JP2001031700A - 新規抗体 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【目的】未知のアポトーシス回避機構の起因物質を見出
し、それをコントロールする手段を提供し、癌の予防と
治療の手段、更に起因物質をマーカーにした癌診断手段
の提供すること。 【構成】インターフェロン−γ刺激の有無に関わらずヒ
ト大腸癌細胞株ｃｏｌｏ２０５細胞の細胞膜上に強く発
現し・ヒト正常組織では上皮細胞に存在する糖蛋白抗原
を認識する癌細胞のアポトーシス誘発能を担持した抗
体、この抗体により免疫学的に認識されるポリペプチ
ド、および該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ド、また該ポリペプチド及び／又はポリヌクレオチドと
の反応性を利用して化合物を同定する。これらを利用し
た生体におけるアポトーシス系をコントロールする手段
を提供し、癌の予防および治療のための新規な手段を提
供し、さらにこれらをマーカーにした新規な癌診断手段
を提供する。
し、それをコントロールする手段を提供し、癌の予防と
治療の手段、更に起因物質をマーカーにした癌診断手段
の提供すること。 【構成】インターフェロン−γ刺激の有無に関わらずヒ
ト大腸癌細胞株ｃｏｌｏ２０５細胞の細胞膜上に強く発
現し・ヒト正常組織では上皮細胞に存在する糖蛋白抗原
を認識する癌細胞のアポトーシス誘発能を担持した抗
体、この抗体により免疫学的に認識されるポリペプチ
ド、および該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ド、また該ポリペプチド及び／又はポリヌクレオチドと
の反応性を利用して化合物を同定する。これらを利用し
た生体におけるアポトーシス系をコントロールする手段
を提供し、癌の予防および治療のための新規な手段を提
供し、さらにこれらをマーカーにした新規な癌診断手段
を提供する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、癌、特に大腸癌のアポ
トーシスに関与する抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオ
チドおよびこれらに由来する化合物、さらにこれらを含
む癌の予防および治療に有用な医薬組成物および癌診断
手段に関するものである。
トーシスに関与する抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオ
チドおよびこれらに由来する化合物、さらにこれらを含
む癌の予防および治療に有用な医薬組成物および癌診断
手段に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】細胞死の機序として、アポトーシスの機
序が注目を集め、このアポトーシス機序の癌治療への応
用が期待されている。このアポトーシスの引き金となる
ものが、Ｆａｓ抗原と呼ばれる物質であって、細胞膜に
存在するレセプター分子であることが報告されている。
しかし、ヒトの大腸癌細胞は、細胞膜にＦａｓ抗原を発
現しているにもかかわらず、Ｆａｓ抵抗性を示し、アポ
トーシスの誘発が起こらないことが報告されている（Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，５８：５２
６〜５３４）。そのため癌細胞には、いまだ未知の何ら
かのアポトーシス回避機構が存在することが推定されて
いる。
序が注目を集め、このアポトーシス機序の癌治療への応
用が期待されている。このアポトーシスの引き金となる
ものが、Ｆａｓ抗原と呼ばれる物質であって、細胞膜に
存在するレセプター分子であることが報告されている。
しかし、ヒトの大腸癌細胞は、細胞膜にＦａｓ抗原を発
現しているにもかかわらず、Ｆａｓ抵抗性を示し、アポ
トーシスの誘発が起こらないことが報告されている（Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，５８：５２
６〜５３４）。そのため癌細胞には、いまだ未知の何ら
かのアポトーシス回避機構が存在することが推定されて
いる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明が、解決しよう
とする課題は、いまだ未知のアポトーシス回避機構を探
求し、その起因物質を見出し、その起因物質をコントロ
ールする手段を提供して癌の予防および治療の手段を提
供し、さらに起因物質をマーカーにした癌診断手段を提
供することである。
とする課題は、いまだ未知のアポトーシス回避機構を探
求し、その起因物質を見出し、その起因物質をコントロ
ールする手段を提供して癌の予防および治療の手段を提
供し、さらに起因物質をマーカーにした癌診断手段を提
供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、先にインタ
ーフェロン−γ（以下、ＩＦＮ−γと略称する）によっ
て、ヒト浮遊性大腸癌細胞株ｃｏｌｏ２０５細胞（以
下、単にｃｏｌｏ２０５細胞とよぶ）に細胞凝集現象が
誘発されることを見出した。この細胞凝集現象を、様々
な細胞接着分子に対するモノクロ−ナル抗体を用いて阻
害効果を検討したところ、部分的に、抗ＣＥＡ抗体によ
ってのみ阻害されたものの、完全阻害にはいたらなかっ
た（Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９３，７１：
１０９〜１１７）。本発明者は、このバイオアッセイ系
を用い、新規のモノクロ−ナル抗体の作成を試みた。そ
の結果、ｃｏｌｏ２０５の細胞を用いて、全く新規な特
徴を有するモノクロ−ナル抗体の調製に成功した。この
抗体が認識する抗原は、細胞のアポトーシスに対する制
御機能を有することが推定され、抗体自身は、この抗原
に作用し、結果として癌細胞のアポトーシスを誘発し
た。また、従来、アポトーシス関連因子として公知のＦ
ａｓ抗原は、細胞をＩＦＮ−γ処理することによりその
発現が増強されることが報告されている（Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．，１９８９，１６９：１７４７−１７５６）
が、本発明の抗体により認識される抗原は、細胞をＩＦ
Ｎ−γ処理しても発現の変化は無かった。さらに、細胞
株により、本発明の抗体が認識する抗原、アポトーシス
関連因子として公知のＦａｓ抗原や腫瘍壊死因子受容体
（以下、ＴＮＦ−Ｒと略称する）の発現程度が異なって
いることが確認された。すなわち、本発明の抗体が認識
する抗原は、アポトーシス関連因子として公知のＦａｓ
抗原やＴＮＦ−Ｒとは異なるものであった。
ーフェロン−γ（以下、ＩＦＮ−γと略称する）によっ
て、ヒト浮遊性大腸癌細胞株ｃｏｌｏ２０５細胞（以
下、単にｃｏｌｏ２０５細胞とよぶ）に細胞凝集現象が
誘発されることを見出した。この細胞凝集現象を、様々
な細胞接着分子に対するモノクロ−ナル抗体を用いて阻
害効果を検討したところ、部分的に、抗ＣＥＡ抗体によ
ってのみ阻害されたものの、完全阻害にはいたらなかっ
た（Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９３，７１：
１０９〜１１７）。本発明者は、このバイオアッセイ系
を用い、新規のモノクロ−ナル抗体の作成を試みた。そ
の結果、ｃｏｌｏ２０５の細胞を用いて、全く新規な特
徴を有するモノクロ−ナル抗体の調製に成功した。この
抗体が認識する抗原は、細胞のアポトーシスに対する制
御機能を有することが推定され、抗体自身は、この抗原
に作用し、結果として癌細胞のアポトーシスを誘発し
た。また、従来、アポトーシス関連因子として公知のＦ
ａｓ抗原は、細胞をＩＦＮ−γ処理することによりその
発現が増強されることが報告されている（Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．，１９８９，１６９：１７４７−１７５６）
が、本発明の抗体により認識される抗原は、細胞をＩＦ
Ｎ−γ処理しても発現の変化は無かった。さらに、細胞
株により、本発明の抗体が認識する抗原、アポトーシス
関連因子として公知のＦａｓ抗原や腫瘍壊死因子受容体
（以下、ＴＮＦ−Ｒと略称する）の発現程度が異なって
いることが確認された。すなわち、本発明の抗体が認識
する抗原は、アポトーシス関連因子として公知のＦａｓ
抗原やＴＮＦ−Ｒとは異なるものであった。
【０００５】本発明の抗体により認識される抗原は、癌
細胞のアポトーシスに深く関与していること推定され、
該抗原の存在は癌診断手段の新規なマーカーとしての価
値を有する。
細胞のアポトーシスに深く関与していること推定され、
該抗原の存在は癌診断手段の新規なマーカーとしての価
値を有する。
【０００６】本発明は、下記性質イ）、ロ）を有する糖
蛋白抗原、 イ）インターフェロン−γ刺激の有無にかかわらず、ヒ
ト大腸癌細胞株ｃｏｌｏ２０５細胞の細胞膜上に強く発
現している、 ロ）ヒト正常組織では主に上皮細胞に存在する、を認識
する抗体であって、 １）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持ち、 ２）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、 ３）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこし、 ４）大腸癌細胞株であるＨＴ−２９、Ｃａｃｏ−２、Ａ
ＣＭ、胃癌細胞株であるＫＡＴＯ−ＩＩＩ、乳癌細胞株
であるＭＣＦ−７、Ｂ ｃｅｌｌリンパ腫細胞であるＲ
ａｊｉ細胞との反応性があり、 ５）該抗体との免疫学的反応後のｃｏｌｏ２０５細胞か
ら、Ｆａｓ抗原を消失せしめる、癌細胞誘発能を保持し
た新規モノクローナル抗体を提供する。
蛋白抗原、 イ）インターフェロン−γ刺激の有無にかかわらず、ヒ
ト大腸癌細胞株ｃｏｌｏ２０５細胞の細胞膜上に強く発
現している、 ロ）ヒト正常組織では主に上皮細胞に存在する、を認識
する抗体であって、 １）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持ち、 ２）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、 ３）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこし、 ４）大腸癌細胞株であるＨＴ−２９、Ｃａｃｏ−２、Ａ
ＣＭ、胃癌細胞株であるＫＡＴＯ−ＩＩＩ、乳癌細胞株
であるＭＣＦ−７、Ｂ ｃｅｌｌリンパ腫細胞であるＲ
ａｊｉ細胞との反応性があり、 ５）該抗体との免疫学的反応後のｃｏｌｏ２０５細胞か
ら、Ｆａｓ抗原を消失せしめる、癌細胞誘発能を保持し
た新規モノクローナル抗体を提供する。
【０００７】更に本発明は、上記の抗体により免疫学的
に認識されるポリペプチドおよび該ポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドを提供する。
に認識されるポリペプチドおよび該ポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドを提供する。
【０００８】本発明は、このポリペプチドおよび／また
は請求項３のポリヌクレオチドとの反応性をもち、少な
くとも請求項１の抗体と生物学的評価において同等の下
記の機能、 １）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持ち、 ２）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、 ３）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこす、
を担持した化合物を同定する方法を提供し、また同定さ
れる化合物を提供する。
は請求項３のポリヌクレオチドとの反応性をもち、少な
くとも請求項１の抗体と生物学的評価において同等の下
記の機能、 １）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持ち、 ２）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、 ３）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこす、
を担持した化合物を同定する方法を提供し、また同定さ
れる化合物を提供する。
【０００９】本発明は、本発明の抗体またはポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドまたは前記同定された化合物
のうちの少なくとも一つを含有することを特徴とする癌
の予防および治療に有用な医薬組成物を提供する。
ドまたはポリヌクレオチドまたは前記同定された化合物
のうちの少なくとも一つを含有することを特徴とする癌
の予防および治療に有用な医薬組成物を提供する。
【００１０】本発明は、本発明の抗体および／またはこ
の抗体により免疫学的に認識されるポリペプチドおよび
／またはこのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドをマーカーとして利用することを特徴とする癌診断手
段を提供する。
の抗体により免疫学的に認識されるポリペプチドおよび
／またはこのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドをマーカーとして利用することを特徴とする癌診断手
段を提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】（新規抗体）本発明の抗体は、後
述の実施例に示すように、ｃｏｌｏ２０５癌細胞株を免
疫原として利用したものである。しかし、得られた抗体
を用いて、対応する抗原の組織分布を検討したところ、
広くヒト正常組織に分布することから、免疫原はこれに
限定されない。本発明の抗体としての特徴は以下に要約
される。
述の実施例に示すように、ｃｏｌｏ２０５癌細胞株を免
疫原として利用したものである。しかし、得られた抗体
を用いて、対応する抗原の組織分布を検討したところ、
広くヒト正常組織に分布することから、免疫原はこれに
限定されない。本発明の抗体としての特徴は以下に要約
される。
【００１２】１）モノクロ−ナル抗体として確認された
免疫グロブリンクラスは、マウスＩｇＭである。しか
し、本発明の抗体と同様の免疫反応性を維持する限り
は、単量体であるＩｇＧであっても利用できる。 ２）対応する抗原が、ＩＦＮ‐γ刺激の有無にかかわら
ず、ｃｏｌｏ２０５細胞の細胞膜上に強く発現する。 ３）対応する抗原は、免疫組織化学的検討において上皮
細胞以外のヒト正常組織で認められない。 ４）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持つ。 ５）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発する。 ６）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこす。 ７）大腸癌細胞株であるＨＴ−２９、Ｃａｃｏ−２、Ａ
ＣＭ、胃癌細胞株であるＫＡＴＯ−ＩＩＩ、乳癌細胞株
であるＭＣＦ−７、Ｂ ｃｅｌｌリンパ腫細胞であるＲ
ａｊｉ細胞との免疫学的反応性がある。 ８）本発明の抗体との免疫学的反応後のｃｏｌｏ２０５
細胞は、Ｆａｓ抗原による染色性を消失する。すなわ
ち、Ｆａｓ抗原を細胞膜上から失う。
免疫グロブリンクラスは、マウスＩｇＭである。しか
し、本発明の抗体と同様の免疫反応性を維持する限り
は、単量体であるＩｇＧであっても利用できる。 ２）対応する抗原が、ＩＦＮ‐γ刺激の有無にかかわら
ず、ｃｏｌｏ２０５細胞の細胞膜上に強く発現する。 ３）対応する抗原は、免疫組織化学的検討において上皮
細胞以外のヒト正常組織で認められない。 ４）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持つ。 ５）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発する。 ６）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこす。 ７）大腸癌細胞株であるＨＴ−２９、Ｃａｃｏ−２、Ａ
ＣＭ、胃癌細胞株であるＫＡＴＯ−ＩＩＩ、乳癌細胞株
であるＭＣＦ−７、Ｂ ｃｅｌｌリンパ腫細胞であるＲ
ａｊｉ細胞との免疫学的反応性がある。 ８）本発明の抗体との免疫学的反応後のｃｏｌｏ２０５
細胞は、Ｆａｓ抗原による染色性を消失する。すなわ
ち、Ｆａｓ抗原を細胞膜上から失う。
【００１３】本発明の抗体は、モノクロ−ナル抗体とし
て確立された。その手法は、前述のように、癌細胞を免
疫原にし、動物例えばマウス、ラット、兎、やぎ、馬等
に投与し、要すればアジュバントの存在化で、体液性応
答および／または細胞性応答等の免疫誘導を行う。この
誘導手段が施された動物から、脾細胞に代表される抗体
産生細胞を回収し、自体公知のミエローマ細胞等の永久
増殖性細胞との融合またはウイルス感染による永久細胞
化による形質転換手段を導入する。本発明からなる抗体
産生細胞の選択は、先に本発明者が報告したｃｏｌｏ２
０５細胞株を利用したバイオアッセイの手段（Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９３，７１：１０９〜１１
７）を利用する。つまり、ｃｏｌｏ２０５細胞株の細胞
死誘導活性を有する抗体を産生する細胞をスクリーニン
グし、自体公知の限界希釈法によるクローニングを繰り
返し、クローン化した。
て確立された。その手法は、前述のように、癌細胞を免
疫原にし、動物例えばマウス、ラット、兎、やぎ、馬等
に投与し、要すればアジュバントの存在化で、体液性応
答および／または細胞性応答等の免疫誘導を行う。この
誘導手段が施された動物から、脾細胞に代表される抗体
産生細胞を回収し、自体公知のミエローマ細胞等の永久
増殖性細胞との融合またはウイルス感染による永久細胞
化による形質転換手段を導入する。本発明からなる抗体
産生細胞の選択は、先に本発明者が報告したｃｏｌｏ２
０５細胞株を利用したバイオアッセイの手段（Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９３，７１：１０９〜１１
７）を利用する。つまり、ｃｏｌｏ２０５細胞株の細胞
死誘導活性を有する抗体を産生する細胞をスクリーニン
グし、自体公知の限界希釈法によるクローニングを繰り
返し、クローン化した。
【００１４】抗体の回収は、自体公知の手段、例えばク
ローン化した抗体産生細胞の培養液や該抗体産生細胞を
移植したマウスの腹水から、アルコール、硫安、ＰＥＧ
等を所望により組合せて使用し、行うことができる。ま
た、本発明の抗体との特異的結合性を利用したアフィニ
ティークロマトグラフィーを利用して好適に単離するこ
とも可能である。本発明の抗体と特異的に結合する物質
を得る手段としては、例えば本発明の抗体を固定化し、
そこにランダムに合成ポリペプチドを添加し、本発明の
抗体との免疫学的反応性を保持するポリペプチドを容易
に見つけ出すことが可能である。
ローン化した抗体産生細胞の培養液や該抗体産生細胞を
移植したマウスの腹水から、アルコール、硫安、ＰＥＧ
等を所望により組合せて使用し、行うことができる。ま
た、本発明の抗体との特異的結合性を利用したアフィニ
ティークロマトグラフィーを利用して好適に単離するこ
とも可能である。本発明の抗体と特異的に結合する物質
を得る手段としては、例えば本発明の抗体を固定化し、
そこにランダムに合成ポリペプチドを添加し、本発明の
抗体との免疫学的反応性を保持するポリペプチドを容易
に見つけ出すことが可能である。
【００１５】アフィニティー担体を構築することによっ
て、動物の血清等から、本発明の抗体機能と同等の特異
性を保持するポリクローナル抗体の回収も容易におこな
うことが出来る。
て、動物の血清等から、本発明の抗体機能と同等の特異
性を保持するポリクローナル抗体の回収も容易におこな
うことが出来る。
【００１６】本発明の抗体に関する性状は、以下に記述
する実施例で詳述した。
する実施例で詳述した。
【００１７】本発明の抗体により免疫学的に認識される
ポリペプチドは、少なくとも８個のアミノ酸配列を有
し、少なくとも本発明のモノクロ−ナル抗体との免疫学
的反応性を持つ。このポリペプチドを得るための手段と
しては、無細胞蛋白質合成系を利用すれば、容易に回収
可能である。例えば、小麦胚芽由来のリボソーム系を利
用し、ｃｏｌｏ２０５由来の遺伝子ライブラリーを原料
として、各種ｍＲＮＡを調製し、エリクソン等の方法
（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９
８３、９６：３８〜５０）に従い蛋白質合成反応を行
い、産生されるポリペプチドを本発明の抗体の固定化担
体によって選択的に補足し、その後、抗体と結合しうる
ペプチド、すなわち抗原性を有するポリペプチド、およ
び該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを同定
・分析することによって達成できる。本発明のポリヌク
レオチドは、当然にその相補鎖をも包含する。
ポリペプチドは、少なくとも８個のアミノ酸配列を有
し、少なくとも本発明のモノクロ−ナル抗体との免疫学
的反応性を持つ。このポリペプチドを得るための手段と
しては、無細胞蛋白質合成系を利用すれば、容易に回収
可能である。例えば、小麦胚芽由来のリボソーム系を利
用し、ｃｏｌｏ２０５由来の遺伝子ライブラリーを原料
として、各種ｍＲＮＡを調製し、エリクソン等の方法
（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９
８３、９６：３８〜５０）に従い蛋白質合成反応を行
い、産生されるポリペプチドを本発明の抗体の固定化担
体によって選択的に補足し、その後、抗体と結合しうる
ペプチド、すなわち抗原性を有するポリペプチド、およ
び該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを同定
・分析することによって達成できる。本発明のポリヌク
レオチドは、当然にその相補鎖をも包含する。
【００１８】かくして、本発明の抗体およびその抗体と
の反応性をもつポリペプチドおよび該ポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドの同定が出来れば、少なくと
も本発明の抗体による作用と比較して生物学的評価にお
いて同等の下記機能、すなわち、１）ｃｏｌｏ２０５細
胞に対し濃度依存的に増殖抑制作用を持ち、２）ｃｏｌ
ｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、３）ｃｏｌｏ２
０５細胞の核断片化・濃縮化をおこす機能を担持した化
合物を同定する方法が提供可能となる。同定方法は、例
えば当該ポリペプチドとの反応性をマーカーにして選別
された候補化合物を、本発明者が別途確立したバイオア
ッセイによるｃｏｌｏ２０５細胞への作用能によってス
クリーニングすることにより達成可能である。また、ポ
リペプチドの配列または立体構造に基づくドラッグデザ
イン手法による拮抗剤または誘導剤等の選別、蛋白質合
成系を利用した遺伝子レベルでの発現調整剤の選別、抗
体を利用した抗体認識物質の選別等が、自体公知の医薬
品スクリーニングシステムにおいて利用可能である。
の反応性をもつポリペプチドおよび該ポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドの同定が出来れば、少なくと
も本発明の抗体による作用と比較して生物学的評価にお
いて同等の下記機能、すなわち、１）ｃｏｌｏ２０５細
胞に対し濃度依存的に増殖抑制作用を持ち、２）ｃｏｌ
ｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、３）ｃｏｌｏ２
０５細胞の核断片化・濃縮化をおこす機能を担持した化
合物を同定する方法が提供可能となる。同定方法は、例
えば当該ポリペプチドとの反応性をマーカーにして選別
された候補化合物を、本発明者が別途確立したバイオア
ッセイによるｃｏｌｏ２０５細胞への作用能によってス
クリーニングすることにより達成可能である。また、ポ
リペプチドの配列または立体構造に基づくドラッグデザ
イン手法による拮抗剤または誘導剤等の選別、蛋白質合
成系を利用した遺伝子レベルでの発現調整剤の選別、抗
体を利用した抗体認識物質の選別等が、自体公知の医薬
品スクリーニングシステムにおいて利用可能である。
【００１９】このようにして、獲得した本発明の抗体、
ポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび同定された化合
物は、正常細胞の癌化の調整または癌化細胞の制御を可
能とし、これらのうちの少なくとも一つを含有する組成
物は、新規なメカニズムによる癌の予防、治療、遺伝子
治療に有用な医薬組成物を提供する。
ポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび同定された化合
物は、正常細胞の癌化の調整または癌化細胞の制御を可
能とし、これらのうちの少なくとも一つを含有する組成
物は、新規なメカニズムによる癌の予防、治療、遺伝子
治療に有用な医薬組成物を提供する。
【００２０】また、本発明の抗体、ポリペプチド、ポリ
ヌクレオチドは、正常細胞の癌化のマーカーとしての全
く新規な診断手段を提供する。本発明の抗体に対して免
疫学的反応性を有する抗原は、正常細胞においても広く
分布しており、上皮細胞に特有のものであることが見出
され、癌化によりその細胞膜上への発現が減少してゆく
傾向が認められた。たとえば、腺腫や高分化型の癌では
発現が高いが、低分化型の癌では発現が低い。また、こ
の抗原が細胞のアポトーシスの制御に関連すると推定さ
れたことから、この抗原が、正常細胞においては、該細
胞の新旧回転に関連している可能性が考えられる。従っ
て、組織分析によりこの抗原の量・質の変異を検定すれ
ば、細胞の癌化の有力な診断手段を提供する。また、ポ
リヌクレオチドは、遺伝子レベルでの細胞の癌化の有力
な診断手段を提供する。
ヌクレオチドは、正常細胞の癌化のマーカーとしての全
く新規な診断手段を提供する。本発明の抗体に対して免
疫学的反応性を有する抗原は、正常細胞においても広く
分布しており、上皮細胞に特有のものであることが見出
され、癌化によりその細胞膜上への発現が減少してゆく
傾向が認められた。たとえば、腺腫や高分化型の癌では
発現が高いが、低分化型の癌では発現が低い。また、こ
の抗原が細胞のアポトーシスの制御に関連すると推定さ
れたことから、この抗原が、正常細胞においては、該細
胞の新旧回転に関連している可能性が考えられる。従っ
て、組織分析によりこの抗原の量・質の変異を検定すれ
ば、細胞の癌化の有力な診断手段を提供する。また、ポ
リヌクレオチドは、遺伝子レベルでの細胞の癌化の有力
な診断手段を提供する。
【００２１】（免疫および細胞融合）ｃｏｌｏ２０５細
胞を抗原とし、ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週令、雌）の腹
腔内に２×１０７個／０．１ｃｃＰＢＳを免疫した。３
週間隔で３回免疫後、３日目に脾臓を摘出し、脾細胞を
マウス骨髄腫細胞Ｓｐ２／０とポリエチレングリコール
２０００を用いて自体公知の方法で細胞融合し、融合細
胞を得た（Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５−
４９７）。得られた融合細胞を培養し、その培養上清を
ｃｏｌｏ２０５細胞死を指標とした位相差顕微鏡下での
観察による測定系（バイオアッセイ法）を用いてスクリ
ーニングした。
胞を抗原とし、ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週令、雌）の腹
腔内に２×１０７個／０．１ｃｃＰＢＳを免疫した。３
週間隔で３回免疫後、３日目に脾臓を摘出し、脾細胞を
マウス骨髄腫細胞Ｓｐ２／０とポリエチレングリコール
２０００を用いて自体公知の方法で細胞融合し、融合細
胞を得た（Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５−
４９７）。得られた融合細胞を培養し、その培養上清を
ｃｏｌｏ２０５細胞死を指標とした位相差顕微鏡下での
観察による測定系（バイオアッセイ法）を用いてスクリ
ーニングした。
【００２２】（ｃｏｌｏ２０５細胞死を指標としたスク
リーニング（バイオアッセイ法））ｃｏｌｏ２０５細胞
１×１０４個を測定用９６穴プレート（合計１９２０
穴）で培養し、融合細胞培養上清を添加、４８時間培養
し、位相差顕微鏡下で観察してｃｏｌｏ２０５細胞の生
死を判定した。その結果、ｃｏｌｏ２０５細胞死誘導活
性を有する融合細胞を含む培養穴が１個得られた。該融
合細胞を、限界希釈法（０．３個／穴）を３回繰り返し
行い、クローン化した。
リーニング（バイオアッセイ法））ｃｏｌｏ２０５細胞
１×１０４個を測定用９６穴プレート（合計１９２０
穴）で培養し、融合細胞培養上清を添加、４８時間培養
し、位相差顕微鏡下で観察してｃｏｌｏ２０５細胞の生
死を判定した。その結果、ｃｏｌｏ２０５細胞死誘導活
性を有する融合細胞を含む培養穴が１個得られた。該融
合細胞を、限界希釈法（０．３個／穴）を３回繰り返し
行い、クローン化した。
【００２３】（抗体の精製）得られたクローン化融合細
胞を培養し、培養上清よりＩｍｍｕｎｏＡｓｓｉｓｔ
ＭＧ−ＰＰ（関東化学株式会社）を用いて、抗体を精製
した。得られた抗体を以下ＬＨＫ抗体と称する。該ＬＨ
Ｋ抗体の免疫グロブリンクラスを検討したところ、Ｉｇ
Ｍであった。
胞を培養し、培養上清よりＩｍｍｕｎｏＡｓｓｉｓｔ
ＭＧ−ＰＰ（関東化学株式会社）を用いて、抗体を精製
した。得られた抗体を以下ＬＨＫ抗体と称する。該ＬＨ
Ｋ抗体の免疫グロブリンクラスを検討したところ、Ｉｇ
Ｍであった。
【００２４】（各種癌細胞表面におけるＬＨＫ抗体が認
識する抗原の発現）ヒト癌細胞表面におけるＬＨＫ抗体
が認識する抗原の発現をフローサイトメトリー（ＦＡＣ
ＳｃａｎＲ、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）を
用いて、定法により解析した。また、従来アポトーシス
を誘導することが知られている細胞表面抗原であるＦａ
ｓ抗原および腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＲ−Ｒ）の発現
と比較した。各細胞１０６個に１μｇのＬＨＫ抗体、１
μｇの抗Ｆａｓ抗体（マウスＩｇＭ、Ｃｏｕｌｔｅｒ
社）、１μｇの抗ＴＮＦーＲ抗体（ハムスターＩｇＧ、
Ｃｏｕｌｔｅｒ社）を加えて、４℃で３０分インキュベ
ートした。ついで細胞を洗浄し、ＬＨＫ抗体、抗Ｆａｓ
抗体でインキュベートした細胞は、ＦＩＴＣ（ｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）を結
合したヤギ抗マウスＩｇＭ抗を用いて、また、抗ＴＮＦ
ーＲ抗体でインキュベートした細胞は、ＦＩＴＣを結合
したヤギ抗ハムスターＩｇＧ抗体を用いて染色し、フロ
ーサイトメトリーを使用して測定した。表１に示すよう
に、大腸癌細胞株であるＨＴ−２９、Ｃａｃｏ−２、Ｗ
ｉＤｒ、胃癌細胞株であるＫＡＴＯ−ＩＩＩに認められ
た。また、図示していないが、乳癌細胞株であるＭＣＦ
−７、Ｂ ｃｅｌｌリンパ腫細胞であるＲａｊｉ細胞に
も認められた。さらに、ＬＨＫ抗体が認識する抗原（以
下、ＬＨＫと称する）と、Ｆａｓ抗原、ＴＮＦ−Ｒの各
種細胞株での分布が異なっていた。表中、＋＋は陽性細
胞が１０〜１００％、＋は１〜１０％、−は０％である
ことを示す。
識する抗原の発現）ヒト癌細胞表面におけるＬＨＫ抗体
が認識する抗原の発現をフローサイトメトリー（ＦＡＣ
ＳｃａｎＲ、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）を
用いて、定法により解析した。また、従来アポトーシス
を誘導することが知られている細胞表面抗原であるＦａ
ｓ抗原および腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＲ−Ｒ）の発現
と比較した。各細胞１０６個に１μｇのＬＨＫ抗体、１
μｇの抗Ｆａｓ抗体（マウスＩｇＭ、Ｃｏｕｌｔｅｒ
社）、１μｇの抗ＴＮＦーＲ抗体（ハムスターＩｇＧ、
Ｃｏｕｌｔｅｒ社）を加えて、４℃で３０分インキュベ
ートした。ついで細胞を洗浄し、ＬＨＫ抗体、抗Ｆａｓ
抗体でインキュベートした細胞は、ＦＩＴＣ（ｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）を結
合したヤギ抗マウスＩｇＭ抗を用いて、また、抗ＴＮＦ
ーＲ抗体でインキュベートした細胞は、ＦＩＴＣを結合
したヤギ抗ハムスターＩｇＧ抗体を用いて染色し、フロ
ーサイトメトリーを使用して測定した。表１に示すよう
に、大腸癌細胞株であるＨＴ−２９、Ｃａｃｏ−２、Ｗ
ｉＤｒ、胃癌細胞株であるＫＡＴＯ−ＩＩＩに認められ
た。また、図示していないが、乳癌細胞株であるＭＣＦ
−７、Ｂ ｃｅｌｌリンパ腫細胞であるＲａｊｉ細胞に
も認められた。さらに、ＬＨＫ抗体が認識する抗原（以
下、ＬＨＫと称する）と、Ｆａｓ抗原、ＴＮＦ−Ｒの各
種細胞株での分布が異なっていた。表中、＋＋は陽性細
胞が１０〜１００％、＋は１〜１０％、−は０％である
ことを示す。
【表１】 さらに、ヒト組換え型ＩＦＮ−γ １００Ｕ／ｍｌの存
在下でｃｏｌｏ２０５細胞を４８時間培養し、細胞表面
上のＬＨＫ、Ｆａｓ抗原、ＴＮＦ−Ｒの発現を比較し
た。図１に示すようにＩＦＮ−γ処理により、Ｆａｓ抗
原の発現は増強されたが、ＬＨＫは全く変化しなかっ
た。また、ＬＨＫ抗体１μｇ／ｍｌでｃｏｌｏ２０５細
胞を４℃で３０分間処後、細胞表面上のＦａｓ抗原の発
現をフローサイトメトリーを使用して上記同様の方法に
より測定したところ、Ｆａｓ抗原の消失が確認された。
ＬＨＫを細胞上に保有するが、ＬＨＫ抗体ではアポトー
シスを誘導し得ないＲａｊｉ細胞では同様の処理を行っ
てもＦａｓ抗原の消失が認められなかった。以上の結果
から、ＬＨＫは従来アポトーシス関連因子として公知の
Ｆａｓ抗原、ＴＮＦ−Ｒとは異なることが判明した。
在下でｃｏｌｏ２０５細胞を４８時間培養し、細胞表面
上のＬＨＫ、Ｆａｓ抗原、ＴＮＦ−Ｒの発現を比較し
た。図１に示すようにＩＦＮ−γ処理により、Ｆａｓ抗
原の発現は増強されたが、ＬＨＫは全く変化しなかっ
た。また、ＬＨＫ抗体１μｇ／ｍｌでｃｏｌｏ２０５細
胞を４℃で３０分間処後、細胞表面上のＦａｓ抗原の発
現をフローサイトメトリーを使用して上記同様の方法に
より測定したところ、Ｆａｓ抗原の消失が確認された。
ＬＨＫを細胞上に保有するが、ＬＨＫ抗体ではアポトー
シスを誘導し得ないＲａｊｉ細胞では同様の処理を行っ
てもＦａｓ抗原の消失が認められなかった。以上の結果
から、ＬＨＫは従来アポトーシス関連因子として公知の
Ｆａｓ抗原、ＴＮＦ−Ｒとは異なることが判明した。
【００２５】（ヒト正常組織での本発明の抗体が認識す
る抗原の発現）ヒト正常組織での本発明の抗体が認識す
る抗原の発現を確認するために、ヒトの凍結組織切片の
免疫組織化学的染色を定法により行った。本発明の抗体
を凍結組織切片に付し、間接イムノペルオキシダーゼ法
により、染色した。表２に示すように、ヒト正常組織で
は、本発明の抗体により認識される抗原は上皮細胞に存
在し、他の細胞には全く認められなかった。
る抗原の発現）ヒト正常組織での本発明の抗体が認識す
る抗原の発現を確認するために、ヒトの凍結組織切片の
免疫組織化学的染色を定法により行った。本発明の抗体
を凍結組織切片に付し、間接イムノペルオキシダーゼ法
により、染色した。表２に示すように、ヒト正常組織で
は、本発明の抗体により認識される抗原は上皮細胞に存
在し、他の細胞には全く認められなかった。
【表２】
【００２６】（ＬＨＫ抗体によるｃｏｌｏ２０５細胞の
増殖抑制）ＬＨＫ抗体によるｃｏｌｏ２０５細胞の増殖
抑制活性を測定した。また、ＬＨＫを細胞表面上に保有
するが、ＬＨＫ抗体でアポトーシスを誘導し得ないＪｕ
ｒｋａｔ細胞との比較において、抗Ｆａｓ抗体またはＴ
ＮＦによる増殖抑制活性と比較した。各細胞１×１０４
個をＬＨＫ抗体、抗Ｆａｓ抗体、ＴＮＦと共に４８時間
培養し、［３Ｈ］チミジンを加えてさらに１２時間培養
し、細胞に取り込まれた放射活性を測定した。図２に示
すようにｃｏｌｏ２０５細胞は、ＬＨＫ抗体によりその
増殖が顕著に抑制されたが、抗Ｆａｓ抗体、ＴＮＦでは
抑制されなかった。一方、細胞表面上にＬＨＫを保有す
るが、ＬＨＫ抗体でアポトーシスを誘導し得ないＪｕｒ
ｋａｔ細胞は抗Ｆａｓ抗体、ＴＮＦでその増殖が抑制さ
れたものの、ＬＨＫ抗体は全く影響が無かった。すなわ
ち、ＬＨＫは従来公知のアポトーシス関連因子であるＦ
ａｓやＴＮＦ−Ｒとは異なった細胞死誘導因子であるこ
とが判明した。
増殖抑制）ＬＨＫ抗体によるｃｏｌｏ２０５細胞の増殖
抑制活性を測定した。また、ＬＨＫを細胞表面上に保有
するが、ＬＨＫ抗体でアポトーシスを誘導し得ないＪｕ
ｒｋａｔ細胞との比較において、抗Ｆａｓ抗体またはＴ
ＮＦによる増殖抑制活性と比較した。各細胞１×１０４
個をＬＨＫ抗体、抗Ｆａｓ抗体、ＴＮＦと共に４８時間
培養し、［３Ｈ］チミジンを加えてさらに１２時間培養
し、細胞に取り込まれた放射活性を測定した。図２に示
すようにｃｏｌｏ２０５細胞は、ＬＨＫ抗体によりその
増殖が顕著に抑制されたが、抗Ｆａｓ抗体、ＴＮＦでは
抑制されなかった。一方、細胞表面上にＬＨＫを保有す
るが、ＬＨＫ抗体でアポトーシスを誘導し得ないＪｕｒ
ｋａｔ細胞は抗Ｆａｓ抗体、ＴＮＦでその増殖が抑制さ
れたものの、ＬＨＫ抗体は全く影響が無かった。すなわ
ち、ＬＨＫは従来公知のアポトーシス関連因子であるＦ
ａｓやＴＮＦ−Ｒとは異なった細胞死誘導因子であるこ
とが判明した。
【００２７】（ＬＨＫ抗体によるＤＮＡのアポトーシス
の誘導）ＬＨＫ抗体１μｇ／ｍｌで１２時間処理したｃ
ｏｌｏ２０５細胞から、定法によりＤＮＡを抽出し
（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８７，１３９：３１９９
−３２０６）、ＤＮＡの断片化を測定した。図３に示す
ように、ＬＨＫ抗体で処理した細胞では明らかにＤＮＡ
の断片化が確認された。また、ＬＨＫ抗体で同様に処理
したｃｏｌｏ２０５細胞をＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８を
用いて染色し、蛍光顕微鏡下で測定したところ、核の断
片化、濃縮化が確認された。すなわち、ＬＨＫ抗体によ
り、細胞のアポトーシスが誘導されることが判明した。
の誘導）ＬＨＫ抗体１μｇ／ｍｌで１２時間処理したｃ
ｏｌｏ２０５細胞から、定法によりＤＮＡを抽出し
（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８７，１３９：３１９９
−３２０６）、ＤＮＡの断片化を測定した。図３に示す
ように、ＬＨＫ抗体で処理した細胞では明らかにＤＮＡ
の断片化が確認された。また、ＬＨＫ抗体で同様に処理
したｃｏｌｏ２０５細胞をＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８を
用いて染色し、蛍光顕微鏡下で測定したところ、核の断
片化、濃縮化が確認された。すなわち、ＬＨＫ抗体によ
り、細胞のアポトーシスが誘導されることが判明した。
【００２８】（ＬＨＫの確認）ＬＨＫ抗体が認識するｃ
ｏｌｏ２０５細胞表面上の抗原ＬＨＫの確認のため、ｃ
ｏｌｏ２０５細胞（５×１０６個）をビオチンラベル
し、ｌｙｓｉｓバッファーにて細胞を溶解後、１５，０
００回転で２０分間遠心した。その上清をＬＨＫ抗体−
抗マウスＩｇＭ抗体−アガロースビーズと反応させた。
バッファーで５回洗浄後、サンプルバッファーに溶解
し、９５℃で１分反応させ、泳動を行った。泳動後、Ｐ
ＶＤＦ膜に転写し、ブロッキングバッファーを用いて３
時間反応させた。洗浄後、ＰＶＤＦ膜をＡＢＣキットに
て反応させた。反応後、洗浄し、ＥＣＬキット（ＥＣＬ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ：Ａｍｅｒｓｈａ
ｍｎＢｕｃｋｓ，ＵＫ）で反応後、現像した。その結
果、図４に示すように、ＬＨＫ抗体で認識される約７０
ｋＤａの糖蛋白質が確認された。
ｏｌｏ２０５細胞表面上の抗原ＬＨＫの確認のため、ｃ
ｏｌｏ２０５細胞（５×１０６個）をビオチンラベル
し、ｌｙｓｉｓバッファーにて細胞を溶解後、１５，０
００回転で２０分間遠心した。その上清をＬＨＫ抗体−
抗マウスＩｇＭ抗体−アガロースビーズと反応させた。
バッファーで５回洗浄後、サンプルバッファーに溶解
し、９５℃で１分反応させ、泳動を行った。泳動後、Ｐ
ＶＤＦ膜に転写し、ブロッキングバッファーを用いて３
時間反応させた。洗浄後、ＰＶＤＦ膜をＡＢＣキットに
て反応させた。反応後、洗浄し、ＥＣＬキット（ＥＣＬ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ：Ａｍｅｒｓｈａ
ｍｎＢｕｃｋｓ，ＵＫ）で反応後、現像した。その結
果、図４に示すように、ＬＨＫ抗体で認識される約７０
ｋＤａの糖蛋白質が確認された。
【発明の効果】以上説明したように本発明の抗体、ポリ
ペプチド、ポリヌクレオチド、および同定化合物は、新
規なアポトーシス機構の制御に関連しており、これらを
利用した生体におけるアポトーシス系を制御する手段を
提供して癌の予防および治療のための新規な手段を提供
し、さらにこれらをマーカーにした新規な癌診断手段を
提供することができる。
ペプチド、ポリヌクレオチド、および同定化合物は、新
規なアポトーシス機構の制御に関連しており、これらを
利用した生体におけるアポトーシス系を制御する手段を
提供して癌の予防および治療のための新規な手段を提供
し、さらにこれらをマーカーにした新規な癌診断手段を
提供することができる。
【図１】 インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）添加培
養処理による細胞表面上の、ＬＨＫ、Ｆａｓ抗原、腫瘍
壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）の発現の変動をフローサ
イトメトリーで測定した結果を示す図である。図中、Ｉ
ＦＮ−γ（−）はインターフェロン無添加での培養を、
ＩＦＮ−γ（＋）はインターフェロン添加培養を意味す
る。
養処理による細胞表面上の、ＬＨＫ、Ｆａｓ抗原、腫瘍
壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）の発現の変動をフローサ
イトメトリーで測定した結果を示す図である。図中、Ｉ
ＦＮ−γ（−）はインターフェロン無添加での培養を、
ＩＦＮ−γ（＋）はインターフェロン添加培養を意味す
る。
【図２】 ＬＨＫ抗体、抗Ｆａｓ抗体、ＴＮＦの、Ｃｏ
ｌｏ２０５細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞における増殖抑
制活性を示す図である。
ｌｏ２０５細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞における増殖抑
制活性を示す図である。
【図３】 ＬＨＫ抗体により引き起こされるｃｏｌｏ２
０５細胞のＤＮＡ断片化を示す写真である。
０５細胞のＤＮＡ断片化を示す写真である。
【図４】 ＬＨＫ抗体を用いてｃｏｌｏ２０５細胞の細
胞表面上に存在するＬＨＫを免疫沈降法により確認した
写真である。
胞表面上に存在するＬＨＫを免疫沈降法により確認した
写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/02 Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (72)発明者 渡辺 守 東京都新宿区信濃町35 慶応義塾大学 慶 應がんセンター内 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA45 DA02 GA03 GA18 GA23 HA15 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01 DA14 4C084 AA02 AA07 BA44 DA39 ZB212 ZB262 4C085 AA13 AA14 BB01 BB11 DD61 4H045 AA10 AA11 AA30 BA53 CA41 DA76 DA86 EA28 EA51 FA72 GA15 GA26 HA06
Claims (7)
- 【請求項１】 下記性質イ）、ロ）を有する糖蛋白抗
原、 イ）インターフェロン−γ刺激の有無にかかわらず、ヒ
ト大腸癌細胞株ｃｏｌｏ２０５細胞の細胞膜上に強く発
現している、 ロ）ヒト正常組織では主に上皮細胞に存在する、を認識
する抗体であって、 １）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持ち、 ２）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、 ３）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこし、 ４）大腸癌細胞株であるＨＴ−２９、Ｃａｃｏ−２、Ａ
ＣＭ、胃癌細胞株であるＫＡＴＯ−ＩＩＩ、乳癌細胞株
であるＭＣＦ−７、Ｂ ｃｅｌｌリンパ腫細胞であるＲ
ａｊｉ細胞との反応性があり、 ５）該抗体との免疫学的反応後のｃｏｌｏ２０５細胞か
ら、Ｆａｓ抗原を消失せしめる、癌細胞のアポトーシス
誘発能を保持した抗体。 - 【請求項２】 請求項１の抗体により免疫学的に認識さ
れるポリペプチド。 - 【請求項３】 請求項２のポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチド。 - 【請求項４】 請求項２のポリペプチドおよび／または
請求項３のポリヌクレオチドとの反応性をもち、少なく
とも請求項１の抗体と生物学的評価において同等の下記
の機能、 １）ｃｏｌｏ２０５細胞に対し濃度依存的に増殖抑制作
用を持ち、 ２）ｃｏｌｏ２０５細胞のＤＮＡ断片化を誘発し、 ３）ｃｏｌｏ２０５細胞の核断片化・濃縮化をおこす、
を担持した化合物を同定する方法。 - 【請求項５】 請求項４の方法で、同定される化合物。
- 【請求項６】 請求項１〜３および５に記載の物質のう
ち少なくとも一つを含有することを特徴とする癌の予防
および治療に有用な医薬組成物。 - 【請求項７】 請求項１の抗体および／または請求項２
のポリペプチドおよび／または請求項３のポリヌクレオ
チドを利用することを特徴とする癌診断手段。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20038699A JP2001031700A (ja) | 1999-07-14 | 1999-07-14 | 新規抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20038699A JP2001031700A (ja) | 1999-07-14 | 1999-07-14 | 新規抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001031700A true JP2001031700A (ja) | 2001-02-06 |
Family
ID=16423469
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20038699A Withdrawn JP2001031700A (ja) | 1999-07-14 | 1999-07-14 | 新規抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001031700A (ja) |
-
1999
- 1999-07-14 JP JP20038699A patent/JP2001031700A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20061003 |