KR19990035755A

KR19990035755A - 부갑상선 호르몬 유사 단백질과 관련된 화합물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR19990035755A
Application number: KR1019980700411A
Authority: KR
Inventors: 레오나르드 제이 데프토스; 토마스 알 위티
Original assignee: 와트 씨 데이빗, 해리 에이 루스제; 아이씨엔 파마슈티컬스, 인코포레이티드
Priority date: 1995-07-20
Filing date: 1996-06-10
Publication date: 1999-05-25
Also published as: EP0871883A1; JP2000513201A; AU6172196A; WO1997004312A1

Abstract

본 발명은 부갑상선 호르몬 관련 단백질(PTHRP) 140-173 및/또는 PTHRP 109-141상의 에피토프(들)에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 및 그 밖의 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 데에 있다. 본 발명의 다른 일면은 본 발명의 에피토프 특이적 결합 분자에 결합할 수 있는 다양한 폴리펩티드 또는 그 밖의 분자, 및 조직, 세포 및/또는 유체내에서 PTHRP를 검출하기 위한 검정법 및 키트, 및 다양한 질병의 진단, 모니터링 및/또는 치료법을 제공하는 것을 포함한다.

Description

부갑상선 호르몬 유사 단백질과 관련된 화합물 및 이의 제조방법

악성 종양 관련된 과칼슘혈증은 많은 형태의 암, 종양 및 그 밖의 종양의 중요한 병리학적 신호이다. 악성 종양 관련된 과칼슘혈증은 부갑상선 호르몬 유사 단백질(문헌에서 부갑상선 호르몬 관련 단백질로서 언급될 수도 있음)(PTHRP)의 과다 발현에 의해 종종 유발된다. 부갑상선 호르몬 유사 단백질은 뼈 흡수 및 신장에서 칼슘의 재흡수를 촉진하여 혈중 칼슘 수준을 위험 수준으로 끌어올린다. 부갑상선 호르몬 유사 단백질의 분비는 다수의 조직으로부터 유도된 종양과 관련되었고, PTHRP 과다 발현은 신장, 방광, 전립선, 유방 및 난소암을 포함하는 많은 상이한 형태의 암과 관련되었다. 문헌[Burtis, Clin. Chem. 38: 2171-2181 (1992)]에는 PTHRP가 기술되어 있다.

유전자 구조 분석에 의해 결정된 바에 따르면, 사람의 부갑상선 호르몬 유사 단백질은 36개의 아미노산 선두 서열을 갖는 전구체 분자로부터 유도된 173개의 아미노산 단백질, 1 내지 139개의 아미노산 단백질 및 1 내지 141개의 아미노산 단백질로 구성되어 있다[참고문헌: Suva, et al., Science 237: 893-896(1987) 및 Magnin, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:597-601(1988)]. 특이적으로 나타내어지지 않는다면, 본원에서 사용되는 용어 "PTHRP" 및 "부갑상선 호르몬 유사 단백질"은 사람의 PTHRP 분자를 의미한다. 문헌[Burtis, Clin. Chem. 38:2171-2183]에는 부갑상선 호르몬 유사 단백질 및 부갑상선 호르몬 유사 단백질을 코딩시키는 유전자의 구조가 기술되어 있다.

부갑상선 호르몬 유사 단백질은 신체내에서 수차례 단백질 가수 분해된다. PTHRP의 상이한 영역은 상이한 농도로 혈류에서 순환하고 있음을 발견할 수 있다[참고문헌: Ratcliffe, et al., Clin. Chem. 37:1781-1787(1991), Burtis, et al., J. Bone. Miner Res. 6 (Suppl. 1):5229 (1991)]. 더욱이, 상이한 PTHRP 분자의 특정 개체수는 또한 종양의 진행에 따라 변할 수 있다. 이와 같이, 많은 상이한 처리된 형태의 PTHRP, 즉, "동일형"의 PTHRP은 상이한 신체 유체, 조직 및 세포에서 이용할 수 있는 항체 결합 부위의 상대적인 양에 따라 상이한 세기의 결합 신호를 생성시킨다.

1-173 PTHRP 서열을 포함하는 PTHRP의 상이한 영역에 대하여 특이적인 상이한 항체가 분자를 검출하는 이들의 능력을 상당히 변화시키기 때문에, 개개의 상이한 처리된 형태의 PTHRP 중에서 변이성은 PTHRP 검정, 및 종양의 치료 및 진단에 있어 중요한 관련성이 있다. 이와 같이, 상이한 PTHRP 특이 항체는 PTHRP을 검출, 및 결과적으로 종양을 검출하는 방법에 따라 변한다.

종양 세포에서 부갑상선 호르몬 유사 단백질의 빈번한 과다 발현, 및 초과량의 부갑상선 호르몬 유사 단백질 생성의 병원성 효과가 주어질 때, 본래 분자의 특정 펩티드를 포함하여, 부갑상선 호르몬 유사 단백질의 민감한 검출을 위한 항체를 제공하는 것은 관심사항이다.

본 발명은 부갑상선 유사 단백질과 관련된 화합물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명은 PTHRP와 관련하여 많은 상이한 화합물 및 방법을 제공하는 데에 있다. 본 발명의 한 일면은 PTHRP 140-173상의 하나 이상의 에피토프 또는 PTHRP 109-141상의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 데에 있다. 에피토프 특이적 결합 분자는 각각 동정수 1D5 및 9H7을 갖는 하이브리도마에 의해 생성된 항체, 및 상기 항체와 유사한 특이도를 갖는 분자에 의해 제조된 비항체 분자를 포함한다.

본 발명의 다른 일면은 에피토프 특이적 결합 분자에 결합하는 표적 분자를 제공한다. 이들 표적 분자는 아미노산 140-173 또는 PTHRP, 또는 이들의 부그룹, 및 그 밖의 비펩티드 분자로 구성된 폴리펩티드를 포함한다.

본 발명의 다른 일면은 체외 및 체내 검정, 및 신체의 종양 세포 및 다양한 유체에서 PTHRP을 검출하고, 다양한 PTHRP-생성 질병을 진단 및 모니터링하기 위한 키트를 제공하는 데에 있다.

본 발명의 더욱 또 다른 일면은 동일반응계 또는 동일반응계 이외의 환자 및 환자의 유체 또는 조직에 본 발명의 하나 이상의 상이한 에피토프 특이적 결합 분자를 투여하는 것을 포함하는 종양을 치료하는 방법을 제공하는 데에 있다.

본 발명은 아미노산 잔기 140-173을 지닌 PTHRP로 구성된 펩티드에 대한 반응으로 생성된 단클론성 항체 및 아미노산 잔기 109-141을 지닌 PTHRP로 구성된 펩티드에 대한 반응으로 생성된 단클론성 항체는 PTHRP 분자의 다른 영역을 특이적으로 결합시킬 수 있는 그 밖의 단클론성 항체 보다 더욱 더 높은 민감도를 지닌 PTHRP 발현 종양 세포를 검출할 수 있고, 그 밖의 PTHRP 특이적 항체 보다 상기 단클론성 항체로 PTHRP의 검출이 종양, 특히 유방암 및 전립선암의 존재와 더 양호하게 상호 관련되어 있다는 놀라운 발견을 하는데 있다.

에피토프 특이적 결합 분자

본 발명의 한 일면은 PTHRP 140-173상에 존재하는 하나 이상의 에피토프에 대하여 특이적인 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 데에 있다. 이들 분자는 다양한 항체, 및 보다 상세하게는 산디에고 캘리포니아 주립대학 레오나르드 데프토스(Leonard Deftos) 박사의 실험실, 및 산디에고 베테랑 어페어스 메디칼 센터(Veterans Medical Center)에서 제조한 하이브리도마 1D5에 의해 생성된 단클론성 항체를 포함한다. 하이브리도마 1D5에 의해 생성된 단클론성 항체와 유사한 결합 특이도를 갖는 항체는 많은 방법 중에서도 특히 PTHRP 140-173으로 마우스를 면역시키고 통상의 하이브리도마 발생 기술을 사용함으로써 수득될 수 있다. 하이브리도마 1D5에 의해 생성된 단클론성 항체와 유사한 결합 특이도를 갖는 항체는 PTHRP 140-173에 대한 결합 검정법 또는 하기에 기술된 바와 같은 다른 검정법을 수행함으로써 확인될 수 있다.

본 발명의 또 다른 일면은 PTHRP 109-141 상에 존재하는 하나 이상의 에피토프에 특이적인 항체를 제공한다. 이들 분자는 다양한 항체, 및 보다 상세하게는 산디에고 캘리포니아 주립대학 레오나르드 데프토스(Leonard Deftos) 박사의 실험실, 및 산디에고 베테랑 어페어스 메디칼 센터(Veterans Medical Center)에서 제조한 하이브리도마 9H7에 의해 생성된 단클론성 항체를 포함한다. 하이브리도마 9H7에 의해 생성된 단클론성 항체와 유사한 결합 특이도를 갖는 항체는 많은 방법 중에서도 특히 PTHRP 109-141로 마우스를 면역시키고 통상의 하이브리도마 발생 기술을 사용함으로써 수득될 수 있다. 하이브리도마 9H7에 의해 생성된 단클론성 항체와 유사한 결합 특이도를 갖는 항체는 PTHRP 109-141에 대한 결합 검정법 또는 하기에 기술된 바와 같은 다른 검정법을 수행함으로써 확인될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 면역글로불린 G(IgG) 및 M(IgM)과 같은 통상의 항체를 포함하며, 항체의 결합 특이도와 유사한 결합 특이도를 갖는 다양한 항체 유도된 분자를 또한 언급한다. 이들 항체 유도된 분자의 예로는 Fab 단편, Fabc 단편, Fab' 단편, F(ab') 단편, 항체 융합 단백질, 1본쇄 항체, 다이어바디이즈(diabodies), 이작용성 항체, 키메라 항체, CDR 융합된 사람 항체 등이 있다.

본 발명의 항체는 토끼, 래트, 마우스, 원숭이 등을 포함하는 다양한 동물로부터 생성된 단클론성 및 다클론성 항체 둘 모두를 포함한다. 유도체가 유도된 항체의 결합 특이도와 유사한 결합 특이도를 갖는 상이한 형태의 항체 유도된 분자의 정보, 및 이들을 제조하는 방법은 그 중에서도 특히 문헌[Borreback, Antibody Engineering: 2nd Edition, Oxford Press (1994), Winter and Milstein, Nature 349: 293-299 (1991)] 등에 기술되어 있다. 본 발명의 항체는 면역글로불린 클래스 및 모든 형태 둘 모두로 변할 수 있다. 통상의 단클론성 항체를 생성시키기 위한 기술은 그 중에서도 특히 문헌[Harlowe and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988), Peter and Baumgarten, Monoclonal Antibodies, Springer-Verlag, New York, NY (1992)]에 기술되어 있다. 본 발명의 항체는 문헌[Huse, et al., Science 256:1275-1281 (1989)]에 기술된 기술 및 체외 항체 스크리닝을 위한 유사한 기술의 조합된 라이브러리를 사용하는 것과 같은 체외 선택 기술을 통해 초기에 분리될 수 있는 다양한 항체 유도된 분자를 포함한다. 체외에서 이와 같이 선택된 분자는 본 발명의 표적 분자로 라이브러리를 스크리닝함으로써 분리될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "에피토프 특이적 결합 분자"는 상기에서 기술된 바와 같은 둘 모두의 항체를 포함하며, 또한 항체에 대하여 무시할 만한 수준의 구조적으로 동족체지만 PTHRP 140-173, PTHRP 104-143, 또는 이들 펩티드로부터 유도된 그 밖의 하위 단편에 특이적으로 결합할 수 있는 특성을 여전히 갖는 다양한 비항체 분자를 포함한다. 비항체 에피토프 특이적 결합 분자의 예는 "분자 임프린팅(imprinting)"을 포함한다. 분자 임프린팅을 생성시키는 방법에 대한 상세한 설명은 그 중에서도 특히 출원인이 모스바크(Mossbach)인 미국특허 제 5,110,833호와 문헌[O'Shannessy et al., Anal. Biochem. 177:144-149 (1989), Andersson et al., J. Chromatog. 513:167-179 (1990), Andersson et al., J. Chromatog. 516:313-322 (1990), Andersson et al., J. Chromatog.. 516:323-331 (1990), Dalulis et al., Biotech. and Bioeng. 39:176-184 (1992), and Glad et al., J. Chromatog. 347:11-13 (1985)]에 기술되어 있다. 본원에 제공된 비항체 에피토프 특이적 결합 분자는 검정, 키트, 치료 원안 및 본 발명의 다른 일면에서 항체에 대하여 치환될 수 있다.

본 발명의 또 다른 일면은 관심사항인 화학적 또는 생물학적 특성을 갖는 검출 가능한 마아커로 표지된 분자와 같은, 에피토프 특이적 결합 분자의 다양한 컨쥬게이트를 제공한다. 관심의 대상인 마아커로는 방사성핵종(예를 들어,¹³¹I,¹²⁵I,⁹⁹Tc), 형광단, 효소, 발색단, 비오틴, 상자성 동위원소, 콜로이드성 금, X-선 불투과성 이미징 화합물 등이 있다. 본 발명의 표지된 항체는 면역 검정 및 질병 치료를 포함하는 다양한 방법으로 사용될 수 있다. 항체, 이들의 유도체, 및 그 밖의 분자를 표지하기 위한 기술은 당업자에게 잘 공지되어 있으며, 표지에 대한 상세한 설명 및 이의 방법은 그 중에서도 특히 문헌[Harlowe and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Coldspring Harbor Press (1988), Catty, Antibodies: A Practical Approach (Volumes 1 and 2), IRL Press, New York (1989)] 등에 기술되어 있다.

본 발명의 또 다른 일면은 본 발명의 단클론성 항체를 생성시키기 위한 하이브리도마를 제공한다. 이들 하이브리도마는 1D5 및 9H7를 포함하며, PTHRP 에피토프에 대한 유사한 결합 특성을 갖는 단클론성 항체를 생성시키는 그 밖의 하이브리도마를 포함한다. 하이브리도마를 생성시키기 위한 기술은 그 중에서도 특히 문헌[Peter and Baumgarten, Monoclonal Antibodies, Springer-Verlag, New York, NY (1992)]에 기술되어 있다. 단클론성 항체를 생성시키는 통상의 기술이 본 발명의 하이브리도마를 생성시키는데 적합할 수 있다. 예를 들어, 마우스는 적합한 에피토프(들)를 함유하는 본 발명의 PTHRP 140-173 또는 그 밖의 표적 분자로 접종되어 하이브리도마를 형성시키기 위한 적합한 융합 파트너, 및 PTHRP 에피토프에 대한 유사한 결합 특성을 갖는 단클론성 항체를 생성시키는 그 밖의 하이브리도마를 제공할 수 있다.

본 발명의 또 다른 일면은 재조합 DNA 기술에 의해 본 발명의 항체를 발현시키기 위한 세포, 즉, 본 발명의 항체를 천연적으로 생성시키지 못하는 세포를 제공한다. 이들 항체의 재조합 DNA 발현은 이들 항체를 코딩시키는 폴리펩티드 서열의 사용을 통해 수행될 수 있다. 항체 발현용 재조합 세포는 진핵 또는 원핵세포일 수 있다. 항체의 재조합 생성을 위한 일반적인 기술은 그 중에서도 특히 출원인이 보스(Boss) 등인 미국특허 제 4,816,397호, 출원인이 카빌리(Cabilly) 등인 미국특허 제 4,816,567호, 출원인이 윈터(Winter) 등인 영국특허 제 2,188,638호, 및 영국특허 제 2,209,757호에 기술되어 있다. 재조합 항체를 생성시키기 위한 이들 일반 기술은 당업자에 의해 본 발명의 항체에 적합하게 될 수 있다.

본 발명의 또 다른 일면은 본 발명의 항체를 코딩시키는 폴리펩티드 서열 및 이들 폴리펩티드에 의해 코딩된 항체를 발현시키기 위한 발현 벡터를 제공한다. 본 발명의 항체를 코딩시키는 본 발명의 폴리펩티드는 당업자에게 잘 공지된 재조합 DNA 클로닝 기술을 사용함으로써 용이하게 수득될 수 있다. 예를 들어, PTHRP 140-173에 특이적인 항체를 코딩시키는 유전자는 하이브리도마 유도된 라이브러리의 핵산 하이브리다이제이션 스크리닝의 수단 또는 PCR(폴리머라아제 연쇄 반응)을 수행함으로써 이들 항체를 생성시킬 수 있는 하이브리도마, 예를 들어, 하이브리도마 1D5로부터 분리될 수 있다. 하이브리도마로부터 항체를 코딩시키는 유전자를 분리하기 위한 방법은 그 중에서도 특히 문헌[Orlandi, R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:3833-3837 (1989)]에 기술되어 있다.

표적 분자

본 발명의 더욱 또 다른 일면은 본 발명의 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 표적 분자를 제공한다. 이들 표적 분자는 PTHRP 140-173, PTHRP 109-141 및 하위 단편 및 이들의 유도체를 포함한다. 표적 분자는 펩티드 또는 비펩티드 분자를 포함할 수 있지만, 바람직하게는 펩티드이다. PTHRP 140-173 유도된 표적 분자의 특히 바람직한 구체예는 폴리펩티드 PTHRP 140-173이며, 이것은 하기 서열에서 PTHRP의 아미노산 140-173으로 구성된다:

PTHRP 109-141 표적 분자의 특히 바람직한 구체예는 폴리펩티드 PTHRP 109-141이며, 하기의 서열에서 PTHRP의 아미노산 109-141로 구성된다:

PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141에 추가하여, 본 발명은 각각 PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141의 유도체인 표적 분자를 제공하는데, 여기에서 상기 유도체는 각각 동정수가 1D5 및 9H7인 하이브리도마에 의해서 생성된 항체, 및 본 발명의 항체의 항원 인지 부위에 결합할 수 있는 에피토프를 포함한다. 이들 유도체는 PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141의 아미노산 서열, 및 추가의 아미노산을 추가로 포함하는 펩티드를 포함한다. 본 발명의 표적 분자인 PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141 유도체는 각각 PTHRP 140-173 또는 PTHRP 109-141의 완전하지 않은 아미노산 서열, 및 그 밖의 스플라이스 변이체를 또한 포함한다. PTHRP 140-173의 완전하지 않은 아미노산 서열을 포함하는 PTHRP 140-173 유도체는 PTHRP 140-173의 하위 영역으로 구성된 폴리펩티드를 전신적으로 생성시키고 본 발명의 하이브리도마 1D5 또는 그 밖의 항체에 의해 생성된 항체에 특이적으로 결합하는 특성에 대하여 이들 하위 영역을 시험함으로써 용이하게 수득될 수 있다. 본 발명의 표적 분자는 PTHRP 140-173중의 하나 이상의 잔기 가 상이한 아미노산 잔기에 의해 치환되는 PTHRP 140-173 유도체를 또한 포함한다. 바람직하게는, 이들 아미노산 잔기의 치환은 보존 치환이다. 즉, 아미노산 잔기는 화학적인 특성이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 치환되는데, 예를 들어, 발린은 알라닌으로 치환되고, 루신은 이소루신으로 치환된다. 유사하게는, 본 발명은 추가의 PTHRP 109-141 유도된 표적 분자를 제공한다. 본 발명은 다수의 항체, 표적 분자, 및 검정법을 제공한다.

본 발명의 항체상에 항원 결합 부위와 상호작용하는 PTHRP 140-173의 특이적 단백질, 특히 단클론성 항체는 분자 생물학에서 통상의 기술을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다는 것이 당업자에게 인지될 것이다. 예를 들어, 연속하는 작은 폴리펩티드, 예를 들어, 약 6개의 아미노산은 체외 합성, 및 하이브리도마 1D5에 의해 생성된 단클론성 항체에 실제적으로 결합하는 폴리펩티드에 대한 시험에 의해 제조될 수 있다. 하이브리도마 9H7에 의해 생성된 단클론성 항체와 특이적으로 상호작용하는 PTHRP 104-141의 에피토프는 유사한 방법에 의해 발견될 수 있다.

본 발명의 표적 분자는 항체 결합 검정법과 같은 통상의 면역학적인 기술, 예를 들어, 하이브리도마 1D5에 의해 PTHRP 140-173에 대하여 생성된 단클론성 항체 또는 그 밖의 항체(단클론성 또는 다클론성 항체)와 PTHRP 140-173 사이의 결합 경쟁에 의해 동정될 수 있다. 본 발명의 표적 분자는 당업자에게 잘 공지된 다양한 스크리닝 방법에 의해 분리될 수 있는데, 여기에서 스크리닝 방법은 본 발명의 항체를 사용한다. 이들 방법은 PTHRP 140-173 또는 PTHRP 109-141로부터 유도된 펩티드 변이체의 임의의 펩티드 라이브러리(들)의 스크리닝을 포함한다. 펩티드의 라이브러리를 스크리닝하는 방법의 상세한 설명은 그 중에서도 특히 문헌[Clackson and Wells, Trends in Biotech. 12:173-184 (1994), Kay et al., Gene 128:59-65 (1993), Lane and Stephen, Curr. Opin. Immunol. 23:709-715 (1993), Keller et al., Virology 193:709-716 (1993), Glaser et al., J. Immunol. 149:3903-3913 (1992), and Arkin and Yonvan, Bio/Technology 10:297-300 (1992)]에 기술되어 있다. 본 발명의 표적 분자용으로 스크리닝된 라이브러리는 체외에서 합성되거나 파아지 라이브러리의 사용을 포함할 수 있다. 파아지의 펩티드 라이브러리를 발생시키고 스크리닝하기 위한 상세한 방법은, 예를 들어, 문헌[Smith, Science 228:1315-1317 (1985), Cortese et al., Trends Biotech. 12:262-267 (1994), Smith, Curr. Opin. Biotech. 2:668-673 (1991), and Felici et al., Gene 128:21-27 (1993)]에 기술되어 있다.

표적 분자용 스크리닝은 본 발명의 항체, 예를 들어, 하이브리도마 9H7 및 1D5에 의해 생성된 항체로 다양한 펩티드의 라이브러리의 스크리닝법에 의해 달성될 수 있다. 본 발명의 항체로 분자의 다양한 라이브러리의 스크리닝법은 비펩티드 분자 라이브러리에 적용되어 본 발명의 항체에 특이적으로 결합하는 비펩티드 분자를 분리할 수 있다. 비펩티드 라이브러리의 발생 및 스크리닝은 그 중에서도 특히 문헌[Devlin et al., Science 249:404-406 (1990), Kay et al., Gene 128:59-65 (1993), Scott et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5398-5402 (1992), Oldenburg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5393-5397 (1992), and Hoess et al., Gene 128:43-49 (1993)]에 기술되어 있다. 또한, PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-143의 3차원 구조는 핵자기 공명(NMR) 및 X-선 결정학과 같은 기술에 의해 (적어도 부분적으로) 결정될 수 있다. PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141의 3차원 구조 정보는 당업자에 의해 사용되어 각각 PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141의 다양한 유도체를 설계할 수 있다.

PTHRP 140-173, PTHRP 109-141, 및 그 밖의 본 발명의 표적 분자는 문헌[Bodanszky, Peptide Chemistry: A Practical Textbook, Springer-Verlag, New York, NY (1988), and Bailey, An Introduction To Peptide Chemistry, John Wiley & Sons, New York, NY (1992)]에 기술된 바와 같은, 통상의 고체상 폴리펩티드 합성에 의해 체외에서 형성될 수 있다. 원하는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드의 자동 합성을 위한 기계장치는 많은 공급업자, 예를 들어, 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)로부터 대규모로 구입할 수 있으며, 펩티드인 본 발명의 표적 분자를 생성시키는데 사용될 수 있다. 또한, PTHRP 140-173, PTHRP 109-141, 및 그 밖의 본 발명의 표적 분자는 PTHRP를 보다 작은 폴리펩티드 단편으로 효소학적 또는 화학적으로 분해하여 생성될 수 있다. 또한, PTHRP 140-173, PTHRP 109-141, 및 그 밖의 본 발명의 표적 분자는 문헌[Goedel, Gene Expression Technology, Methods In Enzymology Volume 185, Academic Press, San Diego (1991)]에 기술된 바와 같은, 잘 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 수 있다.

본 발명의 표적 분자는 당업자에게 자명한 다수의 용도를 갖는다. 예를 들어, 본 발명의 표적 분자는 PTHRP를 검출하기 위한 면역검정에서 사용될 수 있다. 본 발명의 표적 분자는 본 발명의 PTHRP 특이적 항체를 생성시키는데 사용될 수 있다. 이들 항체는 단클론성 항체 또는 다클론성 항체의 생성을 위한 통상의 방법으로 생성될 수 있는데, 여기에서 본 발명의 표적 분자를 동물에 주사하여 PTHRP의 카르복시 말단에 특이적인 항체의 생성을 야기시킨다.

검정법 및 키트

본 발명의 또 다른 일면은 PTHRP의 검출용 검정법을 제공한다. 본원에서 사용되는 용어 "검정"은 검정을 수행하는 방법 및 물리적인 검정 장치( 및/또는 검정 시약) 둘 모두를 언급한다. 본 발명에 의해 제공된 검정 및 검정 방법은 본 발명의 항체 및/또는 항체 분자로 사용하기에 특이적으로 적합한 다수의 면역검정을 포함한다. 면역검정은 고친화도 및 특이도로 서로에 특이적으로 결합할 수 있는 분자의 쌍의 사용을 포함한다. 이들 특이적 결합쌍의 분자의 전형은 항체 및 항체상의 결합 부위에 의해 인지되는 분자, 예를 들어, 분석물이다.

면역검정은 특이적 결합쌍의 분자의 수, 예를 들어, 항체와 항체에 의해 인지되는 분석물 사이의 복합체의 형성의 측정을 포함한다. 면역검정은 분석물을 직접 검출할 수 있다. 즉, 복합체가 항체와 분석물 사이에서 형성되어 분석물의 농도와 직접 상호관련되는 신호를 생성시킨다. 분석물 농도는 또한 복합체 형성의 억제를 측정함으로써 검출될 수 있으며, 여기에서 분석물은 검출 가능한 복합체의 형성을 방해한다. 본 발명의 표적 분자 및 항체는 ELISA, 방사선면역검정(RIA), 에미트(등록상표명:EMIT) 검정, IRMA, 2 부위 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 다양한 면역검정에서 특이적 결합쌍 성분으로서 사용될 수 있다.

본 발명의 검정의 바람직한 구체예는 샌드위치내에서 항체중 한 항체가 본 발명의 PTHRP 140-173 특이적 항체이고, "샌드위치"에서 다른 한 항체가 본 발명의 PTHRP 109-141 특이적 항체인 샌드위치형의 검정이다. 샌드위치형 검정은 제 1 항체를 사용하여 분석물을 고체 지지체 또는 그 유사물 및 제 1 항체에 의해 결합된 분석물에 결합하는 특성을 지닌 제 2 항체에 결합시킨다. 결합된 제 2 항체의 양을 측정하여 용액중의 분석물의 정량화를 제공한다. 샌드위치 검정용의 특히 바람직한 항체는 하이브리도마 1D5 및 하이브리도마 9H7에 의해 생성된 항체이며, 이때 서로를 조합하여 사용된다. 본 발명의 항체 및/또는 항체 결합 분자와 함께 사용하기에 용이하게 적합한 많은 면역검정중 몇몇에 대한 상세한 원안은 문헌[D. Catty, Antibodies: A Practical Approach Volumes 1 and 2, IRL (1989), T. Chard, An Introduction To Radioimmunoassay and Related Techniques, Elsevier Press (1990), J. Clausen, Immunochemical Techniques For The Identification and Estimation Of Macromolecules: Laboratory Techniques In Biochemistry and Molecular Biology 3rd Ed., Elsevier Science Publishers (1988)] 등에 기술되어 있다. 본 발명의 검정법은 정량 또는 정성적일 수 있다.

본 발명의 또 다른 일면에서, PTHRP의 1-173 스플라이스 변이체에 대한 DNA 또는 RNA 코딩을 검출하는 검정법이 수행된다. 여기에서 재차, 이들 변이체가 조사되어야 한다고 일단 인지되면, 표준 방법을 사용하여 이들 검출용 검정법을 수행할 수 있으며, 당업자에게 잘 공지되어 있다.

본 발명은 하나 이상의 항체 또는 그 밖의 본 발명의 에피토프 특이적 결합 분자가 피검체에 투여되는 체내 진단 검정법을 또한 제공한다. 바람직하게는, 항체는 검출 가능한 마아커로 표지되어 본 발명의 표지된 항체가 결합되는 세포 검출을 제공하는데, 예를 들어, 이들 표지는 방사성핵종 및 X-선 불투과성 이미지화제를 포함한다. 이들 진단 방법은 표지된 항체를 피검체에 직접 투여하는 단계, 이로 인하여 항체와 PTHRP의 복합체가 형성되고, 이들 복합체를 검출하는 단계를 포함한다.

본 발명의 검정법은 체외 또는 체내에서 수행될 수 있다. 본 발명의 검정법은 문헌[Cuello Immunohistochemistry II, John Wiley & Sons (1993), Bullock, et al., Techniques In Immunocytochemistry Volumes 1 and 2, Academic Press (1983)]에 기술된 기술과 같은 면역조직화학 기술에 의해 PTHRP 발현 세포를 검출하기 위한 검정법을 또한 포함하며, 상기 문헌에서 PTHRP에 결합된 항체는 형광 또는 유사한 기술에 의해 육안식별될 수 있다. 면역조직화학 기술은 본 발명의 (직접 표지되거나 표지되지 않은) 표지된 항체로 조직 샘플을 인큐베이션시키는 단계 및 조직 샘플에서 항체가 표지의 수단에 의해 결합하는 경우에 검출하는 단계를 포함한다. 본 발명의 검정법의 몇몇 구체예에서, 상기 검정법은 분석용 샘플에 항체를 첨가하는 단계 및 분석용 샘플내 PTHRP에 항체의 결합을 측정하는 단계를 포함한다. 이들 검정법에서 사용되는 항체는 직접 또는 간접적으로 표지될 수 있다. 본 발명의 검정법의 다른 구체예에서, 분석용 샘플내 PTHRP는 본 발명의 표적 분자의 PTHRP에 본 발명의 항체의 결합을 방해한다. 플로우 시토메트리와 함께 본 발명의 항체를 사용하여 PTHRP 생성 또는 비생성 세포를 동정한다.

본 발명의 또 다른 일면은 하나 이상의 본 발명의 다양한 일면을 수행하기 위한 키트를 제공한다. 이들 키트는 본 발명의 면역검정을 수행하는데 필요한 하나 이상의 반응물을 함유하며, 목적하는 화합물 및 반응물을 사전에 측정된 양으로 함유하여 본 방법을 수행하는 경우에 정밀도 및 정확도 둘 모두를 보장한다. 키트에는 본 발명의 방법을 수행하기 위한 설명서가 첨부될 수 있다. 본 발명의 키트는 하나 이상의 하기 항목을 포함할 수 있다: 본 발명의 항체, 본 발명의 표적 분자, 공지된 농도의 표준, 완충액, 항체 표지 시약, 반응 용기 등.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 키트는 목적 검정을 수행하는데 사용될 수 있는 둘 이상의 시약을 포함한다. 샌드위치 검정을 수행하기 위한 키트는 PTHRP 109-141을 특이적으로 결합시키는 특성을 갖는 본 발명의 항체, 및 PTHRP 140-173을 특이적으로 결합시키는 특성을 갖는 본 발명의 항체를 포함할 수 있다. 본 발명의 키트는 본 발명의 표적 분자를 추가로 포함할 수 있다. 목적 키트내에 포함되어 있는 항체 및 표적 분자는 검출 가능한 마아커로 표지될 수 있다. 본 발명의 키트는 본 발명의 검정법을 수행하는데 유용한 그 밖의 다양한 시약을 포함할 수 있으며, 이들 시약은 완충액, 고체 지지체, 효소 기질, 2차 표지화 항체, PTHRP에 대한 양성 대조군, PTHRP에 대한 음성 대조군 등을 포함한다.

치료

본 발명의 또 다른 일면은 PTHRP의 생성과 관련된 종양 및 그 밖의 질병을 치료하는 방법을 제공한다. 본원에서 사용되는 용어 "치료"는 단지 치료 뿐만 아니라 질병 진행 속도의 감소 또는 증상의 모든 완화를 언급한다.

치료 방법은 PTHRP 특이 항체를 포함하여, 본 발명의 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자의 투여를 포함한다. 이들 에피토프 특이적 결합 분자는 표지되거나 비표지될 수 있으며, 독소, 방사성핵종, 항암약물 등과 같은 치료제와 복합될 수 있다. 치료용의 본 발명의 항체는 바람직하게는 치료하려는 동물종과 동일한 종으로부터 유도된 항체이다. 예를 들어, 치료하려는 피검체가 사람인 경우, 환자에게 투여하려는 PTHRP 특이적 항체는 사람 항체 또는 "사람화된" 항체, 예를 들어, 출원인이 윈터인 미국특허 제 5,225,539호에 기술된 CDR 합체 항체 또는 출원인이 셀테크인 유럽특허출원 제 120694호에 기술된 키메라 항체이다. 종양 세포가 죽거나 복제를 중지되는 치료 방법을 제공하는 단계에 추가하여, 본 발명은 항체 또는 에피토프 특이적 결합 분자를 사용하여 일반 순환시에 PTHRP를 제거하거나 "불활성화"시켜서 PTHRP 분비와 관련된 과칼슘혈증을 감소시킨다.

본 발명의 또 다른 일면은 본 발명의 항체 또는 그 밖의 에피토프 특이적 결합 분자를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 목적하는 약제학적 제형은 제형에 따라 치료 및 체내 진단 둘 모두에 대해서 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는 다수의 방법, 예를 들어, 국소, 경구, 흡입에 의해, 주사에 의해 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 항체는 또한 하나 이상의 불활성 담체 물질과 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 항체를 투여하는 바람직한 수단이 비경구 투여이기 때문에, 본 발명의 바람직한 제형은 비경구 투여에 대해 최적이다. 주사에 의한 비경구 투여에 대하여, 상기 제형은 바람직하게는 0.05 내지 10%의 농도로 본 발명에 따른 활성산의 수용성의 약제학적으로 허용되는 염의 수용액을 포함할 수 있으며, 또한 임의로 수용액중의 안정화제 및/또는 완충물질일 수 있다. 용액의 용량 유닛은 유리하게는 앰파울(ampoules)에 밀폐될 수 있다.

본 발명의 항체가 투여되는 용량은 광범위한 범위에서 다양할 수 있으며, 예를 들어, 항체가 진단 또는 치료용으로 사용되는지의 여부, 질병의 정도, 환자의 연령, PTHRP에 대한 특별한 항체의 결합 친화도 등과 같은 다양한 인자에 의존할 것이며, 개별적으로 조정될 수 있다. 매일 투여될 수 있는 항체의 양에 대한 가능한 출발 범위는 약 0.001mg 내지 약 200mg이다.

치료의 한 방법에서, 초과량의 PTHRP는 신체로부터 혈액을 제거하고, 혈액을 항체로 치료하여 PTHRP를 제거하고, 처리된 혈액을 신체로 재유입시킴으로써 환자로부터 제거된다.

이하 실시예는 본 발명을 설명할 목적으로 제공되며 제한하려고 제공되는 것은 아니다.

용기 또는 비즈, 바람직하게는 플라스틱을 항체, 바람직하게는 단클론성 항체로 처리하여. 항체가 용기 또는 비즈의 표면에 흡착되도록 하는 부갑상선 호르몬 유사 단백질의 에피토프 아미노산 140-173에 항체, 바람직하게는 단클론성 항체를 제공한다. 비공지된 수준의 부갑상선 호르몬 유사 호르몬을 함유하는 혈청 샘플을 표지된 유도체, 바람직하게는 단클론성 유도체와 함께 피복된 용기 또는 비즈에, 부갑상선 호르몬 유사 단백질의 에피토프 아미노산 109-141에 첨가한다. 상기 혼합물을 인큐베이션시켜 두 항체 및 부갑상선 호르몬 유사 단백질을 복합체화시키고, 상기 고체상을 세척하여 비복합된 물질을 제거하고 표지를 검출한다. 신호는 혈청 샘플의 부갑상선 호르몬 유사 단백질 수준에 직접 비례하며, 공지된 농도의 눈금 측정기와 비교하여, 부갑상선 호르몬 유사 단백질 수준의 특이적 결정도를 측정할 수 있다.

또 다른 구체예에서, 140-173 에피토프의 표지된 부갑상선 호르몬 유사 단백질 또는 펩티드를 상기한 고체상 및 혈청 샘플에 첨가할 수 있는 경쟁 검정을 사용할 수 있다. 내생 부갑상선 호르몬 유사 단백질은 이러한 표지된 물질과 경쟁하여 고체상에 결합한다. 세척 및 표지 검출 이후에, 검출되는 신호에 반비례하는 샘플내 부갑상선 호르몬 유사 단백질의 양은 공지된 부갑상선 호르몬 유사 단백질 농도의 검정 곡선을 사용하여 결정할 수 있다.

상기 실시예의 방법 둘 모두는 후속하는 결합 또는 침전으로 액체상에서 달성되어 항체 결합된 표지를 분리할 수 있다. 고체상은 상자성 또는 비상자성일 수 있다.

더욱 또 다른 구체예에서, 종양 세포에서 PTHRP를 검출하는 이들의 능력에 대하여 PTHRP의 상이한 부분에 대한 반응으로 생성된 단클론성 항체를 시험하는 실험을 수행하였다. 시험된 항체를 PTHRP의 아미노산 잔기 1-34, PTHRP의 아미노산 잔기 109-141, 및 PTHRP의 아미노산 잔기 140-173으로 구성된 펩티드에 대하여 제조하였다. 산디에고 캘리포니아 주립대학 레오나르드 데프토스(Leonard Deftos) 박사의 실험실, 및 산디에고 베테랑 어드미니스트레이션 호스피탈에서 단클론성 항체를 구입하였다. 하이브리도마 9H7에 의해 PTHRP 109-141 특이적 항체를 생성시켰다. 하이브리도마 1D5에 의해 PTHRP 104-173 특이적 항체를 생성시켰다. 이들 실험은 면역검정 및 면역조직화학 방법 둘 모두에서 항체가 외과적 표본 및 조직 배양을 포함하는 다양한 종양 세포, 및 보다 상세하게는 수가지 상이한 유방암 세포주에서 PTHRP의 각 에피토프의 발현을 나타낸다는 것을 보여주고 있다. 후자의 경우에, 역전사 PCR (RT-PCR)을 수행하여 PTHRP 코딩화 mRNA가 세포주에서 생성된다는 증명하였다.

균등 범위

앞서 기술된 명세서는 당업자가 본 발명을 실시하도록 하는데 충분한 것으로 간주된다. 실제로, 감염성 질병, 생화학, 또는 관련 분야에서 당업자에게 자명한 본 발명을 수행하는데 상기한 방법의 다양한 변화는 하기 청구의 범위의 범주내에 있도록 의도된다.

참조에 의한 인용

본 명세서에 언급된 모든 공보 및 특허출원은 본 발명이 속하는 기술 분야에 종사하는 당업자의 기술 수준을 나타낸다. 모든 공보 및 특허출원은 각각의 개별적인 공보 또는 특허출원이 참조로 인용되어지도록 특이적으로 및 개별적으로 나타내어지는 것과 동일한 정도로 본원에서 참조로 인용된다.

Claims

PTHRP 140-173상의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자(ESBM).
제 1항에 있어서, 항체를 포함함을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 1항에 있어서, 단클론성 항체를 포함함을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 3항에 있어서, 단클론성 항체가 PTHRP의 아미노산 140-173의 적어도 일부로 구성된 펩티드에 대한 반응으로 생성됨을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 1항에 있어서, 단클론성 항체가 재조합 숙주 세포에 의해 생성됨을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 1항에 있어서, 단클론성 항체가 하이브리도마 1D5에 의해 생성됨을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
PTHRP 104-141상의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 1항에 있어서, 항체를 포함함을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 1항에 있어서, 단클론성 항체를 포함함을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 3항에 있어서, 단클론성 항체가 PTHRP의 아미노산 140-173의 적어도 일부로 구성된 펩티드에 대한 반응으로 생성됨을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 1항에 있어서, 단클론성 항체가 재조합 숙주 세포에 의해 생성됨을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
제 1항에 있어서, 단클론성 항체가 하이브리도마 9H7에 의해 생성됨을 특징으로 하는 에피토프 특이적 결합 분자.
PTHRP 140-173의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계;

상기 에피토프 특이적 결합 분자를 상기 샘플에 첨가하여 복합체를 형성시키는 단계; 및

상기 복합체 형성 양을 측정하는 단계를 포함하여, 샘플에서 PTHRP를 검출하는 방법.
PTHRP 104-141의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계;

상기 에피토프 특이적 결합 분자를 상기 샘플에 첨가하여 복합체를 형성시키는 단계; 및

상기 복합체 형성 양을 측정하는 단계를 포함하여, 샘플에서 PTHRP를 검출하는 방법.
PTHRP 140-173의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 제 1 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계;

PTHRP 104-141의 하나 이상의 제 2 에피토프에 특이적으로 결합하는 제 2 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계;

상기 제 1 및 제 2 에피토프 특이적 결합 분자를 상기 샘플에 첨가하여 복합체를 형성시키는 단계; 및

상기 복합체 형성 양을 측정하는 단계를 포함하여, 샘플에서 PTHRP를 검출하는 방법.
제 13항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 있어서, 단클론성 항체로서 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 13항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 있어서, 샘플이 조직 샘플이고, 표지의 수단에 의해 항체의 결합 부위를 동정하는 단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 13항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자를 검출 가능한 마아커로 표지하는 단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 13항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자를 효소, 비오틴, 합텐, 형광단, 발색단, 중금속, 상자성 동위원소, 콜로이드성 금, 방사성 동위원소, 및 발광단중 하나 이상을 포함하는 검출 가능한 마아커로 표지하는 단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 13항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 있어서, 샘플이 조직 샘플임을 특징으로 하는 방법.
아미노산 서열 PTHRP 140-173을 포함하는 폴리펩티드.
아미노산 서열 PTHRP 109-141을 포함하는 폴리펩티드.
제 1항 내지 제 12항중의 어느 한 항의 에피토프 특이적 결합 분자중의 하나에 특이적으로 결합할 수 있는 표적 분자.
제 21항에 있어서, 표적 분자가 폴리펩티드임을 특징으로 하는 표적 분자.
제 22항에 있어서, PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141중의 하나의 하위 단편을 추가로 포함함을 특징으로 하는 표적 분자.
제 21항에 있어서, PTHRP 140-173 및 PTHRP 109-141중의 하나의 유도체를 추가로 포함함을 특징으로 하는 표적 분자.
PTHRP 140-173의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자를 포함하는 검정법.
PTHRP 104-141의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자를 포함하는 검정법.
PTHRP 140-173의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 제 1 에피토프 특이적 결합 분자; 및

PTHRP 104-141의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 제 2 에피토프 특이적 결합 분자를 포함하는 샌드위치 검정법.
스플라이스 변이체에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계;

상기 샘플에 상기 에피토프 특이적 결합 분자를 첨가하여 복합체를 형성시키는 단계; 및

상기 복합체 형성 양을 측정하는 단계를 포함하여, 샘플 중의 PTHRP의 1-173 스플라이스 변이체를 검출하는 검정법.
스플라이스 변이체에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계;

상기 샘플에 상기 에피토프 특이적 결합 분자를 첨가하여 복합체를 형성시키는 단계; 및

상기 복합체 형성 양을 측정하는 단계를 포함하여, 샘플 중의 PTHRP를 코딩시키는 1-173 cDNA를 검출하는 검정법.
스플라이스 변이체에 특이적으로 결합하는 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계;

상기 샘플에 상기 에피토프 특이적 결합 분자를 첨가하여 복합체를 형성시키는 단계; 및

상기 복합체 형성 양을 측정하는 단계를 포함하여, 샘플의 PTHRP를 코딩시키는 1-173 RNA를 검출하는 검정법.
제 27항 내지 제 32항중의 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자가 단클론성 항체임을 특징으로 하는 검정법.
제 27항 내지 제 32항중의 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자가 효소, 비오틴, 합텐, 형광단, 발색단, 중금속, 상자성 동위원소, 콜로이드성 금, 방사성 동위원소, 및 발광단중 하나 이상을 포함하는 검출 가능한 마아커로 표지됨을 특징으로 하는 검정법.
제 27항 내지 제 32항중에 있어서, 키트가 사전에 측정된 양의 시약, 설명서 및 하나 이상의 반응 용기를 추가로 포함함을 특징으로 하는 키트.
하나 이상의 제 1항 내지 제 12항중 어느 한 항의 에피토프 특이적 결합 분자의 유효량을 환자에게 투여함을 포함하여, 부갑상선 호르몬 관련 단백질을 생성시킴을 특징으로 하는 질병 치료 방법.
제 36항에 있어서, 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자를 독소, 방사성핵종, 및 항암약물 중의 하나 이상과 컨쥬게이션시키는 것을 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 36항에 있어서, 사람 항체 및 사람화된 항체로서 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자를 제공하는 단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 36항에 있어서, 하나 이상의 에피토프 특이적 결합 분자를 사용하여 환자의 일반적인 순환시에 PTHRP를 제거하거나 "불활성화"시키는 단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.