JP2000356641A - リポ蛋白分離分析法、リポ蛋白分離分析装置、およびリポ蛋白分離分析システム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 血清または血漿中に含まれる所定成分の変性
の度合いを容易に判断することが可能なリポ蛋白分離分
析法、リポ蛋白分離分析装置、およびリポ蛋白分離分析
システムの提供。 【解決手段】 検体試料中の所定成分の変性の度合いを
判断するリポ蛋白分離分析法であって、所定成分を有す
るリポ蛋白を含む標準試料を電気泳動することによって
得られる泳動図から所定成分に対応する分画の中心位置
と該標準試料の塗布点との距離（ａ）を求める工程と；
所定成分と同種の成分を有するリポ蛋白を含む検体試料
を電気泳動することによって得られる泳動図から所定成
分に対応する分画の中心位置と検体試料の塗布点との距
離（ｂ）を求める工程と；距離（ａ）と距離（ｂ）とを
比較し、標準試料に対する検体試料の相対移動率｛ｚ
（＝ｂ／ａ）｝を求める工程とを有し、得られた相対移
動率（ｚ）にもとづいて所定成分の変性の度合いを判断
する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、医学、生物学など
の分野で用いられる血清、血漿などの試料中に含まれる
リポ蛋白の分離分析に関する。特に、本発明は、電気泳
動法を用いてリポ蛋白中のアポ蛋白の量的および質的異
常からリポ蛋白の変性を推定するリポ蛋白分離分析法、
リポ蛋白分離分析装置、およびリポ蛋白分離分析システ
ムに関する。

【０００２】

【従来の技術】血清または血漿中のリポ蛋白は脂質と蛋
白質とが複合体を形成したものであって、リポ蛋白中に
はコレステロール、リン脂質および中性脂肪が含まれて
いる。したがって、リポ蛋白の異常は脂質代謝異常を反
映しており、血清または血漿中に含まれるリポ蛋白を分
画し、それをもとにしてリポ蛋白の量的および質的異常
を検討することで脂質代謝異常を推定することができ
る。そのため、リポ蛋白分離分析法は、高脂血症、冠動
脈硬化症、甲状腺機能低下症、閉塞性肝疾患、糖尿病、
腎不全などの脂質代謝に影響を及ぼす疾患の診断や治療
にとって大切な臨床検査の一つとなっている。

【０００３】リポ蛋白分画法としては、超遠心法や、ア
ガロース膜、セルロース・アセテート膜またはポリアク
リルアミドゲル（ＰＡＧ）を支持体として用いた電気泳
動法によるものが従来から知られている。

【０００４】超遠心法では、血清中のリポ蛋白は、該リ
ポ蛋白の比重にもとづいて、ＨＤＬ（高比重リポ蛋
白）、ＬＤＬ（低比重リポ蛋白）、ＶＬＤＬ(超低比重
リポ蛋白)、およびＣＭ(カイロミクロン)に分離され
る。しかし、超遠心法は、超遠心機にかける試料の調製
などに手間がかかると共に分離に長時間要し、また分離
状況を把握する際に試料をさらに細分画化させる必要が
ある。そのため、臨床検査の現場において、各分画の増
減や特定の疾患に特有の分画の検出を目的とするルーチ
ン検査として超遠心法によるリポ蛋白の分離分析を行う
ことは困難である。

【０００５】一方、溶液中のリポ蛋白を移動度の違いか
ら分画する電気泳動法は、リポ蛋白の分離状況を視覚的
に捕えることができる。そのため、日常の検査では多く
の場合、電気泳動法を用いてリポ蛋白の分離分析を行っ
ている。このような電気泳動法によるリポ蛋白の分離分
析の結果と、上述の超遠心法による結果とは良い相関を
示す。電気泳動法を用いてリポ蛋白を分画すると、α
（ＨＤＬ）、preβ（ＶＬＤＬ）、β（ＬＤＬ）、およ
び原点（カイロミクロン）に分離される。さらに、それ
らをファットレッド７Ｂなどの脂質染色剤で各分画に含
まれる脂質を染色することにより、各分画の有無や濃度
を測定することができる。なお、当業者の便宜を図るた
め、従来の超遠心法によって得られるリポ蛋白分画の各
々の名称を、上記電気泳動の各分画名に添えた括弧内に
記載した。

【０００６】リポ蛋白の基本構造は、中性脂肪（トリグ
リセライド）およびコレステロールエステルから形成さ
れた芯の部分と、リン脂質および遊離コレステロールか
ら形成され、かつ前記芯の部分を覆う単層膜と、その膜
の表面に付着した一種類以上のアポ蛋白とから構成され
る。アポ蛋白の種類は、リポ蛋白の各分画ごとに異な
る。すなわち、主に、ＨＤＬ中のアポ蛋白は、アポ蛋白
Ａ-I、Ａ-II、Ａ-IV、Ｃ-I、Ｃ-II、Ｃ-IIIおよびＥで
ある。ＶＬＤＬ中のアポ蛋白は、アポ蛋白Ｃ-I、Ｃ-I
I、Ｃ-III、Ｅ、Ｂ-１００である。ＬＤＬ中のアポ蛋白
は、アポ蛋白Ｂ-１００である。カイロミクロン中のア
ポ蛋白は、アポ蛋白Ａ-I、Ａ-II、Ａ-IV、Ｃ-I、Ｃ-I
I、Ｃ-III、Ｅ、Ｂ-４８である。電気泳動法では、リポ
蛋白中に含まれる各アポ蛋白の等電点の違いが各分画の
移動度の違いとして反映される。

【０００７】ところで、動脈硬化は冠動脈疾患などの成
人病の原因となるため、動脈硬化を予防または治療する
ことが基礎および臨床医学において大きな課題となって
いる。特に、若年者の動脈硬化の患者数が近年増大して
いること、および糖尿病患者も動脈硬化を起こし易いこ
と、などから血清中の脂質の管理がより厳密化されてき
た。例えば、フラミンガム研究所などの疫学調査によっ
て、冠動脈疾患の原因となる粥状動脈硬化症の最大の危
険因子として、血清コレステロール値、特に低比重リポ
蛋白（ＬＤＬ）中のコレステロール値の関与が明らかに
されている。ＬＤＬ中のコレステロールが動脈硬化を引
き起こす素因は、マクロファージが特異的なレセプター
を介して変性ＬＤＬを取り込むことにより泡沫化し、そ
の残骸が血管壁に付着することにある。それ故、変性Ｌ
ＤＬのスクリーニング検査が必要となる。

【０００８】ここで「変性ＬＤＬ」とは、酸化ＬＤＬ、
アセチルＬＤＬ、糖化ＬＤＬ、ＭＤＡ−ＬＤＬ（マロン
ジアルデヒドＬＤＬ）等、種々の修飾を受けたＬＤＬの
総称である。さらに、本明細書で使用される「変性」と
いう用語は、当業者が脂質や蛋白質の変性について通常
用いる広義の意味における「変性」である。例えば、血
液試料に含まれるリポ蛋白質成分の場合、体内の脂質代
謝異常等、in vivo系における物理的または化学的環境
の変化に起因する変性のみならず、血液を採取した後の
in vitro系における物理的または化学的環境の変化に起
因する変性をも含むことは、具体例を挙げるまでもなく
当業者に容易に理解されよう。

【０００９】一般に、小粒子化したＬＤＬは酸化されや
すいと言われている。そのため、変性ＬＤＬのスクリー
ニング検査として、リポ蛋白中の小粒子化したＬＤＬの
割合を検出する試みがなされている。その一例として、
所定のポアサイズを有し、分子篩効果が高いポリアクリ
ルアミドゲル（ＰＡＧ）を用いた電気泳動法により、リ
ポ蛋白分画を行う方法がある。この方法によれば、ＰＡ
Ｇの分子篩効果により、リポ蛋白は、粒子の最も小さい
（最も移動度が大きくなる）ＨＤＬが先に分離され、次
にＬＤＬ、ＶＬＤＬ、カイロミクロンの順で分離され
る。すなわち、ＰＡＧ電気泳動法によるリポ蛋白分画で
は、リポ蛋白中の各粒子の等電点の違いというよりも、
むしろリポ蛋白中の各粒子の大きさの違いにもとづいて
リポ蛋白が分画されることになる。

【００１０】ＰＡＧ電気泳動法を利用して小粒子化した
ＬＤＬの割合を検出する具体的な方法として、ＶＬＤＬ
分画の位置を基準にして各分画間の相対移動距離を用い
るものが挙げられる。この方法は、ＰＡＧを用いて電気
泳動を行い、ＶＬＤＬ分画の中心位置からＬＤＬ分画の
中心位置までの泳動距離を（ｘ）、ＶＬＤＬ分画の中心
位置からＨＤＬ分画の中心位置までの泳動距離を（ｙ）
として、これらの比（ｘ／ｙ）から相対移動距離（Ｒｆ
値またはＲｍ値）を求める。そして、得られた値と、正
常値とを比較することによって小粒子化したＬＤＬの割
合を求めるものである。なお、正常値とは、ＬＤＬが小
粒子化していないリポ蛋白について、同様にして求めた
相対移動距離の値を意味する。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】上述したように、従来
のＰＡＧ電気泳動法によるリポ蛋白の分離分析では、小
粒子化したＬＤＬの割合を求めることを目的としてお
り、電気泳動後のＶＬＤＬ分画およびＨＤＬ分画を基準
にしてＬＤＬ分画の相対移動距離を求める。したがっ
て、得られた相対移動距離はリポ蛋白中の各粒子の大き
さの違いを反映したものとなるが、リポ蛋白中の各粒子
が異なる種類や異なる数のアポ蛋白を持つことによる特
定のアポ蛋白の質的異常または量的異常を反映したもの
とはならない。特に、アポ蛋白Ｂ−１００が何らかの修
飾を受けて変性したＬＤＬの分画と、ＬＤＬが変性して
いない正常なＬＤＬの分画との比較を行う上では、好ま
しい方法とはいえない。その一方で、リポ蛋白中のアポ
蛋白は体内における脂質代謝に直接関与しているため、
アポ蛋白の異常を捕らえることは臨床的に非常に有効で
あると考えられている。

【００１２】したがって、本発明の目的は上述の課題を
解決し、リポ蛋白中のアポ蛋白の量的または質的異常お
よび何らかの化学的修飾に起因する等電点の変化にもと
づいてリポ蛋白の変性、特にＬＤＬの変性の度合いを簡
易に求めるためのリポ蛋白分離分析法、リポ蛋白分離分
析装置、およびリポ蛋白分離分析システムを提供するこ
とである。

【００１３】

【課題を解決するための手段】上述の課題を解決するた
めに、本発明にもとづく第１の態様は、所定成分を有す
るリポ蛋白を含む標準試料の電気泳動図と、前記所定成
分と同種の成分を有するリポ蛋白を含む検体試料の電気
泳動図とを用いて、前記検体試料中の所定成分の変性の
度合いを判断するリポ蛋白分離分析装置であって、前記
標準試料および前記検体試料の電気泳動を行い各試料の
リポ蛋白を分画し、次いで前記各リポ蛋白中の各所定成
分をそれぞれ染色により検出する試薬を用いて前記各所
定成分を染色し、それにより前記各所定成分の可視化さ
れた各電気泳動図を作製する電気泳動図作製手段と、前
記各所定成分の可視化された各電気泳動図を光学的にス
キャンして、該各電気泳動図を光学密度の波形に変換し
て前記各所定成分の各波形図を作製する波形図作製手段
と、前記各波形図を数学的に処理して前記検体試料中の
所定成分の変性の度合いを判断する手段とを備えてな
り、前記所定成分の変性の度合いを判断する手段が、前
記標準試料の所定成分の波形図から、該標準試料の塗布
点と該標準試料中の所定成分に対応する分画の中心位置
との距離（ａ）を求める第１の手段と、前記検体試料の
所定成分の波形図から、該検体試料の塗布点と該検体試
料中の所定成分に対応する分画の中心位置との距離
（ｂ）を求める第２の手段と、前記距離（ａ）と前記距
離（ｂ）とを比較し、前記標準試料に対する前記検体試
料の相対移動率｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝を求める第３の手段
とを備え、前記相対移動率（ｚ）にもとづいて前記検体
試料中の所定成分の変性の度合いを判断することを特徴
とするリポ蛋白分離分析装置に関する。

【００１４】ここで、リポ蛋白分離分析装置は、前記所
定成分の変性の度合いを判断する手段において、前記第
３の手段によって求められた前記相対移動率｛ｚ（＝ｂ
／ａ）｝を式： Ｍ＝ ｂ／ａ − １＝（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（１） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることが
好ましい。

【００１５】ここで、リポ蛋白分離分析装置は、前記所
定成分の変性の度合いを判断する手段において、前記第
３の手段によって求められた前記相対移動率｛ｚ（＝ｂ
／ａ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ／ａ − １）＝ｋ（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（２） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
度数（Ｍ’）として求めることが好ましい。

【００１６】ここで、前記標準試料は標準血清であり、
前記検体試料は血清であることが好ましい。

【００１７】ここで、前記所定成分は、低比重リポ蛋白
であることが好ましい。

【００１８】ここで、前記所定成分は、脂質であること
が好ましい。

【００１９】ここで、前記電気泳動は、アガロースゲル
を主成分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実
施されることが好ましい。

【００２０】本発明にもとづく第２の態様は、所定成分
を有するリポ蛋白を含む標準試料の電気泳動図と、前記
所定成分と同種の成分を有するリポ蛋白を含む検体試料
の電気泳動図と、前記所定成分の指標と成り得るマーカ
ー成分を含む指標試料の電気泳動図とを用いて、前記検
体試料中の所定成分の変性の度合いを判断するリポ蛋白
分離分析装置であって、前記標準試料と前記検体試料と
前記指標試料との電気泳動をそれぞれ行って各試料を分
画し、次いで前記標準および検体試料の各分画中の所定
成分と前記指標試料の分画中のマーカー成分とをそれぞ
れ染色により検出する試薬を用いて各成分を染色し、そ
れにより前記各成分の可視化された各電気泳動図を作製
する電気泳動図作製手段と、前記可視化された各電気泳
動図を光学的にスキャンして各電気泳動図を光学密度の
波形に変換して前記各所定成分および前記マーカー成分
の各波形図を作製する波形図作製手段と、前記各波形図
を数学的に処理して前記検体試料中の所定成分の変性の
度合いを判断する手段とを備えてなり、前記所定成分の
変性の度合いを判断する手段は、第１の測定手段と第２
の測定手段とを有し、これら２つの測定手段によって求
めた前記検体試料の相対移動率にもとづいて前記検体試
料中の所定成分の変性の度合いを判断する手段であり、
前記第１の測定手段は、前記標準試料の波形図から、前
記標準試料の塗布点と該標準試料中の所定成分に対応す
る分画の中心位置との距離（ａ）を求める第１の手段
と、前記指標試料の波形図から、前記指標試料の塗布点
と該指標試料中のマーカー成分に対応する分画の中心位
置との距離（ｃ）を求める第２の手段と、前記距離
（ａ）と前記距離（ｃ）とを比較し、前記標準試料に対
する前記指標試料の相対移動率｛ｚ₁（＝ｃ／ａ）｝を
求める第３の手段とを備え、および前記第２の測定手段
は、前記検体試料の波形図から、前記検体試料の塗布点
と該検体試料中の所定成分に対応する分画の中心位置と
の距離（ｂ）を求め、前記指標試料の波形図から、前記
指標試料の塗布点と該指標試料中のマーカー成分に対応
する分画の中心位置との距離（ｃ）を求める第４の手段
と、前記第１の測定手段によって求められた相対移動率
（ｚ₁）と、前記第２の測定手段によって求められた前
記距離（ｂ）と前記距離（ｃ）とから、前記検体試料の
前記標準試料に対する相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ
・ｚ₁／ｃ）｝を求める第５の手段とを備えることを特
徴とするリポ蛋白分離分析装置に関する。

【００２１】ここで、リポ蛋白分離分析装置は、前記所
定成分の変性の度合いを判断する手段において、前記第
５の手段によって求められた前記相対移動率｛ｚ₂（＝
ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ＝ ｂ・ｚ₁／ｃ − １ ・・・（３） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることが
好ましい。

【００２２】ここで、リポ蛋白分離分析装置は、前記所
定成分の変性の度合いを判断する手段において、前記第
５の手段によって求められた前記相対移動率｛ｚ₂（＝
ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ・ｚ₁／ｃ − １） ・・・・・（４） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
度数（Ｍ’）として求めることが好ましい。

【００２３】ここで、前記標準試料は標準血清であり、
前記検体試料は血清であり、前記指標試料は安定化剤を
加えて保存されていた血清であることが好ましい。

【００２４】ここで、前記標準試料は標準血清であり、
前記検体試料は血清であり、前記指標試料はマーカーと
成り得るアルコール脱水素酵素を含むことが好ましい。

【００２５】ここで、前記第２の測定手段において、前
記第４の手段が前記指標試料と前記検体試料とを混合し
てなる試料を電気泳動することにより前記距離（ｂ）と
前記距離（ｃ）とを同時に求める手段であることが好ま
しい。

【００２６】ここで、前記第１の所定成分は、低比重リ
ポ蛋白であることが好ましい。

【００２７】ここで、前記第１の所定成分は、脂質であ
ることが好ましい。

【００２８】ここで、前記電気泳動は、アガロースゲル
を主成分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実
施されることが好ましい。

【００２９】本発明にもとづく第３の態様は、所定成分
を有するリポ蛋白を含む標準試料の電気泳動図と、前記
所定成分と同種の成分を有するリポ蛋白を含む検体試料
の電気泳動図とを用いて、前記検体試料中の所定成分の
変性の度合いを判断するリポ蛋白分離分析法であって、
前記標準試料および前記検体試料の電気泳動を行い各試
料のリポ蛋白を分画し、次いで前記各リポ蛋白中の各所
定成分をそれぞれ染色により検出する試薬を用いて前記
各所定成分を染色し、それにより前記各所定成分の可視
化された各電気泳動図を作製する電気泳動図作製工程
と、前記各所定成分の可視化された各電気泳動図を光学
的にスキャンして、該各電気泳動図を光学密度の波形に
変換して前記各所定成分の各波形図を作製する波形図作
製工程と、前記各波形図を数学的に処理して前記検体試
料中の所定成分の変性の度合いを判断する工程とを有し
てなり、前記所定成分の変性の度合いを判断する工程
が、前記標準試料の所定成分の波形図から、該標準試料
の塗布点と該標準試料中の所定成分に対応する分画の中
心位置との距離（ａ）を求める第１の工程と、前記検体
試料の所定成分の波形図から、該検体試料の塗布点と該
検体試料中の所定成分に対応する分画の中心位置との距
離（ｂ）を求める第２の工程と、前記距離（ａ）と前記
距離（ｂ）とを比較し、前記標準試料に対する前記検体
試料の相対移動率｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝を求める第３の工
程とを有し、前記相対移動率（ｚ）にもとづいて前記検
体試料中の所定成分の変性の度合いを判断することを特
徴とするリポ蛋白分離分析法に関する。

【００３０】ここで、リポ蛋白分離分析法は、前記所定
成分の変性の度合いを判断する工程において、前記第３
の工程によって求められた前記相対移動率｛ｚ（＝ｂ／
ａ）｝を式： Ｍ＝ ｂ／ａ − １＝（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（１） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることが
好ましい。

【００３１】ここで、リポ蛋白分離分析法は、前記所定
成分の変性の度合いを判断する工程において、前記第３
の工程によって求められた前記相対移動率｛ｚ（＝ｂ／
ａ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ／ａ − １）＝ｋ（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（２） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
度数（Ｍ’）として求めることが好ましい。

【００３２】ここで、前記標準試料は標準血清であり、
前記検体試料は血清であることが好ましい。

【００３３】ここで、前記所定成分は、低比重リポ蛋白
であることが好ましい。

【００３４】ここで、前記所定成分は、脂質であること
が好ましい。

【００３５】ここで、前記電気泳動は、アガロースゲル
を主成分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実
施されることが好ましい。

【００３６】本発明にもとづく第４の態様は、上述のリ
ポ蛋白分離分析法を実行するためのプログラミングが格
納されていることを特徴とする記録媒体に関する。

【００３７】本発明にもとづく第５の態様は、上述の記
録媒体に格納されたプログラミングを実行するコンピュ
ータと、該コンピュータからの前記プログラミングにも
とづいた命令に従って動作するリポ蛋白分離分析装置と
を有することを特徴とするリポ蛋白分離分析システムに
関する。

【００３８】本発明にもとづく第６の態様は、所定成分
を有するリポ蛋白を含む標準試料の電気泳動図と、前記
所定成分と同種の成分を有するリポ蛋白を含む検体試料
の電気泳動図と、前記所定成分の指標と成り得るマーカ
ー成分を含む指標試料の電気泳動図とを用いて、前記検
体試料中の所定成分の変性の度合いを判断するリポ蛋白
分離分析法であって、前記標準試料と前記検体試料と前
記指標試料との電気泳動をそれぞれ行って各試料を分画
し、次いで前記標準および検体試料の各分画中の所定成
分と前記指標試料の分画中のマーカー成分とをそれぞれ
染色により検出する試薬を用いて各成分を染色し、それ
により前記各成分の可視化された各電気泳動図を作製す
る電気泳動図作製工程と、前記可視化された各電気泳動
図を光学的にスキャンして各電気泳動図を光学密度の波
形に変換して前記各所定成分および前記マーカー成分の
各波形図を作製する波形図作製工程と、前記各波形図を
数学的に処理して前記検体試料中の所定成分の変性の度
合いを判断する工程とを有してなり、前記所定成分の変
性の度合いを判断する工程は、第１の測定工程と第２の
測定工程とを有し、これら２つの測定工程によって求め
た前記検体試料の相対移動率にもとづいて前記検体試料
中の所定成分の変性の度合いを判断する工程であり、前
記第１の測定工程は、前記標準試料の波形図から、前記
標準試料の塗布点と該標準試料中の所定成分に対応する
分画の中心位置との距離（ａ）を求める第１の工程と、
前記指標試料の波形図から、前記指標試料の塗布点と該
指標試料中のマーカー成分に対応する分画の中心位置と
の距離（ｃ）を求める第２の工程と、前記距離（ａ）と
前記距離（ｃ）とを比較し、前記標準試料に対する前記
指標試料の相対移動率｛ｚ₁（＝ｃ／ａ）｝を求める第
３の工程とを有し、および前記第２の測定工程は、前記
検体試料の波形図から、前記検体試料の塗布点と該検体
試料中の所定成分に対応する分画の中心位置との距離
（ｂ）を求める第４の工程と、前記指標試料の波形図か
ら、前記指標試料の塗布点と該指標試料中のマーカー成
分に対応する分画の中心位置との距離（ｃ）を求める第
５の工程と、前記第１の測定工程によって求められた相
対移動率（ｚ₁）と、前記第２の測定工程によって求め
られた前記距離（ｂ）と前記距離（ｃ）とから、前記検
体試料の前記標準試料に対する相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ
／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を求める第６の工程とを有する
ことを特徴とするリポ蛋白分離分析法に関する。

【００３９】ここで、リポ蛋白分離分析法は、前記所定
成分の変性の度合いを判断する工程において、前記第６
の工程によって求められた前記相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ
／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ＝ ｂ・ｚ₁／ｃ − １ ・・・・・（３） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることが
好ましい。

【００４０】ここで、リポ蛋白分離分析法は、前記所定
成分の変性の度合いを判断する工程において、前記第６
の工程によって求められた前記相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ
／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ・ｚ₁／ｃ − １） ・・・・・（４） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
度数（Ｍ’）として求めることが好ましい。

【００４１】ここで、前記標準試料は標準血清であり、
前記検体試料は血清であり、前記指標試料は安定化剤を
加えて保存されていた血清であることが好ましい。

【００４２】ここで、前記標準試料は標準血清であり、
前記検体試料は血清であり、前記指標試料はマーカーと
成り得るアルコール脱水素酵素を含むことが好ましい。

【００４３】ここで、前記第２の測定工程において、前
記指標試料と前記検体試料とを混合した状態で電気泳動
することにより、前記第４の工程と前記第５の工程とを
同時に行うことが好ましい。

【００４４】ここで、前記第１の所定成分は、低比重リ
ポ蛋白であることが好ましい。

【００４５】ここで、前記第１の所定成分は、脂質であ
ることが好ましい。

【００４６】ここで、前記電気泳動は、アガロースゲル
を主成分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実
施されることが好ましい。

【００４７】本発明にもとづく第７の態様は、上述のリ
ポ蛋白分離分析法を実行するためのプログラミングが格
納されていることを特徴とする記録媒体に関する。

【００４８】本発明にもとづく第８の態様は、上述の記
録媒体に格納されたプログラミングを実行するコンピュ
ータと、該コンピュータからの前記プログラミングにも
とづいた命令に従って動作するリポ蛋白分離分析装置と
を備えることを特徴とするリポ蛋白分離分析システムに
関する。

【００４９】なお、上記リポ蛋白分離分析法および上記
リポ蛋白分離分析装置において、アガロース支持体の電
気泳動装置を利用する場合、支持体にはアガロース薄膜
を使用する。また、支持体としてアガロースと寒天との
混合物からなる薄膜を使用することもできる（このよう
な支持体を以下、アガロースゲル薄膜ともいう。）。

【００５０】これらのアガロース支持体は、緩衝液に対
してアガロースまたはアガロースゲルを０．４％（Ｗ／
Ｗ）〜１．２％（Ｗ／Ｗ）、より好ましくは０．５％
（Ｗ／Ｗ）〜０．８％（Ｗ／Ｗ）の濃度範囲で用いた溶
液から作製することが好ましい。また、電気泳動の際の
印加電圧は、長さ１２０ｍｍ、幅１３０ｍｍ、膜厚５０
０μｍのアガロース薄膜を使用した場合、２００〜５０
０Ｖとすることが好ましい。さらに、アガロース支持体
には、０．０１〜０．５％（Ｗ／Ｗ）程度の牛血清アル
ブミン（ＢＳＡ）が含まれていることが好ましい。

【００５１】アガロース支持体のかわりに、セルロース
・アセテート、寒天などを支持体とする電気泳動装置、
あるいはキャピラリ電気泳動装置を用いることもでき
る。

【００５２】

【発明の実施の形態】本発明のリポ蛋白分離分析法は、
電気泳動法を用い、リポ蛋白に含まれるアポ蛋白の量的
および質的異常に起因する等電点の変化にもとづいてリ
ポ蛋白の変性を検討する。ここでは、主に肝臓で合成さ
れるコレステロールを他の組織に運ぶＬＤＬを例に挙げ
て説明する。

【００５３】ＬＤＬは、動脈硬化性疾患（心筋梗塞、狭
心症、脳梗塞など）の危険因子であり、ＬＤＬの量的お
よび質的異常を検討することは動脈硬化性疾患の診断お
よび治療にとって重要である。すでに説明したように、
ＬＤＬは、アポ蛋白がＢ-１００のみであり、ＬＤＬを
構成する脂質成分が変性を起こすとアポ蛋白Ｂ-１００
の陰性荷電の量が変化する。そのため、変性脂質を持つ
ＬＤＬ（以下、変性ＬＤＬともいう）を含む試料を等電
点で電気泳動し分離させると、変性ＬＤＬは標準試料
（変性脂質を含まないと仮定する試料）のＬＤＬと異な
る移動度を示す。本発明者は、正常ＬＤＬと変性ＬＤＬ
との移動度の違いに着目して、以下に説明するような電
気泳動法を用いたリポ蛋白分離分析法を発明した。

【００５４】＜電気泳動法を用いたリポ蛋白の分離およ
び分析＞本発明にもとづくリポ蛋白分離分析法に適用さ
れる電気泳動法は、例えばアガロースまたはセルロース
・アセテートを主成分とする支持体を用いることが可能
である。ここでは、アガロースを支持体として用いる電
気泳動法について説明する。アガロースは、分子が互い
に水素結合して網目構造を持ち、溶液の調製が容易であ
ること、無毒であること、泳動後の抽出操作が容易であ
ること、などの理由から、核酸およびタンパク質の電気
泳動における支持体として用いられている。

【００５５】本発明では、リポ蛋白の脂質分離を可能に
する支持体のアガロース濃度を検討した結果として、ト
リス・バルビタール、バルビタールソーダ・トリシンな
どの緩衝液にアガロースを０．５％（Ｗ／Ｗ）〜１．２
％（Ｗ／Ｗ）までの濃度範囲で溶解させて作製した支持
体を使用した。

【００５６】また、長さ１２０ｍｍ、幅１３０ｍｍ、膜
厚５００μｍのアガロース薄膜を支持体として使用した
場合、電気泳動の際の印加電圧は３００〜５００Ｖ、３
０〜７０ｍＡ程度とする。ただし、電気泳動中のアガロ
ース支持体の温度は、一般に１０℃〜２５℃の範囲にお
いて一定でなければならない。また、その支持体上の温
度分布は、好ましくは±１℃以内、より好ましくは±
０．５℃以内である。なぜなら、温度によって移動度が
変化するためである。

【００５７】本発明で使用するアガロース支持体には、
０．０１％〜０．５％、好ましくは０．０４％〜０．２
％の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）が含まれる。なぜな
ら、血清中の遊離脂肪酸が一定量以上になると、ＨＤ
Ｌ，ＶＬＤＬ，ＬＤＬなどの分離速度に影響を与える
が、ＢＳＡを支持体に含ませておくことにより、分離速
度の変化を防ぐことができるからである。

【００５８】電気泳動装置の方式としては水平型と垂直
型とが知られているが、どちらを使用してもよい。しか
し、本発明では、水平型の電気泳動装置を用いた場合に
ついて説明する。なお、本発明では電気泳動装置とし
て、ＨＥＬＥＮＡ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＣＯＰ
ＯＲＡＴＩＯＮ（米国）のＲＥＰを使用したが、これに
限定されるものではない。

【００５９】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析法の原
理について、図１を参照しながら説明する。図中、参照
符号１００はアガロース支持体上に形成された電気泳動
図（以下、単に泳動図ともいう）、参照符号１０１は支
持体に形成された試料孔（塗布点ともいう）、さらに参
照符号１０２および１０３はデンシトメータ（これにつ
いては後述する）と支持体との位置合わせに利用される
セットピン穴である。この図では、５つの試料孔１０１
に塗布されたそれぞれ異なる５種類の試料を電気泳動す
ることによって得られた５通りの泳動パターンが示され
ている。

【００６０】まず、第１の試料と第２の試料とにもとづ
いたリポ蛋白分離分析の一例を説明する。第１の試料
（以下、標準試料（１）ともいう）は、標準血清であ
る。すなわち、心臓、血管疾患などの血清リポタンパク
に影響を及ぼす病気を罹患していない健康な若年層から
採取した平均的な血清であり、ＬＤＬの変性がないもの
と仮定する。図１では、この標準試料（１）を電気泳動
して得られるＬＤＬ（低比重リポタンパク質）、ＶＬＤ
Ｌ（超低比重リポタンパク質）、およびＨＤＬ（高比重
リポタンパク質）の各分画が示されている。なお、塗布
点１０１からＬＤＬ分画の中心位置までの距離を（ａ）
とする。

【００６１】第２の試料（以下、検体試料（２）ともい
う）は、心臓、血管疾患などの血清リポ蛋白に影響を及
ぼす病気に罹患している、またはその疑いがある患者か
ら採取した血清である。この血清は、ＬＤＬが変性して
いる可能性が高い。この検体試料（２）を電気泳動した
場合も第１の試料と同様に、ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、および
ＨＤＬの各分画が得られる。しかし、図に示すように、
検体試料（２）の各分画の移動度は標準試料（１）のも
のと異なる。ここでは、検体試料（２）の塗布点１０１
からＬＤＬに相当する分画（以下、単にＬＤＬ分画とも
いう）１０４の中心位置までの距離を（ｂ）とする。

【００６２】検体試料（２）のＬＤＬ分画１０４は、Ｌ
ＤＬが変性している場合、該変性ＬＤＬを構成するアポ
蛋白Ｂ−１００の陰性荷電が、標準試料（１）の正常Ｌ
ＤＬのものに比べて増加していると思われる。よって、
変性ＬＤＬの分離速度は正常ＬＤＬの分離速度よりも速
いため、距離（ｂ）＞距離（ａ）となる。したがって、
例えば、距離（ｂ）の距離（ａ）に対する相対移動率
｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝を求め、距離（ａ）と距離（ｂ）と
を比較することにより、検体試料（２）に含まれるＬＤ
Ｌの変性の度合いまたはＬＤＬ中に含まれる所定成分の
変性の度合いを推定することができる。ここで、前記所
定成分とは、リポ蛋白中に含まれるコレステロールなど
の特定な脂質類、またはアポ蛋白などの蛋白質を意味す
る。

【００６３】ＬＤＬまたは該ＬＤＬ中に含まれる所定成
分の「変性の度合い」とは、ＬＤＬまたは脂質など所定
成分の変性を後述する変性の割合、変数度数、分類記
号、百分率などで示したものを含む。また、相対移動率
そのもので表示したものも含まれる。

【００６４】変性の度合いの表示形式の一例を説明す
る。検体試料（２）に含まれるＬＤＬが変性していない
場合、（ｂ）＝（ａ）となり、相対移動率｛ｚ（＝ｂ／
ａ）｝は１である。したがって、相対移動率（ｚ）から
１を減ずることにより、検体試料の変性の割合（Ｍ）を
求めることが可能である。すなわち、式： Ｍ ＝ ｂ／ａ − １＝（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（１） に相対移動率（ｚ）を代入することにより検体試料の変
性の度合いを変性の割合（Ｍ）として表示することが可
能となる。上式（１）によると、検体試料（２）が変性
していない場合の相対移動率（ｚ）は１であるため、検
体試料の変性の割合（Ｍ）は０となる。（Ｍ）＞０の場
合、ＬＤＬは変性ＬＤＬと判断され、また（Ｍ）＜０の
場合も同様にＬＤＬに何らかの異常が生じた変性ＬＤＬ
と判断される。一般に、Ｍの値が負になる場合は、肝・
胆道疾患などの疑いがある。

【００６５】変性の度合いは、上記（１）に所定の定数
（ｋ）を適宜選択的に使用して、式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ／ａ − １）＝ｋ（ｂ−ａ）／ａ ・・・・（２） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］にしたがって、整数表示
の変数度数（Ｍ’）で表示することもできる。

【００６６】その他、データを何段階に分類するかなど
の適宜選択される処理方法に応じて、変性の度合いを
大、中、小などの分類表示記号で表示することもでき
る。さらに別の表示形式として、百分率｛（ａ）／（ａ
＋ｂ）｝によって表示する場合は、標準試料（１）の塗
布点からＬＤＬの距離（ａ）の割合からＬＤＬの変性の
度合いを見ることもできる。

【００６７】また、 肝・胆道疾患の疾患分別に、各疾
患に対応した変性ＬＤＬを含む試料と標準試料（１）と
の相対移動度および変性の度合いに関するデータを、例
えば後述するコンピュータの記憶装置に蓄積しておけ
ば、検体試料（２）の距離（ｂ）の値と標準試料（１）
の距離（ａ）の値とをコンピュータに入力し、蓄積され
たデータと比較することにより、検体試料（２）に対応
する疾患の判断することが可能となる。

【００６８】次に、標準試料（１）の代わりに指標試料
として第３の試料（以下、コントロール（３））を用い
た場合について説明する。このコントロール（３）は、
ヒト血清からなるもので、例えば、以下のようにして調
製する。すなわち、総コレステロールと総トリグリセラ
イド値とが正常範囲にある新鮮な血清を集め、安定化剤
として１００ｍｇのＥＤＴＡ・２Ｎａ・２Ｈ₂Ｏと２５
ｇのサッカロースとの混合物を血清１０ｃｃに対して
２．５ｇの割合で加える。次いで、これらを小分けして
凍結乾燥して保存するか、−２０℃で冷凍保存する。凍
結乾燥して保存したコントロール（３）は、コントロー
ル（３）と同体積の蒸留水または精製水などで溶かして
使用する。また、冷凍保存したコントロール（３）は、
室温で溶かして使用する。

【００６９】このようにして調製されたコントロール
（３）を電気泳動すると図１に示すような泳動図が得ら
れる。そこで、標準試料（１）が入手できなくても事前
にコントロール（３）のＬＤＬに相当する分画（以下、
単にＬＤＬ分画ともいう）１０５の移動距離と試料
（１）のＬＤＬ分画の移動距離との相対移動率を求めて
おくことにより、換算して変性の度合いを求めることも
できる。

【００７０】例えば、塗布点からＬＤＬ分画の中心位置
までの距離を標準試料（１）では（ａ）、検体試料
（２）では（ｂ）、さらにコントロール（３）では
（ｃ）とすれば、標準試料（１）に対するコントロール
（３）の相対移動率（ｚ₁）は｛ｚ₁（＝ｃ／ａ）｝（す
なわち、ａ＝ｃ／ｚ₁）で表される。一方、標準試料
（１）に対する検体試料（２）の相対移動率（ｚ₂）は
｛ｚ₂（＝ｂ／ａ）｝で表される。したがって、｛ｚ
₂（＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝となり、標準試料（１）の距離
（ａ）が測定できなくても、コントロール（３）との相
対移動率（ｚ₁）が予め分かっていれば、コントロール
（３）の距離（ｃ）と検体試料（２）の距離（ｂ）とを
測定することにより、相対移動率（ｚ₂）を求めること
ができる。また、得られた相対移動率（ｚ₂）を先に示
したように任意に処理して、変性の度合いを求めること
ができる。

【００７１】次に、標準試料（１）またはコントロール
（３）の代わりに、指標試料としてマーカーとなるアル
コール脱水素酵素を用いた場合について説明する。

【００７２】図１において、第４の試料（以下、試料
（４）ともいう）は、検体に馬由来のアルコール脱水素
酵素からなるマーカー（指標試料）を添加し調製した試
料である。また第５の試料（以下、試料（５）ともい
う）は、検体に細菌由来のアルコール脱水素酵素からな
るマーカーを添加し調製した試料である。

【００７３】馬または細菌由来のアルコール脱水素酵素
からなるそれぞれのマーカーは、アルコール脱水素酵素
を硫酸アンモニウム懸濁溶液として、試料５０μＬに対
して１μＬのアルコール脱水素酵素を加えた時にコレス
テロール濃度で８０ｍｇ／ｄＬ程度の発色量となるよう
に、それぞれの酵素と硫酸アンモニウムとの混合量を調
整しておく。また、リポ蛋白中に含まれるコレステロー
ルの変性の度合いを検討する場合において、アルコール
脱水素酵素からなるマーカーを発色させるために、コレ
ステロール測定試薬（例えば、Ｋ．Ｋ．ＨＥＬＥＮＡ
ＫＥＮＫＹＵＪＹＯ（日本）から市販されているＴＩＴ
ＡＮ ＧＥＬ Ｓ ＣＨＯＬＥＳＴＥＲＯＬ．）１ｍＬ
に、１μＬのエタノールをアルコール脱水素酵素の基質
として加えて使用する。その結果、コレステロール測定
試薬中のエタノールおよびＮＡＤと、試料中のアルコー
ル脱水素酵素とが反応することによって、ＮＡＤがＮＡ
ＤＨ⁺Ｈとなり、さらにコレステロール測定試薬中のジ
アホラーゼとテトラゾリウム塩とによって、コレステロ
ール測定試薬とコレステロールとが反応した場合と同様
にホルマザンを形成して発色する。なお、生成されるＮ
ＡＤＨは、蛍光測定試薬（例えば、Ｈｅｌｅｎａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｕ．
Ｓ．Ａ．）のＲＥＰ Ｆｌｕｒ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏ
ｌ Ｐｒｏｆｉｌｅ−Ｋｉｔ）を用いて蛍光測定するこ
とも可能である。

【００７４】このように調製された馬由来のアルコール
脱水素酵素または細菌由来のアルコール脱水素酵素から
なるマーカーと、検体とを混合して電気泳動すると、図
１のような泳動図が得られる。マーカーと検体とからな
る試料（４）を用いた場合、マーカーが検体から分離し
て、塗布点に対して検体に含まれるＬＤＬ分画１０４と
は反対側に位置するマーカーに相当する分画１０６が得
られる。この分画１０６を、すでに説明した標準試料
（１）のＬＤＬ分画に相当する分画とみなす。試料
（５）を用いた場合も同様に、ＶＬＤＬ分画とＨＤＬ分
画との間に生じたマーカーに相当する分画１０７を標準
試料（１）のＬＤＬ分画に相当する分画とみなす。

【００７５】どちらの場合も、事前に標準試料（１）の
距離（ａ）と、試料（４）または（５）の塗布点からの
マーカー分画の中心位置までの距離（ｃ）との相対移動
率を求めておくことによって、上記コントロール（３）
を用いた場合と同様にして検体における変性ＬＤＬの変
性の度合いを検討することができる。なお、試料（４）
の場合は、マーカーに相当する分画を加算せずに、他の
各分画の定量を容易に行うことができるといった長所が
ある。また、試料（５）の場合には、電気泳動中の温度
管理を厳しく行わなくとも良いといった長所がある。

【００７６】なお、馬または細菌由来のアルコール脱水
素酵素からなるマーカーを、コントロール（３）に加え
て使用することもできる。

【００７７】以上、本発明にもとづくリポ蛋白分離分析
法の原理について図１参照しながら説明した。しかし、
変性の度合いは、標準試料または指標試料と検体試料と
の比較に限らず、同一試料間の変性の度合いについて検
討することもできる。例えば、in vitroにおける検体試
料の変性を元の同一検体試料に対する変性度として求め
る場合には、元の同一検体試料を標準試料として使用
し、相対移動率の項に「１」を入力して測定すればよ
い。

【００７８】以上説明したアガロース支持体を用いた電
気泳動法によるリポ蛋白分離分析法は、以下のように構
成されるシステムによって実施することができる。

【００７９】＜リポ蛋白分離分析システムの構成および
動作＞図２は、本発明によるリポ蛋白分離分析システム
の一構成例を示す図である。リポ蛋白分離分析システム
は、リポ蛋白の分離を行う自動電気泳動装置２０１と、
該自動電気泳動装置２０１によって得られた泳動図を読
み取るデンシトメータ２０６と、自動電気泳動装置２０
１およびデンシトメータ２０６の動作を制御し、かつデ
ンシトメータ２０６からのデーターを本発明のリポ蛋白
分離分析法にもとづいて処理し、その処理結果を表示画
面、記憶媒体、記憶装置、プリンタなどに出力または格
納するコンピュータ本体２０４とから概略構成される。

【００８０】自動電気泳動装置２０１は、一般に使用さ
れる電気泳動装置と同様の構成からなるもので、試料台
２１４、アプリケータ２１２、試薬瓶立て２１８、およ
び電気泳動槽２１６を有する。

【００８１】デンシトメータ２０６は、電気泳動によっ
て分画された各成分の濃度を光の吸収と反射とを利用し
て測定する機器であり、コンピュータ本体２０４に接続
されており、その動作はコンピュータによって制御され
ている。

【００８２】コンピュータは、コンピュータ本体２０
４、入力装置（キーボード２０３、マウス２０８）、表
示装置（ＣＲＴ）２０２、および出力装置（プリンタ）
２０５を備える。なお、図中の参照符号２０７は電気泳
動装置２０１に電力を供給するための電源である。

【００８３】次に、上記のように構成されるリポ蛋白分
離分析装置の動作について説明する。

【００８４】まず、はじめに自動電気泳動装置２０１を
使用したリポ蛋白の分画化と該リポ蛋白の泳動図の作製
を行う。なお、本発明に特徴的な点を除いて電気泳動法
の一般的な操作は当業者によく知られたものであること
から、説明を簡潔に行うことにする。

【００８５】試料の展開は、図１に示すように、標準試
料（１）と検体試料（２）との組み合わせ、検体試料
（２）とコントロール（３）との組み合わせで行うこと
ができる。また、マーカを含む試料（４）あるいは試料
（５）の場合は、それぞれ検体試料（２）と混合して単
独で行うことができる。

【００８６】以下、図２に示すリポ蛋白分離分析装置シ
ステムを用いたリポ蛋白分離分析の一例を説明する。

【００８７】まず、所定量のアガロース溶液を固化させ
ることで、電気泳動装置の支持体に用いるアガロース薄
膜を作製する。この際、アガロース薄膜を所望の形状に
作製するために、セットピン穴１０２および１０３（図
１）に対応する穴が開けられたプラスチック薄膜と、こ
れらの穴に対応し、かつ位置合わせを可能にするピンが
設けられた金型とを使用する。この電気泳動装置では、
アガロースの支持体が電気泳動用の緩衝液を保持できる
ような形状になっている。そのため、金型は、緩衝液を
保持する電極部分は厚く、また試料塗布部に試料孔１０
１が出来るようにパターン化されている。このような金
型のピンに、上記プラスチック薄膜のセットピン穴１０
２および１０３に対応する穴を合わせて、平板で上から
押さえ、次いで金型にアガロース溶液を流し込み、固化
させることによってアガロース薄膜が作製される。な
お、アガロース薄膜は、予め作製して保存しておいたも
の、またはＫ．Ｋ．ＨＥＬＥＮＡ ＫＥＮＫＹＵＪＹＯ
（日本）から市販されているＲＥＰ ＬＩＰＯ ３０
ＰＬＡＴＥなどの既製品を使用してもよい。

【００８８】次に、図２の電気泳動槽２１６において、
分析に用いるアガロース薄膜の２カ所のセットピン穴１
０２および１０３（図１）を、電気泳動槽２１６のセッ
トピン（不図示）に差し込み、該電気泳動槽２１６の床
に密着させる。両端が磁性体の試薬展開棒と電極棒とを
アガロース薄膜（電気泳動用の支持体）に触れるように
して、磁石である電極に吸着させておき、電気泳動槽の
ドアを閉める。 試薬瓶立て２１８にコレステロール試
薬瓶を準備して、試料台２１４に試料を採る。

【００８９】上述のように電気泳動の準備が終了した
後、電気泳動が開始されて泳動図の作製が行われる。以
下に泳動図の作製手順を、図３を参照しながら説明す
る。

【００９０】先ず、はじめにキーボード２０３から泳動
開始の指示を入力する。そのことにより、コンピュータ
から電気泳動装置に泳動開始の指示が送られる。

【００９１】コンピュータ本体２０４から泳動開始の指
示を自動電気泳動装置２０１が受けると、試料台２１４
の試料が試料溝１０１に注入される（Ｓ３０１）。

【００９２】次に、アガロース薄膜に電圧が印加されて
電気泳動が開始する（Ｓ３０２）。

【００９３】所定の時間が経過して、電気泳動が終了し
た後、コレステロール測定試薬などの発色試薬の展開を
行い（Ｓ３０３）、アガロース薄膜に発色試薬を含ま
せ、所定の時間および所定の温度（例えば３０℃）で反
応させることにより、アガロース薄膜を染色する（Ｓ３
０４）。なお、コレステロール成分を検出する発色試薬
としては、Ｋ．Ｋ．ＨＥＬＥＮＡ ＫＥＮＫＹＵＪＹＯ
（日本）から市販されているＴＩＴＡＮ ＧＥＬ Ｓ
ＣＨＯＬＥＳＴＥＲＯＬなどのコレステロール測定試薬
を使用することができる。

【００９４】次いで、染色されたアガロース薄膜を５パ
ーセント酢酸で固定して（Ｓ３０５）、乾燥を行う（Ｓ
３０６）。このような作業の結果、例えば図１に示すよ
うな泳動図が得られる。

【００９５】上述のような手順により泳動図を得た後、
アガロース薄膜上に現れた泳動図を構成する各分画の濃
度および位置をデンシトメータ２０６で読み取る。

【００９６】泳動図が描かれたアガロース薄膜をデンシ
トメータ２０６（図２）にセットする。すなわち、泳動
図送り５２２（図５）のピンと、アガロース薄膜のセッ
トピン穴１０２および１０３（図１）とを位置合わせす
る。泳動図の走査（スキャン）条件の設定は、コンピュ
ータ本体２０４に接続されたＣＲＴ２０２に表示される
画面上で行うことができる。そのような画面の一例を図
４に示す。コンピュータ本体２０４に格納されたプログ
ラミング（所定のアプリケーション）を読み出し、図４
に示すような走査条件設定画面（すなわち、スキャンパ
ラメータ設定画面４０１）をＣＲＴ２０２（図２）に表
示させる。スキャンパラメータ設定画面４０１におい
て、項目名４０２から検査しようとする項目の名称を選
択し、次いで、スキャン４０３を指示することにより測
定が開始される。この画面上では、検査項目名４０２で
「コレステロール」が選択されている。さらに詳しいス
キャン条件の設定は、画面下部のパラメータ設定部４０
４で行い、各パラメータ（条件）の入力には、マウス２
０８およびキーボード２０３（図２）を利用する。予め
設定されたデフォルトを用いてもよい。このデフォルト
を変更する必要がない場合は、スキャンシークエンス
（スキャンＳｅｑ．）４０５（図４）を入力するだけで
よく、スキャン・ボタン４０３をマウス２０８（図２）
でクリックするか、事前に定めたキーボード２０３上の
ショートカットキーを押す。

【００９７】デンシントメータ２０６（図２）による泳
動図のスキャンを開始すると、泳動図がデンシトメータ
内を搬送される速度のデータと、デンシトメータ２０６
で検出される泳動図を透過する光量の変化のデータとが
コンピュータ本体２０４に入力される。そして、それら
のデータをもとにコンピュータ本体２０４によって泳動
図を構成する各分画の相対位置および濃度が計算され
る。これらの過程について、図５を参照しながら以下に
詳細に説明する。

【００９８】図５は、デンシトメータおよびコンピュー
タの構成を説明するためのブロック図である。以下、説
明を容易にするために、検体試料（２）とコントロール
（３）とを組み合わせて電気泳動した場合について説明
する。

【００９９】まず、はじめに、上記のように測定の準備
が完了してスキャン・ボタン４０３が押されると測定が
開始される。光学系５２４（図５）から発せられたビー
ム測定光（図中矢印Ｂ）はスリット（不図示）を通って
泳動図１００を通過する。ビーム測定光Ｂが泳動図１０
０を通過することにより光量の一部が泳動図１００に吸
収され測定光Ｂが変化し、この変化量が起電力の変化と
して受光素子５２６で捕らえられる。受光素子５２６で
捕らえた変化量を対数増幅器５２８で対数増幅して、Ａ
／Ｄ変換器５３０でデジタル値に変換し、コンピュータ
２０４に内蔵された記録媒体（例えば、ハードディス
ク）に格納する。検査結果の出力を指示することによ
り、スキャン方向の横軸に対して積分値を縦軸としたグ
ラフ５３２をＣＲＴ２０２上に表示したり、プリンタ２
０５に出力することができる。また、コンピュータ２０
４は、波形の積分値にもとづいて、各分画を百分率に変
換して、すでに求められている総濃度から各分画の濃度
を求めることもできる。なお、泳動図送り５２２のピン
と泳動図のセットピン穴１０２，１０３（図１）とは一
致しており、かつ試料の塗布位置はセットピン穴１０
２，１０３で規定されるので、試料の塗布点は常に同じ
位置に設定される。

【０１００】コレステロール測定試薬によって染色され
た、コレステロールを含むリポ蛋白の各分画は、発色試
薬に依存する特定の吸光スペクトルを示すようになる。
例えば、Ｋ．Ｋ．ＨＥＬＥＮＡ ＫＥＮＫＹＵＪＹＯ
（日本）から市販されているＴＩＴＡＮ ＧＥＬ Ｓ
ＣＨＯＬＥＳＴＥＲＯＬなどのコレステロール測定試薬
を用いてコレステロールを検出すると、リポ蛋白中のコ
レステロール成分とコレステロール測定試薬中の成分と
が反応してホルマザンが形成される。したがって、ホル
マザンの吸収スペクトルに相当する５７０ｎｍの波長で
泳動図をスキャンすることができる。得られたリポ蛋白
分画（コレステロール）に関するグラフは、ハードディ
スクなどの記録媒体に格納される。このようにして記録
媒体に格納されたリポ蛋白分画に関するグラフの一例
を、図１０から図１２に示す（これらについては後述す
る）。

【０１０１】コンピュータ本体２０４は、泳動図送り５
２２と同期がとれており、泳動図送りの位置情報を得て
いる。 キーボード２０３はコンピュータ本体２０４へ
の指示またはデータの入力を行う際に使用される。プリ
ンター２０５は、検査結果の報告書作成時に使用され
る。Ｉ／Ｏ変換器５３４は、外部コンピュータの端末機
器とのデータのやりとりなどの交信のために使用され
る。

【０１０２】図６および図７は、コンピュータに接続さ
れたＣＲＴ２０２上に表示される画面であり、塗布位
置、コントロール値（データ）などの入力や登録を行う
画面である。

【０１０３】塗布位置６０４（図６）をマウス２０８
（図２）でクリックして電気泳動用の支持体における試
料の塗布点を設定する。 例えば、リポ蛋白分画として
コレステロールの分画測定を行う場合には、項目名６０
１で「コレステロール」を指示する。次いで、スキャン
開始（begin）６０２、スキャン終了（end）６０３にデ
ータを入力する。光学系のスリット状ビーム光を泳動図
１００の塗布点１０１（図１）と一致させ、塗布位置６
０４をマウス２０８（図２）でクリックすると、塗布位
置６０７（図６）に塗布位置のデータ、例えば数字「１
５９０」が表示される。ただし、塗布位置６０７に表示
される数字（ここでは「１５９０」）は、スキャン開始
６０２に表示される数字「２００３」とスキャン終了６
０３に表示される数字「１５３５」との間に入る数字で
なければならない。

【０１０４】同一項目について同一の設定位置を採用す
る場合には、ステップコピー６０６をマウス２０８（図
２）でクリックして全ステップ番号を指示し、登録６０
８（図６）をクリックして登録を指示する。かかる操作
によりコンピュータの記録媒体にデータが記録されるの
で、その後、同一項目、ここでは「コレステロール」の
分画測定を行う場合には、再度の入力は不要である。確
認ボタン６０５をマウス２０８（図２）でクリックする
と、スリット状ビーム光が塗布点位置に移動して、正確
に塗布位置を捕らえているか否かが確認できる。

【０１０５】コントロール登録６０９（図６）をマウス
２０８（図２）でクリックすると、図７のコントロール
値入力メニューが開く。

【０１０６】次に、図７で示される画面に相対移動率７
０１（図７）のデータ（ここでは「１．１２５」）、お
よびＬＤＬの距離７０２（ここでは「６４」）を入力す
る。ここで、相対移動率７０１は、予め求められた、標
準試料（１）における値（ａ）に対するコントロール
（３）における値（ｃ）の比を示す。また、ＬＤＬの距
離７０２は、コントロール（３）の塗布点からＬＤＬ分
画の中心位置までの距離（ｃ）を示すものである。この
ＬＤＬの距離７０２は電気泳動用の支持体として使用可
能な各種薄膜間の微妙な違いを補正する目的のためにも
使用される。それぞれの値を入力した後に、登録７０３
をマウス２０８（図２）でクリックすれば、コンピュー
ター本体２０４にデータが登録され、変性度数が求めら
れる。

【０１０７】次に、ＬＤＬの変性度数を求める２つの方
法について具体的に説明する。

【０１０８】第１の方法を図８に示したフローチャート
にしたがって説明する。例えば、標準試料（１）の塗布
点からのＬＤＬ分画の中心位置までの移動距離（ａ）が
（ａ）＝５５ドッド（Ｓ８０１）、検体の塗布点からの
ＬＤＬ分画の中心位置までの移動距離（ｂ）が（ｂ）＝
７０ドッド（Ｓ８０２）であるとする。この場合、検体
の相対移動率（ｚ）は｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝＝１．２７３
となる（Ｓ８０３）。なお、本明細書中で使用する「ド
ット」という用語は、例えば、測定範囲（走査範囲）が
２５６ドットと定められていれば、測定範囲を２５６分
割することを意味する。

【０１０９】ＬＤＬが変性されていない検体の相対移動
率は「１」であるから、変性の割合は「１．２７３−１
＝０．２７３」となる。この値「０．２７３」を所定の
数値で割り算することにより、変性度数を求めることが
できる（Ｓ８０４）。ただし、この変性の割合「０．２
７３」を変性度数で表すのために何段階に分割するのが
適当であるかを予め定めておき、１分割当たりの範囲を
所定の数値としてプログラムに組み込んでおく必要があ
る。例えば、１分割当たりの範囲を「０．１」とすれ
ば、変性の割合「０．２７３」は変性度数「２．７３」
と表される（Ｓ８０５）。

【０１１０】また、例えば大、中、小などの適当な分類
表示記号を用い、これらの記号に対応する数値範囲をそ
れぞれ適宜定めておくことによって、先に得られた数値
（ここでは「０．２７３」）をその数値が該当する、
大、中、または小の記号で表示することもできる。ま
た、得られた数値を百分率として表示することもでき
る。

【０１１１】次に、第２の方法を図９に示したフローチ
ャートにしたがって説明する。例えば、検体の塗布点か
らのＬＤＬ分画の中心位置までの距離（ｂ）が（ｂ）＝
７０ドット（Ｓ９０１）、コントロール（３）の塗布点
からのＬＤＬ分画の中心位置までの距離（ｃ）が（ｃ）
＝６０ドット（Ｓ９０２）、コントロール（３）の相対
移動率（ｚ₁）が｛ｚ₁（＝ｃ／ａ）｝＝１．１２５（Ｓ
９０３）である場合について、検体のＬＤＬの変性度数
を求める。

【０１１２】標準試料の塗布点からのＬＤＬ分画の中心
位置までの距離（ａ）は、｛ａ（＝ｃ／１．１２５）｝
＝５３ドット、検体試料と標準試料の相対移動率
（ｚ₂）は｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝＝７０／
５３＝１．３２となる。したがって、変性ＬＤＬを含ま
ない検体試料の相対移動率は１であるから、変性の割合
は「１．３２−１＝０．３２」となる（Ｓ９０４）。こ
の後、上記第１の方法と同様にして検体試料の変性の割
合を変性度数に変換する（図中、Ｓ９０５に対応）。１
分割当たりの範囲を「０．０８」とすれば、変性度数
「４」と表される（Ｓ９０６）。

【０１１３】なお、上述した例示は一例であり、適当な
条件を定めることにより、いかなる表示をすることも可
能である。

【０１１４】図１０から図１２は、デンシトメータで得
られた情報をコンピュータによって分析した結果を示す
グラフ（コレステロールの濃度および位置分布）が表示
されたＣＲＴ画面を示す図である。図中のグラフでは、
横軸は分画展開位置を表し、縦軸は光学密度または吸光
度を表す。また、画面上のグラフに隣接する部分には、
コレステロールを含むＨＤＬ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬなどの
割合と濃度の分析結果が表示されており、その下部に
は、ＨＤＬとＬＤＬとの比が示されている。

【０１１５】まず、図１０について説明する。この図
は、検体試料（２）に変性ＬＤＬが含まれない（標準試
料（１）に相当する）場合を示す。図中、グラフ１００
４中の直線１００１は塗布点の位置を示し、直線１００
２は変性のない標準試料（１）のＬＤＬ分画の中心位置
（波形のピーク位置）、および検体試料（２）のＬＤＬ
分画の中心位置（波形のピーク位置）を示す。１００３
には変性度数が表示されるが、図１０においては標準試
料（１）ＬＤＬ分画の中心位置と検体試料のＬＤＬ分画
の中心位置とが重なっているので、変性度数はゼロを示
している。

【０１１６】次に、図１１は検体試料（２）に変性ＬＤ
Ｌが含まれる場合を示す。図中、グラフ１１０５中の直
線１１０１は塗布点の位置を示し、直線１１０２は標準
試料（１）のＬＤＬ分画の中心位置（波形のピーク位
置）を示し、直線１１０３は検体試料（２）のＬＤＬ分
画の中心位置（波形のピーク位置）を示す。変性度数１
１０４は、「＋８６」と表示されているため、ＬＤＬは
変性されていることが分かる。

【０１１７】さらに、図１２は検体試料に変性ＬＤＬが
含まれ、さらにその変性度数が負の値となる場合を示
す。図中、グラフ１２０５中の直線１２０１は塗布点の
位置を示し、直線１２０２は標準試料（１）のＬＤＬ分
画の中心位置（波形のピーク位置）を示し、直線１２０
３は検体試料（２）のＬＤＬ分画の中心位置（波形のピ
ーク位置）を示す。検体試料（２）のＬＤＬ分画の中心
位置よりも標準試料（１）におけるＬＤＬ分画の中心位
置の方が左側にある。すなわち、塗布点からその中心位
置までの距離が長いので、変性度数１２０４は、「−４
２」と負の値になっている。変数度数の負の値は、検体
試料（２）のＬＤＬの泳動速度が、標準試料（１）のＬ
ＤＬの泳動速度よりも遅い事を示しており、肝・胆道疾
患などで出現する異常ＬＤＬの検出に役立つ。

【０１１８】このように電気泳動によるリポ蛋白の分離
分析結果を用いて自動的にＬＤＬの変性度数が求められ
ると、診断やそれに応じた食事療法や薬物療法の方針が
たてやすい。

【０１１９】なお、上記の画面に表示されたグラフは、
オペレータの指示によりプリンタ２０５（図２）から出
力することができる。上述の説明では、血清中のリポ蛋
白分離分析法を、該リポ蛋白に含まれるコレステロール
の分画位置および濃度に着目して説明した。しかし、本
発明はコレステロールに限定されるものではなく、他の
脂質成分あるいはタンパク質成分に着目することが可能
であることはいうまでもない。

【０１２０】また、本明細書では、アガロース電気泳動
法による血清試料の分離分析に関する事例により、本発
明のリポ蛋白分離分析法について説明した。しかし、本
発明のリポ蛋白分離分析法を、セルロース・アセテー
ト、寒天などの、支持体となり得る種々の薄膜を用いた
電気泳動装置により分離された試料などに対しても適用
できる。

【０１２１】また本発明のリポ蛋白分離分析法は、各種
薄膜を用いた電気泳動のみならず、キャピラリ電気泳動
装置を使用した場合についても適用することができる。
キャピラリ電気泳動装置を使用する場合は、標準試料ま
たは指標試料の分離を検体試料の分離の前または後に行
い、各試料の塗布位置からＬＤＬ分画の中心位置までの
距離または分離時間から相対移動度を求め、次いで、先
に説明したような手順にしたがってリポ蛋白の分離分析
を実施することが可能である。また、通常、キャピラリ
電気泳動法で用いられる標準物質をマーカーとして使用
し、該標準物質と検体試料とを混合して電気泳動を行
い、先に説明したような手順にしたがってリポ蛋白の分
離分析を実施することも可能である。

【０１２２】

【発明の効果】以上説明したように、本発明にもとづく
リポ蛋白分離分析法、リポ蛋白分離分析装置、およびリ
ポ蛋白分離分析システムによれば、アポ蛋白の等電点の
違いに着目したリポ蛋白の電気泳動の結果から、リポ蛋
白中の所定成分、特に動脈硬化に関与する変性ＬＤＬの
変性の度合いを求めることができ、リポ蛋白中の所定成
分の量的または質的異常を容易かつ効果的に検討するこ
とができる。すなわち、再現性、定量性に優れ、操作法
が簡便で大量の検体を効率よく測定できる、臨床的に非
常に有効なリポ蛋白分離分析法、リポ蛋白分離分析装
置、およびリポ蛋白分離分析システムを提供することが
可能となる。さらに、本発明の分析結果を抗酸化剤の薬
効の経過観察に役立て治療効果を観察できるので治療方
針が立て易くなると共に医療費の削減に貢献することが
可能となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の原理を説明する図であって、電気泳動
法により得られた血清中のリポ蛋白の模式的泳動図であ
る。

【図２】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析法に適用さ
れる電気泳動装置、デンシトメータ、およびコンピュー
タから構成されるリポ蛋白分離分析システムを説明する
ための模式図である。

【図３】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析法に適用さ
れる電気泳動法による泳動図の作製過程を説明するため
のフローチャートである。

【図４】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析システムに
具備されたＣＲＴに表示される測定条件設定画面の模式
図である。

【図５】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析システムに
具備されたデンシトメータおよびコンピュータの構成を
説明するブロック図である。

【図６】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析システムに
具備されたＣＲＴに表示される画面の一例として、塗布
位置を表示設定するのに必要な条件を入力するＣＲＴ画
面を示す模式図である。

【図７】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析システムに
具備されたＣＲＴに表示される画面の一例として、マー
カーのデータを入力するＣＲＴ画面を示す模式図であ
る。

【図８】本発明にもとづく第１のリポ蛋白分離分析法を
説明するフローチャートである。

【図９】本発明にもとづく第２のリポ蛋白分離分析法を
説明するフローチャートである。

【図１０】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析システム
に具備されたデンシトメータにより得られた結果を、コ
ンピュータを介してグラフ化および数値化して表示した
ＣＲＴ画面を示す模式図である。

【図１１】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析システム
に具備されたデンシトメータにより得られた結果を、コ
ンピュータを介してグラフ化および数値化して表示した
ＣＲＴ画面を示す模式図である。

【図１２】本発明にもとづくリポ蛋白分離分析システム
に具備されたデンシトメータにより得られた結果を、コ
ンピュータを介してグラフ化および数値化して表示した
ＣＲＴ画面を示す模式図である。

【符号の説明】

１００ 電気泳動図 １０１ 塗布点、試料溝 １０２ セットピン穴 １０３ セットピン穴 １０４ ＬＤＬに相当する分画 １０５ ＬＤＬに相当する分画 １０６ マーカーに相当する分画 １０７ マーカーに相当する分画 ２０１ 自動電気泳動装置 ２０２ 表示装置（ＣＲＴ） ２０３ キーボード ２０４ コンピュータ ２０５ プリンタ ２０６ デンシトメータ ２０７ 電源 ２０８ マウス ２１２ アプリケータ ２１４ 試料台 ２１６ 電気泳動槽 ２１８ 試薬瓶立て ５２２ 泳動図送り ５２４ 光学系 ５２６ 受光素子 ５２８ 対数増幅器 ５３０ Ａ／Ｄ変換器 ５３２ グラフ ５３４ Ｉ／Ｏ変換器

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 27/26 ３０１Ｂ ３１５Ｆ ３２５Ａ

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 所定成分を有するリポ蛋白を含む標準試
   料の電気泳動図と、前記所定成分と同種の成分を有する
   リポ蛋白を含む検体試料の電気泳動図とを用いて、前記
   検体試料中の所定成分の変性の度合いを判断するリポ蛋
   白分離分析装置であって、 前記標準試料および前記検体試料の電気泳動を行い各試
   料のリポ蛋白を分画し、次いで前記各リポ蛋白中の各所
   定成分をそれぞれ染色により検出する試薬を用いて前記
   各所定成分を染色し、それにより前記各所定成分の可視
   化された各電気泳動図を作製する電気泳動図作製手段
   と、 前記各所定成分の可視化された各電気泳動図を光学的に
   スキャンして、該各電気泳動図を光学密度の波形に変換
   して前記各所定成分の各波形図を作製する波形図作製手
   段と、 前記各波形図を数学的に処理して前記検体試料中の所定
   成分の変性の度合いを判断する手段とを備えてなり、 前記所定成分の変性の度合いを判断する手段が、 前記標準試料の所定成分の波形図から、該標準試料の塗
   布点と該標準試料中の所定成分に対応する分画の中心位
   置との距離（ａ）を求める第１の手段と、 前記検体試料の所定成分の波形図から、該検体試料の塗
   布点と該検体試料中の所定成分に対応する分画の中心位
   置との距離（ｂ）を求める第２の手段と、 前記距離（ａ）と前記距離（ｂ）とを比較し、前記標準
   試料に対する前記検体試料の相対移動率｛ｚ（＝ｂ／
   ａ）｝を求める第３の手段とを備え、前記相対移動率
   （ｚ）にもとづいて前記検体試料中の所定成分の変性の
   度合いを判断することを特徴とするリポ蛋白分離分析装
   置。
2. 【請求項２】 前記所定成分の変性の度合いを判断する
   手段において、前記第３の手段によって求められた前記
   相対移動率｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝を式： Ｍ ＝ ｂ／ａ − １＝（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（１） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
   を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることを
   特徴とする請求項１に記載のリポ蛋白分離分析装置。
3. 【請求項３】 前記所定成分の変性の度合いを判断する
   手段において、前記第３の手段によって求められた前記
   相対移動率｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ／ａ − １）＝ｋ（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（２） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
   て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
   度数（Ｍ’）として求めることを特徴とする請求項１に
   記載のリポ蛋白分離分析装置。
4. 【請求項４】 前記所定成分は、低比重リポ蛋白である
   ことを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載のリ
   ポ蛋白分離分析装置。
5. 【請求項５】 前記電気泳動は、アガロースゲルを主成
   分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実施され
   ることを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載の
   リポ蛋白分離分析装置。
6. 【請求項６】 所定成分を有するリポ蛋白を含む標準試
   料の電気泳動図と、前記所定成分と同種の成分を有する
   リポ蛋白を含む検体試料の電気泳動図と、前記所定成分
   の指標と成り得るマーカー成分を含む指標試料の電気泳
   動図とを用いて、前記検体試料中の所定成分の変性の度
   合いを判断するリポ蛋白分離分析装置であって、 前記標準試料と前記検体試料と前記指標試料との電気泳
   動をそれぞれ行って各試料を分画し、次いで前記標準お
   よび検体試料の各分画中の所定成分と前記指標試料の分
   画中のマーカー成分とをそれぞれ染色により検出する試
   薬を用いて各成分を染色し、それにより前記各成分の可
   視化された各電気泳動図を作製する電気泳動図作製手段
   と、 前記可視化された各電気泳動図を光学的にスキャンして
   各電気泳動図を光学密度の波形に変換して前記各所定成
   分および前記マーカー成分の各波形図を作製する波形図
   作製手段と、 前記各波形図を数学的に処理して前記検体試料中の所定
   成分の変性の度合いを判断する手段とを備えてなり、 前記所定成分の変性の度合いを判断する手段は、第１の
   測定手段と第２の測定手段とを有し、これら２つの測定
   手段によって求めた前記検体試料の相対移動率にもとづ
   いて前記検体試料中の所定成分の変性の度合いを判断す
   る手段であり、 前記第１の測定手段は、 前記標準試料の波形図から、前記標準試料の塗布点と該
   標準試料中の所定成分に対応する分画の中心位置との距
   離（ａ）を求める第１の手段と、 前記指標試料の波形図から、前記指標試料の塗布点と該
   指標試料中のマーカー成分に対応する分画の中心位置と
   の距離（ｃ）を求める第２の手段と、 前記距離（ａ）と前記距離（ｃ）とを比較し、前記標準
   試料に対する前記指標試料の相対移動率｛（ｚ₁（＝ｃ
   ／ａ）｝を求める第３の手段とを備え、および前記第２
   の測定手段は、 前記検体試料の波形図から、前記検体試料の塗布点と該
   検体試料中の所定成分に対応する分画の中心位置との距
   離（ｂ）を求め、前記指標試料の波形図から、前記指標
   試料の塗布点と該指標試料中のマーカー成分に対応する
   分画の中心位置との距離（ｃ）を求める第４の手段と、 前記第１の測定手段によって求められた相対移動率（ｚ
   ₁）と、前記第２の測定手段によって求められた前記距
   離（ｂ）と前記距離（ｃ）とから、前記検体試料の前記
   標準試料に対する相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁
   ／ｃ）｝を求める第５の手段とを備えることを特徴とす
   るリポ蛋白分離分析装置。
7. 【請求項７】 前記所定成分の変性の度合いを判断する
   手段において、前記第５の手段によって求められた前記
   相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ＝ ｂ・ｚ₁／ｃ − １ ・・・・・（３） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
   を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることを
   特徴とする請求項６に記載のリポ蛋白分離分析装置。
8. 【請求項８】 前記所定成分の変性の度合いを判断する
   手段において、前記第５の手段によって求められた前記
   相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ・ｚ₁／ｃ − １） ・・・・・（４） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
   て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
   度数（Ｍ’）として求めることを特徴とする請求項６に
   記載のリポ蛋白分離分析装置。
9. 【請求項９】 前記指標試料はマーカーと成り得るアル
   コール脱水素酵素を含むことを特徴とする請求項６から
   ８のいずれかに記載のリポ蛋白分離分析装置。
10. 【請求項１０】 前記第２の測定手段において、前記第
    ４の手段が前記指標試料と前記検体試料とを混合してな
    る試料を電気泳動することにより前記距離（ｂ）と前記
    距離（ｃ）とを同時に求める手段であることを特徴とす
    る請求項９に記載のリポ蛋白分離分析装置。
11. 【請求項１１】 前記第１の所定成分は、低比重リポ蛋
    白であることを特徴とする請求項６から１０のいずれか
    に記載のリポ蛋白分離分析装置。
12. 【請求項１２】 前記電気泳動は、アガロースゲルを主
    成分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実施さ
    れることを特徴とする請求項６から１１のいずれかに記
    載のリポ蛋白分離分析装置。
13. 【請求項１３】 所定成分を有するリポ蛋白を含む標準
    試料の電気泳動図と、前記所定成分と同種の成分を有す
    るリポ蛋白を含む検体試料の電気泳動図とを用いて、前
    記検体試料中の所定成分の変性の度合いを判断するリポ
    蛋白分離分析法であって、 前記標準試料および前記検体試料の電気泳動を行い各試
    料のリポ蛋白を分画し、次いで前記各リポ蛋白中の各所
    定成分をそれぞれ染色により検出する試薬を用いて前記
    各所定成分を染色し、それにより前記各所定成分の可視
    化された各電気泳動図を作製する電気泳動図作製工程
    と、 前記各所定成分の可視化された各電気泳動図を光学的に
    スキャンして、該各電気泳動図を光学密度の波形に変換
    して前記各所定成分の各波形図を作製する波形図作製工
    程と、 前記各波形図を数学的に処理して前記検体試料中の所定
    成分の変性の度合いを判断する工程とを有してなり、 前記所定成分の変性の度合いを判断する工程が、 前記標準試料の所定成分の波形図から、該標準試料の塗
    布点と該標準試料中の所定成分に対応する分画の中心位
    置との距離（ａ）を求める第１の工程と、 前記検体試料の所定成分の波形図から、該検体試料の塗
    布点と該検体試料中の所定成分に対応する分画の中心位
    置との距離（ｂ）を求める第２の工程と、 前記距離（ａ）と前記距離（ｂ）とを比較し、前記標準
    試料に対する前記検体試料の相対移動率｛ｚ（＝ｂ／
    ａ）｝を求める第３の工程とを有し、前記相対移動率
    （ｚ）にもとづいて前記検体試料中の所定成分の変性の
    度合いを判断することを特徴とするリポ蛋白分離分析
    法。
14. 【請求項１４】 前記所定成分の変性の度合いを判断す
    る工程において、前記第３の工程によって求められた前
    記相対移動率｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝を式： Ｍ＝ ｂ／ａ − １＝（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（１） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
    を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることを
    特徴とする請求項１３に記載のリポ蛋白分離分析法。
15. 【請求項１５】 前記所定成分の変性の度合いを判断す
    る工程において、前記第３の工程によって求められた前
    記相対移動率｛ｚ（＝ｂ／ａ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ／ａ − １）＝ｋ（ｂ−ａ）／ａ ・・・・・（２） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
    て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
    度数（Ｍ’）として求めることを特徴とする請求項１３
    に記載のリポ蛋白分離分析法。
16. 【請求項１６】 前記所定成分は、低比重リポ蛋白であ
    ることを特徴とする請求項１３から１５のいずれかに記
    載のリポ蛋白分離分析法。
17. 【請求項１７】 前記電気泳動は、アガロースゲルを主
    成分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実施さ
    れることを特徴とする請求項１３から１６のいずれかに
    記載のリポ蛋白分離分析法。
18. 【請求項１８】 請求項１３から１７のいずれかに記載
    のリポ蛋白分離分析法を実行するためのプログラミング
    が格納されていることを特徴とする記録媒体。
19. 【請求項１９】 請求項１８に記載の記録媒体に格納さ
    れたプログラミングを実行するコンピュータと、該コン
    ピュータからの前記プログラミングにもとづいた命令に
    従って動作するリポ蛋白分離分析装置とを備えることを
    特徴とするリポ蛋白分離分析システム。
20. 【請求項２０】 所定成分を有するリポ蛋白を含む標準
    試料の電気泳動図と、前記所定成分と同種の成分を有す
    るリポ蛋白を含む検体試料の電気泳動図と、前記所定成
    分の指標と成り得るマーカー成分を含む指標試料の電気
    泳動図とを用いて、前記検体試料中の所定成分の変性の
    度合いを判断するリポ蛋白分離分析法であって、 前記標準試料と前記検体試料と前記指標試料との電気泳
    動をそれぞれ行って各試料を分画し、次いで前記標準お
    よび検体試料の各分画中の所定成分と前記指標試料の分
    画中のマーカー成分とをそれぞれ染色により検出する試
    薬を用いて各成分を染色し、それにより前記各成分の可
    視化された各電気泳動図を作製する電気泳動図作製工程
    と、 前記可視化された各電気泳動図を光学的にスキャンして
    各電気泳動図を光学密度の波形に変換して前記各所定成
    分および前記マーカー成分の各波形図を作製する波形図
    作製工程と、 前記各波形図を数学的に処理して前記検体試料中の所定
    成分の変性の度合いを判断する工程とを有してなり、 前記所定成分の変性の度合いを判断する工程は、第１の
    測定工程と第２の測定工程とを有し、これら２つの測定
    工程によって求めた前記検体試料の相対移動率にもとづ
    いて前記検体試料中の所定成分の変性の度合いを判断す
    る工程であり、 前記第１の測定工程は、 前記標準試料の波形図から、前記標準試料の塗布点と該
    標準試料中の所定成分に対応する分画の中心位置との距
    離（ａ）を求める第１の工程と、 前記指標試料の波形図から、前記指標試料の塗布点と該
    指標試料中のマーカー成分に対応する分画の中心位置と
    の距離（ｃ）を求める第２の工程と、 前記距離（ａ）と前記距離（ｃ）とを比較し、前記標準
    試料に対する前記指標試料の相対移動率｛ｚ₁（＝ｃ／
    ａ）｝を求める第３の工程とを有し、および前記第２の
    測定工程は、 前記検体試料の波形図から、前記検体試料の塗布点と該
    検体試料中の所定成分に対応する分画の中心位置との距
    離（ｂ）を求める第４の工程と、 前記指標試料の波形図から、前記指標試料の塗布点と該
    指標試料中のマーカー成分に対応する分画の中心位置と
    の距離（ｃ）を求める第５の工程と、 前記第１の測定工程によって求められた相対移動率（ｚ
    ₁）と、前記第２の測定工程によって求められた前記距
    離（ｂ）と前記距離（ｃ）とから、前記検体試料の前記
    標準試料に対する相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁
    ／ｃ）｝を求める第６の工程とを有することを特徴とす
    るリポ蛋白分離分析法。
21. 【請求項２１】 前記所定成分の変性の度合いを判断す
    る工程において、前記第６の工程によって求められた前
    記相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ＝ ｂ・ｚ₁／ｃ − １ ・・・・・（３） に代入することによって、前記所定成分の変性の度合い
    を前記所定成分の変性の割合（Ｍ）として求めることを
    特徴とする請求項２０に記載のリポ蛋白分離分析法。
22. 【請求項２２】 前記所定成分の変性の度合いを判断す
    る工程において、前記第６の工程によって求められた前
    記相対移動率｛ｚ₂（＝ｂ／ａ＝ｂ・ｚ₁／ｃ）｝を式： Ｍ’＝ ｋ（ｂ・ｚ₁／ｃ − １） ・・・・・（４） ［式中、ｋは定数（ｋ＞０）］に代入することによっ
    て、前記所定成分の変性の度合いを前記所定成分の変性
    度数（Ｍ’）として求めることを特徴とする請求項２０
    に記載のリポ蛋白分離分析法。
23. 【請求項２３】 前記指標試料はマーカーと成り得るア
    ルコール脱水素酵素を含むことを特徴とする請求項２０
    から２２のいずれかに記載のリポ蛋白分離分析法。
24. 【請求項２４】 前記第２の測定工程において、前記指
    標試料と前記検体試料とを混合した状態で電気泳動する
    ことにより、前記第４の工程と前記第５の工程とを同時
    に行うことを特徴とする請求項２３に記載のリポ蛋白分
    離分析法。
25. 【請求項２５】 前記第１の所定成分は、低比重リポ蛋
    白であることを特徴とする請求項２０から２４のいずれ
    かに記載のリポ蛋白分離分析法。
26. 【請求項２６】 前記電気泳動は、アガロースゲルを主
    成分とする支持体を用いる電気泳動装置によって実施さ
    れることを特徴とする請求項２０から２５のいずれかに
    記載のリポ蛋白分離分析法。
27. 【請求項２７】 請求項２０から２６のいずれかに記載
    のリポ蛋白分離分析法を実行するためのプログラミング
    が格納されていることを特徴とする記録媒体。
28. 【請求項２８】 請求項２７に記載の記録媒体に格納さ
    れたプログラミングを実行するコンピュータと、該コン
    ピュータからの前記プログラミングにもとづいた命令に
    従って動作するリポ蛋白分離分析装置とを備えることを
    特徴とするリポ蛋白分離分析システム。