JP2000227432A - 肺癌の予後検査方法 - Google Patents
肺癌の予後検査方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 臨床診断や治療法を決定するための肺癌患者
の予後を予測する方法を提供するものである。 【解決手段】 治療前の肺癌患者の血清中の血管内皮細
胞増殖因子／血管透過性因子（VEGF/VPF）濃度に基いて
肺癌の予後を検査する。
の予後を予測する方法を提供するものである。 【解決手段】 治療前の肺癌患者の血清中の血管内皮細
胞増殖因子／血管透過性因子（VEGF/VPF）濃度に基いて
肺癌の予後を検査する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、治療前の肺癌患者
の血清中の血管内皮細胞増殖因子／血管透過性因子（ V
EGF/VPF：以下単にＶＰＦという）濃度を測定すること
により、肺癌患者の予後を予測する方法に関するもので
あり、臨床診断や治療法を決定するための検査法として
利用されるもので、医療および検査技術に属するもので
ある。
の血清中の血管内皮細胞増殖因子／血管透過性因子（ V
EGF/VPF：以下単にＶＰＦという）濃度を測定すること
により、肺癌患者の予後を予測する方法に関するもので
あり、臨床診断や治療法を決定するための検査法として
利用されるもので、医療および検査技術に属するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】本発明者らは、先に治療後の肺癌患者の
血清中のＶＰＦ濃度の測定により肺癌の再発あるいは転
移の予測ができることを明らかにした（特開平１０−１
７７０２３号公報）。また、酵素免疫測定法におけるＶ
ＰＦの検出法についてもすでに本発明者らにより確立さ
れており、数pg/mlのＶＰＦを検出できることを明らか
にしている（特開平８−３１３５２２号公報）。また、
先にも示したことであるが、肺癌において血清ＣＥＡ値
が予後因子となることが示唆されているが、否定的な結
果も報告されており、広く利用されるまでには至ってい
ない。
血清中のＶＰＦ濃度の測定により肺癌の再発あるいは転
移の予測ができることを明らかにした（特開平１０−１
７７０２３号公報）。また、酵素免疫測定法におけるＶ
ＰＦの検出法についてもすでに本発明者らにより確立さ
れており、数pg/mlのＶＰＦを検出できることを明らか
にしている（特開平８−３１３５２２号公報）。また、
先にも示したことであるが、肺癌において血清ＣＥＡ値
が予後因子となることが示唆されているが、否定的な結
果も報告されており、広く利用されるまでには至ってい
ない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、肺癌患
者の治療を行ううえで、治療前に治療後の患者の予後が
予測されれば、臨床診断や治療法の決定に非常に有益で
あるため、先の研究がそれらに応用できないか検討した
のである。すなわち、本発明は、治療前の肺癌患者の予
後の予測に関する方法を提供することを課題とするもの
である。
者の治療を行ううえで、治療前に治療後の患者の予後が
予測されれば、臨床診断や治療法の決定に非常に有益で
あるため、先の研究がそれらに応用できないか検討した
のである。すなわち、本発明は、治療前の肺癌患者の予
後の予測に関する方法を提供することを課題とするもの
である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を行い、現状における治療前の肺
癌患者の血清中ＶＰＦ値と治療後の患者の１年生存率お
よび２年生存率との間に密接な関連があることを解明
し、治療前の肺癌患者の血清中のＶＰＦ濃度を測定する
ことにより、肺癌患者の１年生存率および２年生存率の
予測が可能であることを見出し、また、このＶＰＦ濃度
の測定においてＶＰＦに対する抗体が有効であることを
見出し、本発明を完成したのである。すなわち、本発明
は、治療前の肺癌患者の血清中のＶＰＦ濃度に基くこと
を特徴とする肺癌の予後検査方法に関するものであり、
また、ＶＰＦ濃度の測定がＶＰＦと特異的に結合する化
合物を用いて行われることを特徴とする当該肺癌の予後
検査方法であり、さらにＶＰＦと特異的に結合する物質
が抗体であることを特徴とする前記肺癌の予後検査方法
に関するものである。本発明によれば、現状の治療方法
による肺癌患者の１年生存率および２年生存率の予測が
可能である。
を解決すべく鋭意研究を行い、現状における治療前の肺
癌患者の血清中ＶＰＦ値と治療後の患者の１年生存率お
よび２年生存率との間に密接な関連があることを解明
し、治療前の肺癌患者の血清中のＶＰＦ濃度を測定する
ことにより、肺癌患者の１年生存率および２年生存率の
予測が可能であることを見出し、また、このＶＰＦ濃度
の測定においてＶＰＦに対する抗体が有効であることを
見出し、本発明を完成したのである。すなわち、本発明
は、治療前の肺癌患者の血清中のＶＰＦ濃度に基くこと
を特徴とする肺癌の予後検査方法に関するものであり、
また、ＶＰＦ濃度の測定がＶＰＦと特異的に結合する化
合物を用いて行われることを特徴とする当該肺癌の予後
検査方法であり、さらにＶＰＦと特異的に結合する物質
が抗体であることを特徴とする前記肺癌の予後検査方法
に関するものである。本発明によれば、現状の治療方法
による肺癌患者の１年生存率および２年生存率の予測が
可能である。
【０００５】
【発明の実施の形態】ＶＰＦは、血管新生すなわち毛細
血管内皮細胞の増殖、移動および組織への浸潤と言う現
象は胎児の生長、創傷治癒、癌細胞の増殖などの生理的
または病理的現象において重要な役割を果たしているこ
とが知られているもので、マウス、ラット、モルモッ
ト、ウシ及びヒトの正常又は腫瘍細胞株で分泌されてお
り、また組織別では脳、下垂体、腎臓、卵巣に存在する
ことが明らかにされているものである[Ferrara,N.、et.
al. Endocrine Reviews 13:18(1992)]。またＶＰＦ
は乳癌の血管新生と転移［Weider、N.et.al. N.Engl.
J.Med. 324:1(1991)］や腎細胞癌の血管新生［医学の
あゆみ、168:231(1994)］、あるいは網膜疾患における
血管新生［Adamis.A.P.et.al.、Biochem.Biophys.Res.C
omm.、193:631(1993)］に関与していることが報告され
ているものである。ヒトＶＰＦ遺伝子についてはそのc
ＤＮＡがすでに単離されて塩基配列が決定され、アミノ
酸配列も推定されている。この遺伝子からアミノ酸残基
数の異なる４種類の蛋白（アミノ酸残基数が１２１個、
１６５個、１８９個、２０６個の４種類）が作られ、そ
れらの中で１２１個のアミノ酸残基数のもの（ＶＰＦ12
1）と１６５個のアミノ酸残基数のもの（ＶＰＦ165）が
成熟蛋白であると言われている［Ferrara N.,et.al.、
Endocrine Reviews 13:18(1992)］。ＶＰＦ121はＶＰ
Ｆ165のカルボキシル末端の４４個のアミノ酸が欠損し
たものであり、ＶＰＦ121とＶＰＦ165の間に、血管内皮
細胞に対する作用の違いがあるかどうかについては不明
なものである。
血管内皮細胞の増殖、移動および組織への浸潤と言う現
象は胎児の生長、創傷治癒、癌細胞の増殖などの生理的
または病理的現象において重要な役割を果たしているこ
とが知られているもので、マウス、ラット、モルモッ
ト、ウシ及びヒトの正常又は腫瘍細胞株で分泌されてお
り、また組織別では脳、下垂体、腎臓、卵巣に存在する
ことが明らかにされているものである[Ferrara,N.、et.
al. Endocrine Reviews 13:18(1992)]。またＶＰＦ
は乳癌の血管新生と転移［Weider、N.et.al. N.Engl.
J.Med. 324:1(1991)］や腎細胞癌の血管新生［医学の
あゆみ、168:231(1994)］、あるいは網膜疾患における
血管新生［Adamis.A.P.et.al.、Biochem.Biophys.Res.C
omm.、193:631(1993)］に関与していることが報告され
ているものである。ヒトＶＰＦ遺伝子についてはそのc
ＤＮＡがすでに単離されて塩基配列が決定され、アミノ
酸配列も推定されている。この遺伝子からアミノ酸残基
数の異なる４種類の蛋白（アミノ酸残基数が１２１個、
１６５個、１８９個、２０６個の４種類）が作られ、そ
れらの中で１２１個のアミノ酸残基数のもの（ＶＰＦ12
1）と１６５個のアミノ酸残基数のもの（ＶＰＦ165）が
成熟蛋白であると言われている［Ferrara N.,et.al.、
Endocrine Reviews 13:18(1992)］。ＶＰＦ121はＶＰ
Ｆ165のカルボキシル末端の４４個のアミノ酸が欠損し
たものであり、ＶＰＦ121とＶＰＦ165の間に、血管内皮
細胞に対する作用の違いがあるかどうかについては不明
なものである。
【０００６】本発明は、治療前の肺癌患者の血清中のＶ
ＰＦ濃度を測定することを特徴とするものであり、肺癌
患者において確定診断後、当該肺癌患者における１年生
存率および２年生存率と血清中ＶＰＦ濃度との密接な関
係、即ち、肺癌患者において、肺癌と診断され１年以内
あるいは２年以内に死亡した患者の血清中ＶＥＧＦ濃度
は、１年以上あるいは２年以上生存した肺癌患者の血清
中ＶＥＧＦ濃度に比べ、有意に高値であると言う関係に
基づいて、血清中ＶＰＦ濃度を測定することにより、肺
癌患者が１年間以上あるいは２年以上生存でき得るか否
かを予測することを可能とするものであり、血清中のＶ
ＰＦ濃度の測定方法としては特に制限はないが、例え
ば、ＶＥＧＦと特異的に結合する物質を用いる方法が挙
げられる。このような物質としては、例えば、ＶＰＦに
結合する抗体や受容体などが挙げられる。ＶＰＦに対す
る抗体としては、モノクローナル抗体の他、ポリクロー
ナル抗体を用いることも可能である。またヒト化などの
特殊抗体を用いることも可能である。それら抗体は適宜
標識して用い得る。標識としては、例えば、赤血球、ラ
テックス、放射性同位元素、酵素、発光物質、蛍光物
質、金属分子、金属ゲル、バクテリオファージなどを用
いることが可能である。一方、抗体に代えて、ＶＥＧＦ
に対する公知の受容体を用いることも可能である(Shibu
ya. M. et al, Oncogene, 5:519(1990)、Jaime.C.et a
l, Science, 255 :989(1992)参照）
ＰＦ濃度を測定することを特徴とするものであり、肺癌
患者において確定診断後、当該肺癌患者における１年生
存率および２年生存率と血清中ＶＰＦ濃度との密接な関
係、即ち、肺癌患者において、肺癌と診断され１年以内
あるいは２年以内に死亡した患者の血清中ＶＥＧＦ濃度
は、１年以上あるいは２年以上生存した肺癌患者の血清
中ＶＥＧＦ濃度に比べ、有意に高値であると言う関係に
基づいて、血清中ＶＰＦ濃度を測定することにより、肺
癌患者が１年間以上あるいは２年以上生存でき得るか否
かを予測することを可能とするものであり、血清中のＶ
ＰＦ濃度の測定方法としては特に制限はないが、例え
ば、ＶＥＧＦと特異的に結合する物質を用いる方法が挙
げられる。このような物質としては、例えば、ＶＰＦに
結合する抗体や受容体などが挙げられる。ＶＰＦに対す
る抗体としては、モノクローナル抗体の他、ポリクロー
ナル抗体を用いることも可能である。またヒト化などの
特殊抗体を用いることも可能である。それら抗体は適宜
標識して用い得る。標識としては、例えば、赤血球、ラ
テックス、放射性同位元素、酵素、発光物質、蛍光物
質、金属分子、金属ゲル、バクテリオファージなどを用
いることが可能である。一方、抗体に代えて、ＶＥＧＦ
に対する公知の受容体を用いることも可能である(Shibu
ya. M. et al, Oncogene, 5:519(1990)、Jaime.C.et a
l, Science, 255 :989(1992)参照）
【０００7】
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
るが本発明はこれら実施例に制限されるものではない。 （１）抗ＶPＦポリクローナル抗体の作製 単離したヒトＶPＦｃＤＮＡをグルタチオンＳ-トランス
フェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白（ＧＳＴ−ＶPＦ）
として大腸菌で産生させ、得られた蛋白を抗原として常
法に従ってウサギ抗ＶPＦポリクローナル抗体を作製し
た。抗体価の上昇したウサギの血清を分離し、陰イオン
交換カラムクロマトグラフィーによりウサギ抗ＶPＦポ
リクローナル抗体のＩgＧ画分を得た。
るが本発明はこれら実施例に制限されるものではない。 （１）抗ＶPＦポリクローナル抗体の作製 単離したヒトＶPＦｃＤＮＡをグルタチオンＳ-トランス
フェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白（ＧＳＴ−ＶPＦ）
として大腸菌で産生させ、得られた蛋白を抗原として常
法に従ってウサギ抗ＶPＦポリクローナル抗体を作製し
た。抗体価の上昇したウサギの血清を分離し、陰イオン
交換カラムクロマトグラフィーによりウサギ抗ＶPＦポ
リクローナル抗体のＩgＧ画分を得た。
【０００８】（２）抗ＶＰＦポリクローナル抗体の酵素
標識 ＩgＧ画分の一部をペプシンで消化してＦ(ab’)２を調
製後、ヒンジ法によりペルオキシダーゼ（西洋わさび）
と結合させ、ペルオキシダーゼ標識したウサギ抗ＶＰＦ
ポリクローナル抗体を得た。
標識 ＩgＧ画分の一部をペプシンで消化してＦ(ab’)２を調
製後、ヒンジ法によりペルオキシダーゼ（西洋わさび）
と結合させ、ペルオキシダーゼ標識したウサギ抗ＶＰＦ
ポリクローナル抗体を得た。
【０００９】（３）肺癌患者血清中ＶＰＦ濃度の測定 肺癌患者血清中ＶＰＦ濃度を以下に示すように、酵素免
疫測定法により測定した。抗ＶＰＦポリクローナル抗体
（５μｇ／ｍｌ）を１００μl/wellずつ９６穴プレート
にまき４℃で一晩放置した後、０.１％ウシ血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）、ＰＢＳで４回洗浄した。１％ＢＳＡ、
０.１Ｍ塩化ナトリウム、０.１％アジ化ナトリウム、
０.１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液pＨ６.５でブロッキング
（３７℃で４時間）した後、１％ＢＳＡ、０.４％ゲラ
チン、１mＭ塩化マグネシウム、２０mＭエチレンジアミ
ン四酢酸ナトリウム、０.１Ｍ塩化ナトリウム、０.１％
アジ化ナトリウムを含む５０mＭリン酸ナトリウム緩衝
液pＨ７.０（検体希釈液）で３希釈した血清あるいは同
検体希釈液に溶解した標準ＶＰＦを入れ室温で１時間放
置した。０.１％ＢＳＡ、ＰＢＳで６回洗浄後、ペルオ
キシダーゼ標識抗ＶＥＧＦポリクローナル抗体を１００
μl/wellずつ入れ室温で１時間反応させた。再度、０.
１％ＢＳＡ、ＰＢＳで８回洗浄後、０.１２５％（ｗ/
ｖ）オルトフェニレンジアミン、０.０１５％過酸化水
素、０.２Ｍトリス（ヒドロキシメチル（アミノメタ
ン）-クエン酸緩衝液（pＨ５.２）を１００μl/wellず
つ入れ、室温で３０分間反応させた。２Ｎ硫酸を１００
μl/wellずつ入れ、反応を停止させた後、６５０nmの吸
光度に対する４９０nmの吸光度をプレートリーダー（M-
Vmax, Molecular Devices社製）で測定した。
疫測定法により測定した。抗ＶＰＦポリクローナル抗体
（５μｇ／ｍｌ）を１００μl/wellずつ９６穴プレート
にまき４℃で一晩放置した後、０.１％ウシ血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）、ＰＢＳで４回洗浄した。１％ＢＳＡ、
０.１Ｍ塩化ナトリウム、０.１％アジ化ナトリウム、
０.１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液pＨ６.５でブロッキング
（３７℃で４時間）した後、１％ＢＳＡ、０.４％ゲラ
チン、１mＭ塩化マグネシウム、２０mＭエチレンジアミ
ン四酢酸ナトリウム、０.１Ｍ塩化ナトリウム、０.１％
アジ化ナトリウムを含む５０mＭリン酸ナトリウム緩衝
液pＨ７.０（検体希釈液）で３希釈した血清あるいは同
検体希釈液に溶解した標準ＶＰＦを入れ室温で１時間放
置した。０.１％ＢＳＡ、ＰＢＳで６回洗浄後、ペルオ
キシダーゼ標識抗ＶＥＧＦポリクローナル抗体を１００
μl/wellずつ入れ室温で１時間反応させた。再度、０.
１％ＢＳＡ、ＰＢＳで８回洗浄後、０.１２５％（ｗ/
ｖ）オルトフェニレンジアミン、０.０１５％過酸化水
素、０.２Ｍトリス（ヒドロキシメチル（アミノメタ
ン）-クエン酸緩衝液（pＨ５.２）を１００μl/wellず
つ入れ、室温で３０分間反応させた。２Ｎ硫酸を１００
μl/wellずつ入れ、反応を停止させた後、６５０nmの吸
光度に対する４９０nmの吸光度をプレートリーダー（M-
Vmax, Molecular Devices社製）で測定した。
【００１０】（４）肺癌患者血清中ＶＰＦ測定結果 治療開始後１年未満に死亡した肺癌患者２３例および治
療開始後１年以上生存した肺癌患者４８例、合計７１例
の肺癌患者の治療前血清中ＶＰＦ濃度を上記方法にて測
定した。その結果を表１に示した。χ（カイ）二乗検定
の結果、治療前血清中ＶＰＦ濃度２００pg/mlを境界値
とした場合、１年未満に死亡した肺癌患者群と１年以上
生存した肺癌患者群との間において、有意差（ｐ＜０.
００１）を認めた。これは、治療前血清中ＶＰＦ濃度が
２００pg/ml以上を示す肺癌患者は、１年未満に死亡す
る可能性が有意に高いことを示しており、治療前血清中
ＶＰＦ濃度を測定することにより、患者の予後が推測可
能であることを示している。
療開始後１年以上生存した肺癌患者４８例、合計７１例
の肺癌患者の治療前血清中ＶＰＦ濃度を上記方法にて測
定した。その結果を表１に示した。χ（カイ）二乗検定
の結果、治療前血清中ＶＰＦ濃度２００pg/mlを境界値
とした場合、１年未満に死亡した肺癌患者群と１年以上
生存した肺癌患者群との間において、有意差（ｐ＜０.
００１）を認めた。これは、治療前血清中ＶＰＦ濃度が
２００pg/ml以上を示す肺癌患者は、１年未満に死亡す
る可能性が有意に高いことを示しており、治療前血清中
ＶＰＦ濃度を測定することにより、患者の予後が推測可
能であることを示している。
【００１１】
【表１】
【００１２】（５）肺癌患者血清中ＶＰＦ測定結果 治療開始後２年未満に死亡した肺癌患者２９例および治
療開始後２年以上生存した肺癌患者１２例、合計４１例
の肺癌患者の治療前血清中ＶＰＦ濃度を上記方法にて測
定した。その結果を表２に示した。χ（カイ）二乗検定
の結果、治療前血清中ＶＰＦ濃度２００pg/mlを境界値
とした場合、２年未満に死亡した肺癌患者群と２年以上
生存した肺癌患者群との間において、有意差（ｐ＝０.
０００２）を認めた。これは、治療前血清中ＶＰＦ濃度
が２００pg/ml以上を示す肺癌患者は、２年未満に死亡
する可能性が有意に高いことを示しており、治療前血清
中ＶＰＦ濃度を測定することにより、患者の予後が推測
可能であることを示している。
療開始後２年以上生存した肺癌患者１２例、合計４１例
の肺癌患者の治療前血清中ＶＰＦ濃度を上記方法にて測
定した。その結果を表２に示した。χ（カイ）二乗検定
の結果、治療前血清中ＶＰＦ濃度２００pg/mlを境界値
とした場合、２年未満に死亡した肺癌患者群と２年以上
生存した肺癌患者群との間において、有意差（ｐ＝０.
０００２）を認めた。これは、治療前血清中ＶＰＦ濃度
が２００pg/ml以上を示す肺癌患者は、２年未満に死亡
する可能性が有意に高いことを示しており、治療前血清
中ＶＰＦ濃度を測定することにより、患者の予後が推測
可能であることを示している。
【００１３】
【表２】
【００１４】
【発明の効果】本発明によれば、血清中のＶＰＦ量を測
定することにより、肺癌患者の予後を予測することが可
能であり、本発明は臨床診断や治療法を決定するための
検査法として有用なものである。
定することにより、肺癌患者の予後を予測することが可
能であり、本発明は臨床診断や治療法を決定するための
検査法として有用なものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G045 AA01 AA26 BB01 BB14 BB41 BB46 BB51 CA26 DA78 FA29 FB01 FB03 FB06 FB07 GC10 JA01 JA06
Claims (3)
- 【請求項１】 治療前の肺癌患者の血清中の血管内皮細
胞増殖因子／血管透過性因子（VEGF/VPF）濃度に基くこ
とを特徴とする肺癌の予後検査方法。 - 【請求項２】 血清中の血管内皮細胞増殖因子／血管透
過性因子（VEGF/VPF）濃度の測定が血管内皮細胞増殖因
子／血管透過性因子（VEGF/VPF）と特異的に結合する化
合物を用いて行われることを特徴とする請求項１記載の
肺癌の予後検査方法。 - 【請求項３】 血管内皮細胞増殖因子／血管透過性因子
（VEGF/VPF）と特異的に結合する物質が抗体であること
を特徴とする請求項２記載の肺癌の予後検査方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11029933A JP2000227432A (ja) | 1999-02-08 | 1999-02-08 | 肺癌の予後検査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11029933A JP2000227432A (ja) | 1999-02-08 | 1999-02-08 | 肺癌の予後検査方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000227432A true JP2000227432A (ja) | 2000-08-15 |
Family
ID=12289798
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11029933A Pending JP2000227432A (ja) | 1999-02-08 | 1999-02-08 | 肺癌の予後検査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000227432A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107589266A (zh) * | 2017-08-09 | 2018-01-16 | 上海原科实业发展有限公司 | 一种血管内皮生长因子胶乳增强免疫比浊试剂盒及其应用 |
-
1999
- 1999-02-08 JP JP11029933A patent/JP2000227432A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107589266A (zh) * | 2017-08-09 | 2018-01-16 | 上海原科实业发展有限公司 | 一种血管内皮生长因子胶乳增强免疫比浊试剂盒及其应用 |
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