CN1161124C - 具有抗凝集/抗血栓形成作用的硫酸化低聚糖类化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于需治疗的人体或其他温血底物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治疗的方法，该方法包括给患者施用有效量的至少一种硫酸化低聚糖，其中所述低聚糖具有通式I：R1-(RX)n-R2，其中R1和R2和各RX表示单糖单元，它们可以全部相同或不同，相邻的单糖单元通过1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷键连接；而n是1-6的整数。

Description

具有抗凝集/抗血栓形成作用的硫酸化低聚糖类化合物
发明领域
本发明涉及硫酸化低聚糖类化合物，并且具体涉及某些硫酸化低聚糖作为抗凝剂和/或抗血栓形成剂的用途。
发明背景
在过去的50年中，肝素业已作为抗凝剂广泛用于预防术后血栓形成和治疗急性静脉血栓形成，它是由哺乳动物肥大细胞产生的糖胺聚糖。肝素的抗凝集活性主要表现为可促进蛋白酶抑制剂抗凝血酶III对凝集级联中多种关键蛋白酶，特别是(凝血)因子Xa和凝血酶的灭活能力(1，2)。而凝血酶是在级联中将可溶性血纤蛋白原转化为不溶性血纤蛋白的末端(转移)酶。事实上，人们已确定在肝素中有一种特殊的五聚糖类化合物，其结合抗凝血酶III的亲和力极高，并由此造成抑制剂构象的改变(3)。该五聚糖足以使蛋白酶如凝血因子Xa被抗凝血酶III灭活。相反地，肝素需要将抗凝血酶III与凝血酶交联，以促使凝血酶出现失活(3)。
尽管肝素已被作为抗凝剂广泛应用于临床，但肝素存在许多严重缺陷。首先，在结构上肝素十分多变，其分子量、单糖序列和硫酸化模式均可改变(4)。这种多样性的结果是，在绝大多数制剂中，实际上只有50％以下的肝素分子含有与五聚糖相结合的抗凝血酶III(1-3)。因此，难以对不同批次的肝素进行质量控制。其次，肝素是动物的副产物，因而存在被动物病原体污染的危险，目前管理机关对此严密关注。第三，肝素因其分子量高而只能经静脉给药，其皮下注射时的生物利用度很低(5，6)。而且，高分子量的肝素(10-15KDa)妨碍了有效的口服给药。第四，就临床功效来说，肝素的剂量反应曲线很陡。因此必须持续监测患者血浆的凝集时间，以确保不发生药物过量。患者肝素反应性的显著差异也有碍于适当剂量肝素的给药。上述困难造成了无法接受的出血现象，成为肝素治疗的一个并发症，这在长期用药时尤为严重(5，6)。最后，大量患者在长时间与肝素接触后可发展出现肝素诱发型血小板减少症(HIT)(5，6)，对于这些患者个体这是一种妨碍进一步使用肝素的症状。
在克服某些肝素相关性难题的尝试中，许多低分子量(LMW)(分子量：400-6500)的肝素制剂已被开发出来并已获得许可(5，6)。这些制剂保持了天然肝素的抗凝血因子Xa和抗血栓形成活性，但它们是低效抗凝剂。其结果是，LMW肝素类物质似乎较少在患者中诱发出血并发症。而且，由于体积较小，其生物利用度得到提高并且可经皮下给药。
另一种方法是采用有关的糖胺聚糖，硫酸皮肤素作为抗血栓形成剂(7)。有趣的是，硫酸皮肤素与肝素不同，它通过凝血酶的第二种天然抑制剂肝素协同因子II来催化对凝血酶的抑制作用(8)。虽然LMW肝素类化合物和硫酸皮肤素具有可实用性，但仍非常需要结构上很确定的非动物来源的抗凝剂和/或抗血栓形成药，其可使患者产生重现性反应，可以经口服给药，并且没有诱发血小板减少症的趋势。
在先国际专利申请PCT/AU96/00238公开了一类硫酸化低聚糖类化合物制剂，以及这些硫酸化低聚糖作为人体血管生成、肿瘤转移和炎症的有效抑制剂的用途，所述硫酸化低聚糖是基于单糖单元经1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷键连接并且由3-8个单糖单元组成的聚合物。
在本发明的研究中发现，这些硫酸化低聚糖类化合物可以用作抗凝剂/抗血栓形成药，用于克服糖胺聚糖衍生的抗凝剂/抗血栓形成药所造成的许多问题。具体而言，所述硫酸化五糖或六糖已表现出适宜的确定结构，较宽的治疗范围，重现性高的患者反应性，适当地减少了HIT样综合征的诱发机率，以及口服给药的可行性。此外，这些硫酸化低聚糖并非通过抗凝血酶III起作用，而似乎是通过激活肝素协同因子II来抑制凝集作用。因此，活性硫酸化低聚糖的作用方式在一定程度上与硫酸化多糖硫酸皮肤素而不是肝素相似。这些低聚糖类化合物可兼用于预防和治疗多种血栓形成和心血管疾病，特别是深静脉血栓形成、肺栓塞、栓塞性中风、外周动脉栓塞、不稳定型心绞痛和心肌梗死。而且，这些硫酸化低聚糖类化合物可有效地口服给药，因而它们能够代替一种被广泛用于口服给药但副作用严重的抗凝剂华法林。
发明概述
一方面，本发明提供一种适用于需治疗的人体或其他温血动物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治疗的方法，该方法包括给患者施用有效量的至少一种硫酸化低聚糖，其中所述低聚糖具有通式I：
                  R1-(RX)n-R2
                        (I)
其中R1和R2和各RX表示单糖单元，它们均可相同或不同，相邻的单糖单元通过1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷键连接；而
n是1-6的整数，优选3或4。
优选所述硫酸化低聚糖类化合物具有通式II：
                   R-(R)n-R
                        (II)其中各R基表示相同的基团并且分别代表一个单糖单元，相邻的单糖单元通过1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷键连接，并且n是1-5的整数，优选3或4。
在此所用的术语“抗凝集和/或抗血栓形成治疗”包括对需此治疗的患者进行预防性或治疗性的处理。
发明详述
本发明所用的硫酸化低聚糖类化合物是基于单糖单元的聚合物，其单糖单元通过1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷键连接并由3-8个单糖单元组成。优选的低聚糖由3-6个单糖单元组成(也就是n为1-4)，更优选由5-6个单糖单元组成(n为3-4)。所述聚合物可以包括仅含有一种类型单糖单元的均聚物，或含有两种或多种不同类型单糖单元的杂聚物，但优选的是均聚物。
共同连接成低聚糖的单糖单元优选是己糖类化合物，可以是呋喃糖类化合物(如果糖)和吡喃糖类化合物(如葡萄糖、甘露糖、阿卓糖、阿洛糖、塔罗糖、半乳糖、艾杜糖或古洛糖)。特别优选的己糖类化合物是葡萄糖和甘露糖。所述己糖为D或L构型。
各单糖单元可以是己糖、己糖醛酸(hexuronic)、己糖胺或N-乙酰基己糖胺。
式I和II所示的低聚糖还包括单糖单元被衍生化的低聚糖，特别是其中单糖单元为单糖的磷酸酯、乙酸酯或其他酯类衍生物的低聚糖。
通常，可以利用本领域已知的方法通过将低聚糖类化合物硫酸化来制备本发明所述的硫酸化低聚糖，得到其相应的O-硫酸化衍生物。在国际专利申请PCT/AU96/00238中公开了适用的硫酸化方法，该文献的内容在此引入作为参考。所述硫酸化低聚糖可以是天然产物，其中包括由天然多糖(例如直链淀粉、葡聚糖、纤维素、昆布多糖、果胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖、甘露聚糖以及由Pichia Holstii毕赤酵母产生的磷酸甘露聚糖外多糖(phosphomannan exopolysaccharide))经酶促或化学降解得到的低聚糖。此外，所述低聚糖也可以根据国际专利申请PCT/AU96/00238中公开的方法合成制得。
如上所述，本发明范围内的硫酸化低聚糖已表现出抗凝和/或抗血栓形成活性，由此，本发明的另一方面涉及了上述硫酸化低聚糖在治疗温血动物(包括人体)患者中作为抗凝剂和/或抗血栓形成药的应用。
本发明也涉及至少一种上述硫酸化低聚糖在制造用于人体或其他温血动物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治疗的药物中的应用。
而且，本发明还提供一种适用于抗凝和/或抗血栓形成治疗的药物或兽药组合物，其中含有至少一种上述硫酸化低聚糖以及可药用或可兽用的载体或稀释剂。
所述活性组分是以治疗有效量给药。该治疗有效量是指至少部分达到预期作用，或使被治疗的具体症状延缓发作、抑制其发展或同时阻止其发作和发展所需要的用量。当然，这种用量取决于具体的被治疗症状、病症的严重程度和患者的个体指标包括年龄、身体条件、体形、体重以及并行治疗。这些因素是该领域普通专业人员所熟知的，并且无需更多的常规试验就可以得到。一般地，优选最大给药剂量，也就是根据医师诊断的最高安全剂量。但所属领域普通专业人员应懂得，出于医学、心理学或其他实际的原因可以以较低的剂量或耐受剂量进行给药。
在本领域中技术人员对治疗性组合物的制剂十分了解。适用的可药用或可兽用载体和/或稀释剂包括任何和所有的常规溶剂、分散体介质、填充剂、固体载体、含水溶液、包衣剂、抗细菌药和抗真菌药、等渗剂和吸收延迟剂等。这些介质和试剂在药物和兽药活性物质中的用途是该领域所熟知的，例如，见于Remington氏药物科学，18版，Mack出版公司，宾西法尼亚，美国。除与活性成分不相容的常规介质和试剂之外，可以考虑在本发明所述的药用和兽用组合物中使用适合混入药物组合物中的补充活性成分。
为使给药方便和剂量均匀，特别适宜将组合物以剂量单位形式配制。此处所用的剂量单位形式是指完全离散的单位，它们可用作被治疗人体或动物对象的单位剂量；各单位中含有由产生预期治疗作用计算出的预定量的活性成分以及所需的药用或兽用载体和/或稀释剂。本发明新的剂量单位形式的规格取决于并直接依赖于(a)活性成分独特的特点和所要达到的治疗作用，和(b)复合此类活性组分在现有技术中达到具体治疗时的固有限度。
虽然从方便患者来说优选口服给药，但也可采用不同的给药途径。显然，所选择的具体方式取决于被治疗的具体症状和达到治疗效果所需的剂量。一般来说，本发明所述方法可以利用任何医学可接受的给药方式实现，也就是说，任何能够提供治疗水平的本发明活性组分但不引起临床副作用的方式。所述给药方式包括口服、直肠、局部、经鼻、经皮或非肠道(例如皮下、肌肉内和静脉内)途径的给药。口服给药的制剂包括离散单位，如胶囊、片剂、锭剂等。其他给药途径包括鞘内给药直接进入脊髓液，直接导入法如采用本领域熟知的多种导管和囊扩张血管成形术装置，以及实质内注射到靶向区域内。
本发明的适于口服给药的组合物可以以离散单位存在，例如胶囊、片剂或锭剂，其中各单位含有预定量的活性成分；也可存在于脂质体中或是处于含水液体或非水液体中的溶液或悬浮液，如糖浆剂、酏剂或乳剂。
适合非肠道给药的组合物通常包括活性成分的灭菌含水制剂，它优选等渗于接受者的血液。根据已知方法并采用那些适当的分散剂或湿润剂以及悬浮剂可以制得所述含水制剂。灭菌注射制剂也可以是处于无毒的非肠道用稀释剂或溶剂中的灭菌注射溶液或混悬剂，如存在于聚乙二醇和乳酸中的溶液。在可接受的赋形剂和溶剂中可采用水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，通常将灭菌的非挥发油用作溶剂或悬浮介质。就此，任何温和的非挥发油都可被采用，其中包括合成甘油单酯或甘油二酯。而且，注射制剂中还可以选用脂肪酸类化合物如油酸。
其它给药体系包括了缓释给药体系。优选的缓释给药体系是那些可使本发明活性成分在缓释丸剂或胶囊内得以释放的体系。它们包括但不限于：(a)浸渗体系，体系中的活性成分存在于基质内，和(b)扩散体系，该体系中的活性成分以可控速率渗透过聚合物。另外可应用泵式硬件给药体系，其中的某些适用于植入法。
如上所述，在许多血栓形成和心血管疾病的治疗中可以应用本发明的硫酸化低聚糖类化合物，尤其适用于深静脉血栓、肺栓塞、血栓性中风、外周动脉血栓形成、不稳定性心绞痛和心肌梗塞。
在本申请说明书中，除非文中另有需要，否则术语“包括”或它的其它形式如“含有”或“包含”应被理解为暗示了所述事物或一组事物的整体，但不排除任何其它一种或一组事物。
本发明另外的特征是较全面地描述了下列实施例。但是，应懂得这种详细描述只是出于例举本发明的目的，从任何角度来看都不对本发明上述广泛的描述构成限制。
在附图中：
图1：表示一系列基于麦芽糖但链长不同的硫酸化低聚糖的抗凝集活性分析图，它是由活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT)试验来测定。用肝素(抗凝活性120U/mg)作比较。数据得自于由90名供血者采集的混合血浆，抑制剂不存在时的血浆凝集时间为30.8秒。结果代表四个独立的试验。
图2：比较了不同硫酸化五聚糖的抗凝活性，这是通过APTT试验测得的，以肝素作比较。其它详细内容如图1所述。
图3：比较了肝素、LMW肝素(替地肝素(Fragmin))和硫酸化低聚糖甘露五糖(mannopentaose)磷酸硫酸酯(PI-88)对抗-凝血酶III介导性抗凝血因子Xa活性的作用。用显色剂(Helena)测定凝血因子Xa的活性，抗凝血因子Xa的分析试验使用了Roche COBAS Fara生化分析仪。
                         实施例1
硫酸化低聚糖的制备
在本实施例中，后继的硫酸化作用采用两种来源的低聚糖类化合物。第一种原料是衍生自天然多糖类化合物的低聚糖。其常见制备方法包括将多糖类化合物经酶促或化学方式部分解聚并将所得低聚糖按大小分级。用于产生低聚糖的多糖的例子是直链淀粉、葡聚糖、纤维素、昆布多糖、果胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖、甘露聚糖以及由Pichia holstii酵母产生的磷酸甘露聚糖外多糖。第二种原料是含己糖的全合成低聚糖，它是己糖单体经化学聚合制得。在先国际专利申请PCT/AU96/00238中公开了一种制造此类全合成低聚糖类化合物的方法。在同一专利申请中还描述了一种从Pichia Holstii酵母的外多糖中分离出结构为P-6-Man-α-(1→3)-Man-α-(1→3)-Man-α-(1→3)-Man-α-(1→2)Man的磷酸甘露五糖的方法。其他天然低聚糖购自Seikagaku，Tokyo，日本。最终，根据在先国际专利申请PCT/AU96/00238公开的方法将所有低聚糖硫酸化。
                        实施例2
硫酸化低聚糖类化合物的抗凝集作用
表1概括了19种硫酸化低聚糖类化合物的抗凝集活性，它们是通过活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT)试验测定的。由凝血酶时间试验可得到相似的结果。开始时，显然有11种被测硫酸化低聚糖表现出比肝素和替地肝素(LMW肝素)更显著的抗凝集活性。链长、单糖组成和连接键似乎均是决定性因素。链的长度对于麦芽糖系列的影响特别明显，其中，二-、三-和四聚糖活性较低，而麦芽五糖(maltopentaose)、麦芽六糖(maltohexaose)和麦芽七糖(maltoheptaose)的硫酸酯却是相当有效的抗凝剂(表1，图1)。此外，麦芽糖系列的一个意外特征是，从麦芽四糖到麦芽五糖，链长仅增加了一个残基，但抗凝活性却由此提高了19倍。单糖组成的重要性在硫酸脱乙酰壳多糖六聚物中十分突出，硫酸脱乙酰壳多糖六聚物是由β1-4连接的葡糖胺组成，与β1-4连接的葡萄六糖(glucohexaose)(纤维六糖，表1)相比其所显示出的抗凝活性可忽略不计。单糖连接键对于葡萄糖系列的低聚糖的活性十分重要。所以，与α1-4、α1-6和β1-4连接的含葡萄糖的硫酸化低聚糖相比，硫酸化昆布多糖系列(β1-3连接的葡萄糖)所表现出的抗凝活性极低(表1)。单糖键对抗凝活性的其它作用更精细。通常，经α1-2、α1-3、α1-4和α1-6键连接的葡萄糖或甘露糖的硫酸化五糖和六糖具有类似的抗凝活性(表1)。硫酸异麦芽五聚糖是一个例外，它与硫酸化麦芽五糖和甘露五糖相比基本上是一种低效抗凝剂(表1，图2)。这表明，抗凝活性是由较短链的α1-4葡萄糖聚合物而不是α1-6葡萄糖聚合物来表达。同样地，甚至当葡萄糖经β1-4连接成较短链时，硫酸化低聚糖仍有活性，因而在这种情况下，四聚糖纤维四糖是有效抗凝剂(表1)。最后，两种硫酸化程度略微不同的甘露五聚糖磷酸硫酸酯类化合物(PI-88类)基本上活性相等，这表示假如低聚糖类化合物的硫酸化＞50％时，其抗凝活性可得到保证。
显然，基于表1的数据以及图1和2，许多有活性的硫酸化低聚糖显示出相似的抗凝活性，7种最具活性的低聚糖的剂量反应曲线的陡度比肝素平缓4.5-5.9倍。因此，这些低聚糖类的抗凝剂具有比肝素更宽的治疗范围，如果希望严密控制患者的抗凝态，这是一个理想的特征。
硫酸化低聚糖类抗凝剂的另一个特征是，其剂量反应曲线非常线性化，线性回归线的相关系数在多数情况下＞0.99(表1)。反应中这种高度的线性在肝素中不曾观测到。当用20名不同供血者的血浆对甘露五糖磷酸硫酸酯(PI-88)的抗凝活性进行试验时，证实其反应性可重现。当肝素和PI-88使血浆的抗凝集达到类似程度时，PI-88始终具有一种重现性较高的凝集时间延迟作用，即PI-88为88.3±11.9秒，肝素为77.5±20.8秒(表2)。事实上，一名献血者(#13)对肝素无反应，但出乎意料地对PI-88产生反应(表2)。
随后对硫酸化低聚糖类化合物抑制凝集级联的方式进行研究。初期试验表明，PI-88无法提高抗凝血酶III抑制凝血酶的性能。事实上，两种不同的显色分析法揭示出PI-88对抗凝血酶III介导型抗凝血酶活性的提高要比肝素的低700-7000倍(未表示数据)。当对抗凝血酶III介导的凝血因子Xa抑制活性进行试验时，发现PI-88的活性比肝素或LMW肝素(替地肝素)至少低100-1000倍(图3)。这些结果显示，PI-88以及可能的其他活性硫酸化低聚糖类化合物不是通过抗凝血酶III发挥其抗凝作用。然而，后继的研究表示，所述的具有抗凝活性的硫酸化低聚糖可能是经肝素协同因子II起作用，因此，与硫酸皮肤素的抗凝性质相似。在无血浆体系中，向其中的凝血酶和显色凝血酶底物加入纯化的肝素协同因子II，从而发现PI-88提高了肝素协同因子II抑制凝血酶的能力，使其如同肝素和相似皮肤素一般有效(未表示数据)。
总之，这些数据表明，硫酸化低聚糖如PI-88与硫酸皮肤素相类似，并由此可能成为具有显著功效的抗血栓形成药。硫酸化低聚糖类化合物之一PI-88的某些附加生物性质也已被确定。已发现它是一种胶原和ADP诱发型血小板聚集作用的弱抑制剂(表3)，更突出的是硫酸化低聚糖类化合物作用于凝集体系的特异性。临床经常使用鱼精蛋白来逆转肝素和替地肝素的抗凝作用。发现鱼精蛋白也可以有效地使PI-88的抗凝活性失活(表4)，这表明可将鱼精蛋白作为对抗具有抗凝特性的硫酸化低聚糖类化合物的体内解毒药。最后，对PI-88在一定哺乳动物物种范围中作为抗凝剂的性能进行试验。所述化合物被认为是人、狨猴、羊、狗、大鼠和小鼠血浆的有效抗凝剂，但其对兔血浆的活性较弱(表5)。因此，不仅在人体中而且在广大哺乳动物物种中，硫酸化低聚糖均可以用作抗凝剂/抗血栓形成药。
                                     表1由活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT)试验测定的不同硫酸化低聚糖类化合物的抗凝活性的比较
     化合物                    单糖组成          连接键    硫酸化程度a 凝集时间的增加    相关系数c
                                                                          (秒)/μg+b
肝素                      Glc，IdoA，GlcNAc  β1-4，α1-4    ND             29.69           0.977
LMW肝素(替地肝素)         Glc，IdoA，GlcNAc  β1-4，α1-4    ND             11.20           0.977
麦芽糖SO4                        Glc            α1-4       6/8(75％)      0.31            0.995
麦芽三糖SO4                      Glc            α1-4       9/11(82％)     0.25            0.892
麦芽四糖SO4                      Glc            α1-4       11/14(79％)    0.28            0.992
麦芽五糖SO4                      Glc            α1-4       9/11(53％)     5.25            0.996
麦芽六糖SO4                      Glc            α1-4       16.6/20(83％)  5.85            0.999
麦芽七糖SO4                      Glc            α1-4       ND             5.9             -
异麦芽五糖SO4                    Glc            α1-6       14/17(82％)    1.85            0.999
异麦芽六糖SO4                    Glc            α1-6       12.8/20(64％)  6.56            0.999
纤维四糖SO4                      Glc            β1-4       ND             4.2             -
纤维五糖SO4                      Glc            β1-4       ND             3.5
纤维六糖SO4                      Glc            β1-4       ND             4.8             -
昆布四糖SO4                      Glc            β1-3       ND             2.9             -
昆布六糖AO4                      Glc            β1-3       ND             0.9             -
昆布七糖SO4                      Glc            β1-3       ND             0.5             -
脱乙酰壳多糖六聚物SO4            GlcN           β1-4       ND             0.4             -
甘露五糖SO4 d                     Man        α1-3，α1-6    11/17(65％)    5.32            0.985
磷酸甘露五糖SO4(PI-88)e         Man        α1-3，α1-2    12.5/16(78％)  5.67            0.995
磷酸甘露五糖SO4(PI-88)e         Man        α1-3，α1-3    14/16(88％)    5.04            0.995
蔗糖SO4                          Glc，Frc       α1-2       8/8(100％)     0.39            0.994注脚(表1)：
a：实际连接上的硫酸根数目/可以偶联在各分子上的硫酸根的最大理论数目。括号内的数值是硫酸化百分率。在未测定硫酸化程度(ND)情况下，硫酸化低聚糖类化合物处于应产生最高硫酸化度的条件下。
b：用被测化合物浓度增加1μg/ml所致的凝集时间的增加(秒)表示数据。由凝集数据的线性回归分析得到的数值。
c：由凝集数据的线性回归分析法得到的相关系数。当没有足够的用于计算相关系数的数据点时，则无数值。
d：全合成的甘露五糖
e由Pichia holstii酵母分离出的磷酸甘露五糖，其中在还原末端含有6-磷酸甘露糖。ND＝未测定
表2  对供血者在肝素和磷酸甘露五糖SO4(PI-88)抗凝活性中的变化
的评估
正常供血者                      凝集时间(秒)a
    对照物(2.1μg/ml) 磷酸肝素SO4 *PI-88(8.6μg/ml)     甘露五糖
    1234567891011121314151617181920平均值±SD     30.534.831.631.333.431.338.934.931.530.534.933.135.831.134.627.934.827.335.430.632.8±2.8     72.893.795.478.1110.578.2110.6101.670.172.789.573.840.185.669.764.1101.948.773.457.077.5±20.8     77.389.694.085.6101.995.0115.3101.985.278.093.682.985.589.781.272.6108.070.493.672.688.3±11.9
a：利用APTT试验评估的凝集时间。在重复试验中可得到相似的结果。试验采用可将凝集时间延迟约2.5倍的肝素和甘露五糖磷酸硫酸酯(PI-88)浓度。粗斜体所示的供血者13是所述的对肝素无反应但对甘露五糖磷酸硫酸酯有反应的供血者。
表3  硫酸甘露五糖SO4(PI-88)对血小板聚集的抑制作用
    血小板聚集的相对率a
    PI-88浓度(μg/ml)   胶原诱发的聚集   ADP诱发的聚集
    0     114±8     81±1
    21     97±8     74±1
    210     86±10     72±1
    2100     79±0     56±2
a：在PI-88存在或不存在的条件下，用血小板聚集仪测定的胶原(9μg/ml)或ADP(10μM)诱发性人血小板聚集作用以及血小板聚集作用的相对率。数据±SCD代表两个供血者。
表4硫酸鱼精蛋白对肝素、替地肝素和PI-88的抗凝作用的逆转
    抗凝剂 硫酸鱼精蛋白的浓度   凝集时间(秒)a
    Nil         -     31.6
    Nil     10μg/ml     34.4
  肝素(2.1μg/ml)         -     91.9
  肝素(2.1μg/ml)     10μg/ml     33.4
替地肝素(6.25μg/ml)         -     109.0
替地肝素(6.25μg/ml)     10μg/ml     38.0
  PI-88(8.6μg/ml)         -     79.7
  PI-88(8.6μg/ml)     10μg/ml     43.6
a：经APTT试验测定的凝集时间
PI-88＝来源于Pichia holstii酵母的硫酸化甘露五糖磷酸酯
表5肝素、替地肝素和PI-88对不同哺乳动物物种的血浆的抗凝作用
                         凝集时间的相对增加a
    物种     肝素(0.83μg/ml)   替地肝素(6.25μg/ml)     PI-88(2.24μg/ml)     PI-88(22.4μg/ml)
    人体     1.31     3.02     1.42     4.65
    狨猴     1.26     2.71     1.40     2.86
    绵羊     1.10     1.42     1.88     ＞4.98
    兔     1.25     1.85     1.02     1.20
    狗     1.01     1.32     1.24     2.42
    大鼠     1.02     1.90     1.54     ＞5.88
    小鼠     ND     ND     1.13     3.03
a：由APTT试验测定的凝集时间。数据表示抗凝剂所诱发的凝集时间相对于未处理对照物的增加倍数。PI-88＝硫酸化的来源于Pichia holstii酵母的磷酸甘露五糖ND＝未测定
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Claims (13)

1.硫酸化低聚糖在制备用于人体或其他温血动物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治疗的药物中的应用，其中所述低聚糖具有通式I：
                  R1-(RX)n-R2
                                  (I)
其中R1和R2和各RX表示己糖单糖单元，它们均可相同或不同，相邻的单糖单元通过1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷键连接；而
n是1-6的整数。
2.权利要求1所述的用途，其中所述治疗包括对血栓形成或心血管疾病的治疗。
3.权利要求2所述的用途，其中所述治疗包括对深静脉血栓形成、肺栓塞、栓塞性中风、外周动脉栓塞、不稳定型心绞痛和心肌梗死的治疗。
4.权利要求1所述的用途，其中所述通式I的低聚糖中的n为3或4。
5.权利要求1所述的用途，其中在所述通式I的低聚糖中，单糖单元是选自果糖、葡萄糖、甘露糖、阿卓糖、阿洛糖、塔罗糖、半乳糖、艾杜糖和古洛糖的己糖。
6.权利要求1所述的用途，其中所述低聚糖具有通式II：
                   R-(R)n-R
                     (II)
其中各R基表示相同的基团并且各自代表己糖单糖单元，相邻的单糖单元经1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷键连接，并且n是1-5的整数。
7.权利要求6所述的用途，其中在通式II的低聚糖中，n是3或4。
8.权利要求6或7所述的用途，其中在通式II的低聚糖类化合物中，R表示单糖单元，它是选自葡萄糖、甘露糖、阿卓糖、阿洛糖、塔罗糖、半乳糖、艾杜糖和古洛糖的己糖。
9.权利要求8所述的用途，其中在所述通式II的低聚糖中，R表示葡萄糖或甘露糖。
10.权利要求1所述的用途，其中所述低聚糖是由天然多糖经酶促或化学降解作用制得。
11.权利要求10所述的用途，其中所述低聚糖是直链淀粉-、葡聚糖-、纤维素-、昆布多糖-、或甘露聚糖-低聚糖。
12.权利要求11所述的用途，其中所述低聚糖选自麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖、异麦芽五糖、异麦芽六糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖、昆布四糖和甘露五糖。
13.权利要求10所述的用途，其中所述低聚糖是来源于Pichiaholstii毕赤酵母的磷酸甘露五糖。
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