JP2001289854A - 高分子球状体、免疫学的測定試薬及び免疫測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 被測定物質を高感度に測定でき、更に、被測
定物質が多いときにも凝集による光学的変化量が測定可
能域を超えにくい免疫学的測定試薬用担体として有用な
高分子球状体、この高分子球状体に抗原又は抗体を担持
させてなる免疫学的測定試薬、及び、免疫測定法を提供
する。 【解決手段】 フェニル基を有する重合性単量体及び／
又は陰イオン性の重合性単量体の重合体からなる高分子
球状体であって、懸濁液としたときの表面荷電密度が陰
イオンの乖離濃度で０．０１〜０．３μｍｏｌ／ｍ² で
あり、かつ、粒子径０．０１〜１μｍ、ＣＶ値１０％以
内である高分子球状体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、免疫学的測定試薬
用の担体として有用な高分子球状体、この高分子球状体
に抗原又は抗体を担持させてなる免疫学的測定試薬、及
び、免疫測定法に関する。

【０００２】

【従来の技術】臨床検査分野において、ラテックス粒子
等の高分子球状体を担体として抗原（又は抗体）を担持
（吸着又は結合）させ、試料中の抗体（又は抗原）と特
異的に起こる抗原抗体反応によりラテックス粒子の凝集
を生じさせ、その結果により被測定物質である抗体（又
は抗原）を測定する方法が普及している。

【０００３】従来、ラテックス粒子の表面積１ｍ² あた
りの親水性官能基（陰イオンの乖離濃度で表される表面
荷電密度）は、０．３〜８μｍｏｌであり、この粒子に
抗原又は抗体を吸着させることにより、その抗原又は抗
体に特異的に結合する検体中の被測定物質を測定する試
薬が作製される。この試薬をラテックス凝集法に用いる
と、被測定物質の量に応じてラテックス粒子の凝集が生
じるので、凝集による光学的変化量より被測定物質の量
を求めることができた（特開昭５７−１６８１６３号公
報、特開昭５８−９７６５６号公報等）。しかし近年、
より高感度に被測定物質を測定する方法が望まれてき
た。

【０００４】上記のような問題を解決するために、ラテ
ックス粒子の粒径を大きくすることで光学的変化量を大
きくし、被測定物質をより感度よく測定する方法が行わ
れてきた。しかし、この方法では、被測定物質が多いと
きに、ラテックス粒子の凝集による光学的変化量が測定
可能域を超えてしまうことから、高濃度域では被測定物
質の量に応じた光学的変化量が得られないという問題点
があった。

【０００５】また、一般に抗原抗体反応は非常に特異的
な反応であるが、非特異的な抗原抗体反応、又は、他の
反応により正しい測定結果を示さない場合がある。この
原因の一つとして、検体が血清である場合、血清中に含
まれている成分は人により変動するので、その変動した
成分が測定に悪影響を与える血清干渉と呼ばれる現象が
ある。この血漿干渉とは、被測定物質である抗原（又は
抗体）が高値で含まれる検体を、生理食塩水（変動成分
がない血清のモデル）で希釈したときの測定値と、同じ
検体を被測定物質である抗原（又は抗体）を含まない血
清で希釈したときの測定値とが乖離するという現象であ
る。

【０００６】検体が血清又は血漿である場合は、上述の
ような血清干渉が問題となる。そこで、特異性が高く、
正確かつ精密な測定を行うには、血清干渉を抑制するこ
とが重要となる。また、一般に抗原抗体反応を用いた免
疫測定試薬においては、その感度が高いほど、低値にお
ける測定再現性がよくなる傾向がある。測定感度を上げ
るには、被測定物質である抗原（又は抗体）に対する抗
体（又は抗原）の担持量を多くする方法、種々の増感剤
の添加量を多くする方法、検体量を多くする方法等が考
えられる。

【０００７】しかしながら、増感剤の添加量を増やす
と、特異的な反応のみならず、非特異的な反応も促進し
てしまうという問題点がある。また、検体量を多くする
と、上述の血清干渉が起こりやすくなるという問題点が
ある。被測定物質である抗原（又は抗体）に対する抗体
（又は抗原）の担持量を多くすると、コストが高くなる
という問題点がある。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記に鑑
み、被測定物質を高感度に測定でき、更に、被測定物質
が多いときにも凝集による光学的変化量が測定可能域を
超えにくい免疫学的測定試薬用担体として有用な高分子
球状体、この高分子球状体に抗原又は抗体を担持させて
なる免疫学的測定試薬、及び、免疫測定法を提供するこ
とを目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、フェニル基を
有する重合性単量体及び／又は陰イオン性の重合性単量
体の重合体からなる高分子球状体であって、懸濁液とし
たときの表面荷電密度が陰イオンの乖離濃度で０．０１
〜０．３μｍｏｌ／ｍ² であり、かつ、粒子径０．０１
〜１μｍ、ＣＶ値１０％以内であることを特徴とする高
分子球状体である。以下に、本発明を詳述する。

【００１０】本発明の高分子球状体は、フェニル基を有
する重合性単量体及び／又は陰イオン性の重合性単量体
の重合体からなる。上記フェニル基を有する重合性単量
体としては特に限定されず、例えば、スチレン、ジビニ
ルベンゼン、エチルスチレン、α−メチルスチレン、ｐ
−メチルスチレン、ｐ−クロロスチレン、クロロメチル
スチレン等が挙げられる。これらは単独で用いられても
よく、２種以上併用されてもよい。

【００１１】上記陰イオン性の重合性単量体としては特
に限定されず、例えば、スチレンスルホン酸塩、メタア
クリル酸、ジビニルベンゼンスルホン酸塩、エチルスチ
レンスルホン酸塩、α−メチルスルホン酸塩が挙げられ
る。また、この場合の塩としては特に限定されず、ナト
リウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩等
が挙げられる。これらは単独で用いられてもよく、２種
以上が併用されてもよい。なかでも、本発明の高分子球
状体に用いられる陰イオン性の重合性単量体としては、
スチレンスルホン酸塩及び／又はメタアクリル酸が好ま
しい。スチレンスルホン酸塩及び／又はメタアクリル酸
を含むことにより、得られる高分子球状体自体が良好な
乳化力を有するものとなる。

【００１２】上記陰イオン性の重合性単量体を含むこと
により、得られる高分子球状体は、表面電荷を有するも
のとなるので、乳化剤がなくても溶液中に良好に分散さ
れるものとなる。高分子球状体の懸濁液中に乳化剤が存
在すると、これに抗原又は抗体を担持させて後述の免疫
学的測定試薬とした場合に、乳化剤が特異的な抗原抗体
反応による高分子球状体の凝集を阻害したり、場合によ
っては非特異的な反応に関与する場合があるので、乳化
剤を含まない方が好ましい。

【００１３】本発明の高分子球状体において、共重合体
からなる場合、上記フェニル基を有する重合性単量体と
陰イオン性の重合性単量体との含有量としては特に限定
されないが、フェニル基を有する重合性単量体の共重合
成分１００重量部に対して、陰イオン性の重合性単量体
の共重合成分が、５０重量部以下であることが好まし
い。フェニル基を有する重合性単量体の共重合成分１０
０重量部に対して、陰イオン性の重合性単量体の共重合
成分が５０重量部を超えると、得られる高分子球状体が
分散しにくくなることがある。より好ましくは、フェニ
ル基を有する重合性単量体の共重合成分１００重量部に
対して、陰イオン性の重合性単量体の共重合成分が３０
重量部以下である。また、上記フェニル基を有する重合
性単量体のみからなる重合体も、本発明の高分子球状体
として利用できる。

【００１４】上記重合体を重合する方法としては特に限
定されず、重合開始剤を用いて、乳化重合、懸濁重合、
シード重合、分散重合等が挙げられる。上記重合開始剤
としては特に限定されず、例えば、過硫酸カリウム等の
過硫酸塩等が挙げられる。

【００１５】本発明の高分子球状体は、表面電荷を有す
るものであるが、この表面電荷は、上述の共重合成分で
ある陰イオン性の重合性単量体に基づくものと、重合時
に使用される重合開始剤の切片の陰イオンに基づくもの
とによるものである。上記重合開始剤の切片の陰イオン
に基づくものとは、例えば、過硫酸カリウム等の過硫酸
塩を用いた場合は、切片である硫酸根（−ＯＳＯ₃ ^- ）
が共重合粒子表面に存在し、この硫酸根が徐々に加水分
解を受けて、下記式（１）のように変化したものであ
る。 −ＯＳＯ₃ ^- ＋Ｈ₂ Ｏ → −ＯＨ＋ＨＯＳＯ₃ ^- （１）

【００１６】本発明の高分子球状体は、懸濁液としたと
きの表面荷電密度が陰イオンの乖離濃度で０．０１〜
０．３μｍｏｌ／ｍ² である。なお、上記懸濁液の媒体
は、本発明の高分子球状体が使用される免疫学的測定試
験に用いられるものであり、例えば、水、生理食塩水、
血清等が挙げられる。上記荷電密度が陰イオンの乖離濃
度で０．０１μｍｏｌ／ｍ² 未満であると、粒子間の反
発力が弱いので、高分子球状体自体が有する乳化力が損
なわれる。そのため、懸濁液中で安定な分散が得られ
ず、自己凝集を起こし、診断試薬としての実用性が損な
われる。上記荷電密度が陰イオンの乖離濃度で０．３μ
ｍｏｌ／ｍ ² を超えると、高分子球状体間の電気的反発
力が強くなり、自己凝集は起こさず安定であるが、抗原
抗体反応による凝集も妨げられるので、高感度な測定が
できなくなる。好ましくは、上記高分子球状体は、懸濁
液としたときの表面荷電密度が、陰イオンの乖離濃度で
０．０５〜０．３μｍｏｌ／ｍ²である。上記表面荷電
密度は、例えば、電気伝導度測定により求めることがで
きる。

【００１７】また、本発明の高分子球状体は、粒子径
０．０１〜１μｍ、ＣＶ値１０％以内である。上記高分
子球状体の粒子径が０．０１μｍ未満であると、凝集に
よる光学的変化量が小さすぎて、測定に必要な感度が得
られない。１μｍを超えると、高分子球状体自体が経時
的に沈降し、凝集によらない光学的変化を起こす。好ま
しくは、０．０４〜０．７μｍである。また、ＣＶ値が
１０％を超えると、試薬の再現性が低下する。好ましく
は、ＣＶ値が５％以下であり、より好ましくは、３％以
下である。

【００１８】本発明の高分子球状体は、上述のような構
成からなるので、低濃度の被測定物質を測定した際、同
一粒径の従来のラテックスと比較して、凝集による光学
的変化量が大きい。また、高濃度の被測定物質を測定し
た際、従来の大きいラテックスを使用した試薬と比較し
て、凝集により光学的測定可能域を超えるような光学的
変化を起こしにくい。

【００１９】本発明の高分子球状体は、免疫学的測定試
薬用の担体として好適に使用される。本発明２は、本発
明１の高分子球状体に、抗原又は抗体を担持させてなる
免疫学的測定試薬である。本発明１の高分子球状体を不
溶性担体として用いることにより、被測定物質である抗
原（又は抗体）に対する抗体（又は抗原）の担持量が少
なくても、感度及び再現性の良好な免疫測定試薬を得る
ことができる。また、血清干渉の低減も図ることができ
る。

【００２０】本発明２の免疫学的測定試薬において、高
分子球状体に担持される上記抗原又は抗体とは、被測定
物質である抗原（又は抗体）に対する抗体（又は抗原）
等である。上記抗原としては特に限定されず、一般に抗
原抗体反応を利用して測定し得る生理活性物質及びウィ
ルス、細菌等の病原体等の抗原、抗体の全てを用いるこ
とができる。上記生理活性物質としては、例えば、生体
内に存在する各種生体内レセプター、酵素等が挙げられ
る。上記病原体の抗原及び抗体としては、例えば、梅毒
菌体由来抗原、抗梅毒菌体抗体、ＨＢｓ抗原、抗ＨＢｓ
抗体、ＨＣＶ抗原、ＨＩＶ抗原、ＡＴＬＡ抗原、クラミ
ジア抗原、ヘルペス抗原、ヘリコバクター・ピロリ抗原
等が挙げられる。これらは、生体成分由来のもの、培養
で得られたもの、化学合成されたもの、遺伝子組み換え
等の技術によって得られたもの、又は、これらの処理物
等のいずれであってもよい。上記抗体としては、免疫グ
ロブリン分子自体の他、例えば、Ｆ（ａｂ’）₂ のよう
な断片であってもよい。

【００２１】本発明２の免疫学的測定試薬において、本
発明１の高分子球状体に、抗原又は抗体を担持させる方
法としては特に限定されず、高分子球状体に、被測定物
質である抗原（又は抗体）に対する抗体（又は抗原）
を、公知の方法により、物理的又は化学結合的に担持さ
せればよい。

【００２２】本発明２の免疫学的測定試薬においては、
高分子球状体の非特異的凝集反応を抑制するため、又
は、試薬の安定性を高めるために、アルブミン、カゼイ
ン、ゼラチン等のタンパク質、タンパク質分解物、アミ
ノ酸、界面活性剤等を上記高分子球状体に更に担持させ
てもよい。

【００２３】また、本発明２の免疫学的測定試薬は、本
発明１の高分子球状体に、抗原又は抗体を担持させてな
るものであるが、その他に、例えば、上記高分子球状体
を懸濁させるための緩衝液、反応時に使用される緩衝液
等が含まれてもよい。

【００２４】更に、本発明２の免疫学的測定試薬には、
測定感度の向上及び抗原抗体反応の促進のために、種々
の増感剤が添加されてもよい。上記増感剤としては、例
えば、特開平２−１７３５６７号公報に記載されている
メチルセルロース、エチルセルロース等のアルキル化多
糖類；特開平５−１８０８３８号公報に記載されている
プルラン、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。上記
増感剤は、適当な媒体に分散又は溶解させて使用するこ
とが好ましい。この場合において、上記抗原又は抗体を
担持させた高分子球状体と、上記増感剤とを同一の媒体
に分散及び溶解させることにより１液型のラテックス試
薬としてもよく、また、それぞれ別個の媒体に分散及び
溶解させることにより、ラテックス試薬と溶液状試薬と
の２液型試薬として使用してもよい。上記媒体として特
に限定されず、例えば、リン酸緩衝液、グリシン緩衝
液、トリス塩緩衝液、グッド緩衝液等が挙げられる。ま
た、上記媒体のｐＨは、５．５〜８．５が好ましい。よ
り好ましくは、６．５〜８．０である。

【００２５】上記１液型のラテックス試薬中には、更に
牛血清アルブミン、ショ糖、塩濃度調整のために塩化ナ
トリウム等を適宜溶解させてもよい。また、上記ラテッ
クス試薬と溶液状試薬との２液型試薬として使用する場
合にも、それぞれに牛血清アルブミン、ショ糖、塩濃度
調整のために塩化ナトリウム等を適宜溶解させてもよ
い。

【００２６】本発明３は、本発明２の免疫学的測定試薬
を用いた免疫測定法である。本発明３の免疫測定法は、
高分子球状体に担持された抗原又は抗体と、試料中の被
測定物質との抗原抗体反応によって生じる上記高分子球
状体の凝集の度合いを検出することにより、上記被測定
物質を測定する。

【００２７】本発明３の免疫測定法に用いられる上記試
料としては、例えば、血清、血漿等が挙げられるが、こ
れらのみに限定されるものではなく、各種の生体試料、
非生体試料に適用することも可能である。

【００２８】本発明３の免疫測定法において、凝集反応
によって生じた高分子球状体の凝集の度合いは、光学的
に観察又は目視観察することにより検出される。高分子
球状体の凝集の程度を光学的に観察する方法としては特
に限定されず、例えば、散乱強度、吸光度、透過光強度
の増加又は減少を測定すればよい。また、これらの方法
を併用してもよい。

【００２９】高分子球状体の凝集の程度を肉眼で判定す
る場合には、通常、検体と上記タンパク質を担持させた
高分子球状体とを含む溶液を判定板上で混合し、１〜５
分間揺り動かした後、凝集の有無を判定する。凝集判定
には、単に肉眼判定以外に、凝集状態をビデオカメラで
撮影し、画像処理を施すことも可能である。

【００３０】上記抗原抗体反応の条件としては、通常用
いられている条件と同様でよく、反応媒体としては、被
測定物質の種類に応じた各種緩衝液が適宜選ばれる。上
記緩衝液としては、被測定物質を失活させることがな
く、かつ、抗原抗体反応を阻害しないようなイオン濃度
やｐＨを有するものであれば特に限定されず、例えば、
リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液等が挙げ
られる。上記緩衝液のｐＨは、５〜１０が好ましく、６
〜８がより好ましい。反応温度は、０〜５０℃が好まし
く、２０〜４０℃がより好ましい。反応時間は、適宜決
められる。

【００３１】また、反応時には、感度を高めるために、
ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロー
ス、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリ（グリ
コシルエチルメタクリレート）、プルラン等の水溶性高
分子を反応系に添加してもよい。また、特異性を高める
ために、塩化コリン等の第４級アンモニウム塩、ＥＤＴ
Ａ、ポリアニオン、Ｃｌ^- 、Ｉ^- 、ＳＣＮ^- 等のカオト
ロピックイオン、ゼラチン等を反応系に添加してもよ
い。

【００３２】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるも
のではない。

【００３３】実施例１ （高分子球状体の作製）反応容器内に水４８０ｍＬを仕
込み、これにスチレン単量体７５ｇを投与し、撹拌しつ
つ窒素ガスで容器内を置換し、７０℃まで昇温させ、重
合開始剤として過硫酸カリウムを加えた。次いで７０℃
に２４時間保持した後、残存単量体がないことを確認し
た上で、酸素共存下で７０℃に保持したまま更に２４時
間加熱を続け、過硫酸カリウム切片の硫酸根の加水分解
を充分に行った。これによりスチレン重合体からなる高
分子球状体の懸濁液が得られた。

【００３４】得られたスチレン重合体粒子の懸濁液を濾
過し、透過電子顕微鏡による観察を行ったところ、上記
スチレン重合体粒子の平均粒子径は０．４６μｍであ
り、ＣＶ値は３．５％であった。次に塩酸を加え、ｐＨ
を一旦２．０まで下げてからイオン交換水で２週間透析
を行った。透析外膜の伝導度が１．０μΩ／ｃｍ以下で
あることを確認した上で、電気伝導度滴定を行い、その
変曲点からスチレン重合体粒子の表面荷電密度を測定し
た。懸濁液の濃度と粒子径とから単位面積あたりの表面
荷電量（表面荷電密度）に換算すると、０．１５５μｍ
ｏｌ／ｍ² であった。

【００３５】（免疫学的測定試薬の作製）タンパク質と
して４８ｍｇ／ｍＬのＣＲＰポリクロナール抗体を５体
積％含むグリシン緩衝液（ｐＨ７．５）に、上記で得ら
れた粒子を１体積％となるように加え、３７℃で１時間
反応させて、ＣＲＰポリクロナール抗体が結合した高分
子球状体の懸濁液（ラテックス）を得た。

【００３６】上記で作製したラテックスに、牛血清アル
ブミン（以下、ＢＳＡという）を１重量％含むグリシン
緩衝液（ｐＨ７．５）を等量加え、３７℃で更に１時間
反応させた後、遠心分離を行った。得られた沈殿物に、
ＢＳＡを１重量％含有するリン酸−食塩緩衝液（０．０
５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）、０．１Ｍ ＮａＣ
ｌ、以下ＰＢＳという）を加えて、所定濃度で分散させ
た。これをＲ２試薬とした。ＣＲＰ抗原を検体サンプル
（ＣＲＰ抗原濃度０、０．０２、０．０４、０．０８、
０．１６ｍｇ／ｍＬ）とし、ＢＳＡを１重量％含有する
リン酸−食塩緩衝液（ＰＢＳ）を検体希釈液（Ｒ１）と
した。検体サンプル２μＬにＲ１を１３２μＬ加え、撹
拌した後、Ｒ２試薬を１３２μＬ加え、８００ｎｍにお
ける吸光度を測定した。その１０分後に再度８００ｎｍ
の吸光度を測定することで、吸光度の変化量を求めた。
結果を表１に示した。

【００３７】比較例１ 高分子球状体の懸濁液として、積水化学工業社製Ｎ−４
６１ラテックス（粒子径：０．４６μｍ、表面荷電量：
０．３１μｍｏｌ／ｍ² ）を使用した以外は、実施例１
と同様に試薬を作製し、検体サンプルを測定した。結果
を表１に示した。

【００３８】

【表１】

【００３９】表１より、実施例１で作製した高分子球状
体を担体として用いた免疫学的測定試薬の方が、比較例
１の免疫学的測定試薬より凝集による吸光度の変化量が
大きく、高感度であった。

【００４０】実施例２ （１）抗ＨＢｓ抗体担持ラテックスの調製 抗ＨＢｓ抗体を１ｍｇ／ｍＬの濃度で０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．５）に溶解した液１ｍＬに、平均粒子径
０．４μｍのポリスチレンラテックス（固形分１０重量
％、スルホン基量０．２８μｍｏｌ／ｍ² 、積水化学工
業社製）０．５ｍＬを添加し、２５℃にて６０分間攪拌
した。次いで、この液にＢＳＡを１重量％含有するリン
酸−食塩緩衝液（ＰＢＳ）を添加し、３０℃にて６０分
間攪拌後、４℃にて２０分間、１８，０００ｒｐｍで遠
心分離することにより洗浄した。洗浄操作は３回行っ
た。得られた沈殿物に０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．
０）５０ｍＬを添加し、懸濁させ、抗ＨＢｓ抗体担持ラ
テックス液を調製した。

【００４１】（２）緩衝液の調製 １重量％濃度でＢＳＡを含有する０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）に、ポリエチレングリコール（和光純
薬社製、平均分子量：５万）を、２重量％の濃度になる
ように溶解した。

【００４２】（３）ヒトＨＢｓ抗原測定試薬 ヒトＨＢｓ抗原測定試薬として、上記（１）項の抗ＨＢ
ｓ抗体担持ラテックス液からなる第１試薬と上記（２）
項の緩衝液からなる第２試薬とから２液系の試薬を作製
した。

【００４３】（４）標準ＨＢｓ抗原液 標準ＨＢｓ抗原液として、ＨＢｓ抗原を０、５０、１０
０、３００、５００ＩＵ／ｍＬ濃度で含むヒト血清を使
用した。

【００４４】（５）測定用血清 ・再現性評価用検体 精製ＨＢｓ抗原を、ＨＢｓ抗原及び抗ＨＢｓ抗体ともに
陰性の血清を用いて、１０ＩＵ／ｍＬの濃度となるよう
に調整した。

【００４５】・血清干渉評価用検体 ＨＢｓ抗原を約１００ＩＵ／ｍＬの濃度で含む標準液
（以下、１００ＩＵＨＢｓ抗原液という）を、ＨＢｓ抗
原及びＨＢｓ抗体ともに陰性の血清を用いて、以下に示
す希釈率で希釈したものを、血清干渉評価用検体とし
た。 ０／５：希釈に用いた陰性血清そのもの １／５：１００ＩＵＨＢｓ抗原液／陰性血清＝１／４の
比率で希釈 ２／５：１００ＩＵＨＢｓ抗原液／陰性血清＝２／３の
比率で希釈 ３／５：１００ＩＵＨＢｓ抗原液／陰性血清＝３／２の
比率で希釈 ４／５：１００ＩＵＨＢｓ抗原液／陰性血清＝４／１の
比率で希釈 ５／５：希釈せず。即ち、１００ＩＵＨＢｓ抗原液その
もの また、同じ１００ＩＵＨＢｓ抗原液を生理食塩水で上記
と同様に希釈し、希釈系列を作製して、血清干渉評価用
検体とした。

【００４６】（６）標準ＨＢｓ抗原液の測定及びＨＢｓ
抗原検量線の作成 上記（４）の標準ＨＢｓ抗体液２０μＬに、上記（２）
項の緩衝液１５０μＬを混合し、３７℃で適時保存した
後、上記（１）項の抗ＨＢｓ抗体担持ラテックス液１５
０μＬを添加、撹拌した。この後、１分後及び５分後の
波長７５０ｎｍでの吸光度を測定し、この差を吸光度変
化量（ΔＡｂｓ）とした。測定は、日立自動分析装置７
１５０型を使用した。得られた吸光度変化量と標準ＨＢ
ｓ抗原濃度とからＨＢｓ抗原の検量線を作成した。

【００４７】（７）測定用血清の測定 上記（６）項における標準ＨＢｓ抗原液の代わりに、上
記（５）項で用意した測定用血清（血清干渉評価用検体
及び再現性評価用検体）を用いたこと以外は、上記
（６）項と同様の操作を行い、吸光度変化量を求めた。
得られたそれぞれの測定用血清の吸光度変化量から、上
記（６）項で作成した検量線を用いて、それぞれの測定
用血清のＨＢｓ抗原濃度を求めた。標準ＨＢｓ抗原液の
測定結果を表２に、再現性評価用検体の測定結果を表３
に、また、血清干渉評価用検体の測定結果を表４及び図
１に示した。

【００４８】実施例３ 実施例２において（１）項を以下のようにして行ったこ
と以外は、実施例２と同様にしてヒトＨＢｓ抗原測定試
薬を作製し、測定を行った。 （１）抗ＨＢｓ抗体担持ラテックスの調製 抗ＨＢｓ抗体を１ｍｇ／ｍＬの濃度で０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．５）に溶解した液０．７ｍＬに、平均粒
子径０．４μｍのポリスチレンラテックス（固形分１０
重量％、スルホン基量０．１２μｍｏｌ／ｍ² 、積水化
学工業社製）０．５ｍＬを添加し、２５℃にて６０分間
攪拌した。次いでこの液にＢＳＡを１重量％含有するリ
ン酸−食塩緩衝液（ＰＢＳ）を添加し、３０℃にて６０
分間攪拌後、４℃にて２０分間、１８，０００ｒｐｍで
遠心分離することにより洗浄した。洗浄操作は３回行っ
た。得られた沈殿物に０．１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８．０）５０ｍＬを添加し、懸濁させ、抗ＨＢｓ抗体担
持ラテックス液を調製した。標準ＨＢｓ抗原液の測定結
果を表２に、再現性評価用検体の測定結果を表３に、ま
た、血清干渉評価用検体の測定結果を表４及び図２に示
した。

【００４９】比較例２ 実施例２において（１）項を以下のようにして行ったこ
とを除いては、実施例２と同様にしてヒトＨＢｓ抗原測
定試薬を作製し、測定を行った。 （１）抗ＨＢｓ抗体担持ラテックスの調製 抗ＨＢｓ抗体を１ｍｇ／ｍＬの濃度で０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．５）に溶解した液１．０ｍＬに、平均粒
子径０．４μｍのポリスチレンラテックス（固形分１０
重量％、スルホン基量０．３１μｍｏｌ／ｍ² 、積水化
学工業社製）０．５ｍＬを添加し、２５℃にて６０分間
攪拌した。次いで、この液にＢＳＡを１重量％含有する
リン酸−食塩緩衝液（ＰＢＳ）を添加し、３０℃にて６
０分間攪拌後、４℃にて２０分間、１８，０００ｒｐｍ
で遠心分離することにより洗浄した。洗浄操作は３回行
った。得られた沈殿物に、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８．０）５０ｍＬを添加し、懸濁させ、抗ＨＢｓ抗体担
持ラテックス液を調製した。標準ＨＢｓ抗原液の測定結
果を表２に、再現性評価用検体の測定結果を表３に、ま
た、血清干渉評価用検体の測定結果を表４及び図３に示
した。

【００５０】

【表２】

【００５１】

【表３】

【００５２】

【表４】

【００５３】表２より、実施例２及び実施例３のヒトＨ
Ｂｓ抗原測定試薬は、比較例２のヒトＨＢｓ抗原測定試
薬より高い検量線感度を有していた。また、表３より、
実施例２及び実施例３のヒトＨＢｓ抗原測定試薬では、
較例２のヒトＨＢｓ抗原測定試薬より、再現性が良好
であった。表４、図１及び図２より、実施例２及び実施
例３のヒトＨＢｓ抗原測定試薬では、ＨＢｓ抗原を、Ｈ
Ｂｓ抗原及びＨＢｓ抗体ともに陰性の血清及び生理食塩
水のいずれで希釈しても希釈検体の測定値は直線性が保
たれており、また両者の測定値は、ほぼ一致していた。
一方、表２及び図３より、比較例２のヒトＨＢｓ抗原測
定試薬では、ＨＢｓ抗原を生理食塩水で希釈した場合
は、その希釈検体の測定値は直線性が保たれているが、
陰性血清で希釈した場合には、その希釈検体の測定値は
直線性が崩れ、生理食塩水での希釈検体に比べ、負の誤
差を生じていることが分かる。即ち、この測定値の乖離
が血清干渉による誤差ということになる。

【００５４】

【発明の効果】本発明の高分子球状体は、上述のような
構成からなるので、低濃度の被測定物質を測定した際、
同一粒子径の従来のラテックスと比較して、凝集による
吸光度変化量が大きく、高感度の測定を行うことができ
る。また、高濃度の被測定物質を測定した際、粒子径が
大きい従来のラテックスを使用した試薬と比較して、凝
集により吸光度測定可能域を超えるような吸光度の変化
を起こしにくい。更に、本発明の高分子球状体を担体と
して使用した免疫学的測定試薬は、検体が血清である場
合でも、血清干渉による誤差がでにくく、より正確な判
定をすることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の免疫学的測定試薬を用いて血清干渉評
価を行った測定結果である。

【図２】本発明の免疫学的測定試薬を用いて血清干渉評
価を行った測定結果である。

【図３】表面荷電密度が小さい高分子球状体を用いて作
製した免疫学的測定試薬を用いて血清干渉評価を行った
測定結果である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/543 ５８７ Ｇ０１Ｎ 33/543 ５８７ (72)発明者 高原 誠 大阪府三島郡島本町百山２−１ 積水化学 工業株式会社内 Ｆターム(参考） 4J100 AB02P AB03P AB04P AB07P AB08P AB16P AJ02P BA56P CA01 CA04 DA55 EA09 JA53

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 フェニル基を有する重合性単量体及び／
   又は陰イオン性の重合性単量体の重合体からなる高分子
   球状体であって、懸濁液としたときの表面荷電密度が陰
   イオンの乖離濃度で０．０１〜０．３μｍｏｌ／ｍ² で
   あり、かつ、粒子径０．０１〜１μｍ、ＣＶ値１０％以
   内であることを特徴とする高分子球状体。
2. 【請求項２】 陰イオン性の重合性単量体は、スチレン
   スルホン酸塩及び／又はメタアクリル酸であることを特
   徴とする請求項１記載の高分子球状体。
3. 【請求項３】 請求項１又は２記載の高分子球状体に、
   抗原又は抗体を担持させてなることを特徴とする免疫学
   的測定試薬。
4. 【請求項４】 請求項３記載の免疫学的測定試薬を用い
   る免疫測定法であって、高分子球状体に担持された抗原
   又は抗体と、試料中の被測定物質との抗原抗体反応によ
   って生じる前記高分子球状体の凝集の度合いを検出する
   ことにより、前記被測定物質を測定することを特徴とす
   る免疫測定法。