JPH1194831A - ホルモンレセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方法 - Google Patents
ホルモンレセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方法Info
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- JPH1194831A JPH1194831A JP27501197A JP27501197A JPH1194831A JP H1194831 A JPH1194831 A JP H1194831A JP 27501197 A JP27501197 A JP 27501197A JP 27501197 A JP27501197 A JP 27501197A JP H1194831 A JPH1194831 A JP H1194831A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明は癌、特にホルモン依存性癌における新
規で高感度な検出方法を提供することを課題とする。 【解決手段】本発明の課題は血中のホルモンレセプター
に対する自己抗体を測定することで達成される。 【効果】本発明によれば、ホルモンレセプターに対する
自己抗体の測定はホルモン依存性癌を従来の腫瘍マーカ
ーよりも高感度かつ早期に検出可能であり、ホルモン依
存性の癌における新規腫瘍マーカーとして有用である。
規で高感度な検出方法を提供することを課題とする。 【解決手段】本発明の課題は血中のホルモンレセプター
に対する自己抗体を測定することで達成される。 【効果】本発明によれば、ホルモンレセプターに対する
自己抗体の測定はホルモン依存性癌を従来の腫瘍マーカ
ーよりも高感度かつ早期に検出可能であり、ホルモン依
存性の癌における新規腫瘍マーカーとして有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は血中に存在するホルモン
レセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方法
に関する。
レセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方法
に関する。
【０００２】
【従来技術の問題点】各種の癌において細胞核内に局在
する癌関連物質が細胞の癌化に伴い過剰に発現すること
が知られている。一方、腫瘍免疫機構により癌細胞が破
壊される結果、担癌生体の血中に過剰に発現した癌関連
物質が遊離し、体液性抗体の産生を誘発することが知ら
れている。ヒストンやｐ５３などに対する自己抗体はそ
のような例である（文献１〜３）。これらの自己抗体も
癌の診断への応用が試みられてきた。その理由は抗原が
微量しか存在しない場合でも、その抗原に対して産生さ
れる抗体量は生体内で増幅されているので測定が容易で
あり、癌の早期発見につながると期待されるためであ
る。しかしながら、これらの自己抗体の測定は、実際に
は陽性率が低く、癌と非癌との判別が困難なものが多か
った。
する癌関連物質が細胞の癌化に伴い過剰に発現すること
が知られている。一方、腫瘍免疫機構により癌細胞が破
壊される結果、担癌生体の血中に過剰に発現した癌関連
物質が遊離し、体液性抗体の産生を誘発することが知ら
れている。ヒストンやｐ５３などに対する自己抗体はそ
のような例である（文献１〜３）。これらの自己抗体も
癌の診断への応用が試みられてきた。その理由は抗原が
微量しか存在しない場合でも、その抗原に対して産生さ
れる抗体量は生体内で増幅されているので測定が容易で
あり、癌の早期発見につながると期待されるためであ
る。しかしながら、これらの自己抗体の測定は、実際に
は陽性率が低く、癌と非癌との判別が困難なものが多か
った。
【０００３】ヒストンやｐ５３同様に細胞核内に局在
し、癌において過剰発現している蛋白質としては各種ス
テロイドホルモンレセプターが知られてるが、ステロイ
ドホルモンのレセプターであるアンドロゲンレセプター
（ＡＲ）やエストロゲンレセプター（ＥＲ）に対する自
己抗体は、健常人の血中にもごく微量ながら存在する。
たとえばＡＲは血清１μｌあたり数ｆｍｏｌのオーダー
で存在し、女性よりも男性の方が濃度が高いことが知ら
れている（文献４，５）。しかしながら、これらのホル
モンレセプターに対する自己抗体と疾患との関連を明ら
かにした例は知られていない。
し、癌において過剰発現している蛋白質としては各種ス
テロイドホルモンレセプターが知られてるが、ステロイ
ドホルモンのレセプターであるアンドロゲンレセプター
（ＡＲ）やエストロゲンレセプター（ＥＲ）に対する自
己抗体は、健常人の血中にもごく微量ながら存在する。
たとえばＡＲは血清１μｌあたり数ｆｍｏｌのオーダー
で存在し、女性よりも男性の方が濃度が高いことが知ら
れている（文献４，５）。しかしながら、これらのホル
モンレセプターに対する自己抗体と疾患との関連を明ら
かにした例は知られていない。
【０００４】一方、乳癌、前立腺癌等のホルモン標的臓
器由来の癌の多くはホルモンレセプターを発現してい
て、癌の発生あるいは増殖・進展過程において種々のホ
ルモンが影響を与えている。これらの癌はホルモン依存
性癌と呼ばれ、ホルモン療法が有効であることが知られ
ている。たとえば、乳癌の一部にはＥＲやプロゲステロ
ンレセプター（ＰｇＲ）を発現しているものがあり、そ
のような例では抗ホルモン剤の投与や、卵巣摘出等のホ
ルモン療法が有効である。したがって乳癌ではホルモン
レセプターの発現の有無が診断上重要であり、手術や生
検で摘出した組織を検体としてホルモンレセプターの測
定が行われている。そのためにこれらのホルモンレセプ
ター測定用に各種の抗体が開発されてきた（文献６，
７）。しかしながら、ホルモンレセプターを発現してい
るホルモン依存性癌患者の血液中に遊離のホルモンレセ
プターが存在しているか否か、また、それらのホルモン
レセプターに対する自己抗体が存在するか否かについて
言及した例はない。
器由来の癌の多くはホルモンレセプターを発現してい
て、癌の発生あるいは増殖・進展過程において種々のホ
ルモンが影響を与えている。これらの癌はホルモン依存
性癌と呼ばれ、ホルモン療法が有効であることが知られ
ている。たとえば、乳癌の一部にはＥＲやプロゲステロ
ンレセプター（ＰｇＲ）を発現しているものがあり、そ
のような例では抗ホルモン剤の投与や、卵巣摘出等のホ
ルモン療法が有効である。したがって乳癌ではホルモン
レセプターの発現の有無が診断上重要であり、手術や生
検で摘出した組織を検体としてホルモンレセプターの測
定が行われている。そのためにこれらのホルモンレセプ
ター測定用に各種の抗体が開発されてきた（文献６，
７）。しかしながら、ホルモンレセプターを発現してい
るホルモン依存性癌患者の血液中に遊離のホルモンレセ
プターが存在しているか否か、また、それらのホルモン
レセプターに対する自己抗体が存在するか否かについて
言及した例はない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、血中のホル
モンレセプターに対する自己抗体の測定方法を確立し、
より簡易で早期発見が可能な癌の診断方法の提供を目的
とする。
モンレセプターに対する自己抗体の測定方法を確立し、
より簡易で早期発見が可能な癌の診断方法の提供を目的
とする。
【課題を解決するための手段】本発明者らはホルモン依
存性癌患者の血中にホルモンレセプターに対する自己抗
体が多量に出現することを見いだし、以下に示すホルモ
ンレセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方
法を発明した。
存性癌患者の血中にホルモンレセプターに対する自己抗
体が多量に出現することを見いだし、以下に示すホルモ
ンレセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方
法を発明した。
【０００６】（１）血中に存在するホルモンレセプター
に対する自己抗体の測定による癌の検出方法。 （２）ホルモンレセプターがエストロゲンレセプター、
プロゲステロンレセプター、またはアンドロゲンレセプ
ターであることを特徴とする（１）の検出方法。 （３）癌がホルモン依存性癌であることを特徴とする
（２）の検出方法。 （４）ホルモン依存性癌が乳癌、前立腺癌、あるいは卵
巣癌であることを特徴とする（３）の検出方法。 （５）自己抗体の測定方法が免疫学的方法であることを
特徴とする（１）から（４）の検出方法。 （６）免疫学的測定方法が競合法、またはサンドイッチ
法であることを特徴とする（５）の検出方法。 （７）化学合成、または遺伝子組み換えによって得られ
たホルモンレセプターの部分ペプタイドを用いることを
特徴とする（５）から（６）の検出方法。 （８）ホルモンレセプターの部分ペプタイドを不溶性担
体に固相化して用いることを特徴とする（７）の検出方
法。
に対する自己抗体の測定による癌の検出方法。 （２）ホルモンレセプターがエストロゲンレセプター、
プロゲステロンレセプター、またはアンドロゲンレセプ
ターであることを特徴とする（１）の検出方法。 （３）癌がホルモン依存性癌であることを特徴とする
（２）の検出方法。 （４）ホルモン依存性癌が乳癌、前立腺癌、あるいは卵
巣癌であることを特徴とする（３）の検出方法。 （５）自己抗体の測定方法が免疫学的方法であることを
特徴とする（１）から（４）の検出方法。 （６）免疫学的測定方法が競合法、またはサンドイッチ
法であることを特徴とする（５）の検出方法。 （７）化学合成、または遺伝子組み換えによって得られ
たホルモンレセプターの部分ペプタイドを用いることを
特徴とする（５）から（６）の検出方法。 （８）ホルモンレセプターの部分ペプタイドを不溶性担
体に固相化して用いることを特徴とする（７）の検出方
法。
【０００７】本発明は、血中のホルモンレセプターに対
する自己抗体の測定による癌の検出方法であり、測定対
象となるのは、具体的にはエストロゲンレセプター、プ
ロゲステロンレセプター、またはアンドロゲンレセプタ
ーに対する自己抗体である。これらのホルモンレセプタ
ーに対する自己抗体は健常人の血中にも微量ながら存在
するが、前記のホルモンレセプターを発現している一部
の癌の患者血中においては顕著に増大する。
する自己抗体の測定による癌の検出方法であり、測定対
象となるのは、具体的にはエストロゲンレセプター、プ
ロゲステロンレセプター、またはアンドロゲンレセプタ
ーに対する自己抗体である。これらのホルモンレセプタ
ーに対する自己抗体は健常人の血中にも微量ながら存在
するが、前記のホルモンレセプターを発現している一部
の癌の患者血中においては顕著に増大する。
【０００８】これらのホルモンレセプターを発現してい
る癌はホルモン依存性癌と呼ばれ、ホルモンが癌の発生
あるいは増殖・進展過程に影響している。ホルモン依存
性癌としては乳癌、前立腺癌、あるいは卵巣癌の一部が
これに属する。
る癌はホルモン依存性癌と呼ばれ、ホルモンが癌の発生
あるいは増殖・進展過程に影響している。ホルモン依存
性癌としては乳癌、前立腺癌、あるいは卵巣癌の一部が
これに属する。
【０００９】血中の自己抗体の測定方法としては、免疫
学的測定法が適している。すなわち、ヒトのホルモンレ
セプターを動物に免疫して得た抗体を用いて、この抗体
と検体中の自己抗体とをホルモンレセプターに対して競
合させる競合法や、抗体が２分子の抗原と結合できるこ
とを利用して、ホルモンレセプターに結合した自己抗体
に対してさらに第２のホルモンレセプターや、抗ヒトＩ
ｇＧを結合させて、形成される免疫複合体を検出するサ
ンドイッチ法が代表的であり、本発明においてはどちら
の方法も適用可能である。
学的測定法が適している。すなわち、ヒトのホルモンレ
セプターを動物に免疫して得た抗体を用いて、この抗体
と検体中の自己抗体とをホルモンレセプターに対して競
合させる競合法や、抗体が２分子の抗原と結合できるこ
とを利用して、ホルモンレセプターに結合した自己抗体
に対してさらに第２のホルモンレセプターや、抗ヒトＩ
ｇＧを結合させて、形成される免疫複合体を検出するサ
ンドイッチ法が代表的であり、本発明においてはどちら
の方法も適用可能である。
【００１０】免疫学的測定において使用するホルモンレ
セプターは、ヒトの組織から抽出精製したものでも、遺
伝子組み換えや化学合成等により人工的に製造したもの
でもかまわない。しかし、以下に述べる理由により遺伝
子組み換えや化学合成によって得られるホルモンレセプ
ターの部分ペプタイドを用いるのが好ましい。
セプターは、ヒトの組織から抽出精製したものでも、遺
伝子組み換えや化学合成等により人工的に製造したもの
でもかまわない。しかし、以下に述べる理由により遺伝
子組み換えや化学合成によって得られるホルモンレセプ
ターの部分ペプタイドを用いるのが好ましい。
【００１１】第一にホルモンレセプターをヒトの組織か
ら抽出し精製するのは、材料の入手が困難な上に作業も
手間がかかる。また、一定の品質を持つものが得にく
い。第二に癌関連物質に対する自己抗体の中にはモノク
ローナルな抗体も見いだされることから（文献８，
９）、抗原である癌関連物質は、分子全体ではなく特定
の領域のみが多量に発現している可能性が高いためであ
る。また、遺伝子組み換えや化学合成によって得られる
合成ペプタイドは、必要に応じて後述するような固相と
の反応や標識物質との結合に必要な官能基やリンカー分
子を導入することも可能である。
ら抽出し精製するのは、材料の入手が困難な上に作業も
手間がかかる。また、一定の品質を持つものが得にく
い。第二に癌関連物質に対する自己抗体の中にはモノク
ローナルな抗体も見いだされることから（文献８，
９）、抗原である癌関連物質は、分子全体ではなく特定
の領域のみが多量に発現している可能性が高いためであ
る。また、遺伝子組み換えや化学合成によって得られる
合成ペプタイドは、必要に応じて後述するような固相と
の反応や標識物質との結合に必要な官能基やリンカー分
子を導入することも可能である。
【００１２】競合法においてもサンドイッチ法において
もホルモンレセプターを固相に結合させておく必要があ
るが、固相化方法は公知の蛋白質の固相化方法を用いる
ことができる。すなわちマイクロプレート、ポリスチレ
ンビーズ等の固相に物理吸着や架橋剤によりホルモンレ
セプターを結合させておく。必要に応じて官能基やリン
カー分子を導入したホルモンレセプターを用いて固相と
の結合を強固にしたり、ホルモンレセプターの反応性を
損なわないようにすることもできる。
もホルモンレセプターを固相に結合させておく必要があ
るが、固相化方法は公知の蛋白質の固相化方法を用いる
ことができる。すなわちマイクロプレート、ポリスチレ
ンビーズ等の固相に物理吸着や架橋剤によりホルモンレ
セプターを結合させておく。必要に応じて官能基やリン
カー分子を導入したホルモンレセプターを用いて固相と
の結合を強固にしたり、ホルモンレセプターの反応性を
損なわないようにすることもできる。
【００１３】また、競合法においては検体中の自己抗体
と競合する抗体を、サンドイッチ法においては抗ヒトＩ
ｇＧや固相化しない方のホルモンレセプターを検出可能
なように標識しておく。標識に際しても公知の免疫学的
検出方法で用いられる標識物質、標識方法を用いること
ができる。標識物質としてはたとえば125I、3H等の放射
性物質、パーオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ア
ルカリホスファターゼ等の酵素、蛍光物質、発光物質等
が使用可能である。標識方法は標識物質に応じて適宜選
択される。
と競合する抗体を、サンドイッチ法においては抗ヒトＩ
ｇＧや固相化しない方のホルモンレセプターを検出可能
なように標識しておく。標識に際しても公知の免疫学的
検出方法で用いられる標識物質、標識方法を用いること
ができる。標識物質としてはたとえば125I、3H等の放射
性物質、パーオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ア
ルカリホスファターゼ等の酵素、蛍光物質、発光物質等
が使用可能である。標識方法は標識物質に応じて適宜選
択される。
【００１４】また、被標識物質は直接標識されている必
要はない。被標識物質に特異的に結合する物質を標識し
ておいて、それを被標識物質に結合させる間接的な標識
方法も適用可能である。
要はない。被標識物質に特異的に結合する物質を標識し
ておいて、それを被標識物質に結合させる間接的な標識
方法も適用可能である。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明の癌の検出方法を、ＡＲに
対する自己抗体を競合法により測定する場合を例に具体
的な実施の形態を説明する。
対する自己抗体を競合法により測定する場合を例に具体
的な実施の形態を説明する。
【００１６】抗原となるホルモンレセプターは合成ペプ
タイドを使用することにし、公知のＡＲのアミノ酸配列
から親水性の高い領域を選択し、２０残基前後の部分ペ
プタイドを化学合成した。ただし、癌において異常発現
している領域までは特定できないので、数種類の部分ペ
プタイドを合成し、反応性の良好なものを選択すること
が必要である。
タイドを使用することにし、公知のＡＲのアミノ酸配列
から親水性の高い領域を選択し、２０残基前後の部分ペ
プタイドを化学合成した。ただし、癌において異常発現
している領域までは特定できないので、数種類の部分ペ
プタイドを合成し、反応性の良好なものを選択すること
が必要である。
【００１７】合成ペプタイドの反応性の確認は以下の手
順で行う。 １）合成ＡＲペプタイド抗原を物理吸着により、マイク
ロタイタープレートに固相化する。 ２）第一反応 合成ＡＲペプタイド抗原固相化プレートの各ウェルにホ
ルモンレセプターに対する自己抗体価が高いと思われる
患者血清を加えてインキュベーションする。 ３）第二反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、酵素標
識抗ヒトＩｇＧ抗体溶液を加えインキュベーションす
る。 ４）第三反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、発色剤
と基質を加えインキュベーションする。 ５）反応停止 反応停止液を加えて発色反応を停止する。 ６）吸光度の測定 各ウェルの吸光度を測定する。
順で行う。 １）合成ＡＲペプタイド抗原を物理吸着により、マイク
ロタイタープレートに固相化する。 ２）第一反応 合成ＡＲペプタイド抗原固相化プレートの各ウェルにホ
ルモンレセプターに対する自己抗体価が高いと思われる
患者血清を加えてインキュベーションする。 ３）第二反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、酵素標
識抗ヒトＩｇＧ抗体溶液を加えインキュベーションす
る。 ４）第三反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、発色剤
と基質を加えインキュベーションする。 ５）反応停止 反応停止液を加えて発色反応を停止する。 ６）吸光度の測定 各ウェルの吸光度を測定する。
【００１８】合成したペプタイドを用いて抗体を作成し
た。先に述べた理由により本発明において使用する抗体
はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもさし
支えない。合成したペプタイドを常法により家兎に免疫
し、抗ＡＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体を得た。こう
して得られた抗体は、直接放射性同位元素や酵素で標識
して用いることもできるが、本発明の実施例ではさらに
市販の酵素標識抗家兎抗体を結合させて検出することに
した。
た。先に述べた理由により本発明において使用する抗体
はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもさし
支えない。合成したペプタイドを常法により家兎に免疫
し、抗ＡＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体を得た。こう
して得られた抗体は、直接放射性同位元素や酵素で標識
して用いることもできるが、本発明の実施例ではさらに
市販の酵素標識抗家兎抗体を結合させて検出することに
した。
【００１９】抗ＡＲ自己抗体の測定は、以下の手順で行
った。 １）合成ＡＲペプタイド抗原を物理吸着により、マイク
ロタイタープレートに固相化する。 ２）第一反応 合成ＡＲペプタイド抗原固相化プレートの各ウェルに抗
ＡＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体溶液と、検体または
抗ＡＲ自己抗体標準血清を加えてインキュベーションす
る。 ３）第二反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、酵素標
識抗家兎ＩｇＧラット抗体溶液を加えインキュベーショ
ンする。 ４）第三反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、発色剤
と基質を加えインキュベーションする。 ５）反応停止 反応停止液を加えて発色反応を停止する。 ６）吸光度の測定 各ウェルの吸光度を測定する。 ７）血中ＡＲ自己抗体値の算出 抗ＡＲ自己抗体標準血清の吸光度と比較して、検体中の
ＡＲ自己抗体値を算出する。
った。 １）合成ＡＲペプタイド抗原を物理吸着により、マイク
ロタイタープレートに固相化する。 ２）第一反応 合成ＡＲペプタイド抗原固相化プレートの各ウェルに抗
ＡＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体溶液と、検体または
抗ＡＲ自己抗体標準血清を加えてインキュベーションす
る。 ３）第二反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、酵素標
識抗家兎ＩｇＧラット抗体溶液を加えインキュベーショ
ンする。 ４）第三反応 ウェル内の溶液を吸引除去後各ウェルを洗浄し、発色剤
と基質を加えインキュベーションする。 ５）反応停止 反応停止液を加えて発色反応を停止する。 ６）吸光度の測定 各ウェルの吸光度を測定する。 ７）血中ＡＲ自己抗体値の算出 抗ＡＲ自己抗体標準血清の吸光度と比較して、検体中の
ＡＲ自己抗体値を算出する。
【００２０】
【発明の効果】本発明によれば、血中のホルモンレセプ
ターに対する自己抗体を測定することで癌、特にホルモ
ン依存性の癌を検出することが可能である。癌組織に由
来し、本来血中に存在しない物質に対する自己抗体を測
定する癌の検出方法は従来も存在したが、本発明の自己
抗体の測定ではより高感度に癌を検出することが可能で
ある。
ターに対する自己抗体を測定することで癌、特にホルモ
ン依存性の癌を検出することが可能である。癌組織に由
来し、本来血中に存在しない物質に対する自己抗体を測
定する癌の検出方法は従来も存在したが、本発明の自己
抗体の測定ではより高感度に癌を検出することが可能で
ある。
【００２１】健常人においても血中に微量のホルモンレ
セプターに対する自己抗体が存在することは知られてい
たが、ホルモン依存性癌の患者においてホルモンレセプ
ターに対する抗体が増加し、診断に応用可能であること
を示したのは本発明が初めてである。また、乳癌におい
てホルモン療法を行うためにホルモンレセプターの測定
が行われているが、これは存在が明らかになった癌につ
いてホルモン療法が適用可能かどうかを調べるためのも
のであり、本発明とは本質的に異なるものである。
セプターに対する自己抗体が存在することは知られてい
たが、ホルモン依存性癌の患者においてホルモンレセプ
ターに対する抗体が増加し、診断に応用可能であること
を示したのは本発明が初めてである。また、乳癌におい
てホルモン療法を行うためにホルモンレセプターの測定
が行われているが、これは存在が明らかになった癌につ
いてホルモン療法が適用可能かどうかを調べるためのも
のであり、本発明とは本質的に異なるものである。
【００２２】
実施例１：ＡＲペプタイド抗原の作製 １．各種ＡＲペプタイドの合成 ＡＲペプタイド抗原はＡＲのアミノ酸配列のＡ、Ｄ、Ｈ
ドメインの中から親水性の高い領域をひとつずつ選択
し、そのうちの２０残基をＦｍｏｃ法で化学合成し、Ａ
ドメインのペプタイドをペプタイドＡとし、Ｄ、Ｈドメ
インのペプタイドをそれぞれペプタイドＤ、ペプタイド
Ｈとした。
ドメインの中から親水性の高い領域をひとつずつ選択
し、そのうちの２０残基をＦｍｏｃ法で化学合成し、Ａ
ドメインのペプタイドをペプタイドＡとし、Ｄ、Ｈドメ
インのペプタイドをそれぞれペプタイドＤ、ペプタイド
Ｈとした。
【００２３】２．ＡＲ抗原固相化マイクロタイタ−プレ
ートの作製 上記３種の合成ＡＲペプタイド抗原の０．１Ｍ炭酸緩衝
液（ｐＨ９．０）溶液をポリ塩化ビニルマイクロタイタ
ープレート(Dynex Technologies製、PVC Microtiter"U"
Bottom Plates)のＡ列の１２ウェルにペプタイドＡを各
ウェルに３１．３μｇ／ウェルになるように加えた。同
様にＢ列にペプタイドＤを、Ｃ列にペプタイドＨを加
え、４℃で４８時間インキュベーションする。各ウェル
の抗原溶液を回収し、マイクロプレート洗浄機（ライフ
テック製、ミニラボウォッシャー）を用いて１ｍｌの
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．０）で２回洗浄する。そ
の後、１％ＢＳＡ ０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝
液（ｐＨ８．０）を各ウェルに満たしてシールをし、ア
ッセイを行うまでこの状態で４℃で保存した。
ートの作製 上記３種の合成ＡＲペプタイド抗原の０．１Ｍ炭酸緩衝
液（ｐＨ９．０）溶液をポリ塩化ビニルマイクロタイタ
ープレート(Dynex Technologies製、PVC Microtiter"U"
Bottom Plates)のＡ列の１２ウェルにペプタイドＡを各
ウェルに３１．３μｇ／ウェルになるように加えた。同
様にＢ列にペプタイドＤを、Ｃ列にペプタイドＨを加
え、４℃で４８時間インキュベーションする。各ウェル
の抗原溶液を回収し、マイクロプレート洗浄機（ライフ
テック製、ミニラボウォッシャー）を用いて１ｍｌの
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．０）で２回洗浄する。そ
の後、１％ＢＳＡ ０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝
液（ｐＨ８．０）を各ウェルに満たしてシールをし、ア
ッセイを行うまでこの状態で４℃で保存した。
【００２４】３．第一反応 上記合成ＡＲペプタイド抗原固相化プレートの各ウェル
のＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液を吸引除去後、縦の列の各ウ
ェルに１種類の検体を分注するようにして、ホルモンレ
セプターに対する自己抗体価が高いと思われる患者から
採取した１０種の血清検体を１０μｌずつ各ウェルに分
注する。１％ＢＳＡ ０．１％ＥＤＴＡ・２Ｎａ ＰＢ
Ｓ緩衝液（ｐＨ７．４）９０μｌを各ウェルに加え、３
７℃で２時間反応させる。
のＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液を吸引除去後、縦の列の各ウ
ェルに１種類の検体を分注するようにして、ホルモンレ
セプターに対する自己抗体価が高いと思われる患者から
採取した１０種の血清検体を１０μｌずつ各ウェルに分
注する。１％ＢＳＡ ０．１％ＥＤＴＡ・２Ｎａ ＰＢ
Ｓ緩衝液（ｐＨ７．４）９０μｌを各ウェルに加え、３
７℃で２時間反応させる。
【００２５】４．第二反応 第一反応終了後ウェル内の溶液を吸引除去し、マイクロ
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を２回洗浄し、ホースラディッシュパーオキシダーゼ標
識抗ヒトＩｇＧウサギ抗体(ZYMED製)を１％ＢＳＡ Ｐ
ＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて２０００倍希釈した溶液
を各ウェルあたり１００μｌ加え、３７℃で１時間３０
分反応させる。
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を２回洗浄し、ホースラディッシュパーオキシダーゼ標
識抗ヒトＩｇＧウサギ抗体(ZYMED製)を１％ＢＳＡ Ｐ
ＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて２０００倍希釈した溶液
を各ウェルあたり１００μｌ加え、３７℃で１時間３０
分反応させる。
【００２６】５．第三反応 第二反応終了後ウェル内の溶液を吸引除去し、マイクロ
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を３回洗浄し、発色剤ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス
［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］二ア
ンモニウム塩，ナカライテスク製）濃度が３ｍｇ／ｍｌ
になるように０．１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．
０）で溶解し、そこに基質として２０％過酸化水素水を
０．０４％の濃度で加える。この溶液を各ウェルあたり
１００μｌ加え、３７℃３０分反応させる。
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を３回洗浄し、発色剤ＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス
［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］二ア
ンモニウム塩，ナカライテスク製）濃度が３ｍｇ／ｍｌ
になるように０．１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．
０）で溶解し、そこに基質として２０％過酸化水素水を
０．０４％の濃度で加える。この溶液を各ウェルあたり
１００μｌ加え、３７℃３０分反応させる。
【００２７】６．反応停止 第三反応終了後、０．１％アジ化ナトリウムを含む０．
１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）を各ウェルあ
たり１００μｌ加え、反応を停止する。各ウェルの発色
を波長４２０ｎｍで吸光度を測定し、もっとも吸光度の
高かったペプタイドＡを検体測定用に使用することにし
た。
１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）を各ウェルあ
たり１００μｌ加え、反応を停止する。各ウェルの発色
を波長４２０ｎｍで吸光度を測定し、もっとも吸光度の
高かったペプタイドＡを検体測定用に使用することにし
た。
【００２８】実施例２：ＡＲ抗体の測定 ＡＲ抗体の測定はマイクロプレート固相化ＡＲ合成ペプ
タイド抗原に対するＡＲの血中自己抗体と抗ヒトＡＲ家
兎抗体との競合結合反応に基づいた酵素免疫測定法（Ｅ
ＩＡ）で行った。
タイド抗原に対するＡＲの血中自己抗体と抗ヒトＡＲ家
兎抗体との競合結合反応に基づいた酵素免疫測定法（Ｅ
ＩＡ）で行った。
【００２９】１．抗ＡＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体
の作製 実施例１で作製したペプタイドＡをフロイントのコンプ
リート・アジュバントと等量混合し、充分乳化させた後
に家兎に免疫した。免疫は２週間毎に行い、４ケ月後に
一部採血して得られる抗血清を、４０％硫安分画〜透析
〜濃縮し抗ＡＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体とした。
の作製 実施例１で作製したペプタイドＡをフロイントのコンプ
リート・アジュバントと等量混合し、充分乳化させた後
に家兎に免疫した。免疫は２週間毎に行い、４ケ月後に
一部採血して得られる抗血清を、４０％硫安分画〜透析
〜濃縮し抗ＡＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体とした。
【００３０】２．ＡＲ抗原固相化マイクロタイタ−プレ
ートの作製 実施例１で作製したペプタイドＡの０．１Ｍ炭酸緩衝液
（ｐＨ９．０）溶液をポリ塩化ビニルマイクロタイター
プレートの各ウェルに３１．３μｇ／ウェルになるよう
に加え、４℃で４８時間インキュベーションする。各ウ
ェルの抗原溶液を回収し、マイクロプレート洗浄機を用
いて１ｍｌの０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．０）で２回
洗浄する。その後、１％ＢＳＡ ０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を各ウェルに満たしてシ
ールをし、アッセイを行うまでこの状態で４℃で保存し
た。
ートの作製 実施例１で作製したペプタイドＡの０．１Ｍ炭酸緩衝液
（ｐＨ９．０）溶液をポリ塩化ビニルマイクロタイター
プレートの各ウェルに３１．３μｇ／ウェルになるよう
に加え、４℃で４８時間インキュベーションする。各ウ
ェルの抗原溶液を回収し、マイクロプレート洗浄機を用
いて１ｍｌの０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．０）で２回
洗浄する。その後、１％ＢＳＡ ０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を各ウェルに満たしてシ
ールをし、アッセイを行うまでこの状態で４℃で保存し
た。
【００３１】３．標準ＡＲ抗体の調製 血清中のＡＲ抗体が高濃度を示した乳癌患者血清を１％
ＢＳＡ ０．０５ＭＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて、
２倍から１２８倍まで倍々希釈を行い、原血清を１２８
Ｕ／ｍｌとし、ＡＲ標準抗体としては１Ｕ／ｍｌ（原血
清１２８倍希釈）から６４Ｕ／ｍｌ（原血清２倍希釈）
までを用いた。
ＢＳＡ ０．０５ＭＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて、
２倍から１２８倍まで倍々希釈を行い、原血清を１２８
Ｕ／ｍｌとし、ＡＲ標準抗体としては１Ｕ／ｍｌ（原血
清１２８倍希釈）から６４Ｕ／ｍｌ（原血清２倍希釈）
までを用いた。
【００３２】４．血中ＡＲ抗体の測定方法 １）第一反応 ２．で作製したペプタイドＡ固相化プレートの各ウェル
のＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液を吸引除去後、各ウェルに１
％ＢＳＡ ０．１％ＥＤＴＡ・２Ｎａ ＰＢＳ緩衝液
（ｐＨ７．４）にて２０００倍に希釈した抗ＡＲ家兎ポ
リクローナルＩｇＧ抗体９０μｌと標準ＡＲ抗体血清ま
たは被検血清１０μｌを加え、３７℃で２時間反応させ
る。
のＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液を吸引除去後、各ウェルに１
％ＢＳＡ ０．１％ＥＤＴＡ・２Ｎａ ＰＢＳ緩衝液
（ｐＨ７．４）にて２０００倍に希釈した抗ＡＲ家兎ポ
リクローナルＩｇＧ抗体９０μｌと標準ＡＲ抗体血清ま
たは被検血清１０μｌを加え、３７℃で２時間反応させ
る。
【００３３】２）第二反応 第一反応終了後ウェル内の溶液を吸引除去し、マイクロ
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を２回洗浄し、ホースラディッシュパーオキシダーゼ標
識抗家兎ＩｇＧラット抗体(ZYMED製)を１％ＢＳＡ Ｐ
ＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて２０００倍希釈した溶液
を各ウェルあたり１００μｌ加え、３７℃で１時間３０
分反応させる。
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を２回洗浄し、ホースラディッシュパーオキシダーゼ標
識抗家兎ＩｇＧラット抗体(ZYMED製)を１％ＢＳＡ Ｐ
ＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて２０００倍希釈した溶液
を各ウェルあたり１００μｌ加え、３７℃で１時間３０
分反応させる。
【００３４】３）第三反応 第二反応終了後ウェル内の溶液を吸引除去し、マイクロ
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を３回洗浄し、発色剤ＡＢＴＳ濃度が３ｍｇ／ｍｌにな
るように０．１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）
で溶解し、そこに基質として２０％過酸化水素水を０．
０４％の濃度で加える。この溶液を各ウェルあたり１０
０μｌ加え、３７℃３０分反応させる。
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を３回洗浄し、発色剤ＡＢＴＳ濃度が３ｍｇ／ｍｌにな
るように０．１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）
で溶解し、そこに基質として２０％過酸化水素水を０．
０４％の濃度で加える。この溶液を各ウェルあたり１０
０μｌ加え、３７℃３０分反応させる。
【００３５】４）反応停止 第三反応終了後、０．１％アジ化ナトリウムを含む０．
１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）を各ウェルあ
たり１００μｌ加え、反応を停止する。
１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）を各ウェルあ
たり１００μｌ加え、反応を停止する。
【００３６】５）吸光度の測定 各ウェルの発色を波長４２０ｎｍで吸光度を測定する。
【００３７】６）血中ＡＲ抗体値の算出 標準ＡＲ抗体を含まない時の吸光度に対する各ＡＲ抗体
標準濃度の吸光度の割合（阻害率％）を算出し、ＡＲ抗
体阻害標準曲線を描く。次に、標準ＡＲ抗体を含まない
時の吸光度に対する各検体の吸光度の阻害率を計算し、
その阻害率をＡＲ抗体阻害標準曲線に照らし合わせ、各
検体血清中のＡＲ抗体濃度を求める。
標準濃度の吸光度の割合（阻害率％）を算出し、ＡＲ抗
体阻害標準曲線を描く。次に、標準ＡＲ抗体を含まない
時の吸光度に対する各検体の吸光度の阻害率を計算し、
その阻害率をＡＲ抗体阻害標準曲線に照らし合わせ、各
検体血清中のＡＲ抗体濃度を求める。
【００３８】健常人の測定結果をもとにカットフ値を４
Ｕ／ｍｌに設定し、乳癌と前立腺癌の陽性率を算出し
た。
Ｕ／ｍｌに設定し、乳癌と前立腺癌の陽性率を算出し
た。
【００３９】
【表１】
【００４０】表１に示したように、乳癌患者と前立腺癌
患者での陽性率はそれぞれ５３．６％、７６．９％であ
ったが、健常人と前立腺肥大症の陽性率はともに０％で
あった。
患者での陽性率はそれぞれ５３．６％、７６．９％であ
ったが、健常人と前立腺肥大症の陽性率はともに０％で
あった。
【００４１】実施例３：ＥＲペプタイド抗原の作製 １．各種ＥＲペプタイド抗原の作製 ＥＲペプタイド抗原はＥＲアミノ酸配列のＡ／Ｂ、Ｄ、
Ｆドメインの中から親水性の高い領域をひとつずつ選択
し、そのうちの２０残基をＦｍｏｃ法で化学合成し、Ａ
／ＢドメインのペプタイドをペプタイドＡ／Ｂとし、
Ｄ、ＦドメインのペプタイドをそれぞれペプタイドＤ、
ペプタイドＦとした。実施例１と同様の方法で、ペプタ
イドＡ／Ｂ、Ｄ、Ｆをマイクロタイタープレートにそれ
ぞれ固相化し、ホルモンレセプターに対する自己抗体価
が高いと思われる患者血清との反応性からペプタイドＤ
を選択した。
Ｆドメインの中から親水性の高い領域をひとつずつ選択
し、そのうちの２０残基をＦｍｏｃ法で化学合成し、Ａ
／ＢドメインのペプタイドをペプタイドＡ／Ｂとし、
Ｄ、ＦドメインのペプタイドをそれぞれペプタイドＤ、
ペプタイドＦとした。実施例１と同様の方法で、ペプタ
イドＡ／Ｂ、Ｄ、Ｆをマイクロタイタープレートにそれ
ぞれ固相化し、ホルモンレセプターに対する自己抗体価
が高いと思われる患者血清との反応性からペプタイドＤ
を選択した。
【００４２】実施例４：ＥＲ抗体の測定 ＥＲ抗体の測定はＡＲ抗体の測定と同様にマイクロプレ
ート固相化ＥＲ合成ペプタイド抗原に対するＥＲの血中
自己抗体と抗ヒトＥＲ家兎抗体との競合結合反応に基づ
いた酵素免疫測定法（ＥＩＡ）で行った。
ート固相化ＥＲ合成ペプタイド抗原に対するＥＲの血中
自己抗体と抗ヒトＥＲ家兎抗体との競合結合反応に基づ
いた酵素免疫測定法（ＥＩＡ）で行った。
【００４３】１．抗ＥＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体
の作製 実施例３で作製したペプタイドＤをフロイントのコンプ
リート・アジュバントと等量混合し、充分乳化させた後
に家兎に免疫した。免疫は２週間毎に行い、４ケ月後に
一部採血して得られる抗血清を、４０％硫安分画〜透析
〜濃縮し抗ＥＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体とした。
の作製 実施例３で作製したペプタイドＤをフロイントのコンプ
リート・アジュバントと等量混合し、充分乳化させた後
に家兎に免疫した。免疫は２週間毎に行い、４ケ月後に
一部採血して得られる抗血清を、４０％硫安分画〜透析
〜濃縮し抗ＥＲ家兎ポリクローナルＩｇＧ抗体とした。
【００４４】２．ＥＲ抗原固相化マイクロタイタ−プレ
ートの作製 実施例３で作製したペプタイドＤの０．１Ｍ炭酸緩衝液
（ｐＨ９．０）溶液をポリ塩化ビニルマイクロタイター
プレートの各ウェルに３１．３μｇ／ウェルになるよう
０．１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．０にて調製し、４℃で４８
時間インキュベーションする。各ウェルの抗原溶液を回
収し、マイクロプレート洗浄機を用いて１ｍｌの０．１
Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．０）で２回洗浄する。その後、
１％ＢＳＡ ０．０５ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ８．０）
緩衝液を各ウェルを満たしてシールをし、アッセイを行
うまでこの状態で４℃で保存した。
ートの作製 実施例３で作製したペプタイドＤの０．１Ｍ炭酸緩衝液
（ｐＨ９．０）溶液をポリ塩化ビニルマイクロタイター
プレートの各ウェルに３１．３μｇ／ウェルになるよう
０．１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．０にて調製し、４℃で４８
時間インキュベーションする。各ウェルの抗原溶液を回
収し、マイクロプレート洗浄機を用いて１ｍｌの０．１
Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．０）で２回洗浄する。その後、
１％ＢＳＡ ０．０５ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ８．０）
緩衝液を各ウェルを満たしてシールをし、アッセイを行
うまでこの状態で４℃で保存した。
【００４５】３．標準ＥＲ抗体の調製 血清中のＥＲ抗体が高濃度を示した乳癌患者血清を１％
ＢＳＡ ０．０５ＭＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて、
２倍から１２８倍まで倍々希釈を行い、原血清を１２８
Ｕ／ｍｌとし、ＥＲ標準抗体としては１Ｕ／ｍｌ（原血
清１２８倍希釈）から６４Ｕ／ｍｌ（原血清２倍希釈）
までを用いた。
ＢＳＡ ０．０５ＭＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）にて、
２倍から１２８倍まで倍々希釈を行い、原血清を１２８
Ｕ／ｍｌとし、ＥＲ標準抗体としては１Ｕ／ｍｌ（原血
清１２８倍希釈）から６４Ｕ／ｍｌ（原血清２倍希釈）
までを用いた。
【００４６】４．血中ＥＲ抗体の測定方法 １）第一反応 上記ペプタイドＤ固相化プレートの各ウェルのＴｒｉｓ
−ＨＣｌ緩衝液を吸引除去後、各ウェルに１％ＢＳＡ
０．１％ＥＤＴＡ・２Ｎａ ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．
４）にて２０００倍に希釈した抗ＡＲ家兎ポリクローナ
ルＩｇＧ抗体９０μｌと標準ＡＲ抗体血清または被検血
清１０μｌを加え、３７℃で２時間反応させる。
−ＨＣｌ緩衝液を吸引除去後、各ウェルに１％ＢＳＡ
０．１％ＥＤＴＡ・２Ｎａ ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．
４）にて２０００倍に希釈した抗ＡＲ家兎ポリクローナ
ルＩｇＧ抗体９０μｌと標準ＡＲ抗体血清または被検血
清１０μｌを加え、３７℃で２時間反応させる。
【００４７】２）第二反応 第一反応終了後ウェル内の溶液を吸引除去し、マイクロ
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を２回洗浄し、ホースラディッシュパーオキシダーゼ標
識抗家兎ＩｇＧラット抗体を１％ＢＳＡ ＰＢＳ緩衝液
（ｐＨ７．４）にて２０００倍希釈した溶液を各ウェル
あたり１００μｌ加え、３７℃で１時間３０分反応させ
る。
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を２回洗浄し、ホースラディッシュパーオキシダーゼ標
識抗家兎ＩｇＧラット抗体を１％ＢＳＡ ＰＢＳ緩衝液
（ｐＨ７．４）にて２０００倍希釈した溶液を各ウェル
あたり１００μｌ加え、３７℃で１時間３０分反応させ
る。
【００４８】３）第三反応 第二反応終了後ウェル内の溶液を吸引除去し、マイクロ
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を３回洗浄し、発色剤ＡＢＴＳ濃度が３ｍｇ／ｍｌにな
るように０．１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）
で溶解し、そこに基質として２０％過酸化水素水を０．
０４％の濃度で加える。この溶液を各ウェルあたり１０
０μｌ加え、３７℃３０分反応させる。
プレート洗浄機を用いて生理食塩水２ｍｌにて各ウェル
を３回洗浄し、発色剤ＡＢＴＳ濃度が３ｍｇ／ｍｌにな
るように０．１Ｍクエン酸りん酸緩衝液（ｐＨ４．０）
で溶解し、そこに基質として２０％過酸化水素水を０．
０４％の濃度で加える。この溶液を各ウェルあたり１０
０μｌ加え、３７℃３０分反応させる。
【００４９】４）反応停止 第三反応終了後、０．１％アジ化ナトリウムを含む０．
１Ｍクエン酸りん酸緩衝液ｐＨ４．０を各ウェルあたり
１００μｌ加え、反応を停止する。
１Ｍクエン酸りん酸緩衝液ｐＨ４．０を各ウェルあたり
１００μｌ加え、反応を停止する。
【００５０】５）吸光度の測定 各ウェルの発色を波長４２０ｎｍで吸光度を測定する。
【００５１】６）血中ＥＲ抗体値の算出 標準ＥＲ抗体を含まない時の吸光度に対する各ＥＲ抗体
標準濃度の吸光度の割合（阻害率％）を算出し、ＥＲ抗
体阻害標準曲線を描く。次に、標準ＥＲ抗体を含まない
時の吸光度に対する各検体の吸光度の阻害率を計算し、
その阻害率をＥＲ抗体阻害標準曲線に照らし合わせ、各
検体血清中のＥＲ抗体濃度を求める。
標準濃度の吸光度の割合（阻害率％）を算出し、ＥＲ抗
体阻害標準曲線を描く。次に、標準ＥＲ抗体を含まない
時の吸光度に対する各検体の吸光度の阻害率を計算し、
その阻害率をＥＲ抗体阻害標準曲線に照らし合わせ、各
検体血清中のＥＲ抗体濃度を求める。
【００５２】健常人の測定結果をもとにカットフ値を３
Ｕ／ｍｌに設定し、乳癌と前立腺癌の陽性率を算出し
た。
Ｕ／ｍｌに設定し、乳癌と前立腺癌の陽性率を算出し
た。
【００５３】
【表２】
【００５４】表２に示したように、乳癌患者と前立腺癌
患者での陽性率はそれぞれ５４．５％、４０．０％であ
ったが、健常人の陽性率は０％であった。
患者での陽性率はそれぞれ５４．５％、４０．０％であ
ったが、健常人の陽性率は０％であった。
【００５５】参考文献 １．特開平４−３２７６６ ２．特表平７−５０５７１９ ３．特開平９−２２９９３３ ４．Pro.N.A.S. 82, 8345-8348(1985) ５．J.Clinical Endoclinology and Metabolism 64, 24
6-254(1987) ６．特表昭６３−５００８９５ ７．特公平６−１３５５８ ８．腫瘍マーカー研究会誌 8, 43-45(1992) ９．Cancer 9, 2205-2211(1985)
6-254(1987) ６．特表昭６３−５００８９５ ７．特公平６−１３５５８ ８．腫瘍マーカー研究会誌 8, 43-45(1992) ９．Cancer 9, 2205-2211(1985)
Claims (8)
- 【請求項１】血中に存在するホルモンレセプターに対す
る自己抗体の測定による癌の検出方法。 - 【請求項２】ホルモンレセプターがエストロゲンレセプ
ター、プロゲステロンレセプター、またはアンドロゲン
レセプターであることを特徴とする請求項１の検出方
法。 - 【請求項３】癌がホルモン依存性癌であることを特徴と
する請求項２の検出方法。 - 【請求項４】ホルモン依存性癌が乳癌、前立腺癌、ある
いは卵巣癌であることを特徴とする請求項３の検出方
法。 - 【請求項５】自己抗体の測定方法が免疫学的測定方法で
あることを特徴とする請求項１から４の検出方法。 - 【請求項６】免疫学的測定方法が競合法、またはサンド
イッチ法であることを特徴とする請求項５の検出方法。 - 【請求項７】化学合成、または遺伝子組み換えによって
得られたホルモンレセプターの部分ペプタイドを用いる
ことを特徴とする請求項５から６の検出方法。 - 【請求項８】ホルモンレセプターの部分ペプタイドを不
溶性担体に固相化して用いることを特徴とする請求項７
の検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27501197A JP3995316B2 (ja) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | ホルモンレセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27501197A JP3995316B2 (ja) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | ホルモンレセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1194831A true JPH1194831A (ja) | 1999-04-09 |
| JP3995316B2 JP3995316B2 (ja) | 2007-10-24 |
Family
ID=17549646
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27501197A Expired - Fee Related JP3995316B2 (ja) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | ホルモンレセプターに対する自己抗体の測定による癌の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3995316B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008309612A (ja) * | 2007-06-14 | 2008-12-25 | Univ Of Tokyo | 卵巣癌の検出方法及び検出用キット |
-
1997
- 1997-09-22 JP JP27501197A patent/JP3995316B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008309612A (ja) * | 2007-06-14 | 2008-12-25 | Univ Of Tokyo | 卵巣癌の検出方法及び検出用キット |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3995316B2 (ja) | 2007-10-24 |
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