JP2001281147A - 共焦点スキャナ - Google Patents

共焦点スキャナ

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JP2001281147A
JP2001281147A JP2000098248A JP2000098248A JP2001281147A JP 2001281147 A JP2001281147 A JP 2001281147A JP 2000098248 A JP2000098248 A JP 2000098248A JP 2000098248 A JP2000098248 A JP 2000098248A JP 2001281147 A JP2001281147 A JP 2001281147A
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JP2000098248A
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Shinichiro Kawamura
信一郎 河村
Hideomi Negishi
秀臣 根岸
Nobuhiro Tomosada
伸浩 友定
Shinya Otsuki
真也 大槻
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Yokogawa Electric Corp
Original Assignee
Yokogawa Electric Corp
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 試料からの戻り光を複数の異なる波長領域毎
に分離して検出することができ、コストアップを招くこ
となくスループットを高く保つことができる共焦点スキ
ャナを提供する。 【解決手段】 励起光波長の光は透過し、蛍光波長の光
は反射する第1のダイクロイックミラー3を透過してピ
ンホールアレイディスク4を通過した光を試料60に対
して走査するとともに、ピンホールアレイディスクを通
過した試料からの蛍光7を第1のダイクロイックミラー
で反射させる共焦点スキャナ100において、第1のダ
イクロイックミラーで反射された試料からの蛍光を複数
の波長領域の光に分離する第2のダイクロイックミラー
30を設ける。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、共焦点顕微観察系
における光学系に関する発明であり、さらに詳しくは、
顕微鏡と共に使用される共焦点スキャナの構造に関す
る。
【0002】
【従来の技術】図10は、顕微鏡と共に使用される共焦
点スキャナの従来例を示す。図10において、共焦点ス
キャナ100は顕微鏡200に接続してあり、照明用平
行励起光束1(一点鎖線)はマイクロレンズアレイディ
スク(以下、MLディスクと呼ぶ)2により個別の光束
に集光され、ダイクロイックミラー(以下、DMと呼
ぶ)3を透過後、ピンホールアレイディスク(以下、ニ
ポウディスクと呼ぶ)4の個々のピンホールを通過し、
顕微鏡の対物レンズ5により、試料6に集光される。試
料6から出た蛍光信号7(実線)は再び対物レンズ5を
通り、ニポウディスク4の個々のピンホール上に集光さ
れる。個々のピンホールを通過した蛍光信号7はDM3
で反射され、リレーレンズ9により、2次元センサ10
上に蛍光画像を結像する。DM3は励起用光束1は透過
し、所望の蛍光信号7は反射するよう設計されている。
【0003】MLディスク2とニポウディスク4とは互
いに部材8で機械的に連結された状態で、回転中心軸1
1の周りを回転する。この場合、ニポウディスク4上に
形成された個々のピンホールが試料6の被観察平面12
を掃引するように、個々のマイクロレンズとピンホール
は配置されている。また、ニポウディスク4のピンホー
ルが並んでいる平面と、試料6上の被観察平面12と、
2次元センサ10の受光面とは互いに光学的に共役な関
係に配置されているので、2次元センサ10上には試料
6の光学的断面像、すなわち共焦点画像が結像される。
【0004】上述したように、ニポウディスク方式の共
焦点スキャナは2次元センサを用いるため、同一面内に
ある複数個の試料を同時に観察することができる。ま
た、MLディスク2とニポウディスク4を高速で回転さ
せることにより、試料6の共焦点画像を2次元センサ1
0の受光面上に短時間で形成することができるので、図
11に示すように多数の被検査試料をマトリックス上に
並べたサンプル60を顕微鏡と共焦点スキャナに対して
相対的に移動させながら試料全数の共焦点画像を高速に
取り込むことが可能となる。そのため、上記共焦点スキ
ャナは新薬開発のスクリーニング手法に用いられてい
る。なお、十分に明るい蛍光信号を発する試料を検査対
象とする場合には、前述のMLディスク2が用いられな
いこともある。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】前述した従来の共焦点
スキャナは、試料が一種類の蛍光を発する場合に限れ
ば、図11に示したスクリーニング方法で単位時間あた
りに処理できる試料数、すなわちスループットの問題は
生じない。しかし、多くの場合、サンプル60の各試料
に蛍光波長の異なる別々の蛍光試薬を付加するか、ある
いは、複数種の蛍光試薬を全試料に付加することによっ
て、試料の反応によって異なる複数の蛍光波長を検出で
きるようにした多重染色法によるスクリーニング方法が
用いられる。
【0006】上記のように異なる複数の蛍光波長を検出
する場合、まず特定の反射特性を持ち第1の蛍光波長を
検出できるDMを用いてサンプル60(マトリックス状
に配置された試料全数)を検査した後、同じサンプルに
対して、第2の蛍光波長に対応した別の反射特性を持つ
DMに交換してから、再度全数を検査しなければならな
い。したがって、必要な波長種類の数だけこのDM交換
と全数検査を繰り返すことが必要なため、スループット
が低減する欠点があった。
【0007】また、図12に示すように各蛍光波長毎に
顕微鏡200a…、共焦点スキャナ100a…、2次元
センサ10a…を複数台並べる方法を採ることも考えら
れる。しかし、この方法では、サンプル60nに対する
蛍光波長λnの検査が終了すると、このサンプル60n
は顕微鏡200n+1,スキャナ100n+1、2次元
センサ10n+1から成る次の検査系n+1に送られ
る。これと同時に顕微鏡200n−1,スキャナ100
n−1、2次元センサ10n−1から成る検査系n−1
で波長λn−1に対する検査が終了したサンプル60n
−1は検査系nに、また顕微鏡200n+1,スキャナ
100n+1、2次元センサ10n+1から成る検査系
n+1で波長λn+1に対する検査が終了したサンプル
60n+1は検査系n+2に送られる。すなわち、ある
検査系で検査が終了したサンプルは、各々次の検査系に
送られる。そのため、この方法ではスループットを高く
保つことができるが、複数台の共焦点スキャナ、顕微鏡
が必要となるためコストが高くなるという欠点があっ
た。
【0008】本発明は、前述した事情に鑑みてなされた
もので、従来技術のように必要な波長種類の数だけDM
交換と全数検査を繰り返したり、複数台の共焦点スキャ
ナ、顕微鏡を使用したりすることなく、試料からの戻り
光を複数の異なる波長領域毎に分離して検出することが
でき、したがってコストアップを招くことなくスループ
ットを高く保つことができる共焦点スキャナを提供する
ことを目的とする。
【0009】
【課題を解決するための手段】本発明は、前記目的を達
成するため、入射光の内の一部の波長領域の光は透過
し、他部の波長領域の光は反射するダイクロイックミラ
ーと、複数のピンホールを有する回転可能なピンホール
アレイディスクとを具備し、光源からの照射光をダイク
ロイックミラーに入射させ、ダイクロイックミラーを透
過してピンホールアレイディスクを通過した光を試料に
対して走査するとともに、ピンホールアレイディスクを
通過した試料からの戻り光を前記ダイクロイックミラー
に入射させ、該戻り光の一部又は全部をダイクロイック
ミラーで反射させる共焦点スキャナにおいて、ダイクロ
イックミラーで反射された試料からの戻り光を複数の波
長領域の光又は複数の同一波長領域部分に分離する戻り
光分離手段を備えたことを特徴とする共焦点スキャナを
提供する。
【0010】本発明の共焦点スキャナによれば、試料か
らの戻り光を、共焦点スキャナに組み込んだ戻り光分離
手段によって任意の複数の波長領域の光又は複数の同一
波長領域部分に分離できるので、従来技術のように必要
な波長種類の数だけDM交換と全数検査を繰り返した
り、複数台の共焦点スキャナ、顕微鏡を使用したりする
ことなく、任意に分離した波長領域毎又は複数の同一波
長領域部分毎の共焦点画像を同時に、高速に、かつ分解
能度の低下なしに取得することができる。
【0011】本発明の共焦点スキャナの好適な具体例の
1つとしては、入射光の内の励起光波長の光は透過し、
蛍光波長の光は反射するダイクロイックミラーと、複数
のピンホールを有する回転可能なピンホールアレイディ
スクとを具備し、光源からの照射光をダイクロイックミ
ラーに入射させ、ダイクロイックミラーを透過してピン
ホールアレイディスクを通過した光を試料に対して走査
するとともに、ピンホールアレイディスクを通過した試
料からの蛍光を前記ダイクロイックミラーに入射させ、
該蛍光の一部又は全部をダイクロイックミラーで反射さ
せる共焦点スキャナにおいて、ダイクロイックミラーで
反射された試料からの蛍光を複数の波長領域の光又は複
数の同一波長領域部分に分離する戻り光分離手段を備え
たことを特徴とする共焦点スキャナを挙げることができ
る。
【0012】この場合、上記戻り光分離手段は、ダイク
ロイックミラーで反射された試料からの戻り光を複数の
波長領域の光に分離し、分離した光の少なくとも1つを
さらに複数の同一波長領域部分に分離したり、ダイクロ
イックミラーで反射された試料からの戻り光を複数の同
一波長領域部分に分離し、分離した光の少なくとも1つ
をさらに複数の波長領域の光に分離したりするものであ
ってもよい。
【0013】また、本発明の共焦点スキャナは、さらに
下記構成(1)〜(8)を採用することができる。 (1)戻り光分離手段が、前記光源からの照射光及び試
料からの蛍光を入射させるダイクロイックミラー(第1
のダイクロイックミラー)とは反射透過特性の異なる1
つ又は2つ以上の戻り光分離用ダイクロイックミラーを
備えた構成。 (2)上記第1のダイクロイックミラーの反射波長帯域
が、戻り光分離用ダイクロイックミラーの反射波長帯域
を含んでいる構成。 (3)上記第1のダイクロイックミラーの反射波長帯域
が、戻り光分離用ダイクロイックミラーの透過波長帯域
を含んでいる構成。 (4)戻り光分離手段により分離された複数の波長領域
の光又は複数の同一波長領域部分をそれぞれ検出手段に
より検出するための結像光学系を備えた構成。検出手段
としては、例えば2次元センサを用いることができる。 (5)戻り光分離手段と上記検出手段との間に、戻り光
分離手段により分離された複数の波長領域の光又は複数
の同一波長領域部分の少なくとも1つから迷光を除去す
る迷光除去手段を設けた構成。迷光除去手段としては、
例えば、上記複数の波長領域の光又は複数の同一波長領
域部分の少なくとも1つから励起光波長の光を除去する
ものが挙げられる。 (6)上記第1のダイクロイックミラー及び1つ又は2
つ以上の戻り光分離用ダイクロイックミラーが、それぞ
れ平板ミラー又はプリズムミラーである構成。 (7)上記戻り光分離用ダイクロイックミラーである平
板ミラー又はプリズムミラーの一部又は全部が、波長分
離特性は持たず部分透過特性を持つ平板ガラス又はプリ
ズムに置換されている構成。この平板ガラス又はプリズ
ムは、入射光を複数の同一波長領域部分に分離するもの
である。 (8)上記戻り光分離用ダイクロイックミラーである平
板ミラー又はプリズムミラーの一部又は全部が、波長分
離特性を持つ回折格子又は分光プリズムに置換されてい
る構成。
【0014】上述した本発明の共焦点スキャナでは、ダ
イクロイックミラーの透過光を試料に照射し、試料から
の戻り光をダイクロイックミラーで反射させるようにし
たが、ダイクロイックミラーの反射光を試料に照射し、
試料からの戻り光をダイクロイックミラーに透過させる
ようにしてもよく、これによっても同様の作用効果を得
ることができる。
【0015】したがって、本発明は、入射光の内の一部
の波長領域の光は透過し、他部の波長領域の光は反射す
るダイクロイックミラーと、複数のピンホールを有する
回転可能なピンホールアレイディスクとを具備し、光源
からの照射光をダイクロイックミラーに入射させ、ダイ
クロイックミラーで反射してピンホールアレイディスク
を通過した光を試料に対して走査するとともに、ピンホ
ールアレイディスクを通過した試料からの戻り光を前記
ダイクロイックミラーに入射させ、該戻り光の一部又は
全部をダイクロイックミラーに透過させる共焦点スキャ
ナにおいて、ダイクロイックミラーを透過した試料から
の戻り光を複数の波長領域の光又は複数の同一波長領域
部分に分離する戻り光分離手段を備えたことを特徴とす
る共焦点スキャナを提供する。
【0016】上記本発明の共焦点スキャナの好適な具体
例の1つとしては、入射光の内の励起光波長の光は反射
し、蛍光波長の光は透過するダイクロイックミラーと、
複数のピンホールを有する回転可能なピンホールアレイ
ディスクとを具備し、光源からの照射光をダイクロイッ
クミラーに入射させ、ダイクロイックミラーで反射して
ピンホールアレイディスクを通過した光を試料に対して
走査するとともに、ピンホールアレイディスクを通過し
た試料からの蛍光を前記ダイクロイックミラーに入射さ
せ、該蛍光の一部又は全部をダイクロイックミラーに透
過させる共焦点スキャナにおいて、ダイクロイックミラ
ーを透過した試料からの蛍光を複数の波長領域の光又は
複数の同一波長領域部分に分離する戻り光分離手段を備
えたことを特徴とする共焦点スキャナを挙げることがで
きる。
【0017】また、ダイクロイックミラーの反射光を試
料に照射し、試料からの戻り光をダイクロイックミラー
に透過させるようにした上記本発明の共焦点スキャナ
も、前述した構成(1)〜(8)を採用することができ
る。
【0018】
【発明の実施の形態】(第1の実施例)図1は本発明の
第1の実施例を示す構成図である。図1において、図1
0と同一要素には同一符号を付して重複する説明は省略
する。共焦点スキャナ100は顕微鏡に接続してあり、
第1の入射波長λ1=532nmと第2の入射波長λ2
=647nmを含む照明用平行励起光束1(一点鎖線)
はMLディスク2により個別の光束に集光され、図2に
示された分光特性を持つ平板ミラーからなるDM3を透
過後、ニポウディスク4の個々のピンホールを通過し、
顕微鏡の対物レンズ5により、サンプル60の各試料に
集光され蛍光試薬を励起する。対物レンズ5は、収斂レ
ンズ(図示せず)を用いて無限遠光学系を構成していて
もよい。
【0019】サンプル60の各試料は蛍光試薬CY3及
びCY5を付加されており、各々の蛍光試薬が発した蛍
光7は再び対物レンズ5を通り、ニポウディスク4の個
々のピンホール上に集光される。個々のピンホールを通
過した蛍光信号7はDM3で反射され、平板ミラーから
なる第2のDM30(戻り光分離手段)に到達する。D
M30は図3に示す分光特性を持っているので、CY5
の蛍光成分の波長660nmから720nmの信号はD
M30を透過し、図4の分光特性を持つバリアフィルタ
20a(迷光除去手段)を通過後、2次元センサ10a
(検出手段)に到達する。一方、CY3の蛍光成分の波
長550nmから630nmの信号は反射され、図4の
分光特性を持つバリアフィルタ20b(迷光除去手段)
を通過後、2次元センサ10b(検出手段)に到達す
る。リレーレンズ9(結像光学系)により、ニポウディ
スク4上に形成された共焦点光学像は2次元センサ10
a及び10bに結像される。
【0020】本実施例では、ニポウディスク4のピンホ
ールが並んでいる平面と、サンプル60上の被観察平面
と、2次元センサ10a、10bの受光面とは互いに光
学的に共役な関係に配置してあるので、2次元センサ1
0a、10b上にはサンプル60の光学的断面像、すな
わち共焦点画像が結像される。したがって、本実施例で
は、サンプル60の共焦点画像を2次元センサ10a、
10bの受光面上に同時に形成することができるため、
多数の被検査試料をマトリックス上に並べたサンプル6
0を顕微鏡と共焦点スキャナに対して相対的に移動させ
ることにより、試料全数の任意の波長選択分離をした共
焦点画像を高速に取り込むことが可能となる。なお、十
分に明るい蛍光信号を発する試料を検査対象とする場合
には、MLディスク2は省略してもよい。
【0021】なお、図4の分光特性を持つバリアフィル
タ20a,20bは、励起迷光が蛍光信号に混ざって2
次元センサに到達することを阻止するために使用されて
いるが、蛍光信号が励起迷光より十分に大きい場合に
は、バリアフィルタを省いてもよい。
【0022】本実施例で使用する蛍光試薬はCY3、C
Y5に限定されるものではなく、DMに試薬の組み合わ
せに応じた波長分光特性を持たせることにより、任意の
蛍光試薬を選択することが可能である。使用可能な蛍光
色素(励起波長ピーク[nm]/蛍光波長ピーク[n
m])を下記に例示する。また、蛍光試薬の付加の代わ
りに、特定の蛍光を発する蛋白を遺伝子操作で発現する
よう組み込む手法を用いてもよい。
【0023】[蛍光試薬]BODYPY−FL(503
/512)、FITC(494/520)、R−phy
coerythrin(480/578)、GFP(G
reen Fluorescent Protein)
(488/509)、YOYO−1(491/50
9)、TOTO−1(514/533)、Ethidi
um Bromide(510/595)、Propi
dium Iodide(494又は536/61
7)、Acridine Orange(487/52
6又は650)、Rhodamine 123(505
/534)、DiO(484/505)、DiA(49
1/595)、Di−8−ANEPPS(498/68
0)、DiOC5.6.7(478/500から51
0)、BCECF(490/530)、Fluo−3
(506/526)、Calcium Green(5
06/533)、Fura red(480から500
/640又は425から450)、Fura redと
Fluo−3(503/526又は640)、Magn
ecium Green(506/532)
【0024】(第2の実施例)図5は本発明の第2の実
施例を示す構成図である。図5において、図1と同一要
素には同一符号を付して重複する説明は省略する。本実
施例は、共焦点スキャナ100において、リレーレンズ
9a,9b(結像光学系)を第2のDM30と2次元セ
ンサ10a、10bとの間に各々配置することによっ
て、バリアフィルタ20a,20bにおける収差及び2
次元センサ10a、10bの光軸上の位置自由度を改善
したものである。リレーレンズ9a,9bは異なる形
状、焦点距離を持っていてもよい。
【0025】(第3の実施例)図6は本発明の第3の実
施例を示す構成図である。図6において、図1と同一要
素には同一符号を付して重複する説明は省略する。本実
施例は、共焦点スキャナ100において、第2のDM3
0がプリズムミラーである例を示したものである。プリ
ズムミラーは平板ミラーに比べて取り扱いが容易である
という利点がある。
【0026】(第4の実施例)図7は本発明の第4の実
施例を示す構成図である。図7において、図1と同一要
素には同一符号を付して重複する説明は省略する。本実
施例は、共焦点スキャナ100において、第2のDM3
0が、波長分離特性は持たず部分透過特性を持つ平板ガ
ラス(又はプリズム)からなるビームスプリッタ31で
ある例を示したものである。ビームスプリッタ31で分
けられた蛍光信号は同じ蛍光スペクトルを有し、2つの
2次元センサ10a,10bにおいて、解像度、感度、
画角を違えた画像を同時に取得することができる。部分
透過率は主に50:50で用いられることが多いが、こ
の範囲に留まらず任意の部分透過率で使用できる.
【0027】(第5の実施例)図8は本発明の第5の実
施例を示す構成図である。図8において、図1と同一要
素には同一符号を付して重複する説明は省略する。本実
施例は、共焦点スキャナ100において、第2のDM3
0が、波長分離特性を持つ回折格子(又は分光プリズ
ム)32である例を示したものである。本実施例は、回
折格子(又は分光プリズム)32への蛍光7の入斜角度
を変えることで、任意の波長を選択することができる。
【0028】(第6の実施例)図9は本発明の第6の実
施例を示す構成図である。図9において、図1と同一要
素には同一符号を付して重複する説明は省略する。本実
施例は、共焦点スキャナ100において、第2のDM3
0a及び第3のDM30b(戻り光分離手段)、リレー
レンズ9a,9b,9c(結像光学系)及び2次元セン
サ10a、10b、10c(検出手段)を配置し、3つ
に波長分離された共焦点蛍光画像を同時に取得する例を
示したものである。
【0029】
【発明の効果】以上のように、本発明の共焦点スキャナ
によれば、試料からの戻り光を、共焦点スキャナに組み
込んだ戻り光分離手段によって任意の複数の波長領域の
光又は複数の同一波長領域部分に分離できるので、任意
に分離した波長領域毎又は複数の同一波長領域部分毎の
共焦点画像を同時に、高速に、かつ分解能度の低下なし
に取得することができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明の第1の実施例を示す構成図である。
【図2】第1の実施例で用いた第1のダイクロイックミ
ラーの分光特性を示すグラフである。
【図3】第1の実施例で用いた第2のダイクロイックミ
ラーの分光特性を示すグラフである。
【図4】第1の実施例で用いたバリアフィルタの分光特
性を示すグラフである。
【図5】本発明の第2の実施例を示す構成図である。
【図6】本発明の第3の実施例を示す構成図である。
【図7】本発明の第4の実施例を示す構成図である。
【図8】本発明の第5の実施例を示す構成図である。
【図9】本発明の第6の実施例を示す構成図である。
【図10】顕微鏡と共に使用される共焦点スキャナの従
来例を示す構成図である。
【図11】顕微鏡と共に使用される共焦点スキャナの従
来例を示す構成図である。
【図12】共焦点スキャナを用いた従来のスクリーニン
グ方法の一例を示す構成図である。
【符号の説明】
1 照明用平行励起光束 2 マイクロレンズアレイディスク 3 ダイクロイックミラー 4 ピンホールアレイディスク 5 対物レンズ 7 蛍光信号 9 リレーレンズ 10 2次元センサ 20 バリアフィルタ 30 ダイクロイックミラー 31 ビームスプリッタ 32 回折格子又は分光プリズム 60 サンプル 100 共焦点スキャナ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大槻 真也 東京都武蔵野市中町2丁目9番32号 横河 電機株式会社内 Fターム(参考) 2G043 DA02 DA05 EA01 FA02 GA02 GA07 GB01 GB19 HA01 HA09 HA15 JA02 JA04 JA05 KA02 LA03 2H045 AG00 BA13 DA31 2H052 AA08 AA09 AB24 AC04 AC15 AC29 AD34 AF14

Claims (12)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 入射光の内の一部の波長領域の光は透過
    し、他部の波長領域の光は反射するダイクロイックミラ
    ーと、複数のピンホールを有する回転可能なピンホール
    アレイディスクとを具備し、光源からの照射光をダイク
    ロイックミラーに入射させ、ダイクロイックミラーを透
    過してピンホールアレイディスクを通過した光を試料に
    対して走査するとともに、ピンホールアレイディスクを
    通過した試料からの戻り光を前記ダイクロイックミラー
    に入射させ、該戻り光の一部又は全部をダイクロイック
    ミラーで反射させる共焦点スキャナにおいて、ダイクロ
    イックミラーで反射された試料からの戻り光を複数の波
    長領域の光又は複数の同一波長領域部分に分離する戻り
    光分離手段を備えたことを特徴とする共焦点スキャナ。
  2. 【請求項2】 入射光の内の励起光波長の光は透過し、
    蛍光波長の光は反射するダイクロイックミラーと、複数
    のピンホールを有する回転可能なピンホールアレイディ
    スクとを具備し、光源からの照射光をダイクロイックミ
    ラーに入射させ、ダイクロイックミラーを透過してピン
    ホールアレイディスクを通過した光を試料に対して走査
    するとともに、ピンホールアレイディスクを通過した試
    料からの蛍光を前記ダイクロイックミラーに入射させ、
    該蛍光の一部又は全部をダイクロイックミラーで反射さ
    せる共焦点スキャナにおいて、ダイクロイックミラーで
    反射された試料からの蛍光を複数の波長領域の光又は複
    数の同一波長領域部分に分離する戻り光分離手段を備え
    たことを特徴とする請求項1に記載の共焦点スキャナ。
  3. 【請求項3】 戻り光分離手段が、前記光源からの照射
    光及び試料からの蛍光を入射させるダイクロイックミラ
    ー(第1のダイクロイックミラー)とは反射透過特性の
    異なる1つ又は2つ以上の戻り光分離用ダイクロイック
    ミラーを備えたことを特徴とする請求項1又は2に記載
    の共焦点スキャナ。
  4. 【請求項4】 第1のダイクロイックミラーの反射波長
    帯域が、戻り光分離用ダイクロイックミラーの反射波長
    帯域を含んでいることを特徴とする請求項3に記載の共
    焦点スキャナ。
  5. 【請求項5】 第1のダイクロイックミラーの反射波長
    帯域が、戻り光分離用ダイクロイックミラーの透過波長
    帯域を含んでいることを特徴とする請求項3又は4に記
    載の共焦点スキャナ。
  6. 【請求項6】 戻り光分離手段により分離された複数の
    波長領域の光又は複数の同一波長領域部分をそれぞれ検
    出手段により検出するための結像光学系を備えたことを
    特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載の共焦点
    スキャナ。
  7. 【請求項7】 戻り光分離手段と検出手段との間に、戻
    り光分離手段により分離された複数の波長領域の光又は
    複数の同一波長領域部分の少なくとも1つから迷光を除
    去する迷光除去手段を設けたことを特徴とする請求項6
    に記載の共焦点スキャナ。
  8. 【請求項8】 第1のダイクロイックミラー及び1つ又
    は2つ以上の戻り光分離用ダイクロイックミラーが、そ
    れぞれ平板ミラー又はプリズムミラーであることを特徴
    とする請求項3〜7のいずれか1項に記載の共焦点スキ
    ャナ。
  9. 【請求項9】 戻り光分離用ダイクロイックミラーであ
    る平板ミラー又はプリズムミラーの一部又は全部が、波
    長分離特性は持たず部分透過特性を持つ平板ガラス又は
    プリズムに置換されていることを特徴とする請求項8に
    記載の共焦点スキャナ。
  10. 【請求項10】 戻り光分離用ダイクロイックミラーで
    ある平板ミラー又はプリズムミラーの一部又は全部が、
    波長分離特性を持つ回折格子又は分光プリズムに置換さ
    れていることを特徴とする請求項8に記載の共焦点スキ
    ャナ。
  11. 【請求項11】 入射光の内の一部の波長領域の光は透
    過し、他部の波長領域の光は反射するダイクロイックミ
    ラーと、複数のピンホールを有する回転可能なピンホー
    ルアレイディスクとを具備し、光源からの照射光をダイ
    クロイックミラーに入射させ、ダイクロイックミラーで
    反射してピンホールアレイディスクを通過した光を試料
    に対して走査するとともに、ピンホールアレイディスク
    を通過した試料からの戻り光を前記ダイクロイックミラ
    ーに入射させ、該戻り光の一部又は全部をダイクロイッ
    クミラーに透過させる共焦点スキャナにおいて、ダイク
    ロイックミラーを透過した試料からの戻り光を複数の波
    長領域の光又は複数の同一波長領域部分に分離する戻り
    光分離手段を備えたことを特徴とする共焦点スキャナ。
  12. 【請求項12】 入射光の内の励起光波長の光は反射
    し、蛍光波長の光は透過するダイクロイックミラーと、
    複数のピンホールを有する回転可能なピンホールアレイ
    ディスクとを具備し、光源からの照射光をダイクロイッ
    クミラーに入射させ、ダイクロイックミラーで反射して
    ピンホールアレイディスクを通過した光を試料に対して
    走査するとともに、ピンホールアレイディスクを通過し
    た試料からの蛍光を前記ダイクロイックミラーに入射さ
    せ、該蛍光の一部又は全部をダイクロイックミラーに透
    過させる共焦点スキャナにおいて、ダイクロイックミラ
    ーを透過した試料からの蛍光を複数の波長領域の光又は
    複数の同一波長領域部分に分離する戻り光分離手段を備
    えたことを特徴とする請求項11に記載の共焦点スキャ
    ナ。
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