【発明の詳細な説明】
血液調節化合物
発明の分野
本発明は、血液調節活性を有する化合物であって、造血を刺激し、ウイルス、
真菌および細菌感染症の治療に用いることができる新規な化合物に関する。
発明の背景
造血系は終生に及ぶ細胞再生プロセスであり、このプロセスにより特定の幹細
胞集団が少なくとも９種の異なる細胞系統（赤血球、血小板、好酸球、好塩基球
、好中球、単球／マクロファージ、破骨細胞およびリンパ球）のより大きな集団
の成熟分化血液細胞（Ｄexter ＴＭ．Ｓtem cells in normal growth and disea
se．Ｂr．Ｍed.Ｊ．1987;195:1192-1194）を生じさせる(Ｍetcalf Ｄ.，Ｔhe Ｍ
olecular Ｃontrol of Ｂlood Ｃells.1988;Ｈarvard Ｕniversity Ｐress，Ｃa
mbridge，ＭＡ)。さらに、幹細胞は、最終的に、細胞毒性物質で治療した後また
は骨髄移植後の骨髄の再生に関与している。
大部分の標準的な抗腫瘍薬の用量−限定の（dose−limiting）主な毒性は骨髄
抑制に関連付けられ、これが重度であるかまたは長引くと、生命を脅かす感染性
および出血性合併症を引き起こしうる。骨髄抑制は予測可能であり、単一薬剤の
Ｉ相試験細胞毒性化合物の５０％以上で用量−限定的であると報告されている(
Ｍerrouche Ｙ.，Ｃatimel Ｇ.，Ｃlavel Ｍ.，Ｈematopoietic growth factors
and chemoprotectants; should we move toward a two-step process for phas
e Ｉ chnical trails in oncology? Ａnn Ｏncol 1993;4;471-474)。感染の危険
性は、好中球減少症の重篤度および期間により測定される骨髄抑制の程度に直接
関係する(Ｂrody ＧＰ，Ｂuckley Ｍ，Ｓathe ＹＳ，Ｆreireich ＥＪ．Ｑuanti
tative relationship between circulating leukocytes and infections with a
cute leukemia．Ａnn Ｉn Ｍed 1965;64:328-334)。
造血作用の調節は、初期多機能幹細胞および成熟循環エフェクター細胞を含む
、
造血カスケードの種々の段階での種々のサイトカインおよび増殖因子の相互作用
に影響を与える。これらの調節分子として、顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳ
Ｆ)、顆粒球−マクロファージ刺激因子(ＧＭ−ＣＳＧ)、マクロファージ−コロ
ニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）および宿主防御において主要な役割を果たす重複す
る、付加的かつ相乗的作用を有する種々のインターロイキンが挙げられる。機構
的には、これは、顆粒球およびマクロファージの産生の向上、ならびにエフェク
ター細胞機能の活性化により達成される(Ｍoore ＭＡＳ．Ｈemopoietic growth
factor interactions: in vitro and in vivo preclinical evaluation．Ｃance
r Ｓurveys 1990;9:7-80)。これらの活性を調整することで、細菌、ウイルスお
よび真菌感染症を克服するのに必要な最適宿主防御が支持される。
好中球減少症の重篤度および骨髄毒性を予防または軽減させる方法として、造
血増殖因子および／または他の造血サイトカインの使用が挙げられる。このよう
な治療法は、抗腫瘍薬の効能を改善させるかもしれない細胞毒性薬の用量を増加
させる可能性を付与し、抗腫瘍薬の使用に伴う罹患性を減少させるため、該治療
法は一般的に行われるようになってきている(Ｓteward ＷＰ.，Ｇranulocyte an
d granulocyte-macrophage colony stimulating factors，Ｌancet 1993;342:15
3-157)。臨床研究により、Ｇ−、ＧＭ−および／またはＭ−ＣＳＦが、細胞毒性
化学療法を受けている悪性腫瘍の患者または骨髄移植後の感染の危険性が高い患
者において好中球減少症の期間を減少させ、骨髄性回復を促進し、好中球減少症
に伴う感染症および他の感染性合併症を減少させうることがわかった(Ｓteward
ＷＰ.，Ｇranulocyte and granulocyte-macrophage colony stimulating factor
s，Ｌancet 1993;342:153-157およびＭunn ＤＨ，Ｃheung ＮＫＶ．Ｐreclinica
l studies of macrophage colony-stimulating factor．Ｓemin Ｏncol．1992;1
9:395-407)。
本発明者らは骨髄造血細胞に対して刺激効果を有し、ウイルス、真菌および細
菌病の治療および予防において有用である、ある種の新規な化合物を見いだした
。
発明の要約
本発明は、血液調節活性を有し、造血作用の刺激ならびに細菌、ウイルスおよ
び真菌病の予防および治療に用いることができる、後記に式（Ｉ）で表す、化合
物を含む。
これらの化合物は、種々の臨床的状況、例えば手術により誘発された骨髄抑制
、ＡＩＤＳ、ＡＲＤＳ、先天性脊髄形成異常、骨髄および臓器移植に由来の細胞
数の減少した患者における白血球の回復；白血球減少症の患者の感染症からの防
御；重症の火傷患者の治療；いくつかの細胞周期特異性抗ウイルス剤について観
察される脊髄抑制の軽減；骨髄移植を受けた患者、特に移植片対宿主疾患の患者
における感染症の治療、結核の治療およびヒトおよび動物における原因不明の熱
病の治療において有用である。化合物はさらに免疫抑制および「正常」対象の両
方におけるウイルス、真菌および細菌感染症、特にカンジダおよびヘルペスの治
療および予防においても有用である。
これらの化合物はさらに同時係属の米国出願番号０７／７９９４６５および米
国特許第４４９９０８１号（出典明示により本発明の一部とする）のモノマーと
組み合わせて用いて、骨髄細胞における活性の高低の交互のピークを得、造血の
自然の約２４時間周期のリズムを促進できる。このように、細胞増殖抑制療法を
低骨髄活性の期間に適用することができ、かくして骨髄損傷の危険性が軽減され
、一方で次の活性のピークにより再生が促進されるであろう。
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物と医薬上許容される担体とを含んでなる医
薬組成物を提供する。
本発明はさらに、ヒトを含む動物の骨髄造血系の刺激法であって、これを必要
とする動物に、有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる方法を提供す
る。
本発明はまた、免疫抑制されたおよび正常なヒトを含む動物におけるウイルス
、真菌および細菌感染症の予防および治療法であって、これを必要とする動物に
有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる方法を提供する。
本発明はまた、免疫抑制されたおよび正常なヒトを含む動物における敗血症の
予防および治療法であって、これを必要とする動物に有効量の式（Ｉ）の化合物
を投与することからなる方法を提供する。発明の詳細な記載
本発明の化合物は、構造式（Ｉ）：
｛式中、
Ａ1はＡ2と等しく、Ｚ−(ＣＨ2)k−(ＮＲ''')qであり；
Ｚは、環中に４個までのヘテロ原子Ｎ、Ｏ、Ｓを含有する４ないし１０員単環
または二環式複素環系であり（ここに、少なくとも１個のヘテロ原子はＮであり
、環は１または２個のＣ1-4アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ1-4アルコキシ、
(ＣＨ2)mＲ4、オキソ、オキシム、Ｏ−Ｃ1-4アルキルオキシム、ヒドロキシ、Ｎ
(Ｒ3)2、アシルアミノまたはアミノアシル基で置換されているかまたは置換され
ておらず、８、９、１０員単環系は除外する）；
Ｒ'およびＲ"は同一で、水素、Ｃ1-4アルキルＣ(Ｏ)Ｒ4、Ｃ1-4アルキルであ
るかまたはＲ1およびＲ2は、１または２個のＣ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、
Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、ＯＨ、またはＮ(Ｒ3)2で所望により置換されていてもよい
ベンジルであり；
ｋは０ないし４の整数であり；
Ｒ'''は水素、Ｃ1-4アルキルまたはＣ1-4アルキルカルボン酸であり；
ｑは０ないし１の整数であり；
Ｑは
［式中、
Ｂ1はＢ2に等しく、ハロゲン、−(ＣＨ2)m−ＣＮ、−(ＣＨ2)m+1−Ｒ2、−(Ｃ
Ｈ2)m−Ｒ3、−(ＣＨ2)m−ＣＯＲ2または−(ＣＨ2)m−ＣＯＲ3
（ここで、Ｒ2は−ＯＲ3、−ＮＲ3 2、−ＳＲ3であり；
Ｒ3は独立して水素、Ｃ1-4アルキルまたはベンジルであり；
ｍは０ないし４の整数である）であり；
Ｃ1はＣ2に等しく、ハロゲン、−(ＣＨ2)n−ＣＮ、−(ＣＨ2)n+1−Ｒ4、−(Ｃ
Ｈ2)n−Ｒ3、−(ＣＨ2)n−ＣＯＲ4または−(ＣＨ2)n−ＣＯＲ5
（ここで、Ｒ4は独立して−ＯＲ3、−ＮＲ3 2、−ＳＲ3であり；
ｎは０ないし４の整数である）であり；
Ｄは−(ＣＨ2)x−Ｅ−(ＣＨ2)y−
（ここで、Ｅは単結合、−Ｃ＝Ｃ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、
ｘおよびｙは、独立して、０ないし５の整数である；
ただし、Ｅが−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−であるとき、
ｘおよびｙは０ではない）；
ただし、Ｂ1はＣ1と同一ではなく、Ｂ2はＣ2と同一ではない］基である｝
で示される化合物またはその医薬上許容される塩である。
前記の式（Ｉ）におけるＺは、所望により置換されていてもよいピロリル、イ
ソピロリル、ピラゾリル、イソイミダゾリル、トリアゾリル、イソキサゾリル、
オキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、
ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピロリジニル、ピペラジニル、トリ
アジニル、モルホリニル、インドリル、インドレニニル、イソベンザゾリル、ピ
リンジニル、イソインダゾリル、インドキサジニル、ベンズオキサゾリル、キノ
リニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、ピリ
ドピリジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、キノキ
サリニル、インドリニル、ピロリドニル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、イ
ミダゾリニル、ピペリジル、テトラゾリル、キヌクリジニル、アゼチジニル、ま
たはプリニルを意味する。
好ましい化合物は、Ｚが所望により置換されていてもよいピリジニル、ピリミ
ジニル、ピラジニル、ピリダジニル、キノリニル、テトラヒドロキノリニル、ア
ゼチジニルまたはピロリジニルである化合物である。
より好ましい化合物は、Ｚが所望により置換されていてもよい２−ピリジニル
、２−ピリミジニル、２−ピラジニル、２−ピロリドン−５−イルまたは２−ピ
ロリジニルである化合物である。
Ｚの置換基として可能なものは、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4ア
ルコキシ−Ｃ1-4アルキル、オキソ、オキシム、Ｏ−Ｃ1-4アルキルオキシム、ヒ
ドロキシ、アミノ、Ｃ1-4アルキルアミノ、ジ−Ｃ1-4アルキルアミノ、アシルア
ミノまたはアミノアシル基である。
Ｚの好ましい置換基は、メチル、エチル、メトキシ、メトキシメチル、オキソ
、オキシム、ヒドロキシ、アミノ、エチルアミノまたはジメチルアミノである。
好ましいＲ'およびＲ"は、水素、メチルおよびエチルである。
アルキル基は、直鎖でも分岐鎖でもよい。
本発明の化合物は１またはそれ以上の不斉炭素原子を含有し、ラセミおよび光
学活性な形態で存在してもよい。これらのすべての化合物およびジアステレオマ
ーは本発明の範囲内にあると考えられる。
本発明の好ましい化合物は：
調製法
Ｅが単結合で、Ｒ'、Ｒ"、Ｒ'''、Ｃ1、Ｃ2、Ｂ1、Ｂ2、Ａ1、Ａ2、Ｚ、ｋ、
ｍ、ｎ、ｘおよびｙが式（Ｉ）において定義したとおりである式（Ｉ）の化合物
は、スキーム１に記載したのと類似した方法により調製される。
スキーム１ ｃ）ＥＤＣ、ＤＭＦ；ｄ）Ｈ2、１０％Ｐｄ／Ｃ、メタノール
２種の適当な保護されたアミノ酸（スキーム１における１など）を適当な溶媒
（ピリジン／メタノールなど）中、電気化学法を用いて結合する。スキーム１に
おける２のアミノ保護基を標準的な酸性条件（４ＮＨＣｌ／ジオキサンなど）下
で除去し、ついで、得られる塩酸塩を適当な非プロトン性極性溶媒（ＤＭＦなど
）中、ＥＤＣなどの活性化剤を用いて、適当な複素環酸（スキーム１における４
など）でアシル化する。続けて、水素および適当な触媒（１０％Ｐｄ／Ｃなど）
を用い、適当な溶媒（メタノールなど）中、残りの保護基を除去し、スキーム１
における６の生成物を得る。
Ｅ、Ｒ'、Ｒ"、Ｒ'''、Ｃ1、Ｃ2、Ｂ1、Ｂ2、Ａ1、Ａ2、Ｚ、ｋ、ｍ、ｎ、ｘ
およびｙが式（Ｉ）において定義したとおりである式（Ｉ）の化合物は、スキー
ム２に記載したのと類似した方法により調製される。
スキーム２ ａ）ブチルリチウム、ＴＨＦ；ｂ）濃ＨＣｌ、ジオキサン／エタノール；
ｃ）ＥＤＣ、ＤＭＦ；ｄ）ＮａＯＨ、ジオキサン／エタノール
（２Ｓ）−２，５−ジヒドロ−３，６−ジエトキシイソプロピルピラジン（ス
キーム２における１）を適当な溶媒（ＴＨＦなど）中、強い塩基（ブチルリチウ
ムなど）を用い、適当な二価求電子試薬（スキーム２における２など）と結合さ
せ、スキーム２における３を得る。適当な溶媒（ジオキサン／エタノールなど）
中、標準的な酸性条件（希ＨＣｌなど）下、加水分解および環開裂し、ジアミン
（スキーム２における４など）を得て、ついで、非プロトン性極性溶媒（ＤＭＦ
など）中、活性化剤（ＥＤＣなど）を用い、適当な複素環酸（スキーム２におけ
る５など）でビスーアシル化する。適当な溶媒（ジオキサン／エタノールなど）
中、標準的な塩基性条件（ＮａＯＨなど）下でエステルを加水分解し、スキーム
２における７の生成物を得る。
式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩をヒトおよび他の哺乳動物の
治療に用いるためには、通常、製薬慣習にしたがって医薬組成物として処方され
る。
本発明のさらに別の特徴により、活性成分として、１またはそれ以上の前記し
た式（Ｉ）の化合物またはその生理学上適合しうる塩を医薬担体または賦形剤と
合わせて含んでなる医薬組成物が提供される。本発明の組成物は、たとえば経口
、経鼻、非経口または経直腸投与に適した形態で提供してもよい。
本明細書において用いる場合、「医薬上」なる用語は、本発明の獣医学的用途を
包含する。これらのペプチドを経口投与用にカプセル化、錠剤化あるいはエマル
ジョンまたはシロップに調製する。医薬上許容される固体または液体担体を添加
して、組成物を増強したり、安定化したり、あるいは組成物の調製を容易にする
ことができる。液体担体は、シロップ、落花生油、オリーブ油、グリセリン、食
塩水および水を包含する。固体担体は、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム
二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペク
チン、アカシア、寒天またはゼラチンを包含する。担体はまた、単独でまたはワ
ックスを含む、グリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートな
どの徐放性物質を包含する。固体担体の量は変わるが、好ましくは、投与単位当
たり約２０ｍｇないし約１ｇの間である。医薬製剤は、ハードゼラチンカプセル
形の場合、粉砕、混合および充填を含む通常の調剤技術にしたがって調製される
。１または数種の活性成分を含有するカプセルは、例えば、活性成分をラクトー
スまたはソルビトールなどの不活性な担体と混合し、混合物をゼラチンカプセル
中に充填することにより調製される。臓器特異性担体系もまた用いられる。
別法として、本発明のペプチドまたはその誘導体の医薬組成物は、非経口投与
用凍結乾燥粉末の溶液として処方してもよい。粉末は、使用前に適当な希釈剤ま
たは他の医薬上許容される担体の添加により復元される。液体処方は、一般に緩
衝化された等張水溶液である。適当な希釈剤の例は、通常の等張塩溶液、標準的
５％水中デキストロースまたは緩衝酢酸ナトリウムまたはアンモニウム溶液であ
る。このような製剤は非経口投与に特に適しているが、経口投与用に用いること
もできるし、吸入用に計量吸入器またはネブライザー中にいれてもよい。ポリビ
ニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシア、ポリエチレング
リコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムなどの賦形
剤を添加するのが望ましい。
直腸投与の場合、本発明のペプチドの微粉末を、カカオ脂、グリセリン、ゼラ
チンまたはポリエチレングリコールなどの賦形剤と合し、坐剤に成型する。微粉
末はさらに油状製剤、ゲル、クリームまたはエマルションと配合してもよいし、
緩衝剤処理してもしなくてもよく、また経皮貼付剤により投与してもよい。
鼻スプレーは同様に水溶液中に処方され、エアゾル噴射剤を含むかまたは手動
圧縮手段を備えたスプレー容器中に充填する。
本発明の化合物を含有する投与単位は好ましくは０．０５−５０ｍｇ、例えば
０．０５−５ｍｇの式（Ｉ）の化合物またはその塩を含有する。
本発明のさらに別の態様によると、骨髄造血の刺激法であって、有効量の前記
した医薬組成物を対象に投与することからなる方法が提供される。
本発明の化合物を本発明にしたがって投与した場合に、許容できない毒性はな
いと考えられる。
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性を以下の試験により説明する。
基質細胞における造血相乗活性の誘発
基質細胞系Ｃ６．４由来のネズミ骨髄を１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０
中１２ウェルプレート中で増殖させる。集密に達すると、Ｃ６．４細胞を洗浄し
、培地をＦＢＳ不含の新鮮なＲＰＭＩ１６４０と交換する。ネズミＣ６．４細胞
の集密細胞層を化合物で処理する。無細胞上清を１８時間後に集める。上清をＣ
entricon−３０分子量カットオフ膜で分画する。Ｃ６．４細胞造血相乗因子（Ｈ
ＳＦ）活性をネズミＣＦＵ−Ｃ検定において測定する。
ＣＦＵ−Ｃ検定
骨髄細胞をＣ５７Ｂ１／６雌マウスから得、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６
４０中に懸濁する。骨髄細胞（７．５Ｅ＋４細胞／ｍＬ）を標準的ネズミソフト
寒天ＣＦＵ−Ｃ検定において準最適レベルのＣＦＵ＋前記からの試験Ｃ６．４細
胞３０Ｋ−Ｅ上清の希釈物とともに培養する。細胞凝集物＞５０細胞をコロニー
として計数する。計数された寒天コロニー数はＣ６．４骨髄基質系上清中に存在
するＨＳＦの量に比例する。
エフェクター細胞機能検定
雌Ｃ５７Ｂ１マウスに試験化合物を８日間毎日、経口投与する。処置または未
処置マウスからのex vivoで用いた残存腹腔浸出細胞（ＰＥＣ）を冷カルシウム
ならびにマグネシウム不含のヘパリンおよび抗生物質を補足したＤＰＢＳで最終
注射後の２−４時間以内に収穫する。付着ＰＥＭ集団を、標準化ＰＥＣ懸濁液を
マイクロタイター皿中、２時間３７℃（５％ＣＯ2）で培養し、ウェルを温緩衝
液で洗浄することにより非付着細胞を除去することにより調製する。
ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）（１００−２００ｎＭ）による
in vitro刺激に応答してエフェクター細胞または予めオプソニン処理した（オー
トローガスな血清）生シー・アルビカンス（Ｅ：Ｔ＝１：１０）により放出され
るスーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）の抑制可能なスーパーオキシドを
マイクロタイターフェリチトクロムｃ還元検定において定量化する。総体積２０
０ｕＬ／ウエル中１％ゼラチン／ＨＢＳＳおよび８０ｕＭフェリチトクロムｃの
存在下で検定を行う。還元されたチトクロムｃのｎモル数／ウェルを３７℃(５
％ＣＯ2)で１時間インキュベートした後に得た分光分析の読み（５５０ｎｍ）か
ら計算する。還元されたＳＯＤ−抑制可能なチトクロムｃの量をＳＯＤ（２００
Ｕ／ウェル）を含むウェルの包含により決定する。基線となるスーパーオキシド
放出を、刺激のない状態で測定する。実験データは対照群の百分率として表す。実施例１ （Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−オクタノイッ ク−（１，８）−ジアシッド （Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−オクタノ イック−（１，８）−ジアシッド−ジベンジリック−エステルの調製 Ｂｏｃ−Ｄ−グルタミン酸ａ−ベンジルエステル（Ｂｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ−ＯＢ
ｎ、６０ｇ、１７８ｍｍｏｌ）をメタノール：ピリジンの３：１混合物（２４０
ｍｌ）中に溶解する。溶液を冷却ジャケットおよびＰｔ電極を備えた電解セルに
移す。ナトリウムメトキシド（３０％ｗ／ｗ、０．５ｍｌ）のメタノール中メタ
ノール性溶液を添加し、低温保持装置で冷却し１８ないし２５℃の間に温度を保
ち、セルに電流を通す(５０−８０ボルトにおいて５アンペア)。反応物を定期的
にサンプリングし(ＴＬＣ：酢酸エチル：石油エーテル＝１：４)、一度出発物質
がすべて消費されたら、電解を止める。溶液を減圧下で濃縮し、溶離剤として酢
酸エチル：石油エーテル＝１：４を用い、シリカゲル上でクロマトグラフィに付
し、シクロヘキサン：ｎ−ヘキサン（１：１）溶媒混合物から結晶化して、（Ｒ
，Ｒ）−２，７−ビス−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−オクタノイッ
ク−（１，８）−ジアシッド−ジベンジリック−エステル（１３．０ｇ、２５％
）を得る（融点１０７−１１０℃）。（Ｒ，Ｒ）−２，７−ジアミノ−オクタノイック−（１，８）−ジアシッド−ジ ベンジリック−エステルの調製 （Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−オクタ
ノイック−（１，８）−ジアシッド−ジベンジリック−エステル（７．０２ｇ、
１２ｍｍｏｌ）の乾燥ジオキサン中溶液に、ジオキサン（２４ｍｌ）中の５．９
ＭＨＣｌを加えた。混合物をＮ2−雰囲気下１時間室温で攪拌した。１５分後白
い沈殿物が形成した。減圧下、揮発性の化合物を除去した。白色残渣を乾燥ジオ
キサン（２０ｍｌ）で崩壊させ、溶媒を減圧下除去した。得られた沈殿物を乾燥
ジエチルエーテルで洗浄し(３×３０ｍＬ)、注意深く分離し、高減圧下で乾燥し
、定量的に（Ｒ，Ｒ）−２，７−ジアミノ−オクタノイック−（１，８）−ジア
シッド−ジベンジリック−エステルの塩酸塩を得た。（Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−オクタノイッ ク−（１，８）−ジアシッド−ジベンジリック−エステルの調製 （Ｒ，Ｒ）−２，７−ジアミノ−オクタノイック−（１，８）−ジアシッド−ジ
ベンジリック−エステル（３．６９ｇ、８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２３ｍｌ）
中攪拌溶液に、それぞれＤＭＦ（各々２ｍｌ）に溶解した、ピコリン酸(１．９
７ｇ、１６ｍｍｏｌ)、ジイソプロピルエチルアミン(２．７４ｍｌ、１６ｍｍｏ
ｌ)、ＨＯＢｔ（３．６８ｇ、１６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（４．５９ｇ、１６
ｍｍｏｌ）をこの順番にＮ2雰囲気下０℃で添加した。１時間後、混合物を室温
にし、さらに１．５時間攪拌した。飽和水性ＮａＨＣＯ3溶液（１７０ｍｌ）お
よび水（７０ｍｌ）の冷却（０℃）混合物に反応物を注ぎ、反応物をクエンチし
、黄色油を分離した。混合物全体をＣＨＣｌ3で抽出した(３×６０ｍｌ)。合し
た有機層を水で徹底的に洗浄し(６×６０ｍｌ)、分離し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し
、減圧下濃縮した。残渣をメタノール（８ｍｌ）から再結晶化して、（Ｒ，Ｒ）
−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−オクタノイック−（１，
８）−ジアシッド−ジベンジリック−エステル（２．８１ｇ、５９％）を得た。
（融点８５−８６℃）（Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−オクタノイッ ク−（１，８）−ジアシッドの調製
（Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−オクタノイ
ック−（１，８）−ジアシッド−ジベンジリック−エステル（３．３ｇ、５．５
５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１２０ｍｌ）中溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（５００ｍｇ）
を添加し、混合物をＰａｒｒ装置中、水素雰囲気下（１バール）１時間振り混ぜ
た。触媒を濾過して除去し、流出液の溶媒を減圧下除去した。淡黄色残渣をＣＨ3
ＣＮ（４０ｍｌ）から結晶化し、（Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジル
カルボニルアミノ）−オクタノイック−（１，８）−ジアシッド（２．１２ｇ、
９２％）を得た。
融点：８５−８７℃1
Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨz,d4-ＭeＯＨ)d 1.50-1.60(m,4Ｈ),1.91-1.98(m,2Ｈ),2.022
.11(m,2Ｈ),4.66(dd,2Ｈ,J=5.0,8.0Ｈz),7.59(ddd,2Ｈ,1.4,4.9,7.8Ｈz),7.98(d
t,2Ｈ,Ｊ＝1.6,7.8Ｈz),8.1(dt,2Ｈ,Ｊ＝1.1,7.8Ｈz),8.67(dt,1Ｈ,Ｊ＝1.1,4.9
Ｈz);13
Ｃ ＮＭＲ(100ＭＨz,d4-ＭeＯＨ)d 175.3,166.7,150.9,150.1,139.1,128.2,12
3.5,54.0,33.12,26.64;
ＥＳ ＭＳ m/z 415.4(Ｍ+Ｈ+)
実施例２ （Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−デカノイック −（１，８）−ジアシッド １，６−ビス−（(２Ｓ，５Ｒ)−２，５−ジヒドロ−３，６−ジエトキシ−２− イソプロピル−５−ピラジニル）−ヘキサンの調製 （２Ｓ）−２，５−ジヒドロ−３，６−ジエトキシイソプロピルピラジン（２．
０３ｇ、９．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５０ｍｌ）中に溶解し、１．６Ｍのブチ
ルリチウムヘキサン中溶液を−７８℃で添加した(６．０ｍｌ、８０．２ｍｍｏ
ｌ)。−７８℃で１時間後、二価求電子試薬（１，６−ジブロモヘキサン(２．３
ｇ、９．６ｍｍｏｌ)）の３０ｍｌＴＨＦ中の溶液を滴下して添加し、混合物を
一晩で室温にした。混合物を１Ｍリン酸緩衝液（２４０ｍｌ、ｐＨ７．２）中に
注いで加水分解した後、混合物をジエチルエーテルで抽出し（３×２００ｍｌ）
、合した有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥した。濾過および乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）後、
溶媒を回転式エバポレーターで除去し、残渣を真空下乾燥した。混濁した生成物
をフラッシュクロマトグラフィー、石油エーテル／酢酸エチル ９／０．５によ
り精製し、１３．４％の油状生成物を得た。キャピラリーＧＣにより純度および
ジアステレオマー渦剰を決定した。（Ｒ，Ｒ）−２，９−ジアミノデカン−１，１０−ジアシッド−ジエチルエステ ルの調製 １，６−ビス−（(２Ｓ，５Ｒ)−２，５−ジヒドロ−３，６−ジエトキシ−２
−イソプロピル−５−ピラジニル）−ヘキサン（０．５０ｇ、０．９８ｍｍｏｌ
）をジオキサン（８０ｍｌ）およびＥｔＯＨ（１６０ｍｌ）中に溶解し、濃ＨＣ
ｌ（６．２５ｍｌ、７５．０ｍｍｏｌ）の水（１６０ｍｌ）中溶液を滴下して添
加した。混合物を一晩攪拌し、有機溶媒を取り除いた。濃水性アンモニア溶液を
ｐＨが９に達するまで添加し、水層をクロロホルムで抽出した（３×８０ｍｌ）
。合した有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ4)、濾過し、溶媒を除去した。残ったＶａｌ
ＯＥｔをクーゲルロール蒸留（室温、０．０５トル）により除去し、（Ｒ，Ｒ）
−２，９−ジアミノデカン−１，１０−ジアシッド−ジエチルエステル（０．１
７ｇ、６１％）を淡黄色油として得た。（Ｒ，Ｒ）−２，９−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−デカノイック −（１，１０）−ジアシッド−ジエチルエステルの調製 ピコリン酸（０．１５ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのジクロロメタン
に懸濁し、（Ｒ，Ｒ）−２，９−ジアミノデカン−１，１０−ジアシッド−ジエ
チルエステル（０．１７ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。透明な溶液
を０℃に冷却し、ＨＯＢｔ（６．３６ｇ、４０ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（７．６
８
ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩で室温とし、４％ＮａＨ
ＣＯ3溶液で抽出した。合した有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、溶媒を除
去した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル；石油エーテル／酢
酸エチル １／１）により精製し、半結晶化合物として（Ｒ，Ｒ）−２，９−ビ
ス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−デカノイック−（１，１０）−ジアシ
ッド−ジエチルエステル（０．３０ｇ、１００％）を得た。（Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−デカノイック −（１，８）−ジアシッドの調製
（Ｒ，Ｒ）−２，９−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−デカノイッ
ク−（１，１０）−ジアシッド−ジエチルエステル（０．３０ｇ、０．６０ｍｍ
ｏｌ）のジオキサン（４ｍｌ）およびＥｔＯＨ（４ｍｌ）中の冷却（０℃）溶液
に、水性２ＮＮａＯＨ溶液（４ｍｌ、８．０ｍｍｏｌ）および水（２ｍｌ）を添
加した。混合物を一晩で室温とした。溶液を減圧下約５ｍｌにまで濃縮し、残っ
た溶液のｐＨを水性４ＮＨＣｌの添加によりｐＨ３に合わせ、油を分離した。混
合物を酢酸エチルで抽出した（３×１５ｍｌ）。合した有機層を乾燥し(ＭｇＳ
Ｏ4)、濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／ＭｅＯＨ
／ＨＯＡｃ ８／１／１）により精製し、（Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピ
リジルカルボニルアミノ）−デカノイック−（１，８）−ジアシッド（０．２４
ｇ、８２％）を得た。1
Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨz,d6-ＤＭＳＯ)d 8.65(m,4Ｈ),8.01(m,4Ｈ),7.60(m,2Ｈ),4.
40(m,2Ｈ),1.83(m,4Ｈ),1.26(m,8Ｈ);13
Ｃ ＮＭＲ(100ＭＨz,d6-ＤＭＳＯ):d 173.5,163.5,149.5,148.6,138.0,126.8,
121.9,52.3,31.3,28.6,25.3
以下の化合物を上記の実施例と類似の方法により製造した。実施例３ （Ｓ，Ｓ）−２，５−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−ヘキサノイッ ク−１，６−ジアシッド 1Ｈ ＮＭＲ(d4-ＭeＯＨ,400ＭＨz)d 2.01(m,2Ｈ,ＣＨ2),2.20(m,2Ｈ,ＣＨ2),4.6
5(brs,2Ｈ,2ＣＨ),7.56(dd,2Ｈ,Ｊ＝4.7,7.0Ｈz,ピコリル-Ｈ),7.94(t,2Ｈ,Ｊ＝
6.8Ｈz,ピコリル-Ｈ),8.07(d,2Ｈ,Ｊ＝7.7Ｈz，ピコリル-Ｈ),8.65(br s,2Ｈ，
ピコリル-Ｈ);13
Ｃ ＮＭＲ(d4-ＭeＯＨ,100ＭＨz)d 30.0(2ＣＨ2),54.8(2ＣＨ),123.4,128.1,1
39.0,150.0,151.0,166.5,176.2;実施例４ （Ｒ，Ｒ）−２，５−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−ヘキサン−１ ，６−ジオール （Ｒ，Ｒ）−２，５−ジアミノ−ヘキサノイック−（１，６）−ジアシッド−ジ
ベンジリック−エステル（０．８３ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ
）に溶解し、ＬｉＢＨ4（７０ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）を不活性雰囲気下で添
加した。懸濁液を室温で一晩攪拌した。ＴＬＣコントロール（ＲＰ−１８、ＣＨ3
ＣＮ：Ｈ2Ｏ＝３：２）の後、反応物を１００ｍｌの１％ＫＨＳＯ4−溶液中に
注ぎ、３０分間攪拌した。水性層をＣＨＣｌ3で抽出した(３×１００ｍｌ)。合
した有機層をＮａＳＯ4で乾燥し、濾過し、真空下濃縮した。混濁した生成物を
溶剤としてＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏ＝３：２を用い、ＲＰ−１８上でクロマトグラフィ
ーに付し、油として０．４７ｇ（８９．５％）を得た。1
Ｈ ＮＭＲ(ＣＤＣl3,400ＭＨz)d 1.75(m,2Ｈ,ＣＨ2),1.83(m,2Ｈ,ＣＨ2),3.65(
br s,2Ｈ,Ｄ2Ｏ-交換可能,2ＯＨ),3.75(d,4Ｈ,Ｊ＝4.4Ｈz,2ＣＨ2ＯＨ),4.20(m,
2Ｈ,2ＣＨ),7.35(ddd,2Ｈ,Ｊ＝1.2,4.8,7.7Ｈz,2ピコリル-Ｈ),7.78(dt,2Ｈ,Ｊ
＝1.6,
7.6Ｈz,2ピコリル-Ｈ),8.11(d,2Ｈ,Ｊ＝7.8Ｈz,2ピコリル-Ｈ),8.23(d,2Ｈ,Ｊ＝
8.8Ｈz,ＮＨ),8.47(br d,2Ｈ,Ｊ＝4.7Ｈz,2ピコリル-Ｈ).13
Ｃ ＮＭＲ(ＣＤＣl3,100ＭＨz)d 27.9(2ＣＨ2),51.6(2ＣＨ),64.8(2ＣＨ2ＯＨ
),122.3,126.162137.3,148.1,149.7,164.8;実施例５ （Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（(２Ｓ)−５−オキソ−２−ピロリジルカルボニル アミノ）−オクタノイック−１，８−ジアシッド 1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨz,Ｄ2Ｏ)d 1.30-1.37(m,.63-1.87(m,4Ｈ),1.98-2.08(m,2Ｈ)
,2.37-2.58(m,6Ｈ),4.16(dd,2Ｈ,Ｊ＝4.7,9.2Ｈz),4.35(dd,2Ｈ,Ｊ＝5.8,9.0);13
Ｃ ＮＭＲ(100ＭＨz,Ｄ2Ｏ)d 27.4,28.0,32.1,33.8,57.5,59.7,176.8,181.2,1
84.9実施例６ （Ｒ，Ｒ）−２，７−ビス−（２−ピリジルカルボニルアミノ）−（Ｅ）−オク ト−４−エノイック−１，８−ジアシッド−ジエチルエステル 1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨz,d6-ＤＭＳＯ)d 8.61(m,4Ｈ),7.97(m,4Ｈ),7.58(m,2Ｈ),5.
52(t,2Ｈ,Ｊ＝3.5Ｈz),4.44(m,2Ｈ),2.57(m,4Ｈ);13
Ｃ ＮＭＲ(100ＭＨz,d6-ＤＭＳＯ)d 172.7,163.6,149.3,148.6,138.0,128.7,1
26.9,121.9,52.1,34.2;
実施例７ Ｎ，Ｎ’−ビス−ピコリル−Ｄ，Ｄ−シスチン ジメチルエステル
（Ｈ−Ｄ−Ｃｙｓ−ＯＭｅ）２．２ＨＣｌ（１．０ｇ、２．９３ｍｍｏｌ；Ｂａ
ｃｈｅｍより得た）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、ピコリン酸（０．７９ｇ
、６．４５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．０５ｍＬ、６．１５３ｍｍｏｌ）を
添加し、溶液をマイナス２５℃に冷却した。ＨＯＢｔ（０．９９ｇ、６．４５ｍ
ｍｏｌ）およびＷＳＣ（１．２４ｇ、６．４５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を
２５℃で１時間、ついで、周囲温度で１時間、攪拌した。得られた黄色溶液をＮ
ａＨＣＯ3（１２ｇ）を含む水（１５０ｍＬ）中に注ぎ、５分間攪拌した。得ら
れたエマルジョンを酢酸エチルで抽出した(２×１００ｍＬ)。合した有機層を５
％ＫＨＳＯ4溶液で、ついで、脱イオン水で中性になるまで洗浄した。有機層を
Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲ
ル、溶離剤：石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）で精製し、１．３７ｇ（９７
．９％）の標記化合物を油として得た。
分子量４７８．５４９
元素分析：（Ｃ２０Ｈ２２Ｎ４Ｏ６Ｓ２） 計算値：Ｃ５０．２０、Ｈ４．６３
、Ｎ１１．７１ 実測値Ｃ４９．８、Ｈ４．６、Ｎ１１．５実施例８ Ｎ，Ｎ−ビス−ピコリル−Ｄ，Ｄ−シスチン
実施例７の化合物（１．２３ｇ、２．５７ｍｍｏｌ）を水（４．６ｍＬ）を含
むＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中に溶解した。ＬｉＯＨ（２Ｎ溶液、３．７３ｍＬ）を
添加した。得られた黄色溶液を周囲温度で４５分攪拌した。ついで、溶液を濃縮
し（ＭｅＯＨを除去）５ｍＬの水を加えた。溶液を５％ＫＨＳＯ4溶液（１３ｍ
Ｌ）で酸性化し、水性溶液を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）およびＣＨ2Ｃｌ2（１
×５０ｍＬ）で抽出した。合した有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮し
た。得られた残渣をクロマトグラフィー（シリカＰＲ−１８、溶離剤：ＭｅＯＨ
／水＝１／２）で精製し、１５０ｍｇ（１３％）のきわめて純粋な標記化合物を
泡として得た。
分子量４５０．４９５
元素分析（Ｃ１８Ｈ１８Ｎ４Ｏ６Ｓ２）計算値：Ｃ４７．９９、Ｈ４．０３、Ｎ
１２．４４ 実測値：Ｃ４７．５、Ｈ４．４、Ｎ１２．１実施例９ Ｎ，Ｎ’−ビス−ピコリル−Ｌ，Ｌ−シスチン ジメチルエステル
標記化合物を（Ｈ−Ｌ−Ｃｙｓ−ＯＭｅ）２．２ＨＣｌ（Ｂａｃｈｅｍより得
た）から実施例７に記載したように調製した。
収量：１．３０ｇ（９２．９％）、油
分子量４７８．５４９
元素分析（Ｃ２０Ｈ２２Ｎ４Ｏ６Ｓ２）計算値：Ｃ５０．２０、Ｈ４．６３、Ｎ
１１．７１ 実測値：Ｃ４９．８、Ｈ４．８、Ｎ１１．６実施例１０ Ｎ，Ｎ’−ビス−ピコリル−Ｌ，Ｌ−シスチン
標記化合物を実施例８の方法により、実施例９の化合物を用いて調製した。
収量：３４０ｍｇ（２８％）
分子量４５０．４９５
元素分析（Ｃ１８Ｈ１８Ｎ４Ｏ６Ｓ２）計算値：Ｃ４７．９９、Ｈ４．０３、Ｎ
１２．４４ 実測値：Ｃ４８．１、Ｈ４．４、Ｎ１２．３実施例１１
本発明の化合物を配合した医薬用処方は、種々の形態に、多くの賦形剤を用い
て調製できる。このような処方物の例を以下に示す。
錠剤／成分 一錠剤当たり
１．活性成分（式Ｉの化合物） ０．５ｍｇ
２．コーンスターチ ２０ ｍｇ
３．アルギン酸 ２０ ｍｇ
４．アルギン酸ナトリウム ２０ ｍｇ
５．ステアリン酸マグネシウム １．３ｍｇ
錠剤化操作
工程１ 成分Ｎo．１、Ｎo.２、Ｎo.３およびＮo.４を適当なミキサー／ブレ
ンダー中でブレンドする。
工程２ 各添加後、慎重に混合しながら、工程１からのブレンドに十分な量の
水を数回にわけて添加する。塊が湿式顆粒に変わる硬度となるまでそのように水
を添加し、混合する。
工程３ Ｎo.８メッシュ（２．３８ｍｍ）スクリーンを用いて振動グラニュレ
ーターを通すことにより湿式塊を顆粒に変える。
工程４ ついで該湿式顆粒を１４０°Ｆ（６０℃）のオーブン中で乾燥する。
工程５ 乾式顆粒を成分Ｎo.５で潤滑化する。
工程６ 潤滑化顆粒を適当な打錠プレスで圧縮する。
非経口製剤
適当量の式Ｉの化合物をポリエチレングリコール中に加熱しながら溶解させる
ことにより、非経口投与用医薬組成物を調製する。この溶液についでＰｈＥｕｒ
注射用水で希釈する（１００ｍｌにする）。ついで、溶液を０．２２ミクロンメ
ンブランフィルターで濾過することにより滅菌処理し、滅菌容器中に密封する。
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(72)発明者 バトナガール，プラディップ・クマール
アメリカ合衆国19341ペンシルベニア州
エクストン、サウス・バルダーストン・ド
ライブ300番
(72)発明者 ハルトマン，ミヒャエル
オーストリア、アー−4643ペッテンバッ
ハ、ミッテンドルフ130番
(72)発明者 ヒープル，ヨハン
オーストリア、アー−4030リンツ、モーヴ
ェンヴェーク７番
(72)発明者 クレミンガー，ペーター
オーストリア、アー−4481アステン、マル
ゲリテンシュトラーセ10／16番
(72)発明者 ロヴェンスツキー，フランツ
オーストリア、アー−4020リンツ、ツィー
ラーシュトラーセ27番