JP2001507792A - ＩｇＥを検出する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ネコ、イヌ、又はウマの生体試料中のＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃイプシロンレセプタ（Ｆｃ_εＲ）を用いる、ＩｇＥを検出する方法を含む。本発明にさらに、このような方法を行うためのキットにも関連する。

Description

【発明の詳細な説明】 ＩｇＥを検出する方法 発明の分野 本発明はイプシロン免疫グロブリン（ＩｇＥ）を検出するための新規な方法に 関するものである。本発明には、さらにＩｇＥを検出するための新規なキットと 、その検出用試薬を作成する方法とが含まれる。 発明の背景 疾患の診断と治療効果の判断は医療において重要な手段である。特に動物にお けるＩｇＥ産生の検出は疾患の指標にすることができるものである。このような 疾患には、例えば、アレルギー、アトピー性疾患、高ＩｇＥ症候群、内部寄生生 物感染及びＢ細胞の異常増殖がある。加えて、治療後の動物のＩｇＥ産生を検出 すれば、例えばＩｇＥの産生を妨げることを意図した治療法を用いた場合など、 その治療の効果の指標となる。 本発明の発見までは、非ヒト動物から得た試料中のＩｇＥの検出には、ＩｇＥ を検出するための適した試薬がないという障害があった。様々な化合物がＩｇＥ 含有組成物中のＩｇＥを検出しようと用いられてきた。具体的には、イプシロン イディオタイプ抗体に選択的に結合する抗体（即ち抗ＩｇＥ抗体）を用いてＩｇ Ｅが検出されている。しかしながらこれらの抗ＩｇＥ抗体は、例えばガンマイソ タイプ抗体など、その他の抗体イディオタイプと交差反応することがある。本発 明の発見には、推定上のＩｇＥ含有組成物中でＩｇＥの存在を検出するためにＦ ｃイプシロンレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子を利用することが含まれる。ＩｇＥを検 出する際にはＦｃ_εＲ分子は例えば抗ＩｇＥ抗体に比べて有利である。それはな ぜなら、Ｆｃ_εＲ分子は、抗ＩｇＥ結合抗体と比べて、ＩｇＥに結合するときの 結合特異性がより高く（即ちイディオタイプとの交差反応性が低く）、また感受 性（即ち親和性）もより高いからである。 1993，Annals of Allergy 71:481-484のローウェンタール氏らによれば、イヌ 血清は皮膚反応性をヒトに移行させることがあるという。ローウェンタール氏ら による、ヒトＦｃ_εＲがイヌＩｇＥに結合するという教示が正しい可能性はある が、ロ ーウェンタール氏らは皮膚反応性の移行に関与している特定の細胞たんぱくを規 定したデータを提供していない。従って、当業者であれば、ローウェンタール氏 らが教示するような皮膚反応性の移行は多様な別々の分子の間の相互作用による ものであり、ローウェンタール氏らが導き出した結論は単にある一つの解釈に過 ぎないと結論付けるであろう。さらに、ローウェンタール氏らはイヌＩｇＥを検 出するために、精製されたヒトＦｃ_εＲを用いることを教示していない。ヒトＦ ｃ_εＲのサブユニットは１９８８年という早い段階で知られているが、イヌ、ネ コ又はウマＩｇＥを検出するために用いられたことはない。実際、レーダー氏ら に与えられた１９９０年１０月９日発行の米国特許第４，９６２，０３５号はヒ トＦｃ_εＲを開示してはいるが、このようなヒトＦｃ_εＲを用いてヒト又は非ヒ トＩｇＥを検出することは開示していない。精製されたヒトＦｃ_εＲを用いれば 、例えば、さらに他の分子も細胞膜上に存在するがためにＦｃ_εＲ保有細胞が非 特異的な結合を見せるなど、細胞に結合したままのＦｃ_εＲの利用によりもたら される面倒が軽減される。精製されたヒトＦｃ_εＲは非ヒトＩｇＥを検出すると いうことは予見されたことではない。なぜならＦｃ_εＲとＩｇＥとの間の種間結 合は予測不可能だからである。例えば、ヒトＦｃ_εＲはラットＩｇＥに結合する が、ラットＦｃ_εＲはヒトＩｇＥに結合しない。 高親和性のＦｃ_εＲは、アルファ、ベータ及びガンマという三つのたんぱく質 の鎖から成っている。研究者はこれまで、アルファ鎖（Kochan et al.，Nucleic Acids Res．16:3584，1988;Shimizu et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85: 1907-1911，1988及びPang et al.，J．Immunol．151:6166-6174，1993）、ベー タ鎖（Kuster et al.，J．Biol．Chem.267:12782-12787，1992）、及びガンマ鎖 （Kuster et al.，J．Biol．Chem．265:6448-6452，1990）について核酸配列を 開示してきた。 このように、非ヒトＩｇＥを特異的に検出する方法及びキットが当業において 求められている。 発明の概要 本発明はＩｇＥを検出する検出方法及びキットを含む。本発明のある一つの実 施例は、（ａ）分離されたヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子を推定上のＩｇ Ｅ含有 組成物に、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体が形成されるのに適した条件下で接触さ せるステップであって、前記ＩｇＥがイヌＩｇＥ、ネコＩｇＥ及びウマＩｇＥの うちのいずれかから選択されるものである、ステップと、（ｂ）Ｆｃ_εＲ分子： ＩｇＥ複合体を検出することによりＩｇＥの存在を判定するステップであって、 前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の存在はＩｇＥの存在の指標となるものである 、ステップとを含む、ＩｇＥを検出する方法である。好適なＦｃ_εＲ分子はその Ｆｃ_εＲ分子の炭化水素基がビオチンに結合したものである。 本発明のもう一つの実施例は、（ａ）組換え細胞を推定上のＩｇＥ含有組成物 に、組換え細胞：ＩｇＥ複合体の形成にとって適した条件下で接触させるステッ プであって、前記組換え細胞には、ヒトＦｃ_εＲ分子を発現する組換え細胞と、 イヌＩｇＥ、ネコＩｇＥ及びウマＩｇＥを含むＩｇＥに選択的に結合する抗体を 発現する組換え細胞と、が含まれる、ステップと、（ｂ）組換え細胞：ＩｇＥ複 合体を検出することによりＩｇＥの存在を判定するステップであって、前記組換 え細胞：ＩｇＥ複合体の存在はＩｇＥの存在の指標となるものである、ステップ と、を含む、ＩｇＥを検出する方法である。好適な組換え細胞にはＲＢＬ−ｈＦ ｃ_εＲ細胞がある。 本発明の別の実施例は、(ａ)蚤アレルゲンを基質上に固定するステップと、( ｂ)前記蚤アレルゲンを、推定上のＩｇＥ含有組成物に、前記基質に結合した抗 原：ＩｇＥ複合体が形成されるのに適した条件下で接触させるステップと、（ｃ ）抗原１ｇＥ複合体が前記基質に結合した状態が維持される条件下で前記基質か ら結合しない物質を取り除くステップと、（ｃ）前記抗原：ＩｇＥ複合体をＦｃ_ε Ｒ分子に接触させることにより、前記抗原ＩｇＥ：複合体の存在を検出するス テップと、を含む蚤アレルギー性皮膚炎を検出する方法である。好ましくは蚤ア レルゲンは蚤唾液抗原であるとよく、より好ましくは蚤唾液生成物及び／又は蚤 唾液たんぱくであるとよい。 本発明には、さらに本発明の方法を実施するためのキットが含まれる。ある一 つの実施例は、ヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子と、イヌＩｇＥ、ネコＩｇ Ｅ、及びウマＩｇＥを含むＩｇＥを検出する手段とを含む、ＩｇＥを検出するた めのキットである。もう一つの実施例は合衆国のあらゆる地域に共通したアレル ゲンと、ヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子とを含む一般的アレルゲンキット である。もう一 つの実施例は、ヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子及び蚤アレルゲンを含む、 蚤アレルギー性皮膚炎を検出するためのキットである。 本発明の別の実施例は、Ｆｃ_εアルファ鎖たんぱくの炭化水素基がビオチンに 結合した、分離されたヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）アルファ鎖たんぱく質で ある。好適なＦｃ_εＲアルファ鎖たんぱく質はＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂−ＢＩＯＴを 含む。 図面の簡単な説明 図１は、イヌＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲのビオチニル化アルフ ァ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図２は、植物アレルゲン特異的イヌＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲ のビオチニル化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図３は、ヒト又はイヌＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲのビオチニル 化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図４は、蚤アレルゲン特異的イヌＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲの ビオチニル化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図５は、蚤アレルゲン特異的及びイヌ糸状虫抗原特異的イヌＩｇＥ抗体を検出 するためにヒトＦｃ_εＲのビオチニル化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を 示す。 図６は、蚤唾液特異的イヌＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲのビオチ ニル化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図７は、イヌ糸状虫抗原特異的ネコＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲ のビオチニル化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図８は、イヌ糸状虫抗原特異的ネコＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲ のビオチニル化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図９は、抗原特異的ウマＩｇＥ抗体を検出するためにヒトＦｃ_εＲのビオチニ ル化アルファ鎖を用いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図１０は、イヌ糸状虫に感染したイヌから採取した血清中のイヌＩｇＥ抗体を 検出するためにヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を発現する好塩基球性白血病細胞を用 いたＥＬＩＳＡの結果を示す。 図１１は、蚤唾液に感作したイヌから採取した血清中のイヌＩｇＥ抗体を検出 す るためにヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を発現する好塩基球性白血病細胞を用いたＥ ＬＩＳＡの結果を示す。 発明の詳細な説明 本発明は、精製された高親和性のヒトＦｃイプシロンレセプタ（即ちＦｃ_εＲ ＩここではＦｃ_εＲと呼ぶこととする）を、特定の非ヒト（即ちイヌ、ネコ又は ウマ）イプシロン免疫グロブリン（ここではＩｇＥ又はＩｇＥ抗体と呼ぶことと する）を基にした検出（例えば診断的、スクリーニング）方法及びキットに用い ることができるという発見に関するものである。非ヒトＩｇＥを検出することに ヒトＦｃ_εＲを利用することは、イヌ、ネコ及びウマの免疫系はヒトの免疫系か ら、そして相互の間でも異なる（即ち免疫系にとって重要な分子は多くの場合、 種に特異的である）ために、予見されたことはない。 本発明のある一つの実施例は、ある分離されたヒトＦｃ_εＲ分子を用いて非ヒ トＩｇＥを検出する方法である。ここで「ある」（原語："a"）物質又は「ある 」（原語："an"）物質という術語は一つ又はそれ以上のその物質を言うことに留 意されたい。例えば、あるたんぱく質とは一つ又はそれ以上のたんぱく質又は少 なくとも一つのたんぱく質を言うものである。従って、「ある」（原語："a"） （又は「ある」（原語："an"））、「一つの又はそれ以上の」及び「少なくとも 一つの」という術語はここでは互換可能に用いられている場合がある。さらに、 「含む（原語comprising）」、「含む（原語：including）」、及び「有する（ 原語：having）」という術語も互換可能に用いられている場合があることに留意 されたい。さらに、「含む（原語：comprising）」、「含む（原語：including ）」、及び「有する（原語：having）」という術語も互換可能に用いられている 場合があることに留意されたい。さらに、「のうちのいずれかから選択される」 化合物とは、その後に続く化合物のうち、その二つ又はそれ以上の混合物（即ち 組合せ）も含めた、一つ又はそれ以上を言うものである。 本発明によれば、分離された、又は生物学的に純粋な、Ｆｃ_εＲ分子とは、そ の天然ミリューから取り出された分子である。従って、「分離された」及び「生 物学的に純粋な」とは、必ずしもその分子が精製された程度を反映するものでは ない。 本発明に基づく分離されたヒトＦｃ_εＲ分子はその天然源（例えばヒトマスト細 胞から）得られても、組換えＤＮＡ技術を用いて作成されても、又は化学合成に より作成されてもよい。 本発明のＦｃ_εＲ分子（ここではＦｃ_εＲ又はＦｃ_εＲたんぱく質とも呼ばれ る）は全長たんぱく質でも、全長たんぱく質の一部分でも、又はこのようなたん ぱく質のいかなる相同体でもよい。ここで用いられる場合のたんぱく質はポリペ プチドでも又はペプチドでもよい。本発明のＦｃ_εＲ分子には、完全なＦｃ_εＲ （即ちアルファ、ベータ及びガンマといったＦｃ_εＲ鎖）、アルファＦｃ_εＲ鎖 （ここではＦｃ_εＲα鎖とも呼ばれる）、又はその一部分を含めることができる 。好ましくは、Ｆｃ_εＲ分子は、ＩｇＥに結合する、即ちＩｇＥ恒常領域と免疫 複合体を形成することのできる、Ｆｃ_εＲαの少なくとも一部分が含まれている とよい。好ましくは、本 本発明による分離されたＦｃ_εＲ分子は、相同体も含め、そのＦｃ_εＲ分子が ＩｇＥと免疫複合体を形成できる能力により簡単に同定することができる。Ｆｃ_ε Ｒ相同体の例には、アミノ酸が削除（例えばそのたんぱく質の切断形、例えば ペプチドなど）、挿入、反転、置換及び／又は誘導（例えばグリコシル化、リン 酸化、アセチル化、ミリストイレーション、プレニレーション、パルミトイレー ション、アミド化及び／又はグリセロホスファチジルイノシトールの付加など） された結果、その相同体に、ＩｇＥと免疫複合体を形成することのできるエピト ープが少なくとも一つ含まれることとなったようなＦｃ_εＲたんぱく質がある。 Ｆｃ_εＲ相同体は、天然の対立遺伝子変異や、又は自然突然変異の結果生じた ものでもよい。さらに本発明のＦｃ_εＲ相同体は、当該たんぱく質に直接改良を 加えたり、あるいは、例えば無作為又はターゲットを定めた突然変異誘発を起こ す伝統的な又は組換えＤＮＡ技術を用いて当該たんぱく質をコードする遺伝子に 改変を加えることを含め、しかしこれらに限らず、当業において公知の技術を用 いて作成してもよい。 本発明によれば、本発明のヒトＦｃ_εＲα鎖は、ここで配列同定番号第１番と して表される全長Ｆｃ_εＲα鎖たんぱく質をコードするｃＤＮＡのコドン鎖の核 酸配 列の少なくとも一部分によりコードされるものであり、前記一部分は、少なくと も、Ｆｃ_εＲα鎖たんぱく質のＩｇＥ結合部位をコードするものである。配列同 定番号第１番を有するコドン鎖と、それに相補の非コドン鎖（その核酸配列は当 業者には容易に判断が可能であり、ここでは配列同定番号第３番として示すこと とする）との両方を含む二本鎖の核酸分子を、ここではＦｃ_εＲ核酸分子ｎｈＦ ｃ_εＲα₁₁₉₈と呼ぶこととする。配列同定番号第１番を翻訳すると、核酸分子ｎ ｈＦｃ_εＲα₁₁９８は、開始（スタート）コドンが配列同定番号第１番のヌクレ オチド１０７番からヌクレオチド１０９番にあり、終止（ストップ）コドンが配 列同定番号第１番のヌクレオチド８７８番からヌクレオチド８８０番にある開放 読み取り枠を想定したときに、配列同定番号第２番で表される、ここではＰｈＦ ｃ_εＲα₂₅₇と呼ばれる、約２５７個のアミノ酸から成る全長Ｆｃ_εＲα鎖たん ぱく質をコードしていることが分かる。ストップコドンを含めた、ＰｈＦｃ_εＲ α₂₅₇をコードするコドン領域は、その核酸配列がここでは配列同定番号第４番 で表されるコドン鎖を有する核酸分子ｎｈＦｃ_εＲα₇₇₄で表される。配列同定 番号第４番の相補体はここでは配列同定番号第５番で表される。配列同定番号第 １番は、約２５個のアミノ酸から成るシグナルペプチドや、ここではそのアミノ 酸配列を配列同定番号第６番で表すこととする、ここでＰｈＦｃ_εＲα₂₃₂と示 される、約２３２個のアミノ酸から成る成熟たんぱく質をコードしている。この 見かけの成熟たんぱく質をコードする核酸分子はｎｈＦｃ_εＲα₆₉₉と呼ばれ、 そのコドン鎖の核酸配列はここでは配列同定番号第７番で示されている。配列同 定番号第１番はさらに、配列同定番号第２番のアミノ酸２０５番からアミノ酸２ ５７番までに基として延びる疎水性の膜貫通ドメイン及び細胞質の尾をコードし ている。これらの核酸配列及びアミノ酸配列を知ることで、当業者であれば、各 々の核酸分子及びたんぱく質に改良を加えて、例えば、可溶性のより高いＦｃ_ε Ｒα鎖たんぱく質を開発したり、及び／又は、ＩｇＥを検出可能な切断形のたん ぱく質（例えばペプチド）、例えばＰｈＦｃ_εＲα₁₉₇及びＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂な ど、を開発したりすることが可能となる。好適なＦｃ_εＲ分子にはＰｈＦｃ_εＲ α₂₅₇、ＰｈＦｃ_εＲα₁₉₇、ＰｈＦｃ_εＲα₂₃₂及びＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂が含まれ る。Ｆｃ_εＲ分子をコードするのに好適な核酸分子には、ｎｈＦｃ_εＲα₇₇₄、 ｎｈＦｃ_εＲα₁₁₉₈、ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂、ｎｈＦｃ_εＲα₅₉₁、ｎ ｈＦｃ_εＲα₆₉₉及び／又はｎｈＦｃ_εＲα₅₁₆が含まれる。 本発明に基づく分離されたＦｃ_εＲ分子たんぱく質は、このたんぱく質を発現 することのできる細胞をこのたんぱく質産生にとって効果的な条件下で培養し、 このたんぱく質を回収することにより、生成が可能である。培養に好適な細胞は 、このたんぱく質を発現することのできる組換え細胞であるが、この組換え細胞 は、ホスト細胞を、本発明による一つ又はそれ以上の核酸分子で形質転換させる ことにより作成されるものである。ある一つの細胞へのある核酸分子の形質転換 は、この細胞に核酸分子を挿入できれば、いかなる方法によっても達成すること ができる。形質転換技術には、トランスフェクション、電気穿孔法、マイクロイ ンジェクション、リポフェクション、吸着法、及びプロトプラスト融合法がある が、これらに限定されるものではない。組換え細胞は無細胞のままでも、又は、 組織、臓器又は多細胞の有機体に成長させてもよい。本発明による形質転換させ た核酸分子は染色体外のままでも、又は、形質転換させた（即ち組換え）細胞の 染色体の一つ又はそれ以上の部位に、それらの発現能力が維持されるような態様 で組み込まれてもよい。細胞を形質転換するのに適切かつ好適な核酸分子は、適 切かつ好適なＦｃ_εＲ核酸分子自体についてここに開示した通りである。本発明 の組換え細胞に含めるのに特に好適な核酸分子には、ｎｈＦｃ_εＲα₇₇₄、ｎｈ Ｆｃ_εＲα₁₁₉₈、ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂、ｎｈＦｃ_εＲα₅₉₁、ｎｈＦｃ_εＲα₆₉₉ 及び／又はｎｈＦｃ_εＲα₅₁₆が含まれる。 形質転換するのに適したホスト細胞には、本発明の核酸分子で形質転換するこ との可能なあらゆる細胞が含まれる。ホスト細胞は未形質転換のままの細胞でも 、又は、少なくとも一つの核酸分子で既に形質転換された細胞でもよい。本発明 の細胞は、本発明のＦｃ_εＲ分子たんぱく質を内生（即ち天然で）産生できるも のでも、又は、本発明による少なくとも一つの核酸分子で形質転換させた後にこ のようなたんぱく質を産生可能になったものでもよい。本発明のホスト細胞は本 発明の少なくとも一つのたんぱく質を産生できればいかなる細胞でもよいが、バ クテリア、真菌（酵母を含む）、寄生生物（プロトゾア及び外部寄生生物を含む ）、昆虫、その他の動物及び植物の細胞が、これに含まれる。 好ましくは、組換え細胞を本発明の組換え分子でトランスフェクトするとよい が、 この分子には、形質転換させようとする細胞においてその核酸分子の発現を効果 的に制御することのできる転写制御配列のうちの少なくとも一つに有効に連結さ せた、少なくとも一つの前述の核酸分子を含めることができ、その例をここで開 示する。特に好適な組換え分子にはｐＶＬ−ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂がある。Ｆｃ_ε Ｒ分子核酸分子含有組換え分子の作成に関する詳細をここで開示する。本発明に おいて特に好適な組換え分子には、Trichoplusia ni−ｐＶＬ−ｎｈＦｃ_εＲα_{6 12} がある。 本発明のＦｃ_εＲ分子には、ＩｇＥに結合するＦｃ_εＲ分子の一部分と第二分 子とを含むキメラ分子を含めることができるが、ただしこの第二分子とは、この 第二分子があることで、このキメラ分子が基質に結合するときに、基質に結合し ていないＦｃ_εＲ分子と基本的に同じ態様でこのＦｃ_εＲ部分がＩｇＥに結合す るよう、結合を行うことが可能となるものである。適した第二分子の一例には、 免疫グロブリン分子の一部分がある。 本発明のＦｃ_εＲ分子は、ここでＦｃ_εＲ製剤と呼ばれる製剤中に封入するこ とができる。例えば、Ｆｃ_εＲを、Ｆｃ_εＲが可溶化された緩衝液、及び／又は 、担体と配合することができる。適した緩衝剤及び担体は当業者に公知である。 適した緩衝剤の例には、Ｆｃ_εＲがＩｇＥに選択的に結合する働きを行えるあら ゆる緩衝液が含まれるが、例えば、しかしこれらに限らず、リン酸緩衝生理食塩 水、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、重炭酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｎ−２ −ヒドリキシエチルピペラジン−Ｎ‘−２−エタンスルホン酸緩衝生理食塩水） 、ＴＥＳ緩衝液（トリス−ＥＤＴＡ緩衝生理食塩水）、トリス緩衝液、及びＴＡ Ｅ緩衝液（トリス−酢酸−ＥＤＴＡ）がある。担体の例には、ポリマーマトリッ クス、トキソイド、及び例えばウシ血清アルブミンなどの血清アルブミンがある が、これらに限定されるものではない。担体をＦｃ_εＲと混合しても、又は、Ｆ ｃ_εＲがＩｇＥに選択的に結合できる能力に大きく干渉しないような態様でＦｃ_ε Ｒに結合（即ち付着）させてもよい。 本発明のＦｃ_εＲは、Ｆｃ_εＲを発現する細胞表面に結合させてもよい。好適 なＦｃ_εＲ保有細胞には、本発明のヒトＦｃ_εＲα鎖をコードする核酸分子を発 現する組換え細胞がある。本発明においてより好適な組換え細胞は、以下のたん ぱく質、即ちＰｈＦｃ_εＲα₂₅₇及びＰｈＦｃ_εＲα₂₃₂、のうちの少なくとも一 方をコードす る核酸分子を発現するものである。さらにより好適な組換え細胞は、ｎｈＦｃ_ε Ｒα₆₁₂、ｎｈＦｃ_εＲα₅₉₁、ｎｈＦｃ_εＲα₆₉₉及び／又はｎｈＦｃ_εＲα₅₁₆ を含む核酸分子を発現するものであるが、配列同定番号第１番又は配列同定番号 第４番を含む核酸配列を含む核酸分子か、又は、配列同定番号第１番又は配列同 定番号第４番を含む核酸分子の対立遺伝子変異体を含む核酸分子、を発現する組 換え細胞がさらにより好ましい。さらにより好適な組換え細胞はＲＢＬ−ｈＦｃ_ε Ｒ細胞である。 加えて、本発明のＦｃ_εＲ製剤にはＦｃ_εＲだけでなく、ＩｇＥを検出するの に有用な一つ又はそれ以上の別の抗原又は抗体を含めることができる。ここで用 いられる場合の抗原とは、ある抗体が選択的に結合することのできるあらゆる分 子を言う。ここで用いられる場合の、第一の分子の第二の分子への特異的結合と は、この第一の分子が、この第一の分子が第三の分子に結合する際の能力に比し て第二の分子に優先的に結合（例えば高親和性の高結合力を有して）できること を言う。第一の分子は必ずしも第二の分子の天然のリガンドでなくともよい。こ のような抗体の例には、ＩｇＥ重鎖の恒常領域に選択的に結合する抗体（即ち抗 ＩｇＥイソタイプ抗体）又は特異抗原特異性を有するＩｇＥに選択的に結合する 抗体（即ち抗ＩｇＥイディオタイプ抗体）があるが、これらに限られることはな い。このような抗原の例には、ＩｇＥの産生を誘起することの知られたあらゆる 抗原が含まれる。好適な抗原にはアレルゲン及び寄生生物抗原がある。本発明の アレルゲンは、好ましくは、真菌、高木、雑草、低木、稲科植物、コムギ、トウ モロコシ、ダイズ、米、卵、牛乳、チーズ、ウシ（原語：bovines）（又はウシ （原語：cattle））、家禽、ブタ、ヒツジ、酵母、蚤、ハエ、蚊、ユスリカ、ヌ カカ、ブヨ、シラミ、蜂、黄蜂、アリ、ナンキンムシ及びマダニを由来とするも のであるとよい。適した蚤アレルゲンには、蚤、特に蚤の唾液抗原を由来とする アレルゲンがある。好適な蚤アレルゲンには、蚤唾液抗原がある。好適な蚤唾液 抗原には、例えば１９９６年４月１８日公開のフランク氏らによるＰＣＴ特許公 報ＷＯ９６／１１２７１号（この公報全文を参考文献としてここに編入すること とする）などがあるが、蚤唾液生成物及び蚤唾液たんぱくが特に好適である。本 発明によれば、蚤唾液たんぱくには、組換えＤＮＡ法により作成されたたんぱく 質や、ＰＣＴ特許公報ＷＯ９６／１１２７１号に開示のその他 の方法により分離されたたんぱく質が含まれる。 好適な一般的アレルゲンには、稲科植物、ヒロハノウシノケグサ，カーリード ック（原語：Curly Dock），オオバコ、メキシカンファイアブッシュ（原語：Me xican Firebush），シロザ，アカザ、ブタクサ、セージ、ニレ、オナモミ、ネグ ンドカエデ，クルミ、ポプラ、トネリコ、カバ、セイヨウスギ、オーク、クワ、 ゴキブリ、ヒョウヒダニ，アルテルナリア属、アスペルギルス属、クラドスポリ ウム属、フザリウム属、ヘルミントスポリウム属、ケカビ属、ペニシリウム属、 Pullularia，クモノスカビ属及び／又はTricophytonを由来とするものが含まれ る。より好適な一般的アレルゲンには、ヒメモロコシ，ナガハグサ，ヒロハノウ シノケグサ，カモガヤ，多年生ライグラス，コヌカグサ，オオアワガエリ，ギョ ウギシバ，チャヒキ，カーリードック（原語：Curly Dock），ヘラオオバコ，メ キシカンファイアブッシュ（原語：Mexican Firebush），シロザ，ラフピッグウ ィードショートラグウィード（原語：Rough Pigweed Short Ragweed），ウォー ムウッドセージ（原語：Wormwood Sage），アメリカニレ，コモンコックルバー （原語：Common Cocklebur），ネグンドカエデ，クログルミ，イースタンコット ンウッド（原語：Eastern Cottonwood），グリーンアッシュ（原語：Green Ash ），フロリダカンバ，エンピツビャクシン，アカガシワ，アカミグワ，ゴキブリ 、Dermataphagoides farinae，Alternaria alternata，Aspergillus fumigatus ，Cladosporium herbarum，Fusarium vasinfectum，Helminthosporium sativum ，Mucor recemosus，Penicillium notatum，Pullularia pullulans，Rhizopus n igricans及び／又はTricophyton種を由来とするものが含まれる。好適な熱帯性 アレルゲンには、ギョウギシバ，ミノボロ，一年生イチゴツナギ，カモガヤ，多 年生ライグラス，オオアワガエリ，ヒロハノウシノケグサ，コモンコックルバー （原語：Common Cocklebur），イエロードック（原語：Yellow Dock），ヒメス イバ，ヘラオオバコ，シロザ，ラフピッグウィード（原語：Rough Pigweed）， ロシアンシストル（原語：Russian Thistle），ショートラグウィード（原語：S hort Ragweed），エンピツビャクシン，ネコ上皮，アリゾナサイプレス（原語： Arizona Cypress），ラクウショウ，ヤシ科フェニックス属，シマナンヨウスギ ，ユーカリ樹，マンゴ，アカシア，グラーマグラス，イラクサ，ウェスタンコッ トンウッド（原語：Western Cottonwood），塩生草 類，Dermataphagoides pteronyssinus，Aureobasidium pullans，Penecillium n otatum，Penicillium chrysogenum，Drechslera sorokiniana，Fusarium roseum ，Cladosporium sphaerospermum，Aspergillus fumigatus，Alernaria tenuis D ermataphagoides farinae及びStemphyllium sarciniformを由来とするものが含 まれる。好適な砂漠アレルゲンには、バヒアグラス，コスズメノチャヒキ，ヒメ モロコシ，コヌカグサ，フォールスラグウィード（原語：False Ragweed），ケ アレスウィード（原語：Careless Weed），グリースウッド、ラフマーシュエル ダー（原語；Rough Marsh Elder），コキア，トールラグウィード（原語：Tall Ragweed），ウェスタンラグウィード（原語：Western Ragweed），スレンダーラ グウィード（原語：Slender Ragweed）,コモンセージ（原語：Common Sage）， プレーリーセージ（原語：Prairie Sage），マグワートセージ（原語：Mugwort Sage）及びシャドスケールを由来とするものが含まれる。好適な寄生生物抗原に は、蠕虫抗原、特に、例えば（グリーブ氏らによる１９９６年９月１８日出願の 米国特許出願第０８／７１５，６２８号に説かれた）Ｄｉ３３などのイヌ糸状虫 抗原が含まれるが、これに限られるものではない。「由来とする」という術語は 、このような植物又は生物の天然アレルゲン（即ちこのような植物又は生物から 直接分離されるアレルゲン）や、あるアレルゲンに対して免疫反応を誘起するこ とのできるエピトープを少なくとも一つ持ったこのような植物又は生物の非天然 アレルゲン（例えば組換えＤＮＡ技術又は化学合成により作成されるものなど） を言う。 本発明には、さらに、ＩｇＥを検出するためのヒトＦｃ_εＲミメトープ及びそ の利用が含まれる。本発明によれば、「ミメトープ」とは、あるＦｃ_εＲ分子が ＩｇＥに結合するその能力を模倣することのできるあらゆる化合物を言う。ミメ トープは、分解への感受性を減じるよう改良されていながら、ＩｇＥ結合活性は 保ったままのペプチドでもよい。ミメトープのその他の例には、炭化水素を基に した化合物、脂質を基にした化合物、核酸を基にした化合物、天然有機化合物、 合成有機化合物、抗イディオタイプ抗体及び／又は触媒抗体、あるいはこれらの フラグメント、が含まれるが、これらに限られるものではない。ミメトープは、 例えばＩｇＥに結合することのできる化合物を探して合成化合物のライブラリを スクリーニングすることで得ることができる。またミメトープを、例えば合理的 なドラッグデザインによ り得てもよい。合理的なドラッグデザインの手法においては、本発明に基づくあ る化合物の三次元構造を、例えば核磁気共鳴法（ＮＭＲ）又はｘ線クリスタログ ラフィにより分析することができる。こうしてこの三次元構造を用い、例えばコ ンピュータモデリングを行えば、ミメトープと考えられる物質の構造を予測する ことができる。こうして予測されたミメトープの構造を、例えば化学合成、組換 えＤＮＡ技術や、又はミメトープを天然源から分離するなどして、作成すること が可能である。Ｆｃ_εＲミメトープの具体的な例には、抗イディオタイプ抗体、 Selex技術を用いて生成されるオリゴヌクレオチド、ペプチドライブラリを無作 為にスクリーニングして同定されるペプチド、及び、ファージ表示技術を用いて 同定されるたんぱく質がある。 本発明の一実施例は、（ａ）分離されたヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子 を推定上のＩｇＥ含有組成物に、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体が形成されるのに 適した条件下で接触させるステップと、（ｂ）前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体 を検出することによりＩｇＥのレベルを判定するステップと、を含む、非ヒトＩ ｇＥを検出する方法である。このようなＦｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の存在は、 その動物がＩｇＥを産生していることの指標となるものである。ヒトＦｃ_εＲ分 子を用いて検出を行うのに好適な非ヒトＩｇＥには、イヌＩｇＥ、ネコＩｇＥ及 びウマＩｇＥがある。本方法にはさらに、Ｆｃ_εＲ分子と複合体を形成したＩｇ Ｅが非耐熱性であるかどうかを判定するステップを含めてもよい。ＩｇＥの非耐 熱性を判定する方法は実施例の項に開示されている。好ましくは、ＩｇＥは約５ ６℃で約４時間インキュベートされた時に非耐熱性であるとよい。理論に縛られ る訳ではないが、非耐熱性の型のＩｇＥは特定のアレルゲンに結合し、耐熱成型 のＩｇＥはその他のタイプのアレルゲンに結合すると出願人は考える。従って、 耐熱性のＩｇＥに比較して非耐熱性のＩｇＥを検出する方法を用いれば、アレル ゲンの感受性を判別することができる。例えば、特定の蚤アレルゲン及びイヌ糸 状虫アレルゲンに結合するＩｇＥ抗体は非耐熱性であるが、特定の植物アレルゲ ンに結合するＩｇＥ抗体は耐熱性であると出願人は考える。従って、耐熱性のＩ ｇＥが存在することは、動物が特定の植物アレルゲンに感受性があるが特定の蚤 又はイヌ糸状虫アレルゲンには感受性がないということを示しているかも知れな い。さらに、ヒトＦｃ_εＲを用いた非耐熱 性ＩｇＥ及び耐熱性ＩｇＥの同定は、公知のＩｇＥに類似の構造を持っている又 は持っていないかも知れない別々のＩｇＥの小集団が存在することを示唆するも のであると出願人は考える。このように、本発明のＦｃ_εＲ分子は、Ｆｃ_εＲ分 子が結合した分子でありながら、公知のＩｇＥとは同一ではない分子を検出する 上で有用かも知れない。 ここで用いられる場合のイヌとは、家イヌ、野生のイヌ、及び、動物園のイヌ を含めたあらゆるイヌ科の仲間を言う。イヌの例には、家イヌ、野生のイヌ、キ ツネ、オオカミ、ジャッカル及びコヨーテが含まれるが、これらに限らない。こ こで用いられる場合のネコとは、家ネコ、野生のネコ、及び、動物園のネコを含 めたあらゆるネコ科の仲間を言う。ネコの例には、家ネコ、ライオン、トラ、ヒ ョウ、パンサー、クーガー、ボブキャット、オオヤマネコ、ジャガー、チータ、 及びサーバルが含まれるが、これらに限らない。ここで用いられる場合のウマと は、ウマ、ロバ、ラバ及びシマウマを含めたあらゆるウマ科の仲間を言う。 ここで用いられる場合の「接触させる」という術語は、この場合は推定上のＩ ｇＥ含有組成物をヒトＦｃ_εＲ分子に配合又は混合することを言う。 Ｆｃ_εＲ とＩｇＥとの間の複合体の形成とは、測定（即ち検出）の可能な安定した複合体 を形成すべくＦｃ_εＲがＩｇＥに選択的に結合することができることを言う。こ こで用いられる場合のＩｇＥに選択的に結合するという術語は、本発明のＦｃ_ε Ｒがその他の抗体イソタイプには大きく結合することができない状態でＩｇＥに 優先的に結合することができることを言う。Ｆｃ_εＲとＩｇＥとの間の結合は、 複合体の形成にとって適した条件下で行われるが、このような条件（例えば適し た濃度、緩衝剤、温度、反応時間）や、このような条件を最適化する方法は当業 者に公知であり、その例はここで開示されている。複合体形成条件の例はさらに 、例えばSambrook et al.，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，Cold Spr ing Harbor Labs Press，1989に開示されており、このSambrook et alの文献全 体を参考文献としてここに編入することとする。 ここで用いられる場合の「複合体の形成を検出する」という術語は、何らかの 複合体が形成されていないか判断する、即ち複合体の存在（即ち存在）について 検定することを言う。複合体が形成されていれば、形成された複合体の量を調べ てもよ いが、必ずしも調べなくともよい。Ｆｃ_εＲと組成物中の何らかのＩｇＥとの間 の複合体の形成、又は選択的結合は当業において標準的な様々な方法（例えば上 述のSambrook et alを参照されたい）を用いて測定（即ち検出、判定）が可能で あるが、その例はここに開示されている。 ある一つの実施例では、本方法の推定上のＩｇＥ含有組成物には動物から採っ た生体試料が含まれる。適した生体試料には体液組成物又は細胞組成物があるが 、これらに限定されるものではない。体液とは、動物から採取（即ち得る）する ことの可能なあらゆる流体を言い、その例には、血液、血清、血漿、尿、涙液、 房水、中枢神経系流液（ＣＮＦ）、唾液、リンパ液、鼻分泌液、乳汁、及び糞尿 が含まれるが、これらに限らない。本発明のこのような組成物を予処理して、非 ＩｇＥイソタイプの免疫グロブリン、及び／又は、体液中に存在するその他のた んぱく質、例えばアルブミンなど、の少なくともいくつかを除去してもよいが、 必ずしも除去しなくともよい。このような除去には、体液を、例えばプロテイン Ｇなどの物質に接触させてＩｇＧ抗体を取り除くこと、及び／又は、体液を例え ばコンカナバリンＡなどに暴露することで体液のその他の成分からＩｇＥ抗体を 親和性精製すること、が含まれるが、これらに限定されるものではない。別の実 施例では、組成物には、採集された体液であって、その体液中に含まれた免疫グ ロブリンを濃縮するように予処理されたものがある。例えば、体液中に含まれた 免疫グロブリンは硫酸アンモニウムを用いることでその他のたんぱく質から沈降 させることができる。本方法において好適な組成物は血清である。 別の実施例では、本方法の組成物にはＩｇＥ産生細胞がある。このような細胞 は、ＩｇＥを細胞表面に結合させていたり、及び／又は、ＩｇＥを分泌している ことがある。このような細胞の例には、好塩基球及び骨髄腫細胞がある。ＩｇＥ は細胞表面の細胞膜に直接結合していたり、細胞表面に結合した分子（例えば抗 原）に結合していたりする場合がある。 複合体の検出は以下の検定法のうちの一つ又はそれ以上の利用を含め、しかし 、これらに限らず、様々な方法で行うことができる。即ち、酵素結合免疫検定法 、ラジオイムノアッセイ、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、ラテラルフロー検 定法、凝集反応検定法、微粒子を基にした検定法（例えば磁気粒子又は例えばラ テックス 又はポリスチレン・ビードなどの樹脂性ポリマーなど、しかしこれらに限らず、 微粒子を用いる）、免疫沈降検定法、BioCore^TM検定法（金コロイドを用いる） 及び免疫ブロット検定法（例えばウェスタンブロット）である。このような検定 法は当業者に公知である。検定法を用いれば、それらがどのように用いられるか に応じて定性的又は定量的結果を出すことができる。検定の中には、例えば凝集 反応法、微粒子分離法、及び免疫沈降法など、検出可能マーカーを必要とせずに 視覚的（例えば肉眼で、又はデンシトメータ又は分光光度計などの機械を用いて ）に観察が可能なものもある。他の検定法では、検出可能マーカーを、Ｆｃ_εＲ に、又はＦｃ_εＲに選択的に結合する試薬に、あるいは検出しようとするＩｇＥ に結合させる（以下に詳述する）と、複合体の形成を検出する上で便利である。 検出可能マーカーの例には、放射性標識、蛍光標識、化学発光標識、色素産生標 識又はリガンドがあるが、これらに限られるものではない。リガンドとは、別の 分子に選択的に結合する分子を言う。好適な検出可能マーカーには、フルオレセ イン、放射性同位体、ホスファターゼ（例えばアルカリホスファターゼ）、ビオ チン、アビジン、ペルオキシダーゼ（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ）及び ビオチン関連化合物又はアビジン関 これらに限定されるものではない。好ましくは、ビオチンをＦｃ_εＲのα鎖に結 合するとよい。好ましくは、Ｆｃ_εＲα鎖の炭化水素基をビオチンに結合すると よい。ビオチンに結合される好適なＦｃ_εＲ分子はＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂−ＢＩＯ Ｔ（その作成法を実施例の項で説明する）を含むものである。 ある一つの実施例では、複合体は、検出可能マーカーに結合したＦｃ_εＲ分子 に推定上のＩｇＥ含有組成物を接触させることにより、検出される。Ｆｃ_εＲ分 子に結合させるのに適した検出可能マーカーには、放射性標識、蛍光標識、化学 発光標識、又は色素産生標識があるが、これらに限定されるものではない。検出 可能マーカーをＦｃ_εＲ分子又は試薬に結合させるときには、Ｆｃ_εＲ又は試薬 が、検出しようとするＩｇＥに結合する能力を遮断しないような態様で行われる 。好ましくは、Ｆｃ_εＲの炭化水素基をビオチンに結合させるとよい。 別の実施例では、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体は、推定上のＩｇＥ含有組成物 をＦｃ_εＲ分子に接触させ、その後この複合体を指示分子に接触させることによ り検 出される。本発明において適した指示分子には、Ｆｃ_εＲ分子又はＩｇＥ抗体の いずれかに結合することのできる分子がある。従って、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複 合体のどの部分を検出しようとするかに応じて、指示分子には、例えばＦｃ_εＲ 分子、抗原、抗体及びレクチンを含めることができる。判別可能なように標識さ れる化合物で好適なものには、例えば抗ＩｇＥ抗体及び抗Ｆｃ_εＲ抗体が含まれ る。好適なレクチンには、高マンノース基に結合するようなレクチンが含まれる 。より好適なレクチンは、昆虫細胞で産生される、本発明のＦｃ_εＲ分子上に存 在する高マンノース基に結合するものである。指示分子それ自体を本発明の検出 可能マーカーに結合させてもよい。例えば、抗体をビオチン、西洋ワサビペルオ キシダーゼ、アルカリホスファターゼ又はフルオレセインに結合させてもよい。 ある好適な実施例では、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体は、この複合体を、本発 明のＦｃ_εＲ分子に選択的に結合する試薬に接触させることにより、検出される 。このような試薬の例には、Ｆｃ_εＲ分子に選択的に結合する抗体（ここでは抗 Ｆｃ_εＲ抗体と呼ぶこととする）、又は、Ｆｃ_εＲ分子に結合させた検出可能マ ーカーに選択的に結合する化合物、があるが、これらに限らない。ビオチンに結 合させたＦｃ_εＲ分子は、好ましくは、ストレプタビジンを用いて検出されると よく、より好 入手可能）を用いて検出されるとよい。 別の好適な実施例では、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体は、この複合体を、Ｉｇ Ｅ抗体に選択的に結合する試薬（ここでは抗ＩｇＥ試薬と呼ぶこととする）に接 触させることにより、検出される。このような抗ＩｇＥ試薬の例には、抗イソタ イプ抗体である第二抗体（例えばＩｇＥの恒常領域に選択的に結合する抗体）、 抗体結合バクテリア表面たんぱく（例えばプロテインＡ又はプロテインＧ）、抗 体結合細胞（例えばＢ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、多形核白血球細胞 、単核細胞又はマクロファージ細胞）、抗体結合真核細胞表面たんぱく（例えば Ｆｃレセプタ）、及び抗体結合補体たんぱく、があるが、これらに限られるもの ではない。好適な抗ＩｇＥ試薬には、Ｄ９、及びＣＭＩ抗体＃９、ＣＭＩ抗体＃ １９、ＣＭＩ抗体＃５９並びにＣＭＩ抗体＃７１（カリフォルニア州ウェストサ クラメント、カスタム・モノクローナル・インターナショナル社から入手可能） が含まれるが、これらに限 られるものではない。特に、ここで用いられる場合において、抗ＩｇＥ抗体には 、完全な抗体だけでなく、ＩｇＥ重鎖恒常領域に選択的に結合することのできる 、あらゆるそのサブユニット又は部分が含まれる。例えば、抗ＩｇＥ試薬の一部 には、Janeway et al．Immunobiology，the Immune System in Health and Dise ase，Garland Publishing，Inc.，NY，1996（この文献全体を参考文献としてこ こに編入することとする）に詳細に説明されているＦａｂフラグメント又はＦ（ ａｂ‘）₂フラグメントを含めることができる。 ある一つの実施例では、複合体を溶液中で形成かつ検出してよい。別の実施例 では、複合体の形成は、その複合体の一つ又はそれ以上の構成員を基質上に固定 （例えば被膜）した状態で行わせてもよい。固定技術は当業者には公知である。 適した基質材料には、樹脂、ガラス、ゲル、セルロイド、紙、ＰＶＤＦ（ポリフ ッ化ビニリデン）、ナイロン、ニトロセルロース、及び、例えばラテックス、ポ リスチレン、ナイロン、ニトロセルロース、アガロース及び磁気樹脂などの微粒 子材料が含まれるが、これらに限定されるものではない。基質材料にとって適し た形状には、ウェル（例えばマイクロタイタ皿のウェル）、プレート、ディップ スティック、ビード、ラテラルフロー装置、メンブラン、フィルタ、試験管、デ ィッシュ、セルロイド型マトリックス、磁気粒子、及びその他の微粒子が含まれ るが、これらに限定されるものではない。特に好適な基質にはＥＬＩＳＡプレー ト、ディップスティック、ラジオイムノアッセイ・プレート、アガロース・ビー ド、樹脂・ビード、ラテックス・ビード、免疫ブロットメンブラン及び免疫ブロ ットペーパが含まれる。ある実施例では、微粒子などの基質に検出可能マーカー を含めることができる。 ＩｇＥを検出するのに好適な方法は免疫吸着検定法である。本発明の免疫吸着 検定法は捕獲分子及び指示分子を含む。本発明の捕獲分子は、ＩｇＥが基質上に 固定されるような態様で捕獲分子に結合する。従って、捕獲分子は、好ましくは 、この捕獲分子を推定上のＩｇＥ含有組成物に暴露する前に予め本発明の基質に 固定しておくとよい。本発明の指示分子は、捕獲分子に結合したＩｇＥの存在を 検出するものである。従って、指示分子は、好ましくは、捕獲分子を推定上のＩ ｇＥ含有組成物に暴露する前に捕獲分子と同じ基質には固定されていないとよい 。 好適な免疫吸着検定法は、（ａ）Ｆｃ_εＲ分子を推定上のＩｇＥ含有組成物に 接 触させる前に、Ｆｃ_εＲ分子を基質に結合させて、Ｆｃ_εＲ分子で被膜された基 質を形成するステップ、又は（ｂ）Ｆｃ_εＲ分子を推定上のＩｇＥ含有組成物に 接触させる前に、推定上のＩｇＥ組成物を基質に結合させて、推定上のＩｇＥ含 有組成物で被膜された基質を形成するステップ、のいずれかを含む。好ましくは 、この基質は、被膜されていない基質、Ｆｃ_εＲ分子で被膜された基質、抗原で 被膜された基質又は抗ＩｇＥ抗体で被膜された基質、のいずれかを含むとよい。 本発明による捕獲分子及び指示分子の両方がＩｇＥに結合可能である。好まし くは、捕獲分子が指示分子とは異なるＩｇＥ領域に結合するとよく、これにより 、捕獲分子と指示分子とを同時にＩｇＥに結合させることが可能となる。試薬を 捕獲分子として利用するか、又は指示分子として利用するかは、その分子をＩｇ Ｅ分子に暴露するときにその分子を基質上に固定しておくかによる。例えば、本 発明のＦｃ_εＲ分子は、このＦｃ_εＲ分子を基質に結合させる場合には捕獲分子 として用いられる。その代わりに、このＦｃ_εＲ分子を基質に結合させない場合 には、 Ｆｃ_εＲ分子は指示分子として用いられることとなる。捕獲分子又は指 示分子として利用するのに適した分子には、本発明のＦｃ_εＲ分子、本発明の抗 原試薬又は抗ＩｇＥ抗体試薬があるが、これらに限らない。 本発明の免疫吸着検定法にはさらに、指示分子の存在を検出できる、一つ又は それ以上の層及び／又は種類の第二分子又はその他の結合分子を含めてもよい。 例えば、指示分子に選択的に結合する無標識の（即ち検出可能マーカーに結合さ せていない）第二抗体を、この第二抗体に選択的に結合する標識付（即ち検出可 能マーカーに結合させた）第三抗体に結合させてもよい。適した第二抗体、第三 抗体及びその他の第二又は第三分子は当業者には選択可能である。本発明におい て好適な第二分子には、抗原、抗ＩｇＥイディオタイプ抗体及び抗ＩｇＥイソタ イプがある。好適な第三分子は、第二分子の性質に応じて当業者であれば選択可 能である。同じ戦略がその次の層にも当てはまる。 ある一つの実施例では、所望の抗原が、例えばマイクロタイタ皿のウェル又は ディップスティックなどの基質上に固定されることにより、捕獲分子として用い られる。好適な抗原にはここに開示したものが含まれる。動物から採取した生体 試料をこの基質に施し、抗原：ＩｇＥ複合体が基質に結合した状態（即ち試料中 のＩｇＥ が、基質上に固定された抗原に結合する）で形成されるのに適した（即ち充分な ）条件下でインキュベートする。結合しなかった余分な物質（即ち生体試料を由 来とする物質で抗原に結合しなかったもの）があれば、抗原：ＩｇＥ複合体が基 質に結合された状態が維持されるような条件下で基質から取り除かれる。好適な 条件はここで実施例の項に開示してあるが、上述したSambrook et alに概ね説か れている。指示分子は、抗原に結合したＩｇＥに選択的に結合することができ、 この指示分子を検出可能マーカー（好ましくは酵素標識、比色標識、蛍光標識、 放射性同位体、又は、ビオチン又はアビジン系などのリガンド）に結合させてお くことができ、基質に加えてインキュベートすることで、この指示分子と抗原： ＩｇＥ複合体との間の複合体を形成させる。過剰な指示分子を取り除き、必要に 応じて現像主薬を加え、基質を検出装置にかけて分析する。この実施例のために 好適な指示分子はＦｃ_εＲ分子であるが、好ましくはビオチン、蛍光標識又は酵 素標識に結合されたものであるとよい。 ある一つの実施例では、Ｆｃ_εＲ分子が、例えばマイクロタイタ皿のウェル又 はディップスティックなどの基質上に固定されることにより、捕獲分子として用 いられる。動物から採取した生体試料をこの基質に施し、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ 複合体が基質に結合した状態で形成されるのに適した条件下でインキュベートす る。結合しなかった余分な物質があれば、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体が基質に 結合された状態が維持されるような条件下で基質から取り除かれる。このＦｃ_ε Ｒに結合したＩｇＥに選択的に結合することができる指示分子を基質に加え、イ ンキュベートすることで、この指示分子と、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体との間 の複合体を形成させる。好ましくは、この指示分子を検出可能マーカー（好まし くは酵素標識、比色標識、蛍光標識、放射性同位体、又はビオチン又はアビジン 系のリガンド）に結合させておくとよい。過剰な指示分子を取り除き、必要に応 じて現像主薬を加え、基質を検出装置にかけて分析する。この実施例のために好 適な指示分子は、生体試料中のＩｇＥ又は抗ＩｇＥイソタイプ又はイディオタイ プ抗体に結合することとなる抗原であるとよいが、いずれの場合もフルオレセイ ン又はビオチンに結合させておくことが好ましい。 ある一つの実施例では、抗ＩｇＥ抗体（例えばイソタイプ又はイディオタイプ 特 異抗体）が、例えばマイクロタイタ皿のウェル又はディップスティックなどの基 質上に固定されることにより、捕獲分子として用いられる。動物から採取した生 体試料をこの基質に施し、抗ＩｇＥ抗体：ＩｇＥ複合体が基質に結合した状態で 形成されるのに適した条件下でインキュベートする。結合しなかった余分な物質 があれば、抗ＩｇＥ抗体：ＩｇＥ複合体が基質に結合された状態が維持されるよ うな条件下で基質から取り除かれる。Ｆｃ_εＲ分子を基質に加え、インキュベー トすることで、このＦｃ_εＲ分子と、抗ＩｇＥ抗体：ＩｇＥ複合体との間の複合 体を形成させる。好ましくは、このＦｃ_εＲ分子を検出可能マーカー（好ましく はビオチン、酵素標識又は蛍光標識）に結合させておくとよい。過剰なＦｃ_εＲ 分子を取り除き、必要に応じて現像主薬を加え、基質を検出装置にかけて分析す る。 一実施例では、本発明の免疫吸着検定法は捕獲分子を利用しない。この実施例 では、動物から採取した生体試料を基質、例えばマイクロタイタ皿のウェル又は ディップスティックなどに施し、ＩｇＥが基質に結合するのに適した条件下でイ ンキュベートする。体液中に存在する何らかのＩｇＥが基質上に固定される。結 合しなかった余分な物質があれば、ＩｇＥが基質に結合された状態が維持される ような条件下で基質から取り除かれる。Ｆｃ_εＲ分子を基質に加え、インキュベ ートすることで、このＦｃ_εＲ分子とＩｇＥとの間の複合体を形成させる。好ま しくは、このＦｃ_εＲ分子を検出可能マーカー（好ましくはビオチン、酵素標識 又は蛍光標識）に結合させておくとよい。過剰なＦｃ_εＲ分子を取り除き、必要 に応じて現像主薬を加え、基質を検出装置にかけて分析する。 ＩｇＥを検出するもう一つの好適な方法はラテラルフロー検定法であるが、そ の例はPronovost氏らによる１９９５年６月１３日発行の米国特許第５，４２４ ，１９３号、Imrich氏らによる１９９５年５月１６日発行の米国特許第５，４１ ５，９94号、Mlller氏らによる１９９４年１２月２２日公開のＷＯ９４／２９６ ９６号、及びPawlak氏らによる１９９４年１月２０日公開のＷＯ９４／０１７７ ５号に開示されており、これらの各特許公報の全文を参考文献としてここに編入 しておく。ある一つの実施例では、生体試料をラテラルフロー装置に配するが、 このラテラルフロー装置には以下の構成要素が含まれる。即ち（ａ）流路を規定 する支持構造、（ｂ）抗原に結合させたビードを含む標識試薬、この標識試薬は 支持構造の標識域 内に含浸されている、及び（ｃ）ＩｇＥ結合組成物を含む捕獲試薬、である。好 適な抗原にはここに開示されたものが含まれる。捕獲試薬は、標識試薬が標識域 から捕獲域に流れ込めるような態様で、標識域に流体的に接続する、標識試薬の 下流にあたる捕獲域内に配置される。支持構造は、標識域から捕獲域へというビ ードの流れを妨げない材料を含む。支持構造として用いるのに好適な材料にはイ オン（即ち陰イオン又は陽イオン）材料が含まれる。このような材料の例には、 ニトロセルロース（ＮＣ）、ＰＶＤＦ、カルボキシメチルセルロース（ＣＭ）が あるが、これらに限定されるものではない。支持構造は左右の流路を規定すると 共に複数の域、即ち標識域及び捕獲域、に分割される。この装置には、さらに、 流路に沿って配された試料受容域を含めることができ、より好ましくはこの試料 受容域は標識試薬の上流に来るとよい。支持構造内の流路は、捕獲域の下流、好 ましくは流路の終点になる支持構造部分を、標識域及び捕獲域から余分な液体を 吸収することのできる吸収剤に接触させることにより、形成される。 この実施例では、生体試料は、支持構造の一部を含む試料受容域に施される。 標識域が試料を試料受容域から受け取ると、この試料は流路により下流に向けら れる。標識域はＩｇＥに結合する標識試薬を含む。好適な標識試薬は、例えばラ テックス・ビードなどの樹脂性ビードの基質に、直接又はリンカーを介して結合 された抗原である。基質にはさらに検出可能マーカー、好ましくは比色マーカー が含まれる。典型的には、標識試薬は乾燥又は凍結乾燥により支持構造に含浸さ れる。試料構造はさらに標識域の下流にある捕獲域を含む。この捕獲域が標識試 薬を標識域から受け取ると、この試薬は流路により下流に向けられる。捕獲域は 捕獲試薬、この場合には上に開示したようにＦｃ_εＲ分子を含有し、このＦｃ_ε Ｒ分子により、抗原と複合体を形成したＩｇＥが捕獲域に固定される。捕獲試薬 は、好ましくは乾燥又は凍結乾燥により支持構造に固定されているとよい。標識 試薬は捕獲域内に蓄積するが、この蓄積を、視覚又は光学的検出装置により評価 する。 別の実施例では、ＩｇＥを検出するのに用いるラテラルフロー装置は、（ａ） 流路を規定する支持構造、（ｂ）上述したようなＦｃ_εＲ分子を含む標識試薬、 ただしこの標識試薬は支持構造の標識域内に含浸されている、及び（ｃ）抗原を 含む捕獲試薬、ただしこの捕獲試薬は、標識試薬が標識域から捕獲域に流れ込め るような 態様で、標識域に流体的に接続する、標識試薬の下流にあたる捕獲域内に配置さ れる、を含む。この装置は好ましくは、流路に沿って、好ましくは標識試薬の上 流に試料受容域をさらに含むとよい。またこの装置がさらに、流路の終点に配置 された吸収剤を含むことが好ましい。 本発明の一実施例は阻害検定法であり、この方法では、推定上のＩｇＥ含有組 成物中のＩｇＥの存在は、このような組成物を、本発明のＦｃ_εＲ分子と、この Ｆｃ_εＲ分子に結合することが公知の分離されたＩｇＥとに、加えることにより 判定される。推定上のＩｇＥ含有組成物中のＩｇＥの存在を示す、公知のＩｇＥ へのＦｃ_εＲ分子の結合がないこと。 本発明はさらに、開示された検出方法のそれぞれに基づいてＩｇＥを検出する ためのキットが含まれる。一実施例は、ヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子と 、イヌＩｇＥ、ネコＩｇＥ及び／又はウマＩｇＥを含むＩｇＥを検出する手段と を含む、ＩｇＥを検出するためのキットである。適したかつ好適なＦｃ_εＲ分子 はここに開示されている。適した検出方法には、Ｆｃ_εＲ分子又はＩｇＥのいず れかに結合する、ここで開示された化合物が含まれる。本発明において好適なキ ットには、ここで開示された抗原の一つ又はそれ以上を含む検出手段と、ここで 開示されたＩｇＥに選択的に結合することのできる抗体と、及び／又は、Ｆｃ_ε Ｒ分子に結合された検出可能マーカーに結合可能な化合物（例えば、検出可能マ ーカーがビオチンであ らに含まれる。このような抗原は、好ましくは、イヌ、ネコ及び／又はウマを含 む動物中でＩｇＥ抗体の産生を誘起するものであるとよい。 本発明のキットの好適な実施例は、例えばここで開示されたもののような蚤ア レルゲンを含む蚤アレルゲンキットである。蚤アレルゲンキットで用いるのに特 に好適な蚤アレルゲンには、蚤唾液生成物及び蚤唾液たんぱく質がある。 本発明において別の好適なキットは、合衆国のあらゆる地域に共通のアレルゲ ンと、本発明のヒトＦｃ_εＲ分子とを含む一般的アレルゲンキットである。ここ で用いられる場合の「一般的アレルゲン」キットとは、（即ち、基本的には合衆 国の特定の地域に限られるのではなく）概ね合衆国全体を通じて見られるアレル ゲンを含むキットを言う。一般的アレルゲンキットは、一個のキットを用いれば 、合衆国の 大部分の地理的位置にある動物を調べることができるため、地域アレルゲンキッ トに比べて有利である。本発明の一般的アレルゲンキットで用いるのに適したか つ好適な一般的アレルゲンには、ここで開示されたような一般的アレルゲンがあ る。 本発明のもう一つの好適なキットは、牛肉、鶏肉、豚肉、例えばタラ、ハリバ 又は及びマグロなどの魚肉の混合物、卵、牛乳、ビール酵母、全粒小麦、トウモ ロコシ、ダイズ、チーズ及び米を含む食物アレルゲンと、本発明のヒトＦｃ_εＲ 分子とを含む食物アレルゲンキットである。好ましくは、牛肉、鶏肉、豚肉、魚 肉、トウモロコシ及び米は調理されたものであるとよい。 本発明の好適なキットには、アレルゲンが基質に固定されたものが含まれる。 キットが二つ又はそれ以上の抗原を含む場合、このキットには、それぞれが一つ の抗原を含む一つ又はそれ以上の組成物を含めることができる。従って、各抗原 を別々に調べることが可能である。キットにはさらに、ＩｇＥのための二つ又は それ以上の診断試薬、別の分離されたＩｇＥ抗原、及び／又は、ここで開示され たような抗体を含めてもよい。特に好適なのは、ラテラルフロー検定フォーマッ トで用いられるキットである。ラテラルフロー検定キットに、一つ又はそれ以上 のラテラルフロー検定装置を含めることができることは本発明の範囲内である。 複数のラテラルフロー装置をそれぞれの端部に相互に取り付けることで扇のよう な構造を形成してもよい。 具体的には、本発明の方法及びキットは、ＩｇＥのレベルが変化することに関 連した、動物の異常な状態を診断するのに有用である。診断するのに特に好適な 状態には、アレルギー、寄生生物感染及び新形成がある。例えば、本発明の方法 及びキットは、このような方法又はキットが蚤唾液抗原の利用を含む場合、蚤ア レルギー性皮膚炎（ＦＡＤ）を検出するのに特に便利である。ＦＡＤは蚤に噛ま れることに対する過敏反応であると定義されている。好ましくは、推定上のＩｇ Ｅ含有組成物は、ＦＡＤを有すると疑われる動物から得られるとよい。好適な動 物にはここで開示されたものがあるが、イヌ及びネコがより好ましい。加えて、 本発明の方法及びキットは、このような方法又はキットに、例えばＤｉ３３など の蠕虫抗原の利用が含まれる場合、蠕虫感染、特にイヌ糸状虫感染を検出するの に特に有用である。好ましくは、推定上のＩｇＥ含有組成物は、蠕虫感染の疑わ れる動物から得られると よい。好適な動物にはここで開示されたものがあるが、イヌ及びネコがより好ま しい。 以下の実施例は実例を挙げることを目的として提供されるものであり、本発明 の範囲を限定すべく意図されてはいない。 実施例実施例１． 本実施例では、ヒトＦｃ_εレセプタのα鎖の切断部分を発現する組換えバキュ ロウィルスの構築を説明する。 バキュロウィルス多面体転写制御配列に有効に連結させた、Ｆｃ_εＲα鎖の細 胞外ドメインをコードする核酸分子を含む組換え分子ｐＶＬ−ｎｈＦｃ_εＲα_{61 2} を以下の方法で作成した。ヒトＦｃ_εレセプタの全長アルファ鎖（α鎖）をコ ードするｃＤＮＡクローンをJean-Pierre Kinet博士（マサチューセッツ州ケン ブリッジ、ハーバード大学）から得た。このｃＤＮＡクローンは、ここでｎｈＦ ｃ_εＲα₁₁₉₈と呼ばれる約１１９８個のヌクレオチドのインサートを含んでいた 。ｎｈＦｃ_εＲα₁₁₉₈のコドン鎖の核酸配列をここでは配列同定番号第１番で示 す。配列同定番号第１番を翻訳すると、核酸分子ｎｈＦｃ_εＲα₁₁₉₈は、開始コ ドンが配列同定番号第１番のヌクレオチド１０７番からヌクレオチド１０９番に あり、終了コドンが配列同定番号第１番のヌクレオチド８７８番からヌクレオチ ド８８０番にある開放読み取り枠を想定すると、配列同定番号第２番のアミノ酸 配列を有する、ここではＰｈＦｃ_εＲα₂₅₇と呼ばれる、約２５７個のアミノ酸 から成る全長ヒトＦｃ_εレセプタα鎖たんぱく質をコードしていることが分かる 。配列同定番号第１番の相補体はここでは配列同定番号第３番で表される。ここ でＰｈＦｃ_εＲα₂₃₂と示される提案される成熟たんぱく質（即ちシグナル配列 が切り取られたＦｃ_εＲα鎖）は、ここで配列同定番号第６番で表される約２３ ２個のアミノ酸を含んでいる。ＰｈＦｃ_εＲα₂₃₂をコードする核酸分子はここ ではｎｈＦｃ_εＲα₆₉₉と示され、そのコドン鎖は配列同定番号第７番で表され る。 Ｆｃ_εＲα鎖の細胞外ドメインの分泌型を作成するために、ｎｈＦｃ_εＲα_{11 98} によりコードされる疎水性膜貫通ドメイン及びＦｃ_εＲα鎖の細胞質側の尾を 以 下のように取り除いた。約６１２個のヌクレオチドから成る、Ｆｃ_εＲα鎖細胞 外ドメイン核酸分子含有フラグメントを、ｎｈＦｃ_εＲα₁₁₉₈から、核酸配列５ ‘ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＴＡＴＡＡＡＴＡＴＧＧＣＴＣＣＴＧＣＣＡＴＧＧ３’（ 配列同定番号第８番と示す）を有する、BamHI部位を含む前方プライマＥＪＨ０ ４０と、核酸配列５‘ＧＧＣＧＡＡＴＴＣＴＴＡＡＧＣＴＴＴＴＡＴＴＡＣＡＧ ３’（ここでは配列同定番号第９番と示す）を有する、EcoRI部位を含む後方プ ライマＩｇＥアンチセンスとを用いてＰＣＲ増幅した。その結果のＰＣＲ産物を BamHI及びEcoRIで切断してｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂を作成した。核酸分子ｎｈＦｃ_ε Ｒα₆₁₂は、ヒトＦｃ_εＲα鎖の細胞外ドメインをコードする、配列同定番号第 １番のヌクレオチド１０７番からヌクレオチド６９７番までに延びる約５９１個 のヌクレオチド断片を含んでいたが、この断片はここでは核酸分子ｎｈＦｃ_εＲ α₅₉₁と示され、そのコドン鎖は配列同定番号第１０番の核酸配列を有するもの である。配列同定番号第１０番を翻訳すると、核酸分子ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂は、 配列同定番号第１１番のアミノ酸配列を有する、ここではＰｈＦｃ_εＲα₁₉₇と 呼ばれる、約１９７個のアミノ酸から成るＦｃ_εＲたんぱく質をコードしている ことが分かる。核酸分子ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂は、配列同定番号第１３番のアミノ 酸配列を有する、ここではＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂と示される、リーダー配列を持た ない分泌可能型のヒトＦｃ_εＲα鎖をコードしている。ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂のた めのコドン領域はｎｈＦｃ_εＲα₅₁₆と示され、そのコドン鎖は配列同定番号第 １２番で示される核酸配列を有する。配列同定番号第１２番の相補体はここでは 配列同定番号第１４番で表される。 ＰｈＦｃ_εＲα₁₉₇の産生を命令できるバキュロウィルス組換え分子を作成す るために、核酸分子ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂をｐＶＬ１３９２バキュロウィルスシャ トルプラスミド（カリフォルニア州サンディエゴ、ファーミンジェン社から入手 可能）の非反復BamHI及びEcoRI部位にサブクローンして、ここでｐＶＬ−ｎｈＦ ｃ_ε Ｒα₆₁₂と呼ばれる組換え分子を作成した。その結果得られた組換え分子ｐＶＬ −ｎｈＦｃ_εＲα_{612 は}制限マッピングにより、インサートの方向が正しいかを 確認された。実施例２． 本実施例ではＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂たんぱく質の作成を説明する。 組換え分子ｐＶＬ−ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂を直線バキュロゴールドバキュロウィ ルスＤＮＡ（ファーミンジェン社から入手可能）に同時トランスフェクトさせ、 以下の方法を用いてTrichoplusia ni細胞（カリフォルニア州サンディエゴ、イ ンビトロジェン社から入手可能：High Five^TM細胞）に入れた。約１．５リット ルの無血清ex-Cell Medium（インビトロジェン社から入手可能）の培養液に媒質 １ｍｌ当り約１×１０⁶の細胞を接種した。Trichoplusia ni細胞に、組換え分子 ｐＶＬ−ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂を、１細胞当り約２から約５粒子形成単位（ｐｆｕ ）の感染多重度（ＭＯＩ）になるように感染させて組換え細胞Trichoplusia ni −ｐＶＬ−ｎｈＦｃ_εＲα₆₁₂を作成した。この感染を制御された温度２７℃で ４８時間進行させて組換えたんぱく質ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂を生成した。感染後、 遠心分離により細胞を媒質から分離し、媒質を−７０℃で凍結させた。 直前に説明した培養媒質から、セファロース４Ｂに結合させた骨髄腫細胞株Ｕ ２６６ＤＩ（アメリカン・ティシュー・タイプ・カタログＴＩＢ１９６番）の産 生したＩｇＥ抗体を用いたアフィニティー・クロマトグラフィーにより、ＰｈＦ ｃ_εＲα₁₇₂を精製した。このアフィニティーで精製されたＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂の アミノ酸組成及びＮ末端アミノ酸配列を当業において標準的な方法を用いて調べ た。その結果から、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂はTrichoplusia ni細胞により正しく加工 されていることが判明した。実施例３． 本実施例では、組換えヒトＦｃ_εＲアルファ鎖たんぱく質のビオチニル化を説 明する。 実施例２で上述したように調製され、アフィニティ精製された組換えたんぱく 質ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂を以下のようにビオチニル化した。約４４０マイクログラ ム(μｇ)のＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂を、約２００マイクロリットル（μｌ）の０．１ ＭのＮａＩＯ₄を含有する約１．５ミリリットル（ｍｌ）の酢酸緩衝液（０．１ ＭのＮａＡｃ、ｐＨ５．５）中に希釈した。この混合液を約２０分間、氷上でイ ンキュベートし、約２μｌのグリセロールをインキュベート後に加えた。次にこ の混合液を、 ３ｍｌのSlide-A-Lyzerカセット（イリノイ州ロックフォード、ピアス社から入 手可能）に入れた約２リットルの酢酸緩衝液で２回、それぞれ約２時間の間、透 析した。約３．７２μｇのビオチン-LC-ヒドラジド（ピアス社から入手可能）を 約２００μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させ、このカセットに 注入した。次にこのカセットを室温で約２時間震盪させた。インキュベート後、 組換えたんぱく質及びビオチンを含むこの混合液を３回、初回は約１８時間、次 の二回は約２時間、それぞれ５℃で、リン酸緩衝生理食塩水で透析した。ビオチ ニル化したこのたんぱく質を透析液から回収したが、これをここではＰｈＦｃ_ε Ｒα₁₇₂-BIOTと呼ぶこととする。実施例４． 本実施例では、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いた固相ＥＬＩＳＡでのイヌＩｇ Ｅの検出を説明する。 二枚のイムロンIIマイクロタイタ・プレート（ヴァージニア州アレクサンドリ ア、ダイナテック社から入手可能）のウェルに、図１に示すような約１００μｌ ／ウェルの様々な濃度の精製されたイヌＩｇＥの二部にした試料で被膜を施した 。このイヌＩｇＥは、例えばヘテロハイブリドーマ２．３９（Gebhard et al.,I mmunology 85:429-434,1995に説かれている）などのイヌＩｇＥ産生ハイブリド ーマから得て、ＣＢＣ緩衝液（１５ｍＭのＮａ₂ＣＯ₃及び３４．８ｍＭのＮａＨ ＣＯ₃、ｐＨ９．６）中に希釈した。被膜されたプレートを４℃で一晩インキュ ベートした。インキュベート後、このイヌＩｇＥ含有溶液を各プレートから取り 出し、プレートをブロットして乾燥させた。次にこれらプレートを、０．２５％ のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳＢ）溶液約２ ００μｌ／ウェルを用いて遮断した。その後これらのプレートを自動洗浄器（ダ イナテック社から入手可能）を用いて０．０５％のトウィーン−２０ＰＢＳ溶液 （ＰＢＳＴ）で４回、洗浄した。０．０５％のトウィーン−２０の加わったＰＢ ＳＢ（ＰＢＳＢＴ）中４０μｇ／ｍｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT（約１４５μｇ ／ｍｌ：実施例３で説明したもの）の１：４０００希釈液が約１００μｌ／ウェ ルになるようにした実験試料を、イヌＩｇＥで被膜した一方のプレートの各ウェ ルに加えた。約１００μｌのビオチニル 化抗イヌＩｇＥモノクローナル抗体Ｄ９（ウィスコンシン州マディソン、ウィス コンシン大学のDeBoer博士から進呈いただいた）から成る対照試料は、イヌＩｇ Ｅで被膜した他方のプレートの各ウェルに加えられた。これらのプレートを１時 間、室温でインキュベートした後、ＰＢＳＴで４回、洗浄した。西洋ワサビペル オキシダーゼに結合させた約１００μｌの約０．２５μｇ／ｍｌのストレプトア ビジン（メリーランド州ガイザーズバーグ、カークガード・アンド・ペリー・ラ ボラトリーズ（ＫＰＬ）社から入手可能；ＰＢＳＴで希釈）を、実験又は対照試 料を容れた各ウェルに加えた。次にこれらのプレートを１時間、室温でインキュ ベートし、ＰＢＳＴで４回、洗浄した。予め室温まで暖められた約１００μｌの ＴＭＢ基質（ＫＰＬ社から入手可能）を加えた。さらにこれらプレートを１０分 間、室温でインキュベートした後、約１００μｌ／ウェルの停止液（ＫＰＬ社か ら入手可能）を加えた。停止液を加えてから１０分以内に４５０ｎｍでのウェル の光学密度をSpectramax Microtiter Plate（モラキュラー・デバイセズ社から 入手可能）で読んだ。 図１に示されたその結果から、固相検定法では、ヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖は 、イヌＩｇＥ（Ｄ９：開環）に特異的に結合する対照抗体と同様な態様でイヌＩ ｇＥ（閉環）の存在を検出するものであることが分かる。実施例５． 本実施例では、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いた植物アレルゲン特異イヌＩｇ Ｅの検出を説明する。 イムロンIIマイクロタイタ・プレート（ダイナテック社から入手可能）の複数 のウェルに、双方ともＣＢＣ緩衝液中に希釈した、１μｇ／ｍｌのナガハグサア レルゲンを約１００μｌ／ウェルになるように、又は、１μｇ／ｍｌのグリーン アッシュ（原語：Green Ash）アレルゲンを約１００μｌ／ウェルになるように して（両方ともニューカロライナ州ルノアール、グリアー社から入手可能）、い ずれかで被膜を施した。このプレートを４℃で一晩インキュベートした。このプ レートを、実施例４で説明したように遮断し、洗浄した。次に、二つの別々のプ ールのイヌ血清をこの抗原で被膜されたウェルに加えた。最初のプールは、アレ ルゲン反応性であ ると報告された８匹のイヌから分離された血清から成っていた。二番目のプール は、アレルゲン非反応性であると報告された８匹のイヌから分離された血清から 成っていた。各プールの血清を１：１０又は１：１００にＰＢＳＴで希釈した。 約１００μｌの各濃度の各希釈血清試料をウェルに加え、１時間、室温でインキ ュベートした。次にこのプレートを４回、ＰＢＳＴで洗浄した。ＰＢＳＢＴ中に 含まれた、４０μｇ／ｍｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT（実施例３で説明したもの ）の１：４０００希釈液を約１００μＬｌ／ウェルになるように、抗原で被膜し たウェルに加えた。このプレートを１時間、室温でインキュベートした。次にこ のプレートを４回、ＰＢＳＴで洗浄した。ＰＢＳＴ中に含まれた西洋ワサビペル オキシダーゼ（ピアス社から入手可能）に結合させた約０．２５μｇ／ｍｌのニ ュートラビジンを約１００μｌ／ウェルになるように加えた。このプレートを１ 時間、室温でインキュベートした。次にこのプレートを洗浄し、プレートに結合 したニュートラビジンの存在を実施例４で説明した方法を用いて検出した。 図２に示された結果から、ヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖は、一般の雑草アレルゲ ン又は一般の高木アレルゲンに特異的に結合するイヌＩｇＥ抗体の存在を検出す るものであることが分かる。加えて、イヌＩｇＥ抗体の検出は線量依存的である 。実施例６． 本実施例では、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いた総イヌＩｇＥの検出を説明す る。 イムロンIIマイクロタイタ・プレート（ダイナテック社から入手可能）の複数 のウェルに、ＣＢＣ緩衝液中に希釈した約１００μｌ／ウェルの１μｇ／ｍｌの ＣＭＩ抗イヌＩｇＥ抗体＃６（カリフォルニア州ウェストサクラメント、カスタ ム・モノクローナルズ・インターナショナル社から入手可能）で被膜を施した。 このプレートを４℃で一晩インキュベートした。このプレートを、実施例４で説 明したように遮断し、洗浄した。次に、多様な源から採取した血清試料の１：６ ０のＰＢＳＢＴ希釈液を約１００μｌ／ウェル、抗ＩｇＥ抗体で被膜された複数 のウェルに加えた。試料には、（１）蚤唾液に対してアレルギーを持つことが判 明しているイヌの血清、（２）D.immitisに感染しているイヌの血清、（３）及 び（４）イヌアレル ギー校正物質として規定されたイヌ血清のプール（アリゾナ州タンパ、バイオプ ロダクツＤＶＭ社から入手可能）、（５）ナガハグサアレルゲンへの結合の低い 抗体を含んだイヌ血清のプール、（６）ナガハグサアレルゲンへの結合の高いイ ヌ血清のプール、（７）蚤唾液に対してアレルギーを持つことの判明しているイ ヌから得たイヌ血清のプール、この試料は加熱により不活化されている(５６℃ で４時間)、（８）蚤唾液に対してアレルギーを持つことの判明しているイヌか ら得たイヌ血清のプール、又は（９）バリア施設で育てられたイヌから得たイヌ 血清のプール（即ち陰性対照）、が含まれていた。さらに、実施例４で説明した イヌヘテロハイブリドーマを由来とするＩｇＥから成る一組の陽性対照試料をプ レートに加えることで、標準曲線を作成した。このプレートを１時間、室温でイ ンキュベートした後、ＰＢＳＴで４回、洗浄した。イヌＩｇＥの存在を、双方と もにＰＢＳＢＴ中に含有させた、４０μｇ／ｍｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT（実 施例３で説明したもの）による約１００μｌ／ウェルの１：４０００希釈液か、 又は、約１μｇ／ｍｌのＣＭＩ抗イヌＩｇＥ抗体＃１９（カスタム・モノクロー ナルズ・インターナショナル社から入手可能）の約１００μ／ウェル、のいずれ かを用いて検出した。プレートを１時間、室温でインキュベートした。次にこの プレートを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させた約０．２５μｇ／ ｍｌのストレプトアビジンに接触させ、再び洗浄し、プレートに結合したストレ プトアビジンの存在を実施例４で説明した方法を用いて検出した。対照試料につ いて得られた光学密度の読み取り値を用いて標準曲線を作成し、この曲線を用い てテスト試料を容れたウェルに結合した総ＩｇＥを判定した。 図３に示されたその結果から、多様なイヌ血清から得られたイヌＩｇＥが、イ ヌＩｇＥに特異的に結合する抗体を用いるのと同様な態様でヒトＦｃ_εＲのアル ファ鎖を用いて検出されることが分かる。加熱処理された試料（試料７）中に検 出可能な量のＩｇＥが存在しないことは、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTにより検出さ れる抗体がＩｇＥであることを示すものである。加えて、この結果から、ＰｈＦ ｃ_εＲα₁₇₂-BIOTはアレルゲンナガハグサ、試料５及び６）や、寄生生物抗原（ D.immitis、試料２）に結合するＩｇＥを検出するための有効な試薬であること が分かる。実施例７． 本実施例では、蚤唾液に対してアレルギーを持つことの判明しているイヌから 分離されたイヌ血清中のイヌＩｇＥを、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いて検出す ることを説明する。 イムロンIIマイクロタイタ・プレートの複数のウェルに、ＣＢＣ緩衝液中に希 釈した約１００μｌ／ウェルの様々な濃度の蚤唾液組換えたんぱく質ｆｓｐＮ（ 上述したＰＣＴ特許公報ＷＯ９６／１１２７１号に説かれたもの、濃度を図４に 示す）で被膜を施した。このプレートを４℃で一晩インキュベートした。このプ レートを、実施例４で説明したように遮断し、洗浄した。蚤唾液に特異的に結合 するＩｇＥを産生することが判明している、イヌから分離された血清のプールの 、ＰＢＳＢＴ中１：１０の希釈液が約１μｌ／ウェル。いくつかのウェルには、 バックグラウンドの結合レベルが判定できるようにイヌ血清を容れなかった。こ のプレートを１時間、室温でインキュベートした後、ＰＢＳＴで４回、洗浄した 。ＰＢＳＢＴ中に含有させた、４０μｇ／ｍｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT（実施 例３で説明したもの）による１：４０００希釈液を約１００μｌ／ウェルになる ように加えた。プレートを１時間、室温でインキュベートした。次にこのプレー トを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させた約０．２５μｇ／ｍｌの ストレプトアビジンに接触させ、再び洗浄し、プレートに結合したストレプトア ビジンの存在を実施例４で説明した方法を用いて検出した。 図４に示されたその結果から、蚤唾液抗原に特異的に結合するイヌＩｇＥが、 ヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を用いて検出されることが分かる。実施例８． 本実施例では、蚤唾液に対してアレルギーを持つことが判明しているイヌ、イ ヌ糸状虫に感染したイヌ、及び特定病原体除去（ＳＰＦ）イヌ、から分離したイ ヌ血清中の総イヌＩｇＥをＰｈＦｃ_εＲα−ＢＩＯＴを用いて検出することを説 明する。 イムロンIIマイクロタイタ・プレートの複数のウェルに、ＣＢＣ緩衝液中、約 １μｇ／ｍｌのＣＭＩ抗イヌＩｇＥ抗体＃６（カスタム・モノクローナルズ・イ ンターナショナル社から入手可能）で約１００μｌ／ウェルになるように被膜を 施した。 このプレートを４℃で一晩インキュベートした。このプレートを、実施例４で説 明したように遮断し、洗浄した。ＰＢＳＢＴ中にＩｇＥを含有した流体の別々の 試料を、約１００μｌ／ウェルになるように、抗イヌＩｇＥ抗体で被膜された複 数のウェルに加えた。試料には、（１）実施例４で説明したヘテロハイブリドー マから精製された１００μｇ／ｍｌのイヌＩｇＥ、（２）蚤唾液に対してアレル ギーを持つことが判明しているイヌから採取された血清のプールの１：１０希釈 液、（３）（２）と同じ血清プールだが加熱して不活化させた１：１０の希釈液 、（４）臨床上蚤アレルギー性皮膚炎のあることが判明しているイヌから採取さ れた血清の１：１０希釈液（イヌＣＰＯ２）、（５）加熱して不活化させたＣＰ Ｏ２血清の１：１０希釈液、（６）イヌ糸状虫に感染したイヌから採取した血清 の１：１０希釈液（イヌ４１７）、（７）加熱して不活化させた４１７血清の１ ：１０希釈液、（８）イヌ糸状虫に感染したイヌから採取した血清のプールの１ ：１０希釈液、（９）（８）と同じ血清プールであるが加熱して不活化させた１ ：１０希釈液、及び（１０）バリア施設で育てられたイヌから採取された血清の プール、が含まれていた。各試料はＰＢＳＢＴで希釈された。このプレートを１ 時間、室温でインキュベートした後、ＰＢＳＴで４回、洗浄した。ＰＢＳＢＴ中 ４０μｇ／ｍｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT（実施例３で説明したもの）による１ ：４０００希釈液を約１００μｌ／ウェルになるように加えた。プレートを１時 間、室温でインキュベートした。次にこのプレートを洗浄し、西洋ワサビペルオ キシダーゼに結合させた約０．２５μｇ／ｍｌのストレプトアビジンに接触させ 、再び洗浄し、プレートに結合したストレプトアビジンの存在を実施例４で説明 した方法を用いて検出した。 図５に示されたその結果から、蚤唾液に対してアレルギーのイヌから得たイヌ ＩｇＥと、イヌ糸状虫に感染したイヌから得たイヌＩｇＥはヒトＦｃ_εＲのアル ファ鎖を用いて検出されることが分かる。加えて、加熱により不活化された血清 試料中に比色シグナルがないことから、抗ＩｇＥ抗体に結合すると共に、Ｆｃ_ε Ｒアルファ鎖により検出される抗体はイプシロンイソタイプ抗体であり、その他 のイソタイプではないことが分かる。実施例９． 本実施例では、蚤唾液に特異的に結合するＩｇＥをＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを 用いて検出することを説明する。 イムロンIIマイクロタイタ・プレートの複数のウェルに、ＣＢＣ緩衝液中、上 述のＰＣＴ特許公報ＷＯ９６／１１２７１号に説かれた方法を用いて採集された 蚤唾液約０．１μｇ／ｍｌを約１００μｌ／ウェルになるように被膜を施した。 このプレートをインキュベートし、実施例４で説明したように遮断し、洗浄した 。次に実施例８で説明したＩｇＥ含有試料をこの蚤唾液で被膜したプレートに施 した。その後このプレートを実施例８で説明した方法を用いて処理した。 図６に示されたその結果から、血清中に含まれた、蚤唾液に特異的に結合する イヌＩｇＥはヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を用いて検出されることが分かる。加え て、加熱により不活化された血清試料中に比色シグナルがないことから、蚤唾液 たんぱくに結合すると共に、Ｆｃ_εＲアルファ鎖により検出される抗体はイプシ ロンイソタイプ抗体であることが分かる。実施例１０． 本実施例ではネコＩｇＥをＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いて検出することを説 明する。 イムロンIIマイクロタイタ・プレートの複数のウェルに、双方ともにＣＢＣ緩 衝液中に含有させた、約１０μｇ／ｍｌのＤｉ３３たんぱく（上述した米国特許 出願０８／７１５，６２８号に説明されている）か、又は１０μｇ／ｍｌのイヌ 糸状虫の粗ホモジネートで、約１００μｌ／ウェルになるように被膜を施した。 イヌ糸状虫の粗ホモジネートとは、ＰＢＳ虫に均質化した成虫イヌ糸状虫の清澄 させた上清である。このプレートを４℃で一晩インキュベートした。このプレー トを、実施例４で説明したように遮断し、洗浄した。次に、２匹のイヌ糸状虫に 感染したネコから採った血清試料を、Ｄｉ３３で被膜されたウェルと、イヌ糸状 虫抗原で被膜されたウェルとに加えた。イヌ糸状虫に感染したネコ＃ＡＸＨ３又 はネコ＃ＭＧＣ２の血清のＰＢＳＢＴによる１：１０希釈液を約１００μｌ／ウ ェルになるようにプレートに加えた。ネコ＃ＡＸＨ３及びネコ＃ＭＧＣ２の感染 前採血の血清から成る陰性対照試料も、ＰＢＳＢＴ中１：１０の希釈度でプレー トに加えた。イヌ糸状虫に 感染したイヌから得た血清のプールから成る陽性対照試料も、ＰＢＳＢＴ中１： １０の希釈度でプレートに加えた。プレートを１時間、室温でインキュベートし た後、ＰＢＳＴで４回、洗浄した。４０μｇ／ｍｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT（ 実施例３で説明したもの）をＰＢＳＢＴで１：４０００に希釈して約１００μｌ ／ウェルになるように加えた。プレートを１時間、室温でインキュベートした。 その後このプレートを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させた約０． ５ｍｇ／ｍｌのストレプトアビジンの１：４０００希釈液に接触させ、再び洗浄 し、プレートに結合したストレプトアビジンの存在を実施例４で説明した方法を 用いて検出した。 図７に示された結果から、イヌ糸状虫の粗ホモジネート又はＤｉ３３たんぱく に特異的に結合するネコＩｇＥはヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を用いて検出される ことが分かる。実施例１１． 本実施例では、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いたネコＩｇＥの検出を説明する 。 イムロンIIマイクロタイタ・プレートの複数のウェルに、実施例１０で説明し たようなＤｉ３３のＣＢＣ緩衝液溶液で被膜を施した。このプレートを４℃で一 晩インキュベートした。このプレートを、実施例４で説明したように遮断し、洗 浄した。次に、２匹のイヌ糸状虫に感染したネコから採った血清試料を、Ｄｉ３ ３で被膜されたウェルに加えた。イヌ糸状虫に感染したネコ＃ＭＧＣ２の血清及 びイヌ糸状虫に感染したネコの血清のプール、並びにこれらの血清をそれぞれ加 熱して不活化した試料、のＰＢＳＢＴによる１：１０希釈液を約１００μｌ／ウ ェルになるようにプレートに加えた。イヌ糸状虫に感染したイヌから得た血清の プールから成る陽性対照試料も、ＰＢＳＢＴ中１：１０の希釈度でプレートに加 えた。プレートを１時間、室温でインキュベートした後、ＰＢＳＴで４回、洗浄 した。４０μｇ／ｍｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT(実施例３で説明したもの）を ＰＢＳＢＴで１：４０００に希釈して約１００μｌ／ウェルになるように加えた 。プレートを１時間、室温でインキュベートした。その後このプレートを洗浄し 、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させたストレプトアビジンに接触させ、再 び洗浄し、プレートに結合し たストレプトアビジンの存在を実施例４で説明した方法を用いて検出した。 図８に示された結果から、イヌ糸状虫抗原Ｄｉ３３に特異的に結合する、イヌ 糸状虫感染ネコのネコＩｇＥが、ヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を用いて検出される ことが分かる。加えて、加熱により不活化させた血清試料中に比色シグナルが存 在しないことから、Ｄｉ３３たんぱく質に結合すると共にＦｃ_εＲアルファ鎖に より検出される抗体はイプシロンイソタイプ抗体であることが分かる。実施例１２． 本実施例では、ＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いた固相ＥＬＩＳＡにおけるウマ ＩｇＥの検出を説明する。 特定のアレルゲンに対してアレルギーを持つことが判明しているウマから採っ たウマ血清と、同じアレルゲンに対してアレルギーを持たないことが判明してい るウマから採ったウマ血清とを、以下のようにＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOTを用いて ＩｇＥの存在について検定した。Canitec^TMアレルゲン特異ＩｇＥキット（バイ オプロダクツＤＶＭ社から入手可能）のNorth Atlantic/Ohio Valley Regional Panelプレートを、実施例４で説明したように遮断し、洗浄した。この二つのウ マ血清の約１：１０希釈液の二つの試料をＰＢＳＢＴを用いて調製した。この二 つの試料を先の遮断されたプレートに加え、プレートを１時間、室温でインキュ ベートした。このプレートを実施例４で説明したように洗浄した。４０μｇ／ｍ ｌのＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂-BIOT（実施例３で説明したもの）をＰＢＳＢＴ中で１： ４０００にした希釈液を約１００μｌ／ウェルになるように各ウェルに加えた。 その後にプレートを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させた約０．５ ｍｇ／ｍｌのストレプトアビジン溶液に接触させ、再び洗浄し、プレートに結合 したストレプトアビジンの存在を実施例４で説明した方法を用いて検出した。 実施例９に示された結果から、特定のアレルゲンに対してアレルギーを持つこ との判明しているウマから採ったウマＩｇＥは特定の植物に特異的に結合し、ダ ニアレルゲンがヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を用いて検出されることが分かる。実施例１３． 本実施例では、ヒトＦｃ_εＲアルファ鎖をトランスフェクトさせた好塩基球を 用いた固相ＥＬＩＳＡにおけるイヌＩｇＥの検出を説明する。 ヒトＦｃ_εＲアルファ鎖をコードする核酸分子でトランスフェクトしたラット 好塩基球性白血病（ＲＢＬ）細胞（ここではＲＢＬ−ｎＦｃ_εＲ細胞と呼ぶこと とする；Miller et al.,Science 244:334-337,1989に説かれている）を用いてイ ヌＩｇＥを以下のように検出した。１０％の仔ウシ血清を含有するアールの改良 イーグル培地（ＥＭＥＭ−ＦＢＳ）に含有させた約４×１０⁴のＲＢＬ−ｈＦｃ_ε Ｒ細胞を９６ウェルの底の平らな組織培養ブレートの各ウェルに加えた。この ＲＢＬ−ｈＦｃ_εＲ細胞を一晩かけて３７℃でインキュベートした。インキュベ ート後、このプレートをＰＢＳＴで４回、洗浄した。次に細胞を約２分、１ウェ ル当り約２００μｌの無水アルコールを用いて室温で固定した。その後プレート をＰＢＳＴで８回洗浄して残ったアルコールを取り除いた。 ＥＭＥＭ−ＦＢＳによる系列希釈液（濃度は図１０に示す）をイヌ糸状虫に感 染したイヌから採った血清のプールを用いて調製した。ＥＭＥＭ−ＦＢＳによる 系列希釈液（濃度は図１１に示す）を、蚤唾液に感作したイヌから採った血清の プールを用いて調製した。両方の血清プールを約４時間５６℃で加熱して不活化 した別の試料も調製した。加熱処置した試料は上述のように希釈された。 各血清試料の各希釈液を約１００μｌ、固定されたＲＢＬ−ｈＦｃ_εＲ細胞を 含んだ別々のウェルに加え、このプレートを３７℃で約１時間インキュベートし た。インキュベート後、プレートをＰＢＳＴで４回洗浄した。１００μｌのＥＭ ＥＭ−ＦＢＳ中、約５μｇのマウスＩｇＧモノクローナル抗体抗イヌＩｇＥ抗体 （即ちカスタム・モノクローナル抗体＃７１；カスタム・モノクローナル・イン ターナショナル社から入手可能）を各ウェルに加えた。プレートを約３０分間、 ３７℃でインキュベートした。インキュベート後、プレートをＰＢＳＴで４回、 洗浄した。１００μｌのＥＭＥＭ−ＦＢＳに入れた、西洋ワサビペルオキシダー ゼで標識したロバ抗マウスＩｇＧ（ペンシルバニア州ウェストグローブ、ジャク ソン・ラボラトリーズ社から入手可能）を約１００ｎｇ、各ウェルに加え、プレ ートを約３０分間、室温でインキュベートした。インキュベート後、プレートを ＰＢＳＴで４回、洗浄した。ＲＢＬ−ｈＦｃ_εＲ細胞がイヌＩｇＥに結合可能で あることを示す、プレート に結合した抗マウスＩｇＧの存在を、実施例４で説明した方法を用いて検出した 。 図１０に示されたその結果から、イヌ糸状虫に感染したイヌのイヌＩｇＥ（◆ ）が、ヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を発現するＲＢＬ−ｈＦｃ_εＲ細胞を用いて検 出されることが分かる。さらに、このような加熱により不活化された血清試料（ ■）に比色シグナルがないことから見ても、ＲＢＬ−ｈＦｃ_εＲ細胞上のＦｃ_ε Ｒアルファ鎖により検出される抗体がイプシロンイソタイプ抗体であることが分 かる。同様に、図１１に示された結果から、蚤唾液に感作したイヌのイヌＩｇＥ （◆）はヒトＦｃ_εＲのアルファ鎖を発現するＲＢＬ−ｈＦｃ_ε細胞を用いて検 出されることが分かる。さらに、このような加熱により不活化された血清試料（ ■）において比色シグナルがないことから、ＲＢＬ−ｈＦｃ_εＲ細胞上のＦｃ_ε Ｒアルファ鎖により検出される抗体がイプシロンイソタイプ抗体であることが分 かる。 配列表 本発明の様々な実施例を詳細に述べてきたが、当業者であればこれらの実施例 に対する改良及び適応を想到されようことは明白である。しかしながら、このよ うな改良及び適応は、以下の請求の範囲に記載された本発明の範囲内にあること を理解されたく、ここに明示しておく。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ // Ｃ１２Ｎ 5/10 5/00 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ラッシュロー キース イー. アメリカ合衆国 80525 コロラド州 フ ォートコリンズ、ドッグウッドコート 1600 (72)発明者 ワッソム ドナルド エル. アメリカ合衆国 80525 コロラド州 フ ォートコリンズ、イーグルレイクドライブ 4615

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． （ａ）分離されたヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子を、推定上のＩｇ Ｅ含有組成物に、Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体が形成されるのに適した条件下で 接触させるステップであって、前記ＩｇＥがイヌＩｇＥ、ネコＩｇＥ及びウマＩ ｇＥのうちのいずれかから選択されるものである、ステップと、 （ｂ）前記Ｆｃ_εＲ分子ＩｇＥ複合体の存在を検出することによりＩｇＥ の存在を判定するステップであって、前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の存在は ＩｇＥの存在の指標となるものである、ステップと を含む、ＩｇＥを検出する方法。 ２． （ａ）組換え細胞を、推定上のＩｇＥ含有組成物に、組換え細胞：ＩｇＥ 複合体が形成されるのに適した条件下で接触させるステップであって、前記組換 え細胞が、ヒトＦｃ_εＲ分子を発現する組換え細胞、及び、イヌＩｇＥ、ネコＩ ｇＥ及びウマＩｇＥのうちのいずれかから選択されるＩｇＥに選択的に結合する 抗体を発現する組換え細胞、のうちのいずれかから選択される、ステップと、 （ｂ）前記組換え細胞：ＩｇＥ複合体を検出することによりＩｇＥの存在を 判定するステップであって、前記組換え細胞：ＩｇＥ複合体の存在はＩｇＥの存 在の指標となるものである、ステップと を含む、ＩｇＥを検出する方法。 ３． ヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子と、イヌＩｇＥ、ネコＩｇＥ及びウ マＩｇＥのうちのいずれかから選択されるＩｇＥを検出する手段とを含む、Ｉｇ Ｅを検出するためのキット。 ４． 合衆国のすべての地域に共通のアレルゲンと、ヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_ε Ｒ）分子とを含む一般的アレルゲンキット。 ５． （ａ）蚤アレルゲンを基質上に固定するステップと、 （ｂ）前記蚤アレルゲンを、推定上のＩｇＥ含有組成物に、前記基質に結合 したアレルゲン：ＩｇＥ複合体が形成されるのに適した条件下で接触させるステ ップと、 （ｃ）アレルゲン：ＩｇＥ複合体が前記基質に結合したまま維持されるよう な条件下で前記基質から非結合物質を取り除くステップと、 （ｄ）前記アレルゲン：ＩｇＥ複合体をＦｃ_εＲ分子に接触させることによ り、前記アレルゲン：ＩｇＥ複合体の存在を判定するステップと を含む、蚤アレルギー性皮膚炎を検出する方法。 ６． ヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）分子及び蚤アレルゲンを含む、蚤アレル ギー性皮膚炎を検出するキット ７． Ｆｃ_εＲアルファ鎖たんぱく質の炭化水素基がビオチンに結合されている 、分離されたヒトＦｃ_εレセプタ（Ｆｃ_εＲ）アルファ鎖たんぱく質。 ８． 前記Ｆｃ_εＲ分子が、ＩｇＥに結合するＦｃ_εＲアルファ鎖の少なくとも 一部分を含む、請求項１、２、３、４、５、６又は７のいずれかに記載の本発明 。 ９． 前記Ｆｃ_εＲ分子が、ＰｈＦｃ_εＲα₂₅₇、ＰｈＦｃ_εＲα₁₉₇、ＰｈＦｃ_ε Ｒα₂₃₂及びＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂のうちのいずれかから選択されるたんぱく質を 含む、請求項１、３、４、５、６又は７のいずれかに記載の本発明。 １０． 前記Ｆｃ_εＲ分子が、ｎｈＦｃ_εＲα₇₇₄、ｎｈＦｃ_εＲα₁₁₉₈、ｎｈ Ｆｃ_εＲα₆₁₂、ｎｈＦｃ_εＲα₅₉₁、ｎｈＦｃ_εＲα₆₉₉及びｎｈＦｃ_εＲα₅₁₆ のうちのいずれかから選択される核酸分子によりコードされる、請求項１、３、 ４、５、６又は７のいずれかに記載の本発明。 １１． 前記Ｆｃ_εＲ分子が、配列同定番号第１番、配列同定番号第４番、配列 同定番号第７番、配列同定番号第１０番及び配列同定番号第１２番のうちのいず れか から選択される核酸配列を含む核酸分子、及び、前記核酸配列のうちのいずれか を含む核酸分子の対立遺伝子変異体を含む核酸分子、のうちのいずれかから選択 される核酸分子によりコードされる、請求項１、３、４、５、６又は７のいずれ かに記載の本発明。 １２． 前記Ｆｃ_εＲ分子が検出可能マーカーに結合される、請求項１、３、４ 、５又は６のいずれかに記載の本発明。 １３． 前記Ｆｃ_εＲ分子が、放射性標識、蛍光標識、化学発光標識、色素産生 標識及びリガンドのうちのいずれかから選択される検出可能マーカーに結合され る、請求項１、３、４、５又は６のいずれかに記載の本発明。 １４． 前記Ｆｃ_εＲ分子の炭化水素基がビオチンに結合される、請求項１、３ 、４、５又は６のいずれかに記載の本発明。 １５． 前記推定上のＩｇＥ含有組成物が、血液、血清、血漿、尿、涙液、房水 、中枢神経系流液（ＣＮＦ）、唾液、リンパ液、鼻分泌液、乳汁及び糞尿のうち のいずれかから選択される組成物を含む、請求項１、２又は５に記載の方法。 １６． 前記推定上のＩｇＥ含有組成物が血清を含む、請求項１、２又は５に記 載の方法。 １７． 前記推定上のＩｇＥ含有組成物がＩｇＥを産生する細胞を含む、請求項 １、２又は５に記載の方法。 １８． 前記推定上のＩｇＥ含有組成物が、骨髄腫細胞及び好塩基球のうちのい ずれかから選択される細胞を含む、請求項１、２又は５に記載の方法。 １９． （ａ）のステップを行う前に前記Ｆｃ_εＲ分子を基質に結合させてＦｃ_ε Ｒ分子で被膜された基質を形成するステップ、及び、（ａ）のステップを行う前 に前記推定上のＩｇＥ含有組成物を基質に結合させて推定上のＩｇＥ含有組成物 で被膜された基質を形成するステップ、のうちのいずれかから選択されるステッ プをさらに含み、前記基質が、被膜されていない基質、Ｆｃ_εＲ分子で被膜され た基質、抗原で被膜された基質、及び、抗ＩｇＥ抗体で被膜された基質、のうち のいずれかから選択される、請求項１に記載の方法。 ２０． 前記抗原がアレルゲン及び寄生生物抗原のうちのいずれかから選択され る、請求項１９に記載の方法。 ２１． 非結合物質を、前記抗原で被膜された基質又は前記抗体で被膜された基 質から、前記基質に抗原又は抗体が結合されたまま維持されるような条件下で取 り除くステップをさらに含む、請求項１９に記載の方法。 ２２． 前記基質が、樹脂、ガラス、ゲル、セルロイド、紙及び微粒子材料の打 ちのいずれかから選択される材料を含む、請求項５又は１９に記載の方法。 ２３． 前記判定するステップが、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ 、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット検定法、ラテ ラルフロー検定法、凝集反応検定法及び微粒子を基にした検定法のうちのいずれ かから選択される検定を行うステップを含む、請求項１、２又は５に記載の方法 。 ２４． 前記判定するステップが、 （ａ）前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体を、前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合 体に選択的に結合する指示分子に接触させるステップと、 （ｂ）Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体に選択的に結合しない前記指示分子の概 ねすべてを取り除くステップと、 （ｃ）前記指示分子を検出するステップであって、前記指示分子の存在はＩ ｇＥの存在の指標となるものである、ステップと を含む、請求項１に記載の方法。 ２５． 前記指示分子が、Ｆｃ_εＲ分子、抗原、抗体及びレクチンのうちのいず れかから選択される化合物を含む、請求項２４に記載の方法。 ２６． 前記方法が、 （ａ）前記Ｆｃ_εＲ分子を基質上に固定するステップと、 （ｂ）前記Ｆｃ_εＲ分子を、前記推定上のＩｇＥ含有組成物に、前記基質に 結合したＦｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の形成にとって適した条件下で接触させる ステップと、 （ｃ）前記基質にＦｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体が結合したまま維持されるよ うな条件下で前記基質から非結合物質を取り除くステップと、 （ｄ）前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の存在を判定するステップと を含む、請求項１に記載の方法。 ２７． 前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の存在が、前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ 複合体を、抗原、及び、ＩｇＥに選択的に結合する抗体、のうちのいずれかから 選択される化合物に接触させることにより検出される、請求項２６に記載の方法 。 ２８． 前記化合物が検出可能マーカーを含む、請求項２７に記載の方法。 ２９． 前記方法が、 （ａ）所望の抗原を基質上に固定するステップと、 （ｂ）前記抗原を、前記推定上のＩｇＥ含有組成物に、前記基質に結合した 抗原：ＩｇＥ複合体の形成にとって適した条件下で接触させるステップと、 （ｃ）前記基質に抗原：ＩｇＥ複合体が結合したまま維持されるような条件 下で前記基質から非結合物質を取り除くステップと、 （ｄ）前記抗原：ＩｇＥ複合体を前記Ｆｃ_εＲ分子に接触させることにより 、前記抗原：ＩｇＥ複合体の存在を判定するステップと を含む、請求項１に記載の方法。 ３０． 前記方法が、 （ａ）ＩｇＥに選択的に結合する抗体を基質上に固定するステップと、 （ｂ）前記抗体を、前記推定上のＩｇＥ含有組成物に、前記基質に結合した 抗体：ＩｇＥ複合体の形成にとって適した条件下で接触させるステップと、 （ｃ）前記基質に抗体：ＩｇＥ複合体が結合したまま維持されるような条件 下で前記基質から非結合物質を取り除くステップと、 （ｄ）前記抗体：ＩｇＥ複合体を前記Ｆｃ_εＲ分子に接触させることにより 、前記抗体：ＩｇＥ複合体の存在を判定するステップと を含む、請求項１に記載の方法。 ３１． 前記方法が、 （ａ）前記推定上のＩｇＥ含有組成物を基質上に固定するステップと、 （ｂ）前記組成物を、前記Ｆｃ_εＲ分子に、前記基質に結合したＦｃ_εＲ分 子ＩｇＥ複合体の形成にとって適した条件下で接触させるステップと、 （ｃ）前記基質にＦｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体が結合したまま維持されるよ うな条件下で前記基質から非結合物質を取り除くステップと、 （ｄ）前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の存在を判定するステップと を含む、請求項１に記載の方法。 ３２． 前記Ｆｃ_εＲ分子が、フルオレセイン、放射性同位体、ホスファターゼ 、ビオチン、ビオチン関連化合物、アビジン、アビジン関連化合物及びペルオキ シダーゼのうちのいずれかから選択される検出可能マーカーに結合される、請求 項１、３、４、５、６、２９、３０又は３１に記載の本発明。 ３３． 前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ複合体の存在が、前記Ｆｃ_εＲ分子：ＩｇＥ 複合体を、抗体、抗原及びレクチンのうちのいずれかから選択される指示分子に 接触させることにより判定される、請求項３２に記載の方法。 ３４． 前記Ｆｃ_εＲ分子が検出可能マーカーを含む、請求項３２に記載の方法 。 ３５． 前記推定上のＩｇＥ含有組成物が動物から得られ、前記動物がイヌ及び ネコのうちのいずれかから選択される、請求項１に記載の方法。 ３６． 前記方法が溶液で行われる、請求項１に記載の方法。 ３７． 前記組換え細胞が、ＰｈＦｃ_εＲα₂₅₇及びＰｈＦｃ_εＲα₂₃₂のうちの いずれかから選択されるたんぱく質を含むＦｃ_εＲ分子を発現する、請求項２に 記載の方法。 ３８． 前記組換え細胞が、ｎｈＦｃεＲα₆₁₂、ｎｈＦｃ_εＲα₅₉₁、ｎｈＦｃ_ε Ｒα₆₉₉及びｎｈＦｃ_εＲα₅₁₆のうちのいずれかから選択される核酸分子によ りコードされるＦｃ_εＲ分子を発現する、請求項２に記載の方法。 ３９． 前記組換え細胞が、配列同定番号第１番及び配列同定番号第４番のうち のいずれかから選択される核酸配列を含む核酸分子、及び、配列同定番号第１番 及び配列同定番号第４番を含む核酸分子の対立遺伝子変異体を含む核酸分子、の うちのいずれかから選択される核酸分子によりコードされるＦｃ_εＲ分子を発現 する、請求項２に記載の方法。 ４０． 前記組換え細胞がＲＢＬ−ｈＦｃ_εＲ細胞である、請求項２に記載の方 法。 ４１． 前記検出手段が、アレルゲン及び寄生生物抗原のうちのいずれかから選 択される抗原をさらに含み、前記抗原が、イヌ、ネコ及びウマのうちのいずれか から選択される動物においてＩｇＥ抗体の産生を誘起するものである、請求項３ に記載のキット。 ４２． 前記検出手段が、ＩｇＥに選択的に結合する抗体を含む、請求項３に記 載のキット。 ４３． 前記検出手段が前記Ｆｃ_εＲ分子を検出する、請求項３に記載のキット 。 ４４． 前記Ｆｃ_εＲ分子が、前記Ｆｃ_εＲ分子を発現する組換え細胞の表面上 にある、請求項３に記載のキット ４５． 前記抗原が基質上に固定される、請求項４１に記載のキット。 ４６． 前記基質が、樹脂、ガラス、ゲル、セルロイド、紙、磁気樹脂、ポリフ ッ化ビニリデン、ナイロン、ニトロセルロース及び微粒子材料のうちのいずれか から選択される材料を含む、請求項４５に記載のキット。 ４７． 前記基質材料が、ラテックス、ポリスチレン、ナイロン、ニトロセルロ ース、アガロース及び磁気樹脂のうちのいずれかから選択される、請求項５、１ ９又は４５に記載の本発明。 ４８． 前記基質が、ウェル、プレート、ディップスティック、ビード、ラテラ ルフロー装置、メンブラン、フィルター、チューブ、皿、セルロイド型マトリッ クス及び磁気粒子のうちのいずれかから選択される形状を含む、請求項１９又は ４５に記載の本発明。 ４９． 前記基質が、ＥＬＩＳＡプレート、ディップスティック、ラジオイムノ アッセイ・プレート、アガロース・ビード、樹脂製ビード、ラテックス・ビード 、イムノブロット・メンブラン及びイムノブロット・ペーパーを含む、請求項５ 、１９又は４５に記載の本発明。 ５０． 前記基質がラテックス・ビードである、請求項４５に記載のキット。 ５１． 前記アレルゲンが、真菌、高木、雑草、低木、稲科植物、小麦、トウモ ロコシ、ダイズ、米、卵、牛乳、チーズ、ウシ、家禽、ブタ、ヒツジ、酵母、蚤 、ハエ、蚊、ダニ、ユスリカ、ヌカカ（原語：biting gnat）、シラミ、蜂、黄 蜂、アリ、ナンキンムシ及びマダニのうちのいずれかから選択される物質を由来 とする、請求項４１に記載のキット。 ５２． 前記蚤アレルゲンが蚤唾液抗原である、請求項５又は５１に記載の本発 明。 ５３． 前記寄生生物抗原がイヌ糸状虫抗原である、請求項３に記載のキット。 ５４． （ａ）流路を規定する支持構造と、 （ｂ）前記抗原に結合させたビードを含む標識試薬であって、該支持構造内 の標識域に含浸されている、標識試薬と、 （ｃ）前記Ｆｃ_εＲ分子を含む捕獲試薬であって、前記標識試薬が前記標識 域から前記捕獲域へと流れることができるような態様で、記標識試薬の下流にあ たる、前記標識域に流体的に連絡する捕獲域内に配置される、捕獲試薬と を含む装置をさらに含む、請求項３に記載のキット。 ５５． 前記装置が、前記流路に沿って配置された試料受容域をさらに含む、請 求項５４に記載のキット。 ５６． 前記装置が、前記流路の終点に配置された吸収剤をさらに含む、請求項 ５４に記載のキット。 ５７． 前記試料受容域が前記標識試薬の上流に配置される、請求項５５に記載 のキット。 ５８． 前記支持構造が、前記ビードが前記標識域から前記捕獲域へと流れるの を 妨げない材料を含む、請求項５４に記載のキット。 ５９． 前記支持構造がイオン材料を含む、請求項５４に記載のキット。 ６０． 前記支持構造が、ニトロセルロース、ＰＶＤＦ及びカルボキシメチルセ ルロースのうちのいずれかから選択される材料を含む、請求項５４に記載のキッ ト。 ６１． 前記ビードがラテックスビードを含む、請求項５４に記載のキット。 ６２． 前記標識試薬が前記標識域内で乾燥され、前記捕獲試薬が前記捕獲域内 で乾燥される、請求項５４に記載のキット。 ６３． 前記アレルゲンが、稲科植物、ヒロハノウシノケグサ，カーリードック （原語：Curly Dock），オオバコ、メキシカンファイアブッシュ（原語：Mexica n Firebush），シロザ，アカザ、ブタクサ、セージ、ニレ、オナモミ、ネグンド カエデ，クルミ、ポプラ、トネリコ、カバ、セイヨウスギ、オーク、クワ、ゴキ ブリ、ヒョウヒダニ，アルテルナリア属、アスペルギルス属、クラドスポリウム 属、フザリウム属、ヘルミントスポリウム属、ケカビ属、ペニシリウム属、Pull ularia，クモノスカビ属及びTricophytonのうちのいずれかから選択される、請 求項４に記載のキット。 ６４． 前記アレルゲンが、ヒメモロコシ，ナガハグサ，ヒロハノウシノケグサ ，カモガヤ，多年生ライグラス，コヌカグサ，オオアワガエリ，ギョウギシバ， チャヒキ，カーリードック（原語：Curly Dock），ヘラオオバコ，メキシカンフ ァイアブッシュ（原語：Mexican Firebush），シロザ，ラフピッグウィードショ ートラグウィード（原語：Rough Pigweed Short Ragweed），ウォームウッドセ ージ（原語：Wormwood Sage），アメリカニレ，コモンコックルバー（原語：Com mon Cocklebur），ネグンドカエデ，クログルミ，イースタンコットンウッド（ 原語Eastern Cottonwood），グリーンアッシュ（原語：Green Ash），フロリダ カンバ， エンピツビャクシン，アカガシワ，アカミグワ，ゴキブリ、Dermataphagoides f arinae，Alterneria alternata，Aspergillus fumigatus，Cladosporium herbar um，Fusarium vasinfectum，Helminthosporium sativum，Mucor recemosus，Pen icillium notatum，Pullularia pullulans，Rhizopus nigricans及びTricophyto n種のうちのいずれかから選択される、請求項４に記載のキット。 ６５． 前記キットが、各々の組成物が一つのアレルゲンを含む一つ又はそれ以 上の組成物を含む、請求項４に記載のキット。 ６６． アレルゲンが前記基質上に固定される、請求項４に記載のキット。 ６７． 前記蚤アレルゲンが、蚤唾液生成物及び蚤唾液たんぱく質のうちのいず れかから選択される、請求項５又は６に記載の本発明。 ６８． 前記Ｆｃ_εＲアルファ鎖たんぱく質が、配列同定番号第１番、配列同定 番号第４番、配列同定番号第７番、配列同定番号第１０番及び配列同定番号第１ ２番うちのいずれかから選択される核酸配列を含む核酸分子、及び、前記核酸配 列のうちのいずれかを含む核酸分子の対立遺伝子変異体を含む核酸分子、のうち のいずれかから選択される核酸分子によりコードされる、請求項７に記載のＦｃ_ε Ｒアルファ鎖たんぱく質。 ６９． 前記Ｆｃ_εＲアルファ鎖たんぱく質がＰｈＦｃ_εＲα₁₇₂−BIOTを含む 、請求項７に記載のＦｃ_εＲアルファ鎖たんぱく質。