JP2001514630A

JP2001514630A - 抗凝血／抗血栓活性を有する硫酸化オリゴ糖類

Info

Publication number: JP2001514630A
Application number: JP53897298A
Authority: JP
Inventors: パリッシュ，クリストファー・リチャード; カウデン，ウィリアム・バトラー
Original assignee: ジ・オーストラリアン・ナショナル・ユニバーシティー
Priority date: 1997-03-11
Filing date: 1998-03-10
Publication date: 2001-09-11
Also published as: ZA982050B; US6271215B1; AUPO556297A0; WO1998040081A1; CA2283990A1; IL131819A0; TW580391B; CN1161124C; EP0973526A4; CN1251992A; EP0973526A1; BR9808008A

Abstract

(57)【要約】抗凝血および／または抗血栓処置を必要とするヒトまたは他の温血動物患者への抗凝血および／または抗血栓処置方法であって、少なくとも１種の硫酸化オリゴ糖の有効量を患者に投与することを含み、オリゴ糖が一般式Ｉ：〔式中、Ｒ₁およびＲ₂および各Ｒ_xはそのいずれもが同じでも異なっていてもよい単糖単位を表し、隣接する単糖単位は１→２、１→３、１→４および/または１→６グリコシド結合によって結合されており；ｎは１〜６の整数である〕で表される方法。

Description

【発明の詳細な説明】抗凝血／抗血栓活性を有する硫酸化オリゴ糖類技術分野本発明は硫酸化オリゴ糖類に関し、特に抗凝血薬および/または抗血栓薬としてのある種の硫酸化オリゴ糖類の用途に関する。背景技術哺乳動物肥満細胞によって産生される硫酸化グリコサミノグリカンであるヘパリンは、この５０年間、術後血栓症を防止するためおよび急性静脈血栓症を治療するための抗凝血薬として広く用いられてきた。ヘパリンは、主としてプロテアーゼインヒビターであるアンチトロンビンIIIの能力を増強することによって、凝血カスケード中の多くのキープロテアーゼ（最も注目すべきはファクターＸａおよびトロンビンであり、トロンビンは可溶性フィブリノーゲンを不溶性フィブリンに変換するカスケード中の末端酵素である）を脱活性してその抗凝血活性を発揮する（１、２）。事実、高い親和性をもってアンチトロンビンIIIに結合してインヒビター中にコンホメーションの変化を生じる特定のペンタサッカライドがヘパリン中で同定されている（３）。このペンタサッカライドは、アンチトロンビンIIIによるプロテアーゼ、例えばファクターＸａ不活性化を増強するには十分である。これに対して、ヘパリンは、トロンビン不活性化を増強するためにはアンチトロンビンIIIをトロンビンと架橋させる必要がある（３）。ヘパリンは抗凝血薬としての広い臨床用途があるにもかかわらず、多数の大きな欠点を持っている。第１に、ヘパリンは構造的に非常に多様であり、その分子量、単糖の配列および硫酸化様式が変化する（４）。この多様性のために、大部分の製剤中の５０％未満のヘパリン分子が現実にペンタサッカライドと結合しているアンチトロンビンIIIを含んでいる（１-３）。したがってヘパリンの異なるバッチの品質管理は困難である。第２に、ヘパリンは動物の副生物であり、したがって動物の病原菌の混入の危険性があり、今日規制代理店(regulatory agency )の大きい問題である。第３に、ヘパリンは、分子量が高いために静脈投与するしかなく、皮下注射した場合に生体適合性が乏しい（５、６）。また、高分子量（１０〜１５ｋＤａ）であるために薬の効果的な経口デリバリーも妨害する。第４に、臨床効率に関しては、ヘパリンはきわめて傾斜の大きい投与応答曲線を示す。したがって、薬の過剰投与が生じないことを確認するために患者の血漿の凝固時間を絶えず追跡しなければならない。更にヘパリンの効き方の点で患者によってかなり違いがあるためヘパリンの適性投与量は一定しない。これの困難な問題のために出血が生じ、特にこの薬が長期治療で使用されている場合はヘパリン治療を複雑なものにする（５、６）。最後に、長期のヘパリン投与によりかなりの患者が、更なるヘパリン使用をむつかしくする症状である、ヘパリン誘発性の血小板減少症（ＨＩＴ）を発生する。ヘパリンに伴う問題のいくつかを解決する試みとして、低分子量（ＬＭＷ）（分子量４０００〜６５００）の多数のヘパリン製剤が発展し認可されてきた。これらの製剤は元のヘパリンのアンチ-ファクターＸａおよび抗血栓活性を保持しているが、抗凝血薬としての効力が低い。その結果、ＬＭＷヘパリンは患者に出血問題を誘発する可能性は低い。更に寸法が小さいために生体適合性が改善され皮下投与も可能である。他の方法として抗血栓薬として関連するグリコサミノグリカン、デルマタン硫酸が使用されてきた（７）。興味あることに、デルマタン硫酸はヘパリンと異なり、天然の第二のトロンビンインヒビターであるヘパリンコファクターIIによるトロンビン妨害を触媒する（８）。しかし、ＬＭＷヘパリンおよびデルマタン硫酸は有効ではあるが、なお動物由来でなく、患者の応答に再現性があり、経口投与が可能で血小板減少症を誘発する傾向のない、構造が明瞭な抗凝血薬および/ または抗血栓薬に対する要望はかなり根強い。先願の国際出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＡＵ９６／００２３８には、１→２、１→３、１→４および/または１→６グリコシド結合によって結合した単糖単位のポリマーを基にし、３〜８個の単糖単位からなる一群の硫酸化オリゴ糖類の製剤、およびヒト腫瘍起因性血管形成、腫瘍転移および炎症の強力なインヒビターとしてのこれらの硫酸化オリゴ糖類の用途が開示されている。本発明に導く研究において、グリコサミノグリカンから誘導された抗凝血薬/ 抗血栓薬に関係する多数の問題を克服するための抗凝血薬/抗血栓薬としてこれらの硫酸化オリゴ糖類を使用してもよいことが分かってきた。特に、硫酸化ペンタサッカライド類またはヘキササッカライド類は十分構造が定義され、広い治療領域を持ち、高い患者応答再現性があり、多分ＨＩＴ様徴候を誘発する機会が少なく、経口デリバリーの可能性があることが分かってきた。更に、これらの硫酸化オリゴ糖類はアンチトロンビンIIIを経由しないで作用し、ヘパリンコファクターIIを活性化することによって凝血を防止するようである。このように活性な硫酸化オリゴ糖類は作用の様式においてヘパリンよりもむしろある程度硫酸化多糖類であるデルマタン硫酸に類似している。このようなオリゴ糖類は、多くの血栓症および心血管症の予防および治療のいずれにも使用してよく、これらの中の最も顕著なものは程度の高い静脈血栓、肺塞栓症、血栓性発作、抹消動脈血栓、不安定な狭心症および心筋梗塞である。更に、硫酸化オリゴ糖類は有効な経口デリバリーが可能であるため、強い副作用を持って広く経口抗凝血薬として使用されるワルファリンの代替物となり得る。発明の要旨本発明はひとつの面として、抗凝血および/または抗血栓処置を必要とするヒトまたは他の温血動物患者に、少なくとも１種の硫酸化オリゴ糖の有効量を患者に投与することを含む抗凝血および/または抗血栓処置を行うための方法を提供するものであり、ここでオリゴ糖とは一般式Ｉ：Ｒ₁-(Ｒ_x)_n-Ｒ₂ （Ｉ）〔式中、Ｒ₁およびＲ₂および各Ｒ_xはそのいずれもが同じでも異なっていてもよい単糖単位を表し、隣接する単糖単位は１→２、１→３、１→４および/または１→６グリコシド結合によって結合されており；ｎは１〜６の整数、好ましくは３または４である〕を有する。好ましくは、硫酸化オリゴ糖類は一般式II：Ｒ-(Ｒ)_n-Ｒ（II）〔式中、Ｒ基は同じものを表し、いずれも単糖を表し、隣接する単糖単位は１→ ２、１→３、１→４および/または１→６グリコシド結合によって結合されており；ｎは１〜５の整数、好ましくは３または４である〕を有する。本明細書で用いられる「抗凝血および/または抗血栓処置」という言葉は、このような処置を要する患者への予防および治療処置の両方を含むことを意味している。発明の詳細な説明本発明で使用される硫酸化オリゴ糖類は単糖単位の重合体を基礎とするものであり、単糖単位は１→２、１→３、１→４および/または１→６グリコシド結合によつて結合されていてもよく、且つ３〜８個の単糖単位から構成されていてもよい。オリゴ糖類は好ましくは３〜６個の単糖単位（ｎにして１〜４）から、より好ましくは５〜６個の単糖単位（ｎにして３〜４）からなる。重合体はただ１種類の単糖単位のみを含有するホモポリマーを含んでもよいし、または２種類またはそれ以上の単糖単位を含有するヘテロポリマー類を含んでもよい。好ましくはホモポリマーである。結合してオリゴ糖を形成する単糖単位は好ましくはヘキソース類であり、フラクトースのようなフラノース類またはグルコース、マンノース、アルトロース、タロース、ガラクトース、イドースまたはグロースのようなピラノース類であってもよい。特に好ましいヘキソース類はグルコースおよびマンノースである。ヘキソース類はＤ-コンフィグレーションであってもよいしまたはＬ-コンフィグレーションであってもよい。各単糖単位はヘキソース、ヘクスロン、ヘキソサミンまたはＮ-アセチルヘキソサミンであってもよい。一般式ＩまたはIIのオリゴ糖類は単糖単位が誘導体化されていてもよく、特にその単糖単位は単糖のリン酸エステル、酢酸エステルまたは他のエステル誘導体である。一般に、本発明の硫酸化オリゴ糖類は、相当するＯ-硫酸化誘導体を生成することが当業者に公知の方法を用いてオリゴ糖類を硫酸化することによって調製してもよい。適切な硫酸化方法は国際出願ＰＣＴ／ＡＵ９６／００２３８に記載されており、その内容は本発明の一部とする。硫酸化されるべきオリゴ糖類は、天然の多糖類（例えば、アミロース、デキストラン、セルロース、ラミナラン、ペクチン、キチン、キトサン、マンナン、および酵母ピチア・ホルスチイ由来のホスホマンナンエキソポリサッカライド）を酵素的または化学的に分解して調製したオリゴ糖類を含む天然製品であってもよい。または、オリゴ糖類は国際特許ＰＣＴ／ＡＵ９６／００２３８に記載の方法によって合成的に調製しても良い。先に記載したように、本発明の範囲に属する硫酸化オリゴ糖類は、抗凝血および/または抗血栓活性を有することが明らかになり、したがって本発明はもうひとつの面として、温血動物（ヒトを含む）患者の処置における抗凝血および/または抗血栓薬としての上記硫酸化オリゴ糖の使用に及ぶ。本発明はまた、ヒトまたは他の温血動物患者の抗凝血および/または抗血栓処置用医薬の製造における上記硫酸化オリゴ糖の少なくとも１種の使用に及ぶ。更に、本発明はまた、上記硫酸化オリゴ糖の少なくとも１種を薬学的におよび獣医学的に許容できるキャリアまたは希釈剤とともに含む抗凝血および/または抗血栓処置用の薬学または獣医学組成物を提供する。活性成分は治療有効量が投与される。治療有効量とは、少なくとも部分的に必要な効果を得る、または処置されるべきそれぞれの症状の開始を遅らせ、進行を妨害し、または開始または進行をともに半減するに必要な量を意味する。このような量はもちろん処置されるべきそれぞれの症状、症状の強さ、年齢、肉体的条件、大きさ、体重を含む個々の患者のパラメータおよび同時に行う治療に依存する。これらのファクターは当業者には公知であり、単なる日常的実験法の手法によって取り扱うことができる。一般には最大投与量、すなわちしっかりした医学的判断による最高安全投与量を用いるのが好ましい。しかし、医学的理由、心理的理由によって、または実際には他の理由によってより低いまたは許容できる投与量を投与してもよい。治療組成物の製剤は当業者にとって十分公知である。好適な薬学または獣医学的に許容できるキャリアおよび/または希釈剤には、従来の溶媒、分散媒、フィラー、固体キャリア、水溶液、コーティング、抗菌剤および抗黴剤、等張剤および吸収遅延剤等のいずれもおよびすべてが含まれる。このような薬学的および獣医学的に活性な物質のための媒体および薬剤使用は当業者に公知であり、例えばレミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ（Remington's Pharmace utical Sciences）、第18版、マック・パブリッシング社出版（アメリカ合衆国、ペンシルバニア）に記載されている。従来の媒体または剤が活性原料と合い容れない場合を除いて、それらを本発明の医薬的および獣医学的組成物中に用いることは問題ない。補助的活性原料も本発明の組成物に組み込んでよい。特に、投与の容易性および投与量を一様にするために組成物を投与単位形で処方することが好ましい。本発明で使用する投与量単位形とは、治療されるべきヒトまたは動物のために単位投与量として適した物理的に分離した単位をいう；各単位は必要な治療効果をもたらすために計算された活性原料の予め定められた量を必要な医薬的または獣医学的キャリアおよび/または希釈剤とともに含む。本発明の新規な投与量単位形の仕様書は、（ａ）活性原料の特有の特性およびもたらされるべき個々の治療効果、および（ｂ）それぞれの処置のためにこのような活性原料を混合する技術に固有の限界によっておよび直接に依存して指示される。投与ルートは種々のものを使用できるが経日デリバリは患者にとって便利であるため好ましい。選ばれるそれぞれの様式は、もちろん処置されているそれぞれの条件および治療効率のために必要な投与量に依存しよう。一般的に言えば、本発明の方法は医学的に許容し得るいかなる投与様式を用いて実施してもよく、これは臨床的に受け入れることのできない副作用を引き起こすことなく本発明の活性成分の治療効果をもたらす任意の方法を意味する。このような投与方式には経口、大腸、局所、鼻、経皮的、または非経口（例えば、皮下、筋肉内および静脈内）ルートが含まれる。経口投与の製剤にはカプセル、錠剤、トローチ剤等の単離した単位が含まれる。他のルートには脊髄液への直接くも膜下投与、当業者によく知られている種々のカテーテルやバルーンの血管形成装置を用いるような直接導入、および目的領域への実質組織内(intraparenchymal)注射が含まれる。経口投与に好適な本発明の組成物は、カプセル、カシェ剤、錠剤またはトローチ剤のような別々の単位として提供してもよく、それぞれ予め定められた量の活性成分を、リポソーム中にまたは水性リカーまたはシロップのような非水性液体中に溶液または懸濁液として、エリキシルまたはエマルジョンとして含む。非経口投与に好適な組成物には、好ましくは受容個体の血液と等張の、活性成分の滅菌水性製剤を含むことが便利である。この水性製剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用する公知の方法によって処方してもよい。滅菌注射用製剤は、また非毒性の非経口用として許容される希釈剤または溶媒中の滅菌した注射用溶液または懸濁液、例えばポリエチレングリコールまたは乳酸中の溶液であってもよい。使用してもよいビヒクルおよび溶媒の中では、水、リンゲル液および等張性食塩溶液である。加えて、溶媒または懸濁媒体として滅菌した、不揮発性油を用いるのが便利である。この目的のために合成モノ-またはジ-グリセライドを含めてどのような低刺激性の不揮発油を使用してもよい。加えてオレイン酸のような脂肪酸は注射可能物質の調製に使用することができる。他のデリバリーシステムには持続放出デリバリーシステムが含まれる。好ましい持続放出デリバリーシステムは持続放出ペレットまたはカプセルとして本発明の活性成分を放出できるものである。多くの持続放出デリバリーシステムが利用可能である。これには次のものが含まれるがこれに限定されるものではない：（ａ）活性成分がマトリックス中に含まれる崩壊(erosional)系、および（ｂ）活性成分がポリマーを通して制御された速度で浸透してくる拡散系。加えて、ポンプ系ハードウエアーデリバリー系を使用することができ、そのいくつかは植え込み用に適用できる。先に記載したように、本発明では、硫酸化オリゴ糖類は多くの血栓症および心臓血管疾患の処置に使用することができ、これらのうち最も顕著なものは程度の高い静脈血栓、肺塞栓症、血栓性発作、抹消動脈血栓、不安定な狭心症および心筋梗塞である。本発明明細書では、断らない限り、「含む(comprises)」または「含む(compri sing)」のような変形を含む「を含む(comprise)」という語は述べられたそのものまたはその群を含むことを意味し、他のintegerまたはintegerの群の排除を意味するものではない。本発明のさらに別の特徴は、以下の実施例においてより十分に記載されている。しかし、この詳細な記述は本発明を例示する目的で含まれているのであって、上記で説明した本発明の広い記載を決して制限するものでない。添付図について説明する：図１は、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）試験によって測定した鎖長の異なる一連のマルトース系硫酸化オリゴ糖類の抗凝血活性の解析である。ヘパリン（抗凝血活性１２０Ｕ／ｍｇ）が比較として含まれている。９０のドナーからのプールした血漿について得られたデータである血漿凝固時間はインヒビタが存在しない場合は３０．８秒である。結果は４回の各実験の代表値である。図２は、ＡＰＴＴ法で測定した異なる硫酸化ペンタサッカライド類の抗凝血活性の比較を示しており、比較としてヘパリンが含まれている。他の詳細は図１と同じである。図３は、ヘパリン、ＬＭＷヘパリン（フラグミン）および硫酸化オリゴ糖マンノペントースホスフェート硫酸（ＰＩ−８８）のアンチ-トロンビンIII媒介アンチ-ファクターＸａ活性を示している。ファクターＸａの活性は色素再生（ヘレナ）アンチ-Ｘａアッセイをロッシェ・コバス・フェイラ(Roche COBAS Fara)バイオケミストリアナライザ上で行って測定した。実施例１〔硫酸化オリゴ糖類の調製〕本発明実施例では、硫酸化用としてオリゴ糖類の２種類の原料を用いた。第１の原料は天然の多糖類由来のオリゴ糖類である。通常の調製方法として酵素または化学的手段による多糖の部分解重合および得られたオリゴ糖の寸法分別が含まれる。オリゴ糖類が生成される原料となる多糖類の例として、アミロース、デキストラン、セルロース、ラミナリン、ペクチン、キチン、キトサン、マンナンおよび酵母ピチア・ホルスチイ由来のホスホマンナンエクソポリサッカライド類が挙げられる。第２の原料は、ヘキソースモノマーの化学重合によって調製した完全合成のヘキソース含有オリゴ糖である。先行する国際特許出願ＰＣＴ／ＡＵ９６／００２３８にはこれらの完全合成オリゴ糖類の製造方法が開示されている。この出願には酵母ピチア・ホルスチイのエクソポリサッカライド由来のＰ-６-マンノース-α-(１→３)-マンノース-α-(１→３)-マンノース-α-(１→３)-マンノース-α-(１→２)-マンノースの構造を有するマンノペンタオースホスフェートを単離する方法がを記載されている。他の天然のオリゴ糖類はセイカガク社（日本、東京）から購入した。最後にオリゴ糖類はすべて先行の国際特許出願ＰＣＴ／ＡＵ９６／００２３８に開示された方法によって硫酸化した。実施例２〔硫酸化オリゴ糖類の非凝血活性〕表１は活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）試験によって測定した１９個の硫酸化オリゴ糖類の抗凝血活性のまとめである。同じ結果はトロンビン時間試験によって得られている。ヘパリンおよびフラグミン（ＬＭＷヘパリン）と較べて、開始時点では試験した硫酸化オリゴ糖類の１１種類がかなりの抗凝血活性を示すことがはっきししている。鎖長、単糖の構成および結合はすべて重要な要因であるように見える。鎖長の影響は特にマルトース系では顕著であり、マルトペンタオース、マルトヘキサオースおよびマルトヘプタオース硫酸は極めて効果的な抗凝血剤であるのに対して、ジ-、トリ-、およびテトラサッカライドは低い活性を示している（表１、図１）。更に、マルトース系の顕著な特徴は、マルトテトラオースからマルトペンタオースへは残基１個付加して鎖延長することによって抗凝血活性が１９倍増加する。単糖組成の重要性は、β１-４結合グルコサミンからなるキトサン６量体の硫酸エステルによって強調されており、これはβ１-４結合したグルコヘキサオース（セロヘキサオース、表１）較べて無視し得るほどの抗凝血活性しか示さない。グルコース系のオリゴ糖類は活性に及ぼす単糖の結合の重要性を強調している。このように硫酸化ラミナリンシリーズ（ β１−３結合したグルコース）は硫酸化したα１-４、α１-６およびβ１-４結合したグルコース含有オリゴ糖類よりはるかに低い抗凝血活性を示している（表１）。抗凝血活性に及ぼす更なるより名状し難い単糖の結合の影響が存在する。一般にα１-２、α１-３、α１-４およびα１-６結合したグルコースまたはマンノースのペンターおよびヘキササッカライドの硫酸エステルはかなりの抗凝血活性を有する。ひとつの例外はイソマルトペンタオース硫酸であり、これは実質的にマルトペンタオースおよびマンノペンタオース硫酸よりも抗凝血効果が低い（表１、図２）。これは抗凝血活性がα１-６グルコースポリマーより短い鎖α１- ４によって発現されることを示唆している。同様に、グルコースがβ１-４結合している場合はより短鎖の硫酸化オリゴ糖類でさえ活性を有し、この場合にはテトラサッカライドであるセロテトラオースは合理的に強力な抗凝血活性を有する（表１）。最後に、硫酸化の程度がわずかに異なる２種類のマンノペンタオースホスフェート硫酸（ＰＩ-８８’ｓ）は本質的に等活性であり、これはオリゴ糖類の硫酸化が５０％を越えると抗凝血活性が確実となることを示唆している。表１および図１および２で表されたデータによると、活性硫酸化オリゴ糖類はかなりの抗凝血活性を示し、最も活性の高い７種についての投与量応答曲線の勾配はヘパリンの勾配の１／４.５〜１／５.９である。このように、これらのオリゴ糖系抗凝血薬はヘパリンよりもずっと広い治療領域を有しており、患者の抗凝血状態をしっかり制御することを要する場合には好ましい性質である。硫酸化オリゴ糖系抗凝血薬のもうひとつの特性は、その投与量応答曲線が極めて直線的であり、大抵の場合、直線状回帰直線の相関係数は０．９９より大きい（表１）。このように応答性における顕著な直線性はヘパリンでは見られない。この応答性の再現性はマンノペンタオースホスフェート硫酸（ＰＩ-８８）の抗凝血活性を２０の異なるドナーから採取した血漿について試験したことで確認された。ヘパリンおよびＰＩ-８８を同程度加えて血漿を抗凝血した場合に、総合的にＰＩ-８８は凝血時間をヘパリンよりも再現性よく延長した、すなわちヘパリンでは７７．５±２０．８秒であるのに対して８８．３±１１．９秒であった（表２）。事実、１ドナー（＃１３）はヘパリンでは応答しなかったが、ＰＩ- ８８では期待通り応答した（表２）。次に硫酸化オリゴ糖類が凝血カスケードを妨害する挙動を研究した。初期の研究ではＰＩ-８８はアンチートロンビンIIIがトロンビンを妨害する能力を強めないことを示した。事実、２種類の異なる発色(chromogenic)アッセイにより、アンチ-トロンビンIII媒介アンチトロンビン活性を強化するにおいてＰＩ-８８はヘパリンよりも７００〜７０００倍活性が低いことが明らかとなった（データは示していない）。アンチートロンビンIII媒介ファクターＸａ妨害活性を試験した結果、ＰＩ-８８はヘパリンまたはＬＭＷヘパリン（フラグミン）よりも少なくとも１００〜１０００倍活性が低いことが分かった（図３）。これらの結果は、ＰＩ-８８そして恐らく他の活性硫酸化オリゴ糖類もアンチ-トロンビンIII経由ではその抗凝血活性を呈しないことを意味する。しかし、その後の研究で、抗凝血活性を持つ硫酸化オリゴ糖類は多分ヘパリンコファクターII、したがってその抗凝血活性において類似するデルマタン硫酸経由で作用することが示された。精製ヘパリンコファクターIIをトロンビンおよび発色性トロンビン基質に添加した血漿を含まない系で、ＰＩ-８８は、ヘパリンおよびデルマタン硫酸同様、ヘパリンコファクターIIのトロンビンを妨害する能力を効果的に強化することがわかった（データは示していない）。まとめとして、これらのデータは、ＰＩ-８８のような硫酸化オリゴ糖はデルマタン硫酸と類似しており、したがって抗血栓薬としてかなりの能力を有するかもしれないことを示している。硫酸化オリゴ糖類のひとつであるＰＩ-８８の更にいくつかの生物学的特性を明らかにした。これはコラーゲンに起因するおよびＡＤＰに起因する血小板凝集の非常に弱いインヒビターであり（表３）、更に凝血系に及ぼす硫酸化オリゴ糖類の作用の特異性を強調する。プロタミンはヘパリンおよびフラグミンの抗凝血作用を弱めるためにしばしば臨床で使用される。プロタミンはＰＩ-８８の抗凝血活性をも効果的に不活性化することができることが明らかになり（表４）、プロタミンを硫酸化オリゴ糖類の抗凝血特性に対するインビボでの効果的な解毒薬として使用することができることを示している。最後に、ＰＩ-８８を、ある範囲の呻乳動物種における抗凝血薬としての作用能力について試験した。この化合物はヒト、マーモセット、羊、犬、ラットおよびマウスの血漿の効果的な抗凝血薬であるが、ウサギの血漿においては弱い活性でしかないことがわかった（表５）。このように硫酸化オリゴ糖類はヒトだけでなく広い範囲の哺乳動物種においても抗凝血薬/抗血栓薬として使用することができる可能性を秘めている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．抗凝血および／または抗血栓処置を必要とするヒトまたは他の温血動物患者への抗凝血および／または抗血栓処置方法であって、少なくとも１種の硫酸化オリゴ糖の有効量を患者に投与することを含み、オリゴ糖が一般式Ｉ：Ｒ₁-(Ｒ_x)_n-Ｒ₂ （Ｉ）〔式中、Ｒ₁およびＲ₂および各Ｒ_xはそのいずれもが同じでも異なっていてもよい単糖単位を表し、隣接する単糖単位は１→２、１→３、１→４および/または１→６グリコシド結合によって結合されており；ｎは１〜６の整数である〕で表される方法。２．一般式Ｉのオリゴ糖中、ｎが３または４である請求項１に記載の方法。３．一般式Ｉのオリゴ糖中、単糖単位がフラクトース、グルコース、、マンノース、アルトロース、アロース、タロース、ガラクトース、イドースおよびグロースからなる群から選ばれるヘキソース類である請求項１または２に記載の方法。４．オリゴ糖が一般式II：Ｒ-(Ｒ)_n-Ｒ（II）〔式中、各Ｒ基は同じで、いずれも単糖単位を表し、隣接する単糖単位は１→２、１→３、１→４および/または１→６グリコシド結合によって結合されており；ｎは１〜５の整数である〕で表される請求項１に記載の方法。５．一般式IIのオリゴ糖中、ｎが３または４である請求項４に記載の方法。６．一般式IIのオリゴ糖中、Ｒがグルコース、マンノース、アルトロース、アロース、タロース、ガラクトース、イドースおよびグロースからなる群から選ばれるヘキソースである単糖単位を表す請求項４または５に記載の方法。７．一般式IIのオリゴ糖中、Ｒがグルコース、マンノースを表す請求項６に記載の方法。８．オリゴ糖が天然のポリ単糖の酵素または化学分解によって調製される請求項１に記載の方法。９．オリゴ糖がアミロース−、デキストラン−、セルロース−、ラミナリン−、ペクチン−、キチン−、キトサン−またはマンナン−のオリゴ糖である請求項８に記載の方法。１０．オリゴ糖がマルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、イソマルトペンタオース、イソマルトヘキサオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオース、ラミナリテトラオースおよびマンノペンタオースから選ばれる請求項９に記載の方法。１１．オリゴ糖が酵母ピチア・ホルスチイ(Pichiaholstii)由来のマンノペンタオースホスフェートである請求項８に記載の方法。１２．処置が血栓症または心臓血管症の処置を含む請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。１３．処置が程度の高い静脈血栓、肺塞栓症、血栓性発作、抹消動脈血栓、不安定な狭心症および心筋梗塞の処置を含む請求項１２に記載の方法。１４．請求項１で規定する硫酸化オリゴ糖の、温血動物（ヒトを含む）患者の処置における抗凝血薬および／または抗血栓薬としての用途。１５．請求項１で規定した少なくとも１種の硫酸化オリゴ糖を、薬学的および獣医学的に許容できる抗凝血および／または抗血栓処置のためのキャリアまたは希釈剤とともに含む抗凝血および／または抗血栓処置のための薬学または獣医学組成物。１６．請求項１で規定する少なくとも１種の硫酸化オリゴ糖の、ヒトまたは他の温血動物患者の抗凝血および／または抗血栓処置用医薬の製造における用途。