JP2001103985A - ウイルスのヌクレオチド配列 - Google Patents

ウイルスのヌクレオチド配列

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 各種のヘルペスウイルス：七面鳥ウイルス
（ＨＶＴ）、マーク病ウイルス（ＭＤＶ）および感染性
気管支炎ウイルス（ＩＬＴＶ）の遺伝子の非必須的領域
（および外来遺伝の子挿入候補部位として）および（ま
たは）抗原遺伝子暗号領域（抗原コード領域）を同定し
た。 【解決手段】 前者にはＨＳＶ（ヘルペス単純ウイル
ス）のｇＣ遺伝子のＨＶＴ相同遺伝子、ＭＤＶまたはＨ
ＶＴのＴＫ（チミジンキナーゼ）領域、ＩＬＴＶのＯＲ
Ｆ３、ＩＬＴＶ、ＭＤＶまたはＨＶＴのリボヌクレオシ
ド還元酵素（大サブユニット）遺伝子、ＭＤＶのリボヌ
クレオシド還元酵素（小サブユニット）遺伝子が含まれ
る。抗原コード領域にはＨＳＶのｇＢ、ｇＣおよびｇＨ
遺伝子のＨＶＴ相同遺伝子、ＨＳＶのｇＢ遺伝子のＩＬ
ＴＶ相同遺伝子、ＩＬＴＶのＯＲＦ２そしてＨＳＶ−１
の即時型初期遺伝子ＩＥ−１７５およびＩＥ−６８のＨ
ＶＴ相同遺伝子が含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】本発明はウイルスのヌクレオチド配列に
関するものであり、特に、病気に対する免疫性を付与す
るワクチンを作るためのウイルスのヌクレオチド配列に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ヘルペスウイルスは大きな二重鎖ＤＮＡ
ウイルスで、エンベロープによって囲まれた２０面体カ
プシドからなる。このウイルスは生物学的特性とゲノム
構造とにもとづいてアルファ、ベータおよびガンマヘル
ペスウイルスに分類される［Ｒｏｉｚｍａｎ，Ｂ ｅｔ
ａｌ．（１９８１）Ｉｎｔｅｒ−ｖｉｒｏｌｏｇｙ１
８，２０１−２１７］。トリヘルペスウイルスには鶏に
発生するリンパ腫症の一種であるマレック病を引き起こ
すマレック病ウイルス（ＭＤＶ）（ガンマヘルペスウイ
ルス）［総説： Ｐａｙｎｅ，Ｌ．Ｎ．（ｅｄ）Ｍａｒ
ｅｋ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（１９８５），Ｍａｒｔｉｎ
ｕｓ Ｎｉｊｈｏｆｆ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｂｏｓ
ｔｏｎ］と、鶏の呼吸器系上部に感染して致死または排
卵減少を引き起こす感染性咽頭気管炎ウイルス（ＩＬＴ
Ｖ）（アルファウイルス）とが含まれる。
【０００３】最近、われわれの研究室において偶然に
も、多くの保護された遺伝子を同定することを可能とす
るような、ＭＤＶ、ＩＬＴＶおよび哺乳類のヘルペスウ
イルス、特に水痘性口内炎ウイルス（ＶＺＶ）および単
純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）との間における顕著なア
ミノ酸配列の相同性（ホモロジー）が発見された。これ
らには、ＨＳＶの糖タンパク質、ｇＢ、ｇＣおよびｇＨ
に相同なＭＤＶおよび七面鳥ヘルペスウイルス（ＨＶ
Ｔ）のアミノ酸配列、ＴＫおよびリボ核酸還元酵素遺伝
子に相同なＩＬＴＶ、ＭＤＶおよびＨＶＴのアミノ酸配
列、そしてｇＢおよびＶＺＶの遺伝子３４および３５に
相同なＩＬＴＶのアミノ酸配列も含まれる［Ｂａｃｋｍ
ａｓｔｅｒ，Ａ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｊ．ｇｅ
ｎ．Ｖｉｒｏｌ，８９，２０３３−２０４２］。ＭＤＶ
の株は３つの血清型に分類されている。１型は病原性の
株とその弱毒株、２型は天然の非病原性株、そして３型
はＨＶＴが含まれる。１０年以上前から、ＨＶＴによる
種痘がマレック病に対して顕著な有効性を示すことが知
られている。
【０００４】しかし最近になって、ＨＶＴによる種痘に
対して抵抗性を示すＭＤＶが単離されている。このよう
なウイルス毒性が非常に高いＭＤＶによる鶏の損失は、
米国、ヨーロッパおよび中東の地域において発生してい
る。しかし、ＨＶＴ、２型ＭＤＶおよびＭＤＶ高ウイル
ス毒性株を弱毒化して得た株からなる混合物を用いるこ
とによって、そのような損失を確実ではないが減少させ
ることが可能である。このような知見、すなわちＨＶＴ
または２型ＭＤＶによって共有されないＭＤＶ型特異的
エピトープが存在するということは、われわれに抗原的
には従来のワクチンよりもＭＤＶに関係した改良型ワク
チンを作ることが可能であることを結論させた。［総
説： Ｒｏｓｓ ａｎｄ Ｂｉｇｇｓ ｉｎ Ｇｏｌｄ
ｍａｎＪ．Ｍ．ａｎｄ Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｍ．Ａ．（ｅ
ｄｓ）Ｌｅｕｋａｅｍｉａ ａｎｄ Ｌｙｍｐｈｏｍａ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｖｅ
ｎｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｖｉｒｕｓ−Ｉｎｄｕｃ
ｅｄ Ｔｕｍｏｕｒ，ｐ１３−３１，Ｍａｃｍｉｌｌａ
ｎ，１９８６］
【０００５】いくつかのヘルペスウイルス抗原は、組換
えワクシニアウイルス内で発現されたときに保護免疫を
与えることが示される。これらには、ＨＳＶのｇＢ［Ｃ
ａｎｔｉｎＥ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，
５９０８−５９１２］、ＨＳＶのｇＤ［Ｐａｏｌｅｔｔ
ｉ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１，１９３−１
９７］および偽狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）のｇＰ５０、
ＨＳＶのｇＤの相同タンパク質（ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ）
［Ｍａｒｃｈｉｏｌｉ，Ｃ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８
７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１．３９７７−３９８１］が含
まれる。なぜなら、ウイルスの貫通および感染力にｇＢ
が必須であること、またヘルペスウイルス間で保存され
ているｇＢとその相同タンパク質は重要な免疫源である
からである。さらに、感染細胞の表層にｇＢが存在する
ことは、体液性免疫応答および細胞性免疫応答にとって
重要な標的となる［Ｂｌａｃｋｌａｗｓ，Ｂ．Ａ．ｅｔ
ａｌ．Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６８，１１０３−１
１１４（１９８７）；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ−Ｔａｙｌ
ｏｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉ
ｒｏｌ．６９，１７３１−１７３４］。最近になって報
告されたＨＳＶの糖タンパク質ｇＨもまた感染力にとっ
て必須なものであり、また重要な免疫源でもある［Ｄｅ
ｓａｌ，Ｐ．Ｊ．ｅｔａｌ．（１９８８）Ｊ．ｇｅｎ．
Ｖｉｒｏｌ．６９，１１４７−１１５６］。また、ｇＣ
の相同タンパク質であるＰＲＶのｇＩＩＩも中和抗体の
主標的および細胞毒性Ｔ細胞の主標的として重要である
が、かならずしも必須のタンパク質ではないことが知ら
れている。しかし興味深いことは、サイトメガロウイル
ス（ＣＭＶ）によって感染された細胞のＴ細胞介在細胞
毒性反応における即時型初期タンパク質の期待はずれな
出現である［Ｋｏｚｉｎｏｗｓｋｉ Ｕ．Ｈ．ｅｔ ａ
ｌ．（１９８７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１．２０５４−２
０５８］。同様な抗原は、マレック病における潜伏感染
リンパ球および形質転換リンパ球の排除において重要な
役割を担うことができよう。なぜなら、マレック病の腫
瘍組織から確立されたリンパ球芽細胞系において即時型
初期ＲＮＡ転写産物が検出されるからである。
【０００６】また、ボックスウイルスワクシニアをベク
ターとして用いて作られた多くの組換えワクチンが報告
されており、また外来遺伝子発現のためにヘルペスウイ
ルスをベクターとして用いた場合も報告されている。よ
って、肝炎抗原はＨＳＶで発現されている［Ｓｈｉｈ，
Ｍ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１， ５８６７
−５８７０］。またヒト組織プラズミノーゲン活性因子
はＰＲＶで発現されている［Ｔｈｏｍｓｅｎ，Ｄ．Ｒ．
ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｇｅｎｅ ５７，２６１−２
６５］。これら両者の場合、外来遺伝子は非必須的なヘ
ルペス遺伝子のクローン化断片内に挿入され、相同遺伝
子組換えによってウイルスベクターに組み込まれる。肝
炎ウイルス遺伝子は、ヘルペスウイルスプロモーターに
融合され、また組換えＤＮＡはＨＳＶのＴＫ遺伝子に挿
入される。組換えＤＮＡと野生型ＨＳＶＤＮＡとの同時
トランスフェクションにつづく相同遺伝子組換えによっ
て肝炎抗原を発現するＴＫ−ウイルスが得られる。ＰＲ
Ｖの場合、ＵｓにマッピングされたｇＸ遺伝子を外来遺
伝子の挿入部位として用いられる。ここで用いれる戦略
は、ＨＳＶのＴＫ遺伝子をＴＫ欠失ＰＲＶ突然変異体
（ＴＫ陽性ウイルス）に挿入することを含むものであ
る。そして、プラズミノーゲン活性因子はＨＳＶのＴＫ
遺伝子のクローン化断片に挿入し、この組換え体を相同
遺伝子組換えによってＰＲＶに導入する。ＴＫ−ウイル
スを前記のヒト遺伝子を発現するものとして選別する
［前掲、Ｔｈｏｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．］。
【０００７】同様に、ＶＺＶをベクターとして使用する
［Ｌｏｗｅ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，３８９６
−３９００］。いくつかのヘルペスウイルス遺伝子も毒
力（ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ）に関連しており、またインビ
トロの系における増殖に必須のものでないことが知られ
ている。これらにはＨＳＶのＴＫ遺伝子［Ｊａｍｉｅｓ
ｏｎ，Ａ．Ｔ．ｅｔａｌ．（１９７４）Ｊ．ＧｅｎＶｉ
ｒｏｌ．２４，４６５−４８０；Ｆｉｅｌｄ，Ｈ．ａｎ
ｄ Ｗｉｌｄｙ，Ｐ．，（１９８７）Ｊ．Ｈｙｇｉｅｎ
ｅ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）８１，２６７−２７７］およ
びＰＲＶのＴＫ遺伝子が含まれる。実際、ＰＲＶはＴＫ
活性の欠失によって容易に減少される［Ｔａｔａｒｏ
ｖ，Ｇ．（１９６８）Ｚｅｎｔｒａｌｂｌ．Ｖｅｔ．Ｍ
ｅｔ．Ｍｅｄ １５Ｂ，８４８−８５３］。さらに、Ｐ
ＲＶのバルサ（Ｂａｒｔｈａ）株の減少はＵｓにマッピ
ングされた非必須的糖タンパク質ｇ１の欠失にもとづく
［Ｍｅｔｔｅｎｌｅｉｔｅｒ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９
８７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１，４０３０−４０３２］。
長い非反復配列の側面を守る間在繰り返し領域（ＴＲ
Ｓ）に存在するＨＳＶマッピングの遺伝子は、病原性に
関係している［Ｒｏｓｅｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９８
６）ＶｉｒｕｓＲｅｓｅａｒｃｈ ５，１５７−１７
５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｌ．ｅ ａｌ．（１９８
３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １３１，１８０−１９２］。
【０００８】ＨＳＶのいくつかの付加的な遺伝子はイン
ビトロの系における増殖には非必須であるが、毒力に関
係していると報告されている。これらには、ＵＬ２４
（Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｐ．Ｇ．，（１９８２），Ｊ．ｇｅ
ｎ．Ｖｉｒｏｌ．６３，２７７−２９５）、リボ核酸還
元酵素の大サブユニット（Ｇｏｄｓｔｅｉｎ Ｄ．Ｊ．
ａｎｄ Ｗｅｌｌｅｒ，Ｓ．Ｋ．（１９８８）Ｊ．Ｖｉ
ｒｏｌ．６２，１９６−２０５）、ｇＣ（Ｄｒａｐｅｒ
Ｋ．Ｇ．ｅｔ．ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．
５１，５７８−５８５）、ｄＵＴＰアーゼ（Ｆｉｓｈｅ
ｒ，Ｆ．Ｂ．ａｎｄ Ｐｒｅｓｔｏｎ，Ｖ．Ｇ．（１９
８６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １４８，１９０−１９７）、
そしてＵＬ５５およびＵＬ５６（ＭａｃＬｅａｎ，Ａ．
Ｒ．ａｎｄＢｒｏｗｎ，Ｓ．Ｍ．（１９８７）Ｊ．ｇｅ
ｎ．Ｖｉｒｏｌ．６８，１３３９−１３５０）が含まれ
る。さらに、ＵｓにおけるＨＳＶマッピングのいくつか
の遺伝子もまた、インビトロ系における増殖に非必須で
ある［Ｗｅｂｅｒ，Ｐ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３６，５７６−５７９］。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、野生型ウイ
ルスにおいて前記ヌクレオチド配列に結合して存在する
他の配列を実質的に含まないヌクレオチド配列を提供す
る。
【００１０】
【課題を解決する手段】本発明のヌクレオチド配列は下
記の群の中から選択されるる配列およびそのマイナーな
変異で生じるマイナー変異配列にある： （ａ）ＨＳＶのｇＢ遺伝子のＭＶＴ相同遺伝子、（ｂ）
ＨＳＶのｇＣ遺伝子のＨＶＴ相同遺伝子、（ｃ）ＭＳＶ
のｇＨ遺伝子のＨＶＴ相同遺伝子、（ｄ）ＩＬＴＶのＴ
Ｋ遺伝子、（ｅ）ＨＳＶのｇＢ遺伝子のＩＬＴＶ相同遺
伝子、（ｆ）ＩＬＴＶのＯＲＦ２、（ｇ）ＩＬＴＶのＯ
ＲＦ３、（ｈ）ＩＬＴＶのリボヌクレオチド還元酵素
（大サブユニット）、（ｉ）ＨＶＴのリボヌクレオチド
還元酵素（大サブユニット）、（ｊ）ＭＤＶのリボヌク
レオチド還元酵素（大サブユニット）、（ｌ）ＨＳＶ−
Ｉの即時型初期遺伝子ＩＥ１７５のＨＶＴ相同遺伝子、
（ｍ）ＨＳＶ−Ｉの即時型初期遺伝子ＩＥ６８のＨＶＴ
相同遺伝子。
【００１１】
【実施の態様】前記（ａ）から（ｍ）に記載されたそれ
ぞれの配列は、それぞれの配列を発現させるのに必要な
停止および開始シグナルおよびプロモーターを含む他の
５’および３’非遺伝暗号配列（ノンコーデイング配
列）と結合したものであろう。そのような付加された配
列はいわゆる自然発生的なものか、あるいは非対応もの
であろう。特に、プロモーターは前記（１）および
（ｍ）のひとつと結合しているであろう。
【００１２】前記した「マイナー変異配列」という言葉
の意味は、その配列が本来コードしている遺伝子発現産
物そのもののあるべき姿を損なうことがないようなヌク
レオチド配列の変化であり、例えば相互のヌクレオチド
のマイナー置換である。ある抗原を遺伝暗号化（コー
ド）するためにベクターに挿入される配列の場合、配列
にとって必須なこととは配列がタンパク質または糖タン
パク質をコードしていることを意味する。その抗原の持
つ抗原性に悪影響を及ぼすことがないようなアミノ酸配
列の保存的な置換が生じて同様な抗原が遺伝子発現され
るような配列内における保守的変化（ｃｏｎｓｅｒｖａ
ｔｉｖｅ ｃｈａｎｇｅｓ）はこのようなマイナー変異
に含まれるものであろう。特に、抗原をコードする配列
のなかで、抗原タンパク質そのものをコードする部分の
みが使用される。そのような部分とは、例えば、ＨＶＴ
のｇＨ遺伝子に相当するヌクレオチド配列の２７３−３
２０または８６７−９２６およびそれらのマイナー変異
に該当する領域である。本発明のさらなる態様はこれら
の配列およびこれらの配列によりコードされるペプチド
によってなされる。
【００１３】挿入部位に相当する配列の場合、ウイウル
スの感染力と複製とに関しては、なんら必須的なもので
はなく、また組換えを可能とするような配列と相同な配
列のみが必要とされる。よって、特定の配列への特定の
ヌクレオチド配列の挿入は、挿入される場所から下流に
向けてリーデイングフレームを完全に変化させるものと
なるであろう。抗原をコードする配列の場合では、この
ような変化は好ましくないアミノ酸配列を生ずることを
意味する（フレームシフトがどこに生ずるかに依存す
る）が、挿入部位の場合は相同性の度合いはほとんど同
じであるので、組換えが容易に行なえるであろう。挿入
部位においてヌクレオチドの相同性が７５％存在した場
合、通常その配列はマイナー変異と見なされるが、少な
くとも８０、８５、９０、９５または９９％の相同性が
あることが好ましい。このような相同性（ｈｏｍｏｌｏ
ｇｙ）の度合いは上記の配列（ａ）ないし（ｆ）および
（ｘ）のそれぞれの全体に実質的に関係している。短い
配列は、このような長い配列を単離または同定するため
のプローブとして用いられるが、この場合は正確なハイ
ブリダイゼーションを行なわせるために高い相同性が必
要とされる。
【００１４】よって、本発明はさらに上記配列（ａ）な
いし（ｍ）のいずれかの少なくとも一部分に対して９０
％（好ましくは９５％、９９％または１００％）の相同
性を有する少なくとも１３のヌクレオチド副配列を提供
するものである。上記したように、配列（ａ）ないし
（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｌ）および（ｍ）は抗原発
現配列として好適であり、またＭＤＶのＴＫ領域配列は
抗原発現遺伝子の挿入のための非必須的部位部位として
好適である。よって、配列（ｂ）は両方の機能に好適で
ある。これらの配列は、ここで開示された配列情報と、
例えばオリゴヌクレオチドプロープの合成および野生型
のＤＮＡとそのプローブとのハイブリダイゼーションと
を含む標準的技術を用いることによって自然発生的な
（ｎａｔｕｒａｌｌｙ−ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）のＩＬＴ
Ｖ、ＨＶＴおよびＭＤＶウイルスから容易に単離可能で
ある。抗原ＩＬＴＶおよびＨＶＴ配列、すなわち配列
（ａ）から（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、
【００１５】（ｌ）および（ｍ）は、適当な宿主、特に
ＨＶＴまたはＭＤＶ内において現される。ひとつのＩＬ
ＴＶ配列の挿入のための好適な非必須部位はＨＳＶのｇ
Ｃ遺伝子のＭＳＶ相同遺伝子、ＨＶＴまたはＭＤＶのＴ
Ｋ遺伝子、ＨＶＴまたはＭＤＶリホヌクレオチド還元酵
素（大サブユニット）遺伝子、およびＭＤＶのリボヌク
レオチド還元酵素（小サブユニット）遺伝子を含む。第
二に本発明は、ＭＤＶ、ＨＶＴおよびＩＬＴＶの挿入ま
たは欠失突然変異を提供するものである。すなわち、
（ｉ）ＨＶＴの場合、ＨＳＶのｇＣ遺伝子に相同な領域
の突然変異またはＴＫ遺伝子のリボヌクレオチド還元酵
素遺伝子の突然変異であり、（ｉｉ）ＭＤＶの場合、Ｈ
ＳＶのｇＣ遺伝子に相同な領域の突然変異またはリボヌ
クレオチド還元酵素遺伝子（小サブユニット）の突然変
異またはリボヌクレオチド還元酵素遺伝子（大サブユニ
ット）の突然変異であり、（ｉｉｉ）ＩＬＴＶの場合、
ＴＫ遺伝子、ＯＲＦ３またはリボヌクレオチド還元酵素
遺伝子（大サブユニット）の突然変異である。これらの
突然変異は同定された領域の遺伝子コード配列または遺
伝子非コード領域にあると考えられる。
【００１６】ＨＶＴ、ＭＤ Ｖ、およびＩＬＴＶのそれ
ぞれの突然変異体は、鳥禽（ベクターが複製される）類
のなかで遺伝子発現されることが望まれる他の配列から
なるベクターと同様に、非対応抗原コード配列（ｈｅｔ
ｄｌｏｇｏｕｓ ａｎｔｉｇｅｎ−ｅｎｃｏｄｉｎｇ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）のためのウイルスベクターとして
利用できるであろう。このような配列として、もちろん
これらに限定されるものではないが、（ａ）ないし
（ｂ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｌ）および（ｍ）が含まれ
る。非対応（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）という言葉
は、ここではウイルスゲノムに関係した場所に見出され
ていない抗原発現配列（ａｎｔｉｇｅｎ−ｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｎｇ ｇｅｎｅ）を意味している。すなわち、抗原
発現遺伝子はＩＬＴＶの病原性株から単離可能で、これ
よりも病原性の低い株のＴＫ領域に挿入れると考えれ
る。この挿入が自然発生的に生ずるウイルスでは起こら
ない場合、非対応と見なされる。
【００１７】また非対応配列は、鳥脳脊髄炎（流行性振
せん）、鳥インフルエンザ（鳥禽ペスト）、鳥白血病、
ニューキャッスル病（ＰＭＶ２ないしＰＭＶ７）以外の
鳥パラマイキソバイラス（ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘ
ｏｉｒｕｓｅｓ）、鳥レオウイルス病（腸の病気、腱し
ょう炎）、ニワトリ貧血（ニワトリ貧血剤によって起こ
る）、胞子虫症、エッグドロップ症候群（ＥＤＳ７
６）、伝染性上皮腫、感染性気管支炎、感染性粘液嚢症
（グンボロ（Ｇｕｍｂｏｒｏ））、封入体肝炎（アデノ
ウイルス）、七面鳥リンパ増殖性疾患（ｌｙｍｐｈｏｐ
ｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、ニュー
キャッスル病、ニワトリの細網内皮増殖症、七面鳥の細
網内皮増殖症、ロタウイルス腸炎、七面鳥出血性腸炎お
よび七面鳥鼻炎（ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）の
いずれか一つの疾患に関係した抗原をコードするもので
ある。よって、本発明にもとづくベクターは多価ワクチ
ンによる保護を可能とする。例えば、ＭＤＶ抗原の遺伝
暗号配列（コード配列）を持つＩＬＴＶを含むワクチン
は、ＩＴＬおよびマーク病からワクチンを接種された生
物を保護する。さらに、突然変異ＩＬＴＶウイルスそれ
自体は、弱毒化されたウイルスとしてワクチンに利用さ
れる潜在的可能性があり、また挿入された非対応配列を
持つ必要性はない。
【００１８】本発明にもとづく欠失または挿入突然変異
体の調製の簡易的な方法は、適当な細胞に、例えばＴＫ
領域の同時トランスフェクション（ｃｏ−ｔｒａｎｓｆ
ｅｃｔｉｏｎ）、欠失または挿入変異されたものと全ウ
イルスＤＮＡまたは全ウイルス（例えば野生型（ｗｉｌ
ｄ ｔｙｐｅ）のウイルス）を導入することである。そ
のようなウイルスのむき出しとなったＤＮＡが感染性を
有することはすでに知られており、切断しないで調製し
た。リン酸カルシウムによる沈澱によってＤＮＡを調製
するのが好ましい。この方法に用いられる適当な細胞と
は、ニワトリ胚繊維芽細胞（ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏ
ｂｌａｓｔ）、ニワトリ腎臓細胞およびアヒル胚繊維芽
細胞であり、これらはペトリ皿に単層からなる細胞集団
として播種されることによって好適に増殖する。相同遺
伝子組換えによって形質転換ＤＮＡと全ウイルスＤＮＡ
とを感染細胞内で互いに組換え、そして目的とする組換
え体をスクリーニングする。このスクリーニングは、例
えば適当なプローブによるハイブリダイゼーションか、
あるいは問題となっている領域の遺伝子産物に対する適
当な抗体を用いた免疫アッセイによる検知手段によって
行なわれる。相同遺伝子組換えが行なわれるためには、
ウイルスＤＮＡは複製されなければならない。現在のと
ころＮＤＶ、ＨＶＴ、またはＩＬＴＶのための細胞フリ
ーの複製系は知られていないが、もしそのような系が可
能となったら、本発明はそのような系で実施されよう。
複製および組換えが行なわれる環境は決定的なものでは
ない。
【００１９】免疫学的に利用可能なウイルス抗原をコー
ドすることに関与したＩＬＴＶおよびＨＶＴ領域は、適
当なベクター（例えばＨＶＴ、または伝染性上皮腫ウイ
ルス、細菌また菌類などのような他のベクター）に挿入
される。ウイルスベクターの場合（特にヘルペスウイル
スベクターおよび腸炎ウイルスベクター）、抗原をコー
ドしている配列（適当な配列（フランキング配列）が両
端にある）と、上記した適当な宿主細胞内にあるベクタ
ーゲノムとの間にそのような挿入がなされる。宿主にと
って内在（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ）的なものであるプロ
モーターは、非対応（ウイルス抗原をコードする）配列
の対照遺伝子発現として用いられる。細菌および菌類の
場合、抗原をコードする配列はすでに知られている方法
またはこれから発見されるであろう方法によって挿入さ
れよう。サルモネラ菌の非毒性株をそのような宿主とし
て用いることが可能である。非対応配列は宿主ゲノムに
挿入されるか、または自律的に複製するプラスミドによ
って運ばれる。フランキング配列は、非対応配列が挿入
される少なからずすべての領域が含まれる。もし、すべ
ての領域が用いられるとしたら、その領域の配列は形質
転換されたベクターに残るであろう。しかし、そのよう
な領域には機能的な欠失が生ずる。もし、その領域の全
部ではなく一部をフランキング配列として用いた場合、
機能的な欠失と同様の構造的欠失が生ずるであろう。よ
って、ＩＴＬＶの欠失または挿入突然変異のそのような
構成は、ワクチンの改良につながる。一方、ＨＶＴ、鳥
類伝染性上皮腫ウイルスまたは他のベクターに組み込ま
れたＩＬＴＶの糖タンパク質（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ）または他のＩＬＴＶタンパク質の発現は、効果的
なワクチンの製造を可能とする。
【００２０】ウイルスまたはベクターとしてＨＶＴ、Ｍ
ＤＶまたはＩＬＴＶを含むワクチンを合成するするため
に、ウイルスをニワトリ胚繊維芽細胞のような適当な細
胞内で増殖させる。この場合に用いる焙地は１９９培地
（ウエルカムまたはフローラボラトリーズ）のような標
準的な培養液を使用し、この培養液で３７℃、３ないし
４日間増殖させる。つぎに、細胞をトリプシン処理し、
１０％ジメチルスルホキシドと４％牛血清を含む培養液
に懸濁する。その後、細胞をアンプルに入れて密閉し、
そのアンプルを液体窒素保存する。通常、予防接種（ワ
クチン投与）は生後１日経過したニワトリのひよこに対
しておこなわれ、約１，０００プラーク形成単位を筋肉
注射することによってワクチン投与が実施される。この
後、数日で免疫ができる。本発明にもとづくワクチン
は、ＭＤＶに感染しやすい鳥（ｆｏｗｌ）、例えば商業
的に利用される鶏、七面鳥、あひる、がちょうなどの家
禽類を保護するために用いられるものである。以下、本
発明の好適な実施態様を添付した図を参照しながら実施
例にもとづいて説明する。
【００２１】
【実施例】一般的アプローチ バクテリオファージベクターＭ１３にクローン化された
鳥ヘルペスウイルスの短配列を選んで、それを興味ある
遺伝子全体が含まれていると考えられる長めの断片を同
定するためのプローブとして用いた。このような同定は
制限断片のサザンブロットハイブリダイゼーションによ
ってなされた。詳しくは、以下に説明する。ウイルスの
株 ＮＤＶの高い癌誘発性（ｈｉｇｈ ｏｎｃｏｇｅｎ
ｉｃ）を有するＲＢ１Ｂ株（Ｓｃｈａｔ，Ｋ．Ａ．ｅｔ
ａｌ．Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ．１１，５９３−６
０５，１９８２）を米国のコーネル大学Ｂ．カルネック
（Ｂ．Ｃａｌｎｅｋ）教授から入手した。このウイルス
の精製は、ニワトリ腎臓細胞の組織培養中においてプラ
ークを形成させることによって行なった。ニワトリＳＰ
ＦおよびＲＩＲ内で２度継代し、ひよこ胚繊維芽細胞
（ｃｈｉｃｋ ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ
ｓ；ＣＥＦ）内で４回継代した。ニワトリの遺伝的抵抗
性Ｎ−系統株に接種した場合に生ずる悪性腫瘍によって
高い癌誘発性が示された。
【００２２】ウエルカムリサーチ（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｅｃ
ｋｅｎｈａｍ，Ｋｅｗｎｔ）から得たＨＶＴのＦＣ１２
６株（Ｗｉｔｔｅｒ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．
Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．３１，５２５−５３８、１９７０）
を、ＣＥＦ内で１４回継代した。つづいて我々の研究室
においてアヒル胚繊維芽細胞（ＤＥＦ）およびＣＥＦ内
で増殖させた。そして、プラーク精製を行ない、さらに
ＣＥＦ内で増殖させた。本実施例のクローニングに用い
るウイルスＤＮＡは元の単離から数えて２４回の継代が
なされたウイルスから抽出した。組織培養 ＣＥＦは１
９９培養液（ウイエルカム社製）を含む回転ボトル中に
おいて培養された。なお、この培養液には、ペニシル
ン、ストレプトマイシン、ファンジゾン（Ｆｕｇｉｚｏ
ｎｅ）（レグド．テイー．エム；Ｒｅｇｄ．Ｔ．Ｍ）お
よび前記牛血清が添加されている（Ｒｏｓｓ，Ｌ．Ｊ．
Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．２８，３７
−４７，１９７５）。 ＣＫＣは１０ｃｍペトリ皿中で
培養した（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ，Ａ．Ｅ．ａｎｄ Ｂｉ
ｇｇｓ Ｐ．Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ，２１５，５２８−５
３０，１９６７）。
【００２３】ＭＤＶ−ＤＮＡの単離 ＲＢＩＢ感染細胞
（ｃｅｌｌ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＲＢ１Ｂ）を、回転
ボトルのＣＥＦからなる単層に、感染の程度が一細胞あ
たり約０．００１プラーク形成単位（ｐｆｕ）となるよ
うにして植つけて、３７℃で培養した。培養３日目で、
培養液を捨てて新しい培養液と交換した。交換された新
しい培養液は、２％牛血清を含む１９９培養液である。
そして、ゾーン遠心法によって感染細胞の細胞質分画か
らウイルスを単離した（Ｌｅｅ，Ｙ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．
Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．５１，２４５−２５３，１９
８０）。ウイルスＤＮＡは、精製ウイルスをサルコシ
ル、プロテナーゼＫおよびトリス緩衝液でもって一晩、
３７℃で処理し、それをグリセロール勾配でもってゾー
ン遠心（前掲、Ｌｅｅ，Ｙ．Ｓ．ｅｔａｌ．）によって
精製した。高分子量のウイルスＤＮＡをエタノールによ
って沈澱させた後、１０ｍＭのトリス／ＩｍＭのＥＤＴ
ＡからなるＴＥ緩衝液（ｐＨ７．５）に懸濁した。ＩＬＴＶ−ＤＮＡの単離 （ａ）感染ＣＫＣを採集し、播種後２〜３日経過したＰ
ＢＳで洗った後にボルテックスルによる攪拌をおこな
い、氷冷ＴＥ感傷液に再懸濁した。非イオン性の界面活
性剤であるＮＰ４０（最終濃度１％）を添加して攪拌
し、氷うえで１５分間、インキュベートした。ＲＮアー
ゼ処理後、試料を２０００ｒ．ｐ．ｍ．５分間遠心し
た。遠心後、上清を採り、ＳＤＳ（最終濃度１％）およ
びプロテナーゼＫ（最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌ）を加え
て３７℃、３０分間、インキューベートした。この混合
物を２図のフェノール／クロロホルム処理、および１図
のクロロホルム処理をおこない、続いて、１／１０容量
の３Ｍ酢酸ナトリウムを含むエタノール処理することに
よってＤＮＡを沈澱させた。
【００２４】（ｂ）また、ウイルスＤＮＡを以下の方法
によりウイルス感染細胞の培養液化ら単離下。感染後２
〜３日目のそのウイルス感染細胞の培養駅を厚め、３０
００ｒ．ｐ．ｍ．、５分間、４℃の条件でベンチトップ
遠心機により遠心処理した。遠心後、上清を再び１９，
０００ｒ．ｐ．ｍ．の回転数により超遠心（ソーバル）
を４℃、１時間の条件でおこなった。この超遠心処理に
よって得られたウイルスペレットをＴＥ緩衝液に再懸濁
し、ＲＮアーゼンでＲＮＡの消化をおこなった。そし
て、既に述べたようにしてＳＤＳおよびプロテアーゼＫ
処理をおこなって、ウイルスをこわした。最後に破壊さ
れたウイルスから既に述べた方法によりＤＮＡを抽出し
た。ＭＤＶ−ＤＮＡのクローニング １μｇのＭＤＶを
制限酵素ＢａｍＨ１によって切断し、これをジフォスフ
ォリレートｐＵＣ１３ＤＮＡのＢａｍＨ１制限部位に連
結した。一方、使用する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＴＧ
１株細胞を標準的方法（Ｈａｎａｈａｎ，Ｄ．Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．１６６，５５７−５８０，１９８３）に
よって形質転換し、この形質転換細胞をアンピリシンお
よびＸ−ｇａｌ存在下で培養した。白いコロニーを採取
し、ニックトランスレーションされたＭＤＶ−ＤＮＡと
の雑種形成（ハイブリ代是−ション）によってその存在
またはＭＤＶ挿入部位について調べた（Ｃｒｕｎｓｔｅ
ｉｎ Ｍ．ａｎｄ Ｈｏｇｎｅｓｓ，Ｄ．Ｓ．Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７２，
３９６１，１９７５）た。陽性コロニーを小量で培養
し、そしてホルムス（Ｈｏｌｍｅｓ，Ｄ．Ｓ．）および
クイグレイ（Ｑｕｉｇｌｅｙ，Ｍ．）の方法（Ｈｏｌｍ
ｅｓ，Ｄ．Ｓ．ａｎｄ Ｑｕｉｇｌｅｙ，Ｍ．，Ａｎａ
ｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１４，１９３−２９７，１９８
１）によってプラスミドＤＮＡを単離した。挿入部位の
大きさは、組換えＤＮＡをＢａｍＨ１消化し、それをア
ガロース電気泳動することによって調べた。その結果、
１ないし１８キロ塩基対（ｋｂｐ）よりも少ない塩基対
からなるＭＤＶ挿入部位を有するプラスミドが得られ
た。
【００２５】ＩＬＴＶ−ＤＮＡのクローニング ＩＬＴＶ−ＤＮＡのＥｃｏＲ１およびＢｇ１ＩＩライブ
ラリーを既に述べたようなｐＵＣＢに含まれるウイルス
ＤＮＡのクリーニング消化（ＣｌｏｎｉｎｇＤｉｇｅｒ
ｔｓ）によって得た。ウイルスＤＮＡのランダムシーク
エンシング ソニケーション処理したウイルスＤＮＡ断
片をジフォスフォリレートＭ１３．ｍｐ１０（アマーシ
ャムインターナショナルＰＬＣ）のＳｍａＩ制限部位に
クローン化し、ＭＤＶ挿入部位を含むプラークをＮＤＶ
−ＤＮＡに対するハイブリダイゼーションによって同定
した。そして、その配列を３５Ｓ−ｄＡＴＰを用いたジ
デオキシ方法（Ｓａｎｇｅｒ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７４，５４６３−５
４６７）によって同定した。同様な方法をＭＤＶ−ＤＮ
Ａのクローン化断片の配列決定に用いた。この場合、プ
ラークはｐＵＣ１３含有コロニーを避けるために標識さ
れた挿入部位とのハイブリダイゼーションによって決定
した。
【００２６】実施例１ ＭＤＶのｇＢ遺伝子 ＨＶＴのＭ１３クローンは、ＭＤＶのＢａｍＨ１断片１
３とハイブリダイズされたＨＳＶおよびＶＺＶのｇＢ遺
伝子に対して相同性を示す（第１図参照）。ＭＤＶのＲ
Ｂ１株のＢＢａｍＨ１ライブラリーから得たこの断片の
シークエンシングが示すことによれば、その遺伝子のＮ
Ｈ３末端から始まる１／３の部分がＩ３を含んでいた。
この遺伝子の残りの部分は、隣接する制限断片Ｋ３と同
定された。第１図は、２．６ｋｐの長さからなる遺伝子
の位置を示す地図である。その遺伝子から転写されたｍ
ＲＮＡの長さは２．６ｋｐと推測される。翻訳されたタ
ンパク質の長さはアミノ酸、８６５個に相当した（図２
０）。これはシグナル配列ドメインの部分を構成する約
２０のアミノ酸も含まれる。ＭＤＶ−ｇＢ遺伝子の初期
翻訳配列は他のヘルペスウイルスのｇＢ遺伝子と共通な
部分、例えばシステイン残基の列および脂質二重層を広
げることが可能な疎水性配列が存在する（Ｐｅｌｌｅ
ｔ，Ｐ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５３，２４
３−２５３，１９８５）。しかし、ＭＤＶのｇＢ遺伝子
はＨＳＶのｇＢ遺伝子とたった４８％のアミノ酸配列の
相同性しか認められず、２３個のアミノ酸（１８５１−
１９２０残基、図２−１９）の挿入およびグリコシレー
ションによるエクストラ部位の存在など独特の姿を示
す。ＨＶＴのｇＢ（図２−１９）に該当する限定された
配列データ（７０２塩基）とＭＤＶのｇＢの配列とを比
較すると、これら２つの糖タンパク質に関して７６．９
％の核酸の相同性と８７．１％のアミノ酸の相同性とが
認められた。ＭＤＶのｇＢと比較してＨＶＴのｇＢにお
けるアミノ酸置換は、ウイルス中和に関連したＨＳＶの
ｇＢのドメインと等価な領域（１３２３−１４３３残
基）に特に集中した（前掲、Ｐｅｌｌｅｔ Ｐ．Ｅ．ｅ
ｔ ａｌ．１９８５）。ＭＤＶおよびＨＶＴのｇＢ間に
おけるアミノ酸置換もまた、未知の機能に関連した他の
領域に集中された。
【００２７】実施例２ ＨＶＴのｇＨ遺伝子およびＭＤＶのｇＨ遺伝子 ＨＳＶのｇＨ遺伝子に相同な配列を含むＨＶＴのＭ１３
クローンは、遺伝子同定およびマッピングに関するわれ
われの初期の研究において同定された（前掲、Ｂｕｃｋ
ｍａｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．１９８８）。このクローン
は、プローブとして用いた場合、ＨＶＴの６ｋｂからな
るＨｉｎｄＩＩＩ断片とハイブリダイズ（雑種形成）す
る（図２０）。シークエンス（配列決定）によって、こ
の断片がカルボキシ末端を含むおよそ１／４のｇＨ遺伝
子を含むことが明らかになった。ｇＨ遺伝子の残りの部
分を有する隣接するＨｉｎｄＩＩＩ断片（３．２ｋｂ）
はＨｉｎｄＩＩＩ部位と重なり合うＨＶＴのクローン化
ＨｐａＩ断片とハイブリダイゼーションされた。第４図
は、ＨＶＴのｇＨ遺伝子の遺伝暗号領域（コード領域）
とフランキング配列とを示すものである。ＨＶＴのｇＨ
遺伝子と、ＨＳＶ１、ＶＺＶおよびＥＢＶに含まれるそ
の相同遺伝子との間におけるアミノ酸の同一性（％）
は、それぞれ２０、２４および２０であった（アミノ酸
が最大重なり合った数６３０、６４４および１５３から
それぞれ推定した）。
【００２８】実施例３ ＨＶＴのＴＫ遺伝子とＭＤＶのＴＫ遺伝子 ＨＶＴのＴＫ遺伝子の全遺伝暗号領域（１０５３ｂｐ）
は、前記した３．２ｋｂｐからなるＨｉｎｄＩＩＩ断片
を含むものである（図２０）。遺伝子全体およびフラン
キング領域の配列は図２９−３８に示した。同様に、Ｍ
ＤＫのＴＫ遺伝子はＭＤＶの３．６ｋｂｐからなるＢａ
ｍＨ１Ｋ２断片を含むものである。ＭＤＫのＴＫ遺伝子
の完全な配列を図６３ に示した。ＭＤＶおよびＨＶ
ＴのＴＫ配列の比較空、２つの遺伝子は６０％のアミノ
酸の同一性を有することがわかった。これとは対照的
に、ＨＶＴのＴＫ遺伝子とＨＳＶ１、ＶＺＶおよびＥＢ
ＶのＴＫ遺伝子間の同一性はそれぞれたったの３０、２
７および２４％であった（アミノ酸が最大重なり合った
数３２０、３３２および１９３からそれぞれ推定し
た）。ＨＶＴおよびＭＤＶのＴＫ遺伝子から予想される
アミノ酸配列は、ジン酸化に関連したいくつかのウイル
スおよび真核生物のタンパク質のためのＡＴＰおよび
（または）ＣＴＰ結合部位の特徴を示した（Ｇｅｎｔｒ
ｙ，Ｇ．Ａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＡＳｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６８１５−６８１９）。これら
の保守的な配列は外来遺伝子の発現および挿入のための
好適な部位として、またＴＫ−欠失突然変異体を産生す
るのに好適である。
【００２９】実施例４ ＭＤＶ（ｇＰ５７−６５）（ｇＣ相同遺伝子）のＡ抗原
遺伝子 Ａ抗原遺伝子は、ＨＳＶの相同遺伝子として同定された
ことからワクチンの開発にとって大変興味深い遺伝子で
あり、免疫源（主要グリコポリペプチド産物をコードす
る）として、また非必須領域として用いられる。このＡ
抗原遺伝子は、ＭＤＶのＢａｍＨ１Ｂ断片の中に置かれ
ており（Ｉｓｆｏｒｔ ｅｔ ａｌ．１９８７）、ＭＤ
ＶのＧＡ株に関してはヌクレオチド配列が決定されてい
る（Ｃｏｕｓｓｅｎｓ ａｎｄ Ｖｅｌｉｃｅｒ，Ａｂ
ｓｔｒａｃｔ ＯＰ１８．５１，ＶＩＩ Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｖｉｒｏｌ
ｏｇｙ９−１４Ａｕｇｕｓｔ，（１９８７）Ｅｄｍｏｎ
ｔｏｎ，Ｃａｎａｄａ；Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２，２３７
４−２３７９）。前記したランダムなシークエンス決定
に関する研究過程において、Ａ抗原遺伝子発現産物であ
るＭ１３クローン（Ｎｏ．１３０）を同定した。よっ
て、このクローンをＡ抗原を含むＭＤＶのＲＢ１Ｂ株か
ら得られた２．３ＫｂｐのＥｃｏＲ１／ＰｖｕＩＩ断片
を同定するのに用いた。そして、この断片を標準的な方
法により、ＳｍａＩ／ＥｃｏＲ１によって裂かれたｐＵ
Ｃ１３ベクターにクローン化した。ＭＤＶのＲＢ１Ｂの
Ａ抗原の配列と予想されるアミノ酸配列とは図３９−４
４に示した。
【００３０】ＭＤＶおよびＨＶＴのＡ抗原領域は非必須
遺伝子であり、よってＭＤＶおよびＨＶＴ内の部位とし
て好適であり、その中に相同遺伝子組換えによって他の
遺伝子が挿入されよう。このことはいくつかの証拠から
支持される。それらの証拠を以下に示す。 （１）われわれの研究において、他のＲＢ１ＢのＡ抗原
が単離され、かつ配列決定された。これは３’からＡ抗
原ＡＴＧコドンまでのＴが４５塩基つらなった（Ｔ’ｓ
４５ ｂａｓｅｓ ３’ｔｏ ｔｈｅ Ａ ａｎｔｉ
ｇｅｎ ＡＴＧｃｏｄｏｎ）余分な（エクストラ）Ｔ残
基を有する。このエクストロラＴは遺伝子に機能的なＡ
抗原をコードさせるのを不可能にするようなフレームシ
フト変異を引き起こす。この遺伝子は複製ＭＤＶからク
ローン化可能であるので、その結果Ａ抗原はウイルスに
とって非必須的なものであることになる。
【００３１】（２）同様な研究から、ＭＤＶのＡ抗原は
ＨＳＶのｇＣおよびＰＲＶのｇｐＩＩＩ糖タンパク質と
相同であることが明らかになった。これら２つの相同遺
伝子は非必須的なものと考えられている（ＨＳＶ相対体
にとって、ロセンタルらの文献：Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ
ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１，２４３８−２４４
７を見よ。 （３）ＭＤＶの株であって寒天ゲル分散試験によってＡ
抗原が欠如していると判定された株（ｃｈｕｒｃｈｉｌ
ｌ，Ａ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．
４，５５７−５６４，１９６９）またはより感度の高い
２次元免疫沈降試験において低レベルの検出結果を示す
株が報告されている（Ｖａｎ Ｚａａｎｅ，Ｄ．ｅｔ
ａｌ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １２１，１３３−１４６）。
さらに、Ａ抗原は主要な分泌糖タンパク質であり、Ａタ
ンパク質にある外来エピトープを示すための好適な場所
（ｌｏｃａｔｉｏｎ）であろう。これによって、Ａ抗原
遺伝子内にあるフレーム内のエピトープをコードしてい
るオリゴヌクレオチドをコードすることが可能であろ
う。ＨＶＴおよびＩＬＴＶベクターへ遺伝子を導入するため
の戦略 ２つの可能性がある、すなわち、（１）ベクターの非必
須的遺伝子への挿入、（２）ベクターの該当する得電子
との置換。これは、ＭＤＶおよびＨＶＴのいくつかの遺
伝子間において実質的に相同な領域においてのみ可能で
ある。
【００３２】実施例５ ＨＶＴ，ＩＬＴＶまたはＭＤＶの非必須的遺伝子への挿
入 （ａ）ベクターのＴＫ遺伝子座への挿入 （１）ＨＶＴ，ＩＬＴＶまたはＭＤＶは鳥ペルペスウイ
ルスの遺伝子の挿入および発現のためのベクターとして
用いられることが可能であろう。特にＭＤＶのＲＢ１Ｂ
株のｇＢ，ｇＣ，ｇＨまたはｇＣは、ＩＬＴＶに挿入さ
れる。また、ＩＬＴＶのｇＢおよびＤＳ−１７はＨＶＴ
またはＭＤＶに挿入される。これらは、挿入された遺伝
子と結合したプロモーター、非対応（ｈｅｔｅｒｏｌｏ
ｇｏｕｓ）プロモーター、或はこれらの異なるクラスに
ある遺伝子（例えば、ｇＢ遺伝子発現に好適な即時型初
期プロモーター）を用いるであろう。 （２）ＩＬＴＶは、鳥ペルペスウイルスの遺伝子とは無
関係な遺伝子を挿入および発現させるための一般的なベ
クターとして利用可能であり、また、最適な発現のため
のプロオモーターを操作する必要とする遺伝子の挿入に
用いられる方法は、ＨＳＶへの肝炎抗原の挿入に関する
既知の方法（前掲、Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．１９８４）
に基づく。既に述べた方法に因って得られたＭＤＶおよ
びＨＶＴのＤＮＡは、ＤＮＡ抽出中にＤＮＡの切断が起
こらないような予防策を講じることによって、間宣誓を
そこなわず、ＤＮＡを保護することができる。
【００３３】ストウおよびウイルキーの方法（前掲、Ｓ
ｔｏｗ ＆Ｗｉｌｋｉｅ Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．３
３，４７７，１９７６）によって得られたウイルスＤＮ
Ａのリン酸カルシウム沈澱物をＣＥＦからなるサブコン
フルエント（ｓｕｂ−ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）な単層に添
加した。１時間、３７℃で吸着させた後、培養液を添加
して細胞が密集した状態（コンフルエントな状態）とな
るまで１〜２日間培養した。コンフルエントな状態から
なる１９９培地（ウエルカム）と、前記培養駅の一部を
置き換えた（１：１または２：１）。そして、プラーク
が形成されるまで、３７℃で培養した。通常、このプラ
ーク形成は４〜５日後に見られるようになる。１μｇの
ＨＶＴ−ＤＮＡあたり、約２００のプラークが得られ、
また１μｇのＭＤＶ−ＤＮＡあたり、約５０のプラーク
が得られるであろう。組換えウイルスの相同遺伝子組換
えおよび単離のために、目的とする遺伝子を前記したよ
うな１０：１ないし２：１のＴＫまたはｇＣおよび野生
型ウイルスと共形質転換したような非必須的遺伝子へ、
挿入する。或は、完全な野生株を共感染（ｃｏ−ｉｎｆ
ｅｃｔｉｏｎ）に用いることが可能である。
【００３４】ＨＶＴのＦｃ−１２６株のＴＫ遺伝子への
外来抗原遺伝子を挿入することに用いられる制限酵素
は、ＢａｎＩＩ、Ｂｓｐ１２８６、ＤｒａＩＩＩ、Ｅｃ
ｏＲＩ、ＨｉｎｃＩＩ、ＨｐａＩ、ＮｈｅＩおよびＮｓ
ｐｂＩＩおよびＳｐｈＩである。これらの制限酵素によ
る切断（消化）部位は、ＴＫ遺伝子の発現を妨害する外
来ＤＮＡの挿入部位として用いられ、ＴＫ遺伝子部分が
これらの酵素（またＥｃｏＫも利用可）の組合せによる
二重消化によって取り除かれて、不活性化させる。これ
らの酵素のいくつかは、プラスミドベクターに消化部位
をもち、このような部位にウイルスＤＮＡ断片がクロー
ン化される。よって、ベクターを切断することなしにク
ローン化されたＤＮＡを直線化するために制限酵素によ
る部分消化の手法が用いられよう。
【００３５】前記した酵素群には、フランキング遺伝子
活性を阻害するようなものは含まれておらず、ＨＳＶ−
１相同遺伝子がウイルスの増殖に重要な役割を果たす。
ウイールスの組換えは、「プラークリクフト（ｐｌａｑ
ｕｅｌｉｆｔｓ）」によって検知することが可能であ
る。このプラークリフトは、寒天培地にへばりついた感
染細胞と、放出されたウイルスとをニトロセルロースに
移すことによって、そのニトロセルロース上で、細胞か
らの変性ＤＮＡと、ウイルスとをハイブリダイゼーショ
ンするもので、細胞のＤＮＡはヴィラレアル５の文献
（Ｖｉｌｌａｒｅａｌ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ １９６，１８３−１８５，１９７７）に記載された
好適なプローブとする。プローブと雑種形成されたウイ
ルスは、単層培養回収できる。同様の方法が目的とする
エプトープを発現する組換えウイルスを単離することに
用いることが可能である。例えば、「プラークリフト」
に用いられるニトロセルロースに抗体処理をほどこし、
つづいて結合したフォスファターゼまたは標識プロテイ
ンあのような適当な検知システムを用いることによっ
て、この結合した抗体の存在を検出することができる。
そして、アシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）（前掲、
Ｒｏｓｓ，Ｎ．１９８５） （Ｓｃｈａｔ，Ｋ．Ａ．ｅｔ．ａｌ．Ａｎｔｉｖｉｒａ
ｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ４，１５９−２７０，１９８４）
またはＦＭＡＵを含む培地で増殖させることによってＴ
Ｋ−ウイルスを選別する。適当なプロモーターをもつ遺
伝子をまず最初にクローン化ＴＫ遺伝子（図４５−５
５）に挿入する。
【００３６】次に、この組換えＤＮＡをひよこ胚繊維芽
細胞または、ニワトリ腎臓細胞中にベクターの感染ＤＮ
Ａと同時トランスフェクション（ｃｏ−ｔｒａｎｓｆｅ
ｃｔｉｏｎ）させる。この戦略の主な利点は、前記選別
方法が目的とする遺伝子を含むウイルスの組換え体を得
るチャンスを増大させることである。また、最適な発現
に適したプロモーターの選択が可能となることである。
よって、即時型プロモーターの利用は、潜伏性（ｌａｔ
ｅｎｔｌｙ）感染細胞における発現を可能とする。 （ｂ）ベクターのｇＣ遺伝子座における挿入、Ａ抗原Ｃ
ＨＳＶのｇＣ遺伝子ＨＶＴおよびＭＤＶ相同遺伝子）は
生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）およびガラス器内（ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ）系（ｇＣに関するセッション参照）でのウイ
ルス増殖にとって必須なものではないので、その部分は
外来遺伝子の挿入および発現のための好適な部位となる
であろう。さらに、Ａ抗原は、豊富にある抗原の一つで
あり、また分泌されるものであることから、外来タンパ
ク質の免疫特性を強化することに利用できる。このＡ抗
原遺伝子座におけるウイルス組換え体の単離は目的とす
る遺伝子の少なくとも一部がｇＣ遺伝子にあるクレーム
にまず挿入され、そして間宣誓ウイルスＤＮＡとともに
形質転換されることによって達成される。配列特異的プ
ローブまたは特異的抗体によるウイルスプラークのスク
リーニングは、組換え体の単離を可能とする。
【００３７】実施例６ ＨＶＴにおけるＩＬＴＶ遺伝子とその相同遺伝子との置
換 実施例５に示した方法によって、置換はクローン化され
たＩＬＴＶ配列と感染性ＨＶＴ−ＤＮＡとの同時トラン
スフェクションによって達成される。ＩＬＴＶから誘導
された遺伝子をＨＶＴのそれに対応するものと置換する
ことが効果的であろう。ＩＬＴＶ配列とエピトープとを
発現する組換え体は、ＩＬＴＶ特異的モノクローン抗体
または、既に述べたユニークＩＬＴＶ配列に対する抗ペ
プチド抗体を用いることによって検出できる。この方法
の利点は、プロモーターの操作を必要としないことと、
相対的に単純な方法から成るということである。しか
し、相同な部分を持つ遺伝子に限定される。
【００３８】実施例７ ＩＬＴＶのＴＫ−突然変異体を得るための戦略欠失突然
変異 欠失を遺伝子のどの場所にでも生じさせることが可能で
ある。例えば、ＡＴＰおよびＣＴＰ結合部位をリン酸化
するような酵素としての機能に必要な遺伝子のドメンに
対してである。これは、制限酵素による二重消化（ｄｏ
ｕｂｌｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）によって達成される。
ここで用いられる制限酵素は、ＳｎａＢ１またはＢｃ１
Ｉである。二重消化後、適当な断片を再結合させ、つづ
いて、ウイルスＤＮＡとの同時トランスフェクションま
たは、ウイルス感染細胞へのトランスフェクションを実
施する。制限酵素の選択などによる図４５−５５、図５
６およびプラスミドｐＩＬＢｇの地図（図６７）を参照
してもらいたい。ＴＫ−ウイルスはアシクロビル（ａｃ
ｕｃｌｏｖｉｒ）（前掲、Ｒｏｓｓ，Ｎ．１９８５）ま
たは、ＦＭＡＵ（前掲、Ｓｃｈａｔ，Ｋ．ａ．ｅｔ ａ
ｌ．１９８４）の存在下よって、ハイブリダイゼーショ
ンによって、プラーク精製クーロンにおけるＫ遺伝子の
欠失う部位の不存在に関して調べた。ＩＬＴＶの欠失う
突然変異対それ自体をワクチン合成のための弱毒化ウイ
ルスとして用いること、また挿入されたヘテロな抗原遺
伝子配列をもつものとして用いることが可能である。
【００３９】挿入突然変異 ヘルペスウイルスプロモーターまたは他の適当な配列な
たはシグナル塩基による調整下にある機能的β−ガラク
トリダーゼ遺伝子は、ＴＫ活性によって重要なＴＫ遺伝
子のドメインにまず誘導される。そして、組換え体ＤＮ
Ａは間宣誓ウイルスだＮと共形質転換するか、もしくは
ウイルス感染細胞にトランスフェクションして、相同遺
伝子組換えをおこす。アセロビルまたはＦＭＡＵ存在下
における選別はＴＫ−挿入突然変異体を生じさせるであ
ろう。もし、β−ガラクトリダーゼが導入されたとした
ら、突然変異体はＸ−ｇａｌ存在下で青い色のプラーク
が生じることによって検出される。必要に応じてＴＫ遺
伝子とそれを囲む配列を他の適当なベクターにサブクロ
ーン化することができる。
【００４０】実施例８ ＨＶＴへのＭＤＶのＲＢＩＢ株に存在するｇＤ遺伝子の
挿入 （本発明の範囲に囲まれないが、類似の方法を示す）Ｈ
ＶＴのＴＫ遺伝子をプラスミドベクターｐＵＣＢにフロ
ー化し、ｐＴＫ１Ｂと呼ばれるプラスミドを作る。この
プラスミドを、例えばＴＫ遺伝子のみをもつプラスミド
を切断する制限エンドヌクレアーゼＲｓｒＩＩ（図２９
−３８のヌクレオチド配置１９７，酵素認識部位（ＧＧ
ＡＣＣＧ）によって直線化する。これによって、「粘着
性（ｓｔｉｃｋｙ）」端末が生じ、この生じた端末を通
常の方法（参考文献：″Ｍｏｌｅｃｕｌａ ｒＣｌｏｎ
ｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ ｙＭａｎｕａｌ″，
ｅｄ．Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．，ＦｒｉｔｓｃｈＥ．
Ｆ．，ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ．Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９
８２）によつて修復する。
【００４１】ＲＢ１ＢのｇＢ 遺伝子を独自に２つのプ
ラスミド上にクーロン化し、それぞれＲＢ１Ｂ−Ｂａｍ
Ｈ１−Ｉ３およびＲＢ１Ｂ−ＢａｍＨ１−Ｋ３と命名し
た。一つのプラスミド上にある完全な複製ｇＢ遺伝子を
生じさせる為に、両方のプラスミドをＢａｍＨ１で切断
し、そして切断を連結（レゲーション）した。目的通り
に作られた組換え体をプラスミドＤＮＡの制限酵素分析
によって同定した。しかし、前記したように、完全なｇ
Ｂ配列は実質的にＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩで切断し、両端
を修復してそのプラスミドを前記のように合成されたＰ
ＴＫ１Ｂにクローン化した。また、ＭＤＶのｇＢオープ
ンリーディングフレームは、ＨｉｎｃＩＩおよびＮａｅ
Ｉによる消化によって、プラスミドＭＳＢ２７から切り
出され、部分的にＨｐａＩによって切断されたＨＶＴの
ＴＫプラスミドｐＴＫ１Ｂに連絡される。ＴＫとｇＢの
両配列を含む組換え体プラスミドはハイブリダイゼーシ
ョンによって同定され、さらにサザンブロットによって
分析される。そして、組換え体プラスミドはＨＶＴウイ
ルス（ウイルスＤＮＡ）を含む細胞に誘導され、ＴＫ遺
伝子へｇＢ遺伝子を誘導することにようる相同遺伝子組
換えがおこなわれる。ＪＶＴウイルス組換え体はアシク
ロビルまたはＦＭＡＵによって選別され、或は標識ｇＢ
プローブによって検出される。
【００４２】実施例９ ＨＶＴに挿入されるＲＢ１ＢのｇＣ（ＣＡ抗原）遺伝子 末端が鈍くなった（ｂｌｕｎｔ ｅｎｄｅｄ）ＰＴＫ１
Ｂを実施例８に示されるようにして合成した。ＲＢ１Ｂ
のｇＣ遺伝子を制限エンドヌクレマーゼＥｃｏＲＩおよ
びＨｉｎｄＩＩＩ（ｐｕＣ１３ポリリンカーに含まれる
部位）によって、プラスミドｐＭＢ４１９（実施例４）
から切断した。これによって生じた粘着性末端を標準的
なプロトコールに基づいて再び修復した。末端を修復さ
れたｇＣ断片を実施例８に示したようにして直線化され
た末端修復ｐＴＫ１Ｂにクローン化した（クローニング
は、制限酵素による獲られるクローンの分析放射性同位
元素標識断片によるプロービング、またはＤＮＡセーク
エンシング、または、これらの組合せによって変化に富
んだものである。）
【００４３】ＨＶＴの中にクローン化されたＲＢ１Ｂの
ｇＣ遺伝子をもつプラスミドを、リン酸カルシウムによ
る沈澱またはエレクトロポレーション（電気穿孔）によ
ってＨＶＴ−感染細胞にトランスフェクションさせた。
ｇＣ遺伝子の両端をクロスオーバー（ｃｒｏｓｓ−ｏｖ
ｅｒ）させたＨＶＴウイルスとＨＶＴのＴＫプラスミド
のフランキング配列との間の相同遺伝子組換えは、ＲＢ
１ＢのｇＣ遺伝子をＨＶＴウイルスゲノムへ運ぶ。ウイ
ルス組換え体は前記のようにして、ＴＫ−として選別さ
れ、またはプロービングによって同定される。類似の方
法として、既に述べられ、かつ図に示された並列情報
は、それらの遺伝子などをここで開示したＩＬＴＶの非
必須的ゲノムに挿入するためのクローニング戦略を提供
するために用いられるものであり、またはＩＬＴＶ中の
抗原遺伝子を作るために利用される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＢａｍＨ１部位の分布とｇＢおよびＴＫ遺伝
子の位置を示すＭＤＶの地図。
【図２】 ＭＤＶのＲＢ１Ｂ株に存在するｇＢ遺伝子の
ヌクレオチド配列。ＭＤＶの各ヌクレオチドを参照して
番号を付けた。ＨＶＴのｇＢ遺伝子に該当する部分のヌ
クレオチド配列のところには下側に記載されている。相
同性は垂直の棒によって示されている。ＭＤＶのｇＢ遺
伝子とＨＶＴのｇＢ遺伝子と間のアミノ酸の違いは上側
に示されている。
【図３】 図２の続き。
【図４】 図３の続き。
【図５】 図４の続き。
【図６】 図５の続き。
【図７】 図６の続き。
【図８】 図７の続き。
【図９】 図８の続き。
【図１０】 図９の続き。
【図１１】 図１０の続き。
【図１２】 図１１の続き。
【図１３】 図１２の続き。
【図１４】 図１３の続き。
【図１５】 図１４の続き。
【図１６】 図１５の続き。
【図１７】 図１６の続き。
【図１８】 図１７の続き。
【図１９】 図１８の続き。
【図２０】 ｇＨ（破線）、ＴＫ（黒塗）および主キャ
プシドタンパク質（ＭＣＰ、点）の各遺伝子の位置を示
す図。それぞれのＨｉｎｄＩＩＩ部位をＨで表わしてい
る。
【図２１】 ＨＶＴｇＨ遺伝子の大部分のヌクレオチド
配列。対応するアミノ酸配列を上部に示す。
【図２２】 図２１の続き。
【図２３】 図２２の続き。
【図２４】 図２３の続き。
【図２５】 図２４の続き。
【図２６】 図２５の続き。
【図２７】 図２６の続き。
【図２８】 図２７の続き。
【図２９】 ＨＶＴ ＴＫ遺伝子のヌクレオチド配列。
番号はＨＶＴヌクレオチドを参照。ＨＶＴ ＴＫ遺伝子
の部分の配列は下に記載。相同性は垂直棒で示す。ＭＤ
Ｖ ＴＫとＨＶＴ ＴＫのアミノ酸の違いは上部に示
す。
【図３０】 図２９の続き。
【図３１】 図３０の続き。
【図３２】 図３１の続き。
【図３３】 図３２の続き。
【図３４】 図３３の続き。
【図３５】 図３４の続き。
【図３６】 図３５の続き。
【図３７】 図３６の続き。
【図３８】 図３７の続き。
【図３９】 ＭＤＶのＲＢＩＢ株のｇＣ遺伝子のヌクレ
オチド配列。対応するアミノ酸は上部に示す。
【図４０】 図３９の続き。
【図４１】 図４０の続き。
【図４２】 図４１の続き。
【図４３】 図４２の続き。
【図４４】 図４４の続き。
【図４５】ＴＫ遺伝子のクラスターを含むＩＬＴＶゲノ
ムの５４００塩基対のヌクレオチドと、予想されるアミ
ノ酸配列を示す図。主要なオープンリーディングフレー
ム（ＯＲＦｓ）を作ると予想されるアミノ酸配列はスト
ランド用配列の下に、また、相補ストランド用配列のの
上に単一文字コートで示してある。
【図４６】 図４５の続き。
【図４７】 図４６の続き。
【図４８】 図４７の続き。
【図４９】 図４８の続き。
【図５０】 図４９の続き。
【図５１】 図５０の続き。
【図５２】 図５１の続き。
【図５３】 図５２の続き。
【図５４】 図５３の続き。
【図５５】 図５４の続き。
【図５６】 ＩＬＴＶゲノムのＴＫを含む部分での遺伝
子体系を示す図。ＩＬＴＶ ＤＮＡのＥｃｏＲ１（ｐＩ
ＬＥｃ１）とＢｇ１ＩＴ（ｐＩＬＢｇ２）産生断片を含
む互いに重なるＰＵＣ１３プラスミドクローンを示して
いる。
【図５７】 ＩＬＴＶ ｇＢ遺伝子のヌクレオチド配列
の一部。
【図５８】 ＩＬＴＶ リボヌクレオチド還元酵素のヌ
クレオチド配列の一部（大きなサブユニット）。
【図５９】 ＶＺＶ６２／ＨＳＶ−１ ＩＥ１７５遺伝
子のＨＴＶ相同体のヌクレオチド配列。
【図６０】 ＨＴＶリボヌクレオチド還元酵素（大きな
サブユニット）遺伝子のヌクレオチド配列の一部
【図６１】 ＭＤＶリボヌクレオチド還元酵素（大きな
サブユニット）遺伝子のヌクレオチド配列の一部
【図６２】 図６１の続き
【図６３】 ＭＤＶリボヌクレオチド還元酵素（小さい
サブユニット）遺伝子のヌクレオチド配列の一部
【図６４】 ＨＳＶ−１ ＩＥ−１７５遺伝子のＭＤＶ
相同体のヌクレオチド配列の一部。
【図６５】 ＨＳＶ−１ ＩＥ−６８遺伝子のＭＤＶ相
同体の一部。
【図６６】 ウイルス性ゲノムの非必須領域およびプラ
スミドベクター内でクロー発生させたＤＮＡの相同領域
での相同的遺伝子組み換え法を示す概念図。
【図６７】 ＴＫ遺伝子およびＯＲＦｓ３、５の制限部
位と位置とを示すｐＩＬＢｇ２プラスミドの地図。
【手続補正書】
【提出日】平成１２年９月２０日（２０００．９．２
０）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/21 1/21 7/00 5/10 7/04 7/00 Ｃ１２Ｎ 9/02 7/04 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ // Ｃ１２Ｎ 9/02 (Ｃ１２Ｎ 7/00 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｎ 7/00 (Ｃ１２Ｎ 7/04 Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｎ 7/04 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） 5/00 Ａ (72)発明者 ロッス，ルイース ジョセフ ノーマン イギリス国 ＰＥ17 ２ＤＡ ハンティン ドン ホートン ホートン ラボラトリー （番地なし） インスティチュート フ ォア アニマル ヘルス リミテッド内 (72)発明者 スコット，サイモン デビッド イギリス国 ＰＥ17 ２ＤＡ ハンティン ドン ホートン ホートン ラボラトリー （番地なし） インステイチュート フ ォア アニマル ヘルス リミテッド内 (72)発明者 ビンズ，マシュー マッキンリー イギリス国 ＰＥ17 ２ＤＡ ハンティン ドン ホートン ホートン ラボラトリー （番地なし） インスティチュート フ ォア アニマル ヘルス リミテッド内

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヌクレオチド配列であって、前記配列は
    前記配列と結合した野生株ウイルス内において前記配列
    に隣接する配列は含まれず、また前記配列は以下のグル
    ープから選ばれることによって成り立つ： （ａ）ＨＳＶのｇＢ遺伝子と相同なＨＶＴの遺伝子、
    （ｂ）ＨＳＶのｇＣ遺伝子と相同なＨＶＴの遺伝子、
    （ｃ）ＨＳＶのｇＨ遺伝子と相同なＨＶＴの遺伝子、ま
    たはその２７３−３２０または８６７−９２６の部分、
    （ｄ）ＩＬＴＶのＴＫ遺伝子、（ｅ）ＨＳＶのｇＢ遺伝
    子と相同なＩＬＴＶの遺伝子、（ｆ）ＩＬＴＶのＯＲＦ
    ２、（ｇ）ＩＬＴＶのＯＲＦ３、および（ｈ）ＩＬＴＶ
    のリボヌクレオチド還元酵素（大サブユニット）遺伝
    子、（ｉ）ＨＴＶのリボヌクレオチド還元酵素（大サブ
    ユニット）遺伝子、（ｊ）ＭＤＶのリボヌクレオチド還
    元酵素（小サブユニット）遺伝子、（ｋ）ＭＤＶのリボ
    ヌクレオチド還元酵素（大サブユニット）遺伝子、
    （ｌ）ＨＳＶ−Ｉの即時型初期遺伝子ＩＥ−６８と相同
    なＨＶＴの遺伝子、そして（ｍ）ＨＳＶ−Ｉの即時型初
    期遺伝子ＩＥ−１７５と相同なＨＶＴの遺伝子。
  2. 【請求項２】 請求の範囲第１項記載にもとづく配列で
    あって、前記配列は遺伝暗号部分と（または）、前記配
    列の少なくとも５’もしくは３’側の非遺伝暗号部分と
    によって構成さることを特徴とする。
  3. 【請求項３】 請求の範囲第１項または第２項（ｃ配列
    を除く）記載にもとづく配列と適当な宿主で複製可能な
    ＤＮＡとを含むことを特徴とするプラスミドベクター。
  4. 【請求項４】 請求の範囲第３項記載にもとづくプラス
    ミドベクターであって、前記ベクターはＭＤＶ−、ＨＶ
    Ｔ−、またはＩＬＴＶ−感受性細胞に適当なベクターで
    あることを特徴とする。
  5. 【請求項５】 ＭＤＶ、ＨＶＴ、またはＩＬＴの挿入ま
    たは欠失突然変異体であって以下の特徴を有する：、 （ｉ）ＨＶＴの場合、ＨＳＶのｇＣ遺伝子に相同な領域
    の突然変異またはＴＫ遺伝子のリボヌクレオチド還元酵
    素遺伝子の突然変異であり、 （ｉｉ）ＭＤＶの場合、ＨＳＶのｇＣ遺伝子に相同な領
    域の突然変異またはリボヌクレオチド還元酵素遺伝子
    （小サブユニット）の突然変異またはリボヌクレオチド
    還元酵素遺伝子（大サブユニット）の突然変異であり、
    また （ｉｉｉ）ＩＬＴＶの場合、ＴＫ遺伝子、ＯＲＦ
    ３またはリボヌクレオチド還元酵素遺伝子（大サブユニ
    ット）の突然変異である。
  6. 【請求項６】 請求の範囲第５項記載の突然変異体ウイ
    ルスであって、非必須的部分の遺伝子は前記突然変異の
    領域に挿入まれることを特徴とする。
  7. 【請求項７】 請求の範囲第６項記載の突然変異体ウイ
    ルスであって、前記相同な遺伝子は抗原、またはＨＶ
    Ｔ、ＭＤＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤ、ニューキャッ
    スル病もしくはエイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）と結合し
    た前記抗原の部分をコードすることを特徴とする。
  8. 【請求項８】 請求の範囲第１項記載のＨＶＴのｇＨ遺
    伝子の部分のいずれか一つによってコードされたことを
    特徴とするペプチド。
  9. 【請求項９】 請求の範囲第５項記載にもとづく突然変
    異体を調製するための方法であって、前記方法は、 （ｉ）（ａ）前記領域の欠失または挿入突然変異体コピ
    ーと、（ｂ）ＭＤＶ、ＨＶＴ、またはＩＬＴＶから得ら
    れた全ウイルスＤＮＡまたは全ＨＶＴ、ＭＤＶまたはＩ
    ＬＴＶウイルスのいずれか一方と相同遺伝子組換えを行
    なうこと、そして （ｉｉ）組換え体ウイルスを単離することからなる。
  10. 【請求項１０】 請求の範囲第１１項記載の方法であっ
    て、前記（ｉ）において前記突然変異体コピーと、全ウ
    イルスＤＮＡまたは全ウイルスのいずれか一方とを適当
    な細胞に導入するもので、また前記細胞内に取り込また
    前記ＤＮＡの複製過程中に前記組換えが起こることを特
    徴とする。
  11. 【請求項１１】 請求の範囲第５項記載にもとづく突然
    変異体ＩＬＴウイルスとＩＬＴＶ感受性細胞とを含むワ
    クチンであって、前記ウイルスは少なくとも前記突然変
    異の結果により弱毒化されていることを特徴とする。
  12. 【請求項１２】 請求の範囲第５項、第６項、または第
    ７項記載にもとづく突然体と、感受性細胞とを含み、Ｍ
    ＤＶ、ＨＶＴ、またはＩＬＴＶに対して効果的であるこ
    とを特徴とするワクチン。
  13. 【請求項１３】 ＩＬＴＶ、ＨＶＴ、またはＭＤに対し
    て効果的な種痘ベクターであって、前記ベクターは家禽
    内で複製可能な微生物を含むもので、前記微生物は配列
    （ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｌ）また
    は（ｍ）のいずれか一つまたは複数にもとづいた異種で
    複製可能なＤＮＡを含むＩＬＴＶまたはＨＶＴベクター
    を有することを特徴とする。
  14. 【請求項１４】 キャリアメジウムと請求の範囲第１３
    項記載にもとづくベクターとからなることを特徴とする
    ワクチン。
  15. 【請求項１５】 請求の範囲第１４項記載にもとづくワ
    クチンであって、前記キャリアメジウムはＩＬＴＶ−、
    ＨＶＴ−、またはＭＤＶ−感受性細胞を含むもので、ま
    た前記ベクターはＩＬＴＶ、ＨＶＴ、またはＭＤＶであ
    ることを特徴とする。
  16. 【請求項１６】 病気治療のための家禽への種痘方法で
    あって、前記方法は前記家禽に、請求の範囲第１１項、
    第１２項、第１４項、および第１５項のいずれか一項記
    載の非毒性免疫量のワクチンを接種をすることを特徴と
    する。
  17. 【請求項１７】 請求の範囲第１６項記載にもとづく方
    法によって種痘されたことを特徴とする家禽。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8821441D0 (en) * 1988-09-13 1988-10-12 Animal Health Inst Viral vectors
US6875856B2 (en) 1993-09-24 2005-04-05 Syntro Corporation Recombinant infectious laryngotracheitis virus and uses thereof
AU6698900A (en) * 1999-07-16 2001-02-05 Agricultural Research Service Live recombinant vaccine against avian leukosis virus using a marek's disease virus (mdv) virus as vector
EP1178111A1 (en) 2000-08-03 2002-02-06 Lohmann Animal Health GmbH & Co. KG Vaccination against host cell-associated herpesviruses
US8195137B2 (en) * 2008-05-09 2012-06-05 Microsoft Corporation Updating contact information for mobile traffic
CA2725435C (en) * 2009-12-15 2023-01-03 University Of Saskatchewan Vaccines for inclusion body hepatitis
US10809780B2 (en) 2017-03-13 2020-10-20 Samsung Electronics Co., Ltd. Active disturbance rejection based thermal control
US10698460B2 (en) 2017-03-13 2020-06-30 Samsung Electronics Co., Ltd. Advanced thermal control for SSD

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4603112A (en) * 1981-12-24 1986-07-29 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus
US4722848A (en) * 1982-12-08 1988-02-02 Health Research, Incorporated Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus
WO1984002077A1 (en) * 1982-11-30 1984-06-07 Us Health Process for producing poxvirus recombinants for expression of foreign genes
US5928648A (en) * 1985-09-06 1999-07-27 Syntro Corporation Recombinant herpesvirus of turkeys and uses thereof
US4679330A (en) * 1985-12-12 1987-07-14 Williams Kenneth L Concentricity gauge
AU623333B2 (en) * 1986-01-27 1992-05-14 Syntro Corporation Attenuated herpesviruses, herpesviruses which include foreign dna encoding an amino acid sequence and vaccine containing same
AU619181B2 (en) 1987-03-19 1992-01-23 Synergen, Inc. Viral vector system for the introduction of foreign dna expression products into gallinaceous birds
CA1337120C (en) * 1987-07-27 1995-09-26 Mark D. Cochran Attenuated herpesviruses, herpesviruses which include foreign dna encoding an amino acid sequence and vaccines containing same
JP2779447B2 (ja) * 1988-03-20 1998-07-23 財団法人阪大微生物病研究会 弱毒マレック病ウイルス・ベクターを用いる組換え遺伝子作成法、及び該ウイルスの組換え体
GB8821441D0 (en) * 1988-09-13 1988-10-12 Animal Health Inst Viral vectors
AU2946395A (en) 1994-06-30 1996-01-25 Board of Regents of the University of Illinois, The Recombinant infectious laryngotracheitis virus and vaccine
CA2216139C (en) 1995-03-23 2013-01-08 Syntro Corporation Recombinant infectious laryngotracheitis virus and uses thereof

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