JP2001050931A - 遺伝子の一塩基置換ｓｎｐと点突然変異を検出する方法、並びに検出装置及び検出チップ - Google Patents

遺伝子の一塩基置換ｓｎｐと点突然変異を検出する方法、並びに検出装置及び検出チップ

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 複数のサンプルＤＮＡを対象に、大量の
一塩基置換ＳＮＰと点突然変異を高感度に検出、解析を
可能とする。 【解決手段】 密閉空間部Ｓの底面７に多数の金電極８
が形成され、この金電極８には異なる遺伝子配列から成
るオリゴヌクレオチド１０が固定されており、この金電
極８と接触しないように共通電極１６が配置されて成る
遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の検出用チップ
２内の空間部ＳにサンプルＤＮＡを充填し、共通電極１
６と金電極８間に電圧を印加し、電流を検出してハイブ
リリタイゼーションした二鎖ＤＮＡを検出し、解析可能
とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、遺伝子の発現な
ど、遺伝子ＤＮＡの一塩基置換ＳＮＰ（シングル・ヌク
レオチド・ポリモフィズム：人の遺伝コード中の変種）
と点突然変異を検出し解析可能とする遺伝子の一塩基置
換ＳＮＰと点突然変異を検出する方法、並びに検出装置
及び検出チップ装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】一塩基置換ＳＮＰとは、ヒトＤＮＡの１
０００ｂｐから２０００ｂｐに１つあると言われている
塩基配列の一塩基変化であり、正常人、病気の人問わず
人には数十万から数百万のＳＮＰがあると考えられてお
り、病因の解明、予防に有効なマーカーと期待されてい
る。
【０００３】点突然変異とは、すでに既知である遺伝子
における塩基配列の一塩基の変化であり、これにより翻
訳されるタンパク質の機能異常がみられ、疾患の原因に
なる場合がある。
【０００４】遺伝子ＤＮＡの塩基配列の違いを検出、解
析する手段としては、ＤＮＡシーケンス法（塩基配列決
定法）、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（Polymerase chain reactio
n-single stranded polymorphism)法、アレル特異的ハ
イブリダイゼーション法、ＤＮＡチップ法等が用いられ
ている。
【０００５】ＤＮＡシーケンス法は、マキサム・ギルバ
ート法とサンガー（ダイデオキシ）法があるが、現在は
主にダイデオキシ法が用いられている。ヒトの遺伝子の
解析したい領域をＰＣＲ法（ポリミラーゼ連鎖反応法）
で増幅したのち、ＰＣＲ法で用いたプライマー若しくは
増幅ＤＮＡ内に設定したプライマーを用いてシーケンス
を行い、当領域内の遺伝子配列を決定する。この操作を
異なるサンプルＤＮＡを用いて行うことで、遺伝子の一
塩基置換ＳＮＰと点突然変異を検出する。
【０００６】ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（Polymerase chain rea
ction-single stranded polymorphism)法はヒトの遺伝
子の解析したい領域をＰＣＲ法で増幅した後、熱変性で
一本鎖にし、これを非変性ポリアクリルアミドゲル中で
電気泳動を行うことで、ＰＣＲ法で増幅した２本鎖ＤＮ
Ａのそれぞれの鎖に２次構造（分子内水素結合）を形成
させる。一塩基配列の違いによってとる２次構造（分子
内水素結合）がことなるため、電気泳動距離の違いによ
って遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異を検出す
る。
【０００７】アレル特異的ハイブリダイゼーション法で
は、解析したい領域をＰＣＲ法で増幅した後、メンブレ
ン（ナイロンフィルター）の領域内に２０塩基程度のＰ
ＣＲ産物もしくはオリゴヌクレオチドプローブを作成
し、そこに放射性同位元素３２Ｐなどで標識したサンプ
ルＤＮＡ（被検出ＤＮＡ）をハイブリダイゼーションさ
せるものである。その際の温度等のハイブリダイゼーシ
ョン条件を調節することで、遺伝子の一塩基性ＳＮＰと
点突然変異を放射性同位元素の強度の差で検出する。
【０００８】ＤＮＡチップ法は、原理的にはアレル特異
的ハイブリダイゼーション法とほぼ同じであるが、２０
塩基程度のＰＣＲ産物もしくはオリゴヌクレオチドプロ
ーブを固定相（基盤上）に並べ、そこに蛍光標識したサ
ンプルＤＮＡ（被検出ＤＮＡ）をハイブリダイゼーショ
ンさせるものである。温度等のハイブリダイゼーション
条件を調節することで、ヒトの遺伝子の一塩基置換ＳＮ
Ｐと点突然変異を蛍光強度の差によって検出するもので
ある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】アレル特異的ハイブリ
ダイゼーション法におけるハイブリダイゼーションの場
合は、ＤＮＡを放射性同位元素で標識するために、放射
性同位元素の取り扱いと管理に多大な費用が有すること
が問題である。又、ＤＮＡチップ法の場合は、蛍光色素
で標識すると、蛍光色素の大きな分子構造のために十分
な頻度で蛍光がＤＮＡにとりこまれないために、蛍光標
識プローブの蛍光強度が高くないこと、さらに蛍光の退
色及びガラス等の基盤の有する蛍光（背景部分の蛍光）
が問題になる。
【００１０】このような問題点を解決するために、簡単
で感度の優れたＤＮＡハイブリッド形成の検出、二本鎖
ＤＮＡを検出する方法として、プローブＤＮＡを電極に
固定し、このプローブＤＮＡを、インターカレータ存在
下においてサンプルＤＮＡと反応させて、二本鎖ＤＮＡ
の検出、ハイブリッド形成体の検出を電気化学的に行う
方法が開示されている（特開平９−２８８０８０号公報
及び第５７回分析化学討論会予稿集、Ｐ１３７−１３
８、１９９６年、参照）。
【００１１】しかしながら、遺伝子の一塩基置換ＳＮＰ
や遺伝子の突然変異の数は莫大であり、例えばヒトの場
合１５KBの密度（解像度）の一塩基置換ＳＮＰ地図を作
成するためには、すくなくとも２００万の一塩基置換Ｓ
ＮＰを同定しなければならない。又、既知の疾患に関係
する遺伝子の点突然変異の数もきわめて多い。一塩基置
換や点突然変異を網羅的に解析することは従来の方法で
は現実的に不可能に近い。
【００１２】本発明は、上記従来の問題点を解決するこ
とを目的とするものであり、複数のサンプルＤＮＡを対
象に、大量の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異を検出、解
析することが可能な、すなわちハイスループット（高速
大量）の処理ができ、しかも高感度に検出と解析が可能
な一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の同定装置を提供す
る。要するに、本発明は、特開平９−２８８０８０号公
報に記載された二本鎖ＤＮＡの検出、ハイブリッド形成
体の検出を電気化学的に行う原理に基づいて、大量かつ
高感度な一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の検出・解析装
置として実現しようとするものである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するために、サンプルＤＮＡを充填及び除去可能とす
る密閉された内部空間部と、該空間部の底面に形成され
た測定極である多数の金電極と、上記空間部において上
記金電極と接触しないように配置された対極である共通
電極とを備えた、遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変
異の検出用チップであって、上記金電極には、異なる遺
伝子配列から成るＰＣＲ産物もしくはオリゴヌクレオチ
ドが固定されており、上記共通電極と上記金電極間に電
圧が印加され、電流が検出されることが可能であること
を特徴とする遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の
検出用チップを提供する。
【００１４】さらに、本発明は、上記課題を解決するた
めに、サンプルＤＮＡを充填及び除去可能とする密閉さ
れた内部空間部と、該空間部の底面に形成された多数の
金電極と、上記空間部において上記金電極と接触しない
ように配置された共通電極と、上記共通電極と上記金電
極間に電圧を印加し電流を検出可能とする測定装置とを
備えた遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の検出装
置であって、上記金電極には、異なる遺伝子配列から成
るＰＣＲ産物もしくはオリゴヌクレオチドが固定されて
いることを特徴とすることを特徴とする遺伝子の一塩基
置換ＳＮＰと点突然変異の検出装置を提供する。
【００１５】上記内部空間、上記金電極及び上記共通電
極を検出チップ内に含まれるように形成し、上記検出チ
ップを、上記検出測定装置に着脱自在に装着し電気的に
接続できるような構成としてもよい。
【００１６】 上記検出チップの温度をペルチエ素子を
用いて変化させ、上記ハイブリダイゼーションの温度条
件をコントロール可能としてもよい。
【００１７】 さらに、本発明は、上記課題を解決する
ために、空間部内に、サンプルＤＮＡ又はサンプルＤＮ
Ａから遺伝子増幅されたＤＮＡを充填し、バイブリダイ
ゼーションを行わせて二本鎖鎖を形成し、その後、上記
空間部内に、電気化学活性分子を含む電解質を充填し
て、温度をコントロールして上記二本鎖に電気化学活性
分子を結合させ、そして、上記共通電極と上記金電極間
に電圧を印加して流れる電流値を検出することにより、
サンプルＤＮＡの一塩基置換ＳＮＰと点突然変異を検出
することを特徴とする遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突
然変異の検出方法を提供する。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明に係る遺伝子の一塩基置換
ＳＮＰと点突然変異の検出方法、並びに検出装置及び検
出チップの実施の形態を実施例に基づいて図面を参照し
て、以下説明する。図１において、本発明に係る遺伝子
の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の検出装置１は、ハイ
ブリダイゼーション用の検出チップ２と、この検出チッ
プ２を差し込んで、ハイブリダイゼーションにより生じ
る二本鎖ＤＮＡを検出し解析可能とする測定装置３とか
ら構成される。
【００１９】図２において、検出チップ２は、セラミッ
クスや合成樹脂材等により、カードあるいはカセット状
のチップとして形成されており、本体部４と、該本体部
４に上方から装着される上部カバー５（図中想像線で示
される）とから構成される。この検出チップ２は、酸及
びアルカリに耐性を有する材料で形成されており、特
に、上部カバー５はする外部から観察できるように透明
であることが好ましい。
【００２０】本体部４のほぼ中央には、矩形の窪み６が
形成されている。これにより、本体部４に上部カバー５
を装着して一体とすると、その窪みの部分が、密閉され
た空間部Ｓとなる。空間部Ｓの底面、即ち、窪み６の底
面７には、金のスポットをマトリックス状に配列して蒸
着し、多数の金電極８から構成されるアレー状金電極９
が形成されている。
【００２１】図２の右側に金電極８の拡大図を示してい
るが、この拡大図で示されているように、金電極８上に
は、ＰＣＲ産物、オリゴヌクレオチドの５’末端にチオ
ール化してＳＨ基を導入したＳＨ化オリゴヌクレオチド
１０が固定されている。ＰＣＲ産物は二本鎖ＤＮＡであ
るが、一方の鎖の５’末端をチオール化し、ＳＨ基を導
入してあるこのオリゴヌクレオチドは、２０〜５０塩基
含む長さを有し、その基端に導入したチオール基を介し
て金電極８上に固定されている。
【００２２】検出チップ２の先端部１１には、多数のタ
ーミナル端子１２が並設されている。金電極８は、夫々
配線１３に結合され、該配線の他端は、ターミナル端子
１２の夫々と結合するように伸設されている。
【００２３】なお、図４（ａ）に示すように、金電極９
に対する配線は、金電極８それぞれに対応して一本づつ
接続してそれぞれターミナル端子１２に接続してもよい
が、図４（ｂ）に示すように、液晶表示装置等に利用さ
れている、多数の縦及び横の導線１４、１５から成る格
子状の配線として、アレー状に配置した金電極９を夫々
近接する縦及び横の導線に接続するマトリックス配線構
造とする。この場合、縦及び横の導線の一端がターミナ
ル端子１２に接続されることとなる。
【００２４】本実施例では、窪み６の底面でマトリック
ス状に配列してある金電極９と接しない位置に対極であ
る共通電極１６が配列されている。共通電極１６の配線
は金電極同様に金の蒸着によって形成される。共通電極
１６は、共通電極用ターミナル端子１７に接続されるよ
うに伸設されている。さらに、それぞれの金電極９と対
極である共通電極１６の間の電流値は、窪み６内の空間
に接する形で配線された参照電極２８の値を基準に測定
され、測定ごとに正確な電流値が得られる構造となって
いる。
【００２５】検出チップ２の本体部４の及び上部カバー
５の両側部に、窪み６に連通する左右の注入孔１８、１
９（図２中の上方に示された要部拡大図参照。）が形成
されており、通常はキャップ栓により閉鎖されており、
密閉空間Ｓを形成している。キャップをはずし、この注
入孔１８、１９にディスポーザルの注射器２０、２１を
挿入できる。これにより、窪み６と上部カバー５により
画成される密封された空間部Ｓ内へ溶液を注入したり、
あるいは空間部Ｓ内の溶液の交換や混合を迅速に行うこ
とができる。
【００２６】測定装置３は、検出チップ２を差し込む挿
入口２２を有している。挿入口２２の内部には、図４
（ｃ）で示すように、共通電極用ターミナル端子１７及
び各金電極用ターミナル端子１２に接続して、共通電極
用ターミナル端子１７及び各金電極用ターミナル端子１
２間に電圧を印加する回路２３が配設されている。そし
て、共通電極用ターミナル端子１７と各金電極用ターミ
ナル端子１２間に電圧が印加された際に、共通電極１６
と各金電極８の間に流れる電流を、回路２３に設けられ
た検出器２４で検出して測定できるように構成とされて
いる。
【００２７】この検出した電流に基づく測定データは、
検出器２４に接続するＡ−Ｄ変換器２５等でデジタル化
され、パソコン２６によりサンプルの解析、同定等の処
理データとして利用される。さらに、測定装置３には、
ペルチェ素子から成る温度コントロール装置が装備され
いる。
【００２８】以上のような構成から成る本発明に係る遺
伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の検出装置１の作
用について説明する。検出チップ２は、本体部４に上部
カバーが一体に結合され密閉されている。そして、図３
に示すように、注入孔１８、１９に注射器２０、２１を
挿入してサンプルＤＮＡを含む溶液を注入する。
【００２９】なお、サンプルＤＮＡは、生物材料から抽
出したＤＮＡを、ＤＮＡ分解酵素もしくは超音波処理で
分解したもの、又は特定の遺伝子からＰＣＲ（ポリメラ
ーゼ連鎖反応法）によって増幅したＤＮＡを用いる。こ
れらのサンプルＤＮＡは、ハイブリダイゼーションの直
前に熱処理によって変性しておく。
【００３０】固定されたＰＣＲ産物もしくはオリゴヌク
レオチドのＤＮＡ（一本鎖の状態）にサンプルＤＮＡ
（一本鎖の状態）が添加されると、互いに相補的な塩基
配列を持つＰＣＲ産物もしくはオリゴヌクレオチドのＤ
ＮＡとサンプルＤＮＡは、ハイブリダイゼーションが行
われる。この際、検出チップ２を測定装置３内の挿入口
２２に挿入して装着し、測定装置３内に装備されたペル
チェ素子により、温度をコントロールし、ハイブリダイ
ゼーションの温度条件にコントロールする。
【００３１】このハイブリダイゼーションが行われた
後、検出チップ２を測定装置３から抜いて、一方の注入
孔１８から注射器で洗浄液を注入し、他方の注入孔１９
から空間部Ｓ内の液を吸引して、ハイブリダイゼーショ
ンしなかったサンプルＤＮＡを洗い流して洗浄する。
【００３２】このような洗浄を行った後に、電気化学活
性分子を含む電解質溶液を注射器により注入孔１８、１
９から空間部Ｓ内に注入する。電気化学活性分子は、ハ
イブリダイゼーションにより二本鎖ＤＮＡの抵抗値等の
電気的特性を変化させる機能を奏する。この点について
は、特開平９−２８８０８０号公報に詳細に説明されて
いる。
【００３３】このような処理を行った検出チップ２を測
定装置３に再度装着し、検出チップ２の共通電極用ター
ミナル端子１７及び各金電極用ターミナル端子１２を電
圧回路２３に接続し、共通電極１６と各金電極８の間に
弱い電圧をかけると、ハイブリダイゼーションにより生
じた二本鎖ＤＮＡと接続された金電極８には、電圧回路
２３及び共通電極１６を通して微弱電流が流れる。測定
装置３内に装備されたペルチエ素子により温度をコント
ロールし、異なる温度での電流値を測定する。
【００３４】測定装置３では、図４（ｃ）に示すよう
に、各金電極用端子１２に対して走査端子２７が自動的
に切り替えられることにより、順次ハイブリダイゼーシ
ョンの後の二本鎖ＤＮＡに電流が流れて検出され、この
検出結果が、ＡーＤ変換器等によりデジタルデータに変
換されて、パソコンで測定データとしてメモリ等に蓄積
される。この測定データにより、サンプルＤＮＡの同定
や解析が行われる。例えば、予め蓄積されている各種類
のＤＮＡデータ等と比較することにより、サンプルＤＮ
Ａの解析や同定が可能となる。
【００３５】次に本発明に係わる遺伝子の塩基置換、点
突然変異等の電気化学的検出装置の実験例を説明する。
【００３６】（実験例１）遺伝子p53の72番目のコドン
における一塩基置換SNPの検出の実験例を示す。以下の
２種類のポリモルフィズム（遺伝的多型）に相当する塩
基配列をもつオリゴヌクレオチドを金電極それぞれにス
ポットすることにより固定化した。 p53Pro（コドン72番目がPro） p53Arg（コドン72番目がArg）
【００３７】これにp53のコドン72番目がProであるの正
常人の末梢血から採取したDNA、及びこのDNAからp53の
エキソン４に存在するコドン72を含む領域を増幅したPC
R産物を熱変性後ハイブリダイゼーション反応を行っ
た。測定電解質溶液として0.1MAcOH-AcOK (pH5.6), 0.1
M KCl, 0.05mM NFc中で20度で470 mV (Ag/AgCl参照電極
基準)のハイブリダイゼーション前後の電流値変化を測
定した。 末梢血から採取したDNA p53Proの電流変化(%) 52％ p53Argの電流変化(%) 15％ PCR産物 p53Proの電流変化(%) 65％ p53Argの電流変化(%) 13％
【００３８】さらにp53のコドン72番目がArgである正常
人の末梢血から採取したDNA、及びこのDNAからp53のエ
キソン４に存在するコドン72を含む領域を増幅したPCR
産物を同様にハイブリダイゼーション反応を行った。 末梢血から採取したDNA p53Proの電流変化(%) 46％ p53Argの電流変化(%) 17％ PCR産物 p53Proの電流変化(%) 53％ p53Argの電流変化(%) 11％
【００３９】これらの電流変化は、完全にマッチした塩
基配列の場合とミスマッチの場合では明らかな差が認め
られた。
【００４０】（実験例２）塩基置換の数によって測定す
る電流値が異なり、これによりミスマッチの量が測定で
きることを示した実験例を説明する。dT20, dT10dAdT9,
dT8dA4dT8, dAdT19, dA3dT17, dT19dA, dT17dA3の７種
のオリゴヌクレオチドを金電極それぞれにスポットする
ことにより固定化した。これにdA20をハイブリダイゼー
ション反応を行った。
【００４１】測定電解質溶液として0.1M AcOH-AcOK （p
H５．６）、 0.1M KCl, 0.05mM NFc中、２０度で、４７
０mV (Ag/AgCl参照電極基準)で、ハイブリダイゼーショ
ン前後の電流値変化を測定した。この測定結果を表１に
示す。
【００４２】
【表１】
【００４３】表１における電流変化は、ほぼミスマッチ
塩基の量に依存した変化であった。特に末端部にミスマ
ッチが存在する場合は、Tm値より大きな変化が見られ
た。従来のSSCPでは、このような系は検出できなかった
が本手法で初めて明らかとなった。
【００４４】以上、本発明に係る遺伝子の一塩基置換Ｓ
ＮＰと点突然変異を検出する方法、並びに検出装置及び
検出チップについて、その実施例で説明したが、本発明
は、特にこのような実施例に限定されることはなく、特
許請求の範囲の技術的事項の範囲内で、いろいろな実施
の態様があることは言うまでもない。
【００４５】
【発明の効果】本発明に係る遺伝子の一塩基置換ＳＮＰ
と点突然変異を検出する方法、並びに検出装置及び検出
チップは、以上のような構成であるから、複数のサンプ
ルＤＮＡを対象に、大量の一塩基置換ＳＮＰと点突然変
異を高感度でもって、検出、解析することが可能にな
る。
【００４６】このように、高感度、ハイスループット
（高速大量）の処理ができる本発明に係る検出装置は、
生物学、医学分野での遺伝子、表現形質との相関の解析
に有効な手段である。薬剤代謝酵素、がん抑制遺伝子な
どの特定の遺伝子を、本発明に係る一塩基置換ＳＮＰと
点突然変異の検出・解析装置よって、解析することによ
り、遺伝子診断の分野にも利用できる。
【００４７】例えば、本発明に係る検出装置では、高感
度、ハイスループット（高速大量）の処理が可能である
から、日本人の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異のデータ
を収集し、病気の発症と関連する一塩基置換ＳＮＰと点
突然変異を同定し、がん、高血圧などの成人病の予防等
に役立てることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係る遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突
然変異を検出する検出装置の実施例の全体構成を説明す
る斜視図である。
【図２】本発明に係る遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突
然変異を検出に利用される検出チップの実施例の全体構
成を説明する斜視図である。
【図３】図２の検出チップの使用状態を説明する斜視図
である。
【図４】本発明に係る遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突
然変異の検出装置及び検出チップの電極、配線等の構成
を説明するための図である。
【符号の説明】
１ 遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異を検出す
る検出装置 ２ 検出チップ ３ 測定装置 ４ 窪み ８ （各）金電極 ９ 金電極（群） １０ オリゴヌクレオチド １２ 金電極用ターミナル端子 １６ 共通電極 １７ 共通電極用ターミナル端子 １８、１９ 注入孔 ２２ 挿入口 ２６ パソコン
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 竹中 繁織 福岡県古賀市舞の里４−23−21 (72)発明者 宮原 孝俊 千葉市美浜区高浜６−19−15 Ｆターム(参考） 2G045 AA35 AA40 BA13 BB60 CA25 CA26 DA13 FA34 FB02 FB05 GC20 JA01 JA04 JA07 4B024 AA11 AA20 CA01 HA14 HA19 4B029 AA23 BB20

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 サンプルＤＮＡを充填及び除去可能と
    する密閉された内部空間部と、 該空間部の底面に形成された測定極である多数の金電極
    と、 上記空間部において上記金電極と接触しないように配置
    された対極である共通電極とを備えた、遺伝子の一塩基
    置換ＳＮＰと点突然変異の検出用チップであって、 上記金電極には、異なる遺伝子配列から成るＰＣＲ産物
    もしくはオリゴヌクレオチドが固定されており、 上記共通電極と上記金電極間に電圧が印加され、電流が
    検出されることが可能であることを特徴とする遺伝子の
    一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の検出用チップ。
  2. 【請求項２】 サンプルＤＮＡを充填及び除去可能と
    する密閉された内部空間部と、 該空間部の底面に形成された測定極である多数の金電極
    と、 上記空間部において上記金電極と接触しないように配置
    された対極である共通電極と、 上記共通電極と上記金電極間に電圧を印加し電流を検出
    可能とする測定装置とを備えた遺伝子の一塩基置換ＳＮ
    Ｐと点突然変異の検出装置であって、 上記金電極には、異なる遺伝子配列から成るＰＣＲ産物
    もしくはオリゴヌクレオチドが固定されていることを特
    徴とすることを特徴とする遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと
    点突然変異の検出装置。
  3. 【請求項３】 上記内部空間、上記金電極及び上記共
    通電極を検出チップ内に含まれるように形成し、上記検
    出チップを、上記検出測定装置に着脱自在に装着し電気
    的に接続できるように構成されていることを特徴とする
    請求項２記載の遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異
    の検出装置。
  4. 【請求項４】 上記検出チップの温度をペルチエ素子
    を用いて変化させ、上記ハイブリダイゼーションの温度
    条件をコントロール可能としたことを特徴とする請求項
    ２又は３記載の遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異
    の検出装置。
  5. 【請求項５】 請求項２、３又は４記載の空間部内
    に、サンプルＤＮＡ又はサンプルＤＮＡから遺伝子増幅
    されたＤＮＡを充填し、ハイブリダイゼーションを行わ
    せて二本鎖鎖を形成し、 その後、上記空間部内に、電気化学活性分子を含む電解
    質を充填して、温度をコントロールして上記二本鎖に電
    気化学活性分子を結合させ、 そして、上記共通電極と上記金電極間に電圧を印加して
    流れる電流値を検出することにより、サンプルＤＮＡの
    一塩基置換ＳＮＰと点突然変異を検出することを特徴と
    する遺伝子の一塩基置換ＳＮＰと点突然変異の検出方
    法。
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