JP2000513201A

JP2000513201A - 上皮小体ホルモン様たんぱく質に関連する化合物および方法

Info

Publication number: JP2000513201A
Application number: JP09506668A
Authority: JP
Inventors: デフトス，レオナード・ジエイ; ウイテイ，トーマス・アール
Original assignee: アイ・シー・エヌ・フアーマシユーテイカルズ
Priority date: 1995-07-20
Filing date: 1996-06-10
Publication date: 2000-10-10
Also published as: EP0871883A1; AU6172196A; WO1997004312A1; KR19990035755A

Abstract

(57)【要約】本発明は、上皮小体ホルモン関連たんぱく（ＰＴＨＲＰ）１４０−１７３および／あるいはＰＴＨＲＰ１０９−１４１上の単数または複数のエピトープに特異的に結合することができる抗体および他のエピトープ特異的結合分子を提供する。本発明の他の側面は、本発明のエピトープ特異的結合分子に結合することができる種々のポリペプチドおよび他の分子を提供すること、ならびに組織、細胞および／あるいは体液中のＰＴＨＲＰの検出と種々の疾患の診断、監視および／あるいは治療のためのアッセイとキットを提供することを含む。

Description

【発明の詳細な説明】上皮小体ホルモン様たんぱく質に関連する化合物および方法米国政府はＮｏ．ＣＡ４９４７４に従い、本発明を許諾する権利を有する。発明の分野本発明の分野は上皮小体ホルモン様たんぱく質に関連する化学である。発明の背景悪性の体液性高カルシウム血症（ＨＨＭ）とも称される悪性疾患関連の高カルシウム血症は、多くの形態の癌、腫瘍および他の新生物の重要な病理徴候である。悪性疾患関連高カルシウム血症はしばしば上皮小体ホルモン様たんぱく質（文献中では上皮小体ホルモン関連たんぱく質とも称される）（ＰＴＨＲＰ）（配列番号１）の過剰発現によって引き起こされる。上皮小体ホルモン様たんぱく質は、骨吸収および腎におけるカルシウムの再吸収を刺激して、血液中のカルシウム濃度を危険レベルまで上昇させる。上皮小体ホルモン様たんぱく質の分泌は数多くの組織から誘導される腫瘍に結びついており、ＰＴＨＲＰの過剰発現は腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌および卵巣癌を含めた多くの異なる種類の癌に結びついてきた。ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の検討はＢｕｒｔｉｓ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３８：２１７１−２１８３（１９９２）の中に認められる。遺伝子構造の解析によって決定されるように、ヒト上皮小体ホルモン様たんぱく質は、Ｓｕｖａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３７：８９３−８９６（１９８７）およびＭａｇｎｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５９７−６０１（１９８８）に述べられているように、３６個のアミノ酸リーダー配列、１−１３９アミノ酸たんぱく質および１−１４１アミノ酸たんぱく質を持つ前駆体分子から誘導される１７３アミノ酸たんぱく質から成る。特に異なる指示がない限り、本文中で使用される時、「ＰＴＨＲＰ」および「上皮小体ホルモン様たんぱく質」の語はヒトＰＴＨＲＰ分子（配列番号１）を指す。上皮小体ホルモン様たんぱく質の構造および上皮小体ホルモン様たんぱく質をコードする遺伝子の検討は、特に、Ｂｕｒｔｉｓ、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３８：２１７１−２１８３の中に認められる。上皮小体ホルモン様たんぱく質は体内でいくつかのたんぱく分解性開裂を受ける。ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の様々な領域が様々な濃度で血流中に循環していることが、Ｒａｔｃｌｉｆｆｅら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３７：１７８１−１７８７（１９９１）、むＢｕｒｔｉｓら、Ｊ．Ｂｏｎｅ．Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．６（補遺１）：５２２９（１９９１）の中に認められている。さらに、種々のＰＴＨＲＰ分子の特異的個体群はまた新生物の進行の従っても異なりうる。それ故、ＰＴＨＲＰの多くの異なるプロセシングされた形態、すなわちＰＴＨＲＰの「アイソフォーム」が新生物細胞において様々なレベルの量で産生される。従って、ＰＴＨＲＰの種々の領域に特異的な抗体は、種々の体液、組織および細胞における使用可能な抗体結合部位の相対的な量に依存して種々の強さの結合シグナルを産生する。個体における種々のプロセシングされた形態のＰＴＨＲＰ間の変動性は、ＰＴＨＲＰアッセイならびに新生物の治療と診断にとって重要な意味を持つ。１−１７３ＰＴＨＲＰ配列（配列番号１）を含むＰＴＨＲＰ配列の種々の領域に特異的な種々の抗体は、分子を検出する能力が有意に異なると考えられるからである。それ故、種々のＰＴＨＲＰ特異的抗体は、どれほど良好にＰＴＨＲＰを検出することができるか、またその結果としてどれほど良好に新生物を検出することができるかに関して差がある。新生物細胞における上皮小体ホルモン様たんぱく質の頻繁な過剰発現と、過剰レベルの上皮小体ホルモン様たんぱく質産生の病的影響を考慮すると、未変性分子の特異的ペプチドを含めて、上皮小体ホルモン様たんぱく質の感受性の高い検出のための抗体を提供することは興味深い。発明の要旨本発明はＰＴＨＲＰ（配列番号１）に関連する多くの異なる化合物および方法を提供する。本発明の１つの側面は、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）上の少なくとも１個のエピトープあるいはＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）上の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合することができるエピトープ特異的結合分子を提供する。エピトープ特異的結合分子は、各々１Ｄ５と９Ｈ７の同定番号を持つハイブリドーマによって産生される抗体、および該抗体と同様の特異性を持つ分子刷り込み（molecular imprinting）によって調製されるもののような非抗体分子を含む。本発明の他の側面は、エピトープ特異的結合分子に結合する標的分子を提供する。かかる標的分子は、ＰＴＨＲＰのアミノ酸１４０−１７３（配列番号２）あるいは１０９−１４１（配列番号３）あるいはそのサブセットから成るポリペプチド、および他の非ペプチド分子を含む。本発明の他の側面は、新生物細胞および種々の体液中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）の検出、およびＰＴＨＲＰが生じさせる種々の疾患の診断と監視のためのｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏのアッセイとキットを提供する。本発明のさらに別の側面は、ｉｎｓｉｔｕあるいはｅｘｓｉｔｕで、本発明の１つ以上の異なるエピトープ特異的結合分子を患者にあるいは患者の体液または組織に投与することを含む方法のような、新生物を治療する方法を提供する。特定態様の詳細な説明本発明は、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸残基１４０−１７３（配列番号２）から成るペプチドに反応して生じるモノクローナル抗体およびＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸残基１０９−１４１（配列番号３）から成るペプチドに反応して生じるモノクローナル抗体が、単独であるいは組合せとして、ＰＴＨＲＰ分子（配列番号１）の他の領域に特異的に結合することができる他のモノクローナル抗体よりもはるかに高い感受性でＰＴＨＲＰ発現新生物細胞を検出することができ、またかかるモノクローナル抗体によるＰＴＨＲＰ（配列番号１）の検出が、他のＰＴＨＲＰ特異的抗体よりも良好に新生物、特に乳癌および前立腺癌の存在と相関したという驚くべき発見を利用するものである。エピトープ特異的結合分子本発明のひとつの側面は、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）上に存在する１個以上のエピトープに特異的な、エピトープ特異的結合分子を提供する。かかる分子は様々な抗体、特にサンディエゴのカリフォルニア大学、Ｄｒ．ＬｅｏｎａｒｄＤｅｆｔｏｓの研究室およびＳａｎＤｉｅｇｏＶｅｔｅｒａｎｓＡｆｆａｉｒｓＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒにおいて作製されたハイブリドーマ１Ｄ５によって産生されるモノクローナル抗体を含む。ハイブリドーマ１Ｄ５によって産生されるモノクローナル抗体と同様の結合特性を持つ抗体は、数ある方法の中でも特に、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）でマウスを免疫し、従来のハイブリドーマ生成手法を用いることによって得られうる。ハイブリドーマ１Ｄ５によって産生されるモノクローナル抗体と同様の結合特異性を持つ抗体は、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）に対する結合アッセイあるいは以下に述べるような他のアッセイを実施することによって確認できる。本発明のもうひとつの側面は、ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）上に存在する１個以上のエピトープに特異的な抗体を提供する。かかる分子は様々な抗体、特にサンディエゴのカリフォルニア大学、Ｄｒ．ＬｅｏｎａｒｄＤｅｆｔｏｓの研究室およびＳａｎＤｉｅｇｏＶｅｔｅｒａｎｓＡｆｆａｉｒｓＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒにおいて作製されたハイブリドーマ９Ｈ７によって産生されるモノクローナル抗体を含む。ハイブリドーマ９Ｈ７によって産生されるモノクローナル抗体と同様の結合特性を持つ抗体は、数ある方法の中でも特に、ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）でマウスを免疫し、従来のハイブリドーマ生成手法を用いることによって得られるであろう。ハイブリドーマ９Ｈ７によって作製されるモノクローナル抗体と同様の結合特異性を持つ抗体は、ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）に対する結合アッセイあるいは以下に述べるような他のアッセイを実施することによって確認できる。本文中で使用する時、「抗体」の語は免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）およびＭ（ＩｇＭ）のような従来の抗体を含み、またそれらが誘導された抗体の結合特異性と同様の結合特異性を持つ様々な抗体誘導分子を指す。かかる抗体誘導分子の例は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂｃフラグメント、Ｆａｂ ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、抗体融合たんぱく質、一本鎖抗体、ダイアボディ（diabody）、二機能性抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化ヒト化抗体等々を含む。本発明の抗体は、ウサギ、ラット、マウス、サル等々を含む様々な動物から作製されるモノクローナルおよびポリクローナル抗体を含む。それから誘導体が誘導される抗体の結合特異性と同様の結合特異性を持つ抗体誘導分子の種々のタイプ、およびそれらを作製する方法についての情報は、数ある中でも特に、Ｂｏｒｒｅｂａｃｋ、ＡｎｔｉｂｏｄｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：第２版、ＯｘｆｏｒｄＰｒｅｓｓ（１９９４），ＷｉｎｔｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ３４９：２９３−２９９（１９９１）等において認められる。本発明の抗体は、免疫グロブリンのクラスおよびアロタイプの両方において差があると考えられる。従来の抗体およびモノクローナル抗体作製のための手法は、数ある中でも特に、ＨａｒｌｏｗｅとＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ（１９８８）、ＰｅｔｅｒとＢａｕｍｇａｒｔｅｎ，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）において認められる。本発明の抗体は、Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１２７５−１２８１（１９８９）が述べている組合せライブラリーの使用およびｉｎｖｉｔｒｏでの抗体スクリーニングのための同様の手法のような、ｉｎｖｉｔｒｏでの選択手法を通して最初に分離される様々な抗体誘導分子を含む。このようなｉｎｖｉｔｒｏで選択された分子は、本発明の標的分子でライブラリーをスクリーニングすることによって分離されうる。本文中で使用する時、「エピトープ特異的結合分子」の語は、上述したようの両方の抗体を含み、また抗体と無視しうる程度の構造相同性を持つが、それでもＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）、ＰＴＨＲＰ１０４−１４３（配列番号４）、あるいはこれらのペプチドから誘導される他のサブフラグメントに特異的に結合することができる特性を持った様々な非抗体分子も含む。非抗体エピトープ特異的結合分子の例は、「分子インプリント」を含む。どのようにして分子インプリントを作製するかの説明は、特に、米国特許第５，１１０，８３３号（Ｍｏｓｓｂａｃｈ）、Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７７：１４４−１４９（１９８９）、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．５１３：１６７−１７９（１９９０）、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．５１６：３１３− ３２２（１９９０）、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．５１６：３２３−３３１（１９９０）、Ｄａｌｕｌｉｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．ａｎｄＢｉｏｅｎｇ．３９：１７６−１８４（１９９２）、およびＧｌａｄら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．３４７：１１−１３（１９８５）において教示される。本文中で提供される非抗体エピトープ特異的結合分子は、アッセイ、キット、治療プロトコールおよび本発明の他の側面において抗体と置換されうる。本発明のもうひとつの側面は、対象となる化学的あるいは生物学的特性を持った検出可能なマーカで標識したもののような、エピトープ特異的結合分子の様々な結合体を提供する。対象となるマーカは、放射性核種（たとえば¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、⁹⁹Ｔｃ）、蛍光体、酵素、発色団、ビオチン、常磁性アイソトープ、コロイド状金、ラジオオパーク造影化合物等々を含む。本発明の標識抗体は、免疫測定法および疾患治療を含む様々な処置において使用しうる。抗体、抗体の誘導体、および他の分子を標識する手法は当業者には周知であり、標識のための詳細な説明および手順は、特に、ＨａｒｌｏｗｅとＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄｓｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ（１９８８）、Ｃａｔｔｙ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ（第１および２巻）、ＩＲＬＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８９）等々において認められる。本発明のもうひとつの側面は、本発明のモノクローナル抗体作製のためのハイブリドーマを提供する。かかるハイブリドーマは、１Ｄ５、９Ｈ７およびＰＴＨＲＰエピトープに対して同様の結合特性を持ったモノクローナル抗体を作製する他のハイブリドーマを含む。ハイブリドーマの作製手法は、特に、ＰｅｔｅｒとＢａｕｍｇａｒｔｅｎ、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）に記述されている。モノクローナル抗体作製のための従来の手法が本発明のハイブリドーマの作製に好都合に採用されうる。たとえばマウスにＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）あるいは適切なエピトープを含む本発明の他の標的分子を接種して、ハイブリドーマ形成のための適当な融合パートナーおよびＰＴＨＲＰエピトープに対して同様の結合特性を持ったモノクローナル抗体を産生する他のハイブリドーマを提供することができる。本発明のもうひとつの側面は、組換えＤＮＡテクノロジーによって本発明の抗体発現のための細胞、すなわち自然には本発明の抗体を産生しない細胞を提供する。かかる抗体の組換えＤＮＡ発現は、かかる抗体をコードするポリヌクレオチド配列の使用を通して行われうる。本発明の抗体発現のための組換え細胞は、原核細胞あるいは真核細胞のいずれでもよい。抗体の組換え産生のための一般的手法は、特に、米国特許第４，８１６，３９７号（Ｂｏｓｓら）、米国特許第４，８１６，５６７号（Ｃａｂｉｌｌｙら）、英国特許第２，１８８，６３８号（Ｗｉｎｔｅｒら）、および英国特許第２，２０９，７５７号に記述されている。組換え抗体産生のためのこれらの一般的手法が、当業者によって本発明の抗体に適合されうる。本発明のもうひとつの側面は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチド配列ならびにかかるポリヌクレオチドによってコードされる抗体の発現のための発現ベクターを提供する。本発明の抗体をコードする本発明のポリヌクレオチドは、当業者には周知の組換えＤＮＡクローニング手法を用いて容易に入手されうる。たとえば、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）に特異的な抗体をコードする遺伝子は、ハイブリドーマ誘導ライブラリーの核酸ハイブリダイゼーションスクリーニングによって、あるいはＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）を実施することによって、かかる抗体を産生することのできるハイブリドーマ、たとえばハイブリドーマ１Ｄ５から分離されうる。ハイブリドーマから抗体をコードする遺伝子を分離するための方法は、特に、Ｏｒｌａｎｄｉ，Ｒ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：３８３３−３８３７（１９８９）に記述されている。標的分子本発明のさらに別の側面は、本発明の抗体に特異的に結合することができる標的分子を提供する。かかる標的分子は、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）、ＰＴＨＲＰ１０９ −１４１（配列番号３）、およびそれらのサブフラグメントと誘導体を含む。標的分子はペプチドあるいは非ペプチド分子を含みうるが、好ましくはペプチドである。ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）誘導の標的分子の特に好ましい例は、次の配列のＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸１４０−１７３（配列番号２）から成るポリペプチド、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）である：ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）標的分子の特に好ましい例は、次の配列のＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸１０９−１４１（配列番号３）から成るポリペプチド、ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）である：ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）に加えて、本発明はＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）の各々の誘導体である標的分子を提供し、かかる誘導体は、各々１Ｄ５と９Ｈ７の番号を持つハイブリドーマによって産生される抗体および本発明の他の抗体の抗原認識部位に結合することができるエピトープを含む。かかる誘導体は、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）あるいはＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、さらに付加的なアミノ酸を含むペプチドを包含する。本発明の標的分子であるＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）誘導体はまた、各々ＰＴＨＲＰ１４０ −１７３（配列番号２）あるいはＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）の完全ではないアミノ酸配列（即ち、全長アミノ配列より短い配列）、および他のスプライシング変異体から成るポリペプチドも包含する。ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の完全ではないアミノ酸配列を含むＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）誘導体は、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）のサブ領域から成るポリペプチドを系統的に生成し、かかるサブ領域をハイブリドーマ１Ｄ５によって産生される抗体あるいは本発明の他の抗体に特異的に結合する特性に関して試験することにより、容易に入手することができる。本発明の標的分子はまた、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の１個以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸残基で置換されているＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）誘導体も包含する。好ましくはかかるアミノ酸残基の置換は保存的置換である、すなわちアミノ酸残基が同様の化学特性を備えた側鎖のあるアミノ酸残基で置換されている、たとえばバリンがアラニンで置換されている、ロイシンがイソロイシンで置換されている、等々である。本発明は同様に、追加的な（付加）ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）誘導の標的分子を提供する。本発明は数多くの抗体、標的分子およびアッセイを提供する。本発明の抗体、特にモノクローナル抗体の抗原結合部位と相互作用するＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の特異的たんぱく質が分子生物学における従来手法を用いて容易に決定しうることは、当業者によって認識されるであろう。たとえば、小さなポリペプチド、たとえば６個のアミノ酸の連続的なセットは、ｉｎｖｉｔｒｏでの合成と、ハイブリドーマ１Ｄ５によって産生されるモノクローナル抗体に実際に結合するポリペプチドについての試験によって作製されうる。ハイブリドーマ９Ｈ７によって産生されるモノクローナル抗体と特異的に相互作用するＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）のエピトープは、類似の方法によって検出されうる。本発明の標的分子は、抗体結合アッセイ、たとえばハイブリドーマ１Ｄ５によって産生されるモノクローナル抗体あるいはＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）に反応して産生される他の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）と、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）間の結合に関する競合のような、従来の免疫学的手法によって同定されうる。本発明の標的分子は、当業者には周知の様々なスクリーニング法によって分離されうるが、かかるスクリーニング法は本発明の抗体を用いる。かかる方法は、ランダムペプチドライブラリーあるいはＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）あるいはＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）から誘導されるペプチド変異体のライブラリーのスクリーニングを含む。ペプチドに関するライブラリーをスクリーニングする方法の詳細な説明は、特に、ＣｌａｃｋｓｏｎとＷｅｌｌｓ、ＴｒｅｎｄｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈ．１２：１７３−１８４（１９９４）、Ｋａｙら、Ｇｅｎｅ１２８：５９−６５（１９９３）、ＬａｎｅとＳｔｅｐｈｅｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５（１９９３）、Ｋｅｌｌｅｒら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１９３：７０９−７１６（１９９３）、Ｇｌａｓｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３９０３−３９１３（１９９２）、およびＡｒｋｉｎとＹｏｎｖａｎ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：２９７−３００（１９９２）の中に認められる。本発明の標的分子に関してスクリーニングされるライブラリーは、ｉｎｖｉｔｒｏで合成されたライブラリーであるか、もしくはファージライブラリーの使用を含みうる。ファージでのペプチドライブラリーの作製とスクリーニングの詳細な手順は、たとえば、Ｓｍｉｔｈ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２８：１３１５−１３１７（１９８５）、Ｃｏｒｔｅｓｅら、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈ．１２：２６２−２６７（１９９４）、Ｓｍｉｔｈ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２：６６８−６７３（１９９１）、およびＦｅｌｉｃｉら、Ｇｅｎｅ１２８：２１−２７（１９９３）の中に認められる。標的分子についてのスクリーニングは、本発明の抗体、たとえばハイブリドーマ９Ｈ７および１Ｄ５によって産生される抗体で種々のペプチドのライブラリーをスクリーニングすることによっても達成しうる。本発明の抗体による分子の種々のライブラリーのスクリーニングは、本発明の抗体に特異的に結合する非ペプチド分子を分離するために非ペプチド分子ライブラリーに適用することができる。非ペプチドライブラリーの作製とスクリーニングは、特に、Ｄｅｌｖｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：４０４−４０６（１９９０）、Ｋａｙら、Ｇｅｎｅ１２８：５９−６５（１９９３）、Ｓｃｏｔｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：５３９８−５４０２（１９９２）、Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：５３９３−５３９７（１９９２）、およびＨｏｅｓｓら、Ｇｅｎｅ１２８：４３−４９（１９９３）の中に記述されている。さらに、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＴＨＲＰ１０９−１４３の三次元構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）やＸ線結晶学のような手法によって（少なくとも部分的に）決定しうる。ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＰＴＨＲＰ１０９− １４１（配列番号３）の三次元構造情報は、当業者が各々ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）の様々な誘導体をデザインするのに使用しうる。ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）とＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）、ならびにペプチドである本発明の他の標的分子は、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，ＰｅｐｔｉｄｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＴｅｘｔｂｏｏｋ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ（１９８８）、およびＢａｉｌｅｙ，ＡｎＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｏＰｅｐｔｉｄｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）に記述されているもののような、従来の固相法ポリペプチド合成手法によってｉｎｖｉｔｒｏで生成しうる。所望するアミノ酸配列を持ったポリペプチドの自動合成装置は、多くの供給業者、たとえばＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓから市販されており、ペプチドである本発明の標的分子を生成するのに使用することができる。さらに、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）、ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）および本発明の他の標的分子は、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）（天然にあるいは組換えＤＮＡテクノロジーによって生成される）を酵素的あるいは化学的により小さなポリペプチドフラグメントに開裂することによって生成されうる。さらに、ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）、ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）および本発明の他の標的分子はまた、Ｇｏｅｄｅｌ，ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭｅｔｈｏｄｓＩｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８５巻、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ（１９９１）に記述されているもののような、周知の組換えＤＮＡ手法によっても生成できる。本発明の標的分子は、当業者には明白な数多くの用途を持つ。たとえば、本発明の標的分子はＰＴＨＲＰ（配列番号１）を検出するための免疫測定法において使用しうる。本発明の標的分子はまた、本発明のＰＴＨＲＰ特異的抗体を作製するためにも使用できる。かかる抗体は、モノクローナル抗体あるいはポリクローナル抗体作製のための従来の手法によって作製することができ、かかる手法においては、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）のカルボキシ末端に特異的な抗体の産生を誘発するように、動物に本発明の標的分子を注射する。アッセイおよびキット本発明のもうひとつの側面は、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の検出のためのアッセイを提供する。本文中で使用する時、「アッセイ」の語は、アッセイを実施する方法と物質としてのアッセイ装置（および／あるいはアッセイ試薬）の両方を指す。本発明によって提供されるアッセイおよびアッセイ方法は、本発明の抗体および／あるいは抗体分子を用いる用途に特異的に適合されてきた数多くの免疫測定法を含む。免疫測定法は、高い親和性と特異性で互いに特異的に結合することができる分子対の使用を含みうる。かかる特異的結合分子対の典型は、抗体と該抗体上の結合部位によって認識される分子、たとえば分析物である。免疫測定法は、特異的結合分子対の構成員間、たとえば抗体と該抗体によって認識される分析物との間での複合体の形成（あるいは形成の欠如）の測定を含む。免疫測定法は直接分析物を検出することができる、すなわち分析物の濃度と直接相関するシグナルを生じるように抗体と分析物の間で複合体の形成が起こる。分析物の濃度はまた複合体形成の阻害を測定することによっても検出でき、その場合、分析物が検出可能な複合体の形成に干渉する。本発明の抗体と標的分子は、次のものを含むがそれらに限定されない様々な免疫測定法において特異的結合対成分として使用しうる：ＥＬＩＳＡ、放射免疫測定法本発明のアッセイの好ましい例は、サンドイッチ中の抗体のひとつが本発明のＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）特異的抗体であり、「サンドイッチ」の他方の抗体が本発明のＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）特異的抗体である、サンドイッチ型アッセイである。サンドイッチ型アッセイは、分析物ｔｂを固形支持体（常磁性ビーズおよびマイクロタイター皿を含む）または同様のものに結合するための第一抗体と、第一抗体によって結合される分析物に結合する特性を持つ第二抗体を用いる。溶液中の分析物を定量するように結合した第二抗体の量を測定することができる。サンドイッチアッセイにおいて使用するための特に好ましい抗体は、互いに組み合わせて使用した時の、ハイブリドーマ１Ｄ５およびハイブリドーマ９Ｈ７によって産生される抗体である。本発明の抗体および／あるいは抗体結合分子を用いる用途に容易に適合しうる多くの免疫測定法の一部に関する詳細なプロトコールは、Ｄ．Ｃａｔｔｙ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ１および２巻、ＩＲＬ（１９８９）、Ｔ．Ｃｈａｒｄ，ＡｎＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｏＲａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙａｎｄＲｅｌａｔｅｄＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ＥｌｓｅｖｉｅｒＰｒｅｓｓ（１９９０），Ｊ．Ｃｌａｕｓｅｎ，ＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓＦｏｒＴｈｅＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＥｓｔｉｍａｔｉｏｎｏｆＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓＩｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ３版、ＥｌｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８８）等々において認められる。本発明のアッセイは定量的あるいは定性的のいずれかである。本発明のもうひとつの側面では、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の１−１７３スプライシング変異体をコードするＤＮＡまたはＲＮＡを検出するアッセイが実施される。ここでもやはり、ひとたびかかる変異体を検討すべきであることが認識されれば、かかる検出を行うためのアッセイは標準的な手順を用いて実施することができ、またそのアッセイは当業者の通常の技術範囲内である。本発明はまた、本発明の１つ以上の抗体あるいは他のエピトープ特異的結合分子を被験者に投与する、ｉｎｖｉｖｏでの診断アッセイを提供する。好ましくは、抗体を検出可能なマーカで標識して、本発明の該標識抗体が結合している細胞の検出を行うが、かかる標識の例は放射性核種および陽性（ラジオオパーク）造影剤を含む。かかる診断方法は、検出可能に標識した抗体を被験者に投与し、それによって該抗体とＰＴＨＲＰ（配列番号１）の間に複合体が形成される段階と、かかる複合体を検出する段階を含みうる。本発明のアッセイはｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏのいずれかである。本発明のアッセイはまた、Ｃｕｅｌｌｏ，ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＩＩ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９３）、Ｂｕｌｌｏｃｋら、ＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓＩｎＩｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１および２巻、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ（１９８３）に記述されている手法のような免疫組織化学的手法によってＰＴＨＲＰ（配列番号１）発現細胞を検出するためのアッセイを含み、その場合ＰＴＨＲＰ（配列番号１）に結合した抗体は蛍光あるいは同様の手法によって視覚化されうる。免疫組織学的手法は、組織標本を本発明の標識抗体（直接または間接的に標識した）と共にインキュベートし、組織標本中で標識によって抗体が結合しているかどうかを検出する段階を含みうる。本発明のアッセイの一部の例では、アッセイは、分析標本に抗体を加え、分析標本中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）への抗体の結合を測定する段階を含む。かかるアッセイにおいて使用する抗体は直接あるいは間接的に標識することができる。本発明のアッセイの他の例では、分析標本中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）は、本発明の標的分子のＰＴＨＲＰ（配列番号１）への本発明の抗体の結合に干渉する。本発明の抗体はまた、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）産生細胞あるいは非産生細胞を同定するためにフロー・サイトメトリと同時に使用することもできる。本発明のもうひとつの側面は、本発明の種々の側面のひとつ以上を実施するためのキットを提供する。かかるキットは、本発明の免疫測定法を実施するために必要なひとつ以上に試薬を含み、また該方法を実施する時の精度と正確さを確保するために既知量の試薬と対象化合物を含みうる。キットはまた、本発明の方法を実施するための指示書を含みうる。本発明のキットは以下のもののひとつ以上を含みうる：本発明の抗体、本発明の標的分子、既知の濃度の標準品、緩衝液、抗体標識試薬、反応容器等々。好ましい実施例では、本発明のキットは、該アッセイを実施する際に使用しうる少なくとも２つの試薬を含む。サンドイッチアッセイを実施するためのキットは、ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）に特異的に結合する特性を持った本発明の抗体、およびＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）に特異的に結合する特性を持った本発明の抗体を含みうる。本発明のキットはさらに本発明の標的分子を含みうる。該キットに含まれる抗体および標的分子は、検出可能なマーカで標識されうる。本発明のキットはまた本発明のアッセイを実施するために有用な様々な他の試薬を含みうるが、かかる試薬は緩衝液、固形支持体、酵素基質、二次標識抗体、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の陽性対照、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の陰性対照などを含む。治療本発明のもうひとつの側面は、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の産生に関連した新生物および他の疾患を治療する方法を提供する。本文中で使用する時、「治療」の語は、治癒だけでなく症状の軽減あるいは疾患の進行速度の低下も表わす。治療方法は、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）特異的抗体を含めた本発明の１つ以上のエピトープ特異的結合分子の有効量の投与を含みうる。かかるエピトープ特異的結合分子は、標識されているかあるいは未標識でもよく、また毒素、放射性核種、抗癌薬等々のような治療薬と結合させることができる。治療的用途のための本発明の抗体は、好ましくは治療する動物の種と同じ種から誘導される抗体である。たとえば、治療する対象がヒトである時には、患者に投与するＰＴＨＲＰ（配列番号１）特異的抗体は、好ましくはヒト抗体あるいはヒト化抗体、たとえばＷｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号に記載されているようなＣＤＲグラフト化抗体あるいはヨーロッパ特許願第１２０６９４号（ＣｅｌｌＴｅｃｈ）に記載されているようなキメラ抗体である。新生物細胞を死滅させるあるいは新生物細胞の増幅を中止させる治療方法を提供することに加えて、本発明はまた、抗体あるいはエピトープ特異的結合分子を使用して全身循環中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を取り除くかあるいは「不活化」し、それによってＰＴＨＲＰ（配列番号１）の分泌に関連した高カルシウム血症を軽減する治療方法を提供する。本発明のもうひとつの側面は、本発明の抗体あるいは他のエピトープ特異的結合分子を含む医薬組成物を提供する。該組成物は、厳密な処方に依存して、治療とｉｎｖｉｖｏ診断の両方に使用することができる。本発明の抗体は多くの方法で、たとえば代表的には、経口的、鼻腔内、注射あるいは吸入によって投与することができる。本発明の抗体はまた、１つ以上の不活性キャリア物質と共に使用することもできる。本発明の抗体を投与するための好ましい手段は非経口的投与であるので、本発明の好ましい剤型は非経口投与用に至適化される。注射による非経口投与のために、剤型は、本発明に従った活性酸の製薬学的に許容される水溶性の塩の水溶液を、望ましくは０．０５−１０％の濃度で含み、また任意に、水溶液中に安定剤および／あるいは緩衝剤も含みうる。溶液の投与単位は、アンプル中に好都合に納めることができる。本発明の抗体を投与する用量は広い範囲内で変動し、また、たとえば抗体を診断あるいは治療のために使用するかどうか、疾患の重症度、患者の年齢、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）に対する特定抗体の結合親和性等々のような様々な因子に依存するであろう。１日当りに投与しる抗体の量の可能な開始範囲は約０．００１ｍｇから約２００ｍｇまでである。治療のひとつの方法では、身体から血液を取り、その血液を抗体で処置してＰＴＨＲＰ（配列番号１）を除去し、処置した血液を再び体内に戻すことにより、患者から過剰のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を取り除く。以下の実施例は本発明を例証するために提示するものであり、本発明を制限するためのものではない。実施例好ましくはプラスチック製の容器あるいはビーズを、好ましくはモノクローナルの抗体で処理して、上皮小体ホルモン様たんぱく質のアミノ酸１４０−１７３（配列番号２）を抗原決定し、該容器あるいはビーズの表面に該抗体を吸着させる。未知のレベルの上皮小体様ホルモンを含む血清サンプルを、好ましくはモノクローナルの標識した誘導体と共に被覆した容器あるいはビーズに加えて、上皮小体ホルモン様たんぱく質のアミノ酸１０９−１４１（配列番号３）を抗原決定する。該混合物をインキュベートして、２つの抗体と上皮小体ホルモン様たんぱく質を複合化させ、その固相を洗浄して複合化していない物質を取り除き、標識を検出する。シグナルは血清サンプルの上皮小体ホルモン様たんぱく質のレベルに直接比例しており、既知の濃度のキャリブレータ（較正物質）と比較した時に、上皮小体ホルモン様たんぱく質レベルの特異的決定が実施できる。代替的な実施例では、競合的アッセイが使用でき、たとえば、標識した上皮小体ホルモン様たんぱく質あるいは該１４０−１７３（配列番号２）エピトープのペプチドを上述した固相と血清サンプルに加えることができる。内因性上皮小体ホルモン様たんぱく質はこの標識物質と競合して固相と結合する。洗浄して標識を検出したのち、既知の上皮小体ホルモン様たんぱく質濃度の標準曲線を用いて、検出されたシグナルと逆比例する、サンプル中の上皮小体ホルモン様たんぱく質の量を決定することができる。上記の実施例の方法のいずれもが、その後の結合あるいは抗体結合標識を分離するための沈降反応を伴って液相で達成することができる。固相は常磁性であってもよいし、そうでなくてもよい。さらに他の実施例では、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）の異なる部分に対して惹起したモノクローナル抗体を、新生物細胞中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を検出する能力に関して試験する実験を行った。検討した抗体は、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）のＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）、およびＰＴＨＲＰ（配列番号１）の１４０−１７３（配列番号２）のアミノ酸残基１−３４から成るペプチドに応答して調製された。モノクローナル抗体は、サンディエゴのカリフォルニア大学、Ｄｒ．ＬｅｏｎａｒｄＤｅｆｔｏｓの研究室，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＶｅｔｅｒａｎｓＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌから入手した。ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）特異的抗体はハイブリドーマ９Ｈ７によって作製した。ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）特異的抗体はハイブリドーマ１Ｄ５によって作製した。これらの実験は、免疫測定法および免疫組織化学的手法のいずれでも、該抗体が手術標本および組織培養を含めた様々な新生物細胞において、特にいくつかの異なる乳癌細胞系においてＰＴＨＲＰ（配列番号１）の各々のエピトープの発現を示すことを明らかにした。後者の場合には、該細胞系においてＰＴＨＲＰ（配列番号１）をコードするｍＲＮＡが産生されることを明らかにするために、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）を実施した。均等性上記に記載した明細書は当業者が本発明を実施するのに十分であると考えられる。実際に、感染症、生化学の分野あるいは関連分野における同業者にとっては明白な、本発明を実施するための上述の方法の様々な修正は以下の特許請求の範囲内であるとみなされる。参照による包含本明細書において言及されるすべての出版物および特許出願は、本発明が関わる当業者の技術水準を示すものである。すべての出版物および特許出願は、各々の出版物あるいは特許出願が参照によって包含されることが特定的且つ個々に指示されている場合と同程度に、参照によって本文中に包含される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成８年１２月１１日（１９９６．１２．１１）【補正内容】請求の範囲１．ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）上の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）。２．抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。３．モノクローナル抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。４．該モノクローナル抗体が、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも一部から成るペプチドに応答して惹起される、請求項３に記載のＥＳＢＭ。５．該モノクローナル抗体が組換え宿主細胞によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。６．該モノクローナル抗体がハイブリドーマ１Ｄ５によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。７．ＰＴＨＲＰ１０４−１４１上の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）。８．抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。９．モノクローナル抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。１０．該モノクローナル抗体が、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも一部から成るペプチドに応答して惹起される、請求項３に記載のＥＳＢＭ。１１．該モノクローナル抗体が組換え宿主細胞によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。１２．該モノクローナル抗体がハイブリドーマ９Ｈ７によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。１３．サンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を検出する方法であって：ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）を提供する；該ＥＳＢＭを該サンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することからなる方法。１４．サンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を検出する方法であって：ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも１つの第１のエピトープに特異的に結合する第一ＥＳＢＭを提供する；ＰＴＨＲＰ１０４−１４１の少なくとも１つの第２のエピトープに特異的に結合する第二ＥＳＢＭを提供する；該第一および第二ＥＳＢＭを該サンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することからなる方法。１５．さらにＥＳＢＭの少なくとも１個をモノクローナル抗体として提供することを含む、請求項１３−１４のいずれかに記載の方法。１６．該サンプルが組織サンプルであり、さらに標識によって抗体の結合部位を同定することを含む、請求項１３−１４のいずれかに記載の方法。１７．さらにＥＳＢＭの少なくとも１個を検出可能なマーカで標識することを含む、請求項１３−１４のいずれかに記載の方法。１８．さらにＥＳＢＭの少なくとも１個を、酵素、ビオチン、ハプテン、蛍光体、発色団、重金属、常磁性アイソトープ、コロイド状金、放射性同位体、および発光団の内の少なくともひとつを含む検出可能なマーカで標識することを含む、請求項１３−１４のいずれかに記載の方法。１９．該サンプルが組織サンプルである請求項１３−１４のいずれかに記載の方法。２０．ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）を含むアッセイ。２１．サンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）をコードする１−１７３ｃＤＮＡを検出するためのアッセイであって：スプライシング変異体に特異的に結合するＥＳＢＭを提供する；該ＥＳＢＭを該サンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することを含むアッセイ。２２．サンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）をコードする１−１７３ＲＮＡを検出するためのアッセイであって：スプライシング変異体に特異的に結合するＥＳＢＭを提供する；該ＥＳＢＭを該サンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することを含むアッセイ。２３．ＥＳＢＭの少なくとも１つがモノクローナル抗体である請求項２０−２２のいずれかに記載のアッセイ。２４．ＥＳＢＭの少なくとも１つを、酵素、ビオチン、ハプテン、蛍光体、発色団、重金属、常磁性アイソトープ、コロイド状金、放射性同位体、および発光団の内の少なくともひとつを含む検出可能なマーカで標識する、請求項２０−２２のいずれかに記載のアッセイ。２５．さらに既知量の試薬、指示書および少なくとも１つの反応容器を含む、請求項２０−２２のいずれかのキット。２６．上皮小体ホルモン関連たんぱく質の産生を特徴とする疾患を治療する方法であって：請求項１−１２のいずれかに記載の１つ以上のＥＳＢＭの有効量を患者に投与することを含む方法。２７．さらに、ＥＳＢＭの少なくとも１つを毒素、放射性核種および抗癌薬の少なくともひとつと結合させることを含む、請求項２６に記載の方法。２８．ＥＳＢＭの少なくとも１つをヒト抗体およびヒト化抗体として提供することを含む、請求項２６に記載の方法。２９．さらに、患者の全身循環中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を除去あるいは「不活化する」ためにＥＳＢＭの少なくとも１つを使用することを含む請求項２６に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 3/14 43/00 １１１ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/00 43/00 １１１ 16/00 Ｃ０７Ｋ 14/00 Ｃ１２Ｐ 21/08 16/00 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｎ 5/10 ＹＣ１２Ｐ 21/08 33/577 ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＡ６１Ｋ 37/02 33/577 37/24 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）上の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）。２．抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。３．モノクローナル抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。４．該モノクローナル抗体が、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも一部から成るペプチドに応答して惹起される、請求項３に記載のＥＳＢＭ。５．該モノクローナル抗体が組換え宿主細胞によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。６．該モノクローナル抗体がハイブリドーマ１Ｄ５によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。７．ＰＴＨＲＰ１０４−１４１上の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）。８．抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。９．モノクローナル抗体を含む請求項１に記載のＥＳＢＭ。１０．該モノクローナル抗体が、ＰＴＨＲＰ（配列番号１）のアミノ酸１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも一部から成るペプチドに応答して惹起される、請求項３に記載のＥＳＢＭ。１１．該モノクローナル抗体が組換え宿主細胞によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。１２．該モノクローナル抗体がハイブリドーマ９Ｈ７によって産生される請求項１に記載のＥＳＢＭ。１３．ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）を提供する；該ＥＳＢＭをサンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することからなるサンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を検出する方法。１４．ＰＴＨＲＰ１０４−１４１の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）を提供する；該ＥＳＢＭをサンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することからなるサンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を検出する方法。１５．ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも１個の第一エピトープに特異的に結合する第一ＥＳＢＭを提供する；ＰＴＨＲＰ１０４−１４１の少なくとも１個の第二エピトープに特異的に結合する第二ＥＳＢＭを提供する；該第一および第二ＥＳＢＭをサンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することからなるサンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を検出する方法。１６．さらにＥＳＢＭの少なくとも１個をモノクローナル抗体として提供することを含む、請求項１３−１５のいずれかに記載の方法。１７．該サンプルが組織サンプルであり、さらに標識によって抗体の結合部位を同定することを含む、請求項１３−１５のいずれかに記載の方法。１８．さらにＥＳＢＭの少なくとも１個を検出可能なマーカで標識することを含む、請求項１３−１５のいずれかに記載の方法。１９．さらにＥＳＢＭの少なくとも１個を、酵素、ビオチン、ハプテン、蛍光体、発色団、重金属、常磁性アイソトープ、コロイド状金、放射性同位体、および発光団の内の少なくともひとつを含む検出可能なマーカで標識することを含む、請求項１３−１５のいずれかに記載の方法。２０．該サンプルが組織サンプルである請求項１３−１５のいずれかに記載の方法。２１．アミノ酸配列ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）を含むポリペプチド。２２．アミノ酸配列ＰＴＨＲＰ１０９−１４１（配列番号３）を含むポリペプチド。２３．請求項１−１２のＥＳＢＭのひとつに特異的に結合することができる標的分子。２４．標的分子がポリペプチドである請求項２１の標的分子。２５．さらにＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＰＴＨＲＰ１０９ −１４１（配列番号３）のうちのひとつのサブフラグメントを含む、請求項２２に記載の標的分子。２６．さらにＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）およびＰＴＨＲＰ１０９ −１４１（配列番号３）のうちのひとつの誘導体を含む、請求項２１に記載の標的分子。２７．ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）を含むアッセイ。２８．ＰＴＨＲＰ１０４−１４１の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合するエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）を含むアッセイ。２９．ＰＴＨＲＰ１４０−１７３（配列番号２）の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合する第一のエピトープ特異的結合分子（ＥＳＢＭ）；及びＰＴＨＲＰ１０４−１４１の少なくとも１個のエピトープに特異的に結合する第二のＥＳＢＭを含むサイドイッチアッセイ。３０．サンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）の１−１７３スプライシング変異体を検出するためのアッセイであって：スプライシング変異体に特異的に結合するＥＳＢＭを提供する；該ＥＳＢＭを該サンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することを含むアッセイ。３１．サンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）をコードする１−１７３ｃＤＮＡを検出するためのアッセイであって：スプライシング変異体に特異的に結合するＥＳＢＭを提供する；該ＥＳＢＭを該サンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することを含むアッセイ。３２．サンプル中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）をコードする１−１７３ＲＮＡを検出するためのアッセイであって：スプライシング変異体に特異的に結合するＥＳＢＭを提供する；該ＥＳＢＭを該サンプルに加えて複合体を形成させる；及び該複合体形成量を測定することを含むアッセイ。３３．ＥＳＢＭの少なくとも１個がモノクローナル抗体である請求項２７−３２のいずれかに記載のアッセイ。３４．ＥＳＢＭの少なくとも１個を、酵素、ビオチン、ハプテン、蛍光体、発色団、重金属、常磁性アイソトープ、コロイド状金、放射性同位体、および発光団の内の少なくともひとつを含む検出可能なマーカで標識する、請求項２７−３２のいずれかに記載のアッセイ。３５．さらに既知量の試薬、指示書および少なくとも１つの反応容器を含む、請求項２７−３２のいずれかのキット。３６．上皮小体ホルモン関連たんぱく質の産生を特徴とする疾患を治療する方法であって：請求項１−１２の１個以上のＥＳＢＭの有効量を患者に投与することを含む方法。３７．さらに、ＥＳＢＭの少なくとも１個を毒素、放射性核種および抗癌薬の少なくともひとつと結合させることを含む、請求項３６に記載の方法。３８．ＥＳＢＭの少なくとも１個をヒト抗体およびヒト化抗体として提供することを含む、請求項３６に記載の方法。３９．さらに、患者の全身循環中のＰＴＨＲＰ（配列番号１）を除去あるいは「不活化する」ためにＥＳＢＭの少なくとも１つを使用することを含む請求項３６に記載の方法。