JPH0656899A - 電気泳動によるＬｐ（ａ）の分離方法、この方法を実施するためのゲル、及びＬｐ（ａ）の存在に結び付けられる粥腫形成の危険のｉｎ ｖｉｔｒｏ決定のための適用 - Google Patents
電気泳動によるＬｐ（ａ）の分離方法、この方法を実施するためのゲル、及びＬｐ（ａ）の存在に結び付けられる粥腫形成の危険のｉｎ ｖｉｔｒｏ決定のための適用Info
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- JPH0656899A JPH0656899A JP4353387A JP35338792A JPH0656899A JP H0656899 A JPH0656899 A JP H0656899A JP 4353387 A JP4353387 A JP 4353387A JP 35338792 A JP35338792 A JP 35338792A JP H0656899 A JPH0656899 A JP H0656899A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 生物学的媒体中に含まれるＬｐ（ａ）及び種
々のリポタンパク質を電気泳動により分離する方法を提
供する。 【構成】 電気泳動用ゲル及び／又は前記生物学的媒体
がＬｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の
電気泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物を
含むような条件下でリポタンパク質を電気泳動により移
動させることを特徴とする。
々のリポタンパク質を電気泳動により分離する方法を提
供する。 【構成】 電気泳動用ゲル及び／又は前記生物学的媒体
がＬｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の
電気泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物を
含むような条件下でリポタンパク質を電気泳動により移
動させることを特徴とする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、電気泳動によるＬｐ
（ａ）の分離方法、この方法を実施するためのゲル、及
びＬｐ（ａ）の存在に結び付けられる粥腫形成の危険、
より特定的には個体がアテローム性動脈硬化症のような
疾患又はこの疾患に結び付けられる他の全病理に罹患す
る危険を決定するためのこの方法の適用に係る。
（ａ）の分離方法、この方法を実施するためのゲル、及
びＬｐ（ａ）の存在に結び付けられる粥腫形成の危険、
より特定的には個体がアテローム性動脈硬化症のような
疾患又はこの疾患に結び付けられる他の全病理に罹患す
る危険を決定するためのこの方法の適用に係る。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ヒト血
清又は血漿をアガロースゲル中で電気泳動させた後、脂
質を特異的に着色すると、種々のリポタンパク質フラク
ション、ＨＤＬ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びキロミクロンを
分離及び可視化することができ、これらのフラクション
の夫々の割合はアテローム性動脈硬化症の危険の重要な
指標となる（ＦＲＥＤＲＩＣＫＳＯＮ ｅｔ ａｌ．，
１９６７， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．， ２
７６）。
清又は血漿をアガロースゲル中で電気泳動させた後、脂
質を特異的に着色すると、種々のリポタンパク質フラク
ション、ＨＤＬ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びキロミクロンを
分離及び可視化することができ、これらのフラクション
の夫々の割合はアテローム性動脈硬化症の危険の重要な
指標となる（ＦＲＥＤＲＩＣＫＳＯＮ ｅｔ ａｌ．，
１９６７， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．， ２
７６）。
【０００３】Ｌｐ（ａ）は１９６３年にＢＥＲＧにより
同定された特定のリポタンパク質である（Ａｃｔａ Ｐ
ａｔｈｏｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｓｃａｎｄ．，
５９， ３６９）。Ｌｐ（ａ）はＬＤＬと構造的によ
く似ているが、ジスルフィド架橋によりａｐｏ Ｂ１０
０に結合したａｐｏ（ａ）と呼称される付加的なタンパ
ク質部分により特徴付けられる。
同定された特定のリポタンパク質である（Ａｃｔａ Ｐ
ａｔｈｏｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｓｃａｎｄ．，
５９， ３６９）。Ｌｐ（ａ）はＬＤＬと構造的によ
く似ているが、ジスルフィド架橋によりａｐｏ Ｂ１０
０に結合したａｐｏ（ａ）と呼称される付加的なタンパ
ク質部分により特徴付けられる。
【０００４】Ｌｐ（ａ）の生理的な役割はまだ完全には
解明されていないが、多数の臨床研究によると、高い血
漿中Ｌｐ（ａ）濃度（０．３ｇ／ｌ以上）は粥腫形成の
危険と無関係の因子を構成すると報告されている（ＫＯ
ＳＴＮＥＲ ｅｔ ａｌ．，１９８１， Ａｔｈｅｒｏ
ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ， ３８， ５１； ＲＨＯＡＤＳ
ｅｔ ａｌ． １９８６， Ｊ．Ａｎｎ．Ｍｅｄ．Ａ
ｓｓｏｃ．， ２５６， ２５４０）。
解明されていないが、多数の臨床研究によると、高い血
漿中Ｌｐ（ａ）濃度（０．３ｇ／ｌ以上）は粥腫形成の
危険と無関係の因子を構成すると報告されている（ＫＯ
ＳＴＮＥＲ ｅｔ ａｌ．，１９８１， Ａｔｈｅｒｏ
ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ， ３８， ５１； ＲＨＯＡＤＳ
ｅｔ ａｌ． １９８６， Ｊ．Ａｎｎ．Ｍｅｄ．Ａ
ｓｓｏｃ．， ２５６， ２５４０）。
【０００５】実際に、ヒト血清又は血漿を従来方法によ
り電気泳動すると（ゲル標準：Ｔｒｉｓ Ｖｅｒｏｎａ
ｌ緩衝液中アガロース０．５％、図１Ａ参照）、一般に
３種のリポタンパク質フラクション即ちＨＤＬ（α位
置）、ＶＬＤＬ（プレβ位置）及びＬＤＬ（β位置）に
分解することができる。Ｌｐ（ａ）フラクションは存在
するとしてもプレβ１位置に移動し、一般にはＬｐ
（ａ）の存在に結び付けられる粥腫形成の危険の決定の
範囲でその有無について正確に結論を下すように十分に
ＶＬＤＬから区別することができない（ＢＲＵＣＫＥＲ
Ｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０， Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．
Ａｃｔａ， １８８， ７１）。
り電気泳動すると（ゲル標準：Ｔｒｉｓ Ｖｅｒｏｎａ
ｌ緩衝液中アガロース０．５％、図１Ａ参照）、一般に
３種のリポタンパク質フラクション即ちＨＤＬ（α位
置）、ＶＬＤＬ（プレβ位置）及びＬＤＬ（β位置）に
分解することができる。Ｌｐ（ａ）フラクションは存在
するとしてもプレβ１位置に移動し、一般にはＬｐ
（ａ）の存在に結び付けられる粥腫形成の危険の決定の
範囲でその有無について正確に結論を下すように十分に
ＶＬＤＬから区別することができない（ＢＲＵＣＫＥＲ
Ｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０， Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．
Ａｃｔａ， １８８， ７１）。
【０００６】従って、血漿中でＬｐ（ａ）を検出又は定
量することが可能な種々の方法は、現時点ではいずれも
特異抗体の使用に基づいている。これらの方法を具体的
に挙げると、免疫比濁法（ＣＡＺＺＯＬＡＴＯ ｅｔ
ａｌ．， １９８３， Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔ
ａ， １３５， ２０３）、エレクトロシネレシス（Ｍ
ＯＬＩＮＡＲＩ ｅｔ ａｌ．， １９８３， Ｃｌｉ
ｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ， １２８， ３７３）、ＬＡ
ＵＲＥＬＬによる電気免疫拡散（ＫＯＳＴＮＥＲｅｔ
ａｌ．， １９８１， Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉ
ｓ， ３８，５１）、免疫酵素ＥＬＩＳＡ法（ＡＢＥ
ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａ
ｃｔａ， １７７， ３１）及びイムノラテックス法
（ＶＵＤＡＣ ｅｔ ａｌ．， １９８５， Ｊ．Ｌｉ
ｐｉｄ．Ｒｅｓ．， ２６，２６７）などがある。
量することが可能な種々の方法は、現時点ではいずれも
特異抗体の使用に基づいている。これらの方法を具体的
に挙げると、免疫比濁法（ＣＡＺＺＯＬＡＴＯ ｅｔ
ａｌ．， １９８３， Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔ
ａ， １３５， ２０３）、エレクトロシネレシス（Ｍ
ＯＬＩＮＡＲＩ ｅｔ ａｌ．， １９８３， Ｃｌｉ
ｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ， １２８， ３７３）、ＬＡ
ＵＲＥＬＬによる電気免疫拡散（ＫＯＳＴＮＥＲｅｔ
ａｌ．， １９８１， Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉ
ｓ， ３８，５１）、免疫酵素ＥＬＩＳＡ法（ＡＢＥ
ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａ
ｃｔａ， １７７， ３１）及びイムノラテックス法
（ＶＵＤＡＣ ｅｔ ａｌ．， １９８５， Ｊ．Ｌｉ
ｐｉｄ．Ｒｅｓ．， ２６，２６７）などがある。
【０００７】しかしながら、これらの定量法は一般に高
価であり、異常リポタンパク血症の検査の範囲では臨床
医により系統的に処方されていない。従って、このよう
な定量以前に、現行のリポタンパク質分析時に病理的な
量のＬｐ（ａ）の存在を検出できるならば非常に有利で
ある。
価であり、異常リポタンパク血症の検査の範囲では臨床
医により系統的に処方されていない。従って、このよう
な定量以前に、現行のリポタンパク質分析時に病理的な
量のＬｐ（ａ）の存在を検出できるならば非常に有利で
ある。
【０００８】本発明の目的の１つは、血清の他のリポタ
ンパク質からＬｐ（ａ）を分離する方法であって、既存
の方法よりも著しく廉価であり、従って現行の異常リポ
タンパク血症検査の範囲で処方することが可能な方法を
臨床医に明示することである。
ンパク質からＬｐ（ａ）を分離する方法であって、既存
の方法よりも著しく廉価であり、従って現行の異常リポ
タンパク血症検査の範囲で処方することが可能な方法を
臨床医に明示することである。
【０００９】更に本発明の目的は、Ｌｐ（ａ）を確実に
検出し、従ってアテローム性動脈硬化症に結び付けられ
る疾病が個体で出現する危険を確実にｉｎ ｖｉｔｒｏ
診断できるようにすることである。
検出し、従ってアテローム性動脈硬化症に結び付けられ
る疾病が個体で出現する危険を確実にｉｎ ｖｉｔｒｏ
診断できるようにすることである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は生物学的媒体中
に含有されるＬｐ（ａ）及び種々のリポタンパク質を電
気泳動により分離する方法に係り、該方法は、電気泳動
用ゲル及び／又は前記生物学的媒体がＬｐ（ａ）の電気
泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に対
して示差的に変化させ得る化合物を含むような条件下で
リポタンパク質を電気泳動により移動させることを特徴
とする。
に含有されるＬｐ（ａ）及び種々のリポタンパク質を電
気泳動により分離する方法に係り、該方法は、電気泳動
用ゲル及び／又は前記生物学的媒体がＬｐ（ａ）の電気
泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に対
して示差的に変化させ得る化合物を含むような条件下で
リポタンパク質を電気泳動により移動させることを特徴
とする。
【００１１】前記方法はより特定的には、好ましくはＨ
ＤＬ、ＬＤＬ及びＶＬＤＬの分離を維持しながら、生物
学的媒体中でＬｐ（ａ）フラクションをＶＬＤＬ及びＬ
ＤＬフラクションから系統的に分離できることを特徴と
する。
ＤＬ、ＬＤＬ及びＶＬＤＬの分離を維持しながら、生物
学的媒体中でＬｐ（ａ）フラクションをＶＬＤＬ及びＬ
ＤＬフラクションから系統的に分離できることを特徴と
する。
【００１２】本発明の特に有利な方法は、Ｌｐ（ａ）の
電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度
に対して示差的に変化させ得る化合物が、カチオンもし
くはカチオン錯体、疎水性部分を有しており且つ負に帯
電した分子又は中性界面活性剤から選択されることを特
徴とする。
電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度
に対して示差的に変化させ得る化合物が、カチオンもし
くはカチオン錯体、疎水性部分を有しており且つ負に帯
電した分子又は中性界面活性剤から選択されることを特
徴とする。
【００１３】本発明の方法の特に有利な態様によると、
Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電
気泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物は、
使用される電気泳動用ゲルに配合される。これはカチオ
ンの場合に有利である。
Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電
気泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物は、
使用される電気泳動用ゲルに配合される。これはカチオ
ンの場合に有利である。
【００１４】本発明の方法の特に有利な別の態様による
と、Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質
の電気泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合
物、より特定的には疎水性部分を有しており且つ負に帯
電した分子又は中性界面活性剤は、従来のゲル上で電気
泳動を実施する前に生物学的媒体に導入される。
と、Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質
の電気泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合
物、より特定的には疎水性部分を有しており且つ負に帯
電した分子又は中性界面活性剤は、従来のゲル上で電気
泳動を実施する前に生物学的媒体に導入される。
【００１５】好ましくは、生物学的媒体に添加され得る
疎水性部分を有しており且つ負に帯電した分子はより特
定的には、界面活性特性を有することを特徴とする分子
である。
疎水性部分を有しており且つ負に帯電した分子はより特
定的には、界面活性特性を有することを特徴とする分子
である。
【００１６】本発明の別の態様によると本発明のゲル
は、移動用緩衝液に予め添合したアニオン性又はカチオ
ン性の帯電化合物の浸透により変性させた従来のゲルか
ら調製することもできる。この添合はサンプルの堆積前
の電気泳動による予備移動中（堆積はこれらの化合物が
浸透したゲルのゾーン中又はこのゾーンの近傍で行われ
る）又は所謂電気泳動中に実施される。
は、移動用緩衝液に予め添合したアニオン性又はカチオ
ン性の帯電化合物の浸透により変性させた従来のゲルか
ら調製することもできる。この添合はサンプルの堆積前
の電気泳動による予備移動中（堆積はこれらの化合物が
浸透したゲルのゾーン中又はこのゾーンの近傍で行われ
る）又は所謂電気泳動中に実施される。
【００１７】アニオン性又はカチオン性の帯電化合物は
アノード又はカソード緩衝液に無差別に添合してもよい
し、アニオン性化合物のみをカソード緩衝液に加え、カ
チオン性化合物のみをアノード緩衝液に加えてもよい。
アノード又はカソード緩衝液に無差別に添合してもよい
し、アニオン性化合物のみをカソード緩衝液に加え、カ
チオン性化合物のみをアノード緩衝液に加えてもよい。
【００１８】カチオン性又はアニオン性化合物が予備電
気泳動段階により浸透したゲルのゾーンでサンプル（生
物学的媒体）の堆積を行う場合に得られるリピドグラム
は、これらのカチオン性又はアニオン性化合物をゲルの
注入時に直接導入したゲルで得られるリピドグラムと同
様である。
気泳動段階により浸透したゲルのゾーンでサンプル（生
物学的媒体）の堆積を行う場合に得られるリピドグラム
は、これらのカチオン性又はアニオン性化合物をゲルの
注入時に直接導入したゲルで得られるリピドグラムと同
様である。
【００１９】一方、これらのカチオン性又はアニオン性
化合物がまだ到達していないゲルのゾーンでサンプルの
堆積を行う場合には、サンプルのリポタンパク質はこれ
らのサンプルの所謂電気泳動移動時にこれらのカチオン
性又はアニオン性化合物に接触するので、リピドグラム
上に得られるプロフィルは従来のゲル上で得られる分離
と本発明の変性ゲル上で得られる分離との合成である。
予備電気泳動段階後にサンプルを堆積する際に、カチオ
ン性又はアニオン性化合物が予備移動により浸透するゲ
ルのゾーンから近い距離に堆積するほど、リピドグラム
はこれらのカチオン性又はアニオン性化合物が存在する
ゲル上で得られるリピドグラムに類似する。
化合物がまだ到達していないゲルのゾーンでサンプルの
堆積を行う場合には、サンプルのリポタンパク質はこれ
らのサンプルの所謂電気泳動移動時にこれらのカチオン
性又はアニオン性化合物に接触するので、リピドグラム
上に得られるプロフィルは従来のゲル上で得られる分離
と本発明の変性ゲル上で得られる分離との合成である。
予備電気泳動段階後にサンプルを堆積する際に、カチオ
ン性又はアニオン性化合物が予備移動により浸透するゲ
ルのゾーンから近い距離に堆積するほど、リピドグラム
はこれらのカチオン性又はアニオン性化合物が存在する
ゲル上で得られるリピドグラムに類似する。
【００２０】ゲル又は生物学的媒体にこれらの化合物を
加えると、Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度は他のリポタン
パク質の電気泳動移動度に対して示差的に変化する。
加えると、Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度は他のリポタン
パク質の電気泳動移動度に対して示差的に変化する。
【００２１】カチオンもしくはカチオン錯体又は中性界
面活性剤は、これらのカチオンもしくはカチオン錯体又
はこれらの中性界面活性剤を含まない従来の電気泳動用
ゲル上におけるリポタンパク質の移動速度に比較してこ
れらの同一のリポタンパクの電気泳動移動速度を減速さ
せる特性を有する。しかしながら、Ｌｐ（ａ）の移動速
度は他のリポタンパク質ほどは遅れず、又はカチオンも
しくはカチオン錯体又は中性界面活性剤を含まないゲル
で得られる移動速度と変わらない。
面活性剤は、これらのカチオンもしくはカチオン錯体又
はこれらの中性界面活性剤を含まない従来の電気泳動用
ゲル上におけるリポタンパク質の移動速度に比較してこ
れらの同一のリポタンパクの電気泳動移動速度を減速さ
せる特性を有する。しかしながら、Ｌｐ（ａ）の移動速
度は他のリポタンパク質ほどは遅れず、又はカチオンも
しくはカチオン錯体又は中性界面活性剤を含まないゲル
で得られる移動速度と変わらない。
【００２２】所与のリポタンパク質に関して、化合物を
含有するゲル上の移動距離と対照ゲル上のこの同一リポ
タンパク質の移動距離との比をｄ／ｄTとし、最近傍フ
ラクション（即ちＶＬＤＬ）との間の距離が３ｍｍ以上
である場合にフラクションＬｐ（ａ）は個体化されると
みなすならば、カチオンもしくはカチオン錯体又は中性
界面活性剤を使用する本発明の方法を特徴付けるフラク
ションＶＬＤＬの制動因子（ｄ／ｄT）は０．７以下で
ある。
含有するゲル上の移動距離と対照ゲル上のこの同一リポ
タンパク質の移動距離との比をｄ／ｄTとし、最近傍フ
ラクション（即ちＶＬＤＬ）との間の距離が３ｍｍ以上
である場合にフラクションＬｐ（ａ）は個体化されると
みなすならば、カチオンもしくはカチオン錯体又は中性
界面活性剤を使用する本発明の方法を特徴付けるフラク
ションＶＬＤＬの制動因子（ｄ／ｄT）は０．７以下で
ある。
【００２３】疎水性部分を有しており且つ負に帯電した
分子は、これらの負に帯電した分子を含まない従来の電
気泳動用ゲル上におけるリポタンパク質の移動速度に対
してこれらの同一のリポタンパク質の電気泳動移動速度
を加速する特性を有する。Ｌｐ（ａ）の移動速度は上記
分子の存在によりほとんど変化しない。
分子は、これらの負に帯電した分子を含まない従来の電
気泳動用ゲル上におけるリポタンパク質の移動速度に対
してこれらの同一のリポタンパク質の電気泳動移動速度
を加速する特性を有する。Ｌｐ（ａ）の移動速度は上記
分子の存在によりほとんど変化しない。
【００２４】このため、同様に最近傍フラクション（即
ちＬＤＬ）との間の距離が３ｍｍ以上である場合にフラ
クションＬｐ（ａ）は個体化されると仮定するならば、
疎水性部分を有しており且つ負に帯電した分子を使用す
る本発明の方法を特徴付けるフラクションＬＤＬの加速
因子（ｄ／ｄT）は少なくとも約２．３である。
ちＬＤＬ）との間の距離が３ｍｍ以上である場合にフラ
クションＬｐ（ａ）は個体化されると仮定するならば、
疎水性部分を有しており且つ負に帯電した分子を使用す
る本発明の方法を特徴付けるフラクションＬＤＬの加速
因子（ｄ／ｄT）は少なくとも約２．３である。
【００２５】上述のように、ゲル上のリポタンパク質の
移動速度はカチオン又はカチオン錯体の存在下で減少
し、Ｌｐ（ａ）は他のリポタンパク質よりも減速するの
で、これらの条件下ではゲル上ではっきりと個体化され
る。従って、図２Ａのリピドグラム中、ＶＬＤＬとＨＤ
Ｌとの間の付加的フラクションの存在はＬｐ（ａ）を特
徴付ける。この付加的フラクションは免疫固定によりは
っきりと確認された。即ち、着目リポタンパク質バンド
はアポリポタンパク質ａｐｏＢ及びａｐｏ（ａ）に対す
る特異的抗体により検出され、抗ａｐｏ−ＡＩ、抗ａｐ
ｏ−ＡＩＩ、抗ａｐｏ−ＣＩＩＩ及び抗ａｐｏ−Ｅ抗体
とは反応しない（図３）。
移動速度はカチオン又はカチオン錯体の存在下で減少
し、Ｌｐ（ａ）は他のリポタンパク質よりも減速するの
で、これらの条件下ではゲル上ではっきりと個体化され
る。従って、図２Ａのリピドグラム中、ＶＬＤＬとＨＤ
Ｌとの間の付加的フラクションの存在はＬｐ（ａ）を特
徴付ける。この付加的フラクションは免疫固定によりは
っきりと確認された。即ち、着目リポタンパク質バンド
はアポリポタンパク質ａｐｏＢ及びａｐｏ（ａ）に対す
る特異的抗体により検出され、抗ａｐｏ−ＡＩ、抗ａｐ
ｏ−ＡＩＩ、抗ａｐｏ−ＣＩＩＩ及び抗ａｐｏ−Ｅ抗体
とは反応しない（図３）。
【００２６】本発明の範囲内で特に有利な方法は、Ｌｐ
（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳
動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物が、約８
〜約９のｐＨで水酸化物を沈殿しないか、又は電気泳動
用ゲル中に沈殿しないカチオンもしくはカチオン錯体が
少なくとも１０-3モル／ｌとなるように部分的に水酸化
物を沈殿するようなカチオンもしくはカチオン錯体から
選択されることを特徴とする。
（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳
動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物が、約８
〜約９のｐＨで水酸化物を沈殿しないか、又は電気泳動
用ゲル中に沈殿しないカチオンもしくはカチオン錯体が
少なくとも１０-3モル／ｌとなるように部分的に水酸化
物を沈殿するようなカチオンもしくはカチオン錯体から
選択されることを特徴とする。
【００２７】好ましくは、本発明の範囲内で使用される
カチオンは、２以上の酸化度を有する。
カチオンは、２以上の酸化度を有する。
【００２８】有利には、カチオンはメンデーレフの周期
表のＩＩａ、ＩＩＩａ及びＩＩＩｂ族から選択される。
表のＩＩａ、ＩＩＩａ及びＩＩＩｂ族から選択される。
【００２９】これらのカチオンは有利には、Ｍｇ2+，Ｃ
ａ2+，Ｂａ2+，Ｓｒ2+，Ｍｎ2+，Ｂｅ2+，Ａｌ3+，Ｌａ
3+，Ｃｅ3+，Ｉｎ3+及びＹ3+から選択される。
ａ2+，Ｂａ2+，Ｓｒ2+，Ｍｎ2+，Ｂｅ2+，Ａｌ3+，Ｌａ
3+，Ｃｅ3+，Ｉｎ3+及びＹ3+から選択される。
【００３０】好ましくは、使用されるカチオンはＭｇ2+
である。
である。
【００３１】本発明の範囲内で使用されるカチオン錯体
は有利にはＮＨ4 +，（ＮＨ4 +）2Ｆｅ2+，ＮＨ4 +Ｆｅ3+
から選択される。
は有利にはＮＨ4 +，（ＮＨ4 +）2Ｆｅ2+，ＮＨ4 +Ｆｅ3+
から選択される。
【００３２】ゲル中のカチオン又はカチオン錯体の濃度
は有利には約１０-3〜１０-1Ｍ、好ましくは約５×１０
-3〜３×１０-2Ｍである。観察されるＬｐ（ａ）と他の
リポタンパク質との分離効果は、カチオン又はカチオン
錯体の濃度を増加させることにより加速される。しかし
ながら、あまり大量（１０-1Ｍ以上、更には０．０６
Ｍ）の塩を加えると、必要な移動時間が増加し、フラク
ションＶＬＤＬ及びＬＤＬの分離を妨げるので望ましく
ない。
は有利には約１０-3〜１０-1Ｍ、好ましくは約５×１０
-3〜３×１０-2Ｍである。観察されるＬｐ（ａ）と他の
リポタンパク質との分離効果は、カチオン又はカチオン
錯体の濃度を増加させることにより加速される。しかし
ながら、あまり大量（１０-1Ｍ以上、更には０．０６
Ｍ）の塩を加えると、必要な移動時間が増加し、フラク
ションＶＬＤＬ及びＬＤＬの分離を妨げるので望ましく
ない。
【００３３】これらのカチオン又はカチオン錯体の溶液
中で塩を構成するカチオンは、観察されるＬｐ（ａ）と
他のリポタンパク質（塩化物、酢酸塩、硫酸塩等）の分
離効果に干渉しない。
中で塩を構成するカチオンは、観察されるＬｐ（ａ）と
他のリポタンパク質（塩化物、酢酸塩、硫酸塩等）の分
離効果に干渉しない。
【００３４】本発明の特に有利な別の方法は、Ｌｐ
（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳
動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物が、疎水
性部分を有しており且つ負に帯電した分子であることを
特徴とする。
（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳
動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物が、疎水
性部分を有しており且つ負に帯電した分子であることを
特徴とする。
【００３５】好ましくは、疎水性部分を有しており且つ
負に帯電した分子は、アニオン性界面活性剤の類に属し
ており、場合により異原子を含み、硫酸、スルホン酸、
カルボン酸もしくはリン酸のような酸基を含み、５もし
くは６個の炭素原子で飽和された少なくとも１〜６個の
環を含む縮合脂肪族鎖を有する炭素原子数３〜１０の直
鎖もしくは枝分かれ脂肪族鎖であるか、アニオン性界面
活性剤の類に属しており、場合により１（又は複数）の
芳香族環もしくは芳香族複素環により置換された炭素原
子数８以上、好ましくは１０〜１８の直鎖もしくは枝分
かれ脂肪族鎖であり、該鎖、芳香族環もしくは芳香族複
素環がカルボン酸、スルホン酸もしくはリン酸のような
酸基により置換されているか、又は例えばナフタレンの
ように少なくとも２個の縮合芳香族環、例えばキノリン
のように芳香族複素環に縮合した芳香族環、もしくは２
個の縮合芳香族複素環を含む負に帯電した芳香族誘導体
であり、該環の少なくとも１個が硫酸、カルボン酸、ス
ルホン酸もしくはリン酸等のような酸基を含み、他の環
が分子全体から疎水性を喪失させ得る官能基を含まな
い。
負に帯電した分子は、アニオン性界面活性剤の類に属し
ており、場合により異原子を含み、硫酸、スルホン酸、
カルボン酸もしくはリン酸のような酸基を含み、５もし
くは６個の炭素原子で飽和された少なくとも１〜６個の
環を含む縮合脂肪族鎖を有する炭素原子数３〜１０の直
鎖もしくは枝分かれ脂肪族鎖であるか、アニオン性界面
活性剤の類に属しており、場合により１（又は複数）の
芳香族環もしくは芳香族複素環により置換された炭素原
子数８以上、好ましくは１０〜１８の直鎖もしくは枝分
かれ脂肪族鎖であり、該鎖、芳香族環もしくは芳香族複
素環がカルボン酸、スルホン酸もしくはリン酸のような
酸基により置換されているか、又は例えばナフタレンの
ように少なくとも２個の縮合芳香族環、例えばキノリン
のように芳香族複素環に縮合した芳香族環、もしくは２
個の縮合芳香族複素環を含む負に帯電した芳香族誘導体
であり、該環の少なくとも１個が硫酸、カルボン酸、ス
ルホン酸もしくはリン酸等のような酸基を含み、他の環
が分子全体から疎水性を喪失させ得る官能基を含まな
い。
【００３６】アニオン性界面活性剤としてはドデシル硫
酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
及びコール酸ナトリウムを挙げることができる。
酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
及びコール酸ナトリウムを挙げることができる。
【００３７】負に帯電した芳香族誘導体は有利には、２
−ナフタレンカルボン酸、２−ナフタレンスルホン酸、
２−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸、４−ヒドロキ
シ−１−ナフタレンスルホン酸、１−アミノ−５−ナフ
タレンスルホン酸、アミドブラック、アシッドバイオレ
ット１７、クーマシーブルーＲ２５０、パラチンファス
トブラックワン、好ましくは、１−ヒドロキシ−２−ナ
フタレンカルボン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフタレン
カルボン酸から選択される。
−ナフタレンカルボン酸、２−ナフタレンスルホン酸、
２−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸、４−ヒドロキ
シ−１−ナフタレンスルホン酸、１−アミノ−５−ナフ
タレンスルホン酸、アミドブラック、アシッドバイオレ
ット１７、クーマシーブルーＲ２５０、パラチンファス
トブラックワン、好ましくは、１−ヒドロキシ−２−ナ
フタレンカルボン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフタレン
カルボン酸から選択される。
【００３８】アニオン性界面活性剤の有効濃度の範囲は
有利にはゲル中に約１０-6〜約１０-3Ｍ、好ましくは約
１０-4〜約１０-3Ｍである。アニオン性界面活性剤を電
気泳動前に生物学的媒体に導入する場合、その濃度は有
利には約１０-4Ｍ〜１０-1Ｍ、好ましくは約１０-3Ｍ〜
約１０-2Ｍである。この濃度は、ＬＤＬの移動速度がフ
ラクションＬｐ（ａ）の移動速度よりも更に加速され、
ゲル上のＬｐ（ａ）とフラクションＬＤＬとの間の最小
距離が３ｍｍ以上となるような濃度である（Ｌｐ（ａ）
はフラクションＬＤＬの「後ろに」位置する）。
有利にはゲル中に約１０-6〜約１０-3Ｍ、好ましくは約
１０-4〜約１０-3Ｍである。アニオン性界面活性剤を電
気泳動前に生物学的媒体に導入する場合、その濃度は有
利には約１０-4Ｍ〜１０-1Ｍ、好ましくは約１０-3Ｍ〜
約１０-2Ｍである。この濃度は、ＬＤＬの移動速度がフ
ラクションＬｐ（ａ）の移動速度よりも更に加速され、
ゲル上のＬｐ（ａ）とフラクションＬＤＬとの間の最小
距離が３ｍｍ以上となるような濃度である（Ｌｐ（ａ）
はフラクションＬＤＬの「後ろに」位置する）。
【００３９】負に帯電した芳香族誘導体に関しては、ゲ
ル中の有効濃度範囲は約１０-3Ｍ〜約１０-1Ｍ、好まし
くは約１０-2Ｍ〜約５×１０-2Ｍであり、予め生物学的
媒体に導入する場合には有効濃度範囲は約１０-2Ｍ〜約
１Ｍ、好ましくは約５×１０-2Ｍ〜５×１０-1Ｍであ
る。
ル中の有効濃度範囲は約１０-3Ｍ〜約１０-1Ｍ、好まし
くは約１０-2Ｍ〜約５×１０-2Ｍであり、予め生物学的
媒体に導入する場合には有効濃度範囲は約１０-2Ｍ〜約
１Ｍ、好ましくは約５×１０-2Ｍ〜５×１０-1Ｍであ
る。
【００４０】本発明の別の好適態様によると、Ｌｐ
（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳
動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物は中性界
面活性剤（又は中性洗剤）である。
（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳
動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物は中性界
面活性剤（又は中性洗剤）である。
【００４１】好ましくは、中性界面活性剤は水相に可溶
性であり、有利にはＴｒｉｔｏｎＸ１００（登録商
標）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ４０５（登録商標）、Ｔｗｅｅ
ｎ ２０（登録商標）、ＮＰ４０（登録商標）及びＢＲ
ＩＪ３５（登録商標）から選択される。
性であり、有利にはＴｒｉｔｏｎＸ１００（登録商
標）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ４０５（登録商標）、Ｔｗｅｅ
ｎ ２０（登録商標）、ＮＰ４０（登録商標）及びＢＲ
ＩＪ３５（登録商標）から選択される。
【００４２】ゲル中で使用する場合、中性界面活性剤の
濃度は有利には約１０-6〜１０-3Ｍ、好ましくは１０-4
Ｍ〜１０-3Ｍである。電気泳動前に生物学的サンプルに
導入する場合には、中性界面活性剤の濃度は有利には約
１０-4Ｍ〜１０-1Ｍ、好ましくは１０-3Ｍ〜１０-2Ｍで
ある。
濃度は有利には約１０-6〜１０-3Ｍ、好ましくは１０-4
Ｍ〜１０-3Ｍである。電気泳動前に生物学的サンプルに
導入する場合には、中性界面活性剤の濃度は有利には約
１０-4Ｍ〜１０-1Ｍ、好ましくは１０-3Ｍ〜１０-2Ｍで
ある。
【００４３】本発明の別の態様によると、生物学的媒体
中に含まれるＬｐ（ａ）と種々のリポタンパク質との分
離は、カチオン性化合物と中性界面活性剤との混合物に
より従来のゲルを変性させた電気泳動用ゲル上で実施す
ると有利である。Ｌｐ（ａ）の移動度を変化させ得るこ
れらの化合物は、本発明の種々の態様に関して上述した
方法に従って添加される。
中に含まれるＬｐ（ａ）と種々のリポタンパク質との分
離は、カチオン性化合物と中性界面活性剤との混合物に
より従来のゲルを変性させた電気泳動用ゲル上で実施す
ると有利である。Ｌｐ（ａ）の移動度を変化させ得るこ
れらの化合物は、本発明の種々の態様に関して上述した
方法に従って添加される。
【００４４】使用されるカチオン性化合物及び中性界面
活性剤の夫々の割合は、これらの成分の特性、即ち所定
のリポタンパク質フラクションを優先的に減速させる能
力により決定される。Ｌｐ（ａ）を可視化させ得るＶＬ
ＤＬの十分な減速は、カチオン性化合物又は中性界面活
性剤のみを使用することにより得られる。
活性剤の夫々の割合は、これらの成分の特性、即ち所定
のリポタンパク質フラクションを優先的に減速させる能
力により決定される。Ｌｐ（ａ）を可視化させ得るＶＬ
ＤＬの十分な減速は、カチオン性化合物又は中性界面活
性剤のみを使用することにより得られる。
【００４５】しかしながら、非常に新鮮な血清（４℃で
保存する場合には２４時間以内）を使用する場合には、
観察されるＶＬＤＬの移動度が大きいため、非常に高濃
度のカチオン性化合物を使用しなければならず、この場
合、著しく減速したＬＤＬが堆積点に残り、イオン力価
が過剰になるので、移動時間は長くなる。この場合、カ
チオン性化合物に中性界面活性剤を加えると有利であ
る。
保存する場合には２４時間以内）を使用する場合には、
観察されるＶＬＤＬの移動度が大きいため、非常に高濃
度のカチオン性化合物を使用しなければならず、この場
合、著しく減速したＬＤＬが堆積点に残り、イオン力価
が過剰になるので、移動時間は長くなる。この場合、カ
チオン性化合物に中性界面活性剤を加えると有利であ
る。
【００４６】また、非常に新鮮な血清と共に中性界面活
性剤のみを使用する場合には、Ｌｐ（ａ）を遮蔽し得る
ＬＤＬフラクションの非常に大きい減速と、バンドの歪
みとを観察することができる。当業者により決定可能な
最適割合でカチオン性化合物と中性界面活性剤とを併用
すると、所望のリポタンパク質プロフィルが得られる。
性剤のみを使用する場合には、Ｌｐ（ａ）を遮蔽し得る
ＬＤＬフラクションの非常に大きい減速と、バンドの歪
みとを観察することができる。当業者により決定可能な
最適割合でカチオン性化合物と中性界面活性剤とを併用
すると、所望のリポタンパク質プロフィルが得られる。
【００４７】本発明は更に、カチオン又はカチオン錯体
を含むことを特徴とする電気泳動用ゲルに係る。
を含むことを特徴とする電気泳動用ゲルに係る。
【００４８】これらのゲルに含まれるカチオン又はカチ
オン錯体は、有利には上記類から選択される。
オン錯体は、有利には上記類から選択される。
【００４９】本発明は更に、疎水性部分を有しており且
つ負に帯電した分子、特に上記分子から選択されるよう
な分子を含むことを特徴とする電気泳動用ゲルに係る。
つ負に帯電した分子、特に上記分子から選択されるよう
な分子を含むことを特徴とする電気泳動用ゲルに係る。
【００５０】本発明は更に、中性界面活性剤、特に上記
類から選択された中性界面活性剤を含有することを特徴
とする電気泳動用ゲルに係る。
類から選択された中性界面活性剤を含有することを特徴
とする電気泳動用ゲルに係る。
【００５１】本発明は好ましくは、カチオン性化合物及
び中性界面活性剤の混合物を含むことを特徴とする電気
泳動用ゲルに係る。
び中性界面活性剤の混合物を含むことを特徴とする電気
泳動用ゲルに係る。
【００５２】本発明はより特定的には、上記のような生
物学的媒体に含まれるＬｐ（ａ）及び種々のリポタンパ
ク質フラクションを電気泳動により分離する方法を実施
するためのこれらのゲルの使用に係る。
物学的媒体に含まれるＬｐ（ａ）及び種々のリポタンパ
ク質フラクションを電気泳動により分離する方法を実施
するためのこれらのゲルの使用に係る。
【００５３】本発明の特に好適なゲルは、上記濃度条件
でカチオンとしてＭｇ2+を含むゲルである。
でカチオンとしてＭｇ2+を含むゲルである。
【００５４】本発明のゲルは、Ｌｐ（ａ）の電気泳動移
動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に対して示
差的に変化させ得る化合物が存在する以外は、電気泳動
の分野で従来使用されているゲルであり、特にアガロー
スゲル、ポリアクリルアミドゲル又は酢酸セルロースゲ
ルである。
動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に対して示
差的に変化させ得る化合物が存在する以外は、電気泳動
の分野で従来使用されているゲルであり、特にアガロー
スゲル、ポリアクリルアミドゲル又は酢酸セルロースゲ
ルである。
【００５５】本発明のゲルは上記化合物の溶液を加熱下
にゲルの溶液と混合した後、室温に戻してゲルを凝固さ
せることにより調製され得る。
にゲルの溶液と混合した後、室温に戻してゲルを凝固さ
せることにより調製され得る。
【００５６】本発明のゲルは、必要量の上記化合物が浸
透するために十分な時間、上記化合物の溶液にゲルを浸
漬させることにより調製することもできる。
透するために十分な時間、上記化合物の溶液にゲルを浸
漬させることにより調製することもできる。
【００５７】本発明は更に、生物中のＬｐ（ａ）の存在
に結び付けられる粥腫形成の危険を人体で決定するため
の、上記Ｌｐ（ａ）の分離方法の適用にも係る。
に結び付けられる粥腫形成の危険を人体で決定するため
の、上記Ｌｐ（ａ）の分離方法の適用にも係る。
【００５８】この点で、本発明はＬｐ（ａ）の存在に結
び付けられる粥腫形成の危険のｉｎｖｉｔｒｏ決定方法
に係り、該方法は人体から採取した生物学的サンプル、
特に血清又は血漿に基づいて実施され、Ｌｐ（ａ）の電
気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に
対して示差的に変化させ得る少なくとも１種の化合物を
含む電気泳動用ゲル上、特に上記に定義したようなゲル
上、又は必要量の前記化合物が浸透するために十分な時
間、前記化合物を含まない従来のゲルを前記化合物の溶
液中、特に上記類から選択されたカチオンもしくはカチ
オン錯体、特に上記類から選択された疎水性部分を有し
ており且つ負に帯電した分子又は特に上記類から選択さ
れた中性界面活性剤の溶液中に浸漬させることにより前
記従来のゲルからその場で調製されたゲル上に適量の液
体形態の生物学的サンプルを堆積する段階と、電気泳動
により移動させる段階と、生物学的サンプル中にＬｐ
（ａ）が存在する場合には、着色剤スーダンブラック、
スーダンレッドのようなリポタンパク質の特異的着色
剤、脂質の特異的酵素試薬又はリポタンパク質、特にＬ
ｐ（ａ）に対する標識抗体を使用してＬｐ（ａ）を検出
する段階とを含む。
び付けられる粥腫形成の危険のｉｎｖｉｔｒｏ決定方法
に係り、該方法は人体から採取した生物学的サンプル、
特に血清又は血漿に基づいて実施され、Ｌｐ（ａ）の電
気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に
対して示差的に変化させ得る少なくとも１種の化合物を
含む電気泳動用ゲル上、特に上記に定義したようなゲル
上、又は必要量の前記化合物が浸透するために十分な時
間、前記化合物を含まない従来のゲルを前記化合物の溶
液中、特に上記類から選択されたカチオンもしくはカチ
オン錯体、特に上記類から選択された疎水性部分を有し
ており且つ負に帯電した分子又は特に上記類から選択さ
れた中性界面活性剤の溶液中に浸漬させることにより前
記従来のゲルからその場で調製されたゲル上に適量の液
体形態の生物学的サンプルを堆積する段階と、電気泳動
により移動させる段階と、生物学的サンプル中にＬｐ
（ａ）が存在する場合には、着色剤スーダンブラック、
スーダンレッドのようなリポタンパク質の特異的着色
剤、脂質の特異的酵素試薬又はリポタンパク質、特にＬ
ｐ（ａ）に対する標識抗体を使用してＬｐ（ａ）を検出
する段階とを含む。
【００５９】本発明は更に、Ｌｐ（ａ）の存在に結び付
けられる粥腫形成の危険のｉｎ ｖｉｔｒｏ決定方法に
係り、該方法は、人体から採取した生物学的サンプル、
特に血清又は血漿に基づいて実施され、採取した生物学
的サンプルを、特に上記類から選択された疎水性部分を
有しており且つ負に帯電した分子又は特に上記類の中性
界面活性剤を含有する溶液と共にインキュベートする段
階と、こうして処理した生物学的サンプルの適量を従来
の電気泳動用ゲルに堆積する段階と、電気泳動により移
動させる段階と、生物学的サンプル中にＬｐ（ａ）が存
在する場合には、着色剤スーダンブラック、スーダンレ
ッドのようなリポタンパク質の特異的着色剤、脂質の特
異的酵素試薬又はリポタンパク質、特にＬｐ（ａ）に対
する抗体を使用してＬｐ（ａ）を検出する段階とを含
む。
けられる粥腫形成の危険のｉｎ ｖｉｔｒｏ決定方法に
係り、該方法は、人体から採取した生物学的サンプル、
特に血清又は血漿に基づいて実施され、採取した生物学
的サンプルを、特に上記類から選択された疎水性部分を
有しており且つ負に帯電した分子又は特に上記類の中性
界面活性剤を含有する溶液と共にインキュベートする段
階と、こうして処理した生物学的サンプルの適量を従来
の電気泳動用ゲルに堆積する段階と、電気泳動により移
動させる段階と、生物学的サンプル中にＬｐ（ａ）が存
在する場合には、着色剤スーダンブラック、スーダンレ
ッドのようなリポタンパク質の特異的着色剤、脂質の特
異的酵素試薬又はリポタンパク質、特にＬｐ（ａ）に対
する抗体を使用してＬｐ（ａ）を検出する段階とを含
む。
【００６０】抗Ｌｐ（ａ）特異的抗体により探査できな
いＬｐ（ａ）の位置は、通常の方法で本発明の方法を使
用すると、スーダンブラック、スーダンレッドのような
リポタンパク質の特異的着色剤又は脂質の特異的酵素試
薬により検出される。
いＬｐ（ａ）の位置は、通常の方法で本発明の方法を使
用すると、スーダンブラック、スーダンレッドのような
リポタンパク質の特異的着色剤又は脂質の特異的酵素試
薬により検出される。
【００６１】これらの粥腫形成の危険の決定方法は、有
利には特にＡｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９６６）
１５：４５−５２に報告されているＬＡＵＲＥＬＬらの
方法に従い、Ｌｐ（ａ）の付加的定量段階を含む。本発
明の診断方法の感度の閾値は、血漿中Ｌｐ（ａ）含量約
０．１５ｇ／ｌであり、Ｌｐ（ａ）の病理的含量は約
０．３ｇ／ｌである。
利には特にＡｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９６６）
１５：４５−５２に報告されているＬＡＵＲＥＬＬらの
方法に従い、Ｌｐ（ａ）の付加的定量段階を含む。本発
明の診断方法の感度の閾値は、血漿中Ｌｐ（ａ）含量約
０．１５ｇ／ｌであり、Ｌｐ（ａ）の病理的含量は約
０．３ｇ／ｌである。
【００６２】本発明の方法は有利なことには、電気泳動
後に必ずしもイムノブロット法を使用する必要なしに着
色検出を行うことにより、ゲル上に堆積した生物学的媒
体中に生の形態で存在する種々のリポタンパク質からＬ
ｐ（ａ）を生の形態で分離することができる。
後に必ずしもイムノブロット法を使用する必要なしに着
色検出を行うことにより、ゲル上に堆積した生物学的媒
体中に生の形態で存在する種々のリポタンパク質からＬ
ｐ（ａ）を生の形態で分離することができる。
【００６３】本発明の方法を実施すると、Ｌｐ（ａ）は
ＶＬＤＬ及びＨＤＬフラクションの間に配置され、従っ
て、ゲル上で完全に分解し、筋のない（従ってバックグ
ラウンド雑音のない）ゾーンに配置される。
ＶＬＤＬ及びＨＤＬフラクションの間に配置され、従っ
て、ゲル上で完全に分解し、筋のない（従ってバックグ
ラウンド雑音のない）ゾーンに配置される。
【００６４】更に本発明の方法によると、ＩＩＩ型の高
脂肪血症にしばしば存在するＩＤＬフラクションはＬＤ
Ｌ及びＶＬＤＬフラクションの間に配置され、Ｌｐ
（ａ）と混同し得ない。
脂肪血症にしばしば存在するＩＤＬフラクションはＬＤ
Ｌ及びＶＬＤＬフラクションの間に配置され、Ｌｐ
（ａ）と混同し得ない。
【００６５】更に、古い血清サンプルの場合、ＶＬＤＬ
フラクション（プレβ）の減速はＶＬＤＬフラクション
に先行するＬｐ（ａ）を遮蔽し得ない。
フラクション（プレβ）の減速はＶＬＤＬフラクション
に先行するＬｐ（ａ）を遮蔽し得ない。
【００６６】従来のゲル上の電気泳動法によると、上述
の種々の欠点の結果として、リピドグラムのデンシトメ
トリー読取値は分析の視覚試験よりも低い特異性及び感
度を示すと言われている。
の種々の欠点の結果として、リピドグラムのデンシトメ
トリー読取値は分析の視覚試験よりも低い特異性及び感
度を示すと言われている。
【００６７】従来のゲル上でデンシトメトリーにより得
られたＬｐ（ａ）の値と免疫比濁法によるＬｐ（ａ）の
定量法との相関係数は０．５５に過ぎない（Ｃｌｉｎｉ
ｃａＣｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， １８８，１９９０，
ｐ７１−７８）。
られたＬｐ（ａ）の値と免疫比濁法によるＬｐ（ａ）の
定量法との相関係数は０．５５に過ぎない（Ｃｌｉｎｉ
ｃａＣｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， １８８，１９９０，
ｐ７１−７８）。
【００６８】本発明の方法によると、リピドグラムのデ
ンシトメトリーとローレルの電気免疫拡散によるＬｐ
（ａ）の定量法との相関は、相関係数＝０．９１（３０
個の陽性Ｌｐ（ａ）血清）を示す。
ンシトメトリーとローレルの電気免疫拡散によるＬｐ
（ａ）の定量法との相関は、相関係数＝０．９１（３０
個の陽性Ｌｐ（ａ）血清）を示す。
【００６９】本発明は更に、本発明の診断方法を実施す
るためのキットにも係り、該キットは、電気泳動用ゲ
ル、特にアガロースゲルと、特に上記類から選択された
カチオンもしくはカチオン錯体、特に上記類から選択さ
れた負に帯電した疎水性分子、又は特に上記類から選択
された中性界面活性剤からなる化合物の１又は複数の溶
液と、ゲル上でリポタンパク質を電気泳動により移動さ
せるために必要な緩衝溶液と、ゲル上で移動後にＬｐ
（ａ）を含むリポタンパク質を検出することが可能な試
薬、特に着色剤スーダンブラック、スーダンレッド又は
脂質の特異的酵素試薬とを含む。
るためのキットにも係り、該キットは、電気泳動用ゲ
ル、特にアガロースゲルと、特に上記類から選択された
カチオンもしくはカチオン錯体、特に上記類から選択さ
れた負に帯電した疎水性分子、又は特に上記類から選択
された中性界面活性剤からなる化合物の１又は複数の溶
液と、ゲル上でリポタンパク質を電気泳動により移動さ
せるために必要な緩衝溶液と、ゲル上で移動後にＬｐ
（ａ）を含むリポタンパク質を検出することが可能な試
薬、特に着色剤スーダンブラック、スーダンレッド又は
脂質の特異的酵素試薬とを含む。
【００７０】キットで使用される溶液は、ゲルを再緩衝
するように機能するか、又は生物学的サンプルに加えら
れる。
するように機能するか、又は生物学的サンプルに加えら
れる。
【００７１】本発明は更に、Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動
度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に対して示差
的に変化させ得る少なくとも１種の化合物を含有する本
発明のゲル、特に上記に定義したようなゲルと、ゲル上
でリポタンパク質を電気泳動により移動させるために必
要な緩衝溶液と、ゲル上で移動後にＬｐ（ａ）を含むリ
ポタンパク質を検出することが可能な試薬、特に着色剤
スーダンブラック、スーダンレッド又は脂質の特異的酵
素試薬とを含む上記のようなキットにも係る。
度を他のリポタンパク質の電気泳動移動度に対して示差
的に変化させ得る少なくとも１種の化合物を含有する本
発明のゲル、特に上記に定義したようなゲルと、ゲル上
でリポタンパク質を電気泳動により移動させるために必
要な緩衝溶液と、ゲル上で移動後にＬｐ（ａ）を含むリ
ポタンパク質を検出することが可能な試薬、特に着色剤
スーダンブラック、スーダンレッド又は脂質の特異的酵
素試薬とを含む上記のようなキットにも係る。
【００７２】
【実施例】実施例１：図１及び図２に 対応する操作の説明 ： １）図１Ａ及び１Ｂのゲルの調製：ゲルの組成は、アガ
ロース０．５％、Ｔｒｉｓ ０．０６Ｍ、Ｖｅｒｏｎａ
ｌ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎａｌ ０．０
５Ｍ、ウシアルブミン０．１％である。
ロース０．５％、Ｔｒｉｓ ０．０６Ｍ、Ｖｅｒｏｎａ
ｌ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎａｌ ０．０
５Ｍ、ウシアルブミン０．１％である。
【００７３】１００ｍｌ容三角フラスコに脱イオン水３
９ｍｌを導入し、磁気撹拌下にアガロース０．２５ｇを
加えた。絶えず撹拌しながら加熱プレートで５分間沸騰
させた。次にアガロースを溶解させ、完全に透明の溶液
を得た。次にサーモスタット付き浴内で溶液の温度を５
０℃に平衡させた。
９ｍｌを導入し、磁気撹拌下にアガロース０．２５ｇを
加えた。絶えず撹拌しながら加熱プレートで５分間沸騰
させた。次にアガロースを溶解させ、完全に透明の溶液
を得た。次にサーモスタット付き浴内で溶液の温度を５
０℃に平衡させた。
【００７４】５０ｍｌ容三角フラスコに脱イオン水１０
ｍｌを導入し、磁気撹拌下にＴｒｉｓ ０．３６ｇ、Ｖ
ｅｒｏｎａｌ ０．０９２ｇ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏ
ｎａｌ ０．５１５ｇを加えた。完全に溶解後、全体を
サーモスタット付き浴で５０℃に安定化させた。
ｍｌを導入し、磁気撹拌下にＴｒｉｓ ０．３６ｇ、Ｖ
ｅｒｏｎａｌ ０．０９２ｇ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏ
ｎａｌ ０．５１５ｇを加えた。完全に溶解後、全体を
サーモスタット付き浴で５０℃に安定化させた。
【００７５】溶血チューブに脱イオン水１ｍｌ及びウシ
アルブミン０．０５ｇを導入した。渦形成により溶解を
促進させた。溶液を５０℃にした。
アルブミン０．０５ｇを導入した。渦形成により溶解を
促進させた。溶液を５０℃にした。
【００７６】アガロース溶液を収容する１００ｍｌ容三
角フラスコに緩衝液及びウシアルブミンの濃縮溶液を磁
気撹拌下に加えた。全体を十分に均質化させ、５０℃に
維持した。
角フラスコに緩衝液及びウシアルブミンの濃縮溶液を磁
気撹拌下に加えた。全体を十分に均質化させ、５０℃に
維持した。
【００７７】その後、ゲルを注いだ。このために、この
溶液５ｍｌを１０×８ｃｍの寸法の親水性プラスチック
フィルム上に均等に分配した。
溶液５ｍｌを１０×８ｃｍの寸法の親水性プラスチック
フィルム上に均等に分配した。
【００７８】２）図２Ａ及び２Ｂのゲルの調製：ゲルの
組成は、アガロース０．５％、Ｔｒｉｓ ０．０６Ｍ、
Ｖｅｒｏｎａｌ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎ
ａｌ ０．０５Ｍ、酢酸マグネシウム０．０３Ｍ、ウシ
アルブミン０．１％である。
組成は、アガロース０．５％、Ｔｒｉｓ ０．０６Ｍ、
Ｖｅｒｏｎａｌ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎ
ａｌ ０．０５Ｍ、酢酸マグネシウム０．０３Ｍ、ウシ
アルブミン０．１％である。
【００７９】濃縮緩衝溶液に酢酸マグネシウム・４水和
物０．３２２ｇを加えた以外は、図１Ａ及び１Ｂと同一
のプロトコルに従った。
物０．３２２ｇを加えた以外は、図１Ａ及び１Ｂと同一
のプロトコルに従った。
【００８０】３）移動条件：新鮮な血清をゲルのカソー
ド縁部から２．５ｃｍの位置に堆積した（堆積物３μ
ｌ）。
ド縁部から２．５ｃｍの位置に堆積した（堆積物３μ
ｌ）。
【００８１】緩衝液Ｔｒｉｓ ０．０６Ｍ、Ｖｅｒｏｎ
ａｌ ０．０１Ｍ、Ｖｅｒｏｎａｌ０．０５Ｍ中で５０
Ｖで４５分間移動を行った。
ａｌ ０．０１Ｍ、Ｖｅｒｏｎａｌ０．０５Ｍ中で５０
Ｖで４５分間移動を行った。
【００８２】図１Ａ及び１Ｂの場合、移動時間は４５分
間であった。
間であった。
【００８３】図２Ａ及び２Ｂの場合、移動時間は１時間
であった。
であった。
【００８４】移動後、ゲルを完全に乾燥させ、脂質の着
色剤（スーダンブラック）で着色（図１Ａ及び２Ａ）す
るか、又はＬｐ（ａ）に対する特異的抗血清で免疫固定
（図１Ｂ及び２Ｂ）した。
色剤（スーダンブラック）で着色（図１Ａ及び２Ａ）す
るか、又はＬｐ（ａ）に対する特異的抗血清で免疫固定
（図１Ｂ及び２Ｂ）した。
【００８５】実施例２：図６に対応 する操作の説明：ゲ
ルは図４と同一である。図に示す方向に１時間５０Ｖで
予備移動を行った。この予備移動中に、アニオンはアノ
ードに向かって移動し、ゲルのカソード部分は失われ
た。
ルは図４と同一である。図に示す方向に１時間５０Ｖで
予備移動を行った。この予備移動中に、アニオンはアノ
ードに向かって移動し、ゲルのカソード部分は失われ
た。
【００８６】次にＬｐ（ａ）を含有する血清をゲルの全
長に単独に堆積し、予備移動方向に対して垂直な方向に
４５分間移動を行った。次にリポタンパク質をスーダン
ブラックで着色した。
長に単独に堆積し、予備移動方向に対して垂直な方向に
４５分間移動を行った。次にリポタンパク質をスーダン
ブラックで着色した。
【００８７】実施例３：種々のゲル 上のリポタンパク質
フラク ションの移動距離の比較：化合物を含有するゲル
上の移動距離をｄ、対照ゲル上の移動距離をｄTとし、
０．０３Ｍ酢酸マグネシウムを含む本発明のゲル（図２
のゲル）及び０．０２６Ｍの１−ヒドロキシ−２−ナフ
タレンカルボン酸を含む本発明のゲル（図４のゲル）上
で移動距離を測定した。結果を下記表１及び２に示す。
フラク ションの移動距離の比較：化合物を含有するゲル
上の移動距離をｄ、対照ゲル上の移動距離をｄTとし、
０．０３Ｍ酢酸マグネシウムを含む本発明のゲル（図２
のゲル）及び０．０２６Ｍの１−ヒドロキシ−２−ナフ
タレンカルボン酸を含む本発明のゲル（図４のゲル）上
で移動距離を測定した。結果を下記表１及び２に示す。
【００８８】
【表１】
【００８９】
【表２】 実施例４ カソード槽内でＴｒｉｓ ０．０６Ｍ、酸性Ｖｅｒｏｎ
ａｌ ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎａｌ
０．０５Ｍ、ウシアルブミン０．１％からなる緩衝液に
０．０２６Ｍの濃度の１−ヒドロキシ−２−ナフタレン
カルボン酸を加え、図１Ａ及び１Ｂに対応する実施例１
で得られたと同一組成の従来のゲルをサンプル堆積前に
この緩衝液で予備電気泳動させた。
ａｌ ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎａｌ
０．０５Ｍ、ウシアルブミン０．１％からなる緩衝液に
０．０２６Ｍの濃度の１−ヒドロキシ−２−ナフタレン
カルボン酸を加え、図１Ａ及び１Ｂに対応する実施例１
で得られたと同一組成の従来のゲルをサンプル堆積前に
この緩衝液で予備電気泳動させた。
【００９０】約６Ｖ／ｃｍの電位勾配に対応する５０Ｖ
で３０分間移動後、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカ
ルボン酸のゲル浸透はカソード槽から４０ｍｍであっ
た。次にゲルのカソード縁から例えば３０ｍｍとなるよ
うにこのゾーンにサンプルを堆積し、同一緩衝液を使用
して４５分間５０Ｖの電圧下でサンプルを移動させた。
で３０分間移動後、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカ
ルボン酸のゲル浸透はカソード槽から４０ｍｍであっ
た。次にゲルのカソード縁から例えば３０ｍｍとなるよ
うにこのゾーンにサンプルを堆積し、同一緩衝液を使用
して４５分間５０Ｖの電圧下でサンプルを移動させた。
【００９１】得られたリピドグラムは図４のゲルで得ら
れたリピドグラムと同様であった。
れたリピドグラムと同様であった。
【００９２】実施例５ アノード槽内でＴｒｉｓ ０．６Ｍ、酸性Ｖｅｒｏｎａ
ｌ ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎａｌ ０．
０５Ｍ、ウシアルブミン０．１％からなる緩衝液に５×
１０-2Ｍの酢酸マグネシウムを加え、図１Ａ及び１Ｂに
対応する実施例１と同一組成の従来のゲルをサンプル堆
積前にこの緩衝液で予備電気泳動させた。
ｌ ０．０１Ｍ、ナトリウム含有Ｖｅｒｏｎａｌ ０．
０５Ｍ、ウシアルブミン０．１％からなる緩衝液に５×
１０-2Ｍの酢酸マグネシウムを加え、図１Ａ及び１Ｂに
対応する実施例１と同一組成の従来のゲルをサンプル堆
積前にこの緩衝液で予備電気泳動させた。
【００９３】約６Ｖ／ｃｍの電位勾配に対応する５０Ｖ
で４５分間移動後、アノード槽からのＭｇ2+イオンのゲ
ル浸透は４０ｍｍであった。
で４５分間移動後、アノード槽からのＭｇ2+イオンのゲ
ル浸透は４０ｍｍであった。
【００９４】次に、アノード槽からのＭｇ2+イオンの前
端がまだ達していないゲルのゾーン、例えばゲルのアノ
ード縁から４５ｍｍのゾーンにサンプルを堆積した。次
に、同一緩衝液を使用して１時間５０Ｖの電圧下でサン
プルを移動させた。得られたプロフィルは図２Ａ及び２
Ｂのゲル上で得られたプロフィルと同様であり、特にＶ
ＬＤＬフラクションに先行するｌｐａフラクションを含
み、ＬＤＬフラクションとサンプルの堆積点との間に良
好な分離が認められた。
端がまだ達していないゲルのゾーン、例えばゲルのアノ
ード縁から４５ｍｍのゾーンにサンプルを堆積した。次
に、同一緩衝液を使用して１時間５０Ｖの電圧下でサン
プルを移動させた。得られたプロフィルは図２Ａ及び２
Ｂのゲル上で得られたプロフィルと同様であり、特にＶ
ＬＤＬフラクションに先行するｌｐａフラクションを含
み、ＬＤＬフラクションとサンプルの堆積点との間に良
好な分離が認められた。
【図１】図１Ａ及び１Ｂは電気泳動写真であって、（Ｌ
ｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気
泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物を含有
しない）０．５％対照アガロースゲル上で得られたリピ
ドグラムを示し、使用した移動用緩衝液は、Ｔｒｉｓ
０．０６Ｍ、Ｖｅｒｏｎａｌ ０．０１Ｍ、ナトリウム
含有Ｖｅｒｏｎａｌ ０．０５Ｍ、ＢＳＡ １ｇ／ｌで
ある。左の２つのレーン（レーン１及び２）では、堆積
した血清は病理的Ｌｐ（ａ）含量を有する。右の２つの
レーン（レーン３及び４）では、堆積した血清はゼロ又
は非常に低いＬｐ（ａ）含量を有する。図１Ａは、スー
ダンブラックによるリポタンパク質の検出を示す。図１
Ｂは、Ａｐｏ（ａ）に対する特異的血清による免疫固定
を示し、Ｌｐ（ａ）がフラクションＶＬＤＬに重なって
いるために図１Ａのリピドグラムでは明示されなかった
レーン１及び２上のＬｐ（ａ）を明示することができ
る。
ｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の電気
泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物を含有
しない）０．５％対照アガロースゲル上で得られたリピ
ドグラムを示し、使用した移動用緩衝液は、Ｔｒｉｓ
０．０６Ｍ、Ｖｅｒｏｎａｌ ０．０１Ｍ、ナトリウム
含有Ｖｅｒｏｎａｌ ０．０５Ｍ、ＢＳＡ １ｇ／ｌで
ある。左の２つのレーン（レーン１及び２）では、堆積
した血清は病理的Ｌｐ（ａ）含量を有する。右の２つの
レーン（レーン３及び４）では、堆積した血清はゼロ又
は非常に低いＬｐ（ａ）含量を有する。図１Ａは、スー
ダンブラックによるリポタンパク質の検出を示す。図１
Ｂは、Ａｐｏ（ａ）に対する特異的血清による免疫固定
を示し、Ｌｐ（ａ）がフラクションＶＬＤＬに重なって
いるために図１Ａのリピドグラムでは明示されなかった
レーン１及び２上のＬｐ（ａ）を明示することができ
る。
【図２】図２Ａ及び２Ｂは電気泳動写真であって、０．
０３Ｍの酢酸マグネシウムを含有する本発明のゲル上で
得られたリピドグラムを示す（緩衝液は図１Ａに関して
記載した緩衝液と同一である）。これらのゲルに図１Ａ
及び１Ｂと同一血清を同一位置に堆積した。図２Ａはス
ーダンブラックによるリポタンパク質の検出を示す。図
２Ａの２つのレーン１及び２には図１Ａには認められな
かったＬｐ（ａ）に対応するバンドの存在が認められ
る。図２ＢはＡｐｏ（ａ）に対する特異的抗血清による
免疫固定を示し、図２Ａにも認められたＬｐ（ａ）の検
出を確認する。
０３Ｍの酢酸マグネシウムを含有する本発明のゲル上で
得られたリピドグラムを示す（緩衝液は図１Ａに関して
記載した緩衝液と同一である）。これらのゲルに図１Ａ
及び１Ｂと同一血清を同一位置に堆積した。図２Ａはス
ーダンブラックによるリポタンパク質の検出を示す。図
２Ａの２つのレーン１及び２には図１Ａには認められな
かったＬｐ（ａ）に対応するバンドの存在が認められ
る。図２ＢはＡｐｏ（ａ）に対する特異的抗血清による
免疫固定を示し、図２Ａにも認められたＬｐ（ａ）の検
出を確認する。
【図３】図３は電気泳動写真であって、図２Ａ及び２Ｂ
で使用した条件と同一の移動条件で図２Ａ及び２Ｂと同
一のゲルを使用して得られたリピドグラムを示す。病理
的Ｌｐ（ａ）含量を有する血清を６個のレーンに堆積し
た。レーン１〜５は夫々抗血清、即ちレーン１：抗ａｐ
ｏＥ、レーン２：抗ａｐｏＣＩＩＩ、レーン３：抗ａｐ
ｏＡＩ、レーン４：抗ａｐｏ（ａ）、レーン５：抗ａｐ
ｏＢを使用して免疫固定を実施し、レーン６はスーダン
ブラックでリポタンパク質を着色した。（ａｐｏ（ａ）
及びａｐｏＢから構成される）Ｌｐ（ａ）はＶＬＤＬ及
びＬＤＬから分離され、分解していないことが確認され
る。
で使用した条件と同一の移動条件で図２Ａ及び２Ｂと同
一のゲルを使用して得られたリピドグラムを示す。病理
的Ｌｐ（ａ）含量を有する血清を６個のレーンに堆積し
た。レーン１〜５は夫々抗血清、即ちレーン１：抗ａｐ
ｏＥ、レーン２：抗ａｐｏＣＩＩＩ、レーン３：抗ａｐ
ｏＡＩ、レーン４：抗ａｐｏ（ａ）、レーン５：抗ａｐ
ｏＢを使用して免疫固定を実施し、レーン６はスーダン
ブラックでリポタンパク質を着色した。（ａｐｏ（ａ）
及びａｐｏＢから構成される）Ｌｐ（ａ）はＶＬＤＬ及
びＬＤＬから分離され、分解していないことが確認され
る。
【図４】図４は電気泳動写真であって、０．０２６Ｍの
１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸を含有する
ゲルを示す。０〜０．７ｇ／ｌのＬｐ（ａ）を含有する
８種の異なる血清を堆積した。移動は５０Ｖで４５分間
行った。リポタンパク質の検出はスーダンブラックによ
り行った。フラクションＬＤＬの後ろに配置されたＬｐ
（ａ）の存在が明確に確認される。
１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸を含有する
ゲルを示す。０〜０．７ｇ／ｌのＬｐ（ａ）を含有する
８種の異なる血清を堆積した。移動は５０Ｖで４５分間
行った。リポタンパク質の検出はスーダンブラックによ
り行った。フラクションＬＤＬの後ろに配置されたＬｐ
（ａ）の存在が明確に確認される。
【図５】図５Ａ及び５Ｂは電気泳動写真であって、図１
Ａに定義したようなゲルを示し、４種のサンプル即ちレ
ーン１には非処理血清、レーン２には１０-3ＭのＴｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００で処理した血清、レーン３には１０
-3ＭのＴｗｅｅｎ ２０で処理した血清、レーン４には
１０-3ＭのＢＲＩＪ ３５で処理した血清を堆積した。
電気泳動は図１Ａに関して記載した条件下で実施した。
図５Ａではリポタンパク質をスーダンブラックで着色し
た。図５ＢではＬｐ（ａ）に対する特異的抗血清を使用
して免疫固定を行った。中性洗剤はリポタンパク質に対
して制動効果を有しており、Ｌｐ（ａ）は他のリポタン
パク質フラクションよりも著しく影響されないことが認
められる。
Ａに定義したようなゲルを示し、４種のサンプル即ちレ
ーン１には非処理血清、レーン２には１０-3ＭのＴｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００で処理した血清、レーン３には１０
-3ＭのＴｗｅｅｎ ２０で処理した血清、レーン４には
１０-3ＭのＢＲＩＪ ３５で処理した血清を堆積した。
電気泳動は図１Ａに関して記載した条件下で実施した。
図５Ａではリポタンパク質をスーダンブラックで着色し
た。図５ＢではＬｐ（ａ）に対する特異的抗血清を使用
して免疫固定を行った。中性洗剤はリポタンパク質に対
して制動効果を有しており、Ｌｐ（ａ）は他のリポタン
パク質フラクションよりも著しく影響されないことが認
められる。
【図６】図６は電気泳動写真であって、右部分が疎水性
部分を有しており且つ負に帯電した分子（１−ヒドロキ
シ−２−ナフタレンカルボン酸）を含み、左部分がこの
化合物を含まず、従って対照ゲル部分に対応するゲル上
におけるＬｐ（ａ）を含有する血清の電気泳動を示す。
この実験は、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン
酸が種々のリポタンパク質フラクションに及ぼす効果を
直接示し、ＨＤＬ、ＶＬＤＬ及びＬＤＬは著しく加速さ
れ、Ｌｐ（ａ）はほぼ同一移動度を維持している。
部分を有しており且つ負に帯電した分子（１−ヒドロキ
シ−２−ナフタレンカルボン酸）を含み、左部分がこの
化合物を含まず、従って対照ゲル部分に対応するゲル上
におけるＬｐ（ａ）を含有する血清の電気泳動を示す。
この実験は、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン
酸が種々のリポタンパク質フラクションに及ぼす効果を
直接示し、ＨＤＬ、ＶＬＤＬ及びＬＤＬは著しく加速さ
れ、Ｌｐ（ａ）はほぼ同一移動度を維持している。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年３月１５日
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【図２】
【図３】
【図５】
【図４】
【図６】
Claims (20)
- 【請求項１】 生物学的媒体中に含まれるＬｐ（ａ）及
び種々のリポタンパク質を電気泳動により分離する方法
であって、電気泳動用ゲル及び／又は前記生物学的媒体
がＬｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタンパク質の
電気泳動移動度に対して示差的に変化させ得る化合物を
含むような条件下でリポタンパク質を電気泳動により移
動させることを特徴とする方法。 - 【請求項２】 前記化合物が、好ましくはＨＤＬ、ＬＤ
Ｌ及びＶＬＤＬの分離を維持しながら、生物学的媒体中
でＬｐ（ａ）フラクションをＶＬＤＬ及びＬＤＬフラク
ションから分離できることを特徴とする請求項１に記載
の方法。 - 【請求項３】 Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポ
タンパク質の電気泳動移動度に対して示差的に変化させ
得る化合物が、カチオンもしくはカチオン錯体、疎水性
部分を有しており且つ負に帯電した分子又は中性界面活
性剤から選択されることを特徴とする請求項１又は２に
記載の方法。 - 【請求項４】 Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポ
タンパク質の電気泳動移動度に対して示差的に変化させ
得る化合物が、約８〜約９のｐＨで水酸化物を沈殿しな
いか、又は電気泳動用ゲル中に沈殿しないカチオンもし
くはカチオン錯体が少なくとも１０-3モル／ｌとなるよ
うに部分的に水酸化物を沈殿するようなカチオンもしく
はカチオン錯体から選択されることを特徴とする請求項
１から３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項５】 カチオンが２以上の酸化度を有してお
り、好ましくはメンデーレフの周期表のＩＩａ、ＩＩＩ
ａ及びＩＩＩｂ族から選択され、特にＭｇ2+，Ｃａ2+，
Ｂａ2+，Ｓｒ2+，Ｍｎ2+，Ｂｅ2+，Ａｌ3+，Ｌａ3+，Ｃ
ｅ3+，Ｉｎ3+及びＹ3+から選択され、好ましくはＭｇ2+
であり、カチオン錯体が特にＮＨ4 +，（ＮＨ4 +）2Ｆｅ
2+，ＮＨ4 +Ｆｅ3+から選択されることを特徴とする請求
項１から３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項６】 電気泳動用ゲル中のカチオン又はカチオ
ン錯体の濃度が、約１０-3〜１０-1Ｍ、好ましくは約５
×１０-3〜３×１０-2Ｍであることを特徴とする請求項
１から４のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項７】 Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポ
タンパク質の電気泳動移動度に対して示差的に変化させ
得る化合物が、疎水性部分を有しており且つ負に帯電し
た分子であることを特徴とする請求項１から３のいずれ
か一項に記載の方法。 - 【請求項８】 疎水性部分を有しており且つ負に帯電し
た分子が、アニオン性界面活性剤の類に属しており、場
合により異原子を含み、硫酸、スルホン酸、カルボン酸
もしくはリン酸のような酸基を含み、５もしくは６個の
炭素原子で飽和された少なくとも１〜６個の環を含む縮
合脂肪族鎖を有する炭素原子数３〜１０の直鎖もしくは
枝分かれ脂肪族鎖であるか、アニオン性界面活性剤の類
に属しており、場合により１（又は複数）の芳香族環も
しくは芳香族複素環により置換された炭素原子数８以
上、好ましくは１０〜１８の直鎖もしくは枝分かれ脂肪
族鎖であり、該鎖、芳香族環もしくは芳香族複素環がカ
ルボン酸、スルホン酸、硫酸もしくはリン酸のような酸
基により置換されているか、又は例えばナフタレンのよ
うに少なくとも２個の縮合芳香族環、例えばキノリンの
ように芳香族複素環に縮合した芳香族環、もしくは２個
の縮合芳香族複素環を含む負に帯電した芳香族誘導体で
あり、該環の少なくとも１個が硫酸、カルボン酸、スル
ホン酸もしくはリン酸等のような酸基を含み、他の環が
分子全体から疎水性を喪失させ得る官能基を含まず、特
に極性電荷を含まず、疎水性部分を有しており且つ負に
帯電した前記分子が特に、ドデシル硫酸ナトリウム、ド
デシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリ
ウム、２−ナフタレンカルボン酸、２−ナフタレンスル
ホン酸、２−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸、４−
ヒドロキシ−１−ナフタレンスルホン酸、１−アミノ−
５−ナフタレンスルホン酸、アミドブラック、アシッド
バイオレット１７、クーマシーブルーＲ２５０、パラチ
ンファストブラックワンから選択され、好ましくは、１
−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、３−ヒドロ
キシ−２−ナフタレンカルボン酸から選択されることを
特徴とする請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】 Ｌｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポ
タンパク質の電気泳動移動度に対して示差的に変化させ
得る化合物が、中性界面活性剤（すなわち中性洗剤）で
あることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に
記載の方法。 - 【請求項１０】 中性界面活性剤が水相に可溶性であ
り、有利にはＴｒｉｔｏｎ Ｘ１００（登録商標）、Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ４０５（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ２０
（登録商標）、ＮＰ４０（登録商標）及びＢＲＩＪ３５
（登録商標）から選択されることを特徴とする請求項９
に記載の方法。 - 【請求項１１】 電気泳動用ゲル中のアニオン性界面活
性剤又は中性界面活性剤の濃度が約１０-6〜約１０
-3Ｍ、好ましくは約１０-4〜約１０-3Ｍであり、予め生
物学的媒体に導入する場合には約１０-4Ｍ〜１０-1Ｍ、
好ましくは約１０-3Ｍ〜約１０-2Ｍであることを特徴と
する請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１２】 ゲル中の負に帯電した芳香族誘導体の
濃度が、約１０-3Ｍ〜約１０-1Ｍ、好ましくは約１０-2
Ｍ〜約５×１０-2Ｍであり、予め生物学的媒体に導入す
る場合には約１０-2Ｍ〜約１Ｍ、好ましくは約５×１０
-2Ｍ〜５×１０-1Ｍであることを特徴とする請求項１か
ら３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１３】 特にＭｇ2+，Ｃａ2+，Ｂａ2+，Ｓ
ｒ2+，Ｍｎ2+，Ｂｅ2+，Ａｌ3+，Ｌａ3+，Ｃｅ3+，Ｉｎ
3+及びＹ3+から選択され、好ましくはＭｇ2+であるカチ
オン又はカチオン錯体を含んでおり、カチオン錯体が、
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ４０５、Ｔ
ｗｅｅｎ ２０、ＮＰ４０及びＢＲＩＪ３５から特に選
択された中性界面活性剤と混合したＮＨ4 +，（ＮＨ4 +）
2Ｆｅ2+，ＮＨ4 +Ｆｅ3+から選択されることを特徴とす
る電気泳動用ゲル。 - 【請求項１４】 疎水性部分を有しており且つ負に帯電
した分子であって、特に、ドデシル硫酸ナトリウム、ド
デシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリ
ウム、２−ナフタレンカルボン酸、２−ナフタレンスル
ホン酸、２−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸、４−
ヒドロキシ−１−ナフタレンスルホン酸、１−アミノ−
５−ナフタレンスルホン酸、アミドブラック、アシッド
バイオレット１７、クーマシーブルーＲ２５０、パラチ
ンファストブラックワンから選択され、好ましくは、１
−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、３−ヒドロ
キシ−２−ナフタレンカルボン酸から選択された分子を
含むことを特徴とする電気泳動用ゲル。 - 【請求項１５】 生物中のＬｐ（ａ）の存在に結び付け
られる粥腫形成の危険を人体で決定するための、請求項
１から１２のいずれか一項に記載の方法の適用。 - 【請求項１６】 Ｌｐ（ａ）の存在に結び付けられる粥
腫形成の危険のｉｎｖｉｔｒｏ決定方法であって、人体
から採取した生物学的サンプル、特に血清又は血漿に基
づいて実施され、請求項１から１２のいずれか一項に定
義したようなＬｐ（ａ）の電気泳動移動度を他のリポタ
ンパク質の電気泳動移動度に対して示差的に変化させ得
る少なくとも１種の化合物を含む電気泳動用ゲル上、特
に請求項１３又は１４に記載のゲル上、又は必要量の前
記化合物が浸透するために十分な時間、前記化合物を含
まない従来のゲルを前記化合物の溶液中、特に請求項５
に列挙した類から選択されたカチオンもしくはカチオン
錯体、特に請求項８に列挙した類から選択された疎水性
部分を有しており且つ負に帯電した分子又は特に請求項
１０に列挙した類から選択された中性界面活性剤の溶液
中に浸漬させることにより前記従来のゲルからその場で
調製されたゲル上に適量の液体形態の生物学的サンプル
を堆積する段階と、電気泳動により移動させる段階と、
生物学的サンプル中にＬｐ（ａ）が存在する場合には、
着色剤スーダンブラック、スーダンレッドのようなリポ
タンパク質の特異的着色剤、脂質の特異的酵素試薬又は
リポタンパク質、特にＬｐ（ａ）に対する標識抗体を使
用してＬｐ（ａ）を検出する段階とを含む方法。 - 【請求項１７】 Ｌｐ（ａ）の存在に結び付けられる粥
腫形成の危険のｉｎｖｉｔｒｏ決定方法であって、人体
から採取された生物学的サンプル、特に血清又は血漿に
基づいて実施され、採取した生物学的サンプルを、特に
請求項８に列挙した類から選択された疎水性部分を有し
ており且つ負に帯電した分子又は特に請求項１０に列挙
した類の中性界面活性剤を含む溶液と共にインキュベー
トする段階と、こうして処理した生物学的サンプルの適
量を従来の電気泳動用ゲルに堆積する段階と、電気泳動
により移動させる段階と、生物学的サンプル中にＬｐ
（ａ）が存在する場合には、着色剤スーダンブラック、
スーダンレッドのようなリポタンパク質の特異的着色
剤、脂質の特異的酵素試薬又はリポタンパク質、特にＬ
ｐ（ａ）に対する抗体を使用してＬｐ（ａ）を検出する
段階とを含む方法。 - 【請求項１８】 特にＬＡＵＲＥＬＬらの方法に従い、
Ｌｐ（ａ）の付加的定量段階を含むことを特徴とする請
求項１６又は１７に記載の方法。 - 【請求項１９】 請求項１から１２のいずれか一項に記
載の方法又は請求項１６から１８のいずれか一項に記載
の方法を実施するためのキットであって、電気泳動用ゲ
ル、特にアガロースゲルと、特に請求項５に列挙した類
から選択されたカチオンもしくはカチオン錯体、特に請
求項８に列挙した類から選択された負に帯電した疎水性
分子、又は特に請求項１０に列挙した類から選択された
中性界面活性剤からなる化合物の溶液であって、ゲルを
再緩衝させるため又は生物学的サンプルに加えるために
使用される１又は複数の溶液と、ゲル上でリポタンパク
質を電気泳動により移動させるために必要な緩衝溶液
と、ゲル上で移動後にＬｐ（ａ）を含むリポタンパク質
を検出することが可能な試薬、特に着色剤スーダンブラ
ック、スーダンレッド又は脂質の特異的酵素試薬とを含
むキット。 - 【請求項２０】 請求項１から１２のいずれか一項に記
載の方法又は請求項１６から１８のいずれか一項に記載
の方法を実施するためのキットであって、請求項１３又
は１４に記載のゲルと、ゲル上でリポタンパク質を電気
泳動により移動させるために必要な緩衝溶液と、ゲル上
で移動後にＬｐ（ａ）を含むリポタンパク質を検出する
ことが可能な試薬、特に着色剤スーダンブラック、スー
ダンレッド又は脂質の特異的酵素試薬とを含むキット。
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| JP2005326407A (ja) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Sebia | キャピラリー電気泳動によりタンパク質を分離する改良方法とキャピラリー電気泳動用バッファー組成物 |
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