JP2001231567A - テロメア長の調節方法 - Google Patents

テロメア長の調節方法

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JP2001231567A JP2000041929A JP2000041929A JP2001231567A JP 2001231567 A JP2001231567 A JP 2001231567A JP 2000041929 A JP2000041929 A JP 2000041929A JP 2000041929 A JP2000041929 A JP 2000041929A JP 2001231567 A JP2001231567 A JP 2001231567A
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Kunifumi Ota
邦史 太田
Takehiko Shibata
武彦 柴田
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 テロメア長の調節方法の提供。 【解決手段】 Mre11タンパク質をコードするDNA又はMr
e11タンパク質のＣ末端ドメインの一部若しくは全部を
欠失したタンパク質をコードするDNAを細胞に導入する
ことを特徴とするテロメア長の調節方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、真核細胞中の内在
性Mre11タンパク質の生理学的活性を修飾することを特
徴とするテロメア長の調節方法、真核細胞中の内在性Mr
e11タンパク質の生理学的活性を修飾する物質を有効成
分として含有してなるテロメア長調節剤及び真核細胞中
の内在性Mre11タンパク質の生理学的活性を修飾する物
質を有効成分として含有してなるテロメア長関連疾患の
遺伝子治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】テロメアは、真核細胞において線状染色
体を構成する二本鎖DNAの末端に存在する機能構造体で
ある。この構造体は、多くの場合、単純な反復配列から
成り、染色体同志の融合による染色体異常の防止、減数
分裂期における相同染色体対合、遺伝子の発現制御、核
内における染色体の存在様式の決定などに重要な役割を
果たすことが知られている。
【０００３】一般的に、二本鎖DNAの複製は、まずプラ
イマーゼによりRNAプライマーが合成され、次いでDNAポ
リメラーゼにより、その先にDNA鎖が伸長合成されるこ
とにより行われる。RNAプライマーは、DNAポリメラーゼ
の5'-3'エキソヌクレアーゼ活性によって除去されると
同時に、除去された部分はDNAポリメラーゼによってDNA
鎖に置き換えられる。ところが、線状染色体の場合、新
生鎖の5'最末端のRNAプライマーはDNA鎖に置き換えられ
ることがないため、複製が終了したときには、RNAプラ
イマーのサイズ分だけ短縮化することになる。従って、
細胞分裂を繰り返す度に、娘細胞の染色体の末端は次第
に短縮することになり、最後には染色体が不安定になり
細胞は死に至る。一方、ガン細胞や生殖細胞などの不死
化細胞中では、テロメアを伸長させることのできるテロ
メラーゼが高発現しており、テロメア長の短縮が生じな
いことが明らかにされている。そこで、テロメラーセ活
性の調節を作用機作とする細胞寿命調節剤や抗ガン剤の
検索が活発に行われている。
【０００４】しかし、最近、酵母やマウスなどでテロメ
ラーゼの遺伝子を破壊した場合でもテロメアが短縮する
までに時間がかかること[Blasco, M. A.,et al.:Cell,
91:25-34 (1997)；Rudolph, K. L., et al.:Cell, 96:7
01-12 (1999)；Herrera, E.,et al.:Embo J, 18:2950-6
0(1999)］、テロメラーゼの活性には直接関係のない遺
伝子の変異体でもテロメアの短縮や伸長が起こること[B
oulton, S. J.,et al.:Embo J, 17:1819-28 (1998)；Fu
ruse, M., et al.: Embo J, 17:6412-25(1998)；Wilso
n, S., et al.:Nucleic Acids Res, 27:2655-61(1999)]
が明らかとなり、テロメラーゼ以外の機能によってもテ
ロメアが維持されている可能性が指摘されている[Nakam
ura, T. M., et al.:Science, 282:493-6 (1998)；Redd
el, R. R., et al. A review. Biochemistry (Mosc), 6
2:1254-62 (1997)］。なかでも、DNAの二本鎖切断の修
復等に関与していることが知られていたMre11-Rad50-Xr
s2複合体が、テロメア長の調節にも関わっていることが
報告された[Boulton, S. J. , et al.: Embo J, 17: 18
19-28 (1998)；Furuse, M.,et al.:Embo J, 17:6412-25
(1998)；Le, S., et al.: Genetics, 152:143-52 (199
9)］。Mre11-Rad50-Xrs2(Nbs1)複合体［Ajimura, M.,et
al.: Genetics, 133:51-66 (1993)；Johzuka, K.,et a
l.:Genetics, 139:1521-32 (1995)］は、強いDNA結合能
を有する二本鎖DNAエキソヌクレアーゼ・一本鎖DNAエン
ドヌクレアーゼとしての機能を有するMre11を中心に形
成されるタンパク質複合体であり［Furuse, M.,et al.:
Embo J,17:6412-25 (1998)；Paull, T. T.,et al.: Mol
Cell, 1:969-79 (1998)；Usui, T.,et al.:Cell, 95:7
05-16 (1998)；Trujillo, K. M.,et al.:J Biol Chem,2
73:21447-50 (1998)］、DNA二本鎖切断の修復や染色体
組換えの開始反応に必須な酵素である。出芽酵母サッカ
ロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)や
分裂酵母シゾサッカロマイセズ・ポンベ(Schizosacchar
omyces pombe)では、この複合体酵素の構成タンパク質
の一つでも失われると、テロメアの顕著な短縮が見られ
る［Boulton, S. J.,et al.:Embo J, 17:1819-28 (199
8)］。Mre11-Rad50-Xrs2(Nbs1)複合体の各構成タンパク
質は、いずれもそのホモログがヒト中に存在し［Dolgan
ov, G. M.,et al.:Mol Cell Biol, 16:4832-41 (199
6)；Petrini, J. H.,et al.:Genomics, 29: 80-6 (199
5)］、酵母からヒトに至る真核生物全般で共通の役割を
果たすと考えられている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、真核細胞中
の内在性Mre11タンパク質の生理学的活性を修飾するこ
とを特徴とするテロメア長の調節方法を提供することを
目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
に基づいて鋭意研究を行った結果、真核細胞中の内在性
Mre11タンパク質の生理学的活性を修飾することによ
り、該細胞のテロメア長を調節することができることを
見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】すなわち、本発明は、真核細胞中の内在性
Mre11タンパク質の生理学的活性を修飾することを特徴
とするテロメア長の調節方法である。ここで、内在性Mr
e11タンパク質の生理学的活性の修飾は、外来Mre11タン
パク質をコードするDNA又は外来Mre11タンパク質のヌク
レアーゼドメイン若しくはＣ末端ドメインを改変したタ
ンパク質をコードするDNAを、該DNAが発現可能な状態
で、細胞内に導入することにより行われ得る。
【０００８】さらに、本発明は、真核細胞中の内在性Mr
e11タンパク質の生理学的活性を修飾する物質を有効成
分として含有してなる、テロメア長調節剤又はテロメア
長関連疾患（例えば、黒色腫、肝細胞癌、乳癌、胃癌、
脳腫瘍及び細胞老化性疾患など）の遺伝子治療剤であ
る。ここで、内在性Mre11タンパク質の生理学的活性を
修飾する物質としては、外来Mre11タンパク質をコード
するDNA又は外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼドメイ
ン若しくはＣ末端ドメインを改変したタンパク質をコー
ドするDNAを発現可能な状態で含有してなるDNA構築物が
挙げられる。
【０００９】本発明において、前記外来Mre11タンパク
質としては、以下の(a)又は(b)のタンパク質が挙げられ
る。 (a) 配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
を含むタンパク質 (b) 配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
において１若しくは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは
付加されたアミノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質
の生理学的活性を有するタンパク質
【００１０】さらに、本発明において、前記外来Mre11
タンパク質をコードするDNAとしては、以下の(c)又は
(d)のDNAが挙げられる。 (c) 配列番号１又は配列番号３で表される塩基配列を含
むDNA (d) (c)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性を有する
タンパク質をコードするDNA
【００１１】さらに、本発明において、前記外来Mre11
タンパク質のヌクレアーゼドメインを改変したタンパク
質としては、以下の(e)又は(f)のタンパク質が挙げられ
る。 (e) 配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
質 (f) 配列番号６で表されるアミノ酸配列において１若し
くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
（ヌクレアーゼ活性を除く）を有するタンパク質
【００１２】さらに、本発明において、前記外来Mre11
タンパク質のヌクレアーゼドメインを改変したタンパク
質をコードするDNAとしては、以下の(g)又は(h)のDNAが
挙げられる。 (g) 配列番号５で表される塩基配列を含むDNA (h) (g)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（ヌクレ
アーゼ活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
A
【００１３】さらに、本発明において、前記外来Mre11
タンパク質のＣ末端ドメインを改変したタンパク質とし
ては、以下の(i)又は(j)のタンパク質が挙げられる。 (i) 配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
質 (j) 配列番号８で表されるアミノ酸配列において１若し
くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
（二本鎖DNA結合活性を除く）を有するタンパク質
【００１４】さらに、本発明において、前記外来Mre11
タンパク質のＣ末端ドメインを改変したタンパク質をコ
ードするDNAとしては、以下の(k)又は(l)のDNAが挙げら
れる。 (k) 配列番号７で表される塩基配列を含むDNA (l) (k)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（二本鎖D
NA結合活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
A 以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明のテロメア長の調節方法
は、真核細胞中の内在性Mre11タンパク質の生理学的活
性を修飾することに基礎を置くものである。ここで、
「テロメア長の調節」とは、細胞内のテロメア長を短縮
化すること及び細胞内のテロメラーゼ長を維持若しくは
伸長することをいう。「内在性Mre11タンパク質」と
は、細胞中に元来存在し且つMre11タンパク質の生理学
的活性を有するタンパク質をいう。「Mre11タンパク質
の生理学的活性」とは、Rad50タンパク質及びXrs2(Nbs
1)タンパク質と複合体を形成する活性、二本鎖DNA結合
活性、二本鎖DNAエキソヌクレアーゼ活性及び一本鎖DNA
エンドヌクレアーゼ活性の少なくとも１つをいう。な
お、二本鎖DNAエキソヌクレアーゼ活性及び一本鎖DNAエ
ンドヌクレアーゼ活性をまとめてヌクレアーゼ活性とい
う。さらに、「修飾」とは、内在性Mre11タンパク質の
生理学的活性の一部又は全部を、増強、低減又は欠損さ
せることをいう。例えば、テロメア長の短縮化は、完全
長の外来Mre11タンパク質をコードするDNA又は外来Mre1
1タンパク質のヌクレアーゼドメインを改変したタンパ
ク質をコードするDNAを、該DNAが発現可能な状態で、細
胞に導入することにより行うことができる。ここで、
「発現可能な状態」とは、DNA上にコードされているタ
ンパク質が、該DNAを導入した細胞内で生成されるよう
に、プロモーター等の発現に関わるDNA領域とともにベ
クター上に存在する状態をいう。一方、テロメア長の維
持若しくは伸長は、外来Mre11タンパク質のＣ末端ドメ
インを改変したタンパク質をコードするDNAを、該DNAが
発現可能な状態で、細胞に導入することにより行うこと
ができる。ここで、「外来Mre11タンパク質」とは、標
的細胞の外に由来するMre11タンパク質をいう。また、
「改変した」とは、機能ドメイン中の１以上のアミノ酸
を欠失、置換又は付加することをいう。
【００１６】１．外来Mre11タンパク質をコードするDNA
の調製 (1) 外来Mre11タンパク質をコードするDNAの供給源 テロメア長の調節に使用することができる外来Mre11タ
ンパク質をコードするDNAの供給源としては、Mre11タン
パク質をコードするDNAを保有する生物由来の細胞であ
れば特に限定されず、あらゆる生物由来の細胞を使用す
ることができる。例えば、ヒト（Homo sapiens）、マウ
ス（Mus musculus）、アフリカツメガエル（Xenopus la
evis）、ショウジョウバエ（Drosophila melanogaste
r）、シロイヌナズナ（Arabidopsis thaliana）、サッ
カロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisia
e）、ネナガヒトヨタケ（Coprinus cinereus）、シゾサ
ッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pomb
e）などの様々な真核生物由来の細胞が挙げられる。好
ましくは、テロメア長の調節に使用する外来Mre11タン
パク質をコードするDNAは、テロメア長調節の標的とな
る細胞と同じ生物種由来のものであり得る。なお、シゾ
サッカロマイセス・ポンベにおいては、Mre11タンパク
質に相当するタンパク質は、Rad32と呼ばれている。例
えば、ヒト細胞のテロメア長を調節する場合には、ヒト
由来のMre11タンパク質をコードするDNAを用いることが
好ましく、サッカロマイセス・セレビシエ細胞のテロメ
ア長を調節する場合には、サッカロマイセス・セレビシ
エ由来のMre11タンパク質をコードするDNAを用いること
が好ましい。
【００１７】(2) 外来Mre11タンパク質をコードするDNA
の調製 外来Mre11タンパク質をコードするDNAは、上記(1)記載
の生物由来の細胞から調製したゲノムDNAライブラリー
若しくはcDNAライブラリーからのMre11タンパク質をコ
ードするDNAを含むクローンのスクリーニングによっ
て、あるいはゲノムDNAやcDNAなどを鋳型として用いたP
CRによる直接増幅によって得ることができる。
【００１８】例えば、cDNAライブラリーからのスクリー
ニングによってMre11タンパク質をコードするDNAを得る
場合に、まず、上記(1)の生物由来の細胞から、グアニ
ジンチオシアネート法等によってmRNAを調製する。次い
で、オリゴdT配列を含有する合成DNAプライマーをハイ
ブリダイズさせ、逆転写酵素により一本鎖cDNAを合成す
る。その後、大腸菌DNAポリメラーゼI、大腸菌DNAリガ
ーゼ、RNaseHを用いて常法に従って二本鎖cDNAを合成す
る。次いで、T4DNAポリメラーゼによりcDNAの末端を平
滑化した後、いわゆるEcoRIアダプター等のDNAアダプタ
ーをT4DNAリガーゼによりcDNA鎖の両末端に付加する。
次いで、DNAアダプターを付加したcDNA鎖を市販のλフ
ァージベクター（例えば、Stratagene社製λZAPなど）
又はプラスミドベクター（例えば、PromegaBiotech社製
pGEM2など）の制限酵素切断部位に常法に従って挿入す
ることにより、組換えλファージDNA群又は組換えプラ
スミドDNA群を調製する。
【００１９】次いで、組換えλファージDNA群について
は、市販のin vitroパッケージングキット（例えば、Pr
omegaBiotech社製ギガパック・ゴールドなど）などを用
いてin vitroパッケージングを行い、組換えλファージ
DNAを有するλファージ粒子を製造する。得られたλフ
ァージ粒子を常法［Maniatis, T., et al.： Molecular
Cloning. A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Sprin
g Harbor LaboratoryPress, 1989］に従い、例えば、大
腸菌などの宿主に形質導入し、得られた形質転換体を増
殖させることによってファージcDNAライブラリーを得る
ことができる。
【００２０】一方、組換えプラスミドDNA群について
は、常法に従い、例えば、プラスミドDNAを大腸菌など
の宿主に形質転換し、得られた形質転換体を増殖させる
ことによって、プラスミドcDNAライブラリーを得ること
ができる。
【００２１】次いで、上記形質転換体を増殖させ、例え
ばDupon社製ジーンスクリーニングプラスなどのナイロ
ン膜又はニトロセルロース膜上に移し取り、アルカリ存
在下でタンパク質を除去する。膜上のλファージDNA又
はプラスミドDNAに対して、Mre11タンパク質をコードす
るDNAの部分断片から作製した放射性標識プローブをハ
イブリダイズさせ、陽性クローンを選択する。ここで、
使用するプローブは、Mre11タンパク質の部分アミノ酸
配列をコードするDNAの塩基配列に基づいて作製したオ
リゴヌクレオチドプライマーを用い、 PCRによって調製
することができる。例えば、PCRによって、酵母Mre11タ
ンパク質をコードするDNAを含有するクローンのスクリ
ーニングに使用するプローブを調製する場合には、プラ
イマーとして、5'-gtgccattattatttcagaa-3'（配列番号
９）及び5'-gggatcaagtacaactattttc-3'（配列番号１
０）などを用いることができる。次いで、得られた陽性
クローンを培養し、培養物からファージDNA又はプラス
ミドDNAを調製する。
【００２２】また、PCRによる直接増幅によって、Mre11
タンパク質をコードするDNAを調製する場合、まず、常
法に従って、上記(1)の生物由来の細胞からゲノムDNA又
はcDNAを調製する。次いで、得られたゲノムDNA又はcDN
Aを鋳型とし、Mre11タンパク質のＮ末端側のアミノ酸配
列をコードするDNA及びＣ末端側のアミノ酸配列をコー
ドするDNAをプライマーとしてPCRを行う。次いで、PCR
増幅断片を適当なベクターに連結する。例えば、酵母Mr
e11タンパク質をコードするDNAを増幅するために使用す
ることができるプライマーとしては、5'-atggactatcctg
atccaga-3'(配列番号１１)及び5'-gggatcaagtacaactatt
ttc-3'（配列番号１２）などが挙げられる。なお、PCR
による直接増幅法によってMre11タンパク質をコードす
るDNAを得る場合には、DNA合成酵素として、ミスリーデ
ィングの少ないpfuポリメラーゼを使用することが好ま
しい。
【００２３】上記の方法によって、得られたDNAは、ジ
デオキシ法等の公知の手法により塩基配列を決定するこ
とによって、Mre11タンパク質をコードするDNAであるこ
とを確認する。塩基配列の決定は、通常は自動塩基配列
決定機（例えば、PERKIN-ELMER社製373A DNAシークエン
サー等）用いて行うことができる。
【００２４】配列番号１及び配列番号３に、それぞれサ
ッカロマイセス・セレビシエ及びヒト由来のMre11タン
パク質をコードするDNAの塩基配列を、配列番号２及び
４に、それぞれ該タンパク質のアミノ酸配列を例示する
が、このアミノ酸配列からなるタンパク質がMre11タン
パク質の生理学的活性を有する限り、当該アミノ酸配列
において１若しくは数個のアミノ酸に欠失、置換、付加
等の変異が生じてもよい。
【００２５】例えば、配列番号２若しくは配列番号４で
表されるアミノ酸配列の１若しくは数個、好ましくは20
〜30個程度、さらに好ましくは10〜20個をアミノ酸が欠
失してもよく、又は、配列番号２若しくは配列番号４で
表されるアミノ酸配列の１若しくは数個、好ましくは20
〜30個程度、さらに好ましくは10〜20個をアミノ酸が付
加してもよく、あるいは、配列番号２若しくは配列番号
４で表されるアミノ酸配列の１若しくは数個、好ましく
は20〜30個程度、さらに好ましくは10〜20個をアミノ酸
が他のアミノ酸に置換してもよい。
【００２６】また、上記遺伝子とストリンジェントな条
件下でハイブリダイズすることができるDNAも、Mre11タ
ンパク質の生理学的活性を有するタンパク質をコード限
り、本発明において使用することができる。「ストリン
ジェントな条件」とは、例えば、ナトリウム濃度が、33
〜70mM、好ましくは50〜66mMであり、温度が40〜70℃、
好ましくは55〜68℃での条件をいう。
【００２７】なお、Mre11タンパク質の生理学的活性と
は、前記のように、二本鎖DNA結合活性、二本鎖DNAエキ
ソヌクレアーゼ活性及び一本鎖DNAエンドヌクレアーゼ
活性をいうが、これらの活性は、古瀬らの方法［Furuse
et al．:EMBO J 17:6412-25(1998)]に従って測定する
ことができる。
【００２８】２．外来Mre11タンパク質をコードするDNA
への変異の導入 外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼドメインを改変し
た変異型Mre11タンパク質をコードするDNAを、該DNAが
発現可能な状態で細胞に導入した場合は、野生型Mre11
タンパク質をコードするDNAを導入した場合よりも、さ
らにテロメア長は短縮化される。一方、外来Mre11タン
パク質のＣ末端ドメインを改変した変異型Mre11タンパ
ク質をコードするDNAを、該DNAが発現可能な状態で細胞
に導入した場合は、野生型Mre11タンパク質をコードす
るDNAを導入した場合とは異なり、テロメア長は維持若
しくは伸長される。ここで、「ヌクレアーゼドメイン」
とは、Mre11タンパク質を構成するアミノ酸配列上で、
当該タンパク質の二本鎖DNAエキソヌクレアーゼ活性及
び一本鎖DNAエンドヌクレアーゼ活性を担うアミノ酸配
列をいう。具体的には、例えば酵母Mre11タンパク質に
おいては、Ｎ末端から225番目〜450番目の領域をいう。
「Ｃ末端ドメイン」とは、Mre11タンパク質を構成する
アミノ酸配列上で、当該タンパク質の二本鎖DNA結合活
性を担うカルボキシ末端側のアミノ酸配列をいう。具体
的には、例えば酵母Mre11タンパク質においては、Ｎ末
端から600番目以降の領域をいう。
【００２９】変異型Mre11タンパク質をコードするDNA
は、以下のようにして作製することができる。例えば、
Mre11タンパク質のヌクレーゼドメインの特定のアミノ
酸を別のアミノ酸に置換したタンパク質をコードするDN
Aの作製は、当該技術分野で周知の、PCRを利用した部位
特異的変異誘発法［西郷薫ら：分子生物学実験プロトコ
ールI、第263頁〜第270頁、丸善、1997］等により行う
ことができる。
【００３０】３．細胞へのMre11タンパク質又は変異型M
re11タンパク質をコードするDNAの導入 細胞へのMre11タンパク質又は変異型Mre11タンパク質を
コードするDNAの導入は、以下のようにして行うことが
できる。すなわち、上記１又は２において得られたMre1
1タンパク質又は変異型Mre11タンパク質をコードするDN
Aを含む組換えベクターを作製後、得られた組換えベク
ターを、宿主細胞に導入することにより行う。
【００３１】(1) 組換えベクターの作製 組換えベクターは、適当なベクターにMre11タンパク質
又は変異型Mre11タンパク質をコードするDNAを連結(挿
入)することにより得ることができる。ここで使用する
ことができるベクターは、宿主細胞中で複製し、可能な
ものであれば特に限定されず、例えば、プラスミドベク
ター、ウイルスベクター等が挙げられる。
【００３２】酵母宿主細胞用のプラスミドベクターとし
ては、pMAC561aur 、YEp13, YEp24,YCp50などが挙げら
れ、動物細胞宿主用のウイルスベクターとしてはレトロ
ウイルス又はワクシニアウイルスなどが挙げられる。ベ
クターへのMre11タンパク質又は変異型Mre11タンパク質
をコードするDNA の連結は、まず、該DNAを含むDNA断片
を適当な制限酵素で切り出し、上記ベクターDNAの制限
酵素部位又はマルチクローニングサイトに連結する方法
などが採用される。
【００３３】Mre11タンパク質又は変異型Mre11タンパク
質をコードするDNAは、導入された宿主細胞中で発現可
能な状態でベクターに組み込まれることが必要である。
そこで、本発明のベクターには、プロモーター、Mre11
タンパク質又は変異型Mre11タンパク質をコードするDNA
のほか、所望によりエンハンサーなどのシスエレメン
ト、スプライシングシグナル、ポリA付加シグナル、選
択マーカーなどを含有するものを連結することができ
る。なお、選択マーカーとしては、例えばジヒドロ葉酸
還元酵素遺伝子、ブラストサイジン耐性遺伝子、オーレ
オバシジン耐性遺伝子、G418耐性遺伝子等が挙げられ
る。
【００３４】なお、Mre11タンパク質のＮ末端から16番
目のアスパラギン酸がアラニンに置換されたMre11タン
パク質をコードするDNAを含む組換えベクターpMACMre11
D16A、及びＣ末端ドメインの欠失したMre11タンパク質
をコードするDNAを含む組換えベクターpMACMre11ΔC49
は、それぞれ大腸菌DH5α株に導入され(ERKNMRE11D16AY
OPAUR及びERKNMRE11DC49YOPAUR）、工業技術院生命工学
工業技術研究所（茨城県つくば市東１丁目１番３号）
に、平成11年12月22日付でFERM P-17683及びFERM P-1768
4として寄託されている。
【００３５】(2) 形質転換細胞の作製 形質転換細胞の作製は、組換えベクターを、目的遺伝子
が発現し得るように宿主中に導入することにより行うこ
とができる。ここで、宿主としては、テロメアを含む線
状染色体を有する真核生物細胞できるものであれば特に
限定されるものではない。例えば、サッカロミセス・セ
レビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、シゾサッカロミ
セス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)等の酵母が
挙げられ、COS細胞、CHO細胞等の動物細胞が挙げられ、
あるいはSf9、Sf21等の昆虫細胞が挙げられる。
【００３６】酵母を宿主とする場合は、例えばサッカロ
マイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、シ
ゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pomb
e)、ピヒア・パストリス(Pichia pastoris)などが用い
られる。この場合、プロモーターとしては酵母中で発現
できるものであれば特に限定されず、例えばgal1プロモ
ーター、gal10プロモーター、ヒートショックタンパク
質プロモーター、MFα1プロモーター、PHO5プロモータ
ー、PGKプロモーター、GAPプロモーター、ADHプロモー
ター、AOX1プロモーター等が挙げられる。酵母への組換
えベクターの導入方法としては、酵母にDNAを導入する
方法であれば特に限定されず、例えばエレクトロポレー
ション法[Becker, D.M. et al.：Methods. Enzymol., 1
94： 182(1990)]、スフェロプラスト法[Hinnen, A. et
al.：Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 75： 1929(197
8)]、酢酸リチウム法[Itoh, H.：J. Bacteriol., 153：
163(1983)]等が挙げられる。
【００３７】動物細胞を宿主とする場合は、サル細胞CO
S-7、Vero、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO細
胞）、マウスL細胞、ラットGH3、ヒトFL細胞などが用い
られる。プロモーターとしてSRαプロモーター、SV40プ
ロモーター、LTRプロモーター、CMVプロモーター等が用
いられ、また、ヒトサイトメガロウイルスの初期遺伝子
プロモーター等を用いてもよい。動物細胞への組換えベ
クターの導入方法としては、例えばエレクトロポレーシ
ョン法、リン酸カルシウム法、リポフェクション法等が
挙げられる。昆虫細胞を宿主とする場合は、Sf9細胞、S
f21細胞などが用いられる。昆虫細胞への組換えベクタ
ーの導入方法としては、例えばリン酸カルシウム法、リ
ポフェクション法、エレクトロポレーション法などが用
いられる。
【００３８】４．テロメア長の解析 テロメア長の解析は、テロメア配列に特異的にハイブリ
ダイズするプローブを用いるサザンハイブリダイゼーシ
ョン法によって行うことができる。例えば、酵母細胞の
テロメア長を解析する場合、まず対照の酵母細胞及び被
検酵母細胞からゲノムDNAを抽出する。次いで、得られ
たゲノムDNAを適当な制限酵素（例えば、XhoIなど）で
消化した後、アガロースゲル電気泳動によってDNA断片
を分離する。その後、ナイロン膜上にアルカリ条件下で
転写し、これにテロメア配列に特異的にハイブリダイズ
する標識プローブを適当な条件下でハイブリダイズさせ
る。ここで、プローブとしては、5'-gtgtgtgtgtgtgtgtg
tgt-3'（配列番号１３）の配列からなるオリゴヌクレオ
チドが挙げられる。膜を洗浄後、オートラジオグラフィ
ーまたはイメージングプレート（例えば、富士写真フィ
ルム社製BAS2000型）で視覚化し、対照酵母細胞のレー
ンと被検酵母細胞のレーンとを比較することによって、
テロメア長の長短を明らかにすることができる。
【００３９】５．テロメア長調節剤及びテロメア長関連
疾患の遺伝子治療剤としての応用 真核細胞中の内在性Mre11タンパク質の生理学的活性を
修飾することにより、該細胞中のテロメア長を調節する
ことが可能である。従って、真核細胞中の内在性Mre11
タンパク質の生理学的活性を改変する物質を有効成分と
して含有する薬剤は、テロメア長調節剤及びテロメア長
関連疾患の遺伝子治療剤として有用である。真核細胞中
の内在性Mre11タンパク質の生理学的活性を改変する物
質としては、例えば、Mre11タンパク質をコードするDNA
又はMre11タンパク質のヌクレアーゼドメイン又はＣ末
端ドメインを改変したタンパク質をコードするDNAを発
現可能な状態で含有してなるDNA構築物などが挙げられ
る。
【００４０】(1)テロメア長調節剤 Mre11タンパク質又はMre11タンパク質のヌクレアーゼド
メイン又はＣ末端ドメインを改変したタンパク質をコー
ドするDNAを発現可能な状態で含有するDNA構築物は、テ
ロメア長調節剤（例えば、テロメア長調節用試薬）とし
て有用である。すなわち、テロメアを有する染色体を有
する生物由来のあらゆる細胞について、テロメア長を調
節することが可能である。テロメア長の短縮化を促進す
る場合には、Mre11タンパク質又はMre11タンパク質のヌ
クレアーゼドメインを改変したタンパク質をコードする
DNAを発現可能な状態で含有するDNA構築物を細胞内に導
入する。一方、テロメア長を維持若しくは伸長する場合
には、Mre11タンパク質のＣ末端ドメインを改変したタ
ンパク質をコードするDNAを発現可能な状態で含有するD
NA構築物を細胞内に導入する。
【００４１】酵母細胞への遺伝子の導入方法としては、
酵母にDNAを導入する方法であれば特に限定されず、例
えばエレクトロポレーション法[Becker, D.M. et al.：
Methods. Enzymol., 194： 182(1990)]、スフェロプラ
スト法[Hinnen, A. et al.：Proc. Natl. Acad. Sci.,
USA, 75： 1929(1978)]、酢酸リチウム法[Itoh, H.：J.
Bacteriol., 153：163(1983)]等が挙げられる。動物細
胞への遺伝子の導入方法としては、例えばエレクトロポ
レーション法、リン酸カルシウム法、リポフェクション
法等が挙げられる。
【００４２】(2) テロメア長関連疾患の遺伝子治療剤 「テロメア長関連疾患」とは、疾患の発症にテロメア長
が関連するあらゆる疾患をいう。例えば、テロメラーゼ
活性が高まることによって染色体のテロメア長の短縮化
が生じない悪性腫瘍(例えば、黒色腫、肝細胞癌、乳
癌、胃癌、脳腫瘍など)や、正常細胞染色体のテロメア
長と比較してテロメア長の短縮化が昂進してる老化性疾
患などが挙げられる。Mre11タンパク質をコードするDNA
又はMre11タンパク質のヌクレアーゼドメイン若しくは
Ｃ末端ドメインを改変したタンパク質をコードするDNA
を発現可能な状態で含有するDNA構築物を、テロメア長
関連疾患に対する遺伝子治療剤として使用する場合は、
前記DNA構築物を注射や遺伝子銃等により直接投与する
方法が挙げられる。前記DNA構築物の作製することがで
きるベクターとしては、アデノウイルスベクター、アデ
ノ関連ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、
ワクシニアウイルスベクター、レトロウイルスベクター
等が挙げられ、これらのウイルスベクターを用いること
により効率よく、DNAを細胞内に移入することが可能と
なる。また、前記DNA構築物をリポソームなどのリン脂
質小胞に導入し、そのリポソームを投与する方法を採用
してもよい。すなわち、リポソームは、生物的に分解可
能な素材を含む閉鎖小胞であるため、リポソームと本発
明の遺伝子とを混合することにより、リポソーム内部の
水層や脂質二分子層に本発明の遺伝子を保持させる（リ
ポソーム-遺伝子複合体）。次に、該複合体を細胞とと
もに培養すると複合体中の遺伝子が細胞内に取り込まれ
る（リポフェクション法）。そして、得られる細胞を以
下の投与方法で投与すればよい。
【００４３】本発明の遺伝子治療剤の投与形態として
は、通常の静脈内、動脈内等の全身投与のほか、上皮組
織（皮膚の表皮）、各種臓器・組織等に局所投与を行う
こともできる。さらに、カテーテル技術、外科的手術等
と組み合わせた投与形態を採用することもできる。本発
明の遺伝子治療剤の投与量は、年齢、性別、症状、投与
経路、投与回数、剤型によって異なるが、通常は、本発
明の遺伝子の重量にすると成人1日あたり0.1〜100mg/bo
dyの範囲が適当である。
【００４４】
【実施例】以下に、本発明を実施例を示して具体的に説
明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものでは
ない。
【００４５】〔実施例１〕酵母Mre11タンパク質及び変
異型酵母Mre11タンパク質をコードするDNA組換えベクタ
ーの調製 (1)Mre11タンパク質をコードするDNAの調製 YEp24酵母-大腸菌シャトルベクターを用いて構築した酵
母DBY939株のゲノミックDNAライブラリー(M. Carlsonに
よって構築)を含有する大腸菌を、アンピシリンを含むL
B寒天培地上に植菌し、得られたコロニーをナイロン膜
状に固着させ、常法に従ってコロニー由来のDNAを膜に
固定した。MRE11タンパク質のＮ末端側のアミノ酸配列
をコードするDNA配列、及びＣ末端側のアミノ酸をコー
ドするDNA配列を持つオリゴヌクレオチドをプライマ
ー、出芽酵母野生型株ORD149株のゲノムDNAを鋳型とし
て、PCR反応を行った。得られたDNAを大腸菌ベクターに
クローニングし、この断片を切り出して[32P]-dCTPを用
いて標識した。このプローブを先に作製したナイロン膜
にストリンジェントな条件でハイブリダイズさせ、MRE1
1遺伝子断片を有するコロニーを識別した。このコロニ
ーを単離して、同様のコロニーハイブリダイゼーション
を繰り返し、MRE11遺伝子断片を有する単一クローンを
得た。このプラスミドDNAから制限酵素処理によってMRE
11断片を切り出し、別途大腸菌ベクターにクローニング
し、プラスミドpMRE11trを得た。
【００４６】(2) 変異型Mre11タンパク質をコードするD
NAの調製 上記(1)において得られたMre11タンパク質をコードする
DNAを用い、Hashimoto-Gotohらの方法［Hashimoto-Goto
h，T., et al.:Gene, 152:271-275(1995)］に従って、M
re11タンパク質のＣ末端ドメインを欠失したタンパク質
（D16A型Mre11タンパク質ともいう）、Ｎ末端から16番
目のアスパラギン酸がアラニンに置換されたタンパク質
（DC49型 Mre11タンパク質ともいう）及びMre11タンパ
ク質のＣ末端ドメインを欠失し且つＮ末端から16番目の
アスパラギン酸がアラニンに置換されたタンパク質をコ
ードするDNAを調製した。すなわち、16番目のコドンgat
をgct（47番目の塩基をaからc）へ一塩基置換を行ってD
16A変異の導入を行い、また643−644番目のコドンgct a
gtをgcc tagへ変更して終止コドンを導入しDC49型変異
の導入を行った。
【００４７】(3) Mre11タンパク質又は変異型Mre11タン
パク質をコードするDNAを含む組換えベクターの構築 上記(1)及び(2)において得られたMre11タンパク質及び
変異型Mre11タンパク質をコードするDNA断片を、図１に
示すように、オーレオバシジン耐性遺伝子を含む酵母・
大腸菌シャトルベクターpMAC561aurのADH1プロモーター
とCYC1ターミネーターとの間に存するEcoRI部位に挿入
することにより、酵母内大量発現を可能にするベクター
を構築した。野生型のMre11タンパク質をコードするDNA
を含む組換えベクターをpMACMre11WT、Ｎ末端から16番
目のアスパラギン酸がアラニンに置換されたMre11タン
パク質をコードするDNAを含む組換えベクターをpMACMre
11D16A、Ｃ末端ドメインの欠失したMre11タンパク質を
コードするDNAを含む組換えベクターをpMACMre11ΔC4
9、Ｎ末端から16番目のアスパラギン酸がアラニンに置
換され且つＣ末端ドメインの欠失したMre11タンパク質
をコードするDNAを含む組換えベクターをpMACMre11D16A
ΔC49と命名した。
【００４８】〔実施例２〕組換えベクターの酵母への形
質転換 実施例１において得られた組換えベクターを、以下のよ
うにして、フランス・キュリー研究所Alain Nicolas博
士から入手した酵母サッカロマシセス・セレビシエORD1
49株（arg4rv/arg4bg及びtrp1-289/trp1-289対立遺伝子
を有する二倍体）に形質転換した。すなわち、1Mソルビ
トール中で洗浄した酵母株をベクターと混合し、電気穿
孔法によってDNAを細胞内に導入した後、1Mソルビトー
ルを含むトリプトファン欠除寒天最小培地（酵母株はtr
p1遺伝子に変異を有し、ベクターは選択マーカーTRP1遺
伝子を有する）で培養し、プラスミドを有するコロニー
を選択した。これらの酵母株をさらに0.2μg/mlのオー
レオバシジンを含む培地中で培養した。
【００４９】〔実施例３〕テロメア長の解析 実施例２において得られた各形質転換体のテロメア長
を、以下のようにして解析した。すなわち、ベクターpM
AC561aurのみを持つ酵母細胞及び実施例２において得ら
れた組換えベクターpMACMre11WT、pMACMre11D16A、pMAC
Mre11ΔC49、pMACMre11D16AΔC49をそれぞれ有する形質
転換酵母細胞を、0.2μg/mlのオーレオバシジンを含む
栄養培地で12#16時間培養し、細胞を回収した。次い
で、常法に従い、細胞からゲノムDNAを抽出し、制限酵
素XhoIで消化後、アガロースゲル電気泳動によってDNA
断片を分離した。アガロースゲル上のDNA断片をナイロ
ン膜上にアルカリ条件下で吸引転写後、膜をChurchらの
方法［Church,G.M.ｅｔ．ａｌ．：Proc. Natl. Acad. S
ci.U.S.A., 81:1991-1995(1984)］に従い、サザンハイ
ブリダイゼーションによって解析した。プローブとして
は5'-gtgtgtgtgtgtgtgtgtgt-3'（配列番号１３）の20塩
基からなるオリゴヌクレオチドの5'末端を放射性同位元
素P32で標識したものを用い、50℃で20時間反応した。
洗浄の後、オートラジオグラフィーまたは富士フィルム
のイメージングプレートで視覚化した。
【００５０】酵母の染色体は、図２のような構造を有す
る。前記プローブのハイブリダイズし得る領域は、染色
体の末端のテロメア（Y'タイプ）以外にも染色体の途中
にも存在する（Xタイプ）。Mre11タンパク質をコードす
るDNAを有しないベクターだけを有する酵母に比べ、野
生型Mre11タンパク質を大量発現した場合、およびヌク
レアーゼドメインに変異を持つD16A型Mre11タンパク質
を大量発現した場合では、Xタイプ・Yタイプいずれのテ
ロメア領域においても短縮が見られた（図３）。特にヌ
クレアーゼドメインを変異させたD16A型Mre11タンパク
質を大量発現した酵母の方が、テロメア長の短縮は顕著
であった。これに対し、Ｃ末端の領域を欠くDC49型 Mre
11タンパク質を発現させた系ではXタイプ・Yタイプいず
れのテロメア領域においてもテロメア長の伸長が認めら
れた。以上のことより、Mre11タンパク質のＣ末端ドメ
インを欠失したタンパク質をコードするDNAを細胞に導
入することにより細胞のテロメア長を伸長することがで
き、Mre11タンパク質をコードするDNAを細胞に導入する
ことにより細胞のテロメア長を短縮化することが可能で
あることがわかった。
【００５１】
【発明の効果】本発明の方法により、テロメア長の調節
方法、テロメア長調節剤及びテロメア長関連疾患の遺伝
子治療剤が提供される。
【００５２】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> RIKEN ; Japan Science and Technology Corporation <120> The method of telomere length <130> P99-0437 <160> 13 <210> 1 <211> 2079 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <220> <221> CDS <222> (1)..(2076) <400> 1 atg gac tat cct gat cca gac aca ata agg att tta att act aca gat 48 Met Asp Tyr Pro Asp Pro Asp Thr Ile Arg Ile Leu Ile Thr Thr Asp 1 5 10 15 aat cat gtg ggt tac aac gaa aat gat ccc att act ggc gat gat tct 96 Asn His Val Gly Tyr Asn Glu Asn Asp Pro Ile Thr Gly Asp Asp Ser 20 25 30 tgg aaa act ttc cat gaa gtc atg atg ctg gcc aaa aat aac aac gta 144 Trp Lys Thr Phe His Glu Val Met Met Leu Ala Lys Asn Asn Asn Val 35 40 45 gac atg gtt gta cag tcc ggt gat ctt ttt cac gtg aat aag cct tcc 192 Asp Met Val Val Gln Ser Gly Asp Leu Phe His Val Asn Lys Pro Ser 50 55 60 aag aag tca ctc tac caa gta ctg aaa act ttg aga tta tgt tgc atg 240 Lys Lys Ser Leu Tyr Gln Val Leu Lys Thr Leu Arg Leu Cys Cys Met 65 70 75 80 ggt gac aag cct tgc gag tta gaa tta ttg agc gat ccc tca caa gtt 288 Gly Asp Lys Pro Cys Glu Leu Glu Leu Leu Ser Asp Pro Ser Gln Val 85 90 95 ttt cac tac gat gaa ttt acc aac gtt aac tat gag gac ccc aac ttt 336 Phe His Tyr Asp Glu Phe Thr Asn Val Asn Tyr Glu Asp Pro Asn Phe 100 105 110 aat att tct att ccc gta ttc ggc ata tca ggt aat cat gat gat gcg 384 Asn Ile Ser Ile Pro Val Phe Gly Ile Ser Gly Asn His Asp Asp Ala 115 120 125 tcg ggg gac tca ctg ttg tgt cct atg gat ata ctt cat gcg act ggt 432 Ser Gly Asp Ser Leu Leu Cys Pro Met Asp Ile Leu His Ala Thr Gly 130 135 140 cta ata aat cat ttc ggg aaa gtc atc gaa tct gat aaa ata aaa gtc 480 Leu Ile Asn His Phe Gly Lys Val Ile Glu Ser Asp Lys Ile Lys Val 145 150 155 160 gtg cca tta tta ttt cag aaa ggg tcc act aag tta gca ttg tac gga 528 Val Pro Leu Leu Phe Gln Lys Gly Ser Thr Lys Leu Ala Leu Tyr Gly 165 170 175 tta gcc gct gtt cgt gat gaa agg tta ttt aga act ttt aag gat ggt 576 Leu Ala Ala Val Arg Asp Glu Arg Leu Phe Arg Thr Phe Lys Asp Gly 180 185 190 ggt gtc act ttt gaa gta ccg act atg cga gaa ggt gaa tgg ttt aat 624 Gly Val Thr Phe Glu Val Pro Thr Met Arg Glu Gly Glu Trp Phe Asn 195 200 205 tta atg tgc gtc cat caa aat cat aca ggt cac acg aat act gca ttt 672 Leu Met Cys Val His Gln Asn His Thr Gly His Thr Asn Thr Ala Phe 210 215 220 tta cct gaa cag ttc ttg cca gat ttc ctg gat atg gtg ata tgg ggt 720 Leu Pro Glu Gln Phe Leu Pro Asp Phe Leu Asp Met Val Ile Trp Gly 225 230 235 240 cat gaa cat gag tgt att ccg aat ctc gta cac aat cca att aaa aat 768 His Glu His Glu Cys Ile Pro Asn Leu Val His Asn Pro Ile Lys Asn 245 250 255 ttt gat gta tta caa cct ggt tca tct gta gct act tca ctt tgt gag 816 Phe Asp Val Leu Gln Pro Gly Ser Ser Val Ala Thr Ser Leu Cys Glu 260 265 270 gct gag gca caa ccc aag tat gtc ttc atc ctt gac ata aag tat gga 864 Ala Glu Ala Gln Pro Lys Tyr Val Phe Ile Leu Asp Ile Lys Tyr Gly 275 280 285 gaa gca cca aaa atg aca cct att cct ctt gag act ata cgg aca ttc 912 Glu Ala Pro Lys Met Thr Pro Ile Pro Leu Glu Thr Ile Arg Thr Phe 290 295 300 aaa atg aaa tcc att tcg tta caa gat gtt ccc cat ttg agg cct cac 960 Lys Met Lys Ser Ile Ser Leu Gln Asp Val Pro His Leu Arg Pro His 305 310 315 320 gat aaa gat gct acg tct aag tat ctt att gaa caa gtt gaa gaa atg 1008 Asp Lys Asp Ala Thr Ser Lys Tyr Leu Ile Glu Gln Val Glu Glu Met 325 330 335 atc cgc gac gct aat gag gaa act aaa caa aaa tta gcg gac gat ggt 1056 Ile Arg Asp Ala Asn Glu Glu Thr Lys Gln Lys Leu Ala Asp Asp Gly 340 345 350 gaa ggt gac atg gtt gcg gaa tta ccg aaa cca ttg atc aga tta cgt 1104 Glu Gly Asp Met Val Ala Glu Leu Pro Lys Pro Leu Ile Arg Leu Arg 355 360 365 gtt gat tat agt gca ccc tcc aat aca caa tcc tca ata gat tac caa 1152 Val Asp Tyr Ser Ala Pro Ser Asn Thr Gln Ser Ser Ile Asp Tyr Gln 370 375 380 gta gaa aac ccg cgt aga ttt agc aat cga ttt gtg gga cgt gtt gct 1200 Val Glu Asn Pro Arg Arg Phe Ser Asn Arg Phe Val Gly Arg Val Ala 385 390 395 400 aac ggt aat aac gtt gtg cag ttt tat aaa aaa agg tca cct gta act 1248 Asn Gly Asn Asn Val Val Gln Phe Tyr Lys Lys Arg Ser Pro Val Thr 405 410 415 aga tca aaa aaa tcc ggt ata aat gga aca agc atc agt gat aga gat 1296 Arg Ser Lys Lys Ser Gly Ile Asn Gly Thr Ser Ile Ser Asp Arg Asp 420 425 430 gtt gag aaa ctt ttc agc gaa agt ggc ggt gaa cta gaa gtt caa act 1344 Val Glu Lys Leu Phe Ser Glu Ser Gly Gly Glu Leu Glu Val Gln Thr 435 440 445 ttg gtt aat gat ctc ttg aac aaa atg caa cta tct tta tta cca gaa 1392 Leu Val Asn Asp Leu Leu Asn Lys Met Gln Leu Ser Leu Leu Pro Glu 450 455 460 gtt ggt ttg aat gaa gca gta aag aag ttt gta gat aaa gat gag aaa 1440 Val Gly Leu Asn Glu Ala Val Lys Lys Phe Val Asp Lys Asp Glu Lys 465 470 475 480 aca gct ctt aaa gaa ttt att agc cat gaa ata tcg aac gaa gtt gga 1488 Thr Ala Leu Lys Glu Phe Ile Ser His Glu Ile Ser Asn Glu Val Gly 485 490 495 ata tta tct acg aat gaa gaa ttt ctg aga aca gat gat gca gag gaa 1536 Ile Leu Ser Thr Asn Glu Glu Phe Leu Arg Thr Asp Asp Ala Glu Glu 500 505 510 atg aaa gcg ctt ata aaa cag gtt aag cgt gct aac agt gtt agg ccg 1584 Met Lys Ala Leu Ile Lys Gln Val Lys Arg Ala Asn Ser Val Arg Pro 515 520 525 act ccc cct aaa gaa aat gat gag aca aat ttc gca ttc aat ggt aat 1632 Thr Pro Pro Lys Glu Asn Asp Glu Thr Asn Phe Ala Phe Asn Gly Asn 530 535 540 ggg cta gat tcc ttc cgg tct agt aat aga gaa gta aga act gga tct 1680 Gly Leu Asp Ser Phe Arg Ser Ser Asn Arg Glu Val Arg Thr Gly Ser 545 550 555 560 cca gac att acc caa tca cat gtt gat aat gaa tca aga ata acc cat 1728 Pro Asp Ile Thr Gln Ser His Val Asp Asn Glu Ser Arg Ile Thr His 565 570 575 att agt caa gcg gaa agc agt aag cca acg agc aaa ccc aaa cga gtg 1776 Ile Ser Gln Ala Glu Ser Ser Lys Pro Thr Ser Lys Pro Lys Arg Val 580 585 590 cga act gca acg aaa aag aaa att cct gct ttt tca gac tca act gtc 1824 Arg Thr Ala Thr Lys Lys Lys Ile Pro Ala Phe Ser Asp Ser Thr Val 595 600 605 ata tcc gat gca gaa aat gaa ctc ggt gat aat aac gat gct caa gat 1872 Ile Ser Asp Ala Glu Asn Glu Leu Gly Asp Asn Asn Asp Ala Gln Asp 610 615 620 gat gtt gat att gat gag aat gac ata att atg gtc agt act gac gaa 1920 Asp Val Asp Ile Asp Glu Asn Asp Ile Ile Met Val Ser Thr Asp Glu 625 630 635 640 gag gac gct agt tat ggt tta ctt aat ggt cga aaa aca aaa aca aag 1968 Glu Asp Ala Ser Tyr Gly Leu Leu Asn Gly Arg Lys Thr Lys Thr Lys 645 650 655 act cgt tct gct gcg agc acc aaa acc gct tcc aga agg gga aaa gga 2016 Thr Arg Ser Ala Ala Ser Thr Lys Thr Ala Ser Arg Arg Gly Lys Gly 660 665 670 aga gca tca agg acg cca aag acg gat att ctt gga agt ctc ctt gct 2064 Arg Ala Ser Arg Thr Pro Lys Thr Asp Ile Leu Gly Ser Leu Leu Ala 675 680 685 aag aaa aga aaa tag 2079 Lys Lys Arg Lys 690 <210> 2 <211> 692 <212> PRT <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 2 Met Asp Tyr Pro Asp Pro Asp Thr Ile Arg Ile Leu Ile Thr Thr Asp 1 5 10 15 Asn His Val Gly Tyr Asn Glu Asn Asp Pro Ile Thr Gly Asp Asp Ser 20 25 30 Trp Lys Thr Phe His Glu Val Met Met Leu Ala Lys Asn Asn Asn Val 35 40 45 Asp Met Val Val Gln Ser Gly Asp Leu Phe His Val Asn Lys Pro Ser 50 55 60 Lys Lys Ser Leu Tyr Gln Val Leu Lys Thr Leu Arg Leu Cys Cys Met 65 70 75 80 Gly Asp Lys Pro Cys Glu Leu Glu Leu Leu Ser Asp Pro Ser Gln Val 85 90 95 Phe His Tyr Asp Glu Phe Thr Asn Val Asn Tyr Glu Asp Pro Asn Phe 100 105 110 Asn Ile Ser Ile Pro Val Phe Gly Ile Ser Gly Asn His Asp Asp Ala 115 120 125 Ser Gly Asp Ser Leu Leu Cys Pro Met Asp Ile Leu His Ala Thr Gly 130 135 140 Leu Ile Asn His Phe Gly Lys Val Ile Glu Ser Asp Lys Ile Lys Val 145 150 155 160 Val Pro Leu Leu Phe Gln Lys Gly Ser Thr Lys Leu Ala Leu Tyr Gly 165 170 175 Leu Ala Ala Val Arg Asp Glu Arg Leu Phe Arg Thr Phe Lys Asp Gly 180 185 190 Gly Val Thr Phe Glu Val Pro Thr Met Arg Glu Gly Glu Trp Phe Asn 195 200 205 Leu Met Cys Val His Gln Asn His Thr Gly His Thr Asn Thr Ala Phe 210 215 220 Leu Pro Glu Gln Phe Leu Pro Asp Phe Leu Asp Met Val Ile Trp Gly 225 230 235 240 His Glu His Glu Cys Ile Pro Asn Leu Val His Asn Pro Ile Lys Asn 245 250 255 Phe Asp Val Leu Gln Pro Gly Ser Ser Val Ala Thr Ser Leu Cys Glu 260 265 270 Ala Glu Ala Gln Pro Lys Tyr Val Phe Ile Leu Asp Ile Lys Tyr Gly 275 280 285 Glu Ala Pro Lys Met Thr Pro Ile Pro Leu Glu Thr Ile Arg 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Glu Glu 500 505 510 Met Lys Ala Leu Ile Lys Gln Val Lys Arg Ala Asn Ser Val Arg Pro 515 520 525 Thr Pro Pro Lys Glu Asn Asp Glu Thr Asn Phe Ala Phe Asn Gly Asn 530 535 540 Gly Leu Asp Ser Phe Arg Ser Ser Asn Arg Glu Val Arg Thr Gly Ser 545 550 555 560 Pro Asp Ile Thr Gln Ser His Val Asp Asn Glu Ser Arg Ile Thr His 565 570 575 Ile Ser Gln Ala Glu Ser Ser Lys Pro Thr Ser Lys Pro Lys Arg Val 580 585 590 Arg Thr Ala Thr Lys Lys Lys Ile Pro Ala Phe Ser Asp Ser Thr Val 595 600 605 Ile Ser Asp Ala Glu Asn Glu Leu Gly Asp Asn Asn Asp Ala Gln Asp 610 615 620 Asp Val Asp Ile Asp Glu Asn Asp Ile Ile Met Val Ser Thr Asp Glu 625 630 635 640 Glu Asp Ala Ser Tyr Gly Leu Leu Asn Gly Arg Lys Thr Lys Thr Lys 645 650 655 Thr Arg Ser Ala Ala Ser Thr Lys Thr Ala Ser Arg Arg Gly Lys Gly 660 665 670 Arg Ala Ser Arg Thr Pro Lys Thr Asp Ile Leu Gly Ser Leu Leu Ala 675 680 685 Lys Lys Arg Lys 690 <210> 3 <211> 2319 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(2316) <400> 3 atg tcg gcc acg gga aag gtt tct agg cca att caa gtt ttc acg cgc 48 Met Ser Ala Thr Gly Lys Val Ser Arg Pro Ile Gln Val Phe Thr Arg 1 5 10 15 gca aac tat ttt ttc aaa ctc att ttt cag ttt aaa gtc cga aaa tat 96 Ala Asn Tyr Phe Phe Lys Leu Ile Phe Gln Phe Lys Val Arg Lys Tyr 20 25 30 aac tct ctc act gta gaa cgt att ttc ata aga gcc atg tgt ggc agt 144 Asn Ser Leu Thr Val Glu Arg Ile Phe Ile Arg Ala Met Cys Gly Ser 35 40 45 gat gac agt ttt gac gac ttt gta cca gat agt caa gag cca gca tct 192 Asp Asp Ser Phe Asp Asp Phe Val Pro Asp Ser Gln Glu Pro Ala Ser 50 55 60 tcg cgt acc cga aat cag gat cat ctc gac gat gac gag gtt ccc tgc 240 Ser Arg Thr Arg Asn Gln Asp His Leu Asp Asp Asp Glu Val Pro Cys 65 70 75 80 tca caa agg cca gat gct gcc aac gac act atg gtt gaa gat ctc gac 288 Ser Gln Arg Pro Asp Ala Ala Asn Asp Thr Met Val Glu Asp Leu Asp 85 90 95 gag gga gac gag cca gct cat gac gaa tct gag gac atc atc aaa att 336 Glu Gly Asp Glu Pro Ala His Asp Glu Ser Glu Asp Ile Ile Lys Ile 100 105 110 ctc gtt gcc act gat att cat tgc ggt tat gga gaa aat aaa gcc aac 384 Leu Val Ala Thr Asp Ile His Cys Gly Tyr Gly Glu Asn Lys Ala Asn 115 120 125 att cat atg gat gcc gtc aac act ttt gaa gaa gtg ctt caa att gcc 432 Ile His Met Asp Ala Val Asn Thr Phe Glu Glu Val Leu Gln Ile Ala 130 135 140 act gaa caa aaa gtc gat atg att tta ctt gga gga gat ctt ttt cat 480 Thr Glu Gln Lys Val Asp Met Ile Leu Leu Gly Gly Asp Leu Phe His 145 150 155 160 gaa aat aat cca tct aga gaa gtt caa cat cgt gtt aca caa ttg ctc 528 Glu Asn Asn Pro Ser Arg Glu Val Gln His Arg Val Thr Gln Leu Leu 165 170 175 cgt caa tat tgc ttg aat ggg aat cca atc gcg ttg gag ttt ctc tca 576 Arg Gln Tyr Cys Leu Asn Gly Asn Pro Ile Ala Leu Glu Phe Leu Ser 180 185 190 gat gct tct gtc aat ttt aat caa agt gtg ttt ggt cac gtg aac tat 624 Asp Ala Ser Val Asn Phe Asn Gln Ser Val Phe Gly His Val Asn Tyr 195 200 205 tac gat cag aat ttg aat gtc ggt ctt cca att ttc aca att cat gga 672 Tyr Asp Gln Asn Leu Asn Val Gly Leu Pro Ile Phe Thr Ile His Gly 210 215 220 aat cat gat gat cta tca gga aaa gga ctt act gct ctt gat ctt ctt 720 Asn His Asp Asp Leu Ser Gly Lys Gly Leu Thr Ala Leu Asp Leu Leu 225 230 235 240 cac gaa tct gga ctt gta aat ctg ttt gga aag cac agc aac att cag 768 His Glu Ser Gly Leu Val Asn Leu Phe Gly Lys His Ser Asn Ile Gln 245 250 255 gag ttt att gtt tca cca att ttg ctt aga aaa gga gaa act cgt ttg 816 Glu Phe Ile Val Ser Pro Ile Leu Leu Arg Lys Gly Glu Thr Arg Leu 260 265 270 gcg tta tac gga att gga agt caa aga gat gat cgt ctt gtt cga gca 864 Ala Leu Tyr Gly Ile Gly Ser Gln Arg Asp Asp Arg Leu Val Arg Ala 275 280 285 ttc aaa aat aat agt att tca ttt ttg cgg cca aac gct ggc gcc gag 912 Phe Lys Asn Asn Ser Ile Ser Phe Leu Arg Pro Asn Ala Gly Ala Glu 290 295 300 gat tgg ttt aat ttg ttt gtc ctc cat caa aat cgt cca cgg aga gcc 960 Asp Trp Phe Asn Leu Phe Val Leu His Gln Asn Arg Pro Arg Arg Ala 305 310 315 320 atg cac cga tcg aca gga aac ttt ctt ccc gaa tct ctg att cct caa 1008 Met His Arg Ser Thr Gly Asn Phe Leu Pro Glu Ser Leu Ile Pro Gln 325 330 335 ttc ttt gac ctt ctt att tgg gga cac gaa cac gaa tgt aaa cct gat 1056 Phe Phe Asp Leu Leu Ile Trp Gly His Glu His Glu Cys Lys Pro Asp 340 345 350 cct caa tat gtt gct tca tcg gaa gct gtt ggt gat gga ttt tac att 1104 Pro Gln Tyr Val Ala Ser Ser Glu Ala Val Gly Asp Gly Phe Tyr Ile 355 360 365 ctt caa cca gga tcg act gtt gct act tcg ctc act ccg gaa gaa gcc 1152 Leu Gln Pro Gly Ser Thr Val Ala Thr Ser Leu Thr Pro Glu Glu Ala 370 375 380 ctg cag aaa aat gca ttc cta ata aag att aaa gga aga aag ttt gct 1200 Leu Gln Lys Asn Ala Phe Leu Ile Lys Ile Lys Gly Arg Lys Phe Ala 385 390 395 400 tca aag cct att cct ctt caa aca gtt cgt cca atg gtt tgc gat gag 1248 Ser Lys Pro Ile Pro Leu Gln Thr Val Arg Pro Met Val Cys Asp Glu 405 410 415 ctt ctt ctt gat aaa ata cct cca gga agt aga ccg att ttg aaa act 1296 Leu Leu Leu Asp Lys Ile Pro Pro Gly Ser Arg Pro Ile Leu Lys Thr 420 425 430 gat cgt cca aaa cac acg gat ggc cga tac ata gat gaa att gcc att 1344 Asp Arg Pro Lys His Thr Asp Gly Arg Tyr Ile Asp Glu Ile Ala 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Asn Gln Pro Leu Val Asp 545 550 555 560 caa atg aca gtg ctc aaa ccg ata gga att gga aga gct tta gag caa 1728 Gln Met Thr Val Leu Lys Pro Ile Gly Ile Gly Arg Ala Leu Glu Gln 565 570 575 tat tca gca ata gaa gaa ggt ggt ctt gct aca tct gcg aat cgt aac 1776 Tyr Ser Ala Ile Glu Glu Gly Gly Leu Ala Thr Ser Ala Asn Arg Asn 580 585 590 ttt gat agt tgt ttg atg cat caa att gac gtt gtt cgt aaa aca ttg 1824 Phe Asp Ser Cys Leu Met His Gln Ile Asp Val Val Arg Lys Thr Leu 595 600 605 aaa aag atg cct ctg cct ccg att aac gat cca tcg gat tta gac aaa 1872 Lys Lys Met Pro Leu Pro Pro Ile Asn Asp Pro Ser Asp Leu Asp Lys 610 615 620 ttc cgt gat ctg atc acc aag gat tta tac gat atg aaa aaa gcc gat 1920 Phe Arg Asp Leu Ile Thr Lys Asp Leu Tyr Asp Met Lys Lys Ala Asp 625 630 635 640 agc gaa aga ttc aag aat cct gtt gcc gat gtt gaa atg gaa gaa gat 1968 Ser Glu Arg Phe Lys Asn Pro Val Ala Asp Val Glu Met Glu Glu Asp 645 650 655 gaa gac gat cct caa tac tat atg cct cca cag tct act tcg aga aca 2016 Glu Asp Asp Pro Gln Tyr Tyr Met Pro Pro Gln Ser Thr Ser Arg Thr 660 665 670 aat tat gct agc ggc agt gaa gat gaa gtg gca aat tct gat gaa gaa 2064 Asn Tyr Ala Ser Gly Ser Glu Asp Glu Val Ala Asn Ser Asp Glu Glu 675 680 685 atg gga agc agt atc tcg aga cat tcg aag caa cct acc aca cgt ggt 2112 Met Gly Ser Ser Ile Ser Arg His Ser Lys Gln Pro Thr Thr Arg Gly 690 695 700 aga ggt cgt ggt gcc aga gga gca ggt gct tca cga gaa act act cgt 2160 Arg Gly Arg Gly Ala Arg Gly Ala Gly Ala Ser Arg Glu Thr Thr Arg 705 710 715 720 gga aga tcc aat aaa gtt gtt tca acg cga caa atc gat tca gat gga 2208 Gly Arg Ser Asn Lys Val Val Ser Thr Arg Gln Ile Asp Ser Asp Gly 725 730 735 ttc gaa att atc aat gat tcg ccg tct ccg cct cca gct tca cga tca 2256 Phe Glu Ile Ile Asn Asp Ser Pro Ser Pro Pro Pro Ala Ser Arg Ser 740 745 750 acc aga gga aaa gca aga gga aaa tca gct cca tcc aag aaa agg gat 2304 Thr Arg Gly Lys Ala Arg Gly Lys Ser Ala Pro Ser Lys Lys Arg Asp 755 760 765 cta agt ttc ttc taa 2319 Leu Ser Phe Phe 770 <210> 4 <211> 772 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gat ccc att act ggc gat gat tct 96 Asn His Val Gly Tyr Asn Glu Asn Asp Pro Ile Thr Gly Asp Asp Ser 20 25 30 tgg aaa act ttc cat gaa gtc atg atg ctg gcc aaa aat aac aac gta 144 Trp Lys Thr Phe His Glu Val Met Met Leu Ala Lys Asn Asn Asn Val 35 40 45 gac atg gtt gta cag tcc ggt gat ctt ttt cac gtg aat aag cct tcc 192 Asp Met Val Val Gln Ser Gly Asp Leu Phe His Val Asn Lys Pro Ser 50 55 60 aag aag tca ctc tac caa gta ctg aaa act ttg aga tta tgt tgc atg 240 Lys Lys Ser Leu Tyr Gln Val Leu Lys Thr Leu Arg Leu Cys Cys Met 65 70 75 80 ggt gac aag cct tgc gag tta gaa tta ttg agc gat ccc tca caa gtt 288 Gly Asp Lys Pro Cys Glu Leu Glu Leu Leu Ser Asp Pro Ser Gln Val 85 90 95 ttt cac tac gat gaa ttt acc aac gtt aac tat gag gac ccc aac ttt 336 Phe His Tyr Asp Glu Phe Thr Asn Val Asn Tyr Glu Asp Pro Asn Phe 100 105 110 aat att tct att ccc gta ttc ggc ata tca ggt aat cat gat gat gcg 384 Asn Ile Ser Ile Pro Val Phe Gly Ile Ser Gly Asn His Asp Asp Ala 115 120 125 tcg ggg gac tca ctg ttg tgt cct atg gat ata ctt cat gcg act ggt 432 Ser Gly Asp Ser Leu Leu Cys Pro Met Asp Ile Leu His Ala Thr Gly 130 135 140 cta ata aat cat ttc ggg aaa gtc atc gaa tct gat aaa ata aaa gtc 480 Leu Ile Asn His Phe Gly Lys Val Ile Glu Ser Asp Lys Ile Lys Val 145 150 155 160 gtg cca tta tta ttt cag aaa ggg tcc act aag tta gca ttg tac gga 528 Val Pro Leu Leu Phe Gln Lys Gly Ser Thr Lys Leu Ala Leu Tyr Gly 165 170 175 tta gcc gct gtt cgt gat gaa agg tta ttt aga act ttt aag gat ggt 576 Leu Ala Ala Val Arg Asp Glu Arg Leu Phe Arg Thr Phe Lys Asp Gly 180 185 190 ggt gtc act ttt gaa gta ccg act atg cga gaa ggt gaa tgg ttt aat 624 Gly Val Thr Phe Glu Val Pro Thr Met Arg Glu Gly Glu Trp Phe Asn 195 200 205 tta atg tgc gtc cat caa aat cat aca ggt cac acg aat act gca ttt 672 Leu Met Cys Val His Gln Asn His Thr Gly His Thr Asn Thr Ala Phe 210 215 220 tta cct gaa cag ttc ttg cca gat ttc ctg gat atg gtg ata tgg ggt 720 Leu Pro Glu Gln Phe Leu Pro Asp Phe Leu Asp Met Val Ile Trp Gly 225 230 235 240 cat gaa cat gag tgt att ccg aat ctc gta cac aat cca att aaa aat 768 His Glu His Glu Cys Ile Pro Asn Leu Val His Asn Pro Ile Lys Asn 245 250 255 ttt gat gta tta caa cct ggt tca tct gta gct act tca ctt tgt gag 816 Phe Asp Val Leu Gln Pro Gly Ser Ser Val Ala Thr Ser Leu Cys Glu 260 265 270 gct gag gca caa ccc aag tat gtc ttc atc ctt gac ata aag tat gga 864 Ala Glu Ala Gln Pro Lys Tyr Val Phe Ile Leu Asp Ile Lys Tyr Gly 275 280 285 gaa gca cca aaa atg aca cct att cct ctt gag act ata cgg aca ttc 912 Glu Ala Pro Lys Met Thr Pro Ile Pro Leu Glu Thr Ile Arg Thr Phe 290 295 300 aaa atg aaa tcc att tcg tta caa gat gtt ccc cat ttg agg cct cac 960 Lys Met Lys Ser Ile Ser Leu Gln Asp Val Pro His Leu Arg Pro His 305 310 315 320 gat aaa gat gct acg tct aag tat ctt att gaa caa gtt gaa gaa atg 1008 Asp Lys Asp Ala Thr Ser Lys Tyr Leu Ile Glu Gln Val Glu Glu Met 325 330 335 atc cgc gac gct aat gag gaa act aaa caa aaa tta gcg gac gat ggt 1056 Ile Arg Asp Ala Asn Glu Glu Thr Lys Gln Lys Leu Ala Asp Asp Gly 340 345 350 gaa ggt gac atg gtt gcg gaa tta ccg aaa cca ttg atc aga tta cgt 1104 Glu Gly Asp Met Val Ala Glu Leu Pro Lys Pro Leu Ile Arg Leu Arg 355 360 365 gtt gat tat agt gca ccc tcc aat aca caa tcc tca ata gat tac caa 1152 Val Asp Tyr Ser Ala Pro Ser Asn Thr Gln Ser Ser Ile Asp Tyr Gln 370 375 380 gta gaa aac ccg cgt aga ttt agc aat cga ttt gtg gga cgt gtt gct 1200 Val Glu Asn Pro Arg Arg Phe Ser Asn Arg Phe Val Gly Arg Val Ala 385 390 395 400 aac ggt aat aac gtt gtg cag ttt tat aaa aaa agg tca cct gta act 1248 Asn Gly Asn Asn Val Val Gln Phe Tyr Lys Lys Arg Ser Pro Val Thr 405 410 415 aga tca aaa aaa tcc ggt ata aat gga aca agc atc agt gat aga gat 1296 Arg Ser Lys Lys Ser Gly Ile Asn Gly Thr Ser Ile Ser Asp Arg Asp 420 425 430 gtt gag aaa ctt ttc agc gaa agt ggc ggt gaa cta gaa gtt caa act 1344 Val Glu Lys Leu Phe Ser Glu Ser Gly Gly Glu Leu Glu Val Gln Thr 435 440 445 ttg gtt aat gat ctc ttg aac aaa atg caa cta tct tta tta cca gaa 1392 Leu Val Asn Asp Leu Leu Asn Lys Met Gln Leu Ser Leu Leu Pro Glu 450 455 460 gtt ggt ttg aat gaa gca gta aag aag ttt gta gat aaa gat gag aaa 1440 Val Gly Leu Asn Glu Ala Val Lys Lys Phe Val Asp Lys Asp Glu Lys 465 470 475 480 aca gct ctt aaa gaa ttt att agc cat gaa ata tcg aac gaa gtt gga 1488 Thr Ala Leu Lys Glu Phe Ile Ser His Glu Ile Ser Asn Glu Val Gly 485 490 495 ata tta tct acg aat gaa gaa ttt ctg aga aca gat gat gca gag gaa 1536 Ile Leu Ser Thr Asn Glu Glu Phe Leu Arg Thr Asp Asp Ala Glu Glu 500 505 510 atg aaa gcg ctt ata aaa cag gtt aag cgt gct aac agt gtt agg ccg 1584 Met Lys Ala Leu Ile Lys Gln Val Lys Arg Ala Asn Ser Val Arg Pro 515 520 525 act ccc cct aaa gaa aat gat gag aca aat ttc gca ttc aat ggt aat 1632 Thr Pro Pro Lys Glu Asn Asp Glu Thr Asn Phe Ala Phe Asn Gly Asn 530 535 540 ggg cta gat tcc ttc cgg tct agt aat aga gaa gta aga act gga tct 1680 Gly Leu Asp Ser Phe Arg Ser Ser Asn Arg Glu Val Arg Thr Gly Ser 545 550 555 560 cca gac att acc caa tca cat gtt gat aat gaa tca aga ata acc cat 1728 Pro Asp Ile Thr Gln Ser His Val Asp Asn Glu Ser Arg Ile Thr His 565 570 575 att agt caa gcg gaa agc agt aag cca acg agc aaa ccc aaa cga gtg 1776 Ile Ser Gln Ala Glu Ser Ser Lys Pro Thr Ser Lys Pro Lys Arg Val 580 585 590 cga act gca acg aaa aag aaa att cct gct ttt tca gac tca act gtc 1824 Arg Thr Ala Thr Lys Lys Lys Ile Pro Ala Phe Ser Asp Ser Thr Val 595 600 605 ata tcc gat gca gaa aat gaa ctc ggt gat aat aac gat gct caa gat 1872 Ile Ser Asp Ala Glu Asn Glu Leu Gly Asp Asn Asn Asp Ala Gln Asp 610 615 620 gat gtt gat att gat gag aat gac ata att atg gtc agt act gac gaa 1920 Asp Val Asp Ile Asp Glu Asn Asp Ile Ile Met Val Ser Thr Asp Glu 625 630 635 640 gag gac gct agt tat ggt tta ctt aat ggt cga aaa aca aaa aca aag 1968 Glu Asp Ala Ser Tyr Gly Leu Leu Asn Gly Arg Lys Thr Lys Thr Lys 645 650 655 act cgt tct gct gcg agc acc aaa acc gct tcc aga agg gga aaa gga 2016 Thr Arg Ser Ala Ala Ser Thr Lys Thr Ala Ser Arg Arg Gly Lys Gly 660 665 670 aga gca tca agg acg cca aag acg gat att ctt gga agt ctc ctt gct 2064 Arg Ala Ser Arg Thr Pro Lys Thr Asp Ile Leu Gly Ser Leu Leu Ala 675 680 685 aag aaa aga aaa tag 2079 Lys Lys Arg Lys 690 <210> 6 <211> 692 <212> PRT <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 6 Met Asp Tyr Pro Asp Pro Asp Thr Ile Arg Ile Leu Ile Thr Thr Ala 1 5 10 15 Asn His Val Gly Tyr Asn Glu Asn Asp Pro Ile Thr Gly Asp Asp Ser 20 25 30 Trp Lys Thr Phe His Glu Val Met Met Leu Ala Lys Asn Asn Asn Val 35 40 45 Asp Met Val Val Gln Ser Gly Asp Leu Phe His Val Asn Lys Pro Ser 50 55 60 Lys Lys Ser Leu Tyr Gln Val Leu Lys Thr Leu Arg Leu Cys Cys Met 65 70 75 80 Gly Asp Lys Pro Cys Glu Leu Glu Leu Leu Ser Asp Pro Ser Gln Val 85 90 95 Phe His Tyr Asp Glu Phe Thr Asn Val Asn Tyr Glu Asp Pro Asn Phe 100 105 110 Asn Ile Ser Ile Pro Val Phe Gly Ile Ser Gly Asn His Asp Asp Ala 115 120 125 Ser Gly Asp Ser Leu Leu Cys Pro Met Asp Ile Leu His Ala Thr Gly 130 135 140 Leu Ile Asn His Phe Gly Lys Val Ile Glu Ser Asp Lys Ile Lys Val 145 150 155 160 Val Pro Leu Leu Phe Gln Lys Gly Ser Thr Lys Leu Ala Leu Tyr Gly 165 170 175 Leu Ala Ala Val Arg Asp Glu Arg Leu Phe Arg Thr Phe Lys Asp Gly 180 185 190 Gly Val Thr Phe Glu Val Pro Thr Met Arg Glu Gly Glu Trp Phe Asn 195 200 205 Leu Met Cys Val His Gln Asn His Thr Gly His Thr Asn Thr Ala Phe 210 215 220 Leu Pro Glu Gln Phe Leu Pro Asp Phe Leu Asp Met Val Ile Trp Gly 225 230 235 240 His Glu His Glu Cys Ile Pro Asn Leu Val His Asn Pro Ile Lys Asn 245 250 255 Phe Asp Val Leu Gln Pro Gly Ser Ser Val Ala Thr Ser Leu Cys Glu 260 265 270 Ala Glu Ala Gln Pro Lys Tyr Val Phe Ile Leu Asp Ile Lys Tyr Gly 275 280 285 Glu Ala Pro Lys Met Thr Pro Ile Pro Leu Glu Thr Ile Arg Thr Phe 290 295 300 Lys Met Lys Ser Ile Ser Leu Gln Asp Val Pro His Leu Arg Pro His 305 310 315 320 Asp Lys Asp Ala Thr Ser Lys Tyr Leu Ile Glu Gln Val Glu Glu Met 325 330 335 Ile Arg Asp Ala Asn Glu Glu Thr Lys Gln Lys Leu Ala Asp Asp Gly 340 345 350 Glu Gly Asp Met Val Ala Glu Leu Pro Lys Pro Leu Ile Arg Leu Arg 355 360 365 Val Asp Tyr Ser Ala Pro Ser Asn Thr Gln Ser Ser Ile Asp Tyr Gln 370 375 380 Val Glu Asn Pro Arg Arg Phe Ser Asn Arg Phe Val Gly Arg Val Ala 385 390 395 400 Asn Gly Asn Asn Val Val Gln Phe Tyr Lys Lys Arg Ser Pro Val Thr 405 410 415 Arg Ser Lys Lys Ser Gly Ile Asn Gly Thr Ser Ile Ser Asp Arg Asp 420 425 430 Val Glu Lys Leu Phe Ser Glu Ser Gly Gly Glu Leu Glu Val Gln Thr 435 440 445 Leu Val Asn Asp Leu Leu Asn Lys Met Gln Leu Ser Leu Leu Pro Glu 450 455 460 Val Gly Leu Asn Glu Ala Val Lys Lys Phe Val Asp Lys Asp Glu Lys 465 470 475 480 Thr Ala Leu Lys Glu Phe Ile Ser His Glu Ile Ser Asn Glu Val Gly 485 490 495 Ile Leu Ser Thr Asn Glu Glu Phe Leu Arg Thr Asp Asp Ala Glu Glu 500 505 510 Met Lys Ala Leu Ile Lys Gln Val Lys Arg Ala Asn Ser Val Arg Pro 515 520 525 Thr Pro Pro Lys Glu Asn Asp Glu Thr Asn Phe Ala Phe Asn Gly Asn 530 535 540 Gly Leu Asp Ser Phe Arg Ser Ser Asn Arg Glu Val Arg Thr Gly Ser 545 550 555 560 Pro Asp Ile Thr Gln Ser His Val Asp Asn Glu Ser Arg Ile Thr His 565 570 575 Ile Ser Gln Ala Glu Ser Ser Lys Pro Thr Ser Lys Pro Lys Arg Val 580 585 590 Arg Thr Ala Thr Lys Lys Lys Ile Pro Ala Phe Ser Asp Ser Thr Val 595 600 605 Ile Ser Asp Ala Glu Asn Glu Leu Gly Asp Asn Asn Asp Ala Gln Asp 610 615 620 Asp Val Asp Ile Asp Glu Asn Asp Ile Ile Met Val Ser Thr Asp Glu 625 630 635 640 Glu Asp Ala Ser Tyr Gly Leu Leu Asn Gly Arg Lys Thr Lys Thr Lys 645 650 655 Thr Arg Ser Ala Ala Ser Thr Lys Thr Ala Ser Arg Arg Gly Lys Gly 660 665 670 Arg Ala Ser Arg Thr Pro Lys Thr Asp Ile Leu Gly Ser Leu Leu Ala 675 680 685 Lys Lys Arg Lys 690 <210> 7 <211> 1932 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <220> <221> CDS <222> (1)..(1929) <400> 7 atg gac tat cct gat cca gac aca ata agg att tta att act aca gat 48 Met Asp Tyr Pro Asp Pro Asp Thr Ile Arg Ile Leu Ile Thr Thr Asp 1 5 10 15 aat cat gtg ggt tac aac gaa aat gat ccc att act ggc gat gat tct 96 Asn His Val Gly Tyr Asn Glu Asn Asp Pro Ile Thr Gly Asp Asp Ser 20 25 30 tgg aaa act ttc cat gaa gtc atg atg ctg gcc aaa aat aac aac gta 144 Trp Lys Thr Phe His Glu Val Met Met Leu Ala Lys Asn Asn Asn Val 35 40 45 gac atg gtt gta cag tcc ggt gat ctt ttt cac gtg aat aag cct tcc 192 Asp Met Val Val Gln Ser Gly Asp Leu Phe His Val Asn Lys Pro Ser 50 55 60 aag aag tca ctc tac caa gta ctg aaa act ttg aga tta tgt tgc atg 240 Lys Lys Ser Leu Tyr Gln Val Leu Lys Thr Leu Arg Leu Cys Cys Met 65 70 75 80 ggt gac aag cct tgc gag tta gaa tta ttg agc gat ccc tca caa gtt 288 Gly Asp Lys Pro Cys Glu Leu Glu Leu Leu Ser Asp Pro Ser Gln Val 85 90 95 ttt cac tac gat gaa ttt acc aac gtt aac tat gag gac ccc aac ttt 336 Phe His Tyr Asp Glu Phe Thr Asn Val Asn Tyr Glu Asp Pro Asn Phe 100 105 110 aat att tct att ccc gta ttc ggc ata tca ggt aat cat gat gat gcg 384 Asn Ile Ser Ile Pro Val Phe Gly Ile Ser Gly Asn His Asp Asp Ala 115 120 125 tcg ggg gac tca ctg ttg tgt cct atg gat ata ctt cat gcg act ggt 432 Ser Gly Asp Ser Leu Leu Cys Pro Met Asp Ile Leu His Ala Thr Gly 130 135 140 cta ata aat cat ttc ggg aaa gtc atc gaa tct gat aaa ata aaa gtc 480 Leu Ile Asn His Phe Gly Lys Val Ile Glu Ser Asp Lys Ile Lys Val 145 150 155 160 gtg cca tta tta ttt cag aaa ggg tcc act aag tta gca ttg tac gga 528 Val Pro Leu Leu Phe Gln Lys Gly Ser Thr Lys Leu Ala Leu Tyr Gly 165 170 175 tta gcc gct gtt cgt gat gaa agg tta ttt aga act ttt aag gat ggt 576 Leu Ala Ala Val Arg Asp Glu Arg Leu Phe Arg Thr Phe Lys Asp Gly 180 185 190 ggt gtc act ttt gaa gta ccg act atg cga gaa ggt gaa tgg ttt aat 624 Gly Val Thr Phe Glu Val Pro Thr Met Arg Glu Gly Glu Trp Phe Asn 195 200 205 tta atg tgc gtc cat caa aat cat aca ggt cac acg aat act gca ttt 672 Leu Met Cys Val His Gln Asn His Thr Gly His Thr Asn Thr Ala Phe 210 215 220 tta cct gaa cag ttc ttg cca gat ttc ctg gat atg gtg ata tgg ggt 720 Leu Pro Glu Gln Phe Leu Pro Asp Phe Leu Asp Met Val Ile Trp Gly 225 230 235 240 cat gaa cat gag tgt att ccg aat ctc gta cac aat cca att aaa aat 768 His Glu His Glu Cys Ile Pro Asn Leu Val His Asn Pro Ile Lys Asn 245 250 255 ttt gat gta tta caa cct ggt tca tct gta gct act tca ctt tgt gag 816 Phe Asp Val Leu Gln Pro Gly Ser Ser Val Ala Thr Ser Leu Cys Glu 260 265 270 gct gag gca caa ccc aag tat gtc ttc atc ctt gac ata aag tat gga 864 Ala Glu Ala Gln Pro Lys Tyr Val Phe Ile Leu Asp Ile Lys Tyr Gly 275 280 285 gaa gca cca aaa atg aca cct att cct ctt gag act ata cgg aca ttc 912 Glu Ala Pro Lys Met Thr Pro Ile Pro Leu Glu Thr Ile Arg Thr Phe 290 295 300 aaa atg aaa tcc att tcg tta caa gat gtt ccc cat ttg agg cct cac 960 Lys Met Lys Ser Ile Ser Leu Gln Asp Val Pro His Leu Arg Pro His 305 310 315 320 gat aaa gat gct acg tct aag tat ctt att gaa caa gtt gaa gaa atg 1008 Asp Lys Asp Ala Thr Ser Lys Tyr Leu Ile Glu Gln Val Glu Glu Met 325 330 335 atc cgc gac gct aat gag gaa act aaa caa aaa tta gcg gac gat ggt 1056 Ile Arg Asp Ala Asn Glu Glu Thr Lys Gln Lys Leu Ala Asp Asp Gly 340 345 350 gaa ggt gac atg gtt gcg gaa tta ccg aaa cca ttg atc aga tta cgt 1104 Glu Gly Asp Met Val Ala Glu Leu Pro Lys Pro Leu Ile Arg Leu Arg 355 360 365 gtt gat tat agt gca ccc tcc aat aca caa tcc tca ata gat tac caa 1152 Val Asp Tyr Ser Ala Pro Ser Asn Thr Gln Ser Ser Ile Asp Tyr Gln 370 375 380 gta gaa aac ccg cgt aga ttt agc aat cga ttt gtg gga cgt gtt gct 1200 Val Glu Asn Pro Arg Arg Phe Ser Asn Arg Phe Val Gly Arg Val Ala 385 390 395 400 aac ggt aat aac gtt gtg cag ttt tat aaa aaa agg tca cct gta act 1248 Asn Gly Asn Asn Val Val Gln Phe Tyr Lys Lys Arg Ser Pro Val Thr 405 410 415 aga tca aaa aaa tcc ggt ata aat gga aca agc atc agt gat aga gat 1296 Arg Ser Lys Lys Ser Gly Ile Asn Gly Thr Ser Ile Ser Asp Arg Asp 420 425 430 gtt gag aaa ctt ttc agc gaa agt ggc ggt gaa cta gaa gtt caa act 1344 Val Glu Lys Leu Phe Ser Glu Ser Gly Gly Glu Leu Glu Val Gln Thr 435 440 445 ttg gtt aat gat ctc ttg aac aaa atg caa cta tct tta tta cca gaa 1392 Leu Val Asn Asp Leu Leu Asn Lys Met Gln Leu Ser Leu Leu Pro Glu 450 455 460 gtt ggt ttg aat gaa gca gta aag aag ttt gta gat aaa gat gag aaa 1440 Val Gly Leu Asn Glu Ala Val Lys Lys Phe Val Asp Lys Asp Glu Lys 465 470 475 480 aca gct ctt aaa gaa ttt att agc cat gaa ata tcg aac gaa gtt gga 1488 Thr Ala Leu Lys Glu Phe Ile Ser His Glu Ile Ser Asn Glu Val Gly 485 490 495 ata tta tct acg aat gaa gaa ttt ctg aga aca gat gat gca gag gaa 1536 Ile Leu Ser Thr Asn Glu Glu Phe Leu Arg Thr Asp Asp Ala Glu Glu 500 505 510 atg aaa gcg ctt ata aaa cag gtt aag cgt gct aac agt gtt agg ccg 1584 Met Lys Ala Leu Ile Lys Gln Val Lys Arg Ala Asn Ser Val Arg Pro 515 520 525 act ccc cct aaa gaa aat gat gag aca aat ttc gca ttc aat ggt aat 1632 Thr Pro Pro Lys Glu Asn Asp Glu Thr Asn Phe Ala Phe Asn Gly Asn 530 535 540 ggg cta gat tcc ttc cgg tct agt aat aga gaa gta aga act gga tct 1680 Gly Leu Asp Ser Phe Arg Ser Ser Asn Arg Glu Val Arg Thr Gly Ser 545 550 555 560 cca gac att acc caa tca cat gtt gat aat gaa tca aga ata acc cat 1728 Pro Asp Ile Thr Gln Ser His Val Asp Asn Glu Ser Arg Ile Thr His 565 570 575 att agt caa gcg gaa agc agt aag cca acg agc aaa ccc aaa cga gtg 1776 Ile Ser Gln Ala Glu Ser Ser Lys Pro Thr Ser Lys Pro Lys Arg Val 580 585 590 cga act gca acg aaa aag aaa att cct gct ttt tca gac tca act gtc 1824 Arg Thr Ala Thr Lys Lys Lys Ile Pro Ala Phe Ser Asp Ser Thr Val 595 600 605 ata tcc gat gca gaa aat gaa ctc ggt gat aat aac gat gct caa gat 1872 Ile Ser Asp Ala Glu Asn Glu Leu Gly Asp Asn Asn Asp Ala Gln Asp 610 615 620 gat gtt gat att gat gag aat gac ata att atg gtc agt act gac gaa 1920 Asp Val Asp Ile Asp Glu Asn Asp Ile Ile Met Val Ser Thr Asp Glu 625 630 635 640 gag gac gcc tag 1932 Glu Asp Ala <210> 8 <211> 643 <212> PRT <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 8 Met Asp Tyr Pro Asp Pro Asp Thr Ile Arg Ile Leu Ile Thr Thr Asp 1 5 10 15 Asn His Val Gly Tyr Asn Glu Asn Asp Pro Ile Thr Gly Asp Asp Ser 20 25 30 Trp Lys Thr Phe His Glu Val Met Met Leu Ala Lys Asn Asn Asn Val 35 40 45 Asp Met Val Val Gln Ser Gly Asp Leu Phe His Val Asn Lys Pro Ser 50 55 60 Lys Lys Ser Leu Tyr Gln Val Leu Lys Thr Leu Arg Leu Cys Cys Met 65 70 75 80 Gly Asp Lys Pro Cys Glu Leu Glu Leu Leu Ser Asp Pro Ser Gln Val 85 90 95 Phe His Tyr Asp Glu Phe Thr Asn Val Asn Tyr Glu Asp Pro Asn Phe 100 105 110 Asn Ile Ser Ile Pro Val Phe Gly Ile Ser Gly Asn His Asp Asp Ala 115 120 125 Ser Gly Asp Ser Leu Leu Cys Pro Met Asp Ile Leu His Ala Thr Gly 130 135 140 Leu Ile Asn His Phe Gly Lys Val Ile Glu Ser Asp Lys Ile Lys Val 145 150 155 160 Val Pro Leu Leu Phe Gln Lys Gly Ser Thr Lys Leu Ala Leu Tyr Gly 165 170 175 Leu Ala Ala Val Arg Asp Glu Arg Leu Phe Arg Thr Phe Lys Asp Gly 180 185 190 Gly Val Thr Phe Glu Val Pro Thr Met Arg Glu Gly Glu Trp Phe Asn 195 200 205 Leu Met Cys Val His Gln Asn His Thr Gly His Thr Asn Thr Ala Phe 210 215 220 Leu Pro Glu Gln Phe Leu Pro Asp Phe Leu Asp Met Val Ile Trp Gly 225 230 235 240 His Glu His Glu Cys Ile Pro Asn Leu Val His Asn Pro Ile Lys Asn 245 250 255 Phe Asp Val Leu Gln Pro Gly Ser Ser Val Ala Thr Ser Leu Cys Glu 260 265 270 Ala Glu Ala Gln Pro Lys Tyr Val Phe Ile Leu Asp Ile Lys Tyr Gly 275 280 285 Glu Ala Pro Lys Met Thr Pro Ile Pro Leu Glu Thr Ile Arg Thr Phe 290 295 300 Lys Met Lys Ser Ile Ser Leu Gln Asp Val Pro His Leu Arg Pro His 305 310 315 320 Asp Lys Asp Ala Thr Ser Lys Tyr Leu Ile Glu Gln Val Glu Glu Met 325 330 335 Ile Arg Asp Ala Asn Glu Glu Thr Lys Gln Lys Leu Ala Asp Asp Gly 340 345 350 Glu Gly Asp Met Val Ala Glu Leu Pro Lys Pro Leu Ile Arg Leu Arg 355 360 365 Val Asp Tyr Ser Ala Pro Ser Asn Thr Gln Ser Ser Ile Asp Tyr Gln 370 375 380 Val Glu Asn Pro Arg Arg Phe Ser Asn Arg Phe Val Gly Arg Val Ala 385 390 395 400 Asn Gly Asn Asn Val Val Gln Phe Tyr Lys Lys Arg Ser Pro Val Thr 405 410 415 Arg Ser Lys Lys Ser Gly Ile Asn Gly Thr Ser Ile Ser Asp Arg Asp 420 425 430 Val Glu Lys Leu Phe Ser Glu Ser Gly Gly Glu Leu Glu Val Gln Thr 435 440 445 Leu Val Asn Asp Leu Leu Asn Lys Met Gln Leu Ser Leu Leu Pro Glu 450 455 460 Val Gly Leu Asn Glu Ala Val Lys Lys Phe Val Asp Lys Asp Glu Lys 465 470 475 480 Thr Ala Leu Lys Glu Phe Ile Ser His Glu Ile Ser Asn Glu Val Gly 485 490 495 Ile Leu Ser Thr Asn Glu Glu Phe Leu Arg Thr Asp Asp Ala Glu Glu 500 505 510 Met Lys Ala Leu Ile Lys Gln Val Lys Arg Ala Asn Ser Val Arg Pro 515 520 525 Thr Pro Pro 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20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:synthetic DNA <400> 12 gggatcaagt acaactattt tc 22 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:synthetic DNA <400> 13 gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 20
【００５３】配列番号９：合成DNA 配列番号１０：合成DNA 配列番号１１：合成DNA 配列番号１２：合成DNA 配列番号１３：合成DNA
【図面の簡単な説明】
【図１】組換えベクターの構造を示した図である。
【図２】酵母染色体アームの概略図である。
【図３】組換えベクターを導入した酵母細胞のテロメア
長を示す電気泳動写真である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【書類名】 受託番号変更届
【整理番号】 ＲＪＨ１１−０４８
【提出日】 平成１３年 ２月１５日
【旧寄託機関の名称】 経済産業省産業技術総合研究所
生命工学工業技術研究所
【旧受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１７６８３
【新寄託機関の名称】 経済産業省産業技術総合研究所
生命工学工業技術研究所
【新受託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−７４２１
【旧寄託機関の名称】 経済産業省産業技術総合研究所
生命工学工業技術研究所
【旧受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１７６８４
【新寄託機関の名称】 経済産業省産業技術総合研究所
生命工学工業技術研究所
【新受託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−７４２２
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ Ｃ０７Ｋ 14/395 ４Ｈ０４５ Ｃ０７Ｈ 21/00 Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｚ Ｃ０７Ｋ 14/395 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｎ 9/16 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 柴田 武彦 埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所 内 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA11 CA03 CA04 DA03 DA06 DA12 EA04 FA15 GA11 HA01 HA14 HA17 4B050 CC03 DD02 DD04 DD07 LL01 4C057 MM04 MM09 4C084 AA13 BA01 BA08 BA22 BA23 CA01 CA04 CA05 CA13 CA18 CA19 CA23 CA49 CA51 DA27 NA14 ZB211 ZB261 4C087 AA01 AA03 BB21 BB31 BB65 BC12 BC34 CA12 CA16 CA44 MA66 NA14 ZB21 ZB26 4H045 AA20 AA30 BA10 CA11 CA15 CA40 DA89 EA28 FA74

Claims (26)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】真核細胞中の内在性Mre11タンパク質の生
    理学的活性を修飾することを特徴とするテロメア長の調
    節方法。
  2. 【請求項２】内在性Mre11タンパク質の生理学的活性の
    修飾が、外来Mre11タンパク質をコードするDNA又は外来
    Mre11タンパク質のヌクレアーゼドメイン若しくはＣ末
    端ドメインを改変したタンパク質をコードするDNAを、
    該DNAが発現可能な状態で、細胞内に導入することによ
    り行われるものである請求項１記載のテロメア長の調節
    方法。
  3. 【請求項３】外来Mre11タンパク質が、以下の(a)又は
    (b)のタンパク質である請求項２記載の調節方法。 (a)配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
    を含むタンパク質 (b) 配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
    において１若しくは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは
    付加されたアミノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質
    の生理学的活性を有するタンパク質
  4. 【請求項４】外来Mre11タンパク質をコードするDNAが、
    以下の(c)又は(d)のDNAである請求項２記載の調節方
    法。 (c) 配列番号１又は配列番号３で表される塩基配列を含
    むDNA (d) (c)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性を有する
    タンパク質をコードするDNA
  5. 【請求項５】外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼドメ
    インを改変したタンパク質が、以下の(e)又は(f)のタン
    パク質である請求項２記載の調節方法。 (e) 配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
    質 (f) 配列番号６で表されるアミノ酸配列において１若し
    くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
    ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
    （ヌクレアーゼ活性を除く）を有するタンパク質
  6. 【請求項６】外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼドメ
    インを改変したタンパク質をコードするDNAが、以下の
    (g)又は(h)のDNAである請求項２記載の調節方法。 (g) 配列番号５で表される塩基配列を含むDNA (h) (g)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（ヌクレ
    アーゼ活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
    A
  7. 【請求項７】外来Mre11タンパク質のＣ末端ドメインを
    改変したタンパク質が、以下の(i)又は(j)のタンパク質
    である請求項２記載の調節方法。 (i) 配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
    質 (j) 配列番号８で表されるアミノ酸配列において１若し
    くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
    ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
    （二本鎖DNA結合活性を除く）を有するタンパク質
  8. 【請求項８】外来Mre11タンパク質のＣ末端ドメインを
    改変したタンパク質をコードするDNAが、以下の(k)又は
    (l)のDNAである請求項２記載の調節方法。 (k) 配列番号７で表される塩基配列を含むDNA (l) (k)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（二本鎖D
    NA結合活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
    A
  9. 【請求項９】真核細胞中の内在性Mre11タンパク質の生
    理学的活性を修飾する物質を有効成分として含有してな
    るテロメア長調節剤。
  10. 【請求項１０】内在性Mre11タンパク質の生理学的活性
    を修飾する物質が、外来Mre11タンパク質をコードするD
    NA又は外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼドメイン若
    しくはＣ末端ドメインを改変したタンパク質をコードす
    るDNAを発現可能な状態で含有してなるDNA構築物である
    請求項９記載のテロメア長調節剤。
  11. 【請求項１１】外来Mre11タンパク質が、以下の(a)又は
    (b)のタンパク質である請求項１０記載のテロメア長調
    節剤。 (a) 配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
    を含むタンパク質 (b) 配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
    において１若しくは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは
    付加されたアミノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質
    の生理学的活性を有するタンパク質
  12. 【請求項１２】外来Mre11タンパク質をコードするDNA
    が、以下の(c)又は(d)のDNAである請求項１０記載のテ
    ロメア長調節剤。 (c) 配列番号１又は配列番号３で表される塩基配列を含
    むDNA (d) (c)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性を有する
    タンパク質をコードするDNA
  13. 【請求項１３】外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼド
    メインを改変したタンパク質が、以下の(e)又は(f)のタ
    ンパク質である請求項１０記載のテロメア長調節剤。 (e) 配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
    質 (f) 配列番号６で表されるアミノ酸配列において１若し
    くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
    ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
    （ヌクレアーゼ活性を除く）を有するタンパク質
  14. 【請求項１４】外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼド
    メインを改変したタンパク質をコードするDNAが、以下
    の(g)又は(h)のDNAである請求項１０記載のテロメア長
    調節剤。 (g) 配列番号５で表される塩基配列を含むDNA (h) (g)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（ヌクレ
    アーゼ活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
    A
  15. 【請求項１５】外来Mre11タンパク質のＣ末端ドメイン
    を改変したタンパク質が、以下の(i)又は(j)のタンパク
    質である請求項１０記載のテロメア長調節剤。 (i) 配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
    質 (j) 配列番号８で表されるアミノ酸配列において１若し
    くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
    ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
    （二本鎖DNA結合活性を除く）を有するタンパク質
  16. 【請求項１６】外来Mre11タンパク質のＣ末端ドメイン
    を改変したタンパク質をコードするDNAが、以下の(k)又
    は(l)のDNAである請求項１０記載のテロメア長調節剤。 (k) 配列番号７で表される塩基配列を含むDNA (l) (g)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（二本鎖D
    NA結合活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
    A
  17. 【請求項１７】真核細胞中の内在性Mre11タンパク質の
    生理学的活性を修飾する物質を有効成分として含有して
    なるテロメア長関連疾患の遺伝子治療剤。
  18. 【請求項１８】内在性Mre11タンパク質の生理学的活性
    を修飾する物質が、外来Mre11タンパク質をコードするD
    NA又は外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼドメイン若
    しくはＣ末端ドメインを改変したタンパク質をコードす
    るDNAを発現可能な状態で含有してなるDNA構築物である
    請求項１７記載の遺伝子治療剤。
  19. 【請求項１９】テロメア長関連疾患が、悪性腫瘍又は細
    胞老化性疾患である請求項１７記載の遺伝子治療剤。
  20. 【請求項２０】悪性腫瘍が、黒色腫、肝細胞癌、乳癌、
    胃癌、脳腫瘍からなる群から選択される少なくとも１つ
    である請求項１９記載の遺伝子治療剤。
  21. 【請求項２１】外来Mre11タンパク質が、以下の(a)又は
    (b)のタンパク質である請求項１８記載の遺伝子治療
    剤。 (a) 配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
    を含むタンパク質 (b) 配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
    において１若しくは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは
    付加されたアミノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質
    の生理学的活性を有するタンパク質
  22. 【請求項２２】外来Mre11タンパク質をコードするDNA
    が、以下の(c)又は(d)のDNAである請求項１８記載の遺
    伝子治療剤。 (c) 配列番号１又は配列番号３で表される塩基配列を含
    むDNA (d) (c)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性を有する
    タンパク質をコードするDNA
  23. 【請求項２３】外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼド
    メインを改変したタンパク質が、以下の(e)又は(f)のタ
    ンパク質である請求項１８記載の遺伝子治療剤。 (e) 配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
    質 (f) 配列番号６で表されるアミノ酸配列において１若し
    くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
    ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
    （ヌクレアーゼ活性を除く）を有するタンパク質
  24. 【請求項２４】外来Mre11タンパク質のヌクレアーゼド
    メインを改変したタンパク質をコードするDNAが、以下
    の(g)又は(h)のDNAである請求項１８記載の遺伝子治療
    剤。 (g) 配列番号５で表される塩基配列を含むDNA (h) (g)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（ヌクレ
    アーゼ活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
    A
  25. 【請求項２５】外来Mre11タンパク質のＣ末端ドメイン
    を改変したタンパク質が、以下の(i)又は(j)のタンパク
    質である請求項１８記載の遺伝子治療剤。 (i) 配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むタンパク
    質 (j) 配列番号８で表されるアミノ酸配列において１若し
    くは数個アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
    ノ酸配列を含み、且つMre11タンパク質の生理学的活性
    （二本鎖DNA結合活性を除く）を有するタンパク質
  26. 【請求項２６】外来Mre11タンパク質のＣ末端ドメイン
    を改変したタンパク質をコードするDNAが、以下の(k)又
    は(l)のDNAである請求項１８記載の遺伝子治療剤。 (k) 配列番号７で表される塩基配列を含むDNA (l) (g)のDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダ
    イズし、かつMre11タンパク質の生理学的活性（二本鎖D
    NA結合活性を除く）を有するタンパク質をコードするDN
    A
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