適なポリマーである。
【００２５】 本発明の試薬は当該ポリマー骨格に共有結合した１又は複数の懸垂潜伏反応（
好ましくは光反応）基を担持する。光反応基は本明細書において規定されたもの
であり、そして好適な基はその特性を保持する条件下で保存されるときに十分に
安定なものである。例えば、引用することで本明細書に組入れる米国特許第５，
００２，５８２号を参照のこと。潜伏反応基は電磁スペクトルの様々な領域に応
答性であるように選定でき、紫外光及びスペクトルの可視領域に対して応答性（
ここでは、「光反応性」と称する）であることが特に好ましい。
好ましくは光反応）基を担持する。光反応基は本明細書において規定されたもの
であり、そして好適な基はその特性を保持する条件下で保存されるときに十分に
安定なものである。例えば、引用することで本明細書に組入れる米国特許第５，
００２，５８２号を参照のこと。潜伏反応基は電磁スペクトルの様々な領域に応
答性であるように選定でき、紫外光及びスペクトルの可視領域に対して応答性（
ここでは、「光反応性」と称する）であることが特に好ましい。
【００２６】 光反応基は特定の外部刺激に応答して活性種構築に入り、例えば同一又は別々
の分子により供与される隣接化学構造への共有結合をもたらす。光反応基は保存
条件下ではその共有結合をそのまま保持するか、外部エネルギー源による活性化
により、他の分子と共有結合を形成する分子内の原子の基である。
の分子により供与される隣接化学構造への共有結合をもたらす。光反応基は保存
条件下ではその共有結合をそのまま保持するか、外部エネルギー源による活性化
により、他の分子と共有結合を形成する分子内の原子の基である。
【００２７】 光反応基は活性種、例えばフリーラジカル、そして特にニトレン、カルベン及
び励起状態のケトンを電磁エネルギーの吸収により構築する。光反応基は電磁ス
ペクトルの様々な領域に対して応答性となるよう選定し、そして例えば紫外光及
びスペクトルの可視領域に対して応答性である光反応基が好ましく、そして本明
細書において時々「光化学基」又は「光学基」と呼ぶことがある。
び励起状態のケトンを電磁エネルギーの吸収により構築する。光反応基は電磁ス
ペクトルの様々な領域に対して応答性となるよう選定し、そして例えば紫外光及
びスペクトルの可視領域に対して応答性である光反応基が好ましく、そして本明
細書において時々「光化学基」又は「光学基」と呼ぶことがある。
【００２８】 光反応アリールケトン類、例えばアセトフェノン、ベンゾフェノン、アントラ
キノン、アントロン及びアントロン様複素環（即ち、１０位においてＮ，Ｏ又は
Ｓを有するようなアントロンの複素環類似体）又はその置換化（例えば、環置換
化）誘導体が好ましい。かかるケトン類の官能基が好ましく、なぜならそれらは
本明細書に記載の活性化／不活性化／再活性化サイクルに容易に入ることができ
るからである。ベンゾフェノンが特に好適な光反応成分であり、なぜならそれは
三重項状態へのシステム間移行に入る励起単項状態の一次形成により光化学励起
が可能だからである。励起三重項状態は水素原子の引き抜き（例えば支持体表層
から）により炭素・水素結合に侵入でき、かくしてラジカルペアーが構築される
。ラジカルペアーのその後の崩壊は新しい炭素−炭素結合の形成を招く。反応基
（例えば炭素−水素）が結合のために有効でないなら、ベンゾフェノン基の紫外
光誘導励起は可逆式となり、そしてその分子はエネルギー源の除去により基底状
態のエネルギーレベルにまでもどる。光学活性化性アリールケトン類、例えばベ
ンゾフェノン及びアセトフェノンが特に重要であり、なぜならこれらの基は水中
で多重の再活性化に委ねられ、それ故コーティング効率の増大を供するからであ
る。従って、光反応アリールケトン類が特に好ましい。
キノン、アントロン及びアントロン様複素環（即ち、１０位においてＮ，Ｏ又は
Ｓを有するようなアントロンの複素環類似体）又はその置換化（例えば、環置換
化）誘導体が好ましい。かかるケトン類の官能基が好ましく、なぜならそれらは
本明細書に記載の活性化／不活性化／再活性化サイクルに容易に入ることができ
るからである。ベンゾフェノンが特に好適な光反応成分であり、なぜならそれは
三重項状態へのシステム間移行に入る励起単項状態の一次形成により光化学励起
が可能だからである。励起三重項状態は水素原子の引き抜き（例えば支持体表層
から）により炭素・水素結合に侵入でき、かくしてラジカルペアーが構築される
。ラジカルペアーのその後の崩壊は新しい炭素−炭素結合の形成を招く。反応基
（例えば炭素−水素）が結合のために有効でないなら、ベンゾフェノン基の紫外
光誘導励起は可逆式となり、そしてその分子はエネルギー源の除去により基底状
態のエネルギーレベルにまでもどる。光学活性化性アリールケトン類、例えばベ
ンゾフェノン及びアセトフェノンが特に重要であり、なぜならこれらの基は水中
で多重の再活性化に委ねられ、それ故コーティング効率の増大を供するからであ
る。従って、光反応アリールケトン類が特に好ましい。
【００２９】 アジドは光反応基の好適なクラスを構成し、そしてアリールアシド（Ｃ6 Ｒ5 Ｎ3 ）、例えばフェニルアシド、そして特に４−フルオロ−３−ニトロフェニル
アジド、アシルアジド（−ＣＯ−Ｎ3 ）、例えばベンゾイルアジド及びｐ−メチ
ルベンゾイルアジド、アジドホルメート（−Ｏ−ＣＯ−Ｎ3 ）、例えばエチルア
ジドホルメート、フェニルアジドホルメート、スルホニルアジド（−ＳＯ2 −Ｎ 3 ）、例えばベンゼンスルホニルアジド及びホスホリルアジド（ＲＯ）2 ＰＯＮ 3 、例えばジフェニルホスホリルアジド及びジエチルホスホリルアジドが挙げら
れる。ジアゾ化合物は別のクラスの光反応基を構成し、そしてジアゾアルカン（
−ＣＨＮ2 ）、例えばジアゾメタン及びジフェニルジアゾメタン、ジアゾケトン
（−ＣＯ−ＣＨＮ2 ）、例えばジアゾアセトフェノン及び１−トリフルオロメチ
ル−１−ジアゾ−２−ペンタノン、ジアゾアセテート（−Ｏ−ＣＯ−ＣＨＮＨ2 ）、例えばｔ−ブチルジアゾアセテート及びフェニルジアゾアセテート、及びベ
ーターケト−アルファージアゾアセテート（−ＣＯ−ＣＮ2 −ＣＯ−Ｏ−）、例
えばｔ−ブチルアルファージアゾアセトアセテートが挙げられる。その他の光反
応基にはジアジリン（−ＣＨＮ2 ）、例えば３−トリフルオロメチル−３−フェ
ニルジアジリン、及びケテン（−ＣＨ＝Ｃ＝Ｏ）、例えばケテン及びジフェニル
ケテンが挙げられる。光学活性化性アリールケトン類、例えばベンゾフェノン及
びアセトフェノンが特に重要であり、なぜならこれらの基は水中で多重の再活性
化に委ねられ、それ故コーティング効率の増大を供するからである。
アジド、アシルアジド（−ＣＯ−Ｎ3 ）、例えばベンゾイルアジド及びｐ−メチ
ルベンゾイルアジド、アジドホルメート（−Ｏ−ＣＯ−Ｎ3 ）、例えばエチルア
ジドホルメート、フェニルアジドホルメート、スルホニルアジド（−ＳＯ2 −Ｎ 3 ）、例えばベンゼンスルホニルアジド及びホスホリルアジド（ＲＯ）2 ＰＯＮ 3 、例えばジフェニルホスホリルアジド及びジエチルホスホリルアジドが挙げら
れる。ジアゾ化合物は別のクラスの光反応基を構成し、そしてジアゾアルカン（
−ＣＨＮ2 ）、例えばジアゾメタン及びジフェニルジアゾメタン、ジアゾケトン
（−ＣＯ−ＣＨＮ2 ）、例えばジアゾアセトフェノン及び１−トリフルオロメチ
ル−１−ジアゾ−２−ペンタノン、ジアゾアセテート（−Ｏ−ＣＯ−ＣＨＮＨ2 ）、例えばｔ−ブチルジアゾアセテート及びフェニルジアゾアセテート、及びベ
ーターケト−アルファージアゾアセテート（−ＣＯ−ＣＮ2 −ＣＯ−Ｏ−）、例
えばｔ−ブチルアルファージアゾアセトアセテートが挙げられる。その他の光反
応基にはジアジリン（−ＣＨＮ2 ）、例えば３−トリフルオロメチル−３−フェ
ニルジアジリン、及びケテン（−ＣＨ＝Ｃ＝Ｏ）、例えばケテン及びジフェニル
ケテンが挙げられる。光学活性化性アリールケトン類、例えばベンゾフェノン及
びアセトフェノンが特に重要であり、なぜならこれらの基は水中で多重の再活性
化に委ねられ、それ故コーティング効率の増大を供するからである。
【００３０】 光反応基の活性化により、この試薬分子は光反応基の残基を介する共有結合に
より互いと及び／又は材料表層と共有結合する。典型的な光反応基及び活性化に
よるその残基を以下に示す。
より互いと及び／又は材料表層と共有結合する。典型的な光反応基及び活性化に
よるその残基を以下に示す。
【００３１】光反応性 基 残基官能 アリールアジド アミン Ｒ−ＮＨ−Ｒ′ アシルアジド アミド Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ′ アジドホルメート カルバメート Ｒ−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ′ スルホニルアジド スルホンアミド Ｒ−ＳＯ2 −ＮＨ−Ｒ′ ホスホリルアジド ホスホラミド （ＲＯ）2 ＰＯ−ＮＨ−Ｒ′ ジアゾアルカン 新しいＣ−Ｃ結合 ジアゾケトン 新しいＣ−Ｃ結合及び ケトン ジアゾアセテート 新しいＣ−Ｃ結合及び エステル ベーターケト−アルファ 新しいＣ−Ｃ結合及び ージアゾアセテート エステル 脂肪族アゾ 新しいＣ−Ｃ結合 ジアジリン 新しいＣ−Ｃ結合 ケテン 新しいＣ−Ｃ結合 光活性化ケトン 新しいＣ−Ｃ結合及び アルコール
【００３２】 当業者は、本説明により、適切に誘導化された核酸配列の共有固定化を供する
よう適当な熱化学反応基を特定及び選定できるであろう。例えば、アミノ誘導化
核酸配列は活性化エステル、例えばＮＯＳエステルとの共有カップリング反応を
経てアミド連結基を供するであろう。類似の活性化エステル、例えばｐ−ニトロ
フェニル及びペンタフルオロフェニルエステルもアミン基と反応したときにアミ
ド結合を供するであろう。当業者は多種多様なその他のアミン反応性官能基、例
えばイソシアネート、チオイソシアネート、カルボン酸クロリド、エポキシド、
アルデヒド、アルキルハライド及びスルホネートエステル、例えばメシレート、
トシレート及びトレシレートの各々も熱化学反応基として働きうることを認識し
ている。
よう適当な熱化学反応基を特定及び選定できるであろう。例えば、アミノ誘導化
核酸配列は活性化エステル、例えばＮＯＳエステルとの共有カップリング反応を
経てアミド連結基を供するであろう。類似の活性化エステル、例えばｐ−ニトロ
フェニル及びペンタフルオロフェニルエステルもアミン基と反応したときにアミ
ド結合を供するであろう。当業者は多種多様なその他のアミン反応性官能基、例
えばイソシアネート、チオイソシアネート、カルボン酸クロリド、エポキシド、
アルデヒド、アルキルハライド及びスルホネートエステル、例えばメシレート、
トシレート及びトレシレートの各々も熱化学反応基として働きうることを認識し
ている。
【００３３】 別の例において、この核酸配列は当業界周知の技術を利用してスルフヒドリル
基で誘導化されうる。対応の熱化学反応基は、例えば、マレイミド環構造体又は
α−ヨードアセトアミドであろう。これらの構造体はいずれもスルフヒドリル誘
導化核酸配列と共有結合を供するよう容易に反応するであろう。
基で誘導化されうる。対応の熱化学反応基は、例えば、マレイミド環構造体又は
α−ヨードアセトアミドであろう。これらの構造体はいずれもスルフヒドリル誘
導化核酸配列と共有結合を供するよう容易に反応するであろう。
【００３４】 本発明の官能化ポリマーは予備形成ポリマーの適当な誘導化により、又はより
好ましくは、所望の置換パターンを供するよう一組のコモノマーの重合により調
製できうる。この後者のアプローチが好ましく、その理由は様々なコモノマーの
比の変更の容易性及びポリマーへの組込みレベルの管理能力にある。これら２通
りのアプローチの組合せも最適な構造体の提供に利用されうる。
好ましくは、所望の置換パターンを供するよう一組のコモノマーの重合により調
製できうる。この後者のアプローチが好ましく、その理由は様々なコモノマーの
比の変更の容易性及びポリマーへの組込みレベルの管理能力にある。これら２通
りのアプローチの組合せも最適な構造体の提供に利用されうる。
【００３５】 好適な態様において、例えば、分子の一端において、他端にある光反応基又は
熱化学反応基とはスペーサー基により隔離された重合性基を有するモノマーを調
製する。例えば、重合性ビニル基、例えばアクリルアミド、アクリレート、又は
マレイミドは短い炭化水素エステルを介して活性化エステル、例えばＮＯＳエス
テルに、又は光反応基、例えば置換化ベンゾフェノンにカップリングされうる。
これらの化合物は当業者に周知の有機合成技術を利用して調製且つ精製されうる
。所望のモノマーのいくつか、例えばＭＡＰＴＡＣ、Ｎ−［３−（ジメチルアミ
ノ）プロピル］メタクリルアミド（ＤＭＡＰＭＡ）及びＮ−（３−アミノプロピ
ル）メタクリルアミド塩酸塩（ＡＰＭＡ）は市販されており、そしてこのような
化合物はポリマーの骨格と一緒に第四アンモニウム塩、第三アミン及び第一アミ
ンを供する。
熱化学反応基とはスペーサー基により隔離された重合性基を有するモノマーを調
製する。例えば、重合性ビニル基、例えばアクリルアミド、アクリレート、又は
マレイミドは短い炭化水素エステルを介して活性化エステル、例えばＮＯＳエス
テルに、又は光反応基、例えば置換化ベンゾフェノンにカップリングされうる。
これらの化合物は当業者に周知の有機合成技術を利用して調製且つ精製されうる
。所望のモノマーのいくつか、例えばＭＡＰＴＡＣ、Ｎ−［３−（ジメチルアミ
ノ）プロピル］メタクリルアミド（ＤＭＡＰＭＡ）及びＮ−（３−アミノプロピ
ル）メタクリルアミド塩酸塩（ＡＰＭＡ）は市販されており、そしてこのような
化合物はポリマーの骨格と一緒に第四アンモニウム塩、第三アミン及び第一アミ
ンを供する。
【００３６】 コポリマーも当業者に公知の技術を利用して上記のモノマーから調製できる。
好ましくは、これらのモノマー及びコポリマーはアゾ開始剤、例えば２，２′−
アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）又はペルオキシド、例えばベンゾイル
ペルオキシドを利用してビニル基のフリーラジカル重合に入る。重合のために選
定されるモノマーは最終ポリマー生成物の種類に基づいて選ばれる。例えば、第
四アンモニウム基を含む光反応性ポリマーは光反応基を含むモノマーと第四アン
モニウム基を含む第二モノマーとから調製する。ＮＯＳ基を含む光反応性ポリマ
ーは光反応基を含むモノマーと活性化ＮＯＳエステルを含む第二モノマーとから
調製する。第四アンモニウム基及びＮＯＳエステルの双方を含む光反応性ポリマ
ーは３種類のモノマー全てを利用して調製する。
好ましくは、これらのモノマー及びコポリマーはアゾ開始剤、例えば２，２′−
アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）又はペルオキシド、例えばベンゾイル
ペルオキシドを利用してビニル基のフリーラジカル重合に入る。重合のために選
定されるモノマーは最終ポリマー生成物の種類に基づいて選ばれる。例えば、第
四アンモニウム基を含む光反応性ポリマーは光反応基を含むモノマーと第四アン
モニウム基を含む第二モノマーとから調製する。ＮＯＳ基を含む光反応性ポリマ
ーは光反応基を含むモノマーと活性化ＮＯＳエステルを含む第二モノマーとから
調製する。第四アンモニウム基及びＮＯＳエステルの双方を含む光反応性ポリマ
ーは３種類のモノマー全てを利用して調製する。
【００３７】 最終ポリマーの組成は重合反応に添加するモノマーのモル比により調節できる
。典型的には、このような官能化モノマーは重合反応の総モノマー含有量のうち
の比較的低いモル％において利用され、この組成の残りは核酸配列に対して光反
応でも熱化学反応性でもないモノマーから成る。かかるモノマーの例には、限定
することなく、アクリルアミド及びＮ−ビニルピロリドンが挙げられる。利用す
るモノマーの相対的な反応性に基づき、骨格伝いのモノマーの分布はかなりラン
ダムである。
。典型的には、このような官能化モノマーは重合反応の総モノマー含有量のうち
の比較的低いモル％において利用され、この組成の残りは核酸配列に対して光反
応でも熱化学反応性でもないモノマーから成る。かかるモノマーの例には、限定
することなく、アクリルアミド及びＮ−ビニルピロリドンが挙げられる。利用す
るモノマーの相対的な反応性に基づき、骨格伝いのモノマーの分布はかなりラン
ダムである。
【００３８】 時折り、このポリマーの骨格上の熱化学反応基は重合の間に存在しているなら
それ自体が重合性モノマーとして働くことがあり、かくしてポリマーの一次形成
の後の第二工程においてその基の導入が必要となる。例えば、骨格伝いにマレイ
ミドを有する光反応性ポリマーの調製は、上記の技術を利用しての光反応基及び
アミン基の双方を含むポリマーの一次調製、しかる後のアミン基と短い炭化水素
スペーサーにより接続されたマレイミド基及びイソシアネートを含むヘテロ二価
分子との反応により成し遂げることができる。多種多様なかかるポリマー修飾技
術が当業者に公知の典型的な有機反応を利用して有用である。
それ自体が重合性モノマーとして働くことがあり、かくしてポリマーの一次形成
の後の第二工程においてその基の導入が必要となる。例えば、骨格伝いにマレイ
ミドを有する光反応性ポリマーの調製は、上記の技術を利用しての光反応基及び
アミン基の双方を含むポリマーの一次調製、しかる後のアミン基と短い炭化水素
スペーサーにより接続されたマレイミド基及びイソシアネートを含むヘテロ二価
分子との反応により成し遂げることができる。多種多様なかかるポリマー修飾技
術が当業者に公知の典型的な有機反応を利用して有用である。
【００３９】 本発明を以下の非限定例で更に詳しく説明する。当業者は本発明の範囲を逸脱
することなくそれらの態様に様々な変更を施すことができることを承知しており
、また本発明は開示の態様に限定されるものでもない。何らかのことわりのない
限り、％は全て重量％で表示する。この実施例を通じて特定されている様々な「
化合物」の構造は以降の表９に示してある。
することなくそれらの態様に様々な変更を施すことができることを承知しており
、また本発明は開示の態様に限定されるものでもない。何らかのことわりのない
限り、％は全て重量％で表示する。この実施例を通じて特定されている様々な「
化合物」の構造は以降の表９に示してある。
【００４０】 実施例 実施例１４−ベンゾイルベンゾイルクロリド（ＢＢＡ−Ｃ１）の調製（化合物Ｉ） ４−ベンゾイル安息香酸（ＢＢＡ）、１．０kg（４．４２mole）を還流コンデ
ンサー及びオーバーヘッドスターラーの付いた乾燥した５リットルＭｏｒｔｏｎ
フラスコに加え、次いで６４５ml（８．８４mole）の塩化チオニル及び７２５ml
のトルエンを加えた。次にジメチルホルムアミド３．５mlを加え、そしてこの混
合物を４時間還流加熱した。冷却後、その溶媒を減圧で除去し、そして残留塩化
チオニルは３×５００mlのトルエンを利用する３回のエバポレーションにより除
去した。この生成物を１：４のトルエン：ヘキサンから再結晶化し、真空オーブ
ンで乾燥後９８８ｇ（収率９１％）が得られた。生成物の融点は９２−９４℃で
あった。８０MHz (1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ））での核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析
は所望の生成物と一致した：芳香族プロトン７．２０−８．２５（ｍ，９Ｈ）。
テトラメチルシラン内部標準の下流の化学シフト値は全てppm で表示する。最終
化合物を、例えば実施例３記載の光活性化性ポリマーの合成において利用するモ
ノマーの調製に利用するために保存した。
ンサー及びオーバーヘッドスターラーの付いた乾燥した５リットルＭｏｒｔｏｎ
フラスコに加え、次いで６４５ml（８．８４mole）の塩化チオニル及び７２５ml
のトルエンを加えた。次にジメチルホルムアミド３．５mlを加え、そしてこの混
合物を４時間還流加熱した。冷却後、その溶媒を減圧で除去し、そして残留塩化
チオニルは３×５００mlのトルエンを利用する３回のエバポレーションにより除
去した。この生成物を１：４のトルエン：ヘキサンから再結晶化し、真空オーブ
ンで乾燥後９８８ｇ（収率９１％）が得られた。生成物の融点は９２−９４℃で
あった。８０MHz (1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ））での核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析
は所望の生成物と一致した：芳香族プロトン７．２０−８．２５（ｍ，９Ｈ）。
テトラメチルシラン内部標準の下流の化学シフト値は全てppm で表示する。最終
化合物を、例えば実施例３記載の光活性化性ポリマーの合成において利用するモ
ノマーの調製に利用するために保存した。
【００４１】 実施例２Ｎ−（３−アミノプロピル）メタクリルアミド塩酸塩（ＡＰＭＡ）の調製（化合 物II） １０００mlのＣＨ2 Ｃｌ2 中の１，３−ジアミノプロパン１９１０ｇ（２５．
７７mole）の溶液を１２リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコに加え、そして氷浴上
で冷却した。２５０mlのＣＨ2 Ｃｌ2 中のｔ−ブチルフェニルカルボネート１０
００ｇ（５．１５mole）の溶液を反応温度が１５℃未満に保たれる速度で滴下し
た。添加の後、この混合物を室温にまで温め、そして２時間撹拌した。この反応
混合物を９００mlのＣＨ2 Ｃｌ2 及び５００ｇの氷で希釈し、次いで２５００ml
の２．２ＮのＮａＯＨをゆっくりと添加した。この溶液が塩基性であることを確
認する検査の後、この生成物を分液ろう斗に移し、そして有機層を除去し、そし
て抽出物＃１としてとっておいた。次いで水性相を３×１２５０mlのＣＨ2 Ｃｌ 2 で抽出し、各抽出物は別々の画分に保っておいた。４つの有機抽出物を画分＃
１から画分＃４の順番で１２５０mlの０．６ＮのＮａＯＨで１回づつ洗った。２
回目のこの洗浄工程を新しい１２５０mlの０．６ＮのＮａＯＨで繰り返した。そ
の有機抽出物を合わせ、そしてＮａ2 ＳＯ4 で乾かした。一定重量に至るまでの
溶媒の濾過及びエバポレーションは８２５ｇのＮ−モノ−ｔ−ＢＯＣ−１，３−
ジアミノプロパンを供し、それは更に精製することなく使用した。
７７mole）の溶液を１２リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコに加え、そして氷浴上
で冷却した。２５０mlのＣＨ2 Ｃｌ2 中のｔ−ブチルフェニルカルボネート１０
００ｇ（５．１５mole）の溶液を反応温度が１５℃未満に保たれる速度で滴下し
た。添加の後、この混合物を室温にまで温め、そして２時間撹拌した。この反応
混合物を９００mlのＣＨ2 Ｃｌ2 及び５００ｇの氷で希釈し、次いで２５００ml
の２．２ＮのＮａＯＨをゆっくりと添加した。この溶液が塩基性であることを確
認する検査の後、この生成物を分液ろう斗に移し、そして有機層を除去し、そし
て抽出物＃１としてとっておいた。次いで水性相を３×１２５０mlのＣＨ2 Ｃｌ 2 で抽出し、各抽出物は別々の画分に保っておいた。４つの有機抽出物を画分＃
１から画分＃４の順番で１２５０mlの０．６ＮのＮａＯＨで１回づつ洗った。２
回目のこの洗浄工程を新しい１２５０mlの０．６ＮのＮａＯＨで繰り返した。そ
の有機抽出物を合わせ、そしてＮａ2 ＳＯ4 で乾かした。一定重量に至るまでの
溶媒の濾過及びエバポレーションは８２５ｇのＮ−モノ−ｔ−ＢＯＣ−１，３−
ジアミノプロパンを供し、それは更に精製することなく使用した。
【００４２】 １０２０mlのＣＨＣｌ3 中の８０６ｇ（５．２３mole）の無水メタクリル酸の
溶液をオーバーヘッドスターラーの付いた１２リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコ
に入れ、そして氷浴上で冷却した。フェノチアジン６０mgをインヒビターとして
加え、次いで８２５mlのＣＨＣｌ3 中のＮ−モノ−ｔ−ＢＯＣ−１，３−ジアミ
ノプロパン８２５ｇ（４．７３mole）を添加した。添加速度は反応温度を毎回１
０℃未満に保つようにコントロールした。添加が完了した後、氷浴を取外し、そ
してその混合物を一夜撹拌しておいた。この生成物を２４００mlの水で希釈し、
そして分液ろう斗に移した。よく混合した後、水性層を除去し、そして有機層を
２４００mlの２ＮのＮａＯＨで洗い、水性層が塩基性であることを確実にした。
その有機層をＮａ2 ＳＯ4 で乾かし、そして濾過して乾燥剤を除去した。ＣＨＣ
ｌ3 溶媒部を減圧で、生成物と溶媒の合計重量が約３０００ｇとなるまで除去し
た。次に所望の生成物を１１．０リットルのヘキサンを撹拌ＣＨＣｌ3 溶液にゆ
っくり添加することにより沈殿させ、次いで４℃で一夜保存した。この生成物を
濾過により単離し、そしてその固体を９００mlのヘキサンと１５０mlのＣＨＣｌ 3 との組合せ溶媒により２回すすいだ。この固体の十分な乾燥はＤＳＣによりm.
p.８５．８℃の９００ｇのＮ−［Ｎ′−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−３−
アミノプロピル］−メタクリルアミドを供した。ＮＭＲスペクトルメーターでの
分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）アミドＮＨ ６．
３０−６．８０、４．５５−５．１０（ｍ，２Ｈ）、ビニルプロトン５．６５、
５．２０（ｍ，２Ｈ）、Ｎに隣接のメチレン２．９０−３．４５（ｍ，４Ｈ）、
メチル１．９５（ｍ，３Ｈ）、残りのメチレン１．５０−１．９０（ｍ，２Ｈ）
及びｔ−ブチル１．４０（ｓ，９Ｈ）。
溶液をオーバーヘッドスターラーの付いた１２リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコ
に入れ、そして氷浴上で冷却した。フェノチアジン６０mgをインヒビターとして
加え、次いで８２５mlのＣＨＣｌ3 中のＮ−モノ−ｔ−ＢＯＣ−１，３−ジアミ
ノプロパン８２５ｇ（４．７３mole）を添加した。添加速度は反応温度を毎回１
０℃未満に保つようにコントロールした。添加が完了した後、氷浴を取外し、そ
してその混合物を一夜撹拌しておいた。この生成物を２４００mlの水で希釈し、
そして分液ろう斗に移した。よく混合した後、水性層を除去し、そして有機層を
２４００mlの２ＮのＮａＯＨで洗い、水性層が塩基性であることを確実にした。
その有機層をＮａ2 ＳＯ4 で乾かし、そして濾過して乾燥剤を除去した。ＣＨＣ
ｌ3 溶媒部を減圧で、生成物と溶媒の合計重量が約３０００ｇとなるまで除去し
た。次に所望の生成物を１１．０リットルのヘキサンを撹拌ＣＨＣｌ3 溶液にゆ
っくり添加することにより沈殿させ、次いで４℃で一夜保存した。この生成物を
濾過により単離し、そしてその固体を９００mlのヘキサンと１５０mlのＣＨＣｌ 3 との組合せ溶媒により２回すすいだ。この固体の十分な乾燥はＤＳＣによりm.
p.８５．８℃の９００ｇのＮ−［Ｎ′−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−３−
アミノプロピル］−メタクリルアミドを供した。ＮＭＲスペクトルメーターでの
分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）アミドＮＨ ６．
３０−６．８０、４．５５−５．１０（ｍ，２Ｈ）、ビニルプロトン５．６５、
５．２０（ｍ，２Ｈ）、Ｎに隣接のメチレン２．９０−３．４５（ｍ，４Ｈ）、
メチル１．９５（ｍ，３Ｈ）、残りのメチレン１．５０−１．９０（ｍ，２Ｈ）
及びｔ−ブチル１．４０（ｓ，９Ｈ）。
【００４３】 三つ口の２リットルの丸底フラスコにオーバーヘッドスターラー及びガススパ
ージチューブを付けた。メタノール７００mlをこのフラスコに加え、そして氷浴
上で冷却した。撹拌しながら、ＨＣｌガスをこの溶媒に約５リットル／分の速度
で全部で４０分吹込んだ。最終ＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液のモル濃度は、インジケー
ターとしてフェノールフタレインを利用する１ＮのＮａＯＨによる滴定により８
．５Ｍと決定された。Ｎ−［Ｎ′−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−３−アミ
ノプロピル］メタクリルアミド９００ｇ（３．７１mole）をオーバーヘッドスタ
ーラー及びガス出口アダプターの付いた５リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコに加
え、次いで１１５０mlのメタノール溶媒を添加した。フラスコ内に残っている多
少の固体はこの溶媒の容積を有する。フェノチアジン３０mgをインヒビターとし
て加え、次いで６５５ml（５．５７mole）の８．５ＭのＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液を
加えた。この固体をガスを発生させながら、しかし反応が発熱しないようにして
ゆっくりと溶解させた。この混合物を室温で一夜撹拌し、反応の完了を確実にし
た。固体を全て濾過により除き、そして更に３０mgのフェノチアジンを添加した
。この溶媒を減圧で除去し、そして得られる固体残渣を３×１０００mlのイソプ
ロパノールと減圧でエバポレーションしながら共沸させた。最後に、この生成物
を２０００mlの還流イソプロパノールに溶かし、そして４０００mlの酢酸エチル
を撹拌しながらゆっくりと添加した。この混合物をゆっくりと冷却し、そして４
℃で一夜保存した。化合物IIを濾過により単離し、そして一定の重量となるまで
乾かし、ＤＳＣにより１２４．７℃の融点を有する生成物を収量６３０ｇで供し
た。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭ
Ｒ（Ｄ2 Ｏ）ビニルプロトン５．６０、５．３０（ｍ，２Ｈ）、アミドのＮに隣
接するメチレン３．３０（ｔ，２Ｈ）、アミンのＮに隣接するメチレン２．９５
（ｔ，２Ｈ）、メチル１．９０（ｍ，３Ｈ）及び残りのメチレン１．６５−２．
１０（ｍ，２Ｈ）。最終化合物を例えば実施例３に記載の光活性化性ポリマーの
合成に利用するモノマーの調製において利用するために保存した。
ージチューブを付けた。メタノール７００mlをこのフラスコに加え、そして氷浴
上で冷却した。撹拌しながら、ＨＣｌガスをこの溶媒に約５リットル／分の速度
で全部で４０分吹込んだ。最終ＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液のモル濃度は、インジケー
ターとしてフェノールフタレインを利用する１ＮのＮａＯＨによる滴定により８
．５Ｍと決定された。Ｎ−［Ｎ′−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−３−アミ
ノプロピル］メタクリルアミド９００ｇ（３．７１mole）をオーバーヘッドスタ
ーラー及びガス出口アダプターの付いた５リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコに加
え、次いで１１５０mlのメタノール溶媒を添加した。フラスコ内に残っている多
少の固体はこの溶媒の容積を有する。フェノチアジン３０mgをインヒビターとし
て加え、次いで６５５ml（５．５７mole）の８．５ＭのＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液を
加えた。この固体をガスを発生させながら、しかし反応が発熱しないようにして
ゆっくりと溶解させた。この混合物を室温で一夜撹拌し、反応の完了を確実にし
た。固体を全て濾過により除き、そして更に３０mgのフェノチアジンを添加した
。この溶媒を減圧で除去し、そして得られる固体残渣を３×１０００mlのイソプ
ロパノールと減圧でエバポレーションしながら共沸させた。最後に、この生成物
を２０００mlの還流イソプロパノールに溶かし、そして４０００mlの酢酸エチル
を撹拌しながらゆっくりと添加した。この混合物をゆっくりと冷却し、そして４
℃で一夜保存した。化合物IIを濾過により単離し、そして一定の重量となるまで
乾かし、ＤＳＣにより１２４．７℃の融点を有する生成物を収量６３０ｇで供し
た。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭ
Ｒ（Ｄ2 Ｏ）ビニルプロトン５．６０、５．３０（ｍ，２Ｈ）、アミドのＮに隣
接するメチレン３．３０（ｔ，２Ｈ）、アミンのＮに隣接するメチレン２．９５
（ｔ，２Ｈ）、メチル１．９０（ｍ，３Ｈ）及び残りのメチレン１．６５−２．
１０（ｍ，２Ｈ）。最終化合物を例えば実施例３に記載の光活性化性ポリマーの
合成に利用するモノマーの調製において利用するために保存した。
【００４４】 実施例３Ｎ−［３−（４−ベンゾイルベンズアミド）プロピル］メチルアクリルアミド（ ＢＢＡ−ＡＰＭＡ）の調製（化合物III ） 実施例２に記載の一般方法に従って調製した化合物II １２０ｇ（０．６７２
mole）をオーバーヘッドスターラーの付いた乾燥した２リットルの三つ口丸底フ
ラスコに加えた。フェノチアジン２３〜２５mgをインヒビターとして加え、次い
で８００mlのクロロホルムを加えた。この懸濁物を氷浴上で１０℃未満に冷却し
、そして実施例１に記載の一般方法に従って調製した化合物Ｉ １７２．５ｇ（
０．７０５mole）を固体として加えた。５０mlのクロロホルム中のトリエチルア
ミン２０７ml（１．４８５mole）を次に１〜１．５時間かけて滴下した。氷浴を
取外し、そして周囲温度での撹拌を２．５時間続けた。次いでこの生成物を６０
０mlの０．３ＮのＨＣｌ及び２×３００mlの０．０７ＮのＨＣｌで洗った。硫酸
ナトリウムで乾燥後、クロロホルムを減圧で除去し、そしてその生成物を４：１
のトルエン：クロロホルムから２回再結晶化させ、各再結晶化においては重合を
防ぐために２３〜２５ｇのフェノチアジンを使用した。化合物III の典型的な収
率は９０％であり、融点は１４７−１５１℃であった。ＮＭＲスペクトルメータ
ーでの分析は所望の生成物を一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロ
トン７．２０−７．９５（ｍ，９Ｈ）、アミドＮＨ ６．５５（ブロードｔ，１
Ｈ）、ビニルプロトン５．６５、５．２５（ｍ，２Ｈ）、アミドのＮに隣接する
メチレン３．２０−３．６０（ｍ，４Ｈ）、メチル１．９５（ｓ，３Ｈ）、及び
残りのメチレン１．５０−２．００（ｍ，２Ｈ）。最終化合物を例えば実施例９
〜１１に記載の光活性化性ポリマーの合成に利用するために保存した。
mole）をオーバーヘッドスターラーの付いた乾燥した２リットルの三つ口丸底フ
ラスコに加えた。フェノチアジン２３〜２５mgをインヒビターとして加え、次い
で８００mlのクロロホルムを加えた。この懸濁物を氷浴上で１０℃未満に冷却し
、そして実施例１に記載の一般方法に従って調製した化合物Ｉ １７２．５ｇ（
０．７０５mole）を固体として加えた。５０mlのクロロホルム中のトリエチルア
ミン２０７ml（１．４８５mole）を次に１〜１．５時間かけて滴下した。氷浴を
取外し、そして周囲温度での撹拌を２．５時間続けた。次いでこの生成物を６０
０mlの０．３ＮのＨＣｌ及び２×３００mlの０．０７ＮのＨＣｌで洗った。硫酸
ナトリウムで乾燥後、クロロホルムを減圧で除去し、そしてその生成物を４：１
のトルエン：クロロホルムから２回再結晶化させ、各再結晶化においては重合を
防ぐために２３〜２５ｇのフェノチアジンを使用した。化合物III の典型的な収
率は９０％であり、融点は１４７−１５１℃であった。ＮＭＲスペクトルメータ
ーでの分析は所望の生成物を一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロ
トン７．２０−７．９５（ｍ，９Ｈ）、アミドＮＨ ６．５５（ブロードｔ，１
Ｈ）、ビニルプロトン５．６５、５．２５（ｍ，２Ｈ）、アミドのＮに隣接する
メチレン３．２０−３．６０（ｍ，４Ｈ）、メチル１．９５（ｓ，３Ｈ）、及び
残りのメチレン１．５０−２．００（ｍ，２Ｈ）。最終化合物を例えば実施例９
〜１１に記載の光活性化性ポリマーの合成に利用するために保存した。
【００４５】 実施例４Ｎ−スクシニミジル６−マレイミドヘキサノエート（ＭＡＬ−ＥＡＣ−ＮＯＣ） の調製（化合物IV） 官能化モノマーを下記の通りにして調製し、そしてポリマーの骨格上に活性化
エステル基を導入するために実施例９及び１２に記載の通りにして利用した。６
−アミノヘキサン酸１００．０ｇ（０．７６２mole）をオーバーヘッドスターラ
ー及び乾燥チューブの付いた三つ口３リットルフラスコ内の３００mlの酢酸に溶
かした。無水マレイン酸７８．５ｇ（０．８０１mole）を２００mlの酢酸に溶か
し、そして６−アミノヘキサン酸溶液に加えた。この混合物を沸騰湯浴上で加熱
しながら１時間撹拌し、白色固体の形成が得られた。室温で一夜冷却後、固体を
濾過により集め、そして２×５０mlのヘキサンですすいだ。乾燥後、（Ｚ）−４
−オキソ−５−アザ−２−ウンデセンジオン酸の典型的な収量は１５８−１６５
ｇ（９０−９５％）であり、融点は１６０−１６５℃であった。ＮＭＲスペクト
ルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）アミドプロトン８．６５−９．０５（ｍ，１Ｈ）、ビニルプロトン６．１０、
６．３０（ｄ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン２．８５−３．２５（ｍ，２Ｈ
）、カルボニルに隣接するメチレン２．１５（ｔ，２Ｈ）、残りのメチレン１．
００−１．７５（ｍ，６Ｈ）。
エステル基を導入するために実施例９及び１２に記載の通りにして利用した。６
−アミノヘキサン酸１００．０ｇ（０．７６２mole）をオーバーヘッドスターラ
ー及び乾燥チューブの付いた三つ口３リットルフラスコ内の３００mlの酢酸に溶
かした。無水マレイン酸７８．５ｇ（０．８０１mole）を２００mlの酢酸に溶か
し、そして６−アミノヘキサン酸溶液に加えた。この混合物を沸騰湯浴上で加熱
しながら１時間撹拌し、白色固体の形成が得られた。室温で一夜冷却後、固体を
濾過により集め、そして２×５０mlのヘキサンですすいだ。乾燥後、（Ｚ）−４
−オキソ−５−アザ−２−ウンデセンジオン酸の典型的な収量は１５８−１６５
ｇ（９０−９５％）であり、融点は１６０−１６５℃であった。ＮＭＲスペクト
ルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）アミドプロトン８．６５−９．０５（ｍ，１Ｈ）、ビニルプロトン６．１０、
６．３０（ｄ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン２．８５−３．２５（ｍ，２Ｈ
）、カルボニルに隣接するメチレン２．１５（ｔ，２Ｈ）、残りのメチレン１．
００−１．７５（ｍ，６Ｈ）。
【００４６】 （Ｚ）−４−オキソ−５−アザ−２−ウンデセンジオン酸１５０．０ｇ（０．
６５４mole）、無水酢酸６８ml（７３．５ｇ、０．７２１mole）及びフェノチア
ジン５００mgをオーバーヘッドスターラーの付いた２リットルの三つ口丸底フラ
スコに加えた。トリエチルアミン９１ml（０．６５３mole）及び６００mlのＴＨ
Ｆを加え、そしてこの混合物を撹拌しながら還流加熱した。全部で４時間の還流
の後、暗色の混合物を＜６０℃に冷却し、そして３リットルの水中の２５０mlの
１２ＮのＨＣｌの溶液に注ぎ入れた。この混合物を室温で３時間撹拌し、次いで
濾過パッド（Celite 545, J.T. Baker, Jackson, TN ) に通して濾過して固体を
除去した。この濾液を４×５００mlのクロロホルムで抽出し、そして合わせた抽
出物を硫酸ナトリウムで乾かした。重合を防ぐために１５mgのフェノチアジンを
添加した後、その溶媒を減圧で除去した。６−マレイミドヘキサン酸を２：１の
ヘキサン：クロロホルムから再結晶化させ、７６−８３ｇ（５５−６０％）の典
型的な収量を供し、融点は８１−８５℃であった。ＮＭＲスペクトルメーターで
の分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）マレイミドプロ
トン６．５５（ｓ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．４０（ｔ，２Ｈ）、カ
ルボニルに隣接するメチレン２．３０（ｔ，２Ｈ）、及び残りのメチレン１．０
５−１．８５（ｍ，６Ｈ）。
６５４mole）、無水酢酸６８ml（７３．５ｇ、０．７２１mole）及びフェノチア
ジン５００mgをオーバーヘッドスターラーの付いた２リットルの三つ口丸底フラ
スコに加えた。トリエチルアミン９１ml（０．６５３mole）及び６００mlのＴＨ
Ｆを加え、そしてこの混合物を撹拌しながら還流加熱した。全部で４時間の還流
の後、暗色の混合物を＜６０℃に冷却し、そして３リットルの水中の２５０mlの
１２ＮのＨＣｌの溶液に注ぎ入れた。この混合物を室温で３時間撹拌し、次いで
濾過パッド（Celite 545, J.T. Baker, Jackson, TN ) に通して濾過して固体を
除去した。この濾液を４×５００mlのクロロホルムで抽出し、そして合わせた抽
出物を硫酸ナトリウムで乾かした。重合を防ぐために１５mgのフェノチアジンを
添加した後、その溶媒を減圧で除去した。６−マレイミドヘキサン酸を２：１の
ヘキサン：クロロホルムから再結晶化させ、７６−８３ｇ（５５−６０％）の典
型的な収量を供し、融点は８１−８５℃であった。ＮＭＲスペクトルメーターで
の分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）マレイミドプロ
トン６．５５（ｓ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．４０（ｔ，２Ｈ）、カ
ルボニルに隣接するメチレン２．３０（ｔ，２Ｈ）、及び残りのメチレン１．０
５−１．８５（ｍ，６Ｈ）。
【００４７】 ６−マレイミドヘキサン酸２０．０ｇ（９４．７mmol）をアルゴン雰囲気下で
１００mlのクロロホルムに溶かし、次いで４１ml（０．４７mole）の塩化オキサ
リルを加えた。室温で２時間撹拌後、溶媒を減圧で除去し、ここで最後の過剰量
の塩化オキサリルを除くために４×２５mlの追加のクロロホルムを使用した。こ
の酸クロリドを１００mlのクロロホルムに溶かし、次いで１２．０ｇ（０．１０
４mol ）のＮ−ヒドロキシスクシニミド及び１６．０ml（０．１１４mol ）のト
リエチルアミンを加えた。室温で一夜撹拌後、その生成物を４×１００mlの水で
洗い、そして硫酸ナトリウムで乾かした。溶媒の除去は２４．０ｇの生成物（８
２％）を供し、それを更に精製することなく使用した。ＮＭＲスペクトルメータ
ーでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）マレイミド
プロトン６．６０（ｓ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．４５（ｔ，２Ｈ）
、スクシニミジルプロトン２．８０（ｓ，４Ｈ）、カルボニルに隣接するメチレ
ン２．５５（ｔ，２Ｈ）、及び残りのメチレン１．１５−２．００（ｍ，６Ｈ）
。最終化合物を例えば実施例９及び１２に記載の通りにして光活性化性ポリマー
の合成に使用するために保存した。
１００mlのクロロホルムに溶かし、次いで４１ml（０．４７mole）の塩化オキサ
リルを加えた。室温で２時間撹拌後、溶媒を減圧で除去し、ここで最後の過剰量
の塩化オキサリルを除くために４×２５mlの追加のクロロホルムを使用した。こ
の酸クロリドを１００mlのクロロホルムに溶かし、次いで１２．０ｇ（０．１０
４mol ）のＮ−ヒドロキシスクシニミド及び１６．０ml（０．１１４mol ）のト
リエチルアミンを加えた。室温で一夜撹拌後、その生成物を４×１００mlの水で
洗い、そして硫酸ナトリウムで乾かした。溶媒の除去は２４．０ｇの生成物（８
２％）を供し、それを更に精製することなく使用した。ＮＭＲスペクトルメータ
ーでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）マレイミド
プロトン６．６０（ｓ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．４５（ｔ，２Ｈ）
、スクシニミジルプロトン２．８０（ｓ，４Ｈ）、カルボニルに隣接するメチレ
ン２．５５（ｔ，２Ｈ）、及び残りのメチレン１．１５−２．００（ｍ，６Ｈ）
。最終化合物を例えば実施例９及び１２に記載の通りにして光活性化性ポリマー
の合成に使用するために保存した。
【００４８】 実施例５Ｎ−スクシニミジル６−メタクリルアミドヘキサノエート（ＭＡ−ＥＡＣ−ＮＯ Ｓ）の調製（化合物Ｖ） 官能化モノマーを下記のようにして調製し、そしてポリマーの骨格上に活性化
エステル基を導入するために実施例１１に記載の通りにして利用した。６−アミ
ノカプロン酸４．００ｇ（３０．５mmol）を乾燥チューブの付いた乾燥丸底フラ
スコに入れた。無水メタクリル酸５．１６ｇ（３３．５mmol）を加え、そしてこ
の混合物を室温で４時間撹拌した。得られる粘性の油をヘキサンで３回砕き、そ
して残りの油をクロロホルムに溶かし、次いで硫酸ナトリウムで乾かした。濾過
及びエバポレーションの後、生成物の一部をシリカゲルフラッシュクラマトグラ
フィーにより、クロロホルム中の１０％のメタノールの溶媒系を用いて精製した
。適当な画分を合わせ、１mgのフェノチアジンを加え、そして溶媒を減圧で除去
した。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）カルボン酸プロトン７．８０−８．２０（ｂ，１Ｈ）、アミ
ドプロトン５．８０−６．２５（ｂ，１Ｈ）、ビニルプロトン５．２０及び５．
５０（ｍ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．００−３．４５（ｍ，２Ｈ）、
カルボニルに隣接するメチレン２．３０（ｔ，２Ｈ）、メチル基１．９５（ｍ，
３Ｈ）及び残りのメチレン１．１０−１．９０（ｍ，６Ｈ）。
エステル基を導入するために実施例１１に記載の通りにして利用した。６−アミ
ノカプロン酸４．００ｇ（３０．５mmol）を乾燥チューブの付いた乾燥丸底フラ
スコに入れた。無水メタクリル酸５．１６ｇ（３３．５mmol）を加え、そしてこ
の混合物を室温で４時間撹拌した。得られる粘性の油をヘキサンで３回砕き、そ
して残りの油をクロロホルムに溶かし、次いで硫酸ナトリウムで乾かした。濾過
及びエバポレーションの後、生成物の一部をシリカゲルフラッシュクラマトグラ
フィーにより、クロロホルム中の１０％のメタノールの溶媒系を用いて精製した
。適当な画分を合わせ、１mgのフェノチアジンを加え、そして溶媒を減圧で除去
した。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）カルボン酸プロトン７．８０−８．２０（ｂ，１Ｈ）、アミ
ドプロトン５．８０−６．２５（ｂ，１Ｈ）、ビニルプロトン５．２０及び５．
５０（ｍ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．００−３．４５（ｍ，２Ｈ）、
カルボニルに隣接するメチレン２．３０（ｔ，２Ｈ）、メチル基１．９５（ｍ，
３Ｈ）及び残りのメチレン１．１０−１．９０（ｍ，６Ｈ）。
【００４９】 ６−メタクリルアミドヘキサン酸３．０３ｇ（１５．２mmol）を３０mlのドラ
イクロロホルムに溶かし、次いで１．９２ｇ（１６．７mmol）のＮ−ヒドロキシ
スクシニミド及び６．２６ｇ（３０．４mmol）の１，３−ジシクロヘキシルカル
ボジイミドを加えた。反応体をドライ雰囲気下で室温で一夜撹拌した。次いで固
体を濾過により除去し、そして一部をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー
により精製した。非極性不純物をクロロホルム溶媒を利用して除去し、次いでク
ロロホルム中の１０％のテトラヒドロフランを利用して所望の生成物を溶出させ
た。適当な画分をプールし、０．２mgのフェノチアジンを加え、そして溶媒を減
圧下でエバポレーションした。不純物として少量の１，３−ジシクロヘキシル尿
素を含むこの生成物を更に精製することなく使用した。ＮＭＲスペクトルメータ
ーでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）アミドプロ
トン５．６０−６．１０（ｂ，１Ｈ）、ビニルプロトン５．２０及び５．５０（
ｍ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．０５−３．４０（ｍ，２Ｈ）、スクシ
ニミジルプロトン２．８０（ｓ，４Ｈ）、カルボニルに隣接するメチレン２．５
５（ｔ，２Ｈ）、メチル１．９０（ｍ，３Ｈ）、及び残りのメチレン１．１０−
１．９０（ｍ，６Ｈ）。最終化合物を例えば実施例１１に記載の通りにして光活
性化性ポリマーの合成に利用するために保存した。
イクロロホルムに溶かし、次いで１．９２ｇ（１６．７mmol）のＮ−ヒドロキシ
スクシニミド及び６．２６ｇ（３０．４mmol）の１，３−ジシクロヘキシルカル
ボジイミドを加えた。反応体をドライ雰囲気下で室温で一夜撹拌した。次いで固
体を濾過により除去し、そして一部をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー
により精製した。非極性不純物をクロロホルム溶媒を利用して除去し、次いでク
ロロホルム中の１０％のテトラヒドロフランを利用して所望の生成物を溶出させ
た。適当な画分をプールし、０．２mgのフェノチアジンを加え、そして溶媒を減
圧下でエバポレーションした。不純物として少量の１，３−ジシクロヘキシル尿
素を含むこの生成物を更に精製することなく使用した。ＮＭＲスペクトルメータ
ーでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）アミドプロ
トン５．６０−６．１０（ｂ，１Ｈ）、ビニルプロトン５．２０及び５．５０（
ｍ，２Ｈ）、窒素に隣接するメチレン３．０５−３．４０（ｍ，２Ｈ）、スクシ
ニミジルプロトン２．８０（ｓ，４Ｈ）、カルボニルに隣接するメチレン２．５
５（ｔ，２Ｈ）、メチル１．９０（ｍ，３Ｈ）、及び残りのメチレン１．１０−
１．９０（ｍ，６Ｈ）。最終化合物を例えば実施例１１に記載の通りにして光活
性化性ポリマーの合成に利用するために保存した。
【００５０】 実施例６４−ブロモメチルベンゾフェノン（ＢＭＢＰ）の調製（化合物VI） ４−メチルベンゾフェノン７５０ｇ（３．８２mole）をオーバーヘッドスター
ラーの付いた５リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコに加え、そして２８５０mlのベ
ンゼンに溶かした。この溶液を還流加熱し、次いで３３０mlのベンゼン中の６１
０ｇ（３．８２mole）のブロミンを滴下した。添加速度は約１．５ml／min とし
、そしてフラスコに９０ワット（９０ジュール／sec ）のハロゲンスポットライ
トで照射して反応を開始させた。１０％の実働サイクル（５秒間オン、４０秒間
オフ）、次いで１時間後の２０％の実働サイクル（１０秒間オン、４０秒間オフ
）を供するようランプと共にタイマーを使用した。添加の終了時に、この生成物
をガスクロマトグラフィーにより分析し、そして７１％の所望の化合物VI、８％
のジブロモ生成物及び２０％の未反応の４−メチルベンゾフェノンを含むことが
認められた。冷却後、反応混合物を１００mlの水中の１０ｇの亜硫酸水素ナトリ
ウムで洗い、次いで３×２００mlの水で洗った。この生成物を硫酸ナトリウムで
乾かし、そして１：３のトルエンから２回再結晶化させた。真空乾燥後、６３５
ｇの化合物VIが単離され、６０％の収率であり、そして１１２−１１４℃の融点
を有した。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した。 1Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，９Ｈ）及びベ
ンジルプロトン４．４８（ｓ，２Ｈ）。最終化合物を実施例７に記載の通りにし
て光活性化性連鎖移動剤の調製に利用するために保存した。
ラーの付いた５リットルのＭｏｒｔｏｎフラスコに加え、そして２８５０mlのベ
ンゼンに溶かした。この溶液を還流加熱し、次いで３３０mlのベンゼン中の６１
０ｇ（３．８２mole）のブロミンを滴下した。添加速度は約１．５ml／min とし
、そしてフラスコに９０ワット（９０ジュール／sec ）のハロゲンスポットライ
トで照射して反応を開始させた。１０％の実働サイクル（５秒間オン、４０秒間
オフ）、次いで１時間後の２０％の実働サイクル（１０秒間オン、４０秒間オフ
）を供するようランプと共にタイマーを使用した。添加の終了時に、この生成物
をガスクロマトグラフィーにより分析し、そして７１％の所望の化合物VI、８％
のジブロモ生成物及び２０％の未反応の４−メチルベンゾフェノンを含むことが
認められた。冷却後、反応混合物を１００mlの水中の１０ｇの亜硫酸水素ナトリ
ウムで洗い、次いで３×２００mlの水で洗った。この生成物を硫酸ナトリウムで
乾かし、そして１：３のトルエンから２回再結晶化させた。真空乾燥後、６３５
ｇの化合物VIが単離され、６０％の収率であり、そして１１２−１１４℃の融点
を有した。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した。 1Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，９Ｈ）及びベ
ンジルプロトン４．４８（ｓ，２Ｈ）。最終化合物を実施例７に記載の通りにし
て光活性化性連鎖移動剤の調製に利用するために保存した。
【００５１】 実施例７Ｎ−（２−メルカプトエチル）−３，５−ビス（４−ベンゾイルベンジルオキシ ）ベンズアミドの調製（化合物VII ） ３，５−ジヒドロキシ安息香酸４６．２ｇ（０．３０mol ）をソクスレーエキ
トラクター及びコンデンサーの付いた２５０mlのフラスコの中に秤量した。メタ
ノール４８．６ml及び濃硫酸０．８mlをフラスコに加え、そして４８ｇの３Ａモ
レキュラーシーブをソクスレーエキトラクターに入れた。このエキストラクター
をメタノールで満たし、そしてこの混合物を一夜還流加熱した。得られる生成物
のガスクロマトグラフィー分析は所望のメチルエステルへの９８％の転換率を示
した。溶媒を減圧で除去して約５９ｇの粗生成物を得た。この生成物を以下の工
程に更に精製することなく使用した。少量のサンプルを予めＮＭＲ分析のために
精製し、所望の生成物と一致するスペクトルが得られた： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ6 ）芳香族プロトン６．７５（ｄ，２Ｈ）及び６．３８（ｔ，１Ｈ）及び
メチルエステル３．７５（ｓ，３Ｈ）。
トラクター及びコンデンサーの付いた２５０mlのフラスコの中に秤量した。メタ
ノール４８．６ml及び濃硫酸０．８mlをフラスコに加え、そして４８ｇの３Ａモ
レキュラーシーブをソクスレーエキトラクターに入れた。このエキストラクター
をメタノールで満たし、そしてこの混合物を一夜還流加熱した。得られる生成物
のガスクロマトグラフィー分析は所望のメチルエステルへの９８％の転換率を示
した。溶媒を減圧で除去して約５９ｇの粗生成物を得た。この生成物を以下の工
程に更に精製することなく使用した。少量のサンプルを予めＮＭＲ分析のために
精製し、所望の生成物と一致するスペクトルが得られた： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ6 ）芳香族プロトン６．７５（ｄ，２Ｈ）及び６．３８（ｔ，１Ｈ）及び
メチルエステル３．７５（ｓ，３Ｈ）。
【００５２】 以上に由来する全メチルエステル生成物をオーバーヘッドスターラー及びコン
デンサーの付いた２リットルのフラスコに入れ、次いで実施例６に記載の一般方
法に従って調製した１７３．２５ｇ（０．６３mol ）の化合物VI、２０７ｇ（１
．５０mol ）の炭酸カリウム及び１２００mlのアセトンを添加した。得られる混
合物を一夜還流し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）による指示に従い完全な
反応が得られた。この固体を濾過により除去し、そしてアセトンを減圧でエバポ
レーションして４９ｇの粗生成物が得られた。この固体を１リットルの水に希釈
し、そして３×１リットルのクロロホルムで抽出した。その抽出物をアセトン可
溶性画分と合わせ、そして硫酸ナトリウムで乾かし、１７７ｇの粗生成物が得ら
れた。この生成物をアセトニトリルから再結晶化させ、１５０．２ｇの白色固体
が得られ、最初の２工程では９０％の収率であった。この生成物の融点は１３１
．５℃（ＤＳＣ）であり、ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と
一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２５−７．８０（ｍ
，１８Ｈ）、７．１５（ｄ，２Ｈ）及び６．７０（ｔ，１Ｈ）、ベンジルプロト
ン５．０５（ｓ，４Ｈ）及びメチルエステル３．８５（ｓ，３Ｈ）。
デンサーの付いた２リットルのフラスコに入れ、次いで実施例６に記載の一般方
法に従って調製した１７３．２５ｇ（０．６３mol ）の化合物VI、２０７ｇ（１
．５０mol ）の炭酸カリウム及び１２００mlのアセトンを添加した。得られる混
合物を一夜還流し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）による指示に従い完全な
反応が得られた。この固体を濾過により除去し、そしてアセトンを減圧でエバポ
レーションして４９ｇの粗生成物が得られた。この固体を１リットルの水に希釈
し、そして３×１リットルのクロロホルムで抽出した。その抽出物をアセトン可
溶性画分と合わせ、そして硫酸ナトリウムで乾かし、１７７ｇの粗生成物が得ら
れた。この生成物をアセトニトリルから再結晶化させ、１５０．２ｇの白色固体
が得られ、最初の２工程では９０％の収率であった。この生成物の融点は１３１
．５℃（ＤＳＣ）であり、ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と
一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２５−７．８０（ｍ
，１８Ｈ）、７．１５（ｄ，２Ｈ）及び６．７０（ｔ，１Ｈ）、ベンジルプロト
ン５．０５（ｓ，４Ｈ）及びメチルエステル３．８５（ｓ，３Ｈ）。
【００５３】 メチル３，５−ビス（４−ベンゾイルベンジルオキシ）ベンゾエート６０．０
５ｇ（０．１０８mol ）を２リットルのフラスコに入れ、次いで１２０mlの水、
４８０mlのメタノール及び６．４８ｇ（０．１６２mmol）の水酸化ナトリウムを
添加した。この混合物を３時間還流し、エステルの加水分解を完了させた。冷却
後、メタノールを減圧除去し、そして酸のナトリウム塩を２４００mlの温水に溶
かした。この酸を濃塩酸を用いて沈殿させ、濾過し、水で洗い、そして真空オー
ブンで乾かして５８．２ｇの白色固体（収率９９％）を得た。この生成物の融点
は１８８．３℃（ＤＳＣ）であり、そしてＮＭＲスペクトルメーターでの分析は
所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）芳香族プロトン７．
３０−７．８０（ｍ，１８Ｈ）、７．１５（ｄ，２Ｈ）及び６．９０（ｔ，１Ｈ
）及びベンジルプロトン５．２２（ｓ，４Ｈ）。
５ｇ（０．１０８mol ）を２リットルのフラスコに入れ、次いで１２０mlの水、
４８０mlのメタノール及び６．４８ｇ（０．１６２mmol）の水酸化ナトリウムを
添加した。この混合物を３時間還流し、エステルの加水分解を完了させた。冷却
後、メタノールを減圧除去し、そして酸のナトリウム塩を２４００mlの温水に溶
かした。この酸を濃塩酸を用いて沈殿させ、濾過し、水で洗い、そして真空オー
ブンで乾かして５８．２ｇの白色固体（収率９９％）を得た。この生成物の融点
は１８８．３℃（ＤＳＣ）であり、そしてＮＭＲスペクトルメーターでの分析は
所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）芳香族プロトン７．
３０−７．８０（ｍ，１８Ｈ）、７．１５（ｄ，２Ｈ）及び６．９０（ｔ，１Ｈ
）及びベンジルプロトン５．２２（ｓ，４Ｈ）。
【００５４】 ３，５−ビス（４−ベンゾイルベンジルオキシ）安息香酸２０．０ｇ（３６．
８６mmol）を２５０mlのフラスコに加え、次いで３６mlのトルエン、５．４ml（
７４．０mmol）の塩化チオニル及び２８μｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを
添加した。この混合物を４時間還流し、酸クロリドを形成した。冷却後、溶媒及
び過剰の塩化チオニルを減圧で除去した。残留塩化チオニルを２０mlづつのクロ
ロホルムを用いながらの４回の更なるエバポレーションにより除去した。その粗
材料をトルエンから再結晶化させ、１８．４５ｇの生成物、収率８９％を得た。
この生成物の融点は１２６．９℃（ＤＳＣ）であり、ＮＭＲスペクトルメーター
での分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロト
ン７．３０−７．８０（ｍ，１８Ｈ）、７．２５（ｄ，２Ｈ）、及び６．８５（
ｔ，１Ｈ）、及びベンジルプロトン５．１０（ｓ，４Ｈ）。
８６mmol）を２５０mlのフラスコに加え、次いで３６mlのトルエン、５．４ml（
７４．０mmol）の塩化チオニル及び２８μｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを
添加した。この混合物を４時間還流し、酸クロリドを形成した。冷却後、溶媒及
び過剰の塩化チオニルを減圧で除去した。残留塩化チオニルを２０mlづつのクロ
ロホルムを用いながらの４回の更なるエバポレーションにより除去した。その粗
材料をトルエンから再結晶化させ、１８．４５ｇの生成物、収率８９％を得た。
この生成物の融点は１２６．９℃（ＤＳＣ）であり、ＮＭＲスペクトルメーター
での分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロト
ン７．３０−７．８０（ｍ，１８Ｈ）、７．２５（ｄ，２Ｈ）、及び６．８５（
ｔ，１Ｈ）、及びベンジルプロトン５．１０（ｓ，４Ｈ）。
【００５５】 ２−アミノエタンジオール塩酸塩４．１９ｇ（３６．７mmol）をオーバーヘッ
ドスターラーの付いた２５０mlのフラスコに加え、次いで１５mlのクロロホルム
及び１０．６４ml（７６．５mmol）のトリエチルアミンを加えた。このアミン溶
液を氷浴上で冷却後、５０mlのクロロホルム中の３，５−ビス（４−ベンゾイル
ベンジルオキシ）ベンゾイルクロリド１８．４ｇ（３２．８mmol）の溶液を５０
分かけて滴下した。水上での冷却を３０分続け、次いで室温に２時間温めた。こ
の生成物を１５０mlのクロロホルムで希釈し、そして５×２５０mlの０．１Ｎの
塩酸で洗った。この生成物を硫酸ナトリウムで乾かし、そして１５：１のトルエ
ン：ヘキサンで２回再結晶化させ、１３．３ｇの生成物、収率６７％を得た。こ
の生成物の融点は１１５．９℃（ＤＳＣ）であり、そしてＮＭＲスペクトルメー
ターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）芳香
族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，１８Ｈ）、６．９８（ｄ，２Ｈ）及び６．
６５（ｔ，１Ｈ）、アミドＮＨ６．５５（ブロードｔ，２Ｈ）、ベンジルプロト
ン５．１０（ｓ，４Ｈ）、アミドのＮに隣接するメチレン３．５２（ｑ，２Ｈ）
、ＳＨに隣接するメチレン２．１０（ｑ，２Ｈ）及びＳＨ１．３８（ｔ，１Ｈ）
。最終化合物を例えば実施例１２に記載の通りにして光活性化性ポリマーの合成
における連鎖移動剤として利用するために保存した。
ドスターラーの付いた２５０mlのフラスコに加え、次いで１５mlのクロロホルム
及び１０．６４ml（７６．５mmol）のトリエチルアミンを加えた。このアミン溶
液を氷浴上で冷却後、５０mlのクロロホルム中の３，５−ビス（４−ベンゾイル
ベンジルオキシ）ベンゾイルクロリド１８．４ｇ（３２．８mmol）の溶液を５０
分かけて滴下した。水上での冷却を３０分続け、次いで室温に２時間温めた。こ
の生成物を１５０mlのクロロホルムで希釈し、そして５×２５０mlの０．１Ｎの
塩酸で洗った。この生成物を硫酸ナトリウムで乾かし、そして１５：１のトルエ
ン：ヘキサンで２回再結晶化させ、１３．３ｇの生成物、収率６７％を得た。こ
の生成物の融点は１１５．９℃（ＤＳＣ）であり、そしてＮＭＲスペクトルメー
ターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）芳香
族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，１８Ｈ）、６．９８（ｄ，２Ｈ）及び６．
６５（ｔ，１Ｈ）、アミドＮＨ６．５５（ブロードｔ，２Ｈ）、ベンジルプロト
ン５．１０（ｓ，４Ｈ）、アミドのＮに隣接するメチレン３．５２（ｑ，２Ｈ）
、ＳＨに隣接するメチレン２．１０（ｑ，２Ｈ）及びＳＨ１．３８（ｔ，１Ｈ）
。最終化合物を例えば実施例１２に記載の通りにして光活性化性ポリマーの合成
における連鎖移動剤として利用するために保存した。
【００５６】 実施例８Ｎ−スクシニミジル１１−（４−ベンゾイルベンズアミド）ウンデカノエート（ ＢＢＡ−ＡＵＤ−ＮＯＳ）の調製（化合物VIII） 実施例１に記載の一般方法に従って調製した化合物Ｉ（５０ｇ、０．２０４mo
l ）を２５００mlのクロロホルムに溶かし、次いで１５００mlの水中の４３．１
ｇ（０．２１４mol ）の１１−アミノウンデカン酸及び６０．０ｇ（１．５mol
）の水酸化ナトリウムの溶液を添加した。この混合物を５リットルのＭｏｒｔｏ
ｎフラスコの中で１時間強く撹拌し、２層の十分な混合を確実なものとした。こ
の混合物を２５０mlの濃塩酸で酸性にし、そして更に３０分撹拌した。その有機
層を分離し、そして水性層を３×５００mlのクロロホルムで抽出した。合わせた
有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾かし、濾過し、そしてエバポレーションして固
体を得た。その生成物をトルエンから再結晶化させ、６８．３７ｇ（８２％）の
１１−（４−ベンゾイルベンズアミド）ウンデカン酸が得られ、融点は１０７−
１０９℃であった。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致し
た： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，９Ｈ
）、アミドＮＨ６．３０（ブロードｔ，１Ｈ）、アミドのＮに隣接するメチレン
３．３５（ｍ，２Ｈ）、カルボニルに隣接するメチレン２．２５（ｔ，２Ｈ）及
び残りのメチレン１．００−１．８０（ｍ，１６Ｈ）。
l ）を２５００mlのクロロホルムに溶かし、次いで１５００mlの水中の４３．１
ｇ（０．２１４mol ）の１１−アミノウンデカン酸及び６０．０ｇ（１．５mol
）の水酸化ナトリウムの溶液を添加した。この混合物を５リットルのＭｏｒｔｏ
ｎフラスコの中で１時間強く撹拌し、２層の十分な混合を確実なものとした。こ
の混合物を２５０mlの濃塩酸で酸性にし、そして更に３０分撹拌した。その有機
層を分離し、そして水性層を３×５００mlのクロロホルムで抽出した。合わせた
有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾かし、濾過し、そしてエバポレーションして固
体を得た。その生成物をトルエンから再結晶化させ、６８．３７ｇ（８２％）の
１１−（４−ベンゾイルベンズアミド）ウンデカン酸が得られ、融点は１０７−
１０９℃であった。ＮＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致し
た： 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，９Ｈ
）、アミドＮＨ６．３０（ブロードｔ，１Ｈ）、アミドのＮに隣接するメチレン
３．３５（ｍ，２Ｈ）、カルボニルに隣接するメチレン２．２５（ｔ，２Ｈ）及
び残りのメチレン１．００−１．８０（ｍ，１６Ｈ）。
【００５７】 １１−（４−ベンゾイルベンズアミド）ウンデカン酸６０．０ｇ（０．１４６
mol ）をオーブン乾燥した２０００mlのフラスコ内の１２００mlの無水１，４−
ジオキサンの中に温めながら溶解した。室温にまで冷却後、１７．７ｇ（０．１
５４mol ）のＮ−ヒドロキシスクシニミド及び３３．２ｇ（０．１６１mol ）の
１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドをこの溶液に加え、そしてこの混合物
を乾燥雰囲気下で一夜撹拌した。固体を濾過により除去し、フィルターケーキを
１，４−ジオキサンですすいだ。この溶媒を真空下で除去し、そしてその生成物
をエタノールから２回再結晶化させた。真空オーブンの中で十分に乾燥後、５３
．８９ｇ（収率７３％）の白色固体が得られ、融点は９７−９９℃であった。Ｎ
ＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（Ｃ
ＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，９Ｈ）、アミドＮＨ６．２
５（ブロードｔ，１Ｈ）、アミドのＮに隣接するメチレン３．３５（ｍ，２Ｈ）
、スクシニミジル環上のメチレン２．７５（ｓ，４Ｈ）、カルボニルに隣接する
メチレン２．５５（ｔ，２Ｈ）、及び残りのメチレン１．００−１．９０（ｍ，
１６Ｈ）。
mol ）をオーブン乾燥した２０００mlのフラスコ内の１２００mlの無水１，４−
ジオキサンの中に温めながら溶解した。室温にまで冷却後、１７．７ｇ（０．１
５４mol ）のＮ−ヒドロキシスクシニミド及び３３．２ｇ（０．１６１mol ）の
１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドをこの溶液に加え、そしてこの混合物
を乾燥雰囲気下で一夜撹拌した。固体を濾過により除去し、フィルターケーキを
１，４−ジオキサンですすいだ。この溶媒を真空下で除去し、そしてその生成物
をエタノールから２回再結晶化させた。真空オーブンの中で十分に乾燥後、５３
．８９ｇ（収率７３％）の白色固体が得られ、融点は９７−９９℃であった。Ｎ
ＭＲスペクトルメーターでの分析は所望の生成物と一致した： 1Ｈ ＮＭＲ（Ｃ
ＤＣｌ3 ）芳香族プロトン７．２０−７．８０（ｍ，９Ｈ）、アミドＮＨ６．２
５（ブロードｔ，１Ｈ）、アミドのＮに隣接するメチレン３．３５（ｍ，２Ｈ）
、スクシニミジル環上のメチレン２．７５（ｓ，４Ｈ）、カルボニルに隣接する
メチレン２．５５（ｔ，２Ｈ）、及び残りのメチレン１．００−１．９０（ｍ，
１６Ｈ）。
【００５８】 実施例９アクリルアミド、ＢＢＡ−ＡＰＭＡ及びＭＡＬ−ＥＡＣ−ＮＯＳのコポリマー（ ランダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ）の調製（化合物IX、Ａ−Ｃ） 本発明の光活性化性コポリマーは下記のようにして調製した。アクリルアミド
４．２９８ｇ（６０．５mmol）を５７．８mlのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に
溶解し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．２１９ｇ（０．
６３mmol）の化合物III 、実施例４に記載の一般方法に従って調製した０．４８
３ｇ（１．５７mmol）の化合物IV、０．０５８ml（０．３９mmol）のＮ，Ｎ，Ｎ
′，Ｎ′−テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）及び０．１５４ｇ（０
．９４mmol）の２，２′−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）を溶解した
。この溶液を３分間のヘリウムスパージ、その後の更に３分間のアルゴンスパー
ジにより脱酸素した。次いでシールをした槽を６０℃で一夜加熱し、重合を完了
させた。その固体生成物を濾過により単離し、そしてフィルターケーキをＴＨＦ
及びＣＨＣｌ3 でよくすすいだ。この生成物を真空オーブン内で３０℃で乾かし
、５．３４ｇの白色固体を得た。ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）は２．７５ppm
でのＮＯＳ基の存在を確証し、そして光学基負荷量は０．１１８mmolのＢＢＡ／
１ｇのポリマーと決定された。ＭＡＬ−ＥＡＣ−ＮＯＳは化合物IX−Ａを供する
ようこの反応において２．５モル％の重合性モノマーを占める。
４．２９８ｇ（６０．５mmol）を５７．８mlのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に
溶解し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．２１９ｇ（０．
６３mmol）の化合物III 、実施例４に記載の一般方法に従って調製した０．４８
３ｇ（１．５７mmol）の化合物IV、０．０５８ml（０．３９mmol）のＮ，Ｎ，Ｎ
′，Ｎ′−テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）及び０．１５４ｇ（０
．９４mmol）の２，２′−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）を溶解した
。この溶液を３分間のヘリウムスパージ、その後の更に３分間のアルゴンスパー
ジにより脱酸素した。次いでシールをした槽を６０℃で一夜加熱し、重合を完了
させた。その固体生成物を濾過により単離し、そしてフィルターケーキをＴＨＦ
及びＣＨＣｌ3 でよくすすいだ。この生成物を真空オーブン内で３０℃で乾かし
、５．３４ｇの白色固体を得た。ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）は２．７５ppm
でのＮＯＳ基の存在を確証し、そして光学基負荷量は０．１１８mmolのＢＢＡ／
１ｇのポリマーと決定された。ＭＡＬ−ＥＡＣ−ＮＯＳは化合物IX−Ａを供する
ようこの反応において２．５モル％の重合性モノマーを占める。
【００５９】 上記の手順を５モル％の化合物IVを有するポリマーを調製するために利用した
。アクリルアミド３．８４９ｇ（５４．１mmol）を５２．９mlのＴＨＦに溶かし
、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．２１３ｇ（０．６１mm
ol）の化合物VI、実施例４に記載の一般方法に従って調製した０．９３８ｇ（３
．０４mmol）の化合物IV、０．０５３ml（０．３５mmol）のＴＥＭＥＤ及び０．
１４２ｇ（０．８６mmol）のＡＩＢＮを溶解した。得られる固体、化合物IX−Ｂ
を前述の通りに単離すると、４．９３５ｇの生成物が得られ、光学基負荷量は０
．１０１mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
。アクリルアミド３．８４９ｇ（５４．１mmol）を５２．９mlのＴＨＦに溶かし
、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．２１３ｇ（０．６１mm
ol）の化合物VI、実施例４に記載の一般方法に従って調製した０．９３８ｇ（３
．０４mmol）の化合物IV、０．０５３ml（０．３５mmol）のＴＥＭＥＤ及び０．
１４２ｇ（０．８６mmol）のＡＩＢＮを溶解した。得られる固体、化合物IX−Ｂ
を前述の通りに単離すると、４．９３５ｇの生成物が得られ、光学基負荷量は０
．１０１mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
【００６０】 上記の手順を１０モル％の化合物IVを有するポリマーを調製するために利用し
た。アクリルアミド３．２４１ｇ（４５．６mmol）を４６．４mlのＴＨＦに溶解
し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．１７９ｇ（０．５１
mmol）の化合物III 、実施例４に記載の一般方法に従って調製した１．５７９ｇ
（５．１２mmol）の化合物IV、０．０４７ml（０．３１mmol）のＴＥＭＥＤ及び
０．１２６ｇ（０．７７mmol）のＡＩＢＮを溶解した。得られる固体、化合物IX
−Ｃを上記の通りに単離すると、４．７５８ｇの生成物が得られ、光学基負荷量
は０．０９８mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
た。アクリルアミド３．２４１ｇ（４５．６mmol）を４６．４mlのＴＨＦに溶解
し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．１７９ｇ（０．５１
mmol）の化合物III 、実施例４に記載の一般方法に従って調製した１．５７９ｇ
（５．１２mmol）の化合物IV、０．０４７ml（０．３１mmol）のＴＥＭＥＤ及び
０．１２６ｇ（０．７７mmol）のＡＩＢＮを溶解した。得られる固体、化合物IX
−Ｃを上記の通りに単離すると、４．７５８ｇの生成物が得られ、光学基負荷量
は０．０９８mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
【００６１】 実施例１０アクリルアミド、ＢＢＡ−ＡＰＭＡ及び〔３−（メタクリロイルアミノ）プロピ ル〕トリメチルアンモニウムクロリドのコポリマー（ランダムフォトＰＡ−ポリ Ｑｕａｔ）の調製（化合物Ｘ、Ａ−Ｂ） 本発明の光活性化性コポリマーを下記のようにして調製した。アクリルアミド
１０．６８１ｇ（０．１５０mol ）を１５０mlのジメチルスルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）に溶解し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．５９２ｇ
（１．６９mmol）の化合物III 、７．０８mlの５０％の水性溶液として導入する
３．７２７ｇ（１６．９０mmol）の〔３−（メタクリロイルアミノ）プロピル〕
トリメチルアンモニウムクロリド（ＭＡＰＴＡＣ）、０．１６９ml（１．１２mm
ol）のＴＥＭＥＤ及び０．３３３ｇ（２．０３mmol）のＡＩＢＮを溶解した。こ
の溶液を４分間のヘリウムスパージ、次いで更に４分間のアルゴンスパージで脱
酸素した。シールした槽を次に５５℃で一夜加熱し、重合を完了させた。このＤ
ＭＳＯ溶液を水で希釈し、そして１２，０００−１４，０００の分子量カットオ
フチューブを利用して水に対して透析した。得られる溶液の凍結乾燥は１４．２
１ｇの白色固体を供した。ＮＭＲ分析（Ｄ2 Ｏ）は第四アンモニウム基上での３
．１０ppm のメチル基の存在を示し、そして光学基負荷量は０．１０１mmolのＢ
ＢＡ／１ｇのポリマーと決定された。化合物III は化合物Ｘ−Ａを供するこの反
応において重合性モノマーの１モル％を占めた。
１０．６８１ｇ（０．１５０mol ）を１５０mlのジメチルスルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）に溶解し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した０．５９２ｇ
（１．６９mmol）の化合物III 、７．０８mlの５０％の水性溶液として導入する
３．７２７ｇ（１６．９０mmol）の〔３−（メタクリロイルアミノ）プロピル〕
トリメチルアンモニウムクロリド（ＭＡＰＴＡＣ）、０．１６９ml（１．１２mm
ol）のＴＥＭＥＤ及び０．３３３ｇ（２．０３mmol）のＡＩＢＮを溶解した。こ
の溶液を４分間のヘリウムスパージ、次いで更に４分間のアルゴンスパージで脱
酸素した。シールした槽を次に５５℃で一夜加熱し、重合を完了させた。このＤ
ＭＳＯ溶液を水で希釈し、そして１２，０００−１４，０００の分子量カットオ
フチューブを利用して水に対して透析した。得られる溶液の凍結乾燥は１４．２
１ｇの白色固体を供した。ＮＭＲ分析（Ｄ2 Ｏ）は第四アンモニウム基上での３
．１０ppm のメチル基の存在を示し、そして光学基負荷量は０．１０１mmolのＢ
ＢＡ／１ｇのポリマーと決定された。化合物III は化合物Ｘ−Ａを供するこの反
応において重合性モノマーの１モル％を占めた。
【００６２】 上記の手順を２モル％の化合物III を有するポリマーの調製のために用いた。
アクリルアミド１０．２３７ｇ（０．１４４mol ）を１４５mlのＤＭＳＯに溶解
し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した１．１４８ｇ（３．２７
７mmol）の化合物III 、７．２３mlの５０％の水性溶液として導入する３．８０
７ｇ（１７．２４mmol）のＭＡＰＴＡＣ、０．１６４ml（１．０９mmol）のＴＥ
ＭＥＤ及び０．３２２ｇ（１．９６mmol）のＡＩＢＮを溶解した。上記の通りの
作業は１２．５４ｇの生成物（化合物Ｘ−Ｂ）を供し、光学基負荷量は０．１７
６mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
アクリルアミド１０．２３７ｇ（０．１４４mol ）を１４５mlのＤＭＳＯに溶解
し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した１．１４８ｇ（３．２７
７mmol）の化合物III 、７．２３mlの５０％の水性溶液として導入する３．８０
７ｇ（１７．２４mmol）のＭＡＰＴＡＣ、０．１６４ml（１．０９mmol）のＴＥ
ＭＥＤ及び０．３２２ｇ（１．９６mmol）のＡＩＢＮを溶解した。上記の通りの
作業は１２．５４ｇの生成物（化合物Ｘ−Ｂ）を供し、光学基負荷量は０．１７
６mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
【００６３】 実施例１１アクリルアミド、ＢＢＡ−ＡＰＭＡ、ＭＡ−ＥＡＣ−ＮＯＳ及び〔３−（メタク リロイルアミノ）プロピル〕トリメチルアンモニウムクロリドのコポリマー（ラ ンダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ−ポリＱｕａｔ）の調製（化合物XI） 本発明の光活性化性コポリマーを下記のようにして調製した。市販の５０％の
水性ＭＡＰＴＡＣ中の水をクロロホルムとの共沸蒸留により除去した。１０．８
８ｇのＭＡＰＴＡＣを含む水性ＭＡＰＴＡＣ溶液を２０mlのＤＭＳＯ及び１００
mlのクロロホルムで希釈した。この混合物を無水硫酸ナトリウムを含む水より重
い液−液エキストラクターへと全部で８０分間還流した。ゆっくりとしたエアフ
ローを還流の間維持し、モノマーの重合を防いだ。還流の終了時に、過剰のクロ
ロホルムを減圧で除去してＭＡＰＴＡＣのＤＭＳＯ溶液を約３５２mg／mlの濃度
にした。
水性ＭＡＰＴＡＣ中の水をクロロホルムとの共沸蒸留により除去した。１０．８
８ｇのＭＡＰＴＡＣを含む水性ＭＡＰＴＡＣ溶液を２０mlのＤＭＳＯ及び１００
mlのクロロホルムで希釈した。この混合物を無水硫酸ナトリウムを含む水より重
い液−液エキストラクターへと全部で８０分間還流した。ゆっくりとしたエアフ
ローを還流の間維持し、モノマーの重合を防いだ。還流の終了時に、過剰のクロ
ロホルムを減圧で除去してＭＡＰＴＡＣのＤＭＳＯ溶液を約３５２mg／mlの濃度
にした。
【００６４】 アクリルアミド１．７ｇ（２３．９０mmol）を５７．７mlのジメチルスルホキ
シド（ＤＭＳＯ）に溶解し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した
０．２１５ｇ（０．６１４mmol）の化合物III 、１．９３ml（０．６７７ｇ、３
．０６７mmol）の上記のＭＡＰＴＡＣ／ＤＭＳＯ溶液、実施例５に記載の一般方
法に従って調製した０．９１ｇ（３．０６８mmol）の化合物Ｖ、及び０．０６０
ｇ（０．３６５mmol）のＡＩＢＮを溶解した。この溶液を４分間のヘリウムスパ
ージ、次いで更に４分間のアルゴンスパージにより脱酸素した。シールした槽を
５５℃で一夜加熱し、重合を完了させた。この反応混合物を６００mlのジエチル
エーテルに注ぎ入れることによりポリマーを単離した。これらの固体を遠心分離
により分離し、そしてその生成物を２００mlのジエチルエーテル及び２００mlの
クロロホルムで洗った。真空下の溶媒のエバポレーションは３．２７８ｇの生成
物を供し、光学基負荷量は０．１８５mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
シド（ＤＭＳＯ）に溶解し、次いで実施例３に記載の一般方法に従って調製した
０．２１５ｇ（０．６１４mmol）の化合物III 、１．９３ml（０．６７７ｇ、３
．０６７mmol）の上記のＭＡＰＴＡＣ／ＤＭＳＯ溶液、実施例５に記載の一般方
法に従って調製した０．９１ｇ（３．０６８mmol）の化合物Ｖ、及び０．０６０
ｇ（０．３６５mmol）のＡＩＢＮを溶解した。この溶液を４分間のヘリウムスパ
ージ、次いで更に４分間のアルゴンスパージにより脱酸素した。シールした槽を
５５℃で一夜加熱し、重合を完了させた。この反応混合物を６００mlのジエチル
エーテルに注ぎ入れることによりポリマーを単離した。これらの固体を遠心分離
により分離し、そしてその生成物を２００mlのジエチルエーテル及び２００mlの
クロロホルムで洗った。真空下の溶媒のエバポレーションは３．２７８ｇの生成
物を供し、光学基負荷量は０．１８５mmolのＢＢＡ／１ｇのポリマーであった。
【００６５】 実施例１２Ｎ−（２−メルカプトエチル）−３，５−ビス（４−ベンゾイルベンジルオキシ ）ベンズアミドを利用するアクリルアミド及びＭＡＬ−ＥＡＣ−ＮＯＳのコポリ マー（終点ジフォトＰＡ−ポリＮＯＳ）（化合物XII ） 本発明の光活性化性コポリマーを下記のようにして調製した。アクリルアミド
３．１６ｇ（４４．５mmol）を４５．０mlのテトラヒドロフランに溶解し、次い
で０．１６４ｇ（１mmol）のＡＩＢＮ、０．０４５ml（０．３０mmol）のＴＥＭ
ＥＤ、実施例７に記載の一般方法に従って調製した０．３０１ｇ（０．５mmol）
の化合物VII 及び実施例４に記載の一般方法に従って調製した１．５３９ｇ（５
mmol）の化合物IVを溶解した。この溶液を４分間のヘリウムスパージ、次いで更
に４分間のアルゴンスパージにより脱酸素した。シールした槽を５５℃で一夜加
熱して重合を完了させた。沈殿ポリマーを濾過により単離し、そしてクロロホル
ムで洗浄した。最終生成物を真空オーブンで乾かし、０．０１１mmolのＢＢＡ／
１ｇのポリマーの光学基負荷量を有する４．７２７ｇのポリマーが得られた。
３．１６ｇ（４４．５mmol）を４５．０mlのテトラヒドロフランに溶解し、次い
で０．１６４ｇ（１mmol）のＡＩＢＮ、０．０４５ml（０．３０mmol）のＴＥＭ
ＥＤ、実施例７に記載の一般方法に従って調製した０．３０１ｇ（０．５mmol）
の化合物VII 及び実施例４に記載の一般方法に従って調製した１．５３９ｇ（５
mmol）の化合物IVを溶解した。この溶液を４分間のヘリウムスパージ、次いで更
に４分間のアルゴンスパージにより脱酸素した。シールした槽を５５℃で一夜加
熱して重合を完了させた。沈殿ポリマーを濾過により単離し、そしてクロロホル
ムで洗浄した。最終生成物を真空オーブンで乾かし、０．０１１mmolのＢＢＡ／
１ｇのポリマーの光学基負荷量を有する４．７２７ｇのポリマーが得られた。
【００６６】 実施例１３Ｎ−〔３−（ジメチルアミノ）プロピル〕メタクリルアミド及びＢＢＡ−ＡＰＭ Ａのコポリマー（ランダムフォトＰＡ−ポリ第三アミン）（化合物XIII） 本発明の光活性化性コポリマーを下記のようにして調製した。Ｎ−〔３−（ジ
メチルアミノ）プロピル〕メタクリルアミド３３．９３ｇ（０．２mol ）を２７
３mlのＤＭＳＯに溶解し、次いで１６．６mlの濃塩酸及び実施例３に記載の一般
方法に従って調製された６．０７１ｇ（１７．３mmol）の化合物III を溶解した
。最後に、０．２９ml（１．９３mmol）のＴＥＭＥＤ、０．４２６ｇ（２．６mm
ol）のＡＩＢＮ及び１００mlの水をこの反応混合物に加えた。この溶液を１０分
間ヘリウムスパージで脱酸素し、そしてヘッドスペースをアルゴンで満たした。
シールした槽を５５℃で一夜加熱し、重合を完了した。その生成物を脱イオン水
に対して数日間、１２，０００−１４，０００ＭＷＣＯのチューブを利用して透
析した。この生成物を透析後に濾過して全ての固体を除去し、そして凍結乾燥し
て４７．２７ｇの固体生成物を得た。このポリマーは０．３３mmolのＢＢＡ／１
ｇのポリマーの光学基負荷量を有することが決定された。
メチルアミノ）プロピル〕メタクリルアミド３３．９３ｇ（０．２mol ）を２７
３mlのＤＭＳＯに溶解し、次いで１６．６mlの濃塩酸及び実施例３に記載の一般
方法に従って調製された６．０７１ｇ（１７．３mmol）の化合物III を溶解した
。最後に、０．２９ml（１．９３mmol）のＴＥＭＥＤ、０．４２６ｇ（２．６mm
ol）のＡＩＢＮ及び１００mlの水をこの反応混合物に加えた。この溶液を１０分
間ヘリウムスパージで脱酸素し、そしてヘッドスペースをアルゴンで満たした。
シールした槽を５５℃で一夜加熱し、重合を完了した。その生成物を脱イオン水
に対して数日間、１２，０００−１４，０００ＭＷＣＯのチューブを利用して透
析した。この生成物を透析後に濾過して全ての固体を除去し、そして凍結乾燥し
て４７．２７ｇの固体生成物を得た。このポリマーは０．３３mmolのＢＢＡ／１
ｇのポリマーの光学基負荷量を有することが決定された。
【００６７】 実施例１４ポリスチレン（ＰＳ）マイクロウェルプレート上のランダムフォトＰＡ−ポリＮ ＯＳ（化合物IX−Ｃ）とランダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ−ポリＱｕａｔ（化合 物XI）との比較 化合物IX−Ｃ及び化合物XIを別々に脱イオン水に５ng／mlで溶解させた。別々
のウェルに１００μｌの化合物IX及び化合物XIを含むＰＳプレート（PS, Medium
Bind, Corning Costar, Cambridge, MA）にＨｅｒａｅｕｓバルブ（W.C.Heraeu
s GmbH, Hanau, Federal Republic of Germany）を含むＤｙｍａｘランプ（モデ
ルNo. ＰＣ−２、Dymax Corporation, Torrington, CT ）で照射した。照射時間
は１．５分、３３０−３４０nmの波長域で１〜２mW／cm2 の強度とした。このコ
ーティング溶液を捨て、そしてウェルを２時間風乾した。このプレートに更に１
分間照光を行った。このコーティングプレートを直ちに、２ケ月までシールパウ
チの中に保存しておいたオリゴを固定化するために用いた。
のウェルに１００μｌの化合物IX及び化合物XIを含むＰＳプレート（PS, Medium
Bind, Corning Costar, Cambridge, MA）にＨｅｒａｅｕｓバルブ（W.C.Heraeu
s GmbH, Hanau, Federal Republic of Germany）を含むＤｙｍａｘランプ（モデ
ルNo. ＰＣ−２、Dymax Corporation, Torrington, CT ）で照射した。照射時間
は１．５分、３３０−３４０nmの波長域で１〜２mW／cm2 の強度とした。このコ
ーティング溶液を捨て、そしてウェルを２時間風乾した。このプレートに更に１
分間照光を行った。このコーティングプレートを直ちに、２ケ月までシールパウ
チの中に保存しておいたオリゴを固定化するために用いた。
【００６８】 ５０塩基オリゴマー捕獲プローブ５′−ＮＨ2 −GTCTGAGTCGGAGCCAGGGCGGCCGC
CAACAGCAGGAGCAGCGTGCACGG−３′（ＩＤ１）（Ｃ−１２スペーサーを含む５′−
アミノモディファイヤーで合成）を１０pmole ／ウェルでＰＳウェル内にて５０
mMのリン酸バッファーpH８．５、１mMのＥＤＴＡの中で３７℃で１時間インキュ
ベーションした。ハイブリダイゼーションは下記の通りにして、相補性５′−ビ
オチン−CCGTGCACGCTGCTCCTGCTGTTGGCGGCCGCCCTGGCTCCGACTCAGAC−３′（ＩＤ３
）検出プローブ又は非相補性５′−ビオチン−CGGTGGATGGAGCAGGAGGGGCCCGAGTAT
TGGGAGCGGGAGACACAGAA−３′（ＩＤ４）オリゴを利用して実施した。それらは共
に５′−ビオチン修飾で合成したものである。
CAACAGCAGGAGCAGCGTGCACGG−３′（ＩＤ１）（Ｃ−１２スペーサーを含む５′−
アミノモディファイヤーで合成）を１０pmole ／ウェルでＰＳウェル内にて５０
mMのリン酸バッファーpH８．５、１mMのＥＤＴＡの中で３７℃で１時間インキュ
ベーションした。ハイブリダイゼーションは下記の通りにして、相補性５′−ビ
オチン−CCGTGCACGCTGCTCCTGCTGTTGGCGGCCGCCCTGGCTCCGACTCAGAC−３′（ＩＤ３
）検出プローブ又は非相補性５′−ビオチン−CGGTGGATGGAGCAGGAGGGGCCCGAGTAT
TGGGAGCGGGAGACACAGAA−３′（ＩＤ４）オリゴを利用して実施した。それらは共
に５′−ビオチン修飾で合成したものである。
【００６９】 固定化捕獲プローブを有するプレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むリ
ン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、１０mMのＮａ2 ＰＯ4 、１５０mMのＮａＣｌ、pH７．
２）により、マイクロプレートオートウォッシャー（モデルＥＬ４０３Ｈ、Bio-
Tek Instruments, Winooski, VT ）を用いて洗浄した。このプレートを５５℃で
３０分ハイブリダイゼーションバッファーでブロッキングした。このバッファー
は５×のＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸塩、pH７．０
）、０．１％のラウロイルサルコシン、１％のカゼイン及び０．０２％のドデシ
ル硫酸ナトリウムから成る。検出プローブを捕獲プローブにハイブリダイズさせ
るとき、１００μｌ中の５０fmole の検出プローブを各ウェルに加え、そして５
５℃で１時間インキュベーションした。次いでこのプレートを０．１％のドデシ
ル硫酸ナトリウムを含む２×のＳＳＣで５５℃で５分かけて洗った。結合した検
出プローブをストレプトアビジン及び西洋ワサビペルオキシダーゼのコンジュゲ
ート１００μｌ（ＳＡ−ＨＲＰ、Pierce, Rockford, IL）を０．５μｇ／mlで加
え、そして３７℃で３０分インキュベーションすることによりアッセイした。次
いでこのプレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗い、次いでペルオキシダーゼ基質（
Ｈ2 Ｏ2 及びテトラメチルベンジジン：Kirkegard and Perry Laboratories, Ga
ithersburg, MD）を添加し、そしてマイクロウェルプレートリーダー（モデル３
５５０、Bio-Rad Labs, Cambridge, MA ）で６５５nmで測定を行った。プレート
は１０分目に測定した。
ン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、１０mMのＮａ2 ＰＯ4 、１５０mMのＮａＣｌ、pH７．
２）により、マイクロプレートオートウォッシャー（モデルＥＬ４０３Ｈ、Bio-
Tek Instruments, Winooski, VT ）を用いて洗浄した。このプレートを５５℃で
３０分ハイブリダイゼーションバッファーでブロッキングした。このバッファー
は５×のＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸塩、pH７．０
）、０．１％のラウロイルサルコシン、１％のカゼイン及び０．０２％のドデシ
ル硫酸ナトリウムから成る。検出プローブを捕獲プローブにハイブリダイズさせ
るとき、１００μｌ中の５０fmole の検出プローブを各ウェルに加え、そして５
５℃で１時間インキュベーションした。次いでこのプレートを０．１％のドデシ
ル硫酸ナトリウムを含む２×のＳＳＣで５５℃で５分かけて洗った。結合した検
出プローブをストレプトアビジン及び西洋ワサビペルオキシダーゼのコンジュゲ
ート１００μｌ（ＳＡ−ＨＲＰ、Pierce, Rockford, IL）を０．５μｇ／mlで加
え、そして３７℃で３０分インキュベーションすることによりアッセイした。次
いでこのプレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗い、次いでペルオキシダーゼ基質（
Ｈ2 Ｏ2 及びテトラメチルベンジジン：Kirkegard and Perry Laboratories, Ga
ithersburg, MD）を添加し、そしてマイクロウェルプレートリーダー（モデル３
５５０、Bio-Rad Labs, Cambridge, MA ）で６５５nmで測定を行った。プレート
は１０分目に測定した。
【００７０】 表１に挙げる結果は、化合物IX−Ｃでコーティングされたマイクロウェルプレ
ートがアミン捕獲プローブを有効に固定しなかったことを示す。しかしながら、
コーティングとしての化合物XIとの対比により、有意義な結合及び良好なハイブ
リダイゼーションシグナルが供された。化合物IX−Ｃ試薬は表層をほとんど通り
過ぎてしまい、そして捕獲オリゴの結合を阻害した。反対に、化合物XIを使用す
ると、オリゴはイオン相互作用により表層に吸引され、そこでそれらはＮＯＳ基
と共有結合できた。
ートがアミン捕獲プローブを有効に固定しなかったことを示す。しかしながら、
コーティングとしての化合物XIとの対比により、有意義な結合及び良好なハイブ
リダイゼーションシグナルが供された。化合物IX−Ｃ試薬は表層をほとんど通り
過ぎてしまい、そして捕獲オリゴの結合を阻害した。反対に、化合物XIを使用す
ると、オリゴはイオン相互作用により表層に吸引され、そこでそれらはＮＯＳ基
と共有結合できた。
【００７１】
【表１】
【００７２】 実施例１５ランダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ（化合物IX−Ｂ）及びランダムフォトＰＡ−ポ リＱｕａｔ（化合物Ｘ−Ｂ）の混合物による様々なマイクロウェルプレートのコ ーティング ５mg／mlの化合物IX−Ｂ及び０．５mg／mlの化合物Ｘ−Ｂを含むコーティング
溶液を脱イオン水中で調製した。この混合物をポリプロピレン（ＰＰ、Corning
Costar, Cambridge, MA ）、ＰＳ、ポリカーボネート（ＰＣ、Corning Costar,
Cambridge, MA ）及びポリビニルクロリド（ＰＶＣ、Dynatech, Chantilly, VA
）マルチウェルを実施例１４に記載の通りにして処理するのを用いた。３０量体
の捕獲オリゴ５′−ＮＨ2 −GTCTGAGTCGGAGCCAGGGCGGCCGCCAAC−３′（ＩＤ２）
（Ｃ−１２スペーサーを含む５′−アミノモディファイヤーで合成）を０．０３
，０．１，０．３，１，３又は１０pmole ／ウェルにて４℃で一夜インキュベー
ションした。ハイブリダイゼーションは実施例１４において前述した通りにして
、相補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相補性ＩＤ４オリゴを用いて実施した。ＰＰプ
レートは光学的に透明ではないため、各ウェルの内容物を２０分間のインキュベ
ーションの後に発色基質と一緒にＰＳウェルに移した。ハイブリダイゼーション
シグナルがＰＳプレートで測定された。その他のプレートは１０分目に移すこと
なく測定を行った。シグナルレベルは同一の基質グループ内でのみ同等であり、
その理由は異なる材料から作られたマイクロウェルプレートの異なる幾何学形態
による。表２はハイブリダイゼーションシグナルを挙げ、そしてハイブリダイゼ
ーションシグナルの強度と化合物IX−Ｂ及び化合物Ｘ−Ｂの混合物でコーティン
グされた様々なマイクロウェルプレートに適用した捕獲プローブの量との関係を
示す。ＰＰ及びＰＶＣプレート上では、プローブの吸着はごくわずかであり、そ
してポリマー試薬によるコーティングはシグナルを劇的に上昇させた。シグナル
はコーティングウェルに加える捕獲プローブを増やすと上昇するが、約３pmole
／ウェルの捕獲プローブで平衡に達する。発生シグナル値におけるこのプラトー
はハイブリダイゼーションの飽和レベルによるものではなく、比色アッセイにお
ける色調変化反応の限界によるものである。
溶液を脱イオン水中で調製した。この混合物をポリプロピレン（ＰＰ、Corning
Costar, Cambridge, MA ）、ＰＳ、ポリカーボネート（ＰＣ、Corning Costar,
Cambridge, MA ）及びポリビニルクロリド（ＰＶＣ、Dynatech, Chantilly, VA
）マルチウェルを実施例１４に記載の通りにして処理するのを用いた。３０量体
の捕獲オリゴ５′−ＮＨ2 −GTCTGAGTCGGAGCCAGGGCGGCCGCCAAC−３′（ＩＤ２）
（Ｃ−１２スペーサーを含む５′−アミノモディファイヤーで合成）を０．０３
，０．１，０．３，１，３又は１０pmole ／ウェルにて４℃で一夜インキュベー
ションした。ハイブリダイゼーションは実施例１４において前述した通りにして
、相補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相補性ＩＤ４オリゴを用いて実施した。ＰＰプ
レートは光学的に透明ではないため、各ウェルの内容物を２０分間のインキュベ
ーションの後に発色基質と一緒にＰＳウェルに移した。ハイブリダイゼーション
シグナルがＰＳプレートで測定された。その他のプレートは１０分目に移すこと
なく測定を行った。シグナルレベルは同一の基質グループ内でのみ同等であり、
その理由は異なる材料から作られたマイクロウェルプレートの異なる幾何学形態
による。表２はハイブリダイゼーションシグナルを挙げ、そしてハイブリダイゼ
ーションシグナルの強度と化合物IX−Ｂ及び化合物Ｘ−Ｂの混合物でコーティン
グされた様々なマイクロウェルプレートに適用した捕獲プローブの量との関係を
示す。ＰＰ及びＰＶＣプレート上では、プローブの吸着はごくわずかであり、そ
してポリマー試薬によるコーティングはシグナルを劇的に上昇させた。シグナル
はコーティングウェルに加える捕獲プローブを増やすと上昇するが、約３pmole
／ウェルの捕獲プローブで平衡に達する。発生シグナル値におけるこのプラトー
はハイブリダイゼーションの飽和レベルによるものではなく、比色アッセイにお
ける色調変化反応の限界によるものである。
【００７３】 オリゴ誘導体はコーティングされていないＰＳ及びＰＣマイクロウェルプレー
トに効率的に吸着し、そして特異的なハイブリダイゼーションシグナルをもたら
す。Crosら（米国特許第５，５１０，０８４号）はアミン官能化オリゴが不明な
メカニズムによりポリスチレンマイクロウェルプレート上に十分に吸着すること
を報告している。しかしながら、種々のロット内でコーティングされていないＰ
Ｓプレート上での吸着量に著しい変動がある（Chevier ら、FEMS 10: 245, 199
5 ）。
トに効率的に吸着し、そして特異的なハイブリダイゼーションシグナルをもたら
す。Crosら（米国特許第５，５１０，０８４号）はアミン官能化オリゴが不明な
メカニズムによりポリスチレンマイクロウェルプレート上に十分に吸着すること
を報告している。しかしながら、種々のロット内でコーティングされていないＰ
Ｓプレート上での吸着量に著しい変動がある（Chevier ら、FEMS 10: 245, 199
5 ）。
【００７４】
【表２】
【００７５】 実施例１６ＰＰ及びＰＶＣマイクロウェルプレート上の終点ジフォトＰＡ−ポリＮＯＳ（化 合物XII ）及びランダムフォトＰＡ−ポリＱｕａｔ（化合物Ｘ−Ｂ）の評価 ５mg／mlの化合物XII 及び０．５mg／mlの化合物Ｘ−Ｂの混合物を含むコーテ
ィング溶液を脱イオン水で調製した。この２種類の試薬の混合物を、実施例１４
に記載のものと同じ条件下でＰＰ及びＰＶＣマイクロウェルプレートをコーティ
ングするのに用いた。３０量体のＩＤ２捕獲プローブを０．０３，０．１，０．
３，１，３又は１０pmole ／ウェルにおいて０．１mlで４℃で一夜インキュベー
ションした。ハイブリダイゼーションは相補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相補性Ｉ
Ｄ４オリゴを利用して実施例１４に記載の通りにして実施した。表３に挙げるハ
イブリダイゼーションシグナルはハイブリダイゼーションシグナルの強度と化合
物XII 及び化合物Ｘ−Ｂの混合物でコーティングされたＰＰ及びＰＶＣマイクロ
ウェルプレートに適用した捕獲プローブの量との関係を示す。シグナルはコーテ
ィングウェルに添加する捕獲オリゴを増やすと上昇するが、約１pmole ／ウェル
で平衡に達する。シグナル、対、ノイズ比（相補性検出プローブ、対、非相補性
検出プローブに由来）はコーティングＰＰ及びＰＶＣ表層についてそれぞれ２６
及び１１と高かった。
ィング溶液を脱イオン水で調製した。この２種類の試薬の混合物を、実施例１４
に記載のものと同じ条件下でＰＰ及びＰＶＣマイクロウェルプレートをコーティ
ングするのに用いた。３０量体のＩＤ２捕獲プローブを０．０３，０．１，０．
３，１，３又は１０pmole ／ウェルにおいて０．１mlで４℃で一夜インキュベー
ションした。ハイブリダイゼーションは相補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相補性Ｉ
Ｄ４オリゴを利用して実施例１４に記載の通りにして実施した。表３に挙げるハ
イブリダイゼーションシグナルはハイブリダイゼーションシグナルの強度と化合
物XII 及び化合物Ｘ−Ｂの混合物でコーティングされたＰＰ及びＰＶＣマイクロ
ウェルプレートに適用した捕獲プローブの量との関係を示す。シグナルはコーテ
ィングウェルに添加する捕獲オリゴを増やすと上昇するが、約１pmole ／ウェル
で平衡に達する。シグナル、対、ノイズ比（相補性検出プローブ、対、非相補性
検出プローブに由来）はコーティングＰＰ及びＰＶＣ表層についてそれぞれ２６
及び１１と高かった。
【００７６】
【表３】
【００７７】 実施例１７ランダムフォトＰＡ−ポリＱｕａｔ（化合物Ｘ−Ｂ）及びＢＢＡ−ＡＵＤ−ＮＯ Ｓによる逐次コーティング（化合物VIII） 脱イオン水中の０．１mg／mlの化合物Ｘ−ＢをＰＰ及びＰＶＣウェルの中に２
０分インキュベーションした。ウェルにこの溶液が入っているこのプレートを実
施例１４において前述した通りにして１．５分照射に付した。この溶液を捨て、
そしてウェルを乾かした。イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）中の０．５mg／ml
の化合物VIIIを化合物Ｘ−Ｂのコーティングされたウェルの中で５分間インキュ
ベーションした。次いでこの溶液を捨て、プレートを乾かし、そしてウェルが乾
燥してから実施例１４に記載の通りにして１分間照射した。０．１ml中において
０．０３，０．１，０．３，１，３又は１０pmole ／ウェルの３０量体のＩＤ２
捕獲オリゴを４℃で一夜インキュベーションした。ハイブリダイゼーションを相
補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相補性ＩＤ４オリゴを利用して実施例１４に記載の
通りにして実施した。表４はハイブリダイゼーションシグナルを含み、そしてハ
イブリダイゼーションシグナルの強度と、化合物Ｘ−Ｂでコーティングされ、続
いて化合物VIIIコーティングの施されたＰＰ及びＰＶＣマイクロウェルプレート
に適用した捕獲プローブの量との関係を示す。シグナルは、コーティングウェル
に加える捕獲プローブを増やすと上昇するが、約１pmole ／ウェルの捕獲オリゴ
で平衡となった。シグナルは、非コーティングコントロールと比較し、コーティ
ングＰＰ及びＰＶＣ表層のそれぞれについて２９及び１１倍高くなった。
０分インキュベーションした。ウェルにこの溶液が入っているこのプレートを実
施例１４において前述した通りにして１．５分照射に付した。この溶液を捨て、
そしてウェルを乾かした。イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）中の０．５mg／ml
の化合物VIIIを化合物Ｘ−Ｂのコーティングされたウェルの中で５分間インキュ
ベーションした。次いでこの溶液を捨て、プレートを乾かし、そしてウェルが乾
燥してから実施例１４に記載の通りにして１分間照射した。０．１ml中において
０．０３，０．１，０．３，１，３又は１０pmole ／ウェルの３０量体のＩＤ２
捕獲オリゴを４℃で一夜インキュベーションした。ハイブリダイゼーションを相
補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相補性ＩＤ４オリゴを利用して実施例１４に記載の
通りにして実施した。表４はハイブリダイゼーションシグナルを含み、そしてハ
イブリダイゼーションシグナルの強度と、化合物Ｘ−Ｂでコーティングされ、続
いて化合物VIIIコーティングの施されたＰＰ及びＰＶＣマイクロウェルプレート
に適用した捕獲プローブの量との関係を示す。シグナルは、コーティングウェル
に加える捕獲プローブを増やすと上昇するが、約１pmole ／ウェルの捕獲オリゴ
で平衡となった。シグナルは、非コーティングコントロールと比較し、コーティ
ングＰＰ及びＰＶＣ表層のそれぞれについて２９及び１１倍高くなった。
【００７８】
【表４】
【００７９】 実施例１８ランダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ（化合物IX−Ａ）及びランダムフォトＰＡ−ポ リＱｕａｔ（化合物Ｘ−Ａ）の混合物とのランダムフォトＰＡ−ポリＱｕａｔ（ 化合物Ｘ−Ａ）の比較 化合物Ｘ−Ａを０．５又は０．１mg／mlにおいてＰＰマイクロウェルプレート
内で１０分インキュベーションした。次いでこれらのプレートを実施例１４に記
載の通りにして照射した。化合物IX−Ａ及び化合物Ｘ−Ａの混合物を含むコーテ
ィング溶液をＰＰマイクロウェルプレートにコーティングを施すため、脱イオン
水中の５／０．５mg／ml及び０．５／０．１mg／mlの化合物IX−Ａ／化合物Ｘ−
Ａの２通りの割合で調製した。この溶液をウェル内で１０分間インキュベーショ
ンし、そしてウェルを実施例１４に記載の通りにして照射した。３０量体のＩＤ
２捕獲プローブを１pmole ／ウェルにおいて各ウェル内で３７℃で１時間インキ
ュベーションした。ハイブリダイゼーションは相補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相
補性ＩＤ４オリゴを利用して実施例１４に記載の通りにして実施した。表５に挙
げる結果は、化合物IX−Ａ及び化合物Ｘ−Ａの組合せを含むコーティングが化合
物Ｘ−Ａコーティングのみから由来するものと比べて高いシグナルを供すること
を示した。
内で１０分インキュベーションした。次いでこれらのプレートを実施例１４に記
載の通りにして照射した。化合物IX−Ａ及び化合物Ｘ−Ａの混合物を含むコーテ
ィング溶液をＰＰマイクロウェルプレートにコーティングを施すため、脱イオン
水中の５／０．５mg／ml及び０．５／０．１mg／mlの化合物IX−Ａ／化合物Ｘ−
Ａの２通りの割合で調製した。この溶液をウェル内で１０分間インキュベーショ
ンし、そしてウェルを実施例１４に記載の通りにして照射した。３０量体のＩＤ
２捕獲プローブを１pmole ／ウェルにおいて各ウェル内で３７℃で１時間インキ
ュベーションした。ハイブリダイゼーションは相補性ＩＤ３検出オリゴ又は非相
補性ＩＤ４オリゴを利用して実施例１４に記載の通りにして実施した。表５に挙
げる結果は、化合物IX−Ａ及び化合物Ｘ−Ａの組合せを含むコーティングが化合
物Ｘ−Ａコーティングのみから由来するものと比べて高いシグナルを供すること
を示した。
【００８０】
【表５】
【００８１】 実施例１９コーティングマイクロウェルプレート上でのランダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ（ 化合物IX−Ｂ）及びランダムフォトＰＡ−ポリＱｕａｔ（化合物Ｘ−Ｂ）に対す る非修飾オリゴ対アミン修飾オリゴの比較 化合物IX−Ｂ（５mg／ml）及び化合物Ｘ−Ｂ（０．５mg／ml）の混合物を含む
コーティング溶液を脱イオン水中で調製し、ＰＰ，ＰＳ及びＰＶＣマイクロウェ
ルコートをコーティングした。この溶液を約１０分インキュベーションし、そし
て実施例１４に記載の通りにして照射した。３０量体の捕獲５′−ＮＨ2 −TTCT
GTGTCTCCCGCTCCCAATACTCGGGC−３′（ＩＤ５）オリゴを１pmole ／ウェルにおい
て５０mMのリン酸バッファー、pH８．５、１mMのＥＤＴＡ中でウェル内に４℃で
一夜かけてカップリングさせた。ハイブリダイゼーションは相補性検出オリゴＩ
Ｄ４又は非相補性オリゴＩＤ３を利用して実施例１４に記載の通りにして実施し
た。捕獲オリゴのアミン官能基の効果を調べるため、非修飾３０量体捕獲プロー
ブ５′−TTCTGTGTCTCCCGCTCCCAATACTCGGGC−３′（ＩＤ６）（アミンなし）もコ
ーティング表層に加え、そして試験した。表６に示す結果は５′−アミン修飾の
ないオリゴを化合物IX−Ｂ／化合物Ｘ−Ｂコーティング表層上に捕獲プローブと
して利用すると、ハイブリダイゼーションシグナルはアミン修飾によるものの３
０％未満であることを示す。
コーティング溶液を脱イオン水中で調製し、ＰＰ，ＰＳ及びＰＶＣマイクロウェ
ルコートをコーティングした。この溶液を約１０分インキュベーションし、そし
て実施例１４に記載の通りにして照射した。３０量体の捕獲５′−ＮＨ2 −TTCT
GTGTCTCCCGCTCCCAATACTCGGGC−３′（ＩＤ５）オリゴを１pmole ／ウェルにおい
て５０mMのリン酸バッファー、pH８．５、１mMのＥＤＴＡ中でウェル内に４℃で
一夜かけてカップリングさせた。ハイブリダイゼーションは相補性検出オリゴＩ
Ｄ４又は非相補性オリゴＩＤ３を利用して実施例１４に記載の通りにして実施し
た。捕獲オリゴのアミン官能基の効果を調べるため、非修飾３０量体捕獲プロー
ブ５′−TTCTGTGTCTCCCGCTCCCAATACTCGGGC−３′（ＩＤ６）（アミンなし）もコ
ーティング表層に加え、そして試験した。表６に示す結果は５′−アミン修飾の
ないオリゴを化合物IX−Ｂ／化合物Ｘ−Ｂコーティング表層上に捕獲プローブと
して利用すると、ハイブリダイゼーションシグナルはアミン修飾によるものの３
０％未満であることを示す。
【００８２】
【表６】
【００８３】 実施例２０ランダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ（化合物IX−Ａ）及びランダムフォトＰＡ−ポ リＱｕａｔ（化合物Ｘ−Ａ）でコーティングされたマイクロウェルプレート上の オリゴ付加密度 オリゴ付加密度を決定する及び比色アッセイ系の結果を確認するため、放射性
ラベルアッセイを実施した。本実施例においては、化合物IX−Ａ及び化合物Ｘ−
Ａの組合せコーティングを実施例１４に記載の通りにしてＰＶＣウェルで実施し
た。ＩＤ２及びＩＤ５の３０量体捕獲オリゴをコーティングウェル上に固定化さ
せた。放射性ラベルしたＩＤ２プローブをウェル表層上の固定化捕獲オリゴの付
加密度を測定するために利用した。ＩＤ２に対しては相補性であるが、ＩＤ５に
対しては相補性でない放射性ラベルされたＩＤ３を固定化捕獲プローブのハイブ
リダイゼーション反応を測定するために利用した。オリゴＩＤ２及びＩＤ３を末
端トランスフェラーゼ（Boehringer Mannheim Indianapolis, IN）及びα−32Ｐ
−ｄｄＡＴＰ（3000Ci／mmole, Amersham, Arlington Heights, IL）を利用し、
その製造者の仕様書に従って３′末端においてラベルした。32Ｐ−ラベルされた
ＩＤ２並びにラベルされていないＩＤ２及びＩＤ５捕獲プローブをコーティング
ウェル内で５０pmole ／ウェルで室温にて２．２５時間インキュベーションした
。プレートを洗浄し、そして実施例１４に記載の通りにしてブロッキングした。
ラベルアッセイを実施した。本実施例においては、化合物IX−Ａ及び化合物Ｘ−
Ａの組合せコーティングを実施例１４に記載の通りにしてＰＶＣウェルで実施し
た。ＩＤ２及びＩＤ５の３０量体捕獲オリゴをコーティングウェル上に固定化さ
せた。放射性ラベルしたＩＤ２プローブをウェル表層上の固定化捕獲オリゴの付
加密度を測定するために利用した。ＩＤ２に対しては相補性であるが、ＩＤ５に
対しては相補性でない放射性ラベルされたＩＤ３を固定化捕獲プローブのハイブ
リダイゼーション反応を測定するために利用した。オリゴＩＤ２及びＩＤ３を末
端トランスフェラーゼ（Boehringer Mannheim Indianapolis, IN）及びα−32Ｐ
−ｄｄＡＴＰ（3000Ci／mmole, Amersham, Arlington Heights, IL）を利用し、
その製造者の仕様書に従って３′末端においてラベルした。32Ｐ−ラベルされた
ＩＤ２並びにラベルされていないＩＤ２及びＩＤ５捕獲プローブをコーティング
ウェル内で５０pmole ／ウェルで室温にて２．２５時間インキュベーションした
。プレートを洗浄し、そして実施例１４に記載の通りにしてブロッキングした。
【００８４】 ラベルされていない捕獲プローブの入ったウェルを32Ｐ−ラベル化ＩＤ３検出
プローブと、ハイブリダイゼーションバッファーの中で５５℃で１時間ハイブリ
ダイゼーションさせた。32Ｐ−ラベル化捕獲プローブを含むウェルをＩＤ３プロ
ーブの入っていないハイブリダイゼーションバッファー内でインキュベーション
した。０．１％のＳＤＳを含む２×のＳＳＣで５５℃で５分にて３回、次いでＰ
ＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した後、プレートを個々のウェルに切
り、そしてテトラヒドロフランに溶解した。各ウェル内の放射能の量をAquasol-
2 Fluor （DuPont NEN, Boston, MA）でのシンチレーションカウンティングによ
り測定した。表７の結果は捕獲プローブの良好な固定化のために化合物IX−Ａ及
び化合物Ｘ−Ａの双方が必要であることを示す。また、化合物IX−Ａ及び化合物
Ｘ−Ａの濃度を上げると固定化される捕獲オリゴの量が増える。試験した最大の
濃度において、シグナル、対、ノイズ比は３０００、対、１より高かった。
プローブと、ハイブリダイゼーションバッファーの中で５５℃で１時間ハイブリ
ダイゼーションさせた。32Ｐ−ラベル化捕獲プローブを含むウェルをＩＤ３プロ
ーブの入っていないハイブリダイゼーションバッファー内でインキュベーション
した。０．１％のＳＤＳを含む２×のＳＳＣで５５℃で５分にて３回、次いでＰ
ＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した後、プレートを個々のウェルに切
り、そしてテトラヒドロフランに溶解した。各ウェル内の放射能の量をAquasol-
2 Fluor （DuPont NEN, Boston, MA）でのシンチレーションカウンティングによ
り測定した。表７の結果は捕獲プローブの良好な固定化のために化合物IX−Ａ及
び化合物Ｘ−Ａの双方が必要であることを示す。また、化合物IX−Ａ及び化合物
Ｘ−Ａの濃度を上げると固定化される捕獲オリゴの量が増える。試験した最大の
濃度において、シグナル、対、ノイズ比は３０００、対、１より高かった。
【００８５】
【表７】
【００８６】 実施例２１ランダムフォト−ＰＡ−ポリ第三アミン（化合物XIII）、ランダムフォト−ＰＡ −ポリＮＯＳ（化合物IX−Ａ）、並びにランダムフォトＰＡ−ポリＮＯＳ（化合 物IX−Ａ）及びランダム−ＰＡ−ポリ第三アミン（化合物XIII）の混合物間の比 較 化合物XIIIを０．０２mg／mlにて脱イオン水中でＰＰマイクロウェルプレート
内で１０分インキュベーションした。ウェルを実施例１４に記載の通りにして照
射した。化合物IX−ＡをＰＰウェル上に２mg／mlに脱イオン水中で化合物XIIIに
ついて記載の通りにコーティングした。脱イオン水中の２mg／mlの化合物IX−Ａ
及び０．０２mg／mlの化合物XIIIを含むコーティング溶液を調製し、そして化合
物XIIIについて記載の通りにコーティングした。ハイブリダイゼーションは相補
性ＩＤ３検出オリゴ及び非相補性ＩＤ４オリゴを利用して実施例１４に記載の通
りにして実施した。各ウェルの内容物をペルオキシダーゼ基質との１０分間のイ
ンキュベーションの後にＰＳウェルに移した。表８に挙げる結果は化合物IX−Ａ
及び化合物XIIIの組合せが、化合物IX−Ａ又は化合物XIIIのコーティングのみか
らのものと比べて高いシグナルを供与することを示した。
内で１０分インキュベーションした。ウェルを実施例１４に記載の通りにして照
射した。化合物IX−ＡをＰＰウェル上に２mg／mlに脱イオン水中で化合物XIIIに
ついて記載の通りにコーティングした。脱イオン水中の２mg／mlの化合物IX−Ａ
及び０．０２mg／mlの化合物XIIIを含むコーティング溶液を調製し、そして化合
物XIIIについて記載の通りにコーティングした。ハイブリダイゼーションは相補
性ＩＤ３検出オリゴ及び非相補性ＩＤ４オリゴを利用して実施例１４に記載の通
りにして実施した。各ウェルの内容物をペルオキシダーゼ基質との１０分間のイ
ンキュベーションの後にＰＳウェルに移した。表８に挙げる結果は化合物IX−Ａ
及び化合物XIIIの組合せが、化合物IX−Ａ又は化合物XIIIのコーティングのみか
らのものと比べて高いシグナルを供与することを示した。
【００８７】
【表８】
【００８８】 実施例２２アミン誘導化表層上の核酸配列の固定化 本発明のコポリマーは下記のようにして調製される。アクリルアミド５．６８
６ｇ（８０．０mmol）を１００mlのＤＭＳＯに溶解し、次いで実施例４に記載の
一般方法に従って調製した３．０８３ｇ（１０．０mmol）の化合物IV及び実施例
１１に記載の方法に従って調製したドライＤＭＳＯ溶液として導入する２．２０
７ｇ（１０．０mmol）のＭＡＰＴＡＣを溶解する。ＴＥＭＥＤ ０．１３４ml（
０．８９mmol）及びＡＩＢＮ ０．１９７ｇ（１．２０mmol）をこの混合物に加
え、そしてこの系をヘリウムスパージで５分間、次いでアルゴンスパージで更に
５分間脱酸素する。シールした槽を５５℃に加熱して重合を完了させる。ポリマ
ーは反応混合物を８００mlのジエチルエーテルに注ぎ、そして遠心分離して固体
を分離することにより単離する。この生成物を２００mlのジエチルエーテル、次
いで２００mlのクロロホルムで洗う。このポリマーを真空乾燥し、残りの溶媒を
除去する。
６ｇ（８０．０mmol）を１００mlのＤＭＳＯに溶解し、次いで実施例４に記載の
一般方法に従って調製した３．０８３ｇ（１０．０mmol）の化合物IV及び実施例
１１に記載の方法に従って調製したドライＤＭＳＯ溶液として導入する２．２０
７ｇ（１０．０mmol）のＭＡＰＴＡＣを溶解する。ＴＥＭＥＤ ０．１３４ml（
０．８９mmol）及びＡＩＢＮ ０．１９７ｇ（１．２０mmol）をこの混合物に加
え、そしてこの系をヘリウムスパージで５分間、次いでアルゴンスパージで更に
５分間脱酸素する。シールした槽を５５℃に加熱して重合を完了させる。ポリマ
ーは反応混合物を８００mlのジエチルエーテルに注ぎ、そして遠心分離して固体
を分離することにより単離する。この生成物を２００mlのジエチルエーテル、次
いで２００mlのクロロホルムで洗う。このポリマーを真空乾燥し、残りの溶媒を
除去する。
【００８９】 ポリマー表層をメタン及びアンモニアガスの３：１の混合物を利用してプラズ
マ処理することにより誘導化する（例えば、米国特許第５，６４３，５８０号に
記載の一般方法を参照のこと）。メタン（４９０SCCM）及びアンモニア（１６１
SCCM）の混合物を、コーティングするポリマーと一緒にプラズマチャンバーに入
れる。ガスを０．２〜０．３torrの圧力に保ち、そしてチャンバー内に３００〜
５００ワットのグロー放電を樹立させる。サンプルを全部で３〜５分、この条件
下で処理する。アミン誘導化表層の形成は、非コーティング表層と比べての水接
触角の縮小により確認する。
マ処理することにより誘導化する（例えば、米国特許第５，６４３，５８０号に
記載の一般方法を参照のこと）。メタン（４９０SCCM）及びアンモニア（１６１
SCCM）の混合物を、コーティングするポリマーと一緒にプラズマチャンバーに入
れる。ガスを０．２〜０．３torrの圧力に保ち、そしてチャンバー内に３００〜
５００ワットのグロー放電を樹立させる。サンプルを全部で３〜５分、この条件
下で処理する。アミン誘導化表層の形成は、非コーティング表層と比べての水接
触角の縮小により確認する。
【００９０】 アミン誘導化表層を室温で１０分、５０mMのリン酸バッファー、pH８．５中の
上記のポリマーの１０mg／mlの溶液とインキュベーションする。この反応時間の
経過後、コーティング溶液を除去し、そして表層を脱イオン水で十分に洗い、そ
して十分に乾かす。オリゴマー捕獲プローブの固定化及びハイブリダイゼーショ
ンを実施例１４に記載の通りに実施する。
上記のポリマーの１０mg／mlの溶液とインキュベーションする。この反応時間の
経過後、コーティング溶液を除去し、そして表層を脱イオン水で十分に洗い、そ
して十分に乾かす。オリゴマー捕獲プローブの固定化及びハイブリダイゼーショ
ンを実施例１４に記載の通りに実施する。
【００９１】 表９：化合物
【化１】
【化２】
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 エイモス，リチャード エー. アメリカ合衆国，ミネソタ 55418，セン ト アンソニー，スカイクロフト サーク ル 3437 (72)発明者 フー，ショー−ピン アメリカ合衆国，ミネソタ 55113，ファ ルコン ハイツ，ハウエル アベニュ 1810 (72)発明者 ギアー，パトリック イー. アメリカ合衆国，ミネソタ 55346，エデ ン プレイリー，タータン サークル 6741 Ｆターム(参考） 4B024 AA11 AA19 AA20 CA01 HA14 4B029 AA07 AA23 BB20 FA15
Claims (60)
- 【請求項１】 基体の表層に標的分子を付加するための試薬組成物であって
、当該試薬に標的分子を吸引させるための１又は複数の基と、この吸引された標
的分子上の対応の官能基と共有結合を形成するための１又は複数の熱化学反応基
とを含んで成る試薬組成物。 - 【請求項２】 前記試薬組成物がそれを適当な起源に由来するエネルギーの
適用により前記表層に付加させるための１又は複数の光反応基を更に含んで成る
、請求項１記載の試薬組成物。 - 【請求項３】 前記吸引基及び熱化学反応基が１又は複数の親水性ポリマー
骨格に懸垂している、請求項１記載の試薬組成物。 - 【請求項４】 前記標的分子が核酸である、請求項１記載の試薬組成物。
- 【請求項５】 前記吸引基がイオン基である、請求項１記載の試薬組成物。
- 【請求項６】 前記イオン基が第四アンモニウム基及びプロトン化第三アミ
ンから成る群から選ばれる、請求項５記載の試薬組成物。 - 【請求項７】 前記核酸がアミン及びスルフヒドリル基から成る群から選ば
れる官能基を含んで成る、請求項４記載の試薬組成物。 - 【請求項８】 前記試薬組成物が吸引基としての１又は複数のイオン基及び
適当な起源、由来のエネルギーの適用により前記表層に当該試薬組成物を付加さ
せるための１又は複数の光反応基を含んで成る、請求項４記載の試薬組成物。 - 【請求項９】 前記イオン基が第四アンモニウム基を含んで成る、請求項８
記載の試薬組成物。 - 【請求項１０】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項２記載の試薬組成物。 - 【請求項１１】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項１０記載の試薬組成物。 - 【請求項１２】 前記標的分子が核酸であり、前記吸引基がイオン基であり
、そして前記光反応基が光反応性アリールケトン類から成る群から選ばれる、請
求項２記載の試薬組成物。 - 【請求項１３】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項１２記載の試薬組成物。 - 【請求項１４】 前記試薬組成物が１又は複数の吸引基を含んで成る親水性
骨格を含んで成る第一試薬と、１又は複数の熱化学反応基及び１又は複数の光反
応基を含んで成る親水性骨格を含んで成る第二試薬とを含んで成る組成物の形態
にある、請求項３記載の試薬組成物。 - 【請求項１５】 前記標的分子が核酸である、請求項１４記載の試薬組成物
。 - 【請求項１６】 前記吸引基がイオン基である、請求項１４記載の試薬組成
物。 - 【請求項１７】 前記イオン基が第四アンモニウム基及びプロトン化第三ア
ミンから成る群から選ばれる、請求項１６記載の試薬組成物。 - 【請求項１８】 前記核酸がアミン及びスルフヒドリル基から成る群から選
ばれる官能基を含んで成る、請求項１５記載の試薬組成物。 - 【請求項１９】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項１４記載の試薬組成物。 - 【請求項２０】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項１９記載の試薬組成物。 - 【請求項２１】 基体の表層に標的分子を付加するための方法であって、（
ａ）当該基体の表層に試薬組成物を供与する、ここで当該試薬組成物は、それに
前記標的分子を吸引させるための１又は複数の基と、この吸引された標的分子上
の対応の官能基と共有結合を形成するための１又は複数の熱化学反応基とを含ん
で成る；（ｂ）当該標的分子を前記表層に、当該吸引基が前記標的分子を結合し
た前記試薬組成物に吸引させることを可能にするのに十分に近づける；そして（
ｃ）前記熱化学反応基を当該吸引された標的分子と共有結合を形成させるように
する；工程を含んで成る方法。 - 【請求項２２】 前記試薬組成物がそれを適当な起源に由来するエネルギー
の適用により前記表層に付加させるための１又は複数の光反応基を更に含んで成
る、請求項２１記載の方法。 - 【請求項２３】 前記吸引基及び熱化学反応基が１又は複数の親水性ポリマ
ー骨格に懸垂している、請求項２１記載の方法。 - 【請求項２４】 前記標的分子が核酸である、請求項２１記載の方法。
- 【請求項２５】 前記吸引基がイオン基である、請求項２１記載の方法。
- 【請求項２６】 前記イオン基が第四アンモニウム基及びプロトン化第三ア
ミンから成る群から選ばれる、請求項２５記載の方法。 - 【請求項２７】 前記核酸がアミン及びスルフヒドリル基から成る群から選
ばれる官能基を含んで成る、請求項２４記載の方法。 - 【請求項２８】 前記試薬組成物が吸引基としての１又は複数のイオン基及
び適当な起源、由来のエネルギーの適用により前記表層に当該試薬組成物を付加
させるための１又は複数の光反応基を含んで成る、請求項２４記載の方法。 - 【請求項２９】 前記イオン基が第四アンモニウム基を含んで成る、請求項
２８記載の方法。 - 【請求項３０】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項２２記載の方法。 - 【請求項３１】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項３０記載の方法。 - 【請求項３２】 前記標的分子が核酸であり、そして前記光反応基が光反応
性アリールケトン類から成る群から選ばれる、請求項２６記載の方法。 - 【請求項３３】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項３２記載の方法。 - 【請求項３４】 前記試薬組成物が１又は複数の吸引基を含んで成る親水性
骨格を含んで成る第一試薬と、１又は複数の熱化学反応基及び１又は複数の光反
応基を含んで成る親水性骨格を含んで成る第二試薬とを含んで成る組成物の形態
にある、請求項２３記載の方法。 - 【請求項３５】 前記標的分子が核酸である、請求項３４記載の方法。
- 【請求項３６】 前記吸引基がイオン基である、請求項３１記載の方法。
- 【請求項３７】 前記イオン基が第四アンモニウム基及びプロトン化第三ア
ミンから成る群から選ばれる、請求項３６記載の方法。 - 【請求項３８】 前記核酸がアミン及びスルフヒドリル基から成る群から選
ばれる官能基を含んで成る、請求項３５記載の方法。 - 【請求項３９】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項３４記載の方法。 - 【請求項４０】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項３９記載の方法。 - 【請求項４１】 請求項２１記載の方法により標的分子及び試薬組成物でコ
ーティングされた基体表層。 - 【請求項４２】 前記試薬組成物がそれを適当な起源に由来するエネルギー
の適用により前記表層に付加させるための１又は複数の光反応基を更に含んで成
る、請求項４１記載の表層。 - 【請求項４３】 前記標的分子が核酸である、請求項４２記載の表層。
- 【請求項４４】 前記吸引基が第四アンモニウム基及びプロトン化第三アミ
ンから成る群から選ばれる、請求項４１記載の表層。 - 【請求項４５】 前記核酸がアミン及びスルフヒドリル基から成る群から選
ばれる官能基を含んで成る、請求項４３記載の表層。 - 【請求項４６】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項４１記載の表層。 - 【請求項４７】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項４６記載の表層。 - 【請求項４８】 前記試薬組成物が１又は複数の吸引基を含んで成る親水性
骨格を含んで成る第一試薬と、１又は複数の熱化学反応基及び１又は複数の光反
応基を含んで成る親水性骨格を含んで成る第二試薬とを含んで成る組成物の形態
にある、請求項４２記載の表層。 - 【請求項４９】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項４８記載の表層。 - 【請求項５０】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項４９記載の表層。 - 【請求項５１】 請求項１記載のコーティングされた試薬組成物を含んで成
る表層。 - 【請求項５２】 前記試薬組成物がそれを適当な起源に由来するエネルギー
の適用により前記表層に付加させるための１又は複数の光反応基を更に含んで成
る、請求項５１記載の表層。 - 【請求項５３】 前記標的分子が核酸である、請求項５２記載の表層。
- 【請求項５４】 前記吸引基が第四アンモニウム基及びプロトン化第三アミ
ンから成る群から選ばれる、請求項５１記載の表層。 - 【請求項５５】 前記核酸がアミン及びスルフヒドリル基から成る群から選
ばれる官能基を含んで成る、請求項５３記載の表層。 - 【請求項５６】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項５１記載の表層。 - 【請求項５７】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項５６記載の表層。 - 【請求項５８】 前記試薬組成物が１又は複数の吸引基を含んで成る親水性
骨格を含んで成る第一試薬と、１又は複数の熱化学反応基及び１又は複数の光反
応基を含んで成る親水性骨格を含んで成る第二試薬とを含んで成る組成物の形態
にある、請求項５２記載の表層。 - 【請求項５９】 前記光反応基が光反応アリールケトン類から成る群から選
ばれる、請求項５８記載の表層。 - 【請求項６０】 前記光反応アリールケトン類が各々、独立して、アセトフ
ェノン、ベンゾフェノン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環
から成る群から選ばれる、請求項５９記載の表層。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/940,213 US5858653A (en) | 1997-09-30 | 1997-09-30 | Reagent and method for attaching target molecules to a surface |
| US08/940,213 | 1997-09-30 | ||
| PCT/US1998/020140 WO1999016907A2 (en) | 1997-09-30 | 1998-09-25 | Reagent and method for attaching target molecules to a surface |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001518604A true JP2001518604A (ja) | 2001-10-16 |
| JP4426092B2 JP4426092B2 (ja) | 2010-03-03 |
Family
ID=25474428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000513975A Expired - Fee Related JP4426092B2 (ja) | 1997-09-30 | 1998-09-25 | 表層に標的分子を付加するための試薬及び方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5858653A (ja) |
| EP (1) | EP1019424B1 (ja) |
| JP (1) | JP4426092B2 (ja) |
| AU (1) | AU737391B2 (ja) |
| CA (1) | CA2304362C (ja) |
| DE (1) | DE69828625T2 (ja) |
| WO (1) | WO1999016907A2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002534663A (ja) * | 1999-01-08 | 2002-10-15 | サーモディックス，インコーポレイティド | 表面への標的分子の付着 |
| JP2003509211A (ja) * | 1999-09-22 | 2003-03-11 | サーモディックス，インコーポレイティド | 開始剤基を有する水溶性コーティング剤およびコーティング方法 |
| JP2003526791A (ja) * | 2000-03-09 | 2003-09-09 | サーモディックス，インコーポレイティド | エポキシドポリマーの表面 |
| JP2003535351A (ja) * | 2000-06-02 | 2003-11-25 | エペンドルフ アーゲー | バイオ分子を固定しマイクロアレーの出発製品として役立つ表面機能化担体の製造法 |
| JP2009502243A (ja) | 2005-07-20 | 2009-01-29 | サーモディクス，インコーポレイティド | ポリマーコーティング及び細胞接着方法 |
| JP2009502242A (ja) * | 2005-07-20 | 2009-01-29 | サーモディクス，インコーポレイティド | ポリマーがコーティングされたナノフィブリル構造体、並びに細胞維持及び分化のための方法 |
Families Citing this family (143)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6150164A (en) * | 1996-09-30 | 2000-11-21 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods and compositions of a bioartificial kidney suitable for use in vivo or ex vivo |
| US6096726A (en) | 1998-03-11 | 2000-08-01 | Surface Solutions Laboratories Incorporated | Multicomponent complex for use with substrate |
| US6465525B1 (en) | 1998-03-18 | 2002-10-15 | Surmodics, Inc. | Latent reactive blood compatible agents |
| US6376619B1 (en) | 1998-04-13 | 2002-04-23 | 3M Innovative Properties Company | High density, miniaturized arrays and methods of manufacturing same |
| EP1174157B1 (en) * | 1998-04-27 | 2005-06-29 | Surmodics Inc. | Bioactive agent release coating |
| US6818437B1 (en) * | 1998-05-16 | 2004-11-16 | Applera Corporation | Instrument for monitoring polymerase chain reaction of DNA |
| US7498164B2 (en) | 1998-05-16 | 2009-03-03 | Applied Biosystems, Llc | Instrument for monitoring nucleic acid sequence amplification reaction |
| ATE425448T1 (de) | 1998-05-16 | 2009-03-15 | Applera Corp | Optisches gerät insbesondere zur überwachung von dns-polymerasekettenreaktionen |
| US6500481B1 (en) | 1998-06-11 | 2002-12-31 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Biomedical devices with amid-containing coatings |
| US6664061B2 (en) | 1999-06-25 | 2003-12-16 | Amersham Biosciences Ab | Use and evaluation of a [2+2] photoaddition in immobilization of oligonucleotides on a three-dimensional hydrogel matrix |
| US6372813B1 (en) | 1999-06-25 | 2002-04-16 | Motorola | Methods and compositions for attachment of biomolecules to solid supports, hydrogels, and hydrogel arrays |
| DE60027309T2 (de) * | 1999-07-02 | 2006-08-31 | Symyx Technologies, Inc., Santa Clara | Polymerverzweigungen zur immobilisierung von molekülen auf oberflächen oder substraten, wobei die polymere wasserlösliche oder wasserdispergierbare segmente und sonden aufweisen |
| US6492118B1 (en) | 1999-08-27 | 2002-12-10 | Matrix Technologies Corporation | Methods of immobilizing ligands on solid supports |
| US6358557B1 (en) * | 1999-09-10 | 2002-03-19 | Sts Biopolymers, Inc. | Graft polymerization of substrate surfaces |
| AU1075701A (en) | 1999-10-08 | 2001-04-23 | Protogene Laboratories, Inc. | Method and apparatus for performing large numbers of reactions using array assembly |
| US6478423B1 (en) | 1999-10-12 | 2002-11-12 | Johnson & Johnson Vison Care, Inc. | Contact lens coating selection and manufacturing process |
| US6077674A (en) * | 1999-10-27 | 2000-06-20 | Agilent Technologies Inc. | Method of producing oligonucleotide arrays with features of high purity |
| US6482638B1 (en) * | 1999-12-09 | 2002-11-19 | 3M Innovative Properties Company | Heat-relaxable substrates and arrays |
| US6278018B1 (en) * | 1999-12-14 | 2001-08-21 | Surmodics, Inc. | Surface coating agents |
| AU2001256106A1 (en) * | 2000-02-28 | 2001-09-03 | Variom Biotechnology Ag | Method for immobilizing nucleic acids |
| DE10053393A1 (de) * | 2000-02-28 | 2001-12-20 | Origen Biotechnology Ag | Verfahren zur Immobilisierung von Nukleinsäuren |
| US6410643B1 (en) * | 2000-03-09 | 2002-06-25 | Surmodics, Inc. | Solid phase synthesis method and reagent |
| WO2001073126A2 (en) * | 2000-03-24 | 2001-10-04 | Lyles, Mark, B. | Diagnostic devices containing porous material |
| US7875442B2 (en) * | 2000-03-24 | 2011-01-25 | Eppendorf Array Technologies | Identification and quantification of a plurality of biological (micro)organisms or their components |
| DE10028323A1 (de) * | 2000-06-07 | 2001-12-20 | Evotec Biosystems Ag | Titerplatte |
| US6706479B2 (en) * | 2000-10-05 | 2004-03-16 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Bio-chip, photoluminescent methods for identifying biological material, and apparatuses for use with such methods and bio-chips |
| AU2002211669A1 (en) * | 2000-10-12 | 2002-04-22 | Robert Corcoran | Purification of substance by reaction affinity chromatography |
| US6538010B1 (en) * | 2000-11-08 | 2003-03-25 | Research Triangle Institute | Compounds and methods for promoting smoking cessation |
| WO2002039111A1 (fr) * | 2000-11-13 | 2002-05-16 | Toyo Kohan Co., Ltd. | Supports d'hybridation et procede d'immobilisation d'hybrides |
| US6591970B2 (en) | 2000-12-13 | 2003-07-15 | Ecolab Inc. | Water-activatable conveyor lubricant and method for transporting articles on a conveyor system |
| US7205161B2 (en) * | 2001-01-10 | 2007-04-17 | Symyx Technologies, Inc. | Polymer brushes for immobilizing molecules to a surface or substrate having improved stability |
| US20020187249A1 (en) * | 2001-05-08 | 2002-12-12 | Wilhelm Pluster | Process for the production of surface-functionalized supports that serve as starting materials for microarrays used for immobilizing biomolecules |
| NZ511705A (en) * | 2001-05-14 | 2004-03-26 | Horticulture & Food Res Inst | Methods and rapid immunoassay device for detecting progesterone and other steroids |
| US6825032B2 (en) * | 2001-05-14 | 2004-11-30 | Sigma-Aldrich Co. | High capacity assay platforms |
| US7501157B2 (en) * | 2001-06-26 | 2009-03-10 | Accelr8 Technology Corporation | Hydroxyl functional surface coating |
| US6844028B2 (en) * | 2001-06-26 | 2005-01-18 | Accelr8 Technology Corporation | Functional surface coating |
| US7297553B2 (en) * | 2002-05-28 | 2007-11-20 | Nanosphere, Inc. | Method for attachment of silylated molecules to glass surfaces |
| US7687437B2 (en) * | 2001-07-13 | 2010-03-30 | Nanosphere, Inc. | Method for immobilizing molecules onto surfaces |
| US6444318B1 (en) | 2001-07-17 | 2002-09-03 | Surmodics, Inc. | Self assembling monolayer compositions |
| EP1572896A4 (en) * | 2001-07-30 | 2006-06-07 | Angiotech Biocoatings Corp | PFROPFPOLYMERMATRIZES |
| US7097882B2 (en) * | 2001-08-21 | 2006-08-29 | Samsung Sdi Co., Ltd. | Substrate for immobilizing physiological material, and method of fabricating same |
| US7332330B2 (en) | 2001-09-11 | 2008-02-19 | Renamed Biologics, Inc. | Device for maintaining vascularization near an implant |
| US20030099949A1 (en) * | 2001-10-05 | 2003-05-29 | Surmodics, Inc. | Arrays having clustered arrangements and methods of making and using |
| US7348055B2 (en) * | 2001-12-21 | 2008-03-25 | Surmodics, Inc. | Reagent and method for providing coatings on surfaces |
| KR100450202B1 (ko) * | 2002-01-07 | 2004-09-24 | 삼성에스디아이 주식회사 | 생체물질 고정용 관능기의 패턴 형성 방법 |
| KR100484640B1 (ko) * | 2002-01-14 | 2005-04-20 | 삼성에스디아이 주식회사 | 생물분자 고정용 올리고머, 및 이를 포함하는 생물분자고정화 조성물 |
| AU2003217837A1 (en) * | 2002-02-28 | 2003-09-16 | Keck Graduate Institute | Cationic polyelectrolytes in biomolecule purification and analysis |
| US7442546B2 (en) * | 2002-03-15 | 2008-10-28 | The Regents Of The University Of Michigan | Method of modulating inflammatory response |
| US7217512B2 (en) * | 2002-05-09 | 2007-05-15 | Corning Incorporated | Reagent and method for attaching target molecules to a surface |
| US7097850B2 (en) * | 2002-06-18 | 2006-08-29 | Surmodics, Inc. | Bioactive agent release coating and controlled humidity method |
| US20030232087A1 (en) * | 2002-06-18 | 2003-12-18 | Lawin Laurie R. | Bioactive agent release coating with aromatic poly(meth)acrylates |
| JP2004101516A (ja) * | 2002-07-19 | 2004-04-02 | Canon Inc | プローブ担体およびその製造方法 |
| FR2843756B1 (fr) | 2002-08-26 | 2005-04-22 | Commissariat Energie Atomique | Procede de soudage d'une surface polymere avec une surface conductrice ou semi-conductrice et ses applications |
| US20040043508A1 (en) * | 2002-09-03 | 2004-03-04 | Frutos Anthony G. | Polymer-coated substrates for binding biological molecules |
| US7919600B2 (en) * | 2002-09-23 | 2011-04-05 | Alcatel-Lucent Usa Inc. | Compositions that reversibly gel and de-gel |
| US8389700B2 (en) * | 2002-09-23 | 2013-03-05 | Alcatel Lucent | Agent delivery system capable of selectively releasing an agent |
| US20040076961A1 (en) * | 2002-10-21 | 2004-04-22 | Lewis Mark A. | Biomolecule retaining material and methods for attaching biomolecules to a surface |
| US7195908B2 (en) | 2002-10-31 | 2007-03-27 | Corning Incorporated | Supports treated with triamine for immobilizing biomolecules |
| AU2002368411A1 (en) | 2002-11-29 | 2004-06-23 | Marcella Chiari | Method for immobilizing biologic molecules on solid surfaces |
| US20040111144A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-06-10 | Lawin Laurie R. | Barriers for polymeric coatings |
| US20070082019A1 (en) * | 2003-02-21 | 2007-04-12 | Ciphergen Biosystems Inc. | Photocrosslinked hydrogel surface coatings |
| US20040192842A1 (en) * | 2003-03-25 | 2004-09-30 | Council Of Scientific And Industrial Research | Method for preparing photoreactive polymers and immobilization of biomolecules onto these polymers |
| AU2003226633A1 (en) * | 2003-03-31 | 2004-10-25 | Council Of Scientific And Industrial Research | Method for preparing photoreactive polymers for immobilizing biomolecules thereon |
| WO2004088319A1 (ja) * | 2003-03-31 | 2004-10-14 | Kanagawa Academy Of Science And Technology | 物質固定化剤、それを用いた物質固定化方法及びそれを用いた物質固定化基体 |
| US7585499B2 (en) * | 2003-04-10 | 2009-09-08 | Surmodics, Inc. | Method for encapsulation of cellular material using a charged initiator polymer |
| US7820158B2 (en) * | 2003-04-10 | 2010-10-26 | Surmodics, Inc. | Ligand-coupled initiator polymers and methods of use |
| US20050064431A1 (en) * | 2003-09-09 | 2005-03-24 | Eastman Kodak Company | Biological microarray comprising polymer particles and method of use |
| WO2005029041A2 (en) * | 2003-09-19 | 2005-03-31 | Applera Corporation | High density sequence detection methods and apparatus |
| US20050226771A1 (en) * | 2003-09-19 | 2005-10-13 | Lehto Dennis A | High speed microplate transfer |
| US20050233472A1 (en) * | 2003-09-19 | 2005-10-20 | Kao H P | Spotting high density plate using a banded format |
| US7309593B2 (en) * | 2003-10-01 | 2007-12-18 | Surmodics, Inc. | Attachment of molecules to surfaces |
| WO2005037338A1 (en) * | 2003-10-14 | 2005-04-28 | Cook Incorporated | Hydrophilic coated medical device |
| US7423155B2 (en) * | 2003-11-14 | 2008-09-09 | 3M Innovative Properties Company | N-sulfonyldicarboximide containing tethering compounds |
| US7361767B2 (en) * | 2003-11-14 | 2008-04-22 | 3M Innovative Properties Company | N-sulfonyldicarboximide containing tethering compounds |
| US8202833B2 (en) * | 2003-11-26 | 2012-06-19 | Surmodics, Inc. | Composition containing biocompatible polymerization accelerator and polymerizable material |
| EP2789383B1 (en) | 2004-01-07 | 2023-05-03 | Illumina Cambridge Limited | Molecular arrays |
| US20060083772A1 (en) * | 2004-04-06 | 2006-04-20 | Dewitt David M | Coating compositions for bioactive agents |
| US20050220843A1 (en) * | 2004-04-06 | 2005-10-06 | Dewitt David M | Coating compositions for bioactive agents |
| WO2005115490A2 (en) * | 2004-05-25 | 2005-12-08 | Surmodics, Inc. | Natural biodegradable polysaccharide coatings for meical articles |
| US7217428B2 (en) * | 2004-05-28 | 2007-05-15 | Technology Innovations Llc | Drug delivery apparatus utilizing cantilever |
| US20060110594A1 (en) * | 2004-11-24 | 2006-05-25 | Frutos Anthony G | Polymer-coated substrates for binding biomolecules and methods of making and using thereof |
| US20060147943A1 (en) * | 2004-12-30 | 2006-07-06 | Lewis Mark A | Substrates having pendant epoxide groups for binding biomolecules and methods of making and using thereof |
| WO2006078470A2 (en) | 2005-01-18 | 2006-07-27 | Biocept, Inc. | Cell separation using microchannel having patterned posts |
| US20090136982A1 (en) | 2005-01-18 | 2009-05-28 | Biocept, Inc. | Cell separation using microchannel having patterned posts |
| US20060252087A1 (en) * | 2005-01-18 | 2006-11-09 | Biocept, Inc. | Recovery of rare cells using a microchannel apparatus with patterned posts |
| US8158410B2 (en) | 2005-01-18 | 2012-04-17 | Biocept, Inc. | Recovery of rare cells using a microchannel apparatus with patterned posts |
| KR100682919B1 (ko) * | 2005-01-20 | 2007-02-15 | 삼성전자주식회사 | 미세 금속 박막 패턴 형성 방법, 이를 채용한 생체물질고정용 기판 및 바이오칩 |
| US20060210603A1 (en) * | 2005-02-23 | 2006-09-21 | Williams Stuart K | Implantable medical articles having laminin coatings and methods of use |
| CA2600711C (en) * | 2005-03-15 | 2014-07-08 | Surmodics, Inc. | Compliant polymeric coatings for insertable medical articles |
| US20080020941A1 (en) | 2005-03-24 | 2008-01-24 | Jimpei Tabata | Biomolecule-immobilized plate and method for fabricating biomolecule-immobilized plate |
| US8002730B2 (en) * | 2005-04-29 | 2011-08-23 | Medtronic, Inc. | Anti-thrombogenic venous shunt system and method |
| US7544756B2 (en) * | 2005-09-30 | 2009-06-09 | 3M Innovative Properties Company | Crosslinked polymers with amine binding groups |
| US7544755B2 (en) * | 2005-09-30 | 2009-06-09 | 3M Innovative Properties Company | Crosslinked polymers with amine binding groups |
| EP1945380B1 (en) | 2005-11-08 | 2011-02-16 | SurModics, Inc. | Ultra-thin photo-polymeric coatings and uses thereof |
| US7781203B2 (en) * | 2005-12-29 | 2010-08-24 | Corning Incorporated | Supports for assaying analytes and methods of making and using thereof |
| US7695956B2 (en) * | 2006-01-12 | 2010-04-13 | Biocept, Inc. | Device for cell separation and analysis and method of using |
| US20080082036A1 (en) * | 2006-04-25 | 2008-04-03 | Medtronic, Inc. | Cerebrospinal fluid shunt having long term anti-occlusion agent delivery |
| US20080063627A1 (en) * | 2006-09-12 | 2008-03-13 | Surmodics, Inc. | Tissue graft materials containing biocompatible agent and methods of making and using same |
| US8852620B2 (en) | 2007-07-20 | 2014-10-07 | Medtronic Vascular, Inc. | Medical devices comprising polymeric drug delivery systems with drug solubility gradients |
| US8993068B2 (en) | 2008-11-04 | 2015-03-31 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Heterobifunctional polymers and methods for layer-by-layer construction of multilayer films |
| US10058634B2 (en) | 2009-04-28 | 2018-08-28 | Surmodics, Inc. | Devices and methods for delivery of bioactive agents |
| EP2588156B1 (en) | 2010-06-29 | 2014-08-13 | SurModics, Inc. | Fluorinated polymers and lubricious coatings |
| KR101889246B1 (ko) | 2010-07-30 | 2018-08-16 | 노파르티스 아게 | 수분이 풍부한 표면을 갖는 실리콘 히드로겔 렌즈 |
| US8722076B2 (en) | 2010-09-30 | 2014-05-13 | Surmodics, Inc. | Photochrome- or near IR dye-coupled polymeric matrices for medical articles |
| US20120171769A1 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | Mcgonigle Joseph S | Cell attachment coatings and methods |
| US9006345B2 (en) | 2011-03-25 | 2015-04-14 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Heterotrifunctional molecules and methods for the synthesis of dendrimeric materials |
| US9757497B2 (en) | 2011-05-20 | 2017-09-12 | Surmodics, Inc. | Delivery of coated hydrophobic active agent particles |
| US9861727B2 (en) | 2011-05-20 | 2018-01-09 | Surmodics, Inc. | Delivery of hydrophobic active agent particles |
| US10213529B2 (en) | 2011-05-20 | 2019-02-26 | Surmodics, Inc. | Delivery of coated hydrophobic active agent particles |
| US9005700B2 (en) | 2011-10-12 | 2015-04-14 | Novartis Ag | Method for making UV-absorbing ophthalmic lenses |
| US9375517B2 (en) | 2012-01-18 | 2016-06-28 | Surmodies, Inc. | Lubricious medical device coating with low particulates |
| EP2838577B1 (en) | 2012-04-02 | 2019-02-27 | SurModics, Inc. | Hydrophilic polymeric coatings for medical articles with visualization moiety |
| US9012022B2 (en) | 2012-06-08 | 2015-04-21 | Illumina, Inc. | Polymer coatings |
| EP2866849B1 (en) | 2012-06-29 | 2020-02-19 | SurModics, Inc. | Cell attachment coatings and methods using phosphorous-containing photoreagent |
| US11246963B2 (en) | 2012-11-05 | 2022-02-15 | Surmodics, Inc. | Compositions and methods for delivery of hydrophobic active agents |
| WO2014071387A1 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-08 | Surmodics, Inc. | Composition and method for delivery of hydrophobic active agents |
| US9629945B2 (en) | 2012-12-12 | 2017-04-25 | Surmodics, Inc. | Stilbene-based reactive compounds, polymeric matrices formed therefrom, and articles visualizable by fluorescence |
| US10338408B2 (en) | 2012-12-17 | 2019-07-02 | Novartis Ag | Method for making improved UV-absorbing ophthalmic lenses |
| EP4276161A3 (en) | 2013-01-04 | 2024-01-17 | SurModics, Inc. | Low particulate lubricious coating with vinyl pyrrolidone and acidic polymer-containing layers |
| CN103360807A (zh) * | 2013-07-01 | 2013-10-23 | 恒昌涂料（惠阳）有限公司 | 一种含氟光固化水性涂料及其制备方法 |
| SG11201603699SA (en) | 2013-12-17 | 2016-07-28 | Novartis Ag | A silicone hydrogel lens with a crosslinked hydrophilic coating |
| MX2017001626A (es) | 2014-08-08 | 2017-05-09 | Surmodics Inc | Recubrimientos de articulo que incluyen capa de polifenol oligomerizado y metodos biologicos de uso. |
| WO2016032926A1 (en) | 2014-08-26 | 2016-03-03 | Novartis Ag | Method for applying stable coating on silicone hydrogel contact lenses |
| US10124088B2 (en) | 2014-09-29 | 2018-11-13 | Surmodics, Inc. | Lubricious medical device elements |
| CN107405424A (zh) | 2015-01-29 | 2017-11-28 | 苏尔莫迪克斯公司 | 疏水性活性剂颗粒的递送 |
| US10478546B2 (en) | 2015-09-15 | 2019-11-19 | Surmodics, Inc. | Hemodialysis catheter sleeve |
| CN108369291B (zh) | 2015-12-15 | 2021-07-20 | 爱尔康公司 | 用于将稳定的涂层施加在硅酮水凝胶接触镜片上的方法 |
| US10342898B2 (en) | 2015-12-29 | 2019-07-09 | Surmodics, Inc. | Lubricious coatings with surface salt groups |
| US11174447B2 (en) | 2015-12-29 | 2021-11-16 | Surmodics, Inc. | Lubricious coatings with surface salt groups |
| US20170281914A1 (en) | 2016-03-31 | 2017-10-05 | Surmodics, Inc. | Localized treatment of tissues through transcatheter delivery of active agents |
| US10806904B2 (en) | 2016-03-31 | 2020-10-20 | Surmodics, Inc. | Two-part insertion tool and methods |
| US10918835B2 (en) | 2016-03-31 | 2021-02-16 | Surmodics, Inc. | Delivery system for active agent coated balloon |
| US11278647B2 (en) | 2016-03-31 | 2022-03-22 | Surmodics, Inc. | Lubricious coating for medical device |
| US10391292B2 (en) | 2016-06-15 | 2019-08-27 | Surmodics, Inc. | Hemostasis sealing device with constriction ring |
| EP3263623A1 (en) * | 2016-06-30 | 2018-01-03 | Freie Universität Berlin | Coating compound and coating arrangement |
| JP2019532695A (ja) | 2016-09-16 | 2019-11-14 | サーモディクス，インコーポレイティド | 医療デバイス用の潤滑性挿入具および使用方法 |
| US10758719B2 (en) | 2016-12-15 | 2020-09-01 | Surmodics, Inc. | Low-friction sealing devices |
| EP3554571A1 (en) | 2016-12-16 | 2019-10-23 | Surmodics, Inc. | Hydrophobic active agent particle coatings and methods for treatment |
| US10898446B2 (en) | 2016-12-20 | 2021-01-26 | Surmodics, Inc. | Delivery of hydrophobic active agents from hydrophilic polyether block amide copolymer surfaces |
| HUE057348T2 (hu) | 2017-12-13 | 2022-05-28 | Alcon Inc | Eljárás MPS-kompatibilis hidrogradiens kontaktlencsék elõállítására |
| CN113321763A (zh) * | 2021-08-02 | 2021-08-31 | 微创视神医疗科技(上海)有限公司 | 一种聚合物及其应用、以及眼科医疗器材 |
| WO2023059871A1 (en) | 2021-10-08 | 2023-04-13 | Surmodics Md, Llc | Catheter with multiple braid layers |
| WO2023211937A1 (en) | 2022-04-25 | 2023-11-02 | Surmodics, Inc. | Medical device coatings with microcrystalline active agents |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5073484A (en) * | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
| US5512329A (en) * | 1982-09-29 | 1996-04-30 | Bsi Corporation | Substrate surface preparation |
| US4973493A (en) * | 1982-09-29 | 1990-11-27 | Bio-Metric Systems, Inc. | Method of improving the biocompatibility of solid surfaces |
| US4722906A (en) * | 1982-09-29 | 1988-02-02 | Bio-Metric Systems, Inc. | Binding reagents and methods |
| US5217492A (en) * | 1982-09-29 | 1993-06-08 | Bio-Metric Systems, Inc. | Biomolecule attachment to hydrophobic surfaces |
| US5002582A (en) * | 1982-09-29 | 1991-03-26 | Bio-Metric Systems, Inc. | Preparation of polymeric surfaces via covalently attaching polymers |
| US4979959A (en) * | 1986-10-17 | 1990-12-25 | Bio-Metric Systems, Inc. | Biocompatible coating for solid surfaces |
| EP0484472B1 (de) * | 1990-04-12 | 1997-07-16 | SIGRIST, Hans, Dr. | Verfahren zur lichtinduzierten immobilisierung von biomolekülen an chemisch "inerten" oberflächen |
| FR2679255B1 (fr) * | 1991-07-17 | 1993-10-22 | Bio Merieux | Procede d'immobilisation d'un fragment nucleique par fixation passive sur un support solide, support solide ainsi obtenu et son utilisation. |
| CA2107683C (en) * | 1992-02-13 | 2004-07-20 | Dale G. Swan | Immobilization of chemical species in crosslinked matrices |
| US5414075A (en) * | 1992-11-06 | 1995-05-09 | Bsi Corporation | Restrained multifunctional reagent for surface modification |
| EP0680623A4 (en) * | 1993-01-21 | 1996-07-24 | Oregon State | CHEMICAL FUNCTIONALIZATION OF SURFACES. |
| US5610287A (en) * | 1993-12-06 | 1997-03-11 | Molecular Tool, Inc. | Method for immobilizing nucleic acid molecules |
| US5643580A (en) * | 1994-10-17 | 1997-07-01 | Surface Genesis, Inc. | Biocompatible coating, medical device using the same and methods |
| US5707818A (en) * | 1994-12-13 | 1998-01-13 | Bsi Corporation | Device and method for simultaneously performing multiple competitive immunoassays |
| DE19533682A1 (de) * | 1995-09-12 | 1997-03-13 | Biotronik Mess & Therapieg | Verfahren zum Anlagern und Immobilisieren von Heparin auf anorganischen Substratoberflächen von kardiovaskulären Implantanten |
| US5714360A (en) * | 1995-11-03 | 1998-02-03 | Bsi Corporation | Photoactivatable water soluble cross-linking agents containing an onium group |
-
1997
- 1997-09-30 US US08/940,213 patent/US5858653A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-09-25 EP EP98949524A patent/EP1019424B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-25 CA CA002304362A patent/CA2304362C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-25 JP JP2000513975A patent/JP4426092B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-25 DE DE69828625T patent/DE69828625T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-25 AU AU95828/98A patent/AU737391B2/en not_active Ceased
- 1998-09-25 WO PCT/US1998/020140 patent/WO1999016907A2/en active IP Right Grant
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002534663A (ja) * | 1999-01-08 | 2002-10-15 | サーモディックス，インコーポレイティド | 表面への標的分子の付着 |
| JP2003509211A (ja) * | 1999-09-22 | 2003-03-11 | サーモディックス，インコーポレイティド | 開始剤基を有する水溶性コーティング剤およびコーティング方法 |
| JP4782338B2 (ja) * | 1999-09-22 | 2011-09-28 | サーモディクス，インコーポレイティド | 開始剤基を有する水溶性コーティング剤およびコーティング方法 |
| JP2003526791A (ja) * | 2000-03-09 | 2003-09-09 | サーモディックス，インコーポレイティド | エポキシドポリマーの表面 |
| JP5005869B2 (ja) * | 2000-03-09 | 2012-08-22 | サーモディクス，インコーポレイティド | エポキシドポリマーの表面 |
| JP2003535351A (ja) * | 2000-06-02 | 2003-11-25 | エペンドルフ アーゲー | バイオ分子を固定しマイクロアレーの出発製品として役立つ表面機能化担体の製造法 |
| JP2009502243A (ja) | 2005-07-20 | 2009-01-29 | サーモディクス，インコーポレイティド | ポリマーコーティング及び細胞接着方法 |
| JP2009502242A (ja) * | 2005-07-20 | 2009-01-29 | サーモディクス，インコーポレイティド | ポリマーがコーティングされたナノフィブリル構造体、並びに細胞維持及び分化のための方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU737391B2 (en) | 2001-08-16 |
| JP4426092B2 (ja) | 2010-03-03 |
| EP1019424B1 (en) | 2005-01-12 |
| EP1019424A2 (en) | 2000-07-19 |
| US5858653A (en) | 1999-01-12 |
| AU9582898A (en) | 1999-04-23 |
| CA2304362C (en) | 2009-12-01 |
| WO1999016907A2 (en) | 1999-04-08 |
| CA2304362A1 (en) | 1999-04-08 |
| DE69828625T2 (de) | 2005-12-29 |
| DE69828625D1 (de) | 2005-02-17 |
| WO1999016907A3 (en) | 1999-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4426092B2 (ja) | 表層に標的分子を付加するための試薬及び方法 | |
| JP4768130B2 (ja) | 表面への標的分子の付着 | |
| US6506895B2 (en) | Photoactivatable nucleic acids | |
| US7829317B2 (en) | Attachment of molecules to surfaces | |
| JP5005869B2 (ja) | エポキシドポリマーの表面 | |
| US20030082604A1 (en) | High density arrays | |
| MXPA00003045A (es) | Reactivo y metodo para conectar moleculas objetivo a una superficie | |
| MXPA01006935A (es) | Union de moleculas de blanco a las superficies |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050908 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080930 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20081224 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090107 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090306 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090616 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090916 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20091110 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20091210 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121218 Year of fee payment: 3 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |