JP2000514047A

JP2000514047A - 催吐の処置用医薬の製造のためのタキキニンアンタゴニストの使用

Info

Publication number: JP2000514047A
Application number: JP10503257A
Authority: JP
Inventors: ホーウエル，デイビツド・クリストフアー; ヒユーズ，ジヨン; プリチヤード，マーテイン・クライブ; シン，ラクビール
Original assignee: ワーナー―ランバート・コンパニー
Priority date: 1996-06-26
Filing date: 1997-06-18
Publication date: 2000-10-24
Also published as: EP0912173A1; US5998435A; AU3571897A; WO1997049393A1; ZA975637B; NZ333062A; CO4950543A1; CA2255651A1; AU714542B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、〔Ｒ，Ｓ〕−〔２−(１Ｈ−インドール−３−イル)−１−メチル−１−（１−フェニル−エチルカルバモイル）−エチル〕−カルバミン酸ベンゾフラン−２−イルメチルエステルと命名される化合物を投与することからなる催吐の処置方法である。

Description

【発明の詳細な説明】催吐の処置用医薬の製造のためのタキキニンアンタゴニストの使用〔発明の背景〕嘔気および嘔吐は、様々な状態たとえば動揺病、痛みおよび多くの胃腸障害に伴う苦しい症状である。催吐はまた、多くの臨床的状態たとえば癌の化学療法後および全身麻酔下の手術後にも起こる。患者のクォリテフィー・オブ・ライフに対するこれらの症状の衝撃は深刻で、癌の化学療法の場合にはコンプライアンスに重大な影響を与えるほどである。５−HT₃受容体アンタゴニストの出現は抗癌剤化学療法によって誘発される催嘔吐の処置に変化を生じたものの、それらの主要な作用は急性相の反応に限定される。抗癌剤は胃腸における作用、とくに腸管の求心性迷走神経に対する反応を活性化する５−HTの放出を介して急性の嘔吐を誘発する。これは５−HT₃アンタゴニストが比較的限定された制吐プロフィールを有するとの観察と完全に一致する。すなわち、これらの化合物は、癌の化学療法後、手術後、ムスカリン受容体アゴニスト、およびエリスロマイシン投与後に観察される遅延型の催吐に対しては効果が劣る。 NK₁受容体アンタゴニストは広い制吐スペクトルおよび異なる作用部位を有し、催吐の原因になる広範囲の化合物および状態に対し有効な制吐療法としてこれまでに最良の成績を提供している(米国特許第5,360,820号)。催吐の処置とは、予防と確立された症状の緩和を包含することを意図している。催吐の処置には、嘔気、吐気および嘔吐の処置を包含する。催吐には急性の催吐、遅延型催吐、および先行型の催吐が包含される。たとえば催吐は癌化学療法剤、たとえばアルキル化剤たとえばシクロホスファミド、カルムスチン、ロムスチンおよびクロラムブシル；細胞毒性抗生物質たとえばダクチノマイシン、ドキソルビシン、マイトマイシン−Ｃおよびブレオマイシン；代謝拮抗薬たとえばシタラビン、メトトレキセートおよび５−フルオロウラシル；ビンカアルカロイドたとえばエトポシド、ビンブラスチンおよびビンクリスチン；ならびに他の抗癌剤たとえばシスプラチン、ダカルバジン、プロカルバジンおよびヒドロキシ尿素；およびそれらの組合せからなる薬物；放射線宿酔；放射線療法たとえば癌の処置における胸廓または腹部の照射；毒物；トキシンたとえば代謝性障害または感染たとえば胃炎、妊娠によって生じるトキシン；前庭障害たとえば動揺病；術後疾患；胃腸管閉鎖症；胃腸管の運動性低下、内臓痛たとえば心筋梗塞または腹膜炎；偏頭痛；頭蓋間圧の上昇；頭蓋間圧の低下（たとえば、高山病）；ならびにオピオイド鎮痛剤たとえばモルヒネによって誘発される。〔発明の概要〕本発明は、〔Ｒ，Ｓ〕−〔２−（1Ｈ−インドール−３−イル）−１−メチル −１−（１−フェニル−エチルカルバモイル）−エチル〕−カルバミン酸ベンゾフラン−２−イルメチルエステルと命名される化合物（以下、本化合物）の治療的有効量を哺乳動物に投与することからなる催吐の処置方法である。この方法は、急性催吐、遅延型催吐、癌化学療法剤によって誘発される催吐、ならびに急性相および遅延相時の両者でシスプラチンによって誘発される催吐に対して使用される。本化合物はまた、動揺病の処置、ならびに術後嘔気および嘔吐または手術後の臨床的状態に有用である。〔図面の簡単な説明〕図１：フェレットにおいてシスプラチンによって誘発される急性催吐に対する本化合物の作用。シスプラチン(10mg／kg、腹腔内)を本化合物（腹腔内）またはビヒクル（PEG−200）の１時間前に投与した。結果は、１群あたり４匹の動物で最初の４時間の観察期間における嘔吐および催吐の平均数として示す（縦線はSEMを示す）。^*Ｐ＜0.05、^**Ｐ＜0.01、^***Ｐ＜0.001、ビヒクル処置対照群に比較して有意差がある。図２：フェレットにおけるシスプラチン誘発急性および遅延型催吐に対する本化合物の作用。シスプラチン（５mg／kg）を腹腔内に投与した。本化合物（10mg ／kg、腹腔内、１日３回）、オンダンセトロン（１mg／kg、腹腔内、１日３回）もしくはPEG−200を１日３回腹腔内に投与した（最初の用量はシスプラチンの１時間前に投与した）。結果は、１群あたり６匹の動物における嘔吐および催吐の平均数として示す（縦線はSEMを示す）。^**Ｐ＜〔0.005、^***Ｐ＜0.0001、ビヒクル処置対照群に比較して有意差がある。図２ａ：第１日（急性催吐０〜３時間）図２ｂ：第１日（遅延型催吐の開始３〜24時間）図２ｃ：第２日（24〜48時間）図２ｄ：第３日（48〜72時間）図３：ジャービルにおける〔Sar⁹、Met(O₂)¹¹〕−サブスタンスＰ−誘発フットタッピング（後肢を踏み鳴らす行動）に対する本化合物の作用。上のパネル（図３ａ）は、〔Sar⁹、Met(O₂）¹¹〕−サブスタンスＰ投与（nM、脳内）後の用量反応を示す。フットタッピングの持続（秒）を、動物の立直り反射の回復直後から５分間記録した。下のパネル（図３ｂ）は、〔Sar⁹、Met(O₂)¹¹〕−サブスタンスＰ(30nmol／動物)投与前30分に皮下投与した場合の本化合物のこの反応に対する作用を示す。結果は１群８〜10匹の動物の平均で示す（縦線はSEMである）。^*Ｐ＜0.05、^**Ｐ＜0.01、ビヒクル (Veh)処置対照群に比較して有意差がある。図４：フェレットにおいてアポモルフィンによって誘発された催吐に対する本化合物の作用。本化合物はアポモルフィン（0.25mg／kg皮下）投与１時間前に腹腔内にmg／kgの用量を投与した。動物は以後１時間観察した。結果は１群９〜14 匹の動物の平均で示す(縦線はSEMである)。^*Ｐ＜0.05、ビヒクル処置対照群に比較して有意差がある（ANOVA、Dunnettのｔ−試験による）図４ａ、４ｂおよび４ｃはそれぞれ、嘔吐、吐気およびエピソードである。図５：フェレットにおける硫酸銅誘発催吐に対する本化合物の作用。本化合物は硫酸銅(12.5mg/kg経口)投与１時間前に腹腔内にmg／kgの用量を投与した。動物は以後２時間にわたり観察した。結果は、１群８〜14匹の動物の平均で示す（縦線はSEMである）。^*Ｐ＜0.05、^**Ｐ＜0.01、ビヒクル処置対照群に比較して有意差がある（ANOVA、Dunnettのt−試験による）。図５ａ、５ｂおよび５ｃはそれぞれ、嘔吐、催吐およびエピソードである。〔詳細な説明〕〔２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−メチル−１−(１−フェニル− エチルカルバモイル)−エチル〕−カルバミン酸ベンゾフラン−２−イルメチルエステル(以下、本化合物)はヒトNK₁受容体における選択的な、高親和性リガンドである。それは、ヒト細胞系、モルモット、イヌ、フェレットおよびハムスターの脳に存在するNK₁認識部位にナノモルの親和性で結合する。それは、化学療法および他の催吐誘発物質によって誘発される催吐（嘔気および嘔吐）の処置に有用なことが見出されたアンタゴニストである。本化合物は優れた薬物動態プロフィールを有し、それは容易に中枢神経系に浸透する。本化合物は良好な作用持続を有するので、１日２回の投与が可能である。本化合物は優れた生物学的利用能を示し、したがって経口的に与えることができる。これは、在宅で薬物の静脈内投与を受けられない患者に有利である。本化合物は以下の化学構造を有する。本化合物、その製造のための合成操作、およびある種の用途は、1997年１月14 日付で付与された米国特許第5、594、022号に教示されている。この特許は引用により、本明細書中に挿入する。フェレットにおけるシスプラチン誘発催嘔吐に対する本化合物の効果最近の臨床データによれば、化学療法によって誘発される催吐には２つの異なる相の存在が示唆されている。急性(第１日)の催吐は５−HT₃受容体アンタゴニストによる拮抗に感受性であり、それに続くまたは遅延型の５−HT₃受容体アンタゴニストによる制御にさらに大きな抵抗性を示す反応とは区別される。選択的 NK₁受容体アンタゴニストである本化合物の抗催吐活性の可能性をシスプラチンに対する急性および遅延型催吐のフェレットモデルにおいて評価した。急性相成熟雄性アルビノFitchフェレット(体重＞１kg)個別のケージに入れて、飼料（SDS飼料“Ｃ”、Special Diet Services Ltd、Essex、UK）は自由に摂取させた。試験の開始30分前に、フェレットに市販の缶詰のキャットフッド100ｇを与えた。高用量のシスプラスチン(10mg／kg)の投与１時間前に本化合物（PEG−200ビヒクル中）を用量依存的に(３〜30mg／kg)腹腔内投与し、４時間にわたり嘔吐および催吐の頻度の低下を観察し、最小有効量３mg／kgを得た。30mg／kgでは、本化合物は催吐反応に対して完全な拮抗を生じた(図１)。遅延相フェレットにシスプラチン５mg／kgを腹腔内に単回用量として投与すると急性（０〜３時間）および遅延型（３〜72時間）催吐反応が誘発される（図２）。本化合物（10mg／kg）またはオンダンセトロン（１mg／kg）の腹腔内１日３回投与（最初の投与はシスプラチン投与の１時間前に与える）は、催吐反応の最初の３時間の間の吐気および嘔吐を完全に遮断した（図２）。本化合物は３日間に観察された遅延型の催吐も完全に遮断した（図２）。これに反して、５−HT₃受容体アンタゴニストは、遅延型反応に対しては、はるかに低い活性しか示さなかった（図２）。それは遅延型反応の開始時には全く作用を示さず、第２日および第３日にも約20％〜50％の拮抗を生じたのみであった（図２）。これらのデータは、本化合物がオンダンセトロンに比較して改良された制吐プロフィールを有することを示している。本化合物はフェレットにおける急性および遅延相の両者のシスプラチン誘発催吐を低下させることができる。本化合物は、ジャービルにおいて中枢性NK₁受容体によって仲介されるフットタッピング反応およびラットにおける脳内濃度の測定試験によって明らかなように容易にCNSに浸透する。ジャービルにおける〔Sar⁹、Met(O₂)¹¹〕−サブスタンスＰ−誘発後肢フットタッピング（肢を踏み鳴らす行動）本化合物が中枢性NK₁受容体によって仲介されるフットタッピング反応を遮断する能力をジャービルにおいて調べ、本化合物が全身投与後に脳内に浸透できることがわかった。ジャービルはイソフルランで麻酔し、切開して頭蓋を暴露させた。〔Sar⁹、Met(O₂)¹¹〕−サブスタンスＰはカフを施した27−ゲージ針のブレグマ下方4.5mmの深さへの垂直挿入によって投与した。動物は個々に観察箱に入れ、動物の立直り反射の回復直後から５分間、後肢のフットタッピング記録した。NK₁受容体アゴニスト、〔Sar⁹、Met(O₂)¹¹〕−サブスタンスＰの脳内投与は後肢フットタッピングを用量依存的に（１〜100nmol／動物）増大させ、MEDは10nm olを示した（図３）。亜最大用量の〔Sar⁹、Met(O₂)¹¹〕−サブスタンスＰ30nmo lを拮抗試験に選択した。試験の結果は、〔Sar₉、Met(O₂)¹¹〕−サブスタンスＰ投与前30分におけるCP ．-99、994の全身投与が用量依存的にフットタッピング反応を阻害することを示した。このNK₁受容体アンタゴニストは容易にCNS内に浸透することが明らかにされた。これに反し、ジメチルアミノ−酢酸２−〔２−(ベンゾフラン−２−イルメトキシカルボニルアミノ)−３−（1Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロピオニルアミノ〕−２−フェニルエチルエステル（化合物２）（１〜100mg ／kg）を皮下投与した場合は、この反応は遮断されなかった。これは化合物２がフェレットにおけるシスプラチン誘発催吐を遮断できないことと一致する。しかしながら化合物２は脳内投与後には用量依存的にフットタッピング反応に拮抗し、MED10μg／動物を示した。これらのデータはジャービルのフットタッピング反応はNK₁受容体アンタゴニストのCNS作用の測定に有用なモデルであることを示唆している。本化合物のアポモルフィンおよび硫酸銅誘発催吐に対する効果をフェレットにおいて試験した。本化合物はPEG−200中で腹腔内に投与した。このビヒクル１ml ／kg注射容量は催吐反応を生じることが見出された。ビヒクル誘発催吐反応は本化合物（10mg／kg；１ml／kg）によって完全に拮抗された。さらにこの試験では、PEG-200の注射容量を0.5ml／kgに低下させるとビヒクルの催吐反応は有意に低下することが見出された。したがって、本化合物の用量反応試験はこの注射容量を用いて実施した。拮抗試験においては、本化合物をアポモルフィン(0.5mg／kg、皮下)または硫酸銅（12.5mg／kg、経口）の投与前１時間に投与した。動物はそれぞれ１時間または２時間観察した。本化合物(１〜30mg／kg)は中枢性(アポモルフィン)および末梢性（硫酸銅）刺激によって誘発される催吐をMED 30mg／kgで用量依存的に低下させた（図４および５）。これらのデータは、本化合物がオンダンセトロンに比較して、より優れた制吐プロフィールを有することを示している。中枢性および末梢性刺激によって誘発される催吐の両者を遮断するその能力により明らかなように、本化合物は広いスペクトルの制吐活性を有することが期待される。要約すると、本化合物は制吐活性を有する。それは用量依存的に（３〜30mg／ kg）腹腔内）シスプラチン（10mg／kg、腹腔内）によって誘発されるフェレットにおける嘔吐および吐気の頻度をブロックし、最小有効量３mg／kgを示す。最高用量では、それは催吐反応に完全に拮抗する。フットタッピングのモデルにおける本化合物（PEG−200中、10mg／kg、皮下）の持続試験からは、フットタッピングへの拮抗のピークは0.5時間前処置時に生じることが明らかにされた。用量反応分析はこの前処置時に実施し、本化合物はその反応に用量依存的に(１〜100mg／kg、皮下)拮抗し、MED10mg／kgを示した(図３)。これは、本化合物が全身投与後に脳に浸透できることを示している。本化合物はラットにおいて優れた薬物動態プロフィールを発揮する。ナノサスペンジョンおよびPEG／EtOH／水ビヒクルにおける絶対経口生物学的利用性は47 ％および49％であった。本化合物の経口生物学的利用性はラットにおいて、PEG−400／EtOH／水、0.5 ％メチルセルロースおよびナノシステムビヒクルを用いて調べた。薬物は摂食により経口でまたは頸静脈を介して静脈内に投与した。血液サンプルは頸静脈カニューレから薬物投与前および投与後24時間まで様々な時点でヘパリン含有シリンジ中に採取した。遠心分離によって血漿サンプルを得て、分析まで−70℃に保存した。血漿サンプルは、確立されている液体クロマトグラフィー法を用いて本化合物について分析した。本化合物を３種のビヒクル中で単回投与したのちの平均（±SD）本化合物薬物動態パラメーターのまとめを表１に示す。ナノサスペンジョン製剤からの本化合物の絶対経口生物学的利用能は47（±13）％で、この結果は、メチルセルロース中における本化合物の慣用の懸濁液に比べて10倍大きく、 PEG−400／EtOH／水中における本化合物の溶液の場合に等しかった。 HPLC アッセイを用いるラットでの脳浸透性の測定本化合物の脳浸透性は、ラットにおいてHPLCアッセイを用いて評価した。本化合物は尾静脈から静脈内(4.5mg／kg)にまたはPEG−400／EtOH／水中溶液として摂食により経口的に（21.4mg／kg）投与した。各時点でそれぞれ３匹のラットを使用した。血液および脳のサンプリングの前に、ラットはエーテルで麻酔した。血液サンプルは心臓穿刺によって収集した。通常生理食塩溶液を心臓から灌流したのち全脳を収集した。血漿および脳サンプルは液体クロマトグラフィーによる蛍光検出法を用いて分析した。結果は、静脈内投与後の本化合物の脳への浸透が迅速であることを示している（表２）。脳については、本化合物の濃度は静脈内投与後15分の最初のサンプリング時(1400ng／g)において(表２)および経口投与後２時間に(表３)最高であった。これらの時点における脳内総量はそれぞれ2.5 μｇおよび0.04μｇであった(表２および３)。静脈内投与後の脳対血漿の濃度比は15分後に最高で（1.8）、ついで低下して以後の投与後時間では約0.5の定常値を示した（表２）。広範囲の受容体結合アッセイが、本化合物はタキキニンNK₁受容体に対して高度な選択性を有することを示した。副作用の傾向試験では、本化合物はきわめて高用量（100mg／kg、皮下）までハムスターまたはマウスにおいて、鎮静または運動失調を誘発することはなかった。それはまた、麻酔モルモットの血圧および心拍数に影響せず（0.1〜1.0mg／ kg、静脈内）、またラットにおいて膵臓アミラーゼの分泌を刺激しなかった（0. 01〜10mg／kg、静脈内）。本発明の化合物から医薬組成物を調製するためには、不活性の医薬的に許容される担体は固体または液体のいずれであってもよい。固体の形態の製剤には散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシュー剤および坐剤が包含される。固体担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤または錠剤崩壊剤としても作用できる１種または２種以上の物質であってよく、それはまた被包材料であってもよい。散剤では、担体は微粉末化した固体であり、これを微粉末化した活性成分と混合する。錠剤では、活性成分を、必要な結合作用を有する担体と適当な比率で混合し、これを所望の形状およびサイズに圧縮する。坐剤の調製のためには、低融点ワックスたとえば脂肪酸グリセリドとココア脂の混合物をまず融解し、その中に活性成分をたとえば撹拌によって分散させる。融解した均一な混合物を慣用のサイズの型に注ぎ、放冷して固化させる。散剤および錠剤は好ましくは５％〜約70％の活性成分を含有する。適当な担体は炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、乳糖、蔗糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココア脂等である。本発明の化合物には、本化合物の溶媒和化合物、水和物、医薬的に許容される塩および多形化合物（結晶格子の状態が異なる）が包含される。シクロデキストリンは医薬製剤中の適当な包含物の１つである。「製剤」の語は担体としての被包材料と活性成分の組成物を包含し、活性成分（他の担体を含有または含有しない）がその担体に囲まれて、それと合体されたカプセル剤を提供する場合を含むことを企画している。同様にカシェー剤も包含される。錠剤、散剤、カシェー剤、およびカプセル剤は経口投与に適当な固体剤形として使用することができる。静脈内投与に適当な液体製剤には、溶液、懸濁液および乳化液が包含される。非経口投与に適した液体製剤の例としては、活性成分の滅菌水溶液または水−プロピレングリコール溶液を挙げることができる。液体製剤は含水ポリエチレングリコール溶液の溶液で製剤化することもできる。経口投与用の水溶液は、活性成分を適当な溶媒に溶解し、適当な着色剤、着香剤、安定化剤、および増粘剤を所望により添加する。経口投与に使用するための水性懸濁液は微粉末化した活性成分を、粘稠な物質、たとえば天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、および医薬製剤技術として既知の他の懸濁剤とともに水中に分散させることによって製造できる。医薬製剤は好ましくは単位剤形である。このような形態では、製剤は適当量の活性成分を含有する単位用量に分割される。単位剤形はパッケージされた製剤であり、パッケージは別々の量の製剤たとえば小包装された錠剤、カプセル剤およびバイアルまたはアンプル中の散剤を含有している。単位剤形はまたカプセル剤、カシュー剤、または錠剤自体であってよいし、これらのパッケージされた形態の適当な任意の数であってもよい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者プリチヤード，マーテイン・クライブイギリス国ケンブリツジシアーピー・イー17 ４ダブリユー・ビー．ハンテイングドン．セントアイヴス．ベリークロウス９．ザメイプルズ (72)発明者シン，ラクビールイギリス国ケンブリツジシアーシー・ビー６５エス・ピー．ハデンハム．ヒントンビユー23

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物の催吐の処置方法において、〔Ｒ，Ｓ〕−〔２−（1Ｈ−インドール−３−イル）−１−メチル−１−（１−フェニル−エチルカルバモイル）−エチル〕−カルバミン酸ベンゾフラン−２−イルメチルエステルと命名される化合物の治療的有効量を上記哺乳動物に投与することからなる方法。２．催吐が急性である請求項１記載の方法。３．催吐が遅延型である請求項１記載の方法。４．催吐が癌化学療法剤によって誘発される請求項１記載の方法。５．催吐が急性相および遅延相時の両者でシスプラチンによって誘発される請求項１記載の方法。６．哺乳動物の動揺病の処置方法において、〔Ｒ，Ｓ〕−〔２−（1Ｈ−インドール−３−イル）−１−メチル−１−（１−フェニル−エチルカルバモイル）− エチル〕−カルバミン酸ベンゾフラン−２−イルメチルエステルと命名される化合物の治療的有効量を上記哺乳動物に投与することからなる方法。７．哺乳動物の術後嘔気および嘔吐の処置方法において、〔Ｒ，Ｓ〕−〔２−（ 1Ｈ−インドール−３−イル）−１−メチル−１−(１−フェニル−エチルカルバモイル)−エチル〕−カルバミン酸ベンゾフラン−２−イルメチルエステルと命名される化合物の治療的有効量を上記哺乳動物に投与することからなる方法。