JP2001097946A - アシルスルホンアミド誘導体 - Google Patents
アシルスルホンアミド誘導体Info
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- JP2001097946A JP2001097946A JP27837699A JP27837699A JP2001097946A JP 2001097946 A JP2001097946 A JP 2001097946A JP 27837699 A JP27837699 A JP 27837699A JP 27837699 A JP27837699 A JP 27837699A JP 2001097946 A JP2001097946 A JP 2001097946A
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒトキマーゼを選択的に阻害することによっ
て、各種の疾患を予防及び治療できる医薬として有用な
化合物を提供する。 【解決手段】 下記一般式（Ｉ） 【化１】 ｛式中、Ｒ1 は置換基を有していても良いフェニル基、
ナフチル基又は水素原子を示し、Ｒ2 はハロゲン原子、
アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基及
びニトロ基から選ばれる置換基を有していても良いフェ
ニル基又は水素原子を示す。但し、Ｒ1 とＲ2 が同時に
水素原子であることは無い。Ｒ3 は置換基を有していて
も良いアリール基を示す。Ｘは−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−
（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を示す。｝で示
されるアシルスルホンアミド誘導体。
て、各種の疾患を予防及び治療できる医薬として有用な
化合物を提供する。 【解決手段】 下記一般式（Ｉ） 【化１】 ｛式中、Ｒ1 は置換基を有していても良いフェニル基、
ナフチル基又は水素原子を示し、Ｒ2 はハロゲン原子、
アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基及
びニトロ基から選ばれる置換基を有していても良いフェ
ニル基又は水素原子を示す。但し、Ｒ1 とＲ2 が同時に
水素原子であることは無い。Ｒ3 は置換基を有していて
も良いアリール基を示す。Ｘは−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−
（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を示す。｝で示
されるアシルスルホンアミド誘導体。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、キマーゼ阻害作用
を有する新規なアシルスルホンアミド誘導体に関するも
のである。
を有する新規なアシルスルホンアミド誘導体に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】キマーゼは、肥満細胞顆粒中に存在し、
キモトリプシン様基質に対して特異性を示すセリンプロ
テアーゼであるが、肥満細胞の脱顆粒により分泌され、
ヘパラン硫酸プロテオグリカンなどの細胞外マトリック
スに結合することで、心臓、血管、皮膚などにおいて長
期にわたって酵素活性を発揮し、様々な生体反応に深く
関与していることが知られている。最近、キマーゼが、
心臓や血管などにおいて、極めて強力な血管収縮物質で
あるアンジオテンシンIIの産生に関与していることが報
告された（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．６６，８８３，１９９
０）。従って、キマーゼ阻害作用を有する化合物は、ア
ンジオテンシンIIが関与する循環器疾患（例えば、高血
圧、心不全、冠状動脈性疾患、糖尿病性及び非糖尿病性
腎症等）の新しい治療薬として期待されている。また、
キマーゼは、アンジオテンシンIIを産生する以外に、肥
満細胞の脱顆粒促進、インターロイキン−１−βの活性
化、マトリックスメタロプロテアーゼの活性化、トラン
スフォーミンググロースファクターβの遊離など多様な
作用を有しており、その阻害剤は、新しいタイプの抗炎
症剤や抗アレルギー剤になり得るとして注目されてい
る。現在までに、キマーゼ阻害作用を有する化合物が、
例えば、国際特許出願公開第９３／２５５７４号、国際
特許出願公開第９６／０４２４８号、国際特許出願公開
第９８／０９９４９号等に開示されているが、医薬品と
して実用上満足な結果が得られているとは言えず、臨床
的に応用された例もない。
キモトリプシン様基質に対して特異性を示すセリンプロ
テアーゼであるが、肥満細胞の脱顆粒により分泌され、
ヘパラン硫酸プロテオグリカンなどの細胞外マトリック
スに結合することで、心臓、血管、皮膚などにおいて長
期にわたって酵素活性を発揮し、様々な生体反応に深く
関与していることが知られている。最近、キマーゼが、
心臓や血管などにおいて、極めて強力な血管収縮物質で
あるアンジオテンシンIIの産生に関与していることが報
告された（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．６６，８８３，１９９
０）。従って、キマーゼ阻害作用を有する化合物は、ア
ンジオテンシンIIが関与する循環器疾患（例えば、高血
圧、心不全、冠状動脈性疾患、糖尿病性及び非糖尿病性
腎症等）の新しい治療薬として期待されている。また、
キマーゼは、アンジオテンシンIIを産生する以外に、肥
満細胞の脱顆粒促進、インターロイキン−１−βの活性
化、マトリックスメタロプロテアーゼの活性化、トラン
スフォーミンググロースファクターβの遊離など多様な
作用を有しており、その阻害剤は、新しいタイプの抗炎
症剤や抗アレルギー剤になり得るとして注目されてい
る。現在までに、キマーゼ阻害作用を有する化合物が、
例えば、国際特許出願公開第９３／２５５７４号、国際
特許出願公開第９６／０４２４８号、国際特許出願公開
第９８／０９９４９号等に開示されているが、医薬品と
して実用上満足な結果が得られているとは言えず、臨床
的に応用された例もない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ヒト
キマーゼを選択的に阻害することによって、各種の疾患
を予防、治療できる新規なアシルスルホンアミド誘導体
及びそれを有効成分とする医薬を提供することである。
キマーゼを選択的に阻害することによって、各種の疾患
を予防、治療できる新規なアシルスルホンアミド誘導体
及びそれを有効成分とする医薬を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者等は上記目的を
達成するため、鋭意検討した結果、優れたキマーゼ阻害
作用を有する新規なアシルスルホンアミド誘導体を見出
した。すなわち本発明の要旨は、下記一般式（Ｉ）
達成するため、鋭意検討した結果、優れたキマーゼ阻害
作用を有する新規なアシルスルホンアミド誘導体を見出
した。すなわち本発明の要旨は、下記一般式（Ｉ）
【０００５】
【化２】
【０００６】｛式中、Ｒ1 は置換基を有していても良い
フェニル基、ナフチル基又は水素原子を示し、Ｒ2 はハ
ロゲン原子、アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カル
ボキシル基及びニトロ基から選ばれる置換基を有してい
ても良いフェニル基又は水素原子を示す。但し、Ｒ1 と
Ｒ2 が同時に水素原子であることは無い。Ｒ3 は置換基
を有していても良いアリール基を示す。Ｘは−Ｏ−、−
Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を
示す。｝で示されるアシルスルホンアミド誘導体、その
製薬上許容し得る塩、並びにその水和物もしくは溶媒和
物及びこれらを有効成分とする医薬組成物並びにキマー
ゼ阻害剤、各種疾患の治療及び予防薬に存する。一般式
（Ｉ）の化合物には、光学活性体が存在する場合がある
が、本発明はラセミ体及び光学活性体の何れをも包含す
るものである。
フェニル基、ナフチル基又は水素原子を示し、Ｒ2 はハ
ロゲン原子、アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カル
ボキシル基及びニトロ基から選ばれる置換基を有してい
ても良いフェニル基又は水素原子を示す。但し、Ｒ1 と
Ｒ2 が同時に水素原子であることは無い。Ｒ3 は置換基
を有していても良いアリール基を示す。Ｘは−Ｏ−、−
Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を
示す。｝で示されるアシルスルホンアミド誘導体、その
製薬上許容し得る塩、並びにその水和物もしくは溶媒和
物及びこれらを有効成分とする医薬組成物並びにキマー
ゼ阻害剤、各種疾患の治療及び予防薬に存する。一般式
（Ｉ）の化合物には、光学活性体が存在する場合がある
が、本発明はラセミ体及び光学活性体の何れをも包含す
るものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の新規なアシルスルホンアミド誘導体は前
記一般式（Ｉ）で示される。一般式（Ｉ）において、Ｒ
1 は置換基を有していても良いフェニル基、ナフチル基
又は水素原子を示す。
する。本発明の新規なアシルスルホンアミド誘導体は前
記一般式（Ｉ）で示される。一般式（Ｉ）において、Ｒ
1 は置換基を有していても良いフェニル基、ナフチル基
又は水素原子を示す。
【０００８】これらの基の置換基としては、ハロゲン原
子、Ｃ1 〜Ｃ20のアルキル基、Ｃ1〜Ｃ10のアルコキシ
基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルチオ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキ
ルスルフィニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルホニル
基、Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルキル基、Ｃ1 〜Ｃ4 のハロア
ルコキシ基、Ｃ2 〜Ｃ8 のアルコキシカルボニル基、Ｃ
1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基、Ｃ2 〜Ｃ6 のジアルキル
アミノ基、Ｃ6 〜Ｃ14のアリール基、シアノ基、ニトロ
基、アミノ基、アミジノ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキル基ま
たはアルケニル基を有するカルボキシル基、水酸基及び
複素環基の中から選ばれる１〜２個の同じ又は異なる基
が挙げられる。
子、Ｃ1 〜Ｃ20のアルキル基、Ｃ1〜Ｃ10のアルコキシ
基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルチオ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキ
ルスルフィニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルホニル
基、Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルキル基、Ｃ1 〜Ｃ4 のハロア
ルコキシ基、Ｃ2 〜Ｃ8 のアルコキシカルボニル基、Ｃ
1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基、Ｃ2 〜Ｃ6 のジアルキル
アミノ基、Ｃ6 〜Ｃ14のアリール基、シアノ基、ニトロ
基、アミノ基、アミジノ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキル基ま
たはアルケニル基を有するカルボキシル基、水酸基及び
複素環基の中から選ばれる１〜２個の同じ又は異なる基
が挙げられる。
【０００９】上記ハロゲン原子としては、フッ素原子、
塩素原子、臭素原子が挙げられ、Ｃ 1 〜Ｃ10のアルキル
基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルコキシ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキル
チオ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルフィニル基、Ｃ1 〜
Ｃ10のアルキルスルホニル基、Ｃ2 〜Ｃ8 のアルコキシ
カルボニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基、Ｃ2〜
Ｃ6 のジアルキルアミノ基におけるアルキル鎖部分とし
ては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル
基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅ
ｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペ
ンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、イソヘ
キシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル
基などが挙げられる。
塩素原子、臭素原子が挙げられ、Ｃ 1 〜Ｃ10のアルキル
基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルコキシ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキル
チオ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルフィニル基、Ｃ1 〜
Ｃ10のアルキルスルホニル基、Ｃ2 〜Ｃ8 のアルコキシ
カルボニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基、Ｃ2〜
Ｃ6 のジアルキルアミノ基におけるアルキル鎖部分とし
ては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル
基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅ
ｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペ
ンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、イソヘ
キシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル
基などが挙げられる。
【００１０】上記Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルキル基として
は、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、
ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ト
リクロロメチル基、ペンタクロロエチル基などが挙げら
れ、上記Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルコキシ基としては、トリ
フルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、２，２，
２−トリフルオロエトキシ基、１，１，２，２−テトラ
フルオロエトキシ基などが挙げられる。
は、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、
ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ト
リクロロメチル基、ペンタクロロエチル基などが挙げら
れ、上記Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルコキシ基としては、トリ
フルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、２，２，
２−トリフルオロエトキシ基、１，１，２，２−テトラ
フルオロエトキシ基などが挙げられる。
【００１１】Ｃ2 〜Ｃ6 のアルコキシカルボニル基とし
ては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、
プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル
基、ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル
基などが挙げられる。Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基と
しては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルア
ミノ基、イソプロピルアミノ基などが挙げられ、Ｃ2 〜
Ｃ6 のジアルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ
基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基などが挙げ
られ、上記のＣ6 〜Ｃ14の芳香族炭化水素環基として
は、例えばフェニル基、ナフチル基などが挙げられる。
ては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、
プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル
基、ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル
基などが挙げられる。Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基と
しては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルア
ミノ基、イソプロピルアミノ基などが挙げられ、Ｃ2 〜
Ｃ6 のジアルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ
基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基などが挙げ
られ、上記のＣ6 〜Ｃ14の芳香族炭化水素環基として
は、例えばフェニル基、ナフチル基などが挙げられる。
【００１２】また、上記の複素環基としては、２−チエ
ニル基、３−チエニル基、１−チアンスレニル基、２−
チアンスレニル基、２−フリル基、３−フリル基、２Ｈ
−ピラン−３−イル基、２Ｈ−ピラン−４−イル基、２
Ｈ−ピラン−５−イル基、２Ｈ−ピラン−６−イル基、
イソベンゾフラニル基、２Ｈ−クロメン−３−イル基、
２Ｈ−クロメン−４−イル基、２Ｈ−クロメン−５−イ
ル基、２Ｈ−クロメン−６−イル基、２Ｈ−クロメン−
７−イル基、２Ｈ−クロメン−８−イル基、２Ｈ−ピロ
ール−３−イル基、２Ｈ−ピロール−４−イル基、２Ｈ
−ピロール−５−イル基、２−ピロリル基、３−ピロリ
ル基、１−イミダゾリル基、２−イミダゾリル基、４−
イミダゾリル基、５−イミダゾリル基、１−ピラゾリル
基、３−ピラゾリル基、４−ピラゾリル基、５−ピラゾ
リル基、３−イソチアゾリル基、４−イソチアゾリル
基、５−イソチアゾリル基、３−イソキサゾリル基、４
−イソキサゾリル基、５−イソキサゾリル基、２−ピリ
ジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−ピラジ
ニル基、２−ピリミジニル基、４−ピリミジニル基、５
−ピリミジニル基、３−ピリダジニル基、４−ピリダジ
ニル基、１−インドリジニル基、２−インドリジニル
基、３−インドリジニル基、５−インドリジニル基、６
−インドリジニル基、７−インドリジニル基、８−イン
ドリジニル基、１−イソインドリル基、４−イソインド
リル基、５−イソインドリル基、３Ｈ−インドール−２
−イル基、３Ｈ−インドール−４−イル基、３Ｈ−イン
ドール−５−イル基、１−インドリル基、２−インドリ
ル基、３−インドリル基、４−インドリル基、５−イン
ドリル基、６−インドリル基、７−インドリル基、１Ｈ
−インダゾール−３−イル基、１Ｈ−インダゾール−４
−イル基、１Ｈ−インダゾール−５−イル基、１Ｈ−イ
ンダゾール−６−イル基、１Ｈ−インダゾール−７−イ
ル基、２−プリル基、６−プリル基、８−プリル基、４
Ｈ−キノリジン−１−イル基、４Ｈ−キノリジン−２−
イル基、４Ｈ−キノリジン−３−イル基、４Ｈ−キノリ
ジン−６−イル基、４Ｈ−キノリジン−７−イル基、４
Ｈ−キノリジン−８−イル基、４Ｈ−キノリジン−９−
イル基、１−イソキノリル基、３−イソキノリル基、４
−イソキノリル基、５−イソキノリル基、６−イソキノ
リル基、７−イソキノリル基、８−イソキノリル基、２
−キノリル基、３−キノリル基、４−キノリル基、５−
キノリル基、６−キノリル基、７−キノリル基、８−キ
ノリル基、１Ｈ−テトラゾール−５−イル基、３Ｈ−テ
トラゾール−５−イル基、１−フタラジニル基、５−フ
タラジニル基、６−フタラジニル基、１，８−ナフチリ
ジン−２−イル基、１，８−ナフチリジン−３−イル
基、１，８−ナフチリジン−４−イル基、２−キノキサ
リニル基、５−キノキサリニル基、６−キノキサリニル
基、２−キナゾリニル基、４−キナゾリニル基、５−キ
ナゾリニル基、６−キナゾリニル基、７−キナゾリニル
基、８−キナゾリニル基、３−シンノリニル基、４−シ
ンノリニル基、５−シンノリニル基、６−シンノリニル
基、７−シンノリニル基、８−シンノリニル基、２−プ
テリジニル基、４−プテリジニル基、６−プテリジニル
基、７−プテリジニル基、４ａＨ−カルバゾール−１−
イル基、４ａＨ−カルバゾール−２−イル基、４ａＨ−
カルバゾール−３−イル基、４ａＨ−カルバゾール−４
−イル基、４ａＨ−カルバゾール−５−イル基、４ａＨ
−カルバゾール−６−イル基、４ａＨ−カルバゾール−
７−イル基、４ａＨ−カルバゾール−８−イル基、１−
カルバゾリル基、２−カルバゾリル基、３−カルバゾリ
ル基、４−カルバゾリル基、β−カルボリン−１−イル
基、β−カルボリン−３−イル基、β−カルボリン−４
−イル基、β−カルボリン−５−イル基、β−カルボリ
ン−６−イル基、β−カルボリン−７−イル基、β−カ
ルボリン−８−イル基、１−アクリジニル基、２−アク
リジニル基、３−アクリジニル基、４−アクリジニル
基、９−アクリジニル基、１−フェナジニル基、２−フ
ェナジニル基、１−フェノチアジニル基、２−フェノチ
アジニル基、３−フェノチアジニル基、４−フェノチア
ジニル基、３−フラザニル基、１−フェノキサジニル
基、２−フェノキサジニル基、３−フェノキサジニル
基、４−フェノキサジニル基、１−イソクロマニル基、
３−イソクロマニル基、４−イソクロマニル基、５−イ
ソクロマニル基、６−イソクロマニル基、７−イソクロ
マニル基、８−イソクロマニル基、２−クロマニル基、
３−クロマニル基、４−クロマニル基、５−クロマニル
基、６−クロマニル基、７−クロマニル基、８−クロマ
ニル基、１−ピロリジニル基、２−ピロリジニル基、３
−ピロリジニル基、２−ピロリン−１−イル基、２−ピ
ロリン−２−イル基、２−ピロリン−３−イル基、２−
ピロリン−４−イル基、２−ピロリン−５−イル基、１
−イミダゾリジニル基、２−イミダゾリジニル基、３−
イミダゾリジニル基、２−イミダゾリン−１−イル基、
２−イミダゾリン−２−イル基、２−イミダゾリン−４
−イル基、２−イミダゾリン−５−イル基、１−ピラゾ
リジニル基、３−ピラゾリジニル基、４−ピラゾリジニ
ル基、３−ピラゾリン−１−イル基、３−ピラゾリン−
２−イル基、３−ピラゾリン−３−イル基、３−ピラゾ
リン−４−イル基、３−ピラゾリン−５−イル基、１−
ピペリジル基、２−ピペリジル基、３−ピペリジル基、
４−ピペリジル基、１−ピペラジニル基、２−ピペラジ
ニル基、１−インドリニル基、２−インドリニル基、３
−インドリニル基、４−インドリニル基、５−インドリ
ニル基、６−インドリニル基、７−インドリニル基、１
−イソインドリニル基、２−イソインドリニル基、４−
イソインドリニル基、５−イソインドリニル基、１−キ
ヌクリジニル基、２−キヌクリジニル基、３−キヌクリ
ジニル基、４−キヌクリジニル基、２−モルフォリニル
基、３−モルフォリニル基、４−モルフォリニル基、
１，２，４−トリアゾール−３−イル基、１，２，３−
トリアゾール−４−イル基、１，２，４−オキサジアゾ
ール−３−イル基、１，２，４−オキサジアゾール−５
−イル基、１，２，４−チアジアゾール−３−イル基、
１，２，４−チアジアゾール−５−イル基、ベンゾチア
ゾール−２−イル基、ベンズオキサゾール−２−イル
基、ベンズイミダゾール−２−イル基、ベンズイソキサ
ゾール−３−イル基、ベンズイソチアゾール−３−イル
基、ベンズイソチアゾール−３−イル−１，１−ジオキ
サイド基、インドール−３−イル基、ｓｙｎ−トリアジ
ニル基、ａｓ−トリアジニル基などが挙げられる。ま
た、２つの置換基が連結して環状構造を形成しても良
く、その環の大きさは、化学的に安定に存在し得る４員
環、５員環、６員環、７員環、８員環であり、その環状
構造に１つ以上のヘテロ原子（酸素原子、窒素原子、硫
黄原子、）を含むものが挙げられる。
ニル基、３−チエニル基、１−チアンスレニル基、２−
チアンスレニル基、２−フリル基、３−フリル基、２Ｈ
−ピラン−３−イル基、２Ｈ−ピラン−４−イル基、２
Ｈ−ピラン−５−イル基、２Ｈ−ピラン−６−イル基、
イソベンゾフラニル基、２Ｈ−クロメン−３−イル基、
２Ｈ−クロメン−４−イル基、２Ｈ−クロメン−５−イ
ル基、２Ｈ−クロメン−６−イル基、２Ｈ−クロメン−
７−イル基、２Ｈ−クロメン−８−イル基、２Ｈ−ピロ
ール−３−イル基、２Ｈ−ピロール−４−イル基、２Ｈ
−ピロール−５−イル基、２−ピロリル基、３−ピロリ
ル基、１−イミダゾリル基、２−イミダゾリル基、４−
イミダゾリル基、５−イミダゾリル基、１−ピラゾリル
基、３−ピラゾリル基、４−ピラゾリル基、５−ピラゾ
リル基、３−イソチアゾリル基、４−イソチアゾリル
基、５−イソチアゾリル基、３−イソキサゾリル基、４
−イソキサゾリル基、５−イソキサゾリル基、２−ピリ
ジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−ピラジ
ニル基、２−ピリミジニル基、４−ピリミジニル基、５
−ピリミジニル基、３−ピリダジニル基、４−ピリダジ
ニル基、１−インドリジニル基、２−インドリジニル
基、３−インドリジニル基、５−インドリジニル基、６
−インドリジニル基、７−インドリジニル基、８−イン
ドリジニル基、１−イソインドリル基、４−イソインド
リル基、５−イソインドリル基、３Ｈ−インドール−２
−イル基、３Ｈ−インドール−４−イル基、３Ｈ−イン
ドール−５−イル基、１−インドリル基、２−インドリ
ル基、３−インドリル基、４−インドリル基、５−イン
ドリル基、６−インドリル基、７−インドリル基、１Ｈ
−インダゾール−３−イル基、１Ｈ−インダゾール−４
−イル基、１Ｈ−インダゾール−５−イル基、１Ｈ−イ
ンダゾール−６−イル基、１Ｈ−インダゾール−７−イ
ル基、２−プリル基、６−プリル基、８−プリル基、４
Ｈ−キノリジン−１−イル基、４Ｈ−キノリジン−２−
イル基、４Ｈ−キノリジン−３−イル基、４Ｈ−キノリ
ジン−６−イル基、４Ｈ−キノリジン−７−イル基、４
Ｈ−キノリジン−８−イル基、４Ｈ−キノリジン−９−
イル基、１−イソキノリル基、３−イソキノリル基、４
−イソキノリル基、５−イソキノリル基、６−イソキノ
リル基、７−イソキノリル基、８−イソキノリル基、２
−キノリル基、３−キノリル基、４−キノリル基、５−
キノリル基、６−キノリル基、７−キノリル基、８−キ
ノリル基、１Ｈ−テトラゾール−５−イル基、３Ｈ−テ
トラゾール−５−イル基、１−フタラジニル基、５−フ
タラジニル基、６−フタラジニル基、１，８−ナフチリ
ジン−２−イル基、１，８−ナフチリジン−３−イル
基、１，８−ナフチリジン−４−イル基、２−キノキサ
リニル基、５−キノキサリニル基、６−キノキサリニル
基、２−キナゾリニル基、４−キナゾリニル基、５−キ
ナゾリニル基、６−キナゾリニル基、７−キナゾリニル
基、８−キナゾリニル基、３−シンノリニル基、４−シ
ンノリニル基、５−シンノリニル基、６−シンノリニル
基、７−シンノリニル基、８−シンノリニル基、２−プ
テリジニル基、４−プテリジニル基、６−プテリジニル
基、７−プテリジニル基、４ａＨ−カルバゾール−１−
イル基、４ａＨ−カルバゾール−２−イル基、４ａＨ−
カルバゾール−３−イル基、４ａＨ−カルバゾール−４
−イル基、４ａＨ−カルバゾール−５−イル基、４ａＨ
−カルバゾール−６−イル基、４ａＨ−カルバゾール−
７−イル基、４ａＨ−カルバゾール−８−イル基、１−
カルバゾリル基、２−カルバゾリル基、３−カルバゾリ
ル基、４−カルバゾリル基、β−カルボリン−１−イル
基、β−カルボリン−３−イル基、β−カルボリン−４
−イル基、β−カルボリン−５−イル基、β−カルボリ
ン−６−イル基、β−カルボリン−７−イル基、β−カ
ルボリン−８−イル基、１−アクリジニル基、２−アク
リジニル基、３−アクリジニル基、４−アクリジニル
基、９−アクリジニル基、１−フェナジニル基、２−フ
ェナジニル基、１−フェノチアジニル基、２−フェノチ
アジニル基、３−フェノチアジニル基、４−フェノチア
ジニル基、３−フラザニル基、１−フェノキサジニル
基、２−フェノキサジニル基、３−フェノキサジニル
基、４−フェノキサジニル基、１−イソクロマニル基、
３−イソクロマニル基、４−イソクロマニル基、５−イ
ソクロマニル基、６−イソクロマニル基、７−イソクロ
マニル基、８−イソクロマニル基、２−クロマニル基、
３−クロマニル基、４−クロマニル基、５−クロマニル
基、６−クロマニル基、７−クロマニル基、８−クロマ
ニル基、１−ピロリジニル基、２−ピロリジニル基、３
−ピロリジニル基、２−ピロリン−１−イル基、２−ピ
ロリン−２−イル基、２−ピロリン−３−イル基、２−
ピロリン−４−イル基、２−ピロリン−５−イル基、１
−イミダゾリジニル基、２−イミダゾリジニル基、３−
イミダゾリジニル基、２−イミダゾリン−１−イル基、
２−イミダゾリン−２−イル基、２−イミダゾリン−４
−イル基、２−イミダゾリン−５−イル基、１−ピラゾ
リジニル基、３−ピラゾリジニル基、４−ピラゾリジニ
ル基、３−ピラゾリン−１−イル基、３−ピラゾリン−
２−イル基、３−ピラゾリン−３−イル基、３−ピラゾ
リン−４−イル基、３−ピラゾリン−５−イル基、１−
ピペリジル基、２−ピペリジル基、３−ピペリジル基、
４−ピペリジル基、１−ピペラジニル基、２−ピペラジ
ニル基、１−インドリニル基、２−インドリニル基、３
−インドリニル基、４−インドリニル基、５−インドリ
ニル基、６−インドリニル基、７−インドリニル基、１
−イソインドリニル基、２−イソインドリニル基、４−
イソインドリニル基、５−イソインドリニル基、１−キ
ヌクリジニル基、２−キヌクリジニル基、３−キヌクリ
ジニル基、４−キヌクリジニル基、２−モルフォリニル
基、３−モルフォリニル基、４−モルフォリニル基、
１，２，４−トリアゾール−３−イル基、１，２，３−
トリアゾール−４−イル基、１，２，４−オキサジアゾ
ール−３−イル基、１，２，４−オキサジアゾール−５
−イル基、１，２，４−チアジアゾール−３−イル基、
１，２，４−チアジアゾール−５−イル基、ベンゾチア
ゾール−２−イル基、ベンズオキサゾール−２−イル
基、ベンズイミダゾール−２−イル基、ベンズイソキサ
ゾール−３−イル基、ベンズイソチアゾール−３−イル
基、ベンズイソチアゾール−３−イル−１，１−ジオキ
サイド基、インドール−３−イル基、ｓｙｎ−トリアジ
ニル基、ａｓ−トリアジニル基などが挙げられる。ま
た、２つの置換基が連結して環状構造を形成しても良
く、その環の大きさは、化学的に安定に存在し得る４員
環、５員環、６員環、７員環、８員環であり、その環状
構造に１つ以上のヘテロ原子（酸素原子、窒素原子、硫
黄原子、）を含むものが挙げられる。
【００１３】一般式（Ｉ）において、Ｒ2 は水素原子又
はハロゲン原子、アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、
カルボキシル基、ニトロ基から選ばれる置換基を有して
いても良いフェニル基である。上記ハロゲン原子として
はフッ素原子、塩素原子、臭素原子が挙げられる。アル
コキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキ
シ基、ｉ−プロポキシ基、ブトキシ基、ｉ−ブトキシ
基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ペントキシ基、
ｉ−ペントキシ基、ネオペントキシ基、ｔ−ペントキシ
基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオ
キシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基等のＣ1 〜Ｃ
10の直鎖もしくは分岐鎖を有するアルコキシ基が挙げら
れる。一般式（Ｉ）において、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ
2 又は単結合を示す。なお、一般式（Ｉ）においてＲ1
とＲ2 が同時に水素原子であることは無い。
はハロゲン原子、アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、
カルボキシル基、ニトロ基から選ばれる置換基を有して
いても良いフェニル基である。上記ハロゲン原子として
はフッ素原子、塩素原子、臭素原子が挙げられる。アル
コキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキ
シ基、ｉ−プロポキシ基、ブトキシ基、ｉ−ブトキシ
基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ペントキシ基、
ｉ−ペントキシ基、ネオペントキシ基、ｔ−ペントキシ
基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオ
キシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基等のＣ1 〜Ｃ
10の直鎖もしくは分岐鎖を有するアルコキシ基が挙げら
れる。一般式（Ｉ）において、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ
2 又は単結合を示す。なお、一般式（Ｉ）においてＲ1
とＲ2 が同時に水素原子であることは無い。
【００１４】一般式（Ｉ）の化合物は、それ自体公知の
方法を組み合せて製造することができる。本発明化合物
には光学異性体が存在するが、Ｒ配置、Ｓ配置およびそ
れらの混合配置いずれもが本発明の範囲内である。本発
明化合物は、例えば以下の様な方法で製造することがで
きる。
方法を組み合せて製造することができる。本発明化合物
には光学異性体が存在するが、Ｒ配置、Ｓ配置およびそ
れらの混合配置いずれもが本発明の範囲内である。本発
明化合物は、例えば以下の様な方法で製造することがで
きる。
【００１５】
【化３】
【００１６】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＸは前記と同義で
あり、Ｘ′は−ＯＨまたは−ＳＨであり、Ｈａｌはハロ
ゲンであり、Ｒは低級アルキルである。） 本製造方法では化合物（１）と（２）を適当な条件下で
縮合させて化合物（３）を得、それを通常の方法で加水
分解して化合物（４）を得る。縮合反応は、例えばジメ
チルホルムアミド、アセトニトリル、アセトン等の溶媒
中で炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム
等の塩基の存在下に室温〜加温下、好ましくは８０℃付
近で、数時間〜２４時間、好ましくは０．５〜６時間程
度反応させればよい。加水分解はメタノール、エタノー
ル等の低級アルコールに化合物（３）を溶解し、適当な
濃度、例えば１Ｎの水酸化ナトリウムまたは水酸化カリ
ウム水溶液等の塩基を加えて冷却下〜加温下、好ましく
は室温付近で１時間〜２４時間程度反応させれば化合物
（４）が得られる。
あり、Ｘ′は−ＯＨまたは−ＳＨであり、Ｈａｌはハロ
ゲンであり、Ｒは低級アルキルである。） 本製造方法では化合物（１）と（２）を適当な条件下で
縮合させて化合物（３）を得、それを通常の方法で加水
分解して化合物（４）を得る。縮合反応は、例えばジメ
チルホルムアミド、アセトニトリル、アセトン等の溶媒
中で炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム
等の塩基の存在下に室温〜加温下、好ましくは８０℃付
近で、数時間〜２４時間、好ましくは０．５〜６時間程
度反応させればよい。加水分解はメタノール、エタノー
ル等の低級アルコールに化合物（３）を溶解し、適当な
濃度、例えば１Ｎの水酸化ナトリウムまたは水酸化カリ
ウム水溶液等の塩基を加えて冷却下〜加温下、好ましく
は室温付近で１時間〜２４時間程度反応させれば化合物
（４）が得られる。
【００１７】
【化４】 （式中Ｒ3 は前記と同義である。）
【００１８】次に、溶媒に溶かした化合物（４）のカル
ボキシル基を活性化し、塩基存在下で冷却下〜加温下、
好ましくは室温付近でスルホンアミド化合物（５）と縮
合させて化合物（Ｉ）を得る。溶媒としては例えばテト
ラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシエタ
ン、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン等を用いれ
ばよく、カルボキシル基の活性化には例えば１，１′−
カルボニルジイミダゾールが用いられる。塩基としては
例えば１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス
−７−エンを好適に用いることができる。上記合成法に
用いる化合物（１）、（２）、（５）は、公知の化合物
または公知物から通常の方法で合成した化合物を用いる
ことも可能である。
ボキシル基を活性化し、塩基存在下で冷却下〜加温下、
好ましくは室温付近でスルホンアミド化合物（５）と縮
合させて化合物（Ｉ）を得る。溶媒としては例えばテト
ラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシエタ
ン、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン等を用いれ
ばよく、カルボキシル基の活性化には例えば１，１′−
カルボニルジイミダゾールが用いられる。塩基としては
例えば１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス
−７−エンを好適に用いることができる。上記合成法に
用いる化合物（１）、（２）、（５）は、公知の化合物
または公知物から通常の方法で合成した化合物を用いる
ことも可能である。
【００１９】本発明のアシルスルホンアミド誘導体は、
キマーゼに対する選択的な阻害作用を有することから、
キマーゼの関与する各種疾患の治療及び予防に有用であ
る。具体的には、高血圧、鬱血性心不全、心筋症、動脈
硬化症、冠状動脈疾患、心筋梗塞、血管形成手術又は血
栓溶解治療後の血管再狭窄、抹消循環障害、血管炎、糖
尿病性又は非糖尿病性腎臓病、肺高血圧症、気管支喘
息、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、肺気腫、アレル
ギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ、関節炎、癌
等が挙げられる。
キマーゼに対する選択的な阻害作用を有することから、
キマーゼの関与する各種疾患の治療及び予防に有用であ
る。具体的には、高血圧、鬱血性心不全、心筋症、動脈
硬化症、冠状動脈疾患、心筋梗塞、血管形成手術又は血
栓溶解治療後の血管再狭窄、抹消循環障害、血管炎、糖
尿病性又は非糖尿病性腎臓病、肺高血圧症、気管支喘
息、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、肺気腫、アレル
ギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ、関節炎、癌
等が挙げられる。
【００２０】本発明化合物を医薬として用いる場合に
は、その有効成分として、本発明で構造を規定する化合
物又はその製薬上許容しうる塩、並びにそれらの水和物
及び溶媒和物から選ばれる有効成分である物質と、薬学
的に許容され得る固体又は液体の医薬用担体又は希釈剤
と共に、即ち賦形剤や安定剤等と共に、製剤とし、ヒト
を含む動物に経口又は非経口的に投与可能である。非経
口投与としては、例えば、静脈、皮下、筋肉、経皮、直
腸、経鼻、点眼内への投与が挙げられる。なお、当該製
剤において、前記有効成分の担体成分に対する割合は、
１〜９０重量％の間で変動させることができる。
は、その有効成分として、本発明で構造を規定する化合
物又はその製薬上許容しうる塩、並びにそれらの水和物
及び溶媒和物から選ばれる有効成分である物質と、薬学
的に許容され得る固体又は液体の医薬用担体又は希釈剤
と共に、即ち賦形剤や安定剤等と共に、製剤とし、ヒト
を含む動物に経口又は非経口的に投与可能である。非経
口投与としては、例えば、静脈、皮下、筋肉、経皮、直
腸、経鼻、点眼内への投与が挙げられる。なお、当該製
剤において、前記有効成分の担体成分に対する割合は、
１〜９０重量％の間で変動させることができる。
【００２１】経口投与剤の剤型としては、例えば、錠
剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、カプセル
剤等が挙げられる。錠剤の成型方法としては、賦形剤、
結合剤、崩壊剤等の製薬学的に許容される担体を用いて
通常の方法により成型することができる。丸剤、顆粒
剤、散剤も錠剤の場合と同様に賦形剤等を用いて通常の
方法により成型することができる。液剤、シロップ剤の
成型方法は、グリセリンエステル類、アルコール類、
水、植物油等を用いて通常の方法により成型することが
できる。カプセル剤の成型方法は、顆粒剤、散剤、ある
いは液剤等を、ゼラチン等のカプセルに充填することに
よって成型することができる。
剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、カプセル
剤等が挙げられる。錠剤の成型方法としては、賦形剤、
結合剤、崩壊剤等の製薬学的に許容される担体を用いて
通常の方法により成型することができる。丸剤、顆粒
剤、散剤も錠剤の場合と同様に賦形剤等を用いて通常の
方法により成型することができる。液剤、シロップ剤の
成型方法は、グリセリンエステル類、アルコール類、
水、植物油等を用いて通常の方法により成型することが
できる。カプセル剤の成型方法は、顆粒剤、散剤、ある
いは液剤等を、ゼラチン等のカプセルに充填することに
よって成型することができる。
【００２２】非経口投与剤のうち、静脈、皮下、筋肉内
投与の場合には、注射剤として投与することができる。
注射剤としては、本発明で構造を規定する化合物又はそ
の製薬上許容しうる塩を生理的食塩水などの水溶性液剤
に溶解する場合、あるいは、プロピレングリコール、ポ
リエチレングリコール、植物油等の有機エステルからな
る非水溶性液剤に溶解する場合等が挙げられる。経皮投
与の場合には、例えば軟膏剤、クリーム剤などの剤型と
して用いることができる。すなわち、本発明で構造を規
定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を、軟膏剤と
しては、油脂類又はワセリン等と混合し、クリーム剤と
しては、乳化剤と混合し、成型することができる。直腸
投与の場合には、ゼラチンソフトカプセルなどを用いて
坐剤とすることができる。
投与の場合には、注射剤として投与することができる。
注射剤としては、本発明で構造を規定する化合物又はそ
の製薬上許容しうる塩を生理的食塩水などの水溶性液剤
に溶解する場合、あるいは、プロピレングリコール、ポ
リエチレングリコール、植物油等の有機エステルからな
る非水溶性液剤に溶解する場合等が挙げられる。経皮投
与の場合には、例えば軟膏剤、クリーム剤などの剤型と
して用いることができる。すなわち、本発明で構造を規
定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を、軟膏剤と
しては、油脂類又はワセリン等と混合し、クリーム剤と
しては、乳化剤と混合し、成型することができる。直腸
投与の場合には、ゼラチンソフトカプセルなどを用いて
坐剤とすることができる。
【００２３】経鼻投与の場合には、液状又は粉末状の組
成物からなる製剤として用いることができる。液状剤の
基剤としては、水、食塩水、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液
等が用いられ、更に、界面活性剤、酸化防止剤、安定
剤、保存剤、粘性付与剤を含んでいてもよい。粉末状剤
の基剤としては、例えば、水易溶性のポリアクリル酸塩
類、セルロース低級アルキルエーテル類、ポリエチレン
グリコールポリビニルピロリドン、アミロース等の水吸
収性のもの、あるいは、例えば、セルロース類、タンパ
ク類、ガム類、架橋ビニル重合体類等の水難溶性のもの
が挙げられ、これらを混合して用いてもよい。さらに、
粉末状剤には、酸化防止剤、着色剤、保存剤、防腐剤、
矯腐剤等を添加してもよい。
成物からなる製剤として用いることができる。液状剤の
基剤としては、水、食塩水、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液
等が用いられ、更に、界面活性剤、酸化防止剤、安定
剤、保存剤、粘性付与剤を含んでいてもよい。粉末状剤
の基剤としては、例えば、水易溶性のポリアクリル酸塩
類、セルロース低級アルキルエーテル類、ポリエチレン
グリコールポリビニルピロリドン、アミロース等の水吸
収性のもの、あるいは、例えば、セルロース類、タンパ
ク類、ガム類、架橋ビニル重合体類等の水難溶性のもの
が挙げられ、これらを混合して用いてもよい。さらに、
粉末状剤には、酸化防止剤、着色剤、保存剤、防腐剤、
矯腐剤等を添加してもよい。
【００２４】点眼内投与の場合は、水性あるいは非水性
の点眼剤として使用することができる。水性点眼剤とし
ては、溶剤として滅菌精製水、生理的食塩水等を用いる
ことができる。溶剤として滅菌精製水のみを用いた場
合、界面活性剤、高分子増粘剤等の懸濁剤を加えて水性
懸濁点眼剤として用いることができ、また、非イオン性
界面活性剤等の可溶化剤を加えて可溶化点眼液として用
いることもできる。非水性点眼剤としては、溶剤に注射
用非水性溶剤を用いることができ、非水性懸濁点眼液と
して用いることができる。鼻、口等から吸入する場合に
おいては、本発明で構造を規定する化合物又はその製薬
上許容しうる塩を、一般的に用いられる製薬賦形剤との
溶液または懸濁液として、例えば、吸入用エアゾルスプ
レー等を用いて投与する。あるいは、本発明で構造を規
定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を、乾燥粉末
状とし、肺と直接接触させる吸入器等を用いて投与する
こともできる。
の点眼剤として使用することができる。水性点眼剤とし
ては、溶剤として滅菌精製水、生理的食塩水等を用いる
ことができる。溶剤として滅菌精製水のみを用いた場
合、界面活性剤、高分子増粘剤等の懸濁剤を加えて水性
懸濁点眼剤として用いることができ、また、非イオン性
界面活性剤等の可溶化剤を加えて可溶化点眼液として用
いることもできる。非水性点眼剤としては、溶剤に注射
用非水性溶剤を用いることができ、非水性懸濁点眼液と
して用いることができる。鼻、口等から吸入する場合に
おいては、本発明で構造を規定する化合物又はその製薬
上許容しうる塩を、一般的に用いられる製薬賦形剤との
溶液または懸濁液として、例えば、吸入用エアゾルスプ
レー等を用いて投与する。あるいは、本発明で構造を規
定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を、乾燥粉末
状とし、肺と直接接触させる吸入器等を用いて投与する
こともできる。
【００２５】これらの種々の製剤には、必要に応じて、
等張化剤、保存剤、防腐剤、湿潤剤、緩衝剤、乳化剤、
分散剤、安定剤等の製薬学的に許容される担体を添加す
ることができる。また、これらの製剤には、必要に応じ
て、殺菌剤の配合、バクテリア保留フィルターを用いた
濾過、加熱、照射等の処置を行い無菌化することができ
る。あるいは、無菌の固形製剤を製造し、使用直前に適
当な無菌溶液に溶解あるいは懸濁して使用することもで
きる。臨床投与量は、疾患の種類、投与経路、患者の症
状、年齢、性別、体重等を考慮した上で設定することが
望ましいが、成人に対し経口的に投与する場合には、１
〜１０００ｍｇ／日を１回〜数回に分けて投与する。非
経口投与的に投与する場合には、投与経路により大きく
異なるが、通常、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ／日を１回〜
数回に分けて投与する。
等張化剤、保存剤、防腐剤、湿潤剤、緩衝剤、乳化剤、
分散剤、安定剤等の製薬学的に許容される担体を添加す
ることができる。また、これらの製剤には、必要に応じ
て、殺菌剤の配合、バクテリア保留フィルターを用いた
濾過、加熱、照射等の処置を行い無菌化することができ
る。あるいは、無菌の固形製剤を製造し、使用直前に適
当な無菌溶液に溶解あるいは懸濁して使用することもで
きる。臨床投与量は、疾患の種類、投与経路、患者の症
状、年齢、性別、体重等を考慮した上で設定することが
望ましいが、成人に対し経口的に投与する場合には、１
〜１０００ｍｇ／日を１回〜数回に分けて投与する。非
経口投与的に投与する場合には、投与経路により大きく
異なるが、通常、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ／日を１回〜
数回に分けて投与する。
【００２６】
【実施例】以下、本発明化合物の製造例及び薬理試験例
を示して本発明を更に具体的に説明するが、本発明はそ
の要旨を超えない限り、以下の実施例に制約されるもの
ではない。なお、薬理試験に使用したキマーゼの取得方
法を参考例として示す。また、化合物Ｎｏ．は表−１の
化合物Ｎｏ．に対応する。
を示して本発明を更に具体的に説明するが、本発明はそ
の要旨を超えない限り、以下の実施例に制約されるもの
ではない。なお、薬理試験に使用したキマーゼの取得方
法を参考例として示す。また、化合物Ｎｏ．は表−１の
化合物Ｎｏ．に対応する。
【００２７】参考例１ ヒト心臓由来キマーゼｃＤＮＡの取得 ヒト心臓のｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社
製）から、ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ
ｒｅａｃｔｉｏｎ）法により、ヒト心臓キマーゼのｃ
ＤＮＡの取得を行った。反応に用いた合成オリゴヌクレ
オチドＤＮＡの配列は以下の通りである。 ＭＹ８１： ＡｇＣＣＴＣＴＣＴｇｇｇＡＡｇＡＴｇＣＴｇＣＴＴ ＭＹ８２： ＧｇＡＴＣＣＡｇｇＡＴＴＡＡＴＴＴｇＣＣＴｇＣＡｇ ＭＹ９７： ｇＡＴｇＣＴｇＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＣＣＣＣＣＴｇ
ＣＴｇ ＭＹ９９： ＴＴＡＡＴＴＴｇＣＣＴｇＣＡｇｇＡＴＣＴｇｇＴＴｇ
ＡＴＣＣＡ なお、このプライマー配列は、ＧｅｎＢａｎｋのアクセ
ッション番号Ｍ６９１３６を参考にして決定した。
製）から、ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ
ｒｅａｃｔｉｏｎ）法により、ヒト心臓キマーゼのｃ
ＤＮＡの取得を行った。反応に用いた合成オリゴヌクレ
オチドＤＮＡの配列は以下の通りである。 ＭＹ８１： ＡｇＣＣＴＣＴＣＴｇｇｇＡＡｇＡＴｇＣＴｇＣＴＴ ＭＹ８２： ＧｇＡＴＣＣＡｇｇＡＴＴＡＡＴＴＴｇＣＣＴｇＣＡｇ ＭＹ９７： ｇＡＴｇＣＴｇＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＣＣＣＣＣＴｇ
ＣＴｇ ＭＹ９９： ＴＴＡＡＴＴＴｇＣＣＴｇＣＡｇｇＡＴＣＴｇｇＴＴｇ
ＡＴＣＣＡ なお、このプライマー配列は、ＧｅｎＢａｎｋのアクセ
ッション番号Ｍ６９１３６を参考にして決定した。
【００２８】まず始めに、ヒト心臓由来のｃＤＮＡを１
ｕｌ、２．５ｍＭ ｄＡＴＰ，２．５ｍＭ ｄＴＴＰ，
２．５ｍＭ ｄＧＴＰ，２．５ｍＭ ｄＣＴＰを２ｕ
ｌ、２０ｕＭ ＭＹ８１を５ｕｌ、２０ｕＭ ＭＹ８２
を５ｕｌ、Ｔａｑ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｐｅｒｋｉ
ｎ−Ｅｌｍｅｒ社製）を１ｕｌ、Ｔａｑ ｐｏｌｙｍｅ
ｒａｓｅに添付されてきた反応バッファー１０ｕｌの混
合液に滅菌した水を７６ｕｌ加えて１００ｕｌとし、９
４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、１分間を１サ
イクルとする反応を２４回繰り返した後、９４℃、１分
間、５５℃、２分間、７２℃、５分間の反応を１回行っ
た。更に、この反応産物の溶液１ｕｌ、２．５ｍＭ ｄ
ＡＴＰ，２．５ｍＭ ｄＴＴＰ，２．５ｍＭ ｄＧＴ
Ｐ，２．５ｍＭ ｄＣＴＰを２ｕｌ、２０ｕＭ ＭＹ９
７を５ｕｌ、２０ｕＭ ＭＹ９９を５ｕｌ、Ｔａｑ ｐ
ｏｌｙｍｅｒａｓｅ を１ｕｌ、反応バッファー１０ｕ
ｌの混合液に滅菌した水を７６ｕｌ加えて１００ｕｌと
し、９４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、１分間
を１サイクルとする反応を２４回繰り返した後、９４
℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、５分間の反応を
１回行った。反応液５ｕｌを１％アガロースゲルで電気
泳動を行ったところ、約７４５ｂｐのＤＮＡ断片が特異
的に増幅されていることが確認された。このＤＮＡ断片
をｐＣＲIIベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）にサ
ブクローニングし（このベクターをｐＣＲII−ｈＣｈｙ
と呼ぶことにする）、ＤＮＡ配列を蛍光ＤＮＡシークエ
ンサー（ｍｏｄｅｌ ３９４：Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使って解析した。その結果、増
幅されたＤＮＡは、ＧｅｎＢａｎｋのアクセッション番
号Ｍ６９１３６として登録されているＤＮＡ配列の１６
番から７５９番の間の領域を含み、ヒト心臓キマーゼの
タンパク質をコードするＤＮＡであることが確認され
た。
ｕｌ、２．５ｍＭ ｄＡＴＰ，２．５ｍＭ ｄＴＴＰ，
２．５ｍＭ ｄＧＴＰ，２．５ｍＭ ｄＣＴＰを２ｕ
ｌ、２０ｕＭ ＭＹ８１を５ｕｌ、２０ｕＭ ＭＹ８２
を５ｕｌ、Ｔａｑ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｐｅｒｋｉ
ｎ−Ｅｌｍｅｒ社製）を１ｕｌ、Ｔａｑ ｐｏｌｙｍｅ
ｒａｓｅに添付されてきた反応バッファー１０ｕｌの混
合液に滅菌した水を７６ｕｌ加えて１００ｕｌとし、９
４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、１分間を１サ
イクルとする反応を２４回繰り返した後、９４℃、１分
間、５５℃、２分間、７２℃、５分間の反応を１回行っ
た。更に、この反応産物の溶液１ｕｌ、２．５ｍＭ ｄ
ＡＴＰ，２．５ｍＭ ｄＴＴＰ，２．５ｍＭ ｄＧＴ
Ｐ，２．５ｍＭ ｄＣＴＰを２ｕｌ、２０ｕＭ ＭＹ９
７を５ｕｌ、２０ｕＭ ＭＹ９９を５ｕｌ、Ｔａｑ ｐ
ｏｌｙｍｅｒａｓｅ を１ｕｌ、反応バッファー１０ｕ
ｌの混合液に滅菌した水を７６ｕｌ加えて１００ｕｌと
し、９４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、１分間
を１サイクルとする反応を２４回繰り返した後、９４
℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、５分間の反応を
１回行った。反応液５ｕｌを１％アガロースゲルで電気
泳動を行ったところ、約７４５ｂｐのＤＮＡ断片が特異
的に増幅されていることが確認された。このＤＮＡ断片
をｐＣＲIIベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）にサ
ブクローニングし（このベクターをｐＣＲII−ｈＣｈｙ
と呼ぶことにする）、ＤＮＡ配列を蛍光ＤＮＡシークエ
ンサー（ｍｏｄｅｌ ３９４：Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使って解析した。その結果、増
幅されたＤＮＡは、ＧｅｎＢａｎｋのアクセッション番
号Ｍ６９１３６として登録されているＤＮＡ配列の１６
番から７５９番の間の領域を含み、ヒト心臓キマーゼの
タンパク質をコードするＤＮＡであることが確認され
た。
【００２９】参考例２ ヒトキマーゼ遺伝子を大腸菌で発現させるためのベクタ
ーの構築（１） ヒトキマーゼ遺伝子を大腸菌に発現させるためのベクタ
ーの構築を行った。まず参考例１において取得されたｐ
ＣＲII−ｈＣｈｙベクターを鋳型とし、Ｓｐ６、ＭＹ１
１９をプライマーとしてそれぞれ用いてＰＣＲを行っ
た。合成オリゴヌクレオチドＤＮＡプライマーＳｐ６と
ＭＹ１１９の配列は以下のとおりである。 Ｓｐ６ ＡＴＴＴＡｇｇＴｇＡＣＡＣＴＡＴＡｇＡＡ ＭＹ１１９ ＣＡｇＡＡＡＴＡＴＴｇＡＡｇｇｇＡｇｇＡＴＣＡＴＣ
ｇｇｇｇｇＣＡＣＡｇＡＡＴｇＣＡＡ なお、ＭＹ１１９には、ヒトキマーゼの遺伝子を増幅す
るために必要な塩基配列に加えて、ＳｓｐＩ制限酵素切
断部位、ファクターＸａプロテアーゼによって切断され
るアミノ酸配列（ＩＥＧＲ：イソロイシン、グルタミン
酸、グリシン、アルギニン）を導入するための塩基配列
が付加されている。
ーの構築（１） ヒトキマーゼ遺伝子を大腸菌に発現させるためのベクタ
ーの構築を行った。まず参考例１において取得されたｐ
ＣＲII−ｈＣｈｙベクターを鋳型とし、Ｓｐ６、ＭＹ１
１９をプライマーとしてそれぞれ用いてＰＣＲを行っ
た。合成オリゴヌクレオチドＤＮＡプライマーＳｐ６と
ＭＹ１１９の配列は以下のとおりである。 Ｓｐ６ ＡＴＴＴＡｇｇＴｇＡＣＡＣＴＡＴＡｇＡＡ ＭＹ１１９ ＣＡｇＡＡＡＴＡＴＴｇＡＡｇｇｇＡｇｇＡＴＣＡＴＣ
ｇｇｇｇｇＣＡＣＡｇＡＡＴｇＣＡＡ なお、ＭＹ１１９には、ヒトキマーゼの遺伝子を増幅す
るために必要な塩基配列に加えて、ＳｓｐＩ制限酵素切
断部位、ファクターＸａプロテアーゼによって切断され
るアミノ酸配列（ＩＥＧＲ：イソロイシン、グルタミン
酸、グリシン、アルギニン）を導入するための塩基配列
が付加されている。
【００３０】ＰＣＲにより増幅された約８００ｂｐのＤ
ＮＡ断片を、制限酵素ＳｓｐＩとＥｃｏＲＩによって処
理した後、制限酵素ＥｈｅＩとＥｃｏＲＩ処理によって
直鎖状にしたｐＰＲＯＥＸ−１ベクター（Ｌｉｆｅ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）とライゲーション反応を
行った。得られたコンストラクションを蛍光ＤＮＡシー
クエンサーを使ってタンパク質翻訳領域の配列解析を行
ったところ、Ｎ末端側にｐＰＲＯＥＸ−１ベクターに由
来するペプチド（翻訳開始のメチオニン、６個の連続し
たヒスチジン残基、ｒＴＥＶプロテアーゼ切断配列を含
む）を、Ｃ末端側にファクターＸａプロテアーゼによっ
て切断されるアミノ酸配列と成熟型ヒトキマーゼ（前駆
体型ヒトキマーゼの１１番のイソロイシンから２４７番
のアスパラギンまで）のアミノ酸配列をもつ融合タンパ
ク質をコードするＤＮＡ配列であることが確認された。
そして、このベクターをｐＰＲＯ−ｈＣｈｙと呼ぶこと
にした。
ＮＡ断片を、制限酵素ＳｓｐＩとＥｃｏＲＩによって処
理した後、制限酵素ＥｈｅＩとＥｃｏＲＩ処理によって
直鎖状にしたｐＰＲＯＥＸ−１ベクター（Ｌｉｆｅ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）とライゲーション反応を
行った。得られたコンストラクションを蛍光ＤＮＡシー
クエンサーを使ってタンパク質翻訳領域の配列解析を行
ったところ、Ｎ末端側にｐＰＲＯＥＸ−１ベクターに由
来するペプチド（翻訳開始のメチオニン、６個の連続し
たヒスチジン残基、ｒＴＥＶプロテアーゼ切断配列を含
む）を、Ｃ末端側にファクターＸａプロテアーゼによっ
て切断されるアミノ酸配列と成熟型ヒトキマーゼ（前駆
体型ヒトキマーゼの１１番のイソロイシンから２４７番
のアスパラギンまで）のアミノ酸配列をもつ融合タンパ
ク質をコードするＤＮＡ配列であることが確認された。
そして、このベクターをｐＰＲＯ−ｈＣｈｙと呼ぶこと
にした。
【００３１】参考例３ ヒトキマーゼ遺伝子を大腸菌で発現させるためのベクタ
ーの構築（２） ｐＰＲＯ−ｈＣｈｙベクターは、制限酵素ＮｃｏＩとＥ
ｃｏＲＩで処理すると、２つのＤＮＡ断片に切断され
る。このうち小さい方の約７７０ｂｐの断片をアガロー
ス電気泳動で精製し、制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＩ処
理によって直鎖状にしたｐＥＴ２４Ｄベクター（Ｎｏｖ
ａｇｅｎ社製）とライゲーション反応を行った。得られ
たコンストラクションを蛍光ＤＮＡシークエンサーを使
ってタンパク質翻訳領域の配列解析を行ったところ、ｐ
ＰＲＯ−ｈＣｈｙと全く同じ融合タンパク質が翻訳され
るＤＮＡ配列であることが確認された。このベクターを
ｐＥＴ−ｈＣｈｙと呼ぶことにした。ヒト心臓キマーゼ
のｃＤＮＡ取得から、ｐＥＴ−ｈＣｈｙの構築までの流
れを図１として示す。
ーの構築（２） ｐＰＲＯ−ｈＣｈｙベクターは、制限酵素ＮｃｏＩとＥ
ｃｏＲＩで処理すると、２つのＤＮＡ断片に切断され
る。このうち小さい方の約７７０ｂｐの断片をアガロー
ス電気泳動で精製し、制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＩ処
理によって直鎖状にしたｐＥＴ２４Ｄベクター（Ｎｏｖ
ａｇｅｎ社製）とライゲーション反応を行った。得られ
たコンストラクションを蛍光ＤＮＡシークエンサーを使
ってタンパク質翻訳領域の配列解析を行ったところ、ｐ
ＰＲＯ−ｈＣｈｙと全く同じ融合タンパク質が翻訳され
るＤＮＡ配列であることが確認された。このベクターを
ｐＥＴ−ｈＣｈｙと呼ぶことにした。ヒト心臓キマーゼ
のｃＤＮＡ取得から、ｐＥＴ−ｈＣｈｙの構築までの流
れを図１として示す。
【００３２】参考例４ ヒトキマーゼ部分ペプチドに対する抗血清の作製 Ｎ−ＣＶＧＮＰＲＫＴＫＳＡＦＫＧＤＳＧＧ−Ｃの配列
を有するペプチドを合成し、ＭＢＳ（ｍ−ｍａｌｅｉｍ
ｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ−Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉ
ｎｉｍｉｄｅ ｅｓｔｅｒ）を介してＫＬＨ（ｋｅｙｈ
ｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）と結合
させる。この複合体をフロインド完全アジュバントまた
は、フロインド不完全アジュバントと一緒に雌性日本白
色種ウサギに注射する。得られた抗血清をＶ８０と呼ぶ
ことにした。ペプチドの合成及び抗血清取得は、パナフ
ァーム・ラボラトリーズ株式会社に依頼した。
を有するペプチドを合成し、ＭＢＳ（ｍ−ｍａｌｅｉｍ
ｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ−Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉ
ｎｉｍｉｄｅ ｅｓｔｅｒ）を介してＫＬＨ（ｋｅｙｈ
ｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）と結合
させる。この複合体をフロインド完全アジュバントまた
は、フロインド不完全アジュバントと一緒に雌性日本白
色種ウサギに注射する。得られた抗血清をＶ８０と呼ぶ
ことにした。ペプチドの合成及び抗血清取得は、パナフ
ァーム・ラボラトリーズ株式会社に依頼した。
【００３３】参考例５ 成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の大腸菌における発
現 大腸菌ＢＬ２１株コンピテントセルに参考例２で示した
ｐＰＲＯ−ｈＣｈｙベクターを導入し、１００ｕｇ／ｍ
ｌのアンピシリンを含むＬＢ（Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａ
ｎｉ培地）アガロースプレートで選択培養を行った。ま
た、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株コンピテントセルに参
考例３で示したｐＥＴ−ｈＣｈｙベクターを導入し、３
０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢアガロースプレ
ートで選択培養を行った。プレート上でクローン化した
大腸菌は、１００ｕｇ／ｍｌのアンピシリン、もしく
は、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含む１００ｍｌの
ＬＢ培地中において、３７℃で振盪培養した。１２時間
後、この培養液を１００ｕｇ／ｍｌのアンピシリン、も
しくは、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含む新しい９
００ｍｌのＬＢ培地に入れて、３７℃で振盪培養を続け
た。６００ｎｍの吸光度が０．４の細胞密度に到達した
ところで、１００ｍＭのＩＰＴＧ（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ
−１−ｔｈｉｏ−ｂ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏ
ｓｉｄｅ）を最終濃度が１ｍＭになるように加えて、更
に３時間３７℃で振盪培養を行った。
現 大腸菌ＢＬ２１株コンピテントセルに参考例２で示した
ｐＰＲＯ−ｈＣｈｙベクターを導入し、１００ｕｇ／ｍ
ｌのアンピシリンを含むＬＢ（Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａ
ｎｉ培地）アガロースプレートで選択培養を行った。ま
た、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株コンピテントセルに参
考例３で示したｐＥＴ−ｈＣｈｙベクターを導入し、３
０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢアガロースプレ
ートで選択培養を行った。プレート上でクローン化した
大腸菌は、１００ｕｇ／ｍｌのアンピシリン、もしく
は、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含む１００ｍｌの
ＬＢ培地中において、３７℃で振盪培養した。１２時間
後、この培養液を１００ｕｇ／ｍｌのアンピシリン、も
しくは、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含む新しい９
００ｍｌのＬＢ培地に入れて、３７℃で振盪培養を続け
た。６００ｎｍの吸光度が０．４の細胞密度に到達した
ところで、１００ｍＭのＩＰＴＧ（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ
−１−ｔｈｉｏ−ｂ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏ
ｓｉｄｅ）を最終濃度が１ｍＭになるように加えて、更
に３時間３７℃で振盪培養を行った。
【００３４】参考例６ 大腸菌からの成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の抽出 液体培地で大量に培養した大腸菌は、４０００Ｘｇ、２
０分、４℃の遠心分離で沈殿させ、１００ｍｌの結合バ
ッファー（５ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウ
ム、２０ｍＭトリス塩酸バッファー（ｐＨ７．９））で
４℃にて再懸濁後、再び４０００Ｘｇ、２０分、４℃の
遠心分離で沈殿させた。そして、回収した大腸菌を、１
００ｍｌの結合バッファーで再懸濁し、ソニケーター
（ＴＡＩＴＥＣ社製、ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｔｏｒ）
を出力レベルを１０、サイクルを４０％に設定して４℃
にて粉砕した。このソニケーションをかけたサンプルを
１２０００Ｘｇ、２０分、４℃の遠心によって、上清
（上清１と呼ぶ）と沈殿（沈殿１と呼ぶ）に分離し、上
清１を更に、１２０００Ｘｇ、２０分、４℃で遠心する
ことにより上清（上清２と呼ぶ）と沈殿（沈殿２と呼
ぶ）に分離した。沈殿１と沈殿２は、一緒に合わせ、６
Ｍ尿素を含む結合バッファーを１００ｍｌ加えて再び同
一条件のソニケーションにかけて完全に再懸濁し、１時
間、氷上にてインキュベートした。この溶液を１２００
０Ｘｇ、２０分、４℃で遠心して上清（上清３と呼ぶ）
と沈殿（沈殿３と呼ぶ）に分離した。最終的に得られた
画分は次のようになる。 上清２：可溶性画分 上清３：６Ｍ尿素で可溶化された画分 沈殿３：６Ｍ尿素で可溶化されない画分 大腸菌にて発現させた成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク
質がこの３つの画分のどれに主要に存在するかを、参考
例４で取得した抗ヒトキマーゼペプチド抗体（Ｖ８０）
を用いたウェスタンプロッティングにより解析した。上
清２と上清３にヒトキマーゼ融合タンパク質が１対４に
割合で存在することが確認された。
０分、４℃の遠心分離で沈殿させ、１００ｍｌの結合バ
ッファー（５ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウ
ム、２０ｍＭトリス塩酸バッファー（ｐＨ７．９））で
４℃にて再懸濁後、再び４０００Ｘｇ、２０分、４℃の
遠心分離で沈殿させた。そして、回収した大腸菌を、１
００ｍｌの結合バッファーで再懸濁し、ソニケーター
（ＴＡＩＴＥＣ社製、ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｔｏｒ）
を出力レベルを１０、サイクルを４０％に設定して４℃
にて粉砕した。このソニケーションをかけたサンプルを
１２０００Ｘｇ、２０分、４℃の遠心によって、上清
（上清１と呼ぶ）と沈殿（沈殿１と呼ぶ）に分離し、上
清１を更に、１２０００Ｘｇ、２０分、４℃で遠心する
ことにより上清（上清２と呼ぶ）と沈殿（沈殿２と呼
ぶ）に分離した。沈殿１と沈殿２は、一緒に合わせ、６
Ｍ尿素を含む結合バッファーを１００ｍｌ加えて再び同
一条件のソニケーションにかけて完全に再懸濁し、１時
間、氷上にてインキュベートした。この溶液を１２００
０Ｘｇ、２０分、４℃で遠心して上清（上清３と呼ぶ）
と沈殿（沈殿３と呼ぶ）に分離した。最終的に得られた
画分は次のようになる。 上清２：可溶性画分 上清３：６Ｍ尿素で可溶化された画分 沈殿３：６Ｍ尿素で可溶化されない画分 大腸菌にて発現させた成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク
質がこの３つの画分のどれに主要に存在するかを、参考
例４で取得した抗ヒトキマーゼペプチド抗体（Ｖ８０）
を用いたウェスタンプロッティングにより解析した。上
清２と上清３にヒトキマーゼ融合タンパク質が１対４に
割合で存在することが確認された。
【００３５】参考例７ 大腸菌からの成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の精製 融合タンパク質を精製するのには、ヒスチジンタグアミ
ノ酸配列へのニッケルイオンキレートカラム（Ｎｏｖａ
ｇｅｎ社製）のアフィニティーを利用した。上清２から
精製を行う場合は、通常の結合バッファー、洗浄バッフ
ァー、溶出バッファーを用いたが、尿素を含む上清３か
らの精製を行う場合には、それぞれのバッファーに６Ｍ
の尿素を加えた。まず、カラム樹脂（上清２０ｍｌにつ
き、樹脂体積１ｍｌを使用）を、その５倍体積の５０ｍ
Ｍ硫酸ニッケル水溶液で前処理し、３倍体積の結合バッ
ファーで平衡化した。上清２および３は、０．４５ｕｍ
のポアサイズのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）
で濾過した後、カラムにロードした。サンプルをのせた
後のカラムは、１０倍体積の結合バッファー、６倍体積
の洗浄バッファー（２０ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩
化ナトリウム、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
９））で洗浄し、５倍体積の溶出バッファー（１Ｍイミ
ダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウム、２０ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ７．９））で溶出を行った。溶出液は、
１．２５ｍｌずつの分画として集めて−２０℃にて保存
した。どの分画に融合タンパク質が溶出してきているか
は、抗ヒトキマーゼペプチド抗体（Ｖ８０）を用いたウ
ェスタンプロッティングによって解析を行った。
ノ酸配列へのニッケルイオンキレートカラム（Ｎｏｖａ
ｇｅｎ社製）のアフィニティーを利用した。上清２から
精製を行う場合は、通常の結合バッファー、洗浄バッフ
ァー、溶出バッファーを用いたが、尿素を含む上清３か
らの精製を行う場合には、それぞれのバッファーに６Ｍ
の尿素を加えた。まず、カラム樹脂（上清２０ｍｌにつ
き、樹脂体積１ｍｌを使用）を、その５倍体積の５０ｍ
Ｍ硫酸ニッケル水溶液で前処理し、３倍体積の結合バッ
ファーで平衡化した。上清２および３は、０．４５ｕｍ
のポアサイズのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）
で濾過した後、カラムにロードした。サンプルをのせた
後のカラムは、１０倍体積の結合バッファー、６倍体積
の洗浄バッファー（２０ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩
化ナトリウム、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
９））で洗浄し、５倍体積の溶出バッファー（１Ｍイミ
ダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウム、２０ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ７．９））で溶出を行った。溶出液は、
１．２５ｍｌずつの分画として集めて−２０℃にて保存
した。どの分画に融合タンパク質が溶出してきているか
は、抗ヒトキマーゼペプチド抗体（Ｖ８０）を用いたウ
ェスタンプロッティングによって解析を行った。
【００３６】参考例８ 成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の再構成 上清３より精製を行った場合、溶出液には６Ｍの尿素が
含まれている。タンパク質の沈殿を極力防ぎかつ精製タ
ンパク質が酵素活性を保持する条件でこの尿素を除去し
た。まず、溶出液を６Ｍ尿素、０．１％トライトンＸ−
１００を含む結合バッファーで１０倍希釈し、以下に示
した１）から４）の溶液（希釈したサンプル５０ｍｌ対
して２Ｌの透析液を使用）に対して、この番号順で４
℃、１２時間ずつ合計４８時間透析を行った。 １）４Ｍ尿素、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、
０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１０
０ ２）２Ｍ尿素、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、
０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１０
０ ３）トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリ
ウム、０．１％トライトンＸ−１００ ４）トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリ
ウム、０．１％トライトンＸ−１００、１ｍＭ塩化カル
シウム 透析後のサンプルは、１２，０００Ｘｇ、４℃、２０分
の遠心分離で沈澱物を除き、更に、０．２２ｕｍのフィ
ルターで濾過を行い、アミコンＹＭ１０とセントリコン
−１０（Ａｍｉｃｏｎ社製）を使って約１０倍程度に濃
縮をした。濃縮液のタンパク質濃度は、プロテインアッ
セイ（Ｂｉｏｒａｄ社製）を使って定量した。
含まれている。タンパク質の沈殿を極力防ぎかつ精製タ
ンパク質が酵素活性を保持する条件でこの尿素を除去し
た。まず、溶出液を６Ｍ尿素、０．１％トライトンＸ−
１００を含む結合バッファーで１０倍希釈し、以下に示
した１）から４）の溶液（希釈したサンプル５０ｍｌ対
して２Ｌの透析液を使用）に対して、この番号順で４
℃、１２時間ずつ合計４８時間透析を行った。 １）４Ｍ尿素、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、
０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１０
０ ２）２Ｍ尿素、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、
０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１０
０ ３）トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリ
ウム、０．１％トライトンＸ−１００ ４）トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリ
ウム、０．１％トライトンＸ−１００、１ｍＭ塩化カル
シウム 透析後のサンプルは、１２，０００Ｘｇ、４℃、２０分
の遠心分離で沈澱物を除き、更に、０．２２ｕｍのフィ
ルターで濾過を行い、アミコンＹＭ１０とセントリコン
−１０（Ａｍｉｃｏｎ社製）を使って約１０倍程度に濃
縮をした。濃縮液のタンパク質濃度は、プロテインアッ
セイ（Ｂｉｏｒａｄ社製）を使って定量した。
【００３７】参考例９ 成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の活性化 生体では、細胞内で翻訳されたキマーゼタンパク質は、
Ｎ末端側に１９アミノ酸残基のシグナルペプチド配列を
持っている。この最初に翻訳されたキマーゼタンパク質
は細胞外に分泌される過程において、シグナルペプチド
領域が切断され、成熟体のＮ末端にグリシンとグルタミ
ン酸の２アミノ酸残基がついたプロ体となる。プロ体に
はプロテアーゼの活性はなく、何らかのプロテアーゼに
よってこの２アミノ酸プロ配列がプロセシングを受け、
活性を有する成熟体に変換することがわかっている。
Ｎ末端側に１９アミノ酸残基のシグナルペプチド配列を
持っている。この最初に翻訳されたキマーゼタンパク質
は細胞外に分泌される過程において、シグナルペプチド
領域が切断され、成熟体のＮ末端にグリシンとグルタミ
ン酸の２アミノ酸残基がついたプロ体となる。プロ体に
はプロテアーゼの活性はなく、何らかのプロテアーゼに
よってこの２アミノ酸プロ配列がプロセシングを受け、
活性を有する成熟体に変換することがわかっている。
【００３８】本明細書において大腸菌で発現させた成熟
型ヒトキマーゼは、参考例２において示したように、成
熟型ヒトキマーゼのＮ末端側に６個の連続したヒスチジ
ン残基、ｒＴＥＶプロテアーゼ切断配列、ファクターＸ
ａプロテアーゼによって切断されるアミノ酸配列との融
合タンパク質である。従って、この融合タンパク質には
キマーゼの活性が無いことが予測される。成熟型ヒトキ
マーゼのＮ末端側に付加したアミノ酸タグ配列を切り出
して、活性を有するヒトキマーゼを取得するために、フ
ァクターＸａ（Ｄａｎｅｘ Ｂｉｏｔｃｋ社製）による
処理を行った。
型ヒトキマーゼは、参考例２において示したように、成
熟型ヒトキマーゼのＮ末端側に６個の連続したヒスチジ
ン残基、ｒＴＥＶプロテアーゼ切断配列、ファクターＸ
ａプロテアーゼによって切断されるアミノ酸配列との融
合タンパク質である。従って、この融合タンパク質には
キマーゼの活性が無いことが予測される。成熟型ヒトキ
マーゼのＮ末端側に付加したアミノ酸タグ配列を切り出
して、活性を有するヒトキマーゼを取得するために、フ
ァクターＸａ（Ｄａｎｅｘ Ｂｉｏｔｃｋ社製）による
処理を行った。
【００３９】１００ｕｇのヒトキマーゼ融合タンパク質
を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリ
ウム、０．１％トライトンＸ−１００、１ｍＭ塩化カル
シウム中で１ｕｇのファクターＸａと３７℃で３時間イ
ンキュベートした。ファクターＸａ処理前と処理後のサ
ンプルをＳＤＳ Ｐｏｌｙ ａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅ
ｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ）及び、ウェスタンプロッティングによって解析する
と、処理前に約３０ｋＤａであった分子量が、処理後に
約２７ｋＤａへシフトすることがわかった。使用した酵
素の特異性と分子量の変化より、成熟型ヒトキマーゼ融
合タンパク質のＮ末端側に付加したタグ配列がファクタ
ーＸａ認識部位で切断されたものと考察された。
を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリ
ウム、０．１％トライトンＸ−１００、１ｍＭ塩化カル
シウム中で１ｕｇのファクターＸａと３７℃で３時間イ
ンキュベートした。ファクターＸａ処理前と処理後のサ
ンプルをＳＤＳ Ｐｏｌｙ ａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅ
ｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ）及び、ウェスタンプロッティングによって解析する
と、処理前に約３０ｋＤａであった分子量が、処理後に
約２７ｋＤａへシフトすることがわかった。使用した酵
素の特異性と分子量の変化より、成熟型ヒトキマーゼ融
合タンパク質のＮ末端側に付加したタグ配列がファクタ
ーＸａ認識部位で切断されたものと考察された。
【００４０】次にファクターＸａ処理したサンプルのキ
マーゼ活性を測定した。アンジオテンシンＩは、活性化
したキマーゼによって、アンジオテンシンIIとヒスチジ
ン−ロイシンのジペプチドに分解されることが知られて
いる。 アンジオテンシンＩ→アンジオテンシンII＋Ｈｉｓ−Ｌｅｕ （イ） ファクターＸａ処理したキマーゼサンプルを１５０ｍＭ
ホウ酸−四ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．５）中
で、０．７７ｍＭアンジオテンシンＩと３７℃で２時間
インキュベーションした。このプロテアーゼ反応を逆相
クロマトグラフィー（カラム：Ｗｉｄｅ−Ｐｏｒｅ Ｏ
ｃｔａｄｅｃｙｌ（Ｃ１８）５ ｕｍ ｓｔａｎｄａｒ
ｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ４．６Ｘ ２５０ｍｍ
（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社製）、アセトニトリルの勾配：
０％から４０％（０．１％トリフルオロ酢酸、０．０８
％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルを使用）、流
速：１ｍｌ／分）によって分析したところ、確かに上記
（イ）の変換反応が起きていることがわかった。
マーゼ活性を測定した。アンジオテンシンＩは、活性化
したキマーゼによって、アンジオテンシンIIとヒスチジ
ン−ロイシンのジペプチドに分解されることが知られて
いる。 アンジオテンシンＩ→アンジオテンシンII＋Ｈｉｓ−Ｌｅｕ （イ） ファクターＸａ処理したキマーゼサンプルを１５０ｍＭ
ホウ酸−四ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．５）中
で、０．７７ｍＭアンジオテンシンＩと３７℃で２時間
インキュベーションした。このプロテアーゼ反応を逆相
クロマトグラフィー（カラム：Ｗｉｄｅ−Ｐｏｒｅ Ｏ
ｃｔａｄｅｃｙｌ（Ｃ１８）５ ｕｍ ｓｔａｎｄａｒ
ｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ４．６Ｘ ２５０ｍｍ
（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社製）、アセトニトリルの勾配：
０％から４０％（０．１％トリフルオロ酢酸、０．０８
％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルを使用）、流
速：１ｍｌ／分）によって分析したところ、確かに上記
（イ）の変換反応が起きていることがわかった。
【００４１】（イ）の反応を多検体で評価し、反応の効
率を定量化するためにマイクロプレートを使った反応と
計測を行った。９％のトリクロロ酢酸を加えた後、１
０，０００ｒｐｍで５分間遠心を行う。上清を回収し。
０．８４Ｎの水酸化ナトリウム、０．７７％のオルトフ
タルアルデヒドを加えて、室温（２５℃）で５分間反応
させる。２．６Ｎの塩酸を加えて、３４０ｎｍで励起
し、４９０ｎｍの蛍光強度を測定した。その結果、 （Ａ）ファクターＸａで処理したキマーゼサンプル では、アンジオテンシンＩの切断を観察することができ
た。しかし、 （Ｂ）ファクターＸａで処理していないキマーゼサンプ
ル （Ｃ）ヒトキマーゼ融合タンパク質と同等の精製過程を
経た大腸菌（ＩＰＴＧによる誘導前）のタンパク質サン
プル （Ｄ）ファクターＸａのみ では、アンジオテンシンＩの切断は観察されなかった。
以上より、 ＜１＞大腸菌によって発現させた成熟型ヒトキマーゼ融
合タンパク質は、そのままでは、プロテアーゼ活性を持
たないが、ファクターＸａ処理によって活性化しうるこ
と。 ＜２＞ファクターＸａによって活性化されたヒトキマー
ゼは、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンIIに特異
的に変換すること。 ＜３＞この変換の活性は、大腸菌が持つ他のプロテアー
ゼやファクターＸａに起因する物ではなく、活性化させ
たヒトキマーゼによるものであること。が確認された。
率を定量化するためにマイクロプレートを使った反応と
計測を行った。９％のトリクロロ酢酸を加えた後、１
０，０００ｒｐｍで５分間遠心を行う。上清を回収し。
０．８４Ｎの水酸化ナトリウム、０．７７％のオルトフ
タルアルデヒドを加えて、室温（２５℃）で５分間反応
させる。２．６Ｎの塩酸を加えて、３４０ｎｍで励起
し、４９０ｎｍの蛍光強度を測定した。その結果、 （Ａ）ファクターＸａで処理したキマーゼサンプル では、アンジオテンシンＩの切断を観察することができ
た。しかし、 （Ｂ）ファクターＸａで処理していないキマーゼサンプ
ル （Ｃ）ヒトキマーゼ融合タンパク質と同等の精製過程を
経た大腸菌（ＩＰＴＧによる誘導前）のタンパク質サン
プル （Ｄ）ファクターＸａのみ では、アンジオテンシンＩの切断は観察されなかった。
以上より、 ＜１＞大腸菌によって発現させた成熟型ヒトキマーゼ融
合タンパク質は、そのままでは、プロテアーゼ活性を持
たないが、ファクターＸａ処理によって活性化しうるこ
と。 ＜２＞ファクターＸａによって活性化されたヒトキマー
ゼは、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンIIに特異
的に変換すること。 ＜３＞この変換の活性は、大腸菌が持つ他のプロテアー
ゼやファクターＸａに起因する物ではなく、活性化させ
たヒトキマーゼによるものであること。が確認された。
【００４２】薬理試験例 組み換えヒトキマーゼの酵素活性阻害測定 参考例で得られた０．１〜０．２単位（なお、１単位は
１秒間に１ｐｍｏｌのアンジオテンシンIIをアンジオテ
ンシンＩから生成するキマーゼの酵素活性を示す）の活
性型ヒトキマーゼを含むバッファーＡ（２Ｍ ＫＣｌ，
２０ｍＭトリス塩酸、ｐＨ８．０）の４０μｌに、バッ
ファーＢ（４０ｍＭトリス塩酸，０．２％トライトンＸ
−１００，５％アセトニトリル、ｐＨ８．０）１００μ
ｌと、０．１ｍＭアプロチニン（和光純薬）２０μｌ
と、適当な濃度となるように調整された本発明において
合成された化合物を含むスルホキシド溶液２０μｌを加
えた後、基質として、２．５ｍＭスクシニル−アラニル
−アラニル−プロリル−フェニルアラニル−パラニトロ
アニリド（ＳＩＧＭＡ）２０μｌを加え室温で反応させ
た。４０５ｎｍの吸光度の経時変化を測定し、阻害活性
を調べｃｈｙｍａｓｅＩＣ50として示した。
１秒間に１ｐｍｏｌのアンジオテンシンIIをアンジオテ
ンシンＩから生成するキマーゼの酵素活性を示す）の活
性型ヒトキマーゼを含むバッファーＡ（２Ｍ ＫＣｌ，
２０ｍＭトリス塩酸、ｐＨ８．０）の４０μｌに、バッ
ファーＢ（４０ｍＭトリス塩酸，０．２％トライトンＸ
−１００，５％アセトニトリル、ｐＨ８．０）１００μ
ｌと、０．１ｍＭアプロチニン（和光純薬）２０μｌ
と、適当な濃度となるように調整された本発明において
合成された化合物を含むスルホキシド溶液２０μｌを加
えた後、基質として、２．５ｍＭスクシニル−アラニル
−アラニル−プロリル−フェニルアラニル−パラニトロ
アニリド（ＳＩＧＭＡ）２０μｌを加え室温で反応させ
た。４０５ｎｍの吸光度の経時変化を測定し、阻害活性
を調べｃｈｙｍａｓｅＩＣ50として示した。
【００４３】キモトリプシンの酵素活性阻害測定 ０．２Ｕ／ｍｌのキモトリプシン（ウシ膵臓由来、和光
純薬）４０μｌに、バッファーＣ（５０ｍＭトリス塩
酸，０．２％トライトンＸ−１００，５％アセトニトリ
ル、ｐＨ８．３）１００μｌと、適当な濃度となるよう
に調整された本発明において合成された化合物を含むジ
メチルスルホキシド溶液２０μｌを加えた後、基質とし
て１ｍＭメトキシ−スクシニル−アルギニル−プロリル
−チロシル−パラニトロアニリド（ＣＨＲＯＭＯＧＥＮ
ＩＸ）４０μｌを加え室温で反応させた。４０５ｎｍの
吸光度の経時変化を測定し、阻害活性を調べｃｈｙｍｏ
ｔｒｙｐｓｉｎ ＩＣ50として示した。
純薬）４０μｌに、バッファーＣ（５０ｍＭトリス塩
酸，０．２％トライトンＸ−１００，５％アセトニトリ
ル、ｐＨ８．３）１００μｌと、適当な濃度となるよう
に調整された本発明において合成された化合物を含むジ
メチルスルホキシド溶液２０μｌを加えた後、基質とし
て１ｍＭメトキシ−スクシニル−アルギニル−プロリル
−チロシル−パラニトロアニリド（ＣＨＲＯＭＯＧＥＮ
ＩＸ）４０μｌを加え室温で反応させた。４０５ｎｍの
吸光度の経時変化を測定し、阻害活性を調べｃｈｙｍｏ
ｔｒｙｐｓｉｎ ＩＣ50として示した。
【００４４】実施例１＜化合物Ｎｏ．１の合成＞ テトラヒドロフラン（以下ＴＨＦと略す）２０ｍｌ中に
１．６２ｇ（１０ｍｍｏｌ）の１，１′−カルボニルジ
イミダゾールを溶解し、２．１２ｇ（１０ｍｍｏｌ）の
ジフェニル酢酸をＴＨＦ２０ｍｌに溶解したものを滴下
した。０．５時間２５℃で撹拌した後０．５時間加熱還
流した。反応液を２５℃に冷却し、２．０７ｇ（１０ｍ
ｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミド及び１．４９
ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）の１，８−ジアザビシクロ−
［５．４．０］−７−ウンデセンをＴＨＦ１０ｍｌに溶
解したものを滴下し、一晩２５℃で撹拌した。反応液を
１Ｎ塩酸水溶液２００ｍｌ中にあけ析出した結晶を濾取
し、表題化合物を白色固体として３．８１ｇ（収率９５
％）を得た。
１．６２ｇ（１０ｍｍｏｌ）の１，１′−カルボニルジ
イミダゾールを溶解し、２．１２ｇ（１０ｍｍｏｌ）の
ジフェニル酢酸をＴＨＦ２０ｍｌに溶解したものを滴下
した。０．５時間２５℃で撹拌した後０．５時間加熱還
流した。反応液を２５℃に冷却し、２．０７ｇ（１０ｍ
ｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミド及び１．４９
ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）の１，８−ジアザビシクロ−
［５．４．０］−７−ウンデセンをＴＨＦ１０ｍｌに溶
解したものを滴下し、一晩２５℃で撹拌した。反応液を
１Ｎ塩酸水溶液２００ｍｌ中にあけ析出した結晶を濾取
し、表題化合物を白色固体として３．８１ｇ（収率９５
％）を得た。
【００４５】実施例２＜化合物Ｎｏ．２の合成＞ 実施例１と同様の方法で１．４１ｇ（５．０ｍｍｏｌ）
のビス（４−クロロフェニル）酢酸と１．０４ｇ（５．
０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから表題
化合物を白色固体として１．５７ｇ（収率６７％）得
た。
のビス（４−クロロフェニル）酢酸と１．０４ｇ（５．
０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから表題
化合物を白色固体として１．５７ｇ（収率６７％）得
た。
【００４６】実施例３＜化合物Ｎｏ．３の合成＞ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下ＤＭＦと略す）２
０ｍｌ中に１．２９ｇ（１０ｍｍｏｌ）の４−クロロフ
ェノールと２．７８ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブロモフェニ
ル酢酸エチルエステルから２−フェニル−２−（４−ク
ロロフェノキシ）酢酸エステルを白色固体として１．７
０ｇ（５７％）得た。次いで４．１５ｇ（３０ｍｍｏ
ｌ）の炭酸カリウムを加え、１時間８０℃で撹拌した。
反応液を酢酸エチルで抽出し、蒸留水で１回洗浄後有機
層を減圧下濃縮した。残渣をエタノール２０ｍｌに溶解
し、１５ｍｌ（１５ｍｍｏｌ）の１Ｎ水酸化ナトリウム
水溶液を加え、０．５時間８０℃で撹拌した。氷冷下反
応液を希塩酸で酸性とし、析出した固体を濾取し、２−
フェニル−２−（４−クロロフェノキシ）酢酸を白色固
体として２．３６ｇ（収率９０％）を得た。この化合物
１．３１ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０４ｇ（５．０ｍ
ｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから実施例１
と同様にして、表題化合物を白色固体として１．４８ｇ
（収率６５％）得た。
０ｍｌ中に１．２９ｇ（１０ｍｍｏｌ）の４−クロロフ
ェノールと２．７８ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブロモフェニ
ル酢酸エチルエステルから２−フェニル−２−（４−ク
ロロフェノキシ）酢酸エステルを白色固体として１．７
０ｇ（５７％）得た。次いで４．１５ｇ（３０ｍｍｏ
ｌ）の炭酸カリウムを加え、１時間８０℃で撹拌した。
反応液を酢酸エチルで抽出し、蒸留水で１回洗浄後有機
層を減圧下濃縮した。残渣をエタノール２０ｍｌに溶解
し、１５ｍｌ（１５ｍｍｏｌ）の１Ｎ水酸化ナトリウム
水溶液を加え、０．５時間８０℃で撹拌した。氷冷下反
応液を希塩酸で酸性とし、析出した固体を濾取し、２−
フェニル−２−（４−クロロフェノキシ）酢酸を白色固
体として２．３６ｇ（収率９０％）を得た。この化合物
１．３１ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０４ｇ（５．０ｍ
ｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから実施例１
と同様にして、表題化合物を白色固体として１．４８ｇ
（収率６５％）得た。
【００４７】実施例４＜化合物Ｎｏ．４の合成＞ 実施例３と同様にして０．９４ｇ（１０ｍｍｏｌ）のフ
ェノールと２．４３ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブロモフェニ
ル酢酸エチルエステルから２−フェニル−２−フェノキ
シ酢酸を白色固体として１．６３ｇ（収率７１％）得
た。この化合物１．１４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０
４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミ
ドから表題化合物を白色固体として１．４４ｇ（収率６
９％）得た。
ェノールと２．４３ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブロモフェニ
ル酢酸エチルエステルから２−フェニル−２−フェノキ
シ酢酸を白色固体として１．６３ｇ（収率７１％）得
た。この化合物１．１４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０
４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミ
ドから表題化合物を白色固体として１．４４ｇ（収率６
９％）得た。
【００４８】実施例５＜化合物Ｎｏ．５の合成＞ 実施例３と同様にして１．２９ｇ（１０ｍｍｏｌ）の４
−クロロフェノールと２．７８ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブ
ロモ−４−クロロフェニル酢酸エチルエステルから２−
（４−クロロフェニル）−２−（４−クロロフェノキ
シ）酢酸を白色固体として１．７０ｇ（収率５７％）得
た。この化合物１．４９ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０
４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミ
ドから表題化合物を白色固体として２．１０ｇ（収率８
６％）得た。
−クロロフェノールと２．７８ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブ
ロモ−４−クロロフェニル酢酸エチルエステルから２−
（４−クロロフェニル）−２−（４−クロロフェノキ
シ）酢酸を白色固体として１．７０ｇ（収率５７％）得
た。この化合物１．４９ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０
４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミ
ドから表題化合物を白色固体として２．１０ｇ（収率８
６％）得た。
【００４９】実施例６＜化合物Ｎｏ．１３の合成＞ 実施例３と同様の方法で０．７７ｇ（７．０ｍｍｏｌ）
のチオフェノールと２．０５ｇ（７．０ｍｍｏｌ）のブ
ロモナフチル酢酸エチルエステルから２−ナフチル−２
−フェニルチオ酢酸を白色固体として１．２０ｇ（収率
５８％）得た。この化合物１．１８ｇ（４．０ｍｍｏ
ｌ）と０．８３ｇ（４．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレン
スルホンアミドから表題化合物を白色固体として１．３
０ｇ（収率６７％）得た。実施例１〜６と同様にして合
成したＮｏ．１〜Ｎｏ．１６の化合物の構造、分析値、
薬理データを下記表−１に示した。
のチオフェノールと２．０５ｇ（７．０ｍｍｏｌ）のブ
ロモナフチル酢酸エチルエステルから２−ナフチル−２
−フェニルチオ酢酸を白色固体として１．２０ｇ（収率
５８％）得た。この化合物１．１８ｇ（４．０ｍｍｏ
ｌ）と０．８３ｇ（４．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレン
スルホンアミドから表題化合物を白色固体として１．３
０ｇ（収率６７％）得た。実施例１〜６と同様にして合
成したＮｏ．１〜Ｎｏ．１６の化合物の構造、分析値、
薬理データを下記表−１に示した。
【００５０】
【表１】
【００５１】
【表２】
【００５２】
【表３】
【００５３】
【表４】
【００５４】
【表５】
【００５５】
【表６】
【００５６】
【表７】
【００５７】
【表８】
【００５８】
【発明の効果】実施例から明らかな様に、本発明で得ら
れる前記一般式（Ｉ）で示される新規なアシルスルホン
アミド誘導体は、優れたキマーゼ阻害活性を有し、キマ
ーゼの関与する各種疾患の治療及び予防のための医薬と
して期待される。
れる前記一般式（Ｉ）で示される新規なアシルスルホン
アミド誘導体は、優れたキマーゼ阻害活性を有し、キマ
ーゼの関与する各種疾患の治療及び予防のための医薬と
して期待される。
【図１】ヒト心臓キマーゼのｃＤＮＡ取得から、ｐＥＴ
−ｈＣｈｙの構築までの流れを示す図。
−ｈＣｈｙの構築までの流れを示す図。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 増田 裕和 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地 三菱化学株式会社横浜総合研究所内 (72)発明者 臼井 義浩 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地 三菱化学株式会社横浜総合研究所内 (72)発明者 阿部 祐司 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地 三菱化学株式会社横浜総合研究所内 (72)発明者 島田 真弓 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地 三菱化学株式会社横浜総合研究所内 (72)発明者 山本 睦也 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地 三菱化学株式会社横浜総合研究所内 Ｆターム(参考） 4C206 AA03 JA19 MA01 MA04 ZA36 ZA42 ZA45 ZA59 ZA61 ZA81 ZA89 ZA96 ZB13 ZB15 ZB26 ZC20 ZC35 4H006 AA01 AA03 AB20 AB22 AB23 AB25 AB28
Claims (4)
- 【請求項１】 下記一般式（Ｉ） 【化１】 ｛式中、Ｒ1 は置換基を有していても良いフェニル基、
ナフチル基又は水素原子を示し、Ｒ2 はハロゲン原子、
アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基及
びニトロ基から選ばれる置換基を有していても良いフェ
ニル基又は水素原子を示す。但しＲ1 とＲ2 が同時に水
素原子であることは無い。Ｒ3 は置換基を有していても
良いアリール基を示す。Ｘは−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−
（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を示す。｝で示
されるアシルスルホンアミド誘導体、その製薬上許容し
得る塩、並びにその水和物もしくは溶媒和物。 - 【請求項２】 請求項１記載のアシルスルホンアミド誘
導体、その製薬上許容し得る塩、並びにその水和物もし
くは溶媒和物を有効成分とする医薬組成物。 - 【請求項３】 請求項１記載のアシルスルホンアミド誘
導体、その製薬上許容し得る塩、並びにその水和物もし
くは溶媒和物を有効成分とするキマーゼ阻害剤。 - 【請求項４】 請求項１記載のアシルスルホンアミド誘
導体、その製薬上許容し得る塩、並びにその水和物もし
くは溶媒和物を有効成分とする、下記疾患の治療及び／
又は予防薬。高血圧、鬱血性心不全、心筋症、動脈硬化
症、冠状動脈疾患、心筋梗塞、血管形成手術又は血栓溶
解治療後の血管再狭窄、抹消循環障害、血管炎、糖尿病
性又は非糖尿病性腎臓病、肺高血圧症、気管支喘息、慢
性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、肺気腫、アレルギー性
鼻炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ、関節炎、癌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27837699A JP4491866B2 (ja) | 1999-09-30 | 1999-09-30 | アシルスルホンアミド誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27837699A JP4491866B2 (ja) | 1999-09-30 | 1999-09-30 | アシルスルホンアミド誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001097946A true JP2001097946A (ja) | 2001-04-10 |
| JP4491866B2 JP4491866B2 (ja) | 2010-06-30 |
Family
ID=17596485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27837699A Expired - Fee Related JP4491866B2 (ja) | 1999-09-30 | 1999-09-30 | アシルスルホンアミド誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4491866B2 (ja) |
Cited By (6)
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|---|---|---|---|---|
| WO2001062293A1 (fr) * | 2000-02-22 | 2001-08-30 | Suntory Limited | Medicaments preventifs ou therapeutiques contenant des inhibiteurs de chymase en tant que principe actif, pour traiter diverses maladies associees a l'eosinophilie |
| WO2002022595A1 (fr) * | 2000-09-18 | 2002-03-21 | Toa Eiyo Ltd. | Derives de benzothiophenesulfonamide substitue en n |
| WO2003078419A1 (en) * | 2002-03-15 | 2003-09-25 | Toa Eiyo Ltd. | N-substituted benzothiophenesulfonamide derivative |
| US7071220B2 (en) | 2000-09-18 | 2006-07-04 | Toa Eiyo Ltd. | N-substituted benzothiophenesulfonamide derivatives |
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| JP2019519598A (ja) * | 2016-04-18 | 2019-07-11 | アイエフエム セラピューティクス インコーポレイテッド | Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物および組成物 |
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