JP2001159621A - 電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法 - Google Patents
電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、プレキャストゲルを特定のｐＨと
特定の両性電解質を含む緩衝液を用いて調製することに
より、長期保存安定性を有する電気泳動用ポリアクリル
アミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方
法を提供する。 【解決手段】 ポリアクリルアミドプレキャストゲルを
特定範囲の使用量のトリス、グリシン、特定の塩基解離
定数、特定の添加量の両性電解質および、共存両性電解
質とグリシンの濃度合計の濃度が特定範囲の両性電解
質、および特定のｐＨである緩衝液を用いて調製するこ
とにより、保存安定性に優れ、半年から１年以上ゲルの
形状、泳動像に変化が無く保管有効期限が長い電気泳動
用ポリアクリルアミドプレキャストゲルが得られる。ま
た、このゲルを用いることにより、分析方法が普及して
いるレムリーの泳動緩衝液が使用可能となる。
特定の両性電解質を含む緩衝液を用いて調製することに
より、長期保存安定性を有する電気泳動用ポリアクリル
アミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方
法を提供する。 【解決手段】 ポリアクリルアミドプレキャストゲルを
特定範囲の使用量のトリス、グリシン、特定の塩基解離
定数、特定の添加量の両性電解質および、共存両性電解
質とグリシンの濃度合計の濃度が特定範囲の両性電解
質、および特定のｐＨである緩衝液を用いて調製するこ
とにより、保存安定性に優れ、半年から１年以上ゲルの
形状、泳動像に変化が無く保管有効期限が長い電気泳動
用ポリアクリルアミドプレキャストゲルが得られる。ま
た、このゲルを用いることにより、分析方法が普及して
いるレムリーの泳動緩衝液が使用可能となる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、生化学医薬分析
を目的とする長期保存可能な電気泳動用ポリアクリルア
ミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法
に関する。
を目的とする長期保存可能な電気泳動用ポリアクリルア
ミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャ
ストゲルは、蛋白質、糖質、脂質など生体を構成する重
要な物質の検出及び定量分析を目的として、 生物学、医
学、水産学、獣医学など多くの分野における基礎的研究
手段として広く使用されている。特に、ポリアクリルア
ミドゲルは、人工的に合成された物質であるため、処方
を変えることで分離特性の異なるゲルを容易に作成する
ことができる。そのため、予め様々な分離特性を持つよ
うに量産されたプレキャストゲルを使用することで分析
の手間を大幅に省くことができると共に、プレキャスト
ゲルが均一で再現性が良いことから当該分野における生
産および品質管理に貢献するところが大である。量産さ
れたプレキャストゲルを供給するに際しては、保存安定
性が良好であることが期待される。
ストゲルは、蛋白質、糖質、脂質など生体を構成する重
要な物質の検出及び定量分析を目的として、 生物学、医
学、水産学、獣医学など多くの分野における基礎的研究
手段として広く使用されている。特に、ポリアクリルア
ミドゲルは、人工的に合成された物質であるため、処方
を変えることで分離特性の異なるゲルを容易に作成する
ことができる。そのため、予め様々な分離特性を持つよ
うに量産されたプレキャストゲルを使用することで分析
の手間を大幅に省くことができると共に、プレキャスト
ゲルが均一で再現性が良いことから当該分野における生
産および品質管理に貢献するところが大である。量産さ
れたプレキャストゲルを供給するに際しては、保存安定
性が良好であることが期待される。
【０００３】従来、電気泳動用ポリアクリルアミドゲル
は蛋白質の生化学医薬分析用に、オルンスタイン（Ｌ．
Ｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．１２１，３２１−３４９（１９６４））とデービス
（Ｂ．Ｊ．Ｄａｖｉｓ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．１２１, ４０４−４２７（１９６４））によって
提案された方法や、レムリー（Ｕ．Ｋ．Ｌａｅｍｍｌ
ｉ，Ｎａｔｕｒｅ２２７，６８０（１９７０））によっ
て提案された方法が広く使用され、使用者がゲルを製造
して使用してきた。特にドデシル硫酸ナトリウム（以
下、ＳＤＳと略す）をゲルや泳動用緩衝液に添加するこ
とで手軽に蛋白質の分子量を推定できるレムリーの方法
が広く普及している。レムリーの方法はゲル緩衝液とし
てトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（以下、ト
リスと略す）の塩酸による部分中和物を使用し、 泳動用
緩衝液としてはトリス、グリシン塩を使用している（レ
ムリーの泳動緩衝液）。この方法におけるゲル緩衝液で
はｐＨが８．８になるようにトリスの約１０〜２０モル
％を塩酸により部分中和する（レムリーのゲル緩衝
液）。
は蛋白質の生化学医薬分析用に、オルンスタイン（Ｌ．
Ｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．１２１，３２１−３４９（１９６４））とデービス
（Ｂ．Ｊ．Ｄａｖｉｓ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．１２１, ４０４−４２７（１９６４））によって
提案された方法や、レムリー（Ｕ．Ｋ．Ｌａｅｍｍｌ
ｉ，Ｎａｔｕｒｅ２２７，６８０（１９７０））によっ
て提案された方法が広く使用され、使用者がゲルを製造
して使用してきた。特にドデシル硫酸ナトリウム（以
下、ＳＤＳと略す）をゲルや泳動用緩衝液に添加するこ
とで手軽に蛋白質の分子量を推定できるレムリーの方法
が広く普及している。レムリーの方法はゲル緩衝液とし
てトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（以下、ト
リスと略す）の塩酸による部分中和物を使用し、 泳動用
緩衝液としてはトリス、グリシン塩を使用している（レ
ムリーの泳動緩衝液）。この方法におけるゲル緩衝液で
はｐＨが８．８になるようにトリスの約１０〜２０モル
％を塩酸により部分中和する（レムリーのゲル緩衝
液）。
【０００４】しかしながら、レムリーのゲル緩衝液のｐ
Ｈでは、アミド基は経時的に加水分解反応を受ける。加
水分解反応は低温条件でも進行し、 ポリアクリルアミド
ゲルは部分的にアニオン基を有することになる。この結
果、蛋白質の泳動距離が短くなると共に分離像は不鮮明
となるので、ゲルを長期に保存することは出来ない。こ
のため、予め量産したゲルを供給するプレキャストゲル
においては、保管期限を限定して供給する必要があり、
保管期間中のゲルを安定させるため、保存安定性が良好
であることが望まれている。
Ｈでは、アミド基は経時的に加水分解反応を受ける。加
水分解反応は低温条件でも進行し、 ポリアクリルアミド
ゲルは部分的にアニオン基を有することになる。この結
果、蛋白質の泳動距離が短くなると共に分離像は不鮮明
となるので、ゲルを長期に保存することは出来ない。こ
のため、予め量産したゲルを供給するプレキャストゲル
においては、保管期限を限定して供給する必要があり、
保管期間中のゲルを安定させるため、保存安定性が良好
であることが望まれている。
【０００５】保存安定性の良いゲルを製造する方法に関
しては、トリス、両性電解質及び酸から成るゲル緩衝液
を内包した、長期保存安定性に優れ且つ測定可能な分子
量範囲を著しく拡大したポリアクリルアミドゲルの製造
方法が特開平４−１８４１６３公報に開示されている。
この製造方法によるポリアクリルアミド電気泳動ゲルは
レムリーの泳動用緩衝液を使用して分析可能であり、 両
性電解質を含有するｐＨ４．０〜７．５のゲル緩衝液を
内包することを特徴とし、その実施例においてｐＨ６．
９〜７．４のゲルの製造が例示され、冷蔵保存で4 ヶ月
の間は蛋白質の移動度に変化なく安定であるとされてい
る。
しては、トリス、両性電解質及び酸から成るゲル緩衝液
を内包した、長期保存安定性に優れ且つ測定可能な分子
量範囲を著しく拡大したポリアクリルアミドゲルの製造
方法が特開平４−１８４１６３公報に開示されている。
この製造方法によるポリアクリルアミド電気泳動ゲルは
レムリーの泳動用緩衝液を使用して分析可能であり、 両
性電解質を含有するｐＨ４．０〜７．５のゲル緩衝液を
内包することを特徴とし、その実施例においてｐＨ６．
９〜７．４のゲルの製造が例示され、冷蔵保存で4 ヶ月
の間は蛋白質の移動度に変化なく安定であるとされてい
る。
【０００６】このゲル緩衝液は、ポリアクリルアミドゲ
ルの加水分解を抑制する目的でトリスの中和率を高く設
定して、泳動ゲル中のトリス強酸部分とトリス弱酸部分
の境界付近での電位勾配の変化を両性電解質の添加によ
って緩やかにし、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成
したゲルと同等の分画分子量範囲を持たせることを意図
している。
ルの加水分解を抑制する目的でトリスの中和率を高く設
定して、泳動ゲル中のトリス強酸部分とトリス弱酸部分
の境界付近での電位勾配の変化を両性電解質の添加によ
って緩やかにし、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成
したゲルと同等の分画分子量範囲を持たせることを意図
している。
【０００７】しかし、ｐＨ６．９〜７．４の範囲のゲル
緩衝液を内包したポリアクリルアミドゲルは冷蔵保存で
5 ヶ月以上経過すると蛋白質の移動度に変化が現れる。
またスラブゲルの場合、ゲルの形状が変化しガラスプレ
ートがずれ易くなる。その結果、泳動分析上のハンドリ
ングが悪くなり、ガラスのずれによるゲルの剥離などの
問題も生ずる。ｐＨを６．８以下にすると保存安定性が
更に向上することが推測されるが、泳動時間が長くな
る、分離能が悪化すると言う問題があり、５ヶ月以上の
保存安定性を持つ蛋白質の分離能が良好でかつ、レムリ
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象と同
等の分画分子量範囲を持たせたポリアクリルアミドゲル
を得ることができなかった。
緩衝液を内包したポリアクリルアミドゲルは冷蔵保存で
5 ヶ月以上経過すると蛋白質の移動度に変化が現れる。
またスラブゲルの場合、ゲルの形状が変化しガラスプレ
ートがずれ易くなる。その結果、泳動分析上のハンドリ
ングが悪くなり、ガラスのずれによるゲルの剥離などの
問題も生ずる。ｐＨを６．８以下にすると保存安定性が
更に向上することが推測されるが、泳動時間が長くな
る、分離能が悪化すると言う問題があり、５ヶ月以上の
保存安定性を持つ蛋白質の分離能が良好でかつ、レムリ
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象と同
等の分画分子量範囲を持たせたポリアクリルアミドゲル
を得ることができなかった。
【０００８】また、特表平９−５１２９０７公報には、
中性ｐＨ長寿命プレキャスト電気泳動ゲルのためのシス
テムが表示されている。このシステムでゲル緩衝液はｐ
Ｈが中性付近の一価有機アミン又は置換アミンを含有
し、 約6 〜７の間のｐＨに塩酸で滴定されている。泳動
用緩衝液はＭＯＰＳ、ＭＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、
ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ又はＴＡＰＳＯから成る群から選択
される両性イオンを含み、 水酸化ナトリウム又は有機塩
基で約７のｐＨに滴定されている。ゲル緩衝液、泳動緩
衝液共に中性に設定することで、 ポリアクリルアミドゲ
ルの加水分解を抑制すると同時に蛋白質が完全に還元さ
れたままで分離されるような緩衝液システムである。こ
の電気泳動用システムでは１２カ月の間は安定とされて
いる。
中性ｐＨ長寿命プレキャスト電気泳動ゲルのためのシス
テムが表示されている。このシステムでゲル緩衝液はｐ
Ｈが中性付近の一価有機アミン又は置換アミンを含有
し、 約6 〜７の間のｐＨに塩酸で滴定されている。泳動
用緩衝液はＭＯＰＳ、ＭＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、
ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ又はＴＡＰＳＯから成る群から選択
される両性イオンを含み、 水酸化ナトリウム又は有機塩
基で約７のｐＨに滴定されている。ゲル緩衝液、泳動緩
衝液共に中性に設定することで、 ポリアクリルアミドゲ
ルの加水分解を抑制すると同時に蛋白質が完全に還元さ
れたままで分離されるような緩衝液システムである。こ
の電気泳動用システムでは１２カ月の間は安定とされて
いる。
【０００９】しかし、特表平９−５１２９０７公報に表
示されているシステムでは、専用の分子量マーカーを用
いなければならない。また、特表平９−５１２９０７公
報に表示されているポリアクリルアミドゲルは公知の泳
動用緩衝液、例えば汎用に利用されているグリシンを含
有するレムリーの泳動緩衝液を使用しても、泳動速度が
極めて遅く蛋白質の分離分析に使用することが不可能で
ある。
示されているシステムでは、専用の分子量マーカーを用
いなければならない。また、特表平９−５１２９０７公
報に表示されているポリアクリルアミドゲルは公知の泳
動用緩衝液、例えば汎用に利用されているグリシンを含
有するレムリーの泳動緩衝液を使用しても、泳動速度が
極めて遅く蛋白質の分離分析に使用することが不可能で
ある。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】そこで、具体的には、
冷蔵保存で6 ヶ月以上蛋白質の分離能及びゲルの形状共
に安定で、かつレムリーのゲル緩衝液を使用して作成さ
れたゲルの測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせた
ポリアクリルアミドプレキャストゲルを得る点について
解決すべき課題がある。予め様々な分離特性を持つよう
に量産されたプレキャストゲルは、保存安定性が良好で
あれば、保管有効期限を長く設定することが可能であ
る。また、分析方法が普及しているレムリーの泳動緩衝
液が使用できれば、使用者が経済的かつ効率的に分析を
遂行することができる。
冷蔵保存で6 ヶ月以上蛋白質の分離能及びゲルの形状共
に安定で、かつレムリーのゲル緩衝液を使用して作成さ
れたゲルの測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせた
ポリアクリルアミドプレキャストゲルを得る点について
解決すべき課題がある。予め様々な分離特性を持つよう
に量産されたプレキャストゲルは、保存安定性が良好で
あれば、保管有効期限を長く設定することが可能であ
る。また、分析方法が普及しているレムリーの泳動緩衝
液が使用できれば、使用者が経済的かつ効率的に分析を
遂行することができる。
【００１１】
【課題を解決するための手段】この発明の目的は、上記
の課題を解決するものであり、保存安定性に優れ、保管
有効期限が長く、また、分析方法が普及しているレムリ
ーの泳動緩衝液を使用可能とする、長期保存安定性を有
する電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、
その製造方法及びその使用方法を提供することである。
の課題を解決するものであり、保存安定性に優れ、保管
有効期限が長く、また、分析方法が普及しているレムリ
ーの泳動緩衝液を使用可能とする、長期保存安定性を有
する電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、
その製造方法及びその使用方法を提供することである。
【００１２】本発明者らはレムリーの泳動用緩衝液が使
用可能な長期安定性を持つ電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法に
ついて鋭意検討した結果、以下の発明に到達した。すな
わち、ゲル緩衝液のｐH を６．０〜６．８の範囲とし、
トリス、グリシン、１種又は２種以上の共存両性電解質
を含有した特定濃度の泳動ゲル緩衝液を使用することに
より、半年から１年以上ゲルの形状、泳動像に変化の無
いゲルを得ることが出来た。また、その使用方法及びそ
れを製造する方法も見出した。
用可能な長期安定性を持つ電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法に
ついて鋭意検討した結果、以下の発明に到達した。すな
わち、ゲル緩衝液のｐH を６．０〜６．８の範囲とし、
トリス、グリシン、１種又は２種以上の共存両性電解質
を含有した特定濃度の泳動ゲル緩衝液を使用することに
より、半年から１年以上ゲルの形状、泳動像に変化の無
いゲルを得ることが出来た。また、その使用方法及びそ
れを製造する方法も見出した。
【００１３】この発明は、上記の目的を達成するため、
次のように構成されている。即ち、この発明は、泳動用
緩衝液の組成がトリス及び両性電解質を含有する水溶液
である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプレキャ
ストゲルにおいて、そのゲルが特定範囲の使用量のトリ
ス、グリシン、特定の塩基解離定数、特定の添加量の両
性電解質および、共存両性電解質とグリシンの濃度合計
の濃度が特定範囲の両性電解質、および特定のｐＨであ
る緩衝液を用いて調製されていることを特徴とする電気
泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルに関する。
即ち、この発明は、泳動用緩衝液の組成がトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン及び両性電解質を含有する
水溶液である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプ
レキャストゲルにおいて、前記ゲルは、（１）前記トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度が０．０７
ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（２）前
記両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の共存両性
電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（３）ｐＨが
６．０〜６．８の範囲にある緩衝液を用いて調製されて
いることを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミドプ
レキャストゲルに関する。
次のように構成されている。即ち、この発明は、泳動用
緩衝液の組成がトリス及び両性電解質を含有する水溶液
である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプレキャ
ストゲルにおいて、そのゲルが特定範囲の使用量のトリ
ス、グリシン、特定の塩基解離定数、特定の添加量の両
性電解質および、共存両性電解質とグリシンの濃度合計
の濃度が特定範囲の両性電解質、および特定のｐＨであ
る緩衝液を用いて調製されていることを特徴とする電気
泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルに関する。
即ち、この発明は、泳動用緩衝液の組成がトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン及び両性電解質を含有する
水溶液である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプ
レキャストゲルにおいて、前記ゲルは、（１）前記トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度が０．０７
ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（２）前
記両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の共存両性
電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（３）ｐＨが
６．０〜６．８の範囲にある緩衝液を用いて調製されて
いることを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミドプ
レキャストゲルに関する。
【００１４】この電気泳動用ポリアクリルアミドプレキ
ャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が分子内にア
ニオン性基とカチオン性基を同数有するアミノ酸であ
る。
ャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が分子内にア
ニオン性基とカチオン性基を同数有するアミノ酸であ
る。
【００１５】更に、この電気泳動用ポリアクリルアミド
プレキャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が、セ
リン、グルタミン、トリプトファン、メチオニン、又は
フェニルアラニンである。
プレキャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が、セ
リン、グルタミン、トリプトファン、メチオニン、又は
フェニルアラニンである。
【００１６】また、この発明は、アクリルアミド、多官
能架橋剤、水、および前述の緩衝液の混合物を特定のｐ
Ｈ条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とす
る電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製
造方法に関する。即ち、この発明は、アクリルアミド、
多官能架橋剤、水、並びに下記組成の緩衝液 （１）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度
が０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌの範囲にあ
り、（２）両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の
共存両性電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にある から成る混合物を、ｐＨが６．０〜６．８の範囲にある
条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とする
電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製造
方法に関する。
能架橋剤、水、および前述の緩衝液の混合物を特定のｐ
Ｈ条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とす
る電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製
造方法に関する。即ち、この発明は、アクリルアミド、
多官能架橋剤、水、並びに下記組成の緩衝液 （１）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度
が０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌの範囲にあ
り、（２）両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の
共存両性電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にある から成る混合物を、ｐＨが６．０〜６．８の範囲にある
条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とする
電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製造
方法に関する。
【００１７】更に、この発明は、ドデシル硫酸塩が存在
するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン及びグリ
シンを含有する泳動用緩衝液を用いて、蛋白質の分離分
析を行うことを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲルの使用方法に関する。
するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン及びグリ
シンを含有する泳動用緩衝液を用いて、蛋白質の分離分
析を行うことを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲルの使用方法に関する。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明のゲルは、ゲル中に含有す
る緩衝液の組成が、トリス、グリシン、１種又は２種以
上の共存両性電解質からなり、ゲル中のトリス濃度は、
０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは
０．０８ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌである。この範
囲は、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルと
同等の泳動時間を有するために必要なゲル中のリーディ
ングイオンの量を含有させることの出来る範囲である。
ゲル中のトリス濃度が０．０７ｍｏｌ／Ｌよりも低い場
合、泳動像全体が不鮮明となり蛋白質の分離分析に使用
しがたいものとなる。ゲル中のトリス濃度が０．２ｍｏ
ｌ／Ｌより高くなるとゲル中のリーディングイオン濃度
が高くなり、泳動時間が延長し、分析の作業効率が悪く
なる。
る緩衝液の組成が、トリス、グリシン、１種又は２種以
上の共存両性電解質からなり、ゲル中のトリス濃度は、
０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは
０．０８ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌである。この範
囲は、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルと
同等の泳動時間を有するために必要なゲル中のリーディ
ングイオンの量を含有させることの出来る範囲である。
ゲル中のトリス濃度が０．０７ｍｏｌ／Ｌよりも低い場
合、泳動像全体が不鮮明となり蛋白質の分離分析に使用
しがたいものとなる。ゲル中のトリス濃度が０．２ｍｏ
ｌ／Ｌより高くなるとゲル中のリーディングイオン濃度
が高くなり、泳動時間が延長し、分析の作業効率が悪く
なる。
【００１９】また、両性電解質はグリシンと１種又は２
種以上の共存両性電解質から成り、共存両性電解質の塩
基解離定数ｐＫｂの範囲は８．３＜ｐＫｂ＜９．６、好
ましくは９．０＜ｐＫｂ＜９．６である。グリシン単独
ではゲル緩衝液のｐＨを７以下にした場合、レムリーの
ゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象と同等の分
画分子量範囲を持たせることはできない。また、共存両
性電解質の塩基解離定数ｐＫｂがｐＫｂ＜８．３の場
合、トリスよりもｐＫｂが低いことになるため、ゲル緩
衝液のｐＨを変化させ、 また分画分子量範囲を大幅に広
くしてしまう。ｐＫｂ＞９．６の場合、グリシンよりも
塩基解離定数が高いことになるため、ゲル内の電位勾配
の変化を緩やかにする作用に寄与しない。９．０＜ｐＫ
ｂ＜９．６であるセリン、トリプトファン、フェニルア
ラニン等を使用するとｐＫｂの低いものから順に陽極側
へ移動し、 ゲル内の電位勾配の変化は緩やかなものとな
る。従ってレムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲル
の測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせることがで
きる。
種以上の共存両性電解質から成り、共存両性電解質の塩
基解離定数ｐＫｂの範囲は８．３＜ｐＫｂ＜９．６、好
ましくは９．０＜ｐＫｂ＜９．６である。グリシン単独
ではゲル緩衝液のｐＨを７以下にした場合、レムリーの
ゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象と同等の分
画分子量範囲を持たせることはできない。また、共存両
性電解質の塩基解離定数ｐＫｂがｐＫｂ＜８．３の場
合、トリスよりもｐＫｂが低いことになるため、ゲル緩
衝液のｐＨを変化させ、 また分画分子量範囲を大幅に広
くしてしまう。ｐＫｂ＞９．６の場合、グリシンよりも
塩基解離定数が高いことになるため、ゲル内の電位勾配
の変化を緩やかにする作用に寄与しない。９．０＜ｐＫ
ｂ＜９．６であるセリン、トリプトファン、フェニルア
ラニン等を使用するとｐＫｂの低いものから順に陽極側
へ移動し、 ゲル内の電位勾配の変化は緩やかなものとな
る。従ってレムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲル
の測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせることがで
きる。
【００２０】また、共存両性電解質の添加量はグリシン
に対して０．１〜３０ｍｏｌ％、好ましくは１〜２０ｍ
ｏｌ％である。０．１ｍｏｌ％より低添加量の場合、レ
ムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせる効果が現れず、逆に
３０ｍｏｌ％よりも多く添加した場合は泳動像が不鮮明
で実用に耐えないものとなる。
に対して０．１〜３０ｍｏｌ％、好ましくは１〜２０ｍ
ｏｌ％である。０．１ｍｏｌ％より低添加量の場合、レ
ムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせる効果が現れず、逆に
３０ｍｏｌ％よりも多く添加した場合は泳動像が不鮮明
で実用に耐えないものとなる。
【００２１】また、共存両性電解質とグリシンの濃度の
合計が０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは
０．１〜０．２ｍｏｌ／Ｌである。全両性電解質濃度が
０．１ｍｏｌ／Ｌよりも少なく、０．３ｍｏｌ／Ｌより
多くなると泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとな
る。
合計が０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは
０．１〜０．２ｍｏｌ／Ｌである。全両性電解質濃度が
０．１ｍｏｌ／Ｌよりも少なく、０．３ｍｏｌ／Ｌより
多くなると泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとな
る。
【００２２】また、本発明に用いる両性電解質は、分子
内にアニオン基とカチオン基を同数有するものが望まし
く、 本発明のゲル緩衝液中では全てのアニオン性基と全
てのカチオン性基が解離して電気的に中性となり、ｐＫ
2 値よりも高いｐＨではアニオン性基のみが解離しカチ
オン性基の解離が抑制されるため負に帯電する。この為
に上記両性電解質は実質的に１価の弱酸としての挙動を
示す。
内にアニオン基とカチオン基を同数有するものが望まし
く、 本発明のゲル緩衝液中では全てのアニオン性基と全
てのカチオン性基が解離して電気的に中性となり、ｐＫ
2 値よりも高いｐＨではアニオン性基のみが解離しカチ
オン性基の解離が抑制されるため負に帯電する。この為
に上記両性電解質は実質的に１価の弱酸としての挙動を
示す。
【００２３】本発明のプレキャストゲル、その使用方
法、およびその製造方法に使用するゲル緩衝液のｐＨ
は、６．０〜６．８であり、好ましくは６．３である。
ｐＨ６．８よりも高い場合、ポリアクリルアミドゲルの
加水分解が進行し易くなり、保管有効期限を長く持たせ
ることが出来ない。ｐＨ６．０より低い場合、ポリアク
リルアミドゲルとしての安定性は良好であるが、蛋白質
の泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとなる。ｐＨ
６．８では冷蔵保存で6 ヶ月もち、さらにｐＨ６．３で
はアクリルアミド自体のｐＨに近いため、 ｐＨ６．８に
比べ加水分解速度が著しく減少する。その結果１年もの
長期間ゲルの形状、泳動像共に変化は見られず安定であ
る。
法、およびその製造方法に使用するゲル緩衝液のｐＨ
は、６．０〜６．８であり、好ましくは６．３である。
ｐＨ６．８よりも高い場合、ポリアクリルアミドゲルの
加水分解が進行し易くなり、保管有効期限を長く持たせ
ることが出来ない。ｐＨ６．０より低い場合、ポリアク
リルアミドゲルとしての安定性は良好であるが、蛋白質
の泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとなる。ｐＨ
６．８では冷蔵保存で6 ヶ月もち、さらにｐＨ６．３で
はアクリルアミド自体のｐＨに近いため、 ｐＨ６．８に
比べ加水分解速度が著しく減少する。その結果１年もの
長期間ゲルの形状、泳動像共に変化は見られず安定であ
る。
【００２４】本発明のプレキャストゲルの使用方法は、
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にトリス
０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９２ｍｏｌ／
Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である組成の泳動用緩衝液を使
用することが望ましい。この組成はレムリーによって提
案されたゲル緩衝液で、蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液を使用しても
蛋白質の分離分析を行うことは出来るが、広く普及して
いるレムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの分
画分子量範囲よりも広くなってしまう。
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にトリス
０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９２ｍｏｌ／
Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である組成の泳動用緩衝液を使
用することが望ましい。この組成はレムリーによって提
案されたゲル緩衝液で、蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液を使用しても
蛋白質の分離分析を行うことは出来るが、広く普及して
いるレムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの分
画分子量範囲よりも広くなってしまう。
【００２５】本発明のプレキャストゲルの製造方法は、
ゲル緩衝液のｐＨ調整と両性電解質の添加以外は、従来
公知の電気泳動用ポリアクリルアミドゲルの製造方法に
従って製造することができる。例えば、アクリルアミド
と共存する架橋を目的とした水溶性ジビニル化合物とし
ては、Ｎ，Ｎ' −メチレンビスアクリルアミド（以下、
ＢＩＳと略す）が最も多用されているが、その他Ｎ，
Ｎ' −ジアリル酒石酸アミド等の一般的なジビニル化合
物も使用することができる。
ゲル緩衝液のｐＨ調整と両性電解質の添加以外は、従来
公知の電気泳動用ポリアクリルアミドゲルの製造方法に
従って製造することができる。例えば、アクリルアミド
と共存する架橋を目的とした水溶性ジビニル化合物とし
ては、Ｎ，Ｎ' −メチレンビスアクリルアミド（以下、
ＢＩＳと略す）が最も多用されているが、その他Ｎ，
Ｎ' −ジアリル酒石酸アミド等の一般的なジビニル化合
物も使用することができる。
【００２６】本発明のプレキャストゲルの製造方法にお
けるモノマー水溶液には、ゲルに弾力性を持たせゲル強
度を向上させるため、アガロース、ポリアクリルアミ
ド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポ
リエチレンオキサイド、ポリメチルビニルエーテル等の
水溶性ポリマーを含有させることもできる。他のモノマ
ーを共重合することもできる。
けるモノマー水溶液には、ゲルに弾力性を持たせゲル強
度を向上させるため、アガロース、ポリアクリルアミ
ド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポ
リエチレンオキサイド、ポリメチルビニルエーテル等の
水溶性ポリマーを含有させることもできる。他のモノマ
ーを共重合することもできる。
【００２７】本発明のプレキャストゲルの製造方法にお
けるモノマーの重合は、重合開始剤、紫外線照射および
電離性放射線の照射により発生するラジカルによって行
われる。重合開始剤としては、過硫酸アンモニウム（以
下、ＡＰＳと略す）等の過酸化物と、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（以下、ＴＥＭＥ
Ｄと略す）等の還元剤を併用するレドックス型の重合開
始剤が賞用されるが、これら特に限定されるものではな
い。上記過酸化物及び還元剤は全モノマーに対し、 ０．
０５〜５％（重量／容量）が使用される。また、重合温
度は開始剤が機能する温度であれば特に限定されない
が、通常１５〜５０℃の範囲が好ましい。
けるモノマーの重合は、重合開始剤、紫外線照射および
電離性放射線の照射により発生するラジカルによって行
われる。重合開始剤としては、過硫酸アンモニウム（以
下、ＡＰＳと略す）等の過酸化物と、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（以下、ＴＥＭＥ
Ｄと略す）等の還元剤を併用するレドックス型の重合開
始剤が賞用されるが、これら特に限定されるものではな
い。上記過酸化物及び還元剤は全モノマーに対し、 ０．
０５〜５％（重量／容量）が使用される。また、重合温
度は開始剤が機能する温度であれば特に限定されない
が、通常１５〜５０℃の範囲が好ましい。
【００２８】
【実施例】以下、実施例により本発明を実施例により説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ 横幅１２ｃｍ、縦１０ｃｍの長方形のガラス板と、上部
に凹状の切り込みの入った同寸法のガラス板の間に、厚
さ１ｍｍのスペーサーとモノマー液が漏れないようにシ
リコンのシールを挟みガラスプレートを組み立てる。ア
クリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％
Ｔ）、並びに表−１に記載する濃度の緩衝液組成から成
るモノマー溶液に対し、ＡＰＳ０．００２５ｍｏｌ／Ｌ
およびＴＥＭＥＤ０．００７５ｍｏｌ／Ｌとなるように
添加混合後、プレート内に注入し、２５℃下で重合さ
せ、電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを得た。そのポ
リアクリルアミドゲルを用いて市販の蛋白質分子量マー
カーを電気泳動し、移動距離を測定した。
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ 横幅１２ｃｍ、縦１０ｃｍの長方形のガラス板と、上部
に凹状の切り込みの入った同寸法のガラス板の間に、厚
さ１ｍｍのスペーサーとモノマー液が漏れないようにシ
リコンのシールを挟みガラスプレートを組み立てる。ア
クリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％
Ｔ）、並びに表−１に記載する濃度の緩衝液組成から成
るモノマー溶液に対し、ＡＰＳ０．００２５ｍｏｌ／Ｌ
およびＴＥＭＥＤ０．００７５ｍｏｌ／Ｌとなるように
添加混合後、プレート内に注入し、２５℃下で重合さ
せ、電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを得た。そのポ
リアクリルアミドゲルを用いて市販の蛋白質分子量マー
カーを電気泳動し、移動距離を測定した。
【００２９】蛋白質分子量マーカーは、２−メルカプト
エタノール、ＳＤＳを用いて処理し、７重量％グリセリ
ン及び０．０５重量％ブロモフェノールブルー（以下、
ＢＰＢと略す）を加えて試験に供した。泳動用緩衝液の
組成はトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９
２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％のレムリー処方であ
る。電気泳動は２０ｍＡ定電流で行い、ＢＰＢの泳動末
端が下から５ｍｍの所で通電を中止した。染色は、０．
２５重量％クマシーブリリアントブルー（以下、ＣＢＢ
と略す）Ｇ−２５０、１０容量％酢酸、３０容量％メタ
ノール溶液中で振とう機を使用して４５分間行い、脱色
は７容量％酢酸、３容量％メタノール溶液中で振とう機
を使用して９０分間行った。表−２は製造直後の移動度
であり、また表−３は５℃で６ヶ月間保存後の移動度で
ある。移動度とは蛋白質の移動距離をパーセントで表し
たものである。 （移動度％）＝（ウェル下端から各バンドの位置までの
距離）／（ウェル下端からＢＰＢの泳動末端までの距
離）×１００
エタノール、ＳＤＳを用いて処理し、７重量％グリセリ
ン及び０．０５重量％ブロモフェノールブルー（以下、
ＢＰＢと略す）を加えて試験に供した。泳動用緩衝液の
組成はトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９
２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％のレムリー処方であ
る。電気泳動は２０ｍＡ定電流で行い、ＢＰＢの泳動末
端が下から５ｍｍの所で通電を中止した。染色は、０．
２５重量％クマシーブリリアントブルー（以下、ＣＢＢ
と略す）Ｇ−２５０、１０容量％酢酸、３０容量％メタ
ノール溶液中で振とう機を使用して４５分間行い、脱色
は７容量％酢酸、３容量％メタノール溶液中で振とう機
を使用して９０分間行った。表−２は製造直後の移動度
であり、また表−３は５℃で６ヶ月間保存後の移動度で
ある。移動度とは蛋白質の移動距離をパーセントで表し
たものである。 （移動度％）＝（ウェル下端から各バンドの位置までの
距離）／（ウェル下端からＢＰＢの泳動末端までの距
離）×１００
【００３０】ゲル緩衝液の酸による中和率の低いレムリ
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルは、高ｐＨの為
に長期保存により移動度が低下し、分離能が悪化する。
トリスの中和率を上げ、 ゲル緩衝液中に両性電解質とし
てグリシンのみ添加した場合、長期保存による移動度低
下は見られないが低分子領域が検出されない。また、ｐ
Ｈを６．８とし、グリシンと共存両性電解質としてトリ
シン（８．３＞ｐＫｂ）を添加した場合、分画分子量範
囲を大幅に広くしてしまう。
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルは、高ｐＨの為
に長期保存により移動度が低下し、分離能が悪化する。
トリスの中和率を上げ、 ゲル緩衝液中に両性電解質とし
てグリシンのみ添加した場合、長期保存による移動度低
下は見られないが低分子領域が検出されない。また、ｐ
Ｈを６．８とし、グリシンと共存両性電解質としてトリ
シン（８．３＞ｐＫｂ）を添加した場合、分画分子量範
囲を大幅に広くしてしまう。
【００３１】これに対し、９．０＜ｐＫｂ＜９．６であ
るセリンをグリシンと共存両性電解質として使用すると
ｐＫｂの低いものから順に陽極側へ移動し、 ゲル内の電
位勾配の変化は緩やかなものとなる。従ってトリスの中
和率を上げ、 緩衝液ｐＨを６．８または６．３にしても
レムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせることができ、また長
期保存による移動度低下は見られない。
るセリンをグリシンと共存両性電解質として使用すると
ｐＫｂの低いものから順に陽極側へ移動し、 ゲル内の電
位勾配の変化は緩やかなものとなる。従ってトリスの中
和率を上げ、 緩衝液ｐＨを６．８または６．３にしても
レムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせることができ、また長
期保存による移動度低下は見られない。
【００３２】実施例２ 実施例−１と同様のガラスプレートを用い、表−４に記
載する濃度の緩衝液組成から成るモノマー組成でポリア
クリルアミドゲルを製造し、実施例−１と同一条件で電
気泳動を行った結果を表−５に示す。
載する濃度の緩衝液組成から成るモノマー組成でポリア
クリルアミドゲルを製造し、実施例−１と同一条件で電
気泳動を行った結果を表−５に示す。
【００３３】実施例３ 実施例−１と同様のガラスプレートを用い、アクリルア
ミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並
びに表−１に記載する試料−１の緩衝液組成から成るモ
ノマー溶液で１０％ポリアクリルアミドゲルを製造し、
表−６に記載する泳動用緩衝液で実施例−１と同様に電
気泳動を行った結果を表−７に示す。
ミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並
びに表−１に記載する試料−１の緩衝液組成から成るモ
ノマー溶液で１０％ポリアクリルアミドゲルを製造し、
表−６に記載する泳動用緩衝液で実施例−１と同様に電
気泳動を行った結果を表−７に示す。
【００３４】本発明のプレキャストゲルの使用方法は、
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にレムリー
によって提案されたトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリ
シン０．１９２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である
組成の泳動用緩衝液を使用することが望ましい（試料−
５）。レムリーの方法は蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液（比較試料−
５）を使用しても蛋白質の分離分析を行うことは出来る
が、広く普及しているレムリーのゲル緩衝液を使用して
作成したゲルの分画分子量範囲よりも広くなってしま
う。
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にレムリー
によって提案されたトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリ
シン０．１９２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である
組成の泳動用緩衝液を使用することが望ましい（試料−
５）。レムリーの方法は蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液（比較試料−
５）を使用しても蛋白質の分離分析を行うことは出来る
が、広く普及しているレムリーのゲル緩衝液を使用して
作成したゲルの分画分子量範囲よりも広くなってしま
う。
【００３５】実施例−４ 実施例−１と同様のガラスプレートを用い、アクリルア
ミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並
びに表−８に記載する濃度の緩衝液組成から成るモノマ
ー溶液緩衝液組成で１０％ポリアクリルアミドゲルを製
造し、５℃下に１２ヶ月間保存し、テンシロン万能試験
機（株式会社オリエンテック、型式Ｕ−２１２９）でガ
ラスプレートを上下に引っ張り、その引っ張り強度を測
定した結果を表−９に示す。
ミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並
びに表−８に記載する濃度の緩衝液組成から成るモノマ
ー溶液緩衝液組成で１０％ポリアクリルアミドゲルを製
造し、５℃下に１２ヶ月間保存し、テンシロン万能試験
機（株式会社オリエンテック、型式Ｕ−２１２９）でガ
ラスプレートを上下に引っ張り、その引っ張り強度を測
定した結果を表−９に示す。
【００３６】ゲル緩衝液のｐＨを下げることで蛋白質の
移動度のみならず、プレキャストゲルの形状も安定に保
つことができる。ポリアクリルアミドゲルは加水分解す
ると膨潤し易くなり、プレキャストゲルのガラスプレー
トがずれやすくなる。ｐＨ７．５では加水分解は進行し
易く、 ガラスプレートをずらすのに必要な力( 引っ張り
強度) は５℃保存２ヶ月後には約１／３となる。それに
対し、ｐＨ６．８では５℃保存６ヶ月までガラスプレー
トの引っ張り強度は製造直後と同程度を保っており、さ
らにｐＨ６．３ではアクリルアミド自体のｐＨに近いた
め、 ｐＨ６．８に比べ加水分解速度が著しく減少する。
その結果１年もの長期間ゲルの形状に変化は見られず安
定である。
移動度のみならず、プレキャストゲルの形状も安定に保
つことができる。ポリアクリルアミドゲルは加水分解す
ると膨潤し易くなり、プレキャストゲルのガラスプレー
トがずれやすくなる。ｐＨ７．５では加水分解は進行し
易く、 ガラスプレートをずらすのに必要な力( 引っ張り
強度) は５℃保存２ヶ月後には約１／３となる。それに
対し、ｐＨ６．８では５℃保存６ヶ月までガラスプレー
トの引っ張り強度は製造直後と同程度を保っており、さ
らにｐＨ６．３ではアクリルアミド自体のｐＨに近いた
め、 ｐＨ６．８に比べ加水分解速度が著しく減少する。
その結果１年もの長期間ゲルの形状に変化は見られず安
定である。
【００３７】
【発明の効果】本発明は、トリス、及び両性電解質、特
にグリシンを含有する泳動緩衝液を使用する分離分析用
の電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、そ
の製造方法及びその使用方法に関するものであり、長期
保存可能であるので、高品質のゲルを高範囲に供給する
ことが可能である。
にグリシンを含有する泳動緩衝液を使用する分離分析用
の電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、そ
の製造方法及びその使用方法に関するものであり、長期
保存可能であるので、高品質のゲルを高範囲に供給する
ことが可能である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１２年２月２日（２０００．２．２）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正内容】
【書類名】 明細書
【発明の名称】 電気泳動用ポリアクリルアミドプレキ
ャストゲル、その製造方法及びその使用方法
ャストゲル、その製造方法及びその使用方法
【特許請求の範囲】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、生化学医薬分析
を目的とする長期保存可能な電気泳動用ポリアクリルア
ミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法
に関する。
を目的とする長期保存可能な電気泳動用ポリアクリルア
ミドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャ
ストゲルは、蛋白質、糖質、脂質など生体を構成する重
要な物質の検出及び定量分析を目的として、 生物学、医
学、水産学、獣医学など多くの分野における基礎的研究
手段として広く使用されている。特に、ポリアクリルア
ミドゲルは、人工的に合成された物質であるため、処方
を変えることで分離特性の異なるゲルを容易に作成する
ことができる。そのため、予め様々な分離特性を持つよ
うに量産されたプレキャストゲルを使用することで分析
の手間を大幅に省くことができると共に、プレキャスト
ゲルが均一で再現性が良いことから当該分野における生
産および品質管理に貢献するところが大である。量産さ
れたプレキャストゲルを供給するに際しては、保存安定
性が良好であることが期待される。
ストゲルは、蛋白質、糖質、脂質など生体を構成する重
要な物質の検出及び定量分析を目的として、 生物学、医
学、水産学、獣医学など多くの分野における基礎的研究
手段として広く使用されている。特に、ポリアクリルア
ミドゲルは、人工的に合成された物質であるため、処方
を変えることで分離特性の異なるゲルを容易に作成する
ことができる。そのため、予め様々な分離特性を持つよ
うに量産されたプレキャストゲルを使用することで分析
の手間を大幅に省くことができると共に、プレキャスト
ゲルが均一で再現性が良いことから当該分野における生
産および品質管理に貢献するところが大である。量産さ
れたプレキャストゲルを供給するに際しては、保存安定
性が良好であることが期待される。
【０００３】従来、電気泳動用ポリアクリルアミドゲル
は蛋白質の生化学医薬分析用に、オルンスタイン（Ｌ．
Ｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．１２１，３２１−３４９（１９６４））とデービス
（Ｂ．Ｊ．Ｄａｖｉｓ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．１２１, ４０４−４２７（１９６４））によって
提案された方法や、レムリー（Ｕ．Ｋ．Ｌａｅｍｍｌ
ｉ，Ｎａｔｕｒｅ２２７，６８０（１９７０））によっ
て提案された方法が広く使用され、使用者がゲルを製造
して使用してきた。特にドデシル硫酸ナトリウム（以
下、ＳＤＳと略す）をゲルや泳動用緩衝液に添加するこ
とで手軽に蛋白質の分子量を推定できるレムリーの方法
が広く普及している。レムリーの方法はゲル緩衝液とし
てトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（以下、ト
リスと略す）の塩酸による部分中和物を使用し、 泳動用
緩衝液としてはトリス、グリシン塩を使用している（レ
ムリーの泳動緩衝液）。この方法におけるゲル緩衝液で
はｐＨが８．８になるようにトリスの約１０〜２０モル
％を塩酸により部分中和する（レムリーのゲル緩衝
液）。
は蛋白質の生化学医薬分析用に、オルンスタイン（Ｌ．
Ｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．１２１，３２１−３４９（１９６４））とデービス
（Ｂ．Ｊ．Ｄａｖｉｓ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．１２１, ４０４−４２７（１９６４））によって
提案された方法や、レムリー（Ｕ．Ｋ．Ｌａｅｍｍｌ
ｉ，Ｎａｔｕｒｅ２２７，６８０（１９７０））によっ
て提案された方法が広く使用され、使用者がゲルを製造
して使用してきた。特にドデシル硫酸ナトリウム（以
下、ＳＤＳと略す）をゲルや泳動用緩衝液に添加するこ
とで手軽に蛋白質の分子量を推定できるレムリーの方法
が広く普及している。レムリーの方法はゲル緩衝液とし
てトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（以下、ト
リスと略す）の塩酸による部分中和物を使用し、 泳動用
緩衝液としてはトリス、グリシン塩を使用している（レ
ムリーの泳動緩衝液）。この方法におけるゲル緩衝液で
はｐＨが８．８になるようにトリスの約１０〜２０モル
％を塩酸により部分中和する（レムリーのゲル緩衝
液）。
【０００４】しかしながら、レムリーのゲル緩衝液のｐ
Ｈでは、アミド基は経時的に加水分解反応を受ける。加
水分解反応は低温条件でも進行し、 ポリアクリルアミド
ゲルは部分的にアニオン基を有することになる。この結
果、蛋白質の泳動距離が短くなると共に分離像は不鮮明
となるので、ゲルを長期に保存することは出来ない。こ
のため、予め量産したゲルを供給するプレキャストゲル
においては、保管期限を限定して供給する必要があり、
保管期間中のゲルを安定させるため、保存安定性が良好
であることが望まれている。
Ｈでは、アミド基は経時的に加水分解反応を受ける。加
水分解反応は低温条件でも進行し、 ポリアクリルアミド
ゲルは部分的にアニオン基を有することになる。この結
果、蛋白質の泳動距離が短くなると共に分離像は不鮮明
となるので、ゲルを長期に保存することは出来ない。こ
のため、予め量産したゲルを供給するプレキャストゲル
においては、保管期限を限定して供給する必要があり、
保管期間中のゲルを安定させるため、保存安定性が良好
であることが望まれている。
【０００５】保存安定性の良いゲルを製造する方法に関
しては、トリス、両性電解質及び酸から成るゲル緩衝液
を内包した、長期保存安定性に優れ且つ測定可能な分子
量範囲を著しく拡大したポリアクリルアミドゲルの製造
方法が特開平４−１８４１６３公報に開示されている。
この製造方法によるポリアクリルアミド電気泳動ゲルは
レムリーの泳動用緩衝液を使用して分析可能であり、 両
性電解質を含有するｐＨ４．０〜７．５のゲル緩衝液を
内包することを特徴とし、その実施例においてｐＨ６．
９〜７．４のゲルの製造が例示され、冷蔵保存で4 ヶ月
の間は蛋白質の移動度に変化なく安定であるとされてい
る。
しては、トリス、両性電解質及び酸から成るゲル緩衝液
を内包した、長期保存安定性に優れ且つ測定可能な分子
量範囲を著しく拡大したポリアクリルアミドゲルの製造
方法が特開平４−１８４１６３公報に開示されている。
この製造方法によるポリアクリルアミド電気泳動ゲルは
レムリーの泳動用緩衝液を使用して分析可能であり、 両
性電解質を含有するｐＨ４．０〜７．５のゲル緩衝液を
内包することを特徴とし、その実施例においてｐＨ６．
９〜７．４のゲルの製造が例示され、冷蔵保存で4 ヶ月
の間は蛋白質の移動度に変化なく安定であるとされてい
る。
【０００６】このゲル緩衝液は、ポリアクリルアミドゲ
ルの加水分解を抑制する目的でトリスの中和率を高く設
定して、泳動ゲル中のトリス強酸部分とトリス弱酸部分
の境界付近での電位勾配の変化を両性電解質の添加によ
って緩やかにし、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成
したゲルと同等の分画分子量範囲を持たせることを意図
している。
ルの加水分解を抑制する目的でトリスの中和率を高く設
定して、泳動ゲル中のトリス強酸部分とトリス弱酸部分
の境界付近での電位勾配の変化を両性電解質の添加によ
って緩やかにし、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成
したゲルと同等の分画分子量範囲を持たせることを意図
している。
【０００７】しかし、ｐＨ６．９〜７．４の範囲のゲル
緩衝液を内包したポリアクリルアミドゲルは冷蔵保存で
5 ヶ月以上経過すると蛋白質の移動度に変化が現れる。
またスラブゲルの場合、ゲルの形状が変化しガラスプレ
ートがずれ易くなる。その結果、泳動分析上のハンドリ
ングが悪くなり、ガラスのずれによるゲルの剥離などの
問題も生ずる。ｐＨを６．８以下にすると保存安定性が
更に向上することが推測されるが、泳動時間が長くな
る、分離能が悪化すると言う問題があり、５ヶ月以上の
保存安定性を持つ蛋白質の分離能が良好でかつ、レムリ
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象と同
等の分画分子量範囲を持たせたポリアクリルアミドゲル
を得ることができなかった。
緩衝液を内包したポリアクリルアミドゲルは冷蔵保存で
5 ヶ月以上経過すると蛋白質の移動度に変化が現れる。
またスラブゲルの場合、ゲルの形状が変化しガラスプレ
ートがずれ易くなる。その結果、泳動分析上のハンドリ
ングが悪くなり、ガラスのずれによるゲルの剥離などの
問題も生ずる。ｐＨを６．８以下にすると保存安定性が
更に向上することが推測されるが、泳動時間が長くな
る、分離能が悪化すると言う問題があり、５ヶ月以上の
保存安定性を持つ蛋白質の分離能が良好でかつ、レムリ
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象と同
等の分画分子量範囲を持たせたポリアクリルアミドゲル
を得ることができなかった。
【０００８】また、特表平９−５１２９０７公報には、
中性ｐＨ長寿命プレキャスト電気泳動ゲルのためのシス
テムが表示されている。このシステムでゲル緩衝液はｐ
Ｈが中性付近の一価有機アミン又は置換アミンを含有
し、 約6 〜７の間のｐＨに塩酸で滴定されている。泳動
用緩衝液はＭＯＰＳ、ＭＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、
ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ又はＴＡＰＳＯから成る群から選択
される両性イオンを含み、 水酸化ナトリウム又は有機塩
基で約７のｐＨに滴定されている。ゲル緩衝液、泳動緩
衝液共に中性に設定することで、 ポリアクリルアミドゲ
ルの加水分解を抑制すると同時に蛋白質が完全に還元さ
れたままで分離されるような緩衝液システムである。こ
の電気泳動用システムでは１２カ月の間は安定とされて
いる。
中性ｐＨ長寿命プレキャスト電気泳動ゲルのためのシス
テムが表示されている。このシステムでゲル緩衝液はｐ
Ｈが中性付近の一価有機アミン又は置換アミンを含有
し、 約6 〜７の間のｐＨに塩酸で滴定されている。泳動
用緩衝液はＭＯＰＳ、ＭＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、
ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ又はＴＡＰＳＯから成る群から選択
される両性イオンを含み、 水酸化ナトリウム又は有機塩
基で約７のｐＨに滴定されている。ゲル緩衝液、泳動緩
衝液共に中性に設定することで、 ポリアクリルアミドゲ
ルの加水分解を抑制すると同時に蛋白質が完全に還元さ
れたままで分離されるような緩衝液システムである。こ
の電気泳動用システムでは１２カ月の間は安定とされて
いる。
【０００９】しかし、特表平９−５１２９０７公報に表
示されているシステムでは、専用の分子量マーカーを用
いなければならない。また、特表平９−５１２９０７公
報に表示されているポリアクリルアミドゲルは公知の泳
動用緩衝液、例えば汎用に利用されているグリシンを含
有するレムリーの泳動緩衝液を使用しても、泳動速度が
極めて遅く蛋白質の分離分析に使用することが不可能で
ある。
示されているシステムでは、専用の分子量マーカーを用
いなければならない。また、特表平９−５１２９０７公
報に表示されているポリアクリルアミドゲルは公知の泳
動用緩衝液、例えば汎用に利用されているグリシンを含
有するレムリーの泳動緩衝液を使用しても、泳動速度が
極めて遅く蛋白質の分離分析に使用することが不可能で
ある。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】そこで、具体的には、
冷蔵保存で6 ヶ月以上蛋白質の分離能及びゲルの形状共
に安定で、かつレムリーのゲル緩衝液を使用して作成さ
れたゲルの測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせた
ポリアクリルアミドプレキャストゲルを得る点について
解決すべき課題がある。予め様々な分離特性を持つよう
に量産されたプレキャストゲルは、保存安定性が良好で
あれば、保管有効期限を長く設定することが可能であ
る。また、分析方法が普及しているレムリーの泳動緩衝
液が使用できれば、使用者が経済的かつ効率的に分析を
遂行することができる。
冷蔵保存で6 ヶ月以上蛋白質の分離能及びゲルの形状共
に安定で、かつレムリーのゲル緩衝液を使用して作成さ
れたゲルの測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせた
ポリアクリルアミドプレキャストゲルを得る点について
解決すべき課題がある。予め様々な分離特性を持つよう
に量産されたプレキャストゲルは、保存安定性が良好で
あれば、保管有効期限を長く設定することが可能であ
る。また、分析方法が普及しているレムリーの泳動緩衝
液が使用できれば、使用者が経済的かつ効率的に分析を
遂行することができる。
【００１１】
【課題を解決するための手段】この発明の目的は、上記
の課題を解決するものであり、保存安定性に優れ、保管
有効期限が長く、また、分析方法が普及しているレムリ
ーの泳動緩衝液を使用可能とする、長期保存安定性を有
する電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、
その製造方法及びその使用方法を提供することである。
の課題を解決するものであり、保存安定性に優れ、保管
有効期限が長く、また、分析方法が普及しているレムリ
ーの泳動緩衝液を使用可能とする、長期保存安定性を有
する電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、
その製造方法及びその使用方法を提供することである。
【００１２】本発明者らはレムリーの泳動用緩衝液が使
用可能な長期安定性を持つ電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法に
ついて鋭意検討した結果、以下の発明に到達した。すな
わち、ゲル緩衝液のｐH を６．０〜６．８の範囲とし、
トリス、グリシン、１種又は２種以上の共存両性電解質
を含有した特定濃度の泳動ゲル緩衝液を使用することに
より、半年から１年以上ゲルの形状、泳動像に変化の無
いゲルを得ることが出来た。また、その使用方法及びそ
れを製造する方法も見出した。
用可能な長期安定性を持つ電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法に
ついて鋭意検討した結果、以下の発明に到達した。すな
わち、ゲル緩衝液のｐH を６．０〜６．８の範囲とし、
トリス、グリシン、１種又は２種以上の共存両性電解質
を含有した特定濃度の泳動ゲル緩衝液を使用することに
より、半年から１年以上ゲルの形状、泳動像に変化の無
いゲルを得ることが出来た。また、その使用方法及びそ
れを製造する方法も見出した。
【００１３】この発明は、上記の目的を達成するため、
次のように構成されている。即ち、この発明は、泳動用
緩衝液の組成がトリス及び両性電解質を含有する水溶液
である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプレキャ
ストゲルにおいて、そのゲルが特定範囲の使用量のトリ
ス、グリシン、特定の塩基解離定数、特定の添加量の両
性電解質および、共存両性電解質とグリシンの濃度合計
の濃度が特定範囲の両性電解質、および特定のｐＨであ
る緩衝液を用いて調製されていることを特徴とする電気
泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルに関する。
即ち、この発明は、泳動用緩衝液の組成がトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン及び両性電解質を含有する
水溶液である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプ
レキャストゲルにおいて、前記ゲルは、（１）前記トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度が０．０７
ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（２）前
記両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の共存両性
電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（３）ｐＨが
６．０〜６．８の範囲にある緩衝液を用いて調製されて
いることを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミドプ
レキャストゲルに関する。
次のように構成されている。即ち、この発明は、泳動用
緩衝液の組成がトリス及び両性電解質を含有する水溶液
である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプレキャ
ストゲルにおいて、そのゲルが特定範囲の使用量のトリ
ス、グリシン、特定の塩基解離定数、特定の添加量の両
性電解質および、共存両性電解質とグリシンの濃度合計
の濃度が特定範囲の両性電解質、および特定のｐＨであ
る緩衝液を用いて調製されていることを特徴とする電気
泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルに関する。
即ち、この発明は、泳動用緩衝液の組成がトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン及び両性電解質を含有する
水溶液である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプ
レキャストゲルにおいて、前記ゲルは、（１）前記トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度が０．０７
ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（２）前
記両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の共存両性
電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（３）ｐＨが
６．０〜６．８の範囲にある緩衝液を用いて調製されて
いることを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミドプ
レキャストゲルに関する。
【００１４】この電気泳動用ポリアクリルアミドプレキ
ャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が分子内にア
ニオン性基とカチオン性基を同数有するアミノ酸であ
る。
ャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が分子内にア
ニオン性基とカチオン性基を同数有するアミノ酸であ
る。
【００１５】更に、この電気泳動用ポリアクリルアミド
プレキャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が、セ
リン、グルタミン、トリプトファン、メチオニン、又は
フェニルアラニンである。
プレキャストゲルにおいて、前記共存両性電解質が、セ
リン、グルタミン、トリプトファン、メチオニン、又は
フェニルアラニンである。
【００１６】また、この発明は、アクリルアミド、多官
能架橋剤、水、および前述の緩衝液の混合物を特定のｐ
Ｈ条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とす
る電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製
造方法に関する。即ち、この発明は、アクリルアミド、
多官能架橋剤、水、並びに下記組成の緩衝液 （１）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度
が０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌの範囲にあ
り、（２）両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の
共存両性電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にある から成る混合物を、ｐＨが６．０〜６．８の範囲にある
条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とする
電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製造
方法に関する。
能架橋剤、水、および前述の緩衝液の混合物を特定のｐ
Ｈ条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とす
る電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製
造方法に関する。即ち、この発明は、アクリルアミド、
多官能架橋剤、水、並びに下記組成の緩衝液 （１）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度
が０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌの範囲にあ
り、（２）両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の
共存両性電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にある から成る混合物を、ｐＨが６．０〜６．８の範囲にある
条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とする
電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製造
方法に関する。
【００１７】更に、この発明は、ドデシル硫酸塩が存在
するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン及びグリ
シンを含有する泳動用緩衝液を用いて、蛋白質の分離分
析を行うことを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲルの使用方法に関する。
するトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン及びグリ
シンを含有する泳動用緩衝液を用いて、蛋白質の分離分
析を行うことを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミ
ドプレキャストゲルの使用方法に関する。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明のゲルは、ゲル中に含有す
る緩衝液の組成が、トリス、グリシン、１種又は２種以
上の共存両性電解質からなり、ゲル中のトリス濃度は、
０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは
０．０８ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌである。この範
囲は、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルと
同等の泳動時間を有するために必要なゲル中のリーディ
ングイオンの量を含有させることの出来る範囲である。
ゲル中のトリス濃度が０．０７ｍｏｌ／Ｌよりも低い場
合、泳動像全体が不鮮明となり蛋白質の分離分析に使用
しがたいものとなる。ゲル中のトリス濃度が０．２ｍｏ
ｌ／Ｌより高くなるとゲル中のリーディングイオン濃度
が高くなり、泳動時間が延長し、分析の作業効率が悪く
なる。
る緩衝液の組成が、トリス、グリシン、１種又は２種以
上の共存両性電解質からなり、ゲル中のトリス濃度は、
０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは
０．０８ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌである。この範
囲は、 レムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルと
同等の泳動時間を有するために必要なゲル中のリーディ
ングイオンの量を含有させることの出来る範囲である。
ゲル中のトリス濃度が０．０７ｍｏｌ／Ｌよりも低い場
合、泳動像全体が不鮮明となり蛋白質の分離分析に使用
しがたいものとなる。ゲル中のトリス濃度が０．２ｍｏ
ｌ／Ｌより高くなるとゲル中のリーディングイオン濃度
が高くなり、泳動時間が延長し、分析の作業効率が悪く
なる。
【００１９】また、両性電解質はグリシンと１種又は２
種以上の共存両性電解質から成り、共存両性電解質の塩
基解離定数ｐＫｂの範囲は８．３＜ｐＫｂ＜９．６、好
ましくは９．０＜ｐＫｂ＜９．６である。グリシン単独
ではゲル緩衝液のｐＨを７以下にした場合、レムリーの
ゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象と同等の分
画分子量範囲を持たせることはできない。また、共存両
性電解質の塩基解離定数ｐＫｂがｐＫｂ＜８．３の場
合、トリスよりもｐＫｂが低いことになるため、ゲル緩
衝液のｐＨを変化させ、 また分画分子量範囲を大幅に広
くしてしまう。ｐＫｂ＞９．６の場合、グリシンよりも
塩基解離定数が高いことになるため、ゲル内の電位勾配
の変化を緩やかにする作用に寄与しない。９．０＜ｐＫ
ｂ＜９．６であるセリン、トリプトファン、フェニルア
ラニン等を使用するとｐＫｂの低いものから順に陽極側
へ移動し、 ゲル内の電位勾配の変化は緩やかなものとな
る。従ってレムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲル
の測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせることがで
きる。
種以上の共存両性電解質から成り、共存両性電解質の塩
基解離定数ｐＫｂの範囲は８．３＜ｐＫｂ＜９．６、好
ましくは９．０＜ｐＫｂ＜９．６である。グリシン単独
ではゲル緩衝液のｐＨを７以下にした場合、レムリーの
ゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象と同等の分
画分子量範囲を持たせることはできない。また、共存両
性電解質の塩基解離定数ｐＫｂがｐＫｂ＜８．３の場
合、トリスよりもｐＫｂが低いことになるため、ゲル緩
衝液のｐＨを変化させ、 また分画分子量範囲を大幅に広
くしてしまう。ｐＫｂ＞９．６の場合、グリシンよりも
塩基解離定数が高いことになるため、ゲル内の電位勾配
の変化を緩やかにする作用に寄与しない。９．０＜ｐＫ
ｂ＜９．６であるセリン、トリプトファン、フェニルア
ラニン等を使用するとｐＫｂの低いものから順に陽極側
へ移動し、 ゲル内の電位勾配の変化は緩やかなものとな
る。従ってレムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲル
の測定対象と同等の分画分子量範囲を持たせることがで
きる。
【００２０】また、共存両性電解質の添加量はグリシン
に対して０．１〜３０ｍｏｌ％、好ましくは１〜２０ｍ
ｏｌ％である。０．１ｍｏｌ％より低添加量の場合、レ
ムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせる効果が現れず、逆に
３０ｍｏｌ％よりも多く添加した場合は泳動像が不鮮明
で実用に耐えないものとなる。
に対して０．１〜３０ｍｏｌ％、好ましくは１〜２０ｍ
ｏｌ％である。０．１ｍｏｌ％より低添加量の場合、レ
ムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせる効果が現れず、逆に
３０ｍｏｌ％よりも多く添加した場合は泳動像が不鮮明
で実用に耐えないものとなる。
【００２１】また、共存両性電解質とグリシンの濃度の
合計が０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは
０．１〜０．２ｍｏｌ／Ｌである。全両性電解質濃度が
０．１ｍｏｌ／Ｌよりも少なく、０．３ｍｏｌ／Ｌより
多くなると泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとな
る。
合計が０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは
０．１〜０．２ｍｏｌ／Ｌである。全両性電解質濃度が
０．１ｍｏｌ／Ｌよりも少なく、０．３ｍｏｌ／Ｌより
多くなると泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとな
る。
【００２２】また、本発明に用いる両性電解質は、分子
内にアニオン基とカチオン基を同数有するものが望まし
く、 本発明のゲル緩衝液中では全てのアニオン性基と全
てのカチオン性基が解離して電気的に中性となり、ｐＫ
ｂ値よりも高いｐＨではアニオン性基のみが解離しカチ
オン性基の解離が抑制されるため負に帯電する。この為
に上記両性電解質は実質的に１価の弱酸としての挙動を
示す。
内にアニオン基とカチオン基を同数有するものが望まし
く、 本発明のゲル緩衝液中では全てのアニオン性基と全
てのカチオン性基が解離して電気的に中性となり、ｐＫ
ｂ値よりも高いｐＨではアニオン性基のみが解離しカチ
オン性基の解離が抑制されるため負に帯電する。この為
に上記両性電解質は実質的に１価の弱酸としての挙動を
示す。
【００２３】本発明のプレキャストゲル、その使用方
法、およびその製造方法に使用するゲル緩衝液のｐＨ
は、６．０〜６．８であり、好ましくは６．３である。
ｐＨ６．８よりも高い場合、ポリアクリルアミドゲルの
加水分解が進行し易くなり、保管有効期限を長く持たせ
ることが出来ない。ｐＨ６．０より低い場合、ポリアク
リルアミドゲルとしての安定性は良好であるが、蛋白質
の泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとなる。ｐＨ
６．８では冷蔵保存で6 ヶ月もち、さらにｐＨ６．３で
はアクリルアミド自体のｐＨに近いため、 ｐＨ６．８に
比べ加水分解速度が著しく減少する。その結果１年もの
長期間ゲルの形状、泳動像共に変化は見られず安定であ
る。
法、およびその製造方法に使用するゲル緩衝液のｐＨ
は、６．０〜６．８であり、好ましくは６．３である。
ｐＨ６．８よりも高い場合、ポリアクリルアミドゲルの
加水分解が進行し易くなり、保管有効期限を長く持たせ
ることが出来ない。ｐＨ６．０より低い場合、ポリアク
リルアミドゲルとしての安定性は良好であるが、蛋白質
の泳動像が不鮮明で実用に耐えないものとなる。ｐＨ
６．８では冷蔵保存で6 ヶ月もち、さらにｐＨ６．３で
はアクリルアミド自体のｐＨに近いため、 ｐＨ６．８に
比べ加水分解速度が著しく減少する。その結果１年もの
長期間ゲルの形状、泳動像共に変化は見られず安定であ
る。
【００２４】本発明のプレキャストゲルの使用方法は、
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にトリス
０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９２ｍｏｌ／
Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である組成の泳動用緩衝液を使
用することが望ましい。この組成はレムリーによって提
案されたゲル緩衝液で、蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液を使用しても
蛋白質の分離分析を行うことは出来るが、広く普及して
いるレムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの分
画分子量範囲よりも広くなってしまう。
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にトリス
０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９２ｍｏｌ／
Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である組成の泳動用緩衝液を使
用することが望ましい。この組成はレムリーによって提
案されたゲル緩衝液で、蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液を使用しても
蛋白質の分離分析を行うことは出来るが、広く普及して
いるレムリーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルの分
画分子量範囲よりも広くなってしまう。
【００２５】本発明のプレキャストゲルの製造方法は、
ゲル緩衝液のｐＨ調整と両性電解質の添加以外は、従来
公知の電気泳動用ポリアクリルアミドゲルの製造方法に
従って製造することができる。例えば、アクリルアミド
と共存する架橋を目的とした水溶性ジビニル化合物とし
ては、Ｎ，Ｎ' −メチレンビスアクリルアミド（以下、
ＢＩＳと略す）が最も多用されているが、その他Ｎ，
Ｎ' −ジアリル酒石酸アミド等の一般的なジビニル化合
物も使用することができる。
ゲル緩衝液のｐＨ調整と両性電解質の添加以外は、従来
公知の電気泳動用ポリアクリルアミドゲルの製造方法に
従って製造することができる。例えば、アクリルアミド
と共存する架橋を目的とした水溶性ジビニル化合物とし
ては、Ｎ，Ｎ' −メチレンビスアクリルアミド（以下、
ＢＩＳと略す）が最も多用されているが、その他Ｎ，
Ｎ' −ジアリル酒石酸アミド等の一般的なジビニル化合
物も使用することができる。
【００２６】本発明のプレキャストゲルの製造方法にお
けるモノマー水溶液には、ゲルに弾力性を持たせゲル強
度を向上させるため、アガロース、ポリアクリルアミ
ド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポ
リエチレンオキサイド、ポリメチルビニルエーテル等の
水溶性ポリマーを含有させることもできる。他のモノマ
ーを共重合することもできる。
けるモノマー水溶液には、ゲルに弾力性を持たせゲル強
度を向上させるため、アガロース、ポリアクリルアミ
ド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポ
リエチレンオキサイド、ポリメチルビニルエーテル等の
水溶性ポリマーを含有させることもできる。他のモノマ
ーを共重合することもできる。
【００２７】本発明のプレキャストゲルの製造方法にお
けるモノマーの重合は、重合開始剤、紫外線照射および
電離性放射線の照射により発生するラジカルによって行
われる。重合開始剤としては、過硫酸アンモニウム（以
下、ＡＰＳと略す）等の過酸化物と、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（以下、ＴＥＭＥ
Ｄと略す）等の還元剤を併用するレドックス型の重合開
始剤が賞用されるが、これら特に限定されるものではな
い。上記過酸化物及び還元剤は全モノマーに対し、 ０．
０５〜５％（重量／容量）が使用される。また、重合温
度は開始剤が機能する温度であれば特に限定されない
が、通常１５〜５０℃の範囲が好ましい。
けるモノマーの重合は、重合開始剤、紫外線照射および
電離性放射線の照射により発生するラジカルによって行
われる。重合開始剤としては、過硫酸アンモニウム（以
下、ＡＰＳと略す）等の過酸化物と、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（以下、ＴＥＭＥ
Ｄと略す）等の還元剤を併用するレドックス型の重合開
始剤が賞用されるが、これら特に限定されるものではな
い。上記過酸化物及び還元剤は全モノマーに対し、 ０．
０５〜５％（重量／容量）が使用される。また、重合温
度は開始剤が機能する温度であれば特に限定されない
が、通常１５〜５０℃の範囲が好ましい。
【００２８】
【実施例】以下、実施例により本発明を実施例により説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ 横幅１２ｃｍ、縦１０ｃｍの長方形のガラス板と、上部
に凹状の切り込みの入った同寸法のガラス板の間に、厚
さ１ｍｍのスペーサーとモノマー液が漏れないようにシ
リコンのシールを挟みガラスプレートを組み立てる。ア
クリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％
Ｔ）、並びに表１に記載する濃度の緩衝液組成から成る
モノマー溶液に対し、ＡＰＳ０．００２５ｍｏｌ／Ｌお
よびＴＥＭＥＤ０．００７５ｍｏｌ／Ｌとなるように添
加混合後、プレート内に注入し、２５℃下で重合させ、
電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを得た。そのポリア
クリルアミドゲルを用いて市販の蛋白質分子量マーカー
を電気泳動し、移動距離を測定した。
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ 横幅１２ｃｍ、縦１０ｃｍの長方形のガラス板と、上部
に凹状の切り込みの入った同寸法のガラス板の間に、厚
さ１ｍｍのスペーサーとモノマー液が漏れないようにシ
リコンのシールを挟みガラスプレートを組み立てる。ア
クリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％
Ｔ）、並びに表１に記載する濃度の緩衝液組成から成る
モノマー溶液に対し、ＡＰＳ０．００２５ｍｏｌ／Ｌお
よびＴＥＭＥＤ０．００７５ｍｏｌ／Ｌとなるように添
加混合後、プレート内に注入し、２５℃下で重合させ、
電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを得た。そのポリア
クリルアミドゲルを用いて市販の蛋白質分子量マーカー
を電気泳動し、移動距離を測定した。
【表１】
【００２９】蛋白質分子量マーカーは、２−メルカプト
エタノール、ＳＤＳを用いて処理し、７重量％グリセリ
ン及び０．０５重量％ブロモフェノールブルー（以下、
ＢＰＢと略す）を加えて試験に供した。泳動用緩衝液の
組成はトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９
２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％のレムリー処方であ
る。電気泳動は２０ｍＡ定電流で行い、ＢＰＢの泳動末
端が下から５ｍｍの所で通電を中止した。染色は、０．
２５重量％クマシーブリリアントブルー（以下、ＣＢＢ
と略す）Ｇ−２５０、１０容量％酢酸、３０容量％メタ
ノール溶液中で振とう機を使用して４５分間行い、脱色
は７容量％酢酸、３容量％メタノール溶液中で振とう機
を使用して９０分間行った。表２は製造直後の移動度で
あり、また表３は５℃で６ヶ月間保存後の移動度であ
る。移動度とは蛋白質の移動距離をパーセントで表した
ものである。 （移動度％）＝（ウェル下端から各バンドの位置までの
距離）／（ウェル下端からＢＰＢの泳動末端までの距
離）×１００
エタノール、ＳＤＳを用いて処理し、７重量％グリセリ
ン及び０．０５重量％ブロモフェノールブルー（以下、
ＢＰＢと略す）を加えて試験に供した。泳動用緩衝液の
組成はトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリシン０．１９
２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％のレムリー処方であ
る。電気泳動は２０ｍＡ定電流で行い、ＢＰＢの泳動末
端が下から５ｍｍの所で通電を中止した。染色は、０．
２５重量％クマシーブリリアントブルー（以下、ＣＢＢ
と略す）Ｇ−２５０、１０容量％酢酸、３０容量％メタ
ノール溶液中で振とう機を使用して４５分間行い、脱色
は７容量％酢酸、３容量％メタノール溶液中で振とう機
を使用して９０分間行った。表２は製造直後の移動度で
あり、また表３は５℃で６ヶ月間保存後の移動度であ
る。移動度とは蛋白質の移動距離をパーセントで表した
ものである。 （移動度％）＝（ウェル下端から各バンドの位置までの
距離）／（ウェル下端からＢＰＢの泳動末端までの距
離）×１００
【表２】
【表３】
【００３０】ゲル緩衝液の酸による中和率の低いレムリ
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルは、高ｐＨの為
に長期保存により移動度が低下し、分離能が悪化する。
トリスの中和率を上げ、 ゲル緩衝液中に両性電解質とし
てグリシンのみ添加した場合、長期保存による移動度低
下は見られないが低分子領域が検出されない。また、ｐ
Ｈを６．８とし、グリシンと共存両性電解質としてトリ
シン（８．３＞ｐＫｂ）を添加した場合、分画分子量範
囲を大幅に広くしてしまう。
ーのゲル緩衝液を使用して作成したゲルは、高ｐＨの為
に長期保存により移動度が低下し、分離能が悪化する。
トリスの中和率を上げ、 ゲル緩衝液中に両性電解質とし
てグリシンのみ添加した場合、長期保存による移動度低
下は見られないが低分子領域が検出されない。また、ｐ
Ｈを６．８とし、グリシンと共存両性電解質としてトリ
シン（８．３＞ｐＫｂ）を添加した場合、分画分子量範
囲を大幅に広くしてしまう。
【００３１】これに対し、９．０＜ｐＫｂ＜９．６であ
るセリンをグリシンと共存両性電解質として使用すると
ｐＫｂの低いものから順に陽極側へ移動し、 ゲル内の電
位勾配の変化は緩やかなものとなる。従ってトリスの中
和率を上げ、 緩衝液ｐＨを６．８または６．３にしても
レムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせることができ、また長
期保存による移動度低下は見られない。
るセリンをグリシンと共存両性電解質として使用すると
ｐＫｂの低いものから順に陽極側へ移動し、 ゲル内の電
位勾配の変化は緩やかなものとなる。従ってトリスの中
和率を上げ、 緩衝液ｐＨを６．８または６．３にしても
レムリーのゲル緩衝液を用いて作成したゲルの測定対象
と同等の分画分子量範囲を持たせることができ、また長
期保存による移動度低下は見られない。
【００３２】実施例２ 実施例１と同様のガラスプレートを用い、表４に記載す
る濃度の緩衝液組成から成るモノマー組成でポリアクリ
ルアミドゲルを製造し、実施例１と同一条件で電気泳動
を行った結果を表５に示す。
る濃度の緩衝液組成から成るモノマー組成でポリアクリ
ルアミドゲルを製造し、実施例１と同一条件で電気泳動
を行った結果を表５に示す。
【表４】
【表５】
【００３３】実施例３ 実施例１と同様のガラスプレートを用い、アクリルアミ
ド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並び
に表１に記載する試料−１の緩衝液組成から成るモノマ
ー溶液で１０％ポリアクリルアミドゲルを製造し、表６
に記載する泳動用緩衝液で実施例１と同様に電気泳動を
行った結果を表７に示す。
ド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並び
に表１に記載する試料−１の緩衝液組成から成るモノマ
ー溶液で１０％ポリアクリルアミドゲルを製造し、表６
に記載する泳動用緩衝液で実施例１と同様に電気泳動を
行った結果を表７に示す。
【表６】
【表７】
【００３４】本発明のプレキャストゲルの使用方法は、
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にレムリー
によって提案されたトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリ
シン０．１９２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である
組成の泳動用緩衝液を使用することが望ましい（試料−
５）。レムリーの方法は蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液（比較試料−
５）を使用しても蛋白質の分離分析を行うことは出来る
が、広く普及しているレムリーのゲル緩衝液を使用して
作成したゲルの分画分子量範囲よりも広くなってしま
う。
トリス、及び両性電解質を含有する泳動用緩衝液を使用
して蛋白質の分離分析をする方法であり、特にレムリー
によって提案されたトリス０．０２５ｍｏｌ／Ｌ、グリ
シン０．１９２ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１重量％である
組成の泳動用緩衝液を使用することが望ましい（試料−
５）。レムリーの方法は蛋白質の分離分析方法として広
く普及しているため、使用者が経済的かつ効率的に分析
を遂行することができる。グリシン以外の両性電解質、
たとえばＭＯＰＳを含有した泳動用緩衝液（比較試料−
５）を使用しても蛋白質の分離分析を行うことは出来る
が、広く普及しているレムリーのゲル緩衝液を使用して
作成したゲルの分画分子量範囲よりも広くなってしま
う。
【００３５】実施例４ 実施例１と同様のガラスプレートを用い、アクリルアミ
ド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並び
に表８に記載する濃度の緩衝液組成から成るモノマー溶
液緩衝液組成で１０％ポリアクリルアミドゲルを製造
し、５℃下に１２ヶ月間保存し、テンシロン万能試験機
（株式会社オリエンテック、型式Ｕ−２１２９）でガラ
スプレートを上下に引っ張り、その引っ張り強度を測定
した結果を表９に示す。
ド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｔ）、並び
に表８に記載する濃度の緩衝液組成から成るモノマー溶
液緩衝液組成で１０％ポリアクリルアミドゲルを製造
し、５℃下に１２ヶ月間保存し、テンシロン万能試験機
（株式会社オリエンテック、型式Ｕ−２１２９）でガラ
スプレートを上下に引っ張り、その引っ張り強度を測定
した結果を表９に示す。
【表８】
【表９】
【００３６】ゲル緩衝液のｐＨを下げることで蛋白質の
移動度のみならず、プレキャストゲルの形状も安定に保
つことができる。ポリアクリルアミドゲルは加水分解す
ると膨潤し易くなり、プレキャストゲルのガラスプレー
トがずれやすくなる。ｐＨ７．５では加水分解は進行し
易く、 ガラスプレートをずらすのに必要な力( 引っ張り
強度) は５℃保存２ヶ月後には約１／３となる。それに
対し、ｐＨ６．８では５℃保存６ヶ月までガラスプレー
トの引っ張り強度は製造直後と同程度を保っており、さ
らにｐＨ６．３ではアクリルアミド自体のｐＨに近いた
め、 ｐＨ６．８に比べ加水分解速度が著しく減少する。
その結果１年もの長期間ゲルの形状に変化は見られず安
定である。
移動度のみならず、プレキャストゲルの形状も安定に保
つことができる。ポリアクリルアミドゲルは加水分解す
ると膨潤し易くなり、プレキャストゲルのガラスプレー
トがずれやすくなる。ｐＨ７．５では加水分解は進行し
易く、 ガラスプレートをずらすのに必要な力( 引っ張り
強度) は５℃保存２ヶ月後には約１／３となる。それに
対し、ｐＨ６．８では５℃保存６ヶ月までガラスプレー
トの引っ張り強度は製造直後と同程度を保っており、さ
らにｐＨ６．３ではアクリルアミド自体のｐＨに近いた
め、 ｐＨ６．８に比べ加水分解速度が著しく減少する。
その結果１年もの長期間ゲルの形状に変化は見られず安
定である。
【００３７】
【発明の効果】本発明は、トリス、及び両性電解質、特
にグリシンを含有する泳動緩衝液を使用する分離分析用
の電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、そ
の製造方法及びその使用方法に関するものであり、長期
保存可能であるので、高品質のゲルを広範囲に供給する
ことが可能である。
にグリシンを含有する泳動緩衝液を使用する分離分析用
の電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル、そ
の製造方法及びその使用方法に関するものであり、長期
保存可能であるので、高品質のゲルを広範囲に供給する
ことが可能である。
Claims (5)
- 【請求項１】 泳動用緩衝液の組成がトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン及び両性電解質を含有する水溶
液である電気泳動法に用いるポリアクリルアミドプレキ
ャストゲルにおいて、前記ゲルは、（１）前記トリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度が０．０７ｍ
ｏｌ／Ｌ〜０．２ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（２）前記
両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の共存両性電
解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にあり、（３）ｐＨが
６．０〜６．８の範囲にある緩衝液を用いて調製されて
いることを特徴とする電気泳動用ポリアクリルアミドプ
レキャストゲル。 - 【請求項２】 前記共存両性電解質が、分子内にアニオ
ン性基とカチオン性基を同数有するアミノ酸であること
を特徴とする請求項１に記載の電気泳動用ポリアクリル
アミドプレキャストゲル。 - 【請求項３】 前記共存両性電解質が、セリン、グルタ
ミン、トリプトファン、メチオニン、又はフェニルアラ
ニンであることを特徴とする請求項１又は２に記載の電
気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル。 - 【請求項４】 アクリルアミド、多官能架橋剤、水、並
びに下記組成の緩衝液 （１）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの濃度
が０．０７ｍｏｌ／Ｌ〜０．１ｍｏｌ／Ｌの範囲にあ
り、（２）両性電解質がグリシンと１種又は２種以上の
共存両性電解質から成り、 １．前記共存両性電解質の塩基解離定数ｐＫｂが８．３
＜ｐＫｂ＜９．６の範囲にあり、 ２．前記共存両性電解質の添加量が前記グリシンに対し
て０．１〜３０ｍｏｌ％の範囲にあり、 ３．前記共存両性電解質と前記グリシンの濃度の合計が
０．１〜０．３ｍｏｌ／Ｌの範囲にある から成る混合物を、ｐＨが６．０〜６．８の範囲にある
条件で重合開始剤の存在下に重合することを特徴とする
電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲルの製造
方法。 - 【請求項５】 ドデシル硫酸塩が存在するトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン及びグリシンを含有する泳
動用緩衝液を用いて、蛋白質の分離分析を行うことを特
徴とする電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲ
ルの使用方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34383599A JP3942001B2 (ja) | 1999-12-02 | 1999-12-02 | 電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャストゲル，その製造方法及び蛋白質の分離分析方法 |
| EP00979027.0A EP1167962B1 (en) | 1999-12-02 | 2000-11-30 | Polyacrylamide precast gels for electrophoresis, process for producing the same and electrophoresis method by using the gels |
| US09/890,710 US6726821B1 (en) | 1999-12-02 | 2000-11-30 | Polyacrylamide precast gels for electrophoresis, process for producing the same and electroporesis method by using the gels |
| CNB008022941A CN1247990C (zh) | 1999-12-02 | 2000-11-30 | 电泳用的聚丙烯酰胺预制凝胶,其制法以及使用该凝胶的电泳法 |
| AU16496/01A AU769771B2 (en) | 1999-12-02 | 2000-11-30 | Polyacrylamide precast gels for electrophoresis, process for producing the same and electrophoresis method by using the gels |
| PCT/JP2000/008465 WO2001040789A1 (fr) | 1999-12-02 | 2000-11-30 | Gels de polyacrylamide premoules pour l'electrophorese, procede de production de ces derniers et procede d'electrophorese dans lequel on utilise ces gels |
| KR1020017006718A KR100718191B1 (ko) | 1999-12-02 | 2000-11-30 | 전기영동용 폴리아크릴아미드프리캐스트겔, 그 제조방법및 그 겔을 사용한 전기영동법 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001159621A true JP2001159621A (ja) | 2001-06-12 |
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|---|---|
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Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002277438A (ja) * | 2001-03-22 | 2002-09-25 | Hymo Corp | 電気泳動ゲル、その製法及びその使用法 |
| JP2004333190A (ja) * | 2003-05-01 | 2004-11-25 | Hitachi High-Technologies Corp | 電気泳動装置 |
| JP2006516732A (ja) * | 2003-01-17 | 2006-07-06 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 貯蔵寿命が長いプレキャスト電気泳動スラブゲル |
| JP2006528354A (ja) * | 2003-07-18 | 2006-12-14 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 補填モノマー溶液からのプレキャスト電気泳動スラブゲル |
| WO2009025135A1 (ja) * | 2007-08-17 | 2009-02-26 | Hymo Corporation | 電気泳動用プレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法 |
| JP4838358B2 (ja) * | 2007-08-17 | 2011-12-14 | ハイモ株式会社 | 電気泳動用プレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法 |
| JP2013502599A (ja) * | 2009-08-24 | 2013-01-24 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 高速高分離能のゲル電気泳動のためのシステム |
| WO2013089076A1 (ja) * | 2011-12-16 | 2013-06-20 | ハイモ株式会社 | 電気泳動用プレキャストゲル、その製造方法および使用方法 |
| US9150611B2 (en) | 2009-02-23 | 2015-10-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Aqueous transfer buffer |
| WO2016002282A1 (ja) * | 2014-07-04 | 2016-01-07 | アトー株式会社 | 電気泳動用ゲル緩衝液及び電気泳動用ポリアクリルアミドゲル |
| JP2018530758A (ja) * | 2015-10-14 | 2018-10-18 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 延長された保存寿命かつ高性能を備える電気泳動ゲル |
| JP2021183956A (ja) * | 2020-05-22 | 2021-12-02 | アトー株式会社 | ゲル用組成物、ゲル、プレキャストゲル。 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH021544A (ja) * | 1987-10-20 | 1990-01-05 | Amersham Internatl Plc | 生物学的試験に用いる方法と装置 |
| JPH04184163A (ja) * | 1990-11-19 | 1992-07-01 | Hymo Corp | 電気泳動用ポリアクリルアミドゲルの製造方法 |
| JPH05505877A (ja) * | 1990-08-29 | 1993-08-26 | ミコフ，ブディン | トリス―タウリネート―ホルメート緩衝系と好適な均一電気泳動プレートとを用いた均一ゲル状中でのｓｄｓ電気泳動による蛋白質分離 |
| JPH0634602A (ja) * | 1992-07-20 | 1994-02-10 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | ゲル電気泳動法 |
| JPH0815222A (ja) * | 1994-06-28 | 1996-01-19 | Hymo Corp | 電気泳動用ゲル、その製造方法および電気泳動法 |
| JPH09512907A (ja) * | 1994-03-31 | 1997-12-22 | ノーベル エクスペアリメンタル テクノロジー | 中性ｐＨ長寿命プレキャスト電気泳動ゲルのためのシステム |
| JPH10510363A (ja) * | 1994-11-30 | 1998-10-06 | ファルマシア・バイオテック・アクチボラグ | 電気泳動のための新しい緩衝系およびその使用 |
| JP2001242141A (ja) * | 2000-03-02 | 2001-09-07 | Hymo Corp | Ｄｎａの電気泳動方法 |
| JP2001242139A (ja) * | 2000-02-29 | 2001-09-07 | Hymo Corp | Ｄｎａの電気泳動法 |
-
1999
- 1999-12-02 JP JP34383599A patent/JP3942001B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH021544A (ja) * | 1987-10-20 | 1990-01-05 | Amersham Internatl Plc | 生物学的試験に用いる方法と装置 |
| JPH05505877A (ja) * | 1990-08-29 | 1993-08-26 | ミコフ，ブディン | トリス―タウリネート―ホルメート緩衝系と好適な均一電気泳動プレートとを用いた均一ゲル状中でのｓｄｓ電気泳動による蛋白質分離 |
| JPH04184163A (ja) * | 1990-11-19 | 1992-07-01 | Hymo Corp | 電気泳動用ポリアクリルアミドゲルの製造方法 |
| JPH0634602A (ja) * | 1992-07-20 | 1994-02-10 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | ゲル電気泳動法 |
| JPH09512907A (ja) * | 1994-03-31 | 1997-12-22 | ノーベル エクスペアリメンタル テクノロジー | 中性ｐＨ長寿命プレキャスト電気泳動ゲルのためのシステム |
| JPH0815222A (ja) * | 1994-06-28 | 1996-01-19 | Hymo Corp | 電気泳動用ゲル、その製造方法および電気泳動法 |
| JPH10510363A (ja) * | 1994-11-30 | 1998-10-06 | ファルマシア・バイオテック・アクチボラグ | 電気泳動のための新しい緩衝系およびその使用 |
| JP2001242139A (ja) * | 2000-02-29 | 2001-09-07 | Hymo Corp | Ｄｎａの電気泳動法 |
| JP2001242141A (ja) * | 2000-03-02 | 2001-09-07 | Hymo Corp | Ｄｎａの電気泳動方法 |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002277438A (ja) * | 2001-03-22 | 2002-09-25 | Hymo Corp | 電気泳動ゲル、その製法及びその使用法 |
| JP2006516732A (ja) * | 2003-01-17 | 2006-07-06 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 貯蔵寿命が長いプレキャスト電気泳動スラブゲル |
| JP2004333190A (ja) * | 2003-05-01 | 2004-11-25 | Hitachi High-Technologies Corp | 電気泳動装置 |
| JP2006528354A (ja) * | 2003-07-18 | 2006-12-14 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 補填モノマー溶液からのプレキャスト電気泳動スラブゲル |
| WO2009025135A1 (ja) * | 2007-08-17 | 2009-02-26 | Hymo Corporation | 電気泳動用プレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法 |
| JP4838358B2 (ja) * | 2007-08-17 | 2011-12-14 | ハイモ株式会社 | 電気泳動用プレキャストゲル、その製造方法及びその使用方法 |
| US9150611B2 (en) | 2009-02-23 | 2015-10-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Aqueous transfer buffer |
| JP2013502599A (ja) * | 2009-08-24 | 2013-01-24 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 高速高分離能のゲル電気泳動のためのシステム |
| WO2013089076A1 (ja) * | 2011-12-16 | 2013-06-20 | ハイモ株式会社 | 電気泳動用プレキャストゲル、その製造方法および使用方法 |
| JP2013125014A (ja) * | 2011-12-16 | 2013-06-24 | Hymo Corp | 電気泳動用プレキャストゲル、その製造方法および使用方法 |
| WO2016002282A1 (ja) * | 2014-07-04 | 2016-01-07 | アトー株式会社 | 電気泳動用ゲル緩衝液及び電気泳動用ポリアクリルアミドゲル |
| JP2018530758A (ja) * | 2015-10-14 | 2018-10-18 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 延長された保存寿命かつ高性能を備える電気泳動ゲル |
| US10983090B2 (en) | 2015-10-14 | 2021-04-20 | Life Technologies Corporation | Electrophoresis gel with extended shelf life and high performance |
| JP2021183956A (ja) * | 2020-05-22 | 2021-12-02 | アトー株式会社 | ゲル用組成物、ゲル、プレキャストゲル。 |
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