JP2001074744A - Dnaアレイ、その製造方法及び製造装置 - Google Patents

Dnaアレイ、その製造方法及び製造装置

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昭治 河井
Masamitsu Matsumoto
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 点着、読出が容易で、試料数の増加にも容易
に態様できるDNAアレイ、その製造方法及び製造装置
を提供する。 【解決手段】 DNA断片を支持体上に配列したもので
あって、該支持体がプラスチック製テープであり、配列
は1列のみであるもの、及び、DNA断片の水性試料液
を収納した容器の上部蓋に、後端は試料液に浸漬し先端
は蓋から外に突出する毛管点着具を設け、該点着具の先
端にプラスチック製テープを順次接することによって、
試料液をテープに所定間隔で点着する方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、DNAアレイ、そ
の製造方法及び製造装置に関するものである。
【0002】
【従来の技術】DNAアレイとは、利用目的に応じて計
画的に合成あるいは天然の遺伝子物質から切り出して調
整した多数のDNA断片を固相表面に規則正しく配列し
たものである。このDNAアレイは、未知の試料に含ま
れるDNAと反応させて該試料中の遺伝子の性質を調べ
ることに用いられる。ここで、未知の試料中のDNA断
片は、アレイ上のDNAと結合(ハイブリダイゼーショ
ン)するかしないかを試されるもので、反応の結果を判
定するために予め蛍光プローブなどの標識が施されてい
る。
【0003】近年、配列要素の数が400以上の高密度
のDNAアレイを製造する技術が開発されている。1つ
は固相基板上で塩基配列の異なるDNAを同時に合成す
る方法であり、個々のDNAが数十塩基以下のDNAア
レイが製造されている。他の1つは遺伝子工学的方法で
調整したDNA断片の溶液を、微細加工を施したディス
ペンサーを用いて固相基板の上に点着してスポットを形
成する方法であり、個々のDNAが数百塩基以上のDN
Aアレイが製造されている。
【0004】このようなDNAアレイ製造技術は、いず
れも配列要素を固相基板の表面に二次元の格子を形成す
るように配列し、その格子間隔を限りなく小さくするこ
とで配列の密度を高めようとするものである。この方法
の利点は、配列要素の数が比較的小さい間は、その製造
装置もコンパクトで取扱いに便利なものである。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、最初に
述べたDNAを基板上で直接合成する方法は、フォトリ
ソグラフィーを応用するもので、例えば、個々の要素が
10個の塩基からなるDNAアレイを製造するために
は、40種類のフォトマスクを必要とする。この方法
は、フォトマスクを製造する段階で既に巨額の費用が必
要であり、目的に応じた様々な構成パターンのDNAア
レイを安価かつ簡便に製造することは困難である。
【0006】また、DNA断片の溶液を基板上に点着す
る方法は、点着する配列要素を入替える度にディスペン
サー(注射器や針のようなもの)を洗浄、乾燥しなけれ
ばならない。そのため、配列要素の数が多くなればなる
ほど無駄な時間が多くなり、結果としてDNAアレイの
製造コストが高くなる。
【0007】
【課題を解決するための手段】このような現状に鑑み、
本発明者は鋭意研究の結果本発明を完成させたものであ
りその特徴とするところは、DNAアレイにあっては、
DNA断片を支持体上に配列したものであって、該支持
体がプラスチック製テープであり、配列は1列のみであ
る点にあり、DNAアレイの製造方法にあっては、DN
A断片の水性試料液を収納した容器の上部蓋に、後端は
試料液に浸漬し先端は蓋から外に突出する毛管点着具を
設け、該点着具の先端にプラスチック製テープを順次接
することによって、試料液をテープに所定間隔で点着す
る点にあり、DNAアレイの製造装置にあっては、DN
A断片の水性試料液を導入するもので、後端は試料液に
浸漬し先端は蓋から外に突出する毛管点着具を上部蓋に
設けたウェルを多数有するマイクロプレートを前後に移
動させる搬送テーブル、支持体であるプラスチック製テ
ープを保持するテープリール、及び少なくとも1つの該
テープを点着具の先端に押圧、離反させるための可動押
圧具を有する点にある。
【0008】DNA断片とは、遺伝子工学的手法によ
り、特定のDNA二重ラセンを一重鎖に分断し、それを
さらに細かく切断したものをいう。断片自体のサイズや
種類は問わない。DNAのすべてであっても一部であっ
てもよい。
【0009】支持体とは、DNA断片を担持する固相部
である。本発明では、これがプラスチック製テープであ
る。プラスチックは特に限定しないが、ポリエステル、
ポリオレフィン、ポリ塩化ビニル等どのようなものでも
よい。厚みや幅は自由に選択できるが、既存のテープリ
ール等が利用できるため、一般のオーディオテープ或い
はマイクロカセットテープ程度が好適である。テープの
長さは、配列要素の数の問題であり自由に選定できる。
【0010】このテープは、少なくとも1面は親水性で
あることが望ましい。これは、DNA断片の点着は親水
性面に行なう方が簡単なためである。更に、単に点着さ
せるだけでなく、この親水性表面とDNA断片とが化学
的に結合するよう、表面に官能基(アルデヒド基等)を
導入しておくこともよい。化学的結合によって、DNA
断片がより強固に固着し、反応操作時にDNAアレイの
一部が剥がれ落ちるという事故が防止できる。また、反
対面は疎水性であることが好ましい。これは、水や水溶
液を撥き、濡れや汚れを防止できるためである。
【0011】更に、本発明では、配列要素(DNA断
片)は、上記テープに1列のみ配置されるものである。
形状は点状あるいは線状など自由に選択できる。また、
1列であれば直線状でも曲線状でも、更にはジグザク等
その態様はどのようなものでもよい。配列要素の配置間
隔は一定が望ましいが、特に限定はしない。
【0012】本発明のDNAアレイは、上記の構成要素
を有していればよく、その製造方法は自由である。例え
ば、人間が手によってDNA断片を支持体上に固着して
もよいし、自動装置で行なってもよい。点着の方法も試
料液をノズルから、また針に沿わせて落下させてもよい
し、不織布の芯等で点着してもよい。試料液の乾燥も自
然乾燥、送風乾燥等自由である。
【0013】次に請求項2及び請求項3に記載したDN
Aアレイの製造方法の発明について説明する。ここで、
水性試料液とはDNA断片が溶解した溶液であり、これ
は本発明とは関係なく調整されたものである。要するに
現在使用されているものでよいのである。
【0014】この水性試料液は、一般にウェルと呼ばれ
る容器(試験管様のもの)に収納されている。容器自体
はどのようなものでもよい。本発明では、この容器に上
部蓋を取り付ける。この上部蓋は貫通孔を有し、該貫通
孔に毛管点着具を取りつける。この毛管点着具はフェル
トペンの先のようなもので、毛管現象で試料液を吸い上
げられるものであればよい。この点着具の後端は試料液
に浸漬され、先端は上部蓋から突出している。毛管点着
具は先端を細く平らにする等形状は自由に選定できる。
【0015】本発明方法は、このような蓋付き容器を準
備し、その上に請求項1で説明したプラスチック製テー
プを接触させて、点着具から試料液を該テープに点着さ
せるものである。この接触は単に触れるだけでも、押圧
してもよい。更に、容器とテープを逆にしてテープを下
に置き、容器を逆さまにして接触させてもよい。試料液
を点着されたテープは乾燥後、巻き取られて新たな試料
の点着に備えることができる。
【0016】この方法では、容器は多数配置して一度の
接触で同時に多数の試料点着を行なうことができる。例
えば、5列×10段のように二次元に容器が配列された
保持具に保管された試料群を用いることができる。この
とき、テープの移動量は適宜選択することができる。例
えば、第1列を点着したのち、点着された部分をすべて
送り、第2列を点着する方法、即ち第1列、第2列、第
3列と順次点着する方法がある。あるいは、第1列を点
着したのち、第1列の1段目と2段目の試料の間に第2
列の1段目の試料を点着するようにテープを移動させる
方法等が適用できる。
【0017】本発明方法の第1の特徴は、試料容器に設
けた毛管点着具を使用する点にあり、テープの移動方
法、移動量、移動速度、また試料容器そのものの移動方
法や速度更にはテープの移動方向と直角方向の動き等は
まったく自由であり、適宜決めればよい。
【0018】次に請求項4に記載したDNAアレイの製
造装置の発明について説明する。ここでいうマイクロプ
レートとは、試料容器が多数構成されたもので、それ自
体が容器であるとともに枠体でもある。これは、世界的
に統一された規格のものが販売され使用されている。そ
れは、12×8の容器をセットできるもので、サイズが
86×128mm程度のものである。勿論、これに限定
するものではなく、容器の数や配列、サイズ等は自由で
ある。
【0019】搬送テーブルとは、このマイクロプレート
を移動させるもので、移動方向は少なくともテープの長
手方向と直角の方向に移動できるものである。テープの
長手方法には移動できてもできなくともよい。テープの
長手方向と直角の方向に移動させる理由は、マイクロプ
レートにセットされた容器の1列分(複数の容器)が点
着された後、次の列の容器(複数)をテープの点着位置
に移動するためである。この時、テープをどれだけ送る
(移動させる)かは、上記した点着方法(点着順序)の
問題であり自由に決めればよい。
【0020】テープリールは、テープを巻き取れれば特
に制限はない。テープの移動量、移動速度、移動タイミ
ング等はテープリール自体の駆動により制御しても、あ
るいはピンチローラー等の機構によって制御してもよ
い。
【0021】可動押圧具は、テープを毛管点着具の先端
に押圧又は接触させるためのもので、テープを押し付け
る押圧板とこれを支える駆動部からなり、テープをはさ
んで試料とは反対側に位置するものである。重力、スプ
リング、電磁石或いはモーター等によって適宜駆動され
る。
【0022】
【発明の実施の形態】次に本発明の実施の形態に基づ
き、本発明をより詳細に説明する。図1は、本発明のD
NAアレイ1の1例を示す平面図である。プラスチック
製テープ(ポリエステル)2に、多数のDNA断片3が
固着されている。DNA断片は、試料液に溶解させて、
その溶液を点着し乾燥(自然乾燥)させたものである。
この1つの固着エリア(1mm四方)で同一のDNA断
片多数が支持体(テープ)に固着されている。各エリア
は1次元的に配列されている。このエリアの数は、試料
によって、また測定法や項目によって異なる。
【0023】図2は、本発明方法に使用する試料容器の
1例を示す断面図である。これは、1つの容器に1つの
蓋が設けられるもので、実際には多数の容器に1度に蓋
ができるものが便利である。この図では、容器本体4に
試料液5が所定量導入されている。蓋6には中心に貫通
孔を持った挟持部7が設けられ、その挟持部7にフェル
ト製の芯(毛管点着具)8が嵌挿されている。芯8の後
端は試料液に浸漬する位置にあり、先端は蓋から突出し
ている。試料液5は毛管現象によって芯8に吸い上げら
れ、芯8の先端にまで達している。この先端にテープが
触れるとテープに試料液が点着される。
【0024】図3(a)は、一般的なマイクロプレート
9である。マイクロプレート9のそれぞれの凹部が試料
液容器であり、この図ではすでに試料が導入されてい
る。その数は8×12個である。図3(b)は、その断
面図である。図4は、本発明の蓋10である。この蓋
は、原理的には図2に示す蓋6と同様である。
【0025】図5は、図4の蓋を図3のマイクロプレー
トにセットしたところである。図5(a)は、その平面
図、(b)は断面図、(c)は正面図である。この状態
は、図2と意味は同じである。
【0026】図6は、図5に示す蓋付きのマイクロプレ
ート9を、本発明のDNAアレイ製造装置の搬送テーブ
ル11に載置したところである。この搬送テーブル11
は、図面では紙と直角の方向(テープの長手方向と直
角)に移動可能である。このマイクロプレート9の中の
ウェルのある列がテープ12の真下になるようにセット
されている。テープ12は、テープリール13からテー
プリール14に巻き取られる。テープ12は、ピンチロ
ール15によって所定間隔で所定速度で送られる。この
ピンチロール15は、通常コンピューターに連動し制御
される。
【0027】テープ12が通過する真上には、可動押圧
具16が設けられている。テープ12及びマイクロプレ
ート9が所定位置に来た時にこれが下降し、テープ12
を芯8の先端に接触させる。
【0028】図7は図6の装置の側面図である。この図
では、マイクロプレート9の中のウェルの第6列F(図
5(a))がテープ12の真下に位置している。可動押
圧具16が1回点着する度に、搬送テーブル11は1列
分だけ前方(又は後方)にマイクロプレートを移動させ
る。この時、テープも所定距離送られる。そして、点着
箇所が重ならずに、点着されていく。
【0029】この点着されていく順序の1例を示す。第
8図は、マイクロプレートが5列で5段の25ウェルと
した時の平面図である。この第1列目の5つが、最初に
テープに点着される。この状態を図9(a)に示す。こ
の状態から、マイクロプレートが1列分移動し、第2列
目がテープの真下に来る。この時テープが少し送られて
いる。そして最初の位置と重複しないように点着する。
これが図9(b)の状態である。このテープの送り幅
は、最初の1番目の試料と6番目の試料の間に2〜5番
目の試料が点着できるよう決めればよい。最後まで終わ
った状態が図9(c)である。
【0030】図10は、テープを複数載置し、1度に複
数のテープに点着できる例である。この場合には、装置
は複雑そうであるが、テープリールはすべて同期回転で
可能であり、ほとんどテープ1本の場合と変わりはな
い。そして製造効率は高い。
【0031】図11は、可動押圧具16の動きを示す側
面図である。図11(a)は可動押圧具16が押圧して
いない状態である。この例では可動押圧具16は、駆動
部17と押圧部18からなる。駆動部17はモーター等
と連動されて可動するもので、押圧部18は駆動部17
とは固定されておらずフリーである。駆動部17が上昇
する時には、押圧部18を上方に持ち上げる。しかし、
駆動部17が下降する場合は、押圧部18は連結されて
いないため自重で下降するだけである。よってテープに
押圧する力も押圧部の自重のみであり、常に一定であ
る。これによって不要に押圧したり、押圧不足を軽減す
る。
【0032】図12は、本発明DNAアレイを用いて、
被検査試料又は未知試料溶液19とハイブリダイゼーシ
ョンを行なう例を示す。この図のようにテープを溶液に
浸漬通過させるだけであるため、操作が非常に簡単であ
る。駆動機器としてはテープリールの回転用モーターだ
けである。勿論、これは本発明DNAアレイの使用法の
1例を示したものであり、その他の方法でもよく、使用
の方法を限定するものではない。
【0033】図13は、ハイブリダイゼーション操作を
行なった後、その結果を検査する例である。DNA断片
が1次元で配列されているため、テープの1次元送りの
みですべてスキャニングできる。よって、結果の読み取
り装置が非常に簡単なものとなり、速度も向上する。2
次元に移動するものがないため故障も少ない。これも前
記同様本発明DNAアレイの使用法の1例であり限定す
るものではない。
【0034】
【発明の効果】1) 本発明のDNAアレイはDNAの支
持体がテープであるため、これまでのプレート方式では
複数枚にまたがらざるを得ないような点着点数の増加に
対して、単にテープ長さを伸長するだけで対応可能であ
る。 2) 本発明のDNAアレイは、点着点数が変化しても、
各試料領域の大きさを変化させる必要がないため、チッ
プの作成方法、あるいは読み取りの方法を変更する必要
がない。 3) 本発明のDNAアレイは、テープ上に一次元に配列
されているため、点着試料の読み取りが簡単である。 4) 本発明のDNAアレイ製造装置は、各試料に対して
専用の毛管点着具を使用し、点着具の洗浄、試料の補充
という工程が不要であるため、従来のディスペンサー
(ノズルや針)を用いる方法と比較して、DNAチップ
製造時間が短縮される。 5) 本発明のDNAアレイ製造装置は、テープ移動機
構、試料搬送テーブル、点着機構の動作すべてが1方向
のみの移動であるため、制御が簡単で、非常に迅速な動
作が可能である。 6) 本発明のDNAアレイ製造装置は、動作が単純でし
かも、動作精度の要求が比較的緩やかであるため、機構
が簡単であり、複雑な制御機構を必要としないので、非
常に安価に製造できる。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明DNAアレイの1例を示す平面図であ
る。
【図2】本発明に用いる試料液容器の1例を示す断面図
である。
【図3】一般的なマイクロプレートを示し、(a)は平
面図であり、(b)は断面図である。
【図4】本発明に使用する蓋の1例を示し、(a)は平
面図であり、(b)は断面図である。
【図5】図3のマイクロプレートに図4の蓋をセットし
たものを示し、(a)は平面図であり、(b)は断面図
であり、(c)は側面図である。
【図6】本発明装置の1例を示す概略正面図である。
【図7】本発明装置の1例を示す概略側面図である。
【図8】マイクロプレートの1例を示す平面図である。
【図9】本発明DNAアレイの製造工程を示す平面図で
ある。
【図10】本発明装置の他の例を示す概略側面図であ
る。
【図11】本発明方法及び装置に用いる駆動押圧具の1
例を示す側面図である。
【図12】本発明DNAアレイの使用状態を示す正面図
である。
【図13】本発明DNAアレイの使用状態を示す正面図
である。
【符号の説明】
1 DNAアレイ 2 プラスチック製テープ 3 DNA断片 4 容器本体 5 試料液 6 蓋 7 挟持部 8 芯 9 マイクロプレート 10 蓋 11 搬送テーブル 12 テープ 13 テープリール 14 テープリール 15 ピンチロール 16 可動押圧具 17 駆動部 18 押圧部 19 未知試料溶液

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 DNA断片を支持体上に配列したもので
    あって、該支持体がプラスチック製テープであり、配列
    は1列のみであることを特徴とするDNAアレイ。
  2. 【請求項2】 DNA断片の水性試料液を収納した容器
    の上部蓋に、後端は試料液に浸漬し先端は蓋から外に突
    出する毛管点着具を設け、該点着具の先端にプラスチッ
    ク製テープを順次接することによって、試料液をテープ
    に所定間隔で点着することを特徴とするDNAアレイの
    製造方法。
  3. 【請求項3】 DNA断片の水性試料液を導入するもの
    で、後端は試料液に浸漬し先端は蓋から外に突出する毛
    管点着具を上部蓋に設けたウェルを多数有するマイクロ
    プレートを前後に移動させる搬送テーブル、支持体であ
    るプラスチック製テープを保持するテープリール、及び
    少なくとも1つの該テープを点着具の先端に押圧、離反
    させるための可動押圧具を有することを特徴とするDN
    Aアレイの製造装置。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4699993B2 (ja) * 2004-04-20 2011-06-15 ユニバーサル・バイオ・リサーチ株式会社 試料集積用カセット、スポッティング装置および試料集積化装置

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