JP2000198744A

JP2000198744A - ベ―タセルリン蛋白質含有製剤

Info

Publication number: JP2000198744A
Application number: JP11308303A
Authority: JP
Inventors: Jun Sato; 純佐藤; Yoshihiro Omachi; 佳宏大町
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1998-10-30
Filing date: 1999-10-29
Publication date: 2000-07-18

Abstract

(57)【要約】【課題】ベータセルリン蛋白質もしくはそのムテイン又
はその塩を含有する有用な製剤の提供。【解決手段】ベータセルリン蛋白質もしくはそのムテイ
ン又はその塩を含有する徐放性製剤。【効果】膵臓機能を改善し、糖尿病等の治療又は予防に
有用。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ベータセルリン蛋
白質もしくはそのムテイン又はその塩を含有する製剤に
関する。

【０００２】

【従来の技術】ベータセルリン蛋白質（以下、ＢＴＣ蛋
白質と略記する場合がある）は、トランスジェニックマ
ウス由来膵臓ベータ腫瘍細胞が産生する蛋白性因子で、
その全アミノ酸配列はｃＤＮＡの解析から明らかにされ
ている（Shingら；サイエンス（Science）、２５９：１
６０４(１９９３)、Sasadaら；バイオケミカル・アンド
・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ
（Biochemical Biophysical Research Communication
s）、１９０：１１７３(１９９３)）。当初、ＢＴＣ蛋
白質はマウス３Ｔ３細胞に対する増殖促進活性をもつ因
子として見出されたが、その後、血管平滑筋細胞、網膜
色素上皮細胞に対しても増殖促進活性を有することが見
出されている（Shingら；サイエンス（Science）、２５
９：１６０４(１９９３)）。また、ＢＴＣ蛋白質は創
傷、潰瘍や血管奇形の治療、あるいは糖尿病において認
められるアテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症のよ
うな平滑筋細胞増殖に起因する病気の治療に使用できる
競合剤（例えば抗体、偽ペプチド等）の作成等に用いら
れることが報告されている（特開平４−３５２８００号
公報及び特開平６−８７８９４号公報）。

【０００３】一方、糖尿病は、高血糖が持続することに
より様々な合併症が引き起こす疾病であることが知られ
ている。この疾病はインスリン依存型、インスリン非依
存型及びその他に分類され、多様な成因によって起こる
と考えられているが、基本的にはインスリン作用の不足
により発症し、特に、インスリン依存型糖尿病では産生
されるインスリン量の絶対的な不足がその原因となって
いる。小島らは、インスリンを産生する膵臓ベータ細胞
への未分化膵臓幹細胞の分化を促進する作用を有するＢ
ＴＣ蛋白質をアロキサン膵部分灌流糖尿病モデルマウス
に１ｍｇ／ｋｇ体重／日で８週間連日皮下投与したとこ
ろ、耐糖能が改善され、ＢＴＣ蛋白質又はそのムテイン
を含有する膵臓機能改善剤が糖尿病等の治療又は予防に
有用であることを報告している（特開平９−１８８６３
０号公報等)。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】ＢＴＣ蛋白質もしくは
そのムテイン又はその塩の体内動態は分布容積、体内消
失クリアランスが大きく、血中半減期が２０分程度であ
ることから、膵臓機能改善効果を得るためにはＢＴＣ蛋
白質もしくはそのムテイン又はその塩を高投与量で長期
間投与することが必要となる。しかしながら、例えばＢ
ＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の水溶液を
皮下投与する場合には、副作用の発現や、治療又は予防
の現実的な投与において患者の不便性や苦痛が懸念され
る。従って、これらの問題を解決できるＢＴＣ蛋白質も
しくはそのムテイン又はその塩を含有する有用な製剤の
開発が望まれている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、ＢＴＣ蛋白質もしく
はそのムテイン又はその塩を徐放性製剤として投与（特
に局所投与）すると、意外にも、多分化能を有する膵外
分泌腺由来細胞に作用して、これを有効にベータ細胞等
へ分化させるほか、長期間にわたりＢＴＣ蛋白質もしく
はそのムテイン又はその塩が徐放され、薬効を得るため
に高投与量を必要としないため副作用の軽減が達成で
き、かつ連日投与することがないため患者の不便性や苦
痛も軽減される等の臨床上の医薬として優れた性質を本
発明の製剤が有していることを見出した。更に、本発明
者らは、ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩
を含有する製剤を膵臓へ局所投与することにより、有効
に膵臓機能が改善されることを見出し、本発明を完成す
るに至った。

【０００６】即ち本発明は、（１）ベータセルリン蛋白
質もしくはそのムテイン又はその塩を含有する徐放性製
剤、（２）ベータセルリン蛋白質が、配列番号：３、配
列番号：４、配列番号：５及び配列番号：６からなる群
から選ばれる少なくとも１つの配列番号で表わされるア
ミノ酸配列を有する蛋白質である前記（１）記載の徐放
性製剤、（３）ベータセルリン蛋白質が、配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質又は配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質である
前記（１）記載の徐放性製剤、（４）ベータセルリン蛋
白質が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有す
る蛋白質である前記（１）記載の徐放性製剤、（５）ベ
ータセルリン蛋白質のムテインが、配列番号：１もし
くは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列の１ないし
４０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列
番号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配
列の１ないし４０個程度のアミノ酸が他のアミノ酸に置
換したアミノ酸配列、又は配列番号：１もしくは配列
番号：２で表わされるアミノ酸配列に１ないし４０個程
度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列を有する蛋白質で
ある前記（１）記載の徐放性製剤、（６）ベータセルリ
ン蛋白質のムテインが、配列番号：１で表わされるアミ
ノ酸配列のＮ末端から１２個又は３０個のアミノ酸が欠
失したアミノ酸配列を有する蛋白質である前記（１）記
載の徐放性製剤、

【０００７】（７）ベータセルリン蛋白質もしくはその
ムテイン又はその塩及びキャリアーを含有する前記
（１）記載の徐放性製剤、（８）キャリアーがポリマー
である前記（７）記載の徐放性製剤、（９）ポリマーが
生体内分解性ポリマーである前記（８）記載の徐放性製
剤、（１０）生体内分解性ポリマーが脂肪族ポリエステ
ルである前記（９）記載の徐放性製剤、（１１）脂肪族
ポリエステルが乳酸−グリコール酸重合体である前記
（１０）記載の徐放性製剤、（１２）乳酸−グリコール
酸重合体の乳酸／グリコール酸組成比が約１００／０な
いし約４０／６０である前記（１１）記載の徐放性製
剤、（１３）乳酸−グリコール酸重合体の重量平均分子
量が約３,０００ないし約８０,０００である前記（１
１）記載の徐放性製剤、（１４）ポリマーが生体内非分
解性ポリマーである前記（８）記載の徐放性製剤、（１
５）生体内非分解性ポリマーがポリグリセリン脂肪酸エ
ステルである前記（１４）記載の徐放性製剤、

【０００８】（１６）膵臓機能改善剤である前記（１）
記載の徐放性製剤、（１７）糖尿病の治療又は予防剤で
ある前記（１）記載の徐放性製剤、（１８）非経口投与
剤である前記（１）記載の徐放性製剤、（１９）膵臓へ
の局所投与剤である前記（１）記載の徐放性製剤、（２
０）皮下投与剤である前記（１）記載の徐放性製剤、
（２１）筋肉内投与剤である前記（１）記載の徐放性製
剤、（２２）腹腔内投与剤である前記（１）記載の徐放
性製剤、（２３）ベータセルリン蛋白質もしくはそのム
テイン又はその塩を含有する膵臓への局所投与剤、（２
４）徐放性製剤を製造するためのベータセルリン蛋白質
もしくはそのムテイン又はその塩の使用、及び（２５）
膵臓への局所投与剤を製造するためのベータセルリン蛋
白質もしくはそのムテイン又はその塩の使用等に関す
る。

【０００９】本発明で用いられるＢＴＣ蛋白質又はその
ムテインは、ＢＴＣ様活性、即ち線維芽細胞、血管平滑
筋細胞、網膜色素上皮細胞等の細胞増殖促進作用、より
具体的には未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への分
化促進作用を有する蛋白質であれば何れのものであって
もよい。また、例えば発酵生産物、合成化合物、合成ペ
プチド等も用いることができる。また、ＢＴＣ蛋白質と
しては、天然由来のものでもよく、遺伝子工学的手法に
よって製造された組換え型蛋白質でもよい。天然由来の
ＢＴＣ蛋白質としては、例えばヒト、サル、マントヒ
ヒ、チンパンジー、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、マウ
ス、ラット等のあらゆる哺乳動物由来のＢＴＣ蛋白質が
用いられ、中でもヒト、マウス由来のもの等が好まし
く、特にヒト由来のものが好ましい。本発明の製剤をヒ
トに適用する場合は、とりわけヒト由来のＢＴＣ蛋白質
を用いるのが好ましい。

【００１０】ＢＴＣ蛋白質としては、具体的には、配列
番号：３、配列番号：４、配列番号：５及び配列番号：
６からなる群から選ばれる少なくとも１つの配列番号で
表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質等が用いられ
る。より具体的にはヒト由来ＢＴＣ蛋白質として、例え
ば配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有する蛋白
質（特開平６−８７８９４）等が、マウス由来ＢＴＣ蛋
白質としては、例えば配列番号：２で表わされるアミノ
酸配列を有する蛋白質（Shingら；サイエンス（Scienc
e），259：1604(1993)）等が用いられる。また、これら
のＢＴＣ蛋白質は、アミノ酸のみで構成される単純蛋白
質であってもよく、糖蛋白質、リポ蛋白質、ヘム蛋白
質、金属蛋白質、フラビン蛋白質、リン蛋白質等の複合
蛋白質であってもよい。糖蛋白質である場合、糖鎖とし
ては、例えばD-マンノース、D-ガラクトース、L-フルク
トース等の中性糖、D-グルコサミン、D-ガラクトサミン
等のアミノ糖、及びシアル酸等が挙げられる。

【００１１】ＢＴＣ蛋白質のムテインとしては、例えば
上記ＢＴＣ蛋白質の少なくも１個の構成アミノ酸が欠失
している欠失型ムテイン、ＢＴＣ蛋白質の少なくとも１
個の構成アミノ酸が他のアミノ酸に置換している置換型
ムテイン、ＢＴＣ蛋白質に少なくとも１個のアミノ酸が
付加している付加型ムテイン等が用いられる。アミノ酸
の欠失、置換又は付加の数は、ＢＴＣ蛋白質の本来有す
る作用を失わない限り何個でもよい。具体的には、配
列番号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸
配列の１ないし４０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ
酸配列、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わさ
れるアミノ酸配列の１ないし４０個、好ましくは１ない
し９個程度のアミノ酸が他のアミノ酸配列に置換したア
ミノ酸配列、又は配列番号：１もしくは配列番号：２
で表わされるアミノ酸配列に１ないし４０個、好ましく
は１ないし９個程度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列
を有する蛋白質等が用いられ、中でも、次の部分アミノ
酸配列、 His Phe Ser Arg Cys Pro Lys Gln Tyr Lys His Ty
r Cys Ile（配列番号：３） Gly Arg Cys Arg Phe Val Val （配列番号：４） Glu Gln Thr Pro Ser Cys （配列番号：５）、及び Gly Ala Arg Cys Glu Arg Val Asp Leu Phe Tyr
(配列番号：６)からなる群から選ばれる少なくとも１つ
のアミノ酸配列を有する蛋白質等が好ましい。これらのムテインの中でも、欠失型ムテイン等が好まし
く、例えば配列番号：１もしくは配列番号：２で表わさ
れるアミノ酸配列のＮ末端から１ないし４０個程度のア
ミノ酸が欠失したアミノ酸配列を有する蛋白質等が好ま
しい。

【００１２】より具体的には、ＢＴＣ蛋白質の欠失型ム
テインとして、例えば配列番号：１もしくは配列番号：
２で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個又は３
０個のアミノ酸を欠失したアミノ酸配列を有するヒトＢ
ＴＣ蛋白質の欠失型ムテイン等が用いられる（Watanabe
ら；ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal
of Biochemistry），269：9966(1994)）。特に、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個又
は３０個のアミノ酸を欠失したアミノ酸配列を有するヒ
トＢＴＣ蛋白質の欠失型ムテインが好ましい。その他の
ＢＴＣ蛋白質のムテインとしては、ＢＴＣ蛋白質のＮ末
端がアシル化（例、ホルミル、アセチルなどのＣ_2-6ア
ルカノイルなどのＣ_1-6アシル）されたもの、グリコシ
ル化されたもの、ポリエチレングリコール誘導体等の化
学修飾されたもの等、ＢＴＣ蛋白質の有する作用を失わ
ない限り何れのものでもよい。また、該ＢＴＣ蛋白質又
はそのムテインは、Ｃ末端のカルボキシル基がアミド化
又はエステル化（例、メチル、エチル、ｎ−プロピル、
イソプロピル、ｎ−ブチルなどのＣ_1-6アルキル−エス
テルなど）されていてもよい。

【００１３】ＢＴＣ蛋白質又はそのムテインは塩を形成
していてもよく、ＢＴＣ蛋白質又はそのムテインの塩と
しては、とりわけ薬理学的に許容される塩が好ましい。
この様な塩としては、例えば無機酸（例えば塩酸、りん
酸、臭化水素酸、硫酸等）との塩、有機酸（例えば酢
酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハ
ク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、
メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸等）との塩、無
機塩基との塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩等のア
ルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアル
カリ土類金属塩；アルミニウム塩、アンモニウム塩
等）、有機塩基との塩（例えばトリメチルアミン、トリ
エチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミ
ン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシ
クロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジア
ミン等）等が用いられる。

【００１４】本発明に用いられるＢＴＣ蛋白質又はその
ムテインのうち、配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有するヒトＢＴＣ蛋白質、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列のN末端から１２個又は３０個のアミノ
酸が欠失したアミノ酸配列を有する欠失型ヒトＢＴＣム
テイン、及び配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を
有するマウスＢＴＣ蛋白質は公知である。また、それら
以外のＢＴＣ蛋白質又はそのムテインについては自体公
知の方法あるいはそれに準じる方法に従って製造するこ
とができ、例えば自体公知のペプチドの合成法に従っ
て、あるいは公知のペプチド又は前駆体を適当なペプチ
ターゼで切断することによって製造することができる。
ペプチドの合成方法としては、例えば固相合成法、液相
合成法の何れでもよい。即ち、目的とするペプチドは、
そのペプチド又は前駆体を構成し得る部分ペプチドもし
くはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基
を有する場合は保護基を脱離することにより製造するこ
とができる。公知の縮合方法や保護基の脱離としては、
例えば以下のないしに記載された方法が挙げられ
る。 M. Bodanszky 及び M. A. Ondetti，ペプチドシン
セシス（Peptide Synthesis），Interscience Publishe
rs, New York (1966年) Schroeder 及び Luebke，ザペプチド（The Peptid
e），Academic Press, New York（1965年）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、丸善
（株）(1975年) 矢島治明及び榊原俊平、生化学実験講座１、ペプチ
ド又は前駆体の化学IV、205、(1977年）矢島治明監修、続医薬品の開発第14巻ペプチド
合成広川書店また、反応後は通常の精製法、例えば溶媒抽出・蒸留・
カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・
再結晶等を組み合わせて目的とするペプチド又は前駆体
を精製単離することができる。上記方法で得られるペプ
チド又は前駆体は遊離体である場合は、公知の方法によ
って適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得ら
れた場合は、公知の方法によって遊離体に変換すること
ができる。

【００１５】本発明のＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイ
ン又はその塩を含有する徐放性製剤は、キャリアー（担
体あるいは基剤）を含有しているのが好ましく、キャリ
アーとして例えば蛋白、ポリサッカライド、ポリマー
（生体内分解性ポリマー、生体内非分解性ポリマー）、
リポソーム、無機物等が挙げられる。蛋白としては、例
えばコラーゲン、ゲラチン、フィブリン、血清アルブミ
ン等が挙げられる。ポリサッカライドとしては、例えば
デンプン、ヒアルロン酸、キトサン、キチン、アルギン
酸塩、アガロース、デキストラン、セルロース誘導体等
が挙げられる。生体内分解性ポリマーとしては、例えば
脂肪族ポリエステル、ポロフォスファベンゼン、ポリオ
ルソエステル等が挙げられる。生体内非分解性ポリマー
としては、例えばポリグリセリン脂肪酸エステル、シリ
コン、エチルビニルアセテート共重合体、ポリヒドロキ
シエチルメチルメタアクリレート、ポリビニルアルコー
ル、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。リポソーム
としては、通常のリポソームに加えて例えばポリサッカ
ライド修飾リポソーム等が挙げられる。無機物として
は、例えばハイドロキシアパタイド、トリカルシュウム
フォスフェイト、カルシュウムカルボネート、カルシュ
ウムサルフェート等が挙げられる。

【００１６】本発明の徐放性製剤に用いるキャリアーと
しては、例えばポリマー（例えば生体内分解性ポリマ
ー、生体内非分解性ポリマー等）等が好ましく、特に生
体内分解性ポリマーとして例えば脂肪族ポリエステル
等、生体内非分解性ポリマーとして例えばポリグリセリ
ン脂肪酸エステル等が好ましい。脂肪族ポリエステルと
しては、例えば乳酸−グリコール酸重合体等が用いられ
る。乳酸−グリコール酸重合体の組成比（乳酸／グリコ
ール酸；Ｌ／Ｇ比）（モル％）は約１００／０ないし約
４０／６０が好ましく、更に好ましくは約１００／０な
いし約７５／２５であり、特に好ましくは１００／０
（ポリ乳酸）である。乳酸−グリコール酸重合体の重量
平均分子量は約３,０００ないし約８０,０００が好まし
く、更に好ましくは約５,０００ないし約２５,０００で
あり、特に好ましくは約７,０００ないし約２０,０００
である。乳酸−グリコール酸重合体の分散度（重量平均
分子量／数平均分子量）は、好ましくは約１.２ないし
約４.０、更に好ましくは約１.５ないし約３.５であ
る。

【００１７】ポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、
例えばテトラグリセロールモノパルミテート（ＴＧＭ
Ｐ）、テトラグリセロールジパルミテート（ＴＧＤ
Ｐ）、テトラグリセロールトリパルミテート（ＴＧＴ
Ｐ）、テトラグリセロールヘキサパルミテート（ＴＧＨ
Ｐ）、テトラグリセロールモノステアレート（ＴＧＭ
Ｓ）、テトラグリセロールジステアレート（ＴＧＤ
Ｓ）、テトラグリセロールトリステアレート（ＴＧＴ
Ｓ）、テトラグリセロールヘキサステアレート（ＴＧＨ
Ｓ）、ヘキサグリセロールペンタステアレート（ＨＧＰ
Ｓ）、テトラグリセロールヘキサパルミテート（ＴＧＨ
Ｐ）等が挙げられ、これらを単独であるいは混合して用
いることができる。

【００１８】本発明の徐放性製剤は、自体公知の方法に
したがって製造される。本発明の徐放性製剤は、具体的
には、ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩
と、徐放性製剤の製造時に通常用いられるキャリアー
（例えば前記キャリアー）とを混合し、必要に応じて成
形することによって製造される。該キャリアーは、例え
ばＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の使用
量が、キャリアーに対して約０.０１ないし約５０％(ｗ
／ｗ)となるように使用される。以下に本発明の徐放性
製剤として、例えばＡ）生体内非分解性ポリマーである
ポリグリセリン脂肪酸エステルをキャリアーとして用い
たＢＴＣ蛋白質含有徐放性製剤、及びＢ）生体内分解性
ポリマーである乳酸−グリコール酸重合体をキャリアー
として用いたＢＴＣ蛋白質含有徐放性製剤の製造法につ
いて例示する。Ａ）ポリグリセリン脂肪酸エステルをキャリアーとして
用いたＢＴＣ蛋白質含有徐放性製剤ポリグリセリン脂肪酸エステルを加温・融解し、ＢＴＣ
蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の粉末を添加し
攪拌等により均等に分散させる。この後冷却し、円盤
状、フィルム状、棒状等に成形する。このようにして所
定量のＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩を
含有するポリグリセリン脂肪酸エステルの徐放性製剤を
得ることができる。加温温度は約５０ないし約１００
℃、冷却温度は約０ないし約４０℃である。ＢＴＣ蛋白
質もしくはそのムテイン又はその塩の使用量は、ＢＴＣ
蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の種類、所望の
薬理効果及び効果の持続期間等により異なるが、ポリグ
リセリン脂肪酸エステルに対して約０.１ないし約５０
％(ｗ／ｗ)である。

【００１９】Ｂ）乳酸−グリコール酸重合体をキャリア
ーとして用いたＢＴＣ蛋白質含有徐放性製剤Ｂ−１）棒状成形物等の製造法について詳述する。Ｂ−１−ａ）乳酸−グリコール酸重合体を有機溶媒（好ましくはジク
ロルメタン等）で溶解し、ＢＴＣ蛋白質もしくはそのム
テイン又はその塩の水溶液を添加後乳化する。これを真
空乾燥しＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩
が均等に分散した乳酸−グリコール酸重合体の粉末を得
る。これを加温し、冷却することにより、円盤状、フィ
ルム状、棒状（ロッド状）等に成形する。このようにし
て所定量のＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその
塩を含有する乳酸−グリコール酸重合体の徐放性製剤を
得ることができる。加温温度は約５０ないし約１００
℃、冷却温度は約０ないし約４０℃である。ＢＴＣ蛋白
質もしくはそのムテイン又はその塩の使用量は、ＢＴＣ
蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の種類、所望の
薬理効果及び効果の持続期間等により異なるが、乳酸−
グリコール酸重合体に対して約０.１ないし約３０％(ｗ
／ｗ)である。

【００２０】Ｂ−１−ｂ）乳酸−グリコール酸重合体を有機溶媒（好ましくはジク
ロルメタン等）で溶解し、ＢＴＣ蛋白質もしくはそのム
テイン又はその塩の粉末を添加後、均一に分散させる。
得られる分散系を真空乾燥し、ＢＴＣ蛋白質もしくはそ
のムテイン又はその塩が均等に分散した乳酸−グリコー
ル酸重合体の粉末を得る。これを加温し、冷却すること
により、円盤状、フィルム状、棒状（ロッド状）等に成
形する。このようにして所定量のＢＴＣ蛋白質もしくは
そのムテイン又はその塩を含有する乳酸−グリコール酸
重合体の徐放性製剤を得ることができる。加温温度、冷
却温度、およびＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又は
その塩の使用量は、前記と同様である。

【００２１】Ｂ−２）マイクロカプセル（マイクロスフ
ェアとも称する）の製造法について詳述する。Ｗ／Ｏ／
Ｗエマルション及びＯ／Ｗエマルションは、それぞれ
（ｉ）ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の
水溶液、分散液又は懸濁液を内水相とし、乳酸−グリコ
ール酸重合体の有機溶媒溶液を油相とするＷ／Ｏエマル
ションを得るか、又は（ii）ＢＴＣ蛋白質もしくはその
ムテイン又はその塩を乳酸−グリコール酸重合体の有機
溶媒溶液に溶解あるいは懸濁して油相を得、この（ｉ）
又は（ii）を水（外水相）に添加し、分散、乳化するこ
とによって製造される。上記（ｉ）、即ちＢＴＣ蛋白質
もしくはそのムテイン又はその塩の水溶液、分散液又は
懸濁液を内水相とし、乳酸−グリコール酸重合体の有機
溶媒溶液を油相とするＷ／Ｏエマルションは、以下のよ
うにして製造される。まず、ＢＴＣ蛋白質もしくはその
ムテイン又はその塩を水に溶解、分散又は懸濁し、内水
相を製造する。ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又は
その塩の水溶液、分散液又は懸濁液中の濃度は、例えば
０.００１ないし９０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０.０１
ないし８０％（ｗ／ｗ）である。上記ＢＴＣ蛋白質もし
くはそのムテイン又はその塩の使用量は、ＢＴＣ蛋白質
もしくはそのムテイン又はその塩の種類、所望の薬理効
果及び効果の持続期間等により異なるが、乳酸−グリコ
ール酸重合体に対して、約０.０１ないし約５０％（ｗ
／ｗ）、好ましくは約０.１ないし約４０％（ｗ／
ｗ）、特に好ましくは約１ないし約３０％（ｗ／ｗ）で
ある。

【００２２】必要であれば、ＢＴＣ蛋白質もしくはその
ムテイン又はその塩のマイクロカプセルへの取り込みを
あげるために、内水相にゼラチン、寒天、アルギン酸ナ
トリウム、ポリビニールアルコールあるいは塩基性アミ
ノ酸（例えばアルギニン、ヒスチジン、リジン等）等の
薬物保持物質を加えてもよい。薬物保持物質の添加量
は、ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩に対
し、通常約０.０１ないし約１０重量倍である。内水相
は、一旦凍結乾燥して粉末状態とした後、適当な濃度と
なるように水を添加して溶解して用いてもよい。

【００２３】別に、乳酸−グリコール酸重合体を有機溶
媒に溶解し、油相を製造する。前記有機溶媒としては、
ハロゲン化炭化水素（例えばジクロロメタン、クロロホ
ルム、クロロエタン、トリクロロエタン、四塩化炭素
等）、脂肪酸エステル（例えば酢酸エチル、酢酸ブチル
等）、芳香族炭化水素（例えばベンゼン、トルエン、キ
シレン等）が挙げられ、中でもジクロロメタンが好まし
い。有機溶媒中の乳酸−グリコール酸重合体の濃度は、
該乳酸−グリコール酸重合体の種類、分子量、有機溶媒
の種類により異なるが、［乳酸−グリコール酸重合体の
重量／（有機溶媒の重量＋乳酸−グリコール酸重合体の
重量）］（×１００％）は、通常約０.０１ないし約９
０％（ｗ／ｗ）、好ましくは約０.０１ないし約７０％
（ｗ／ｗ）である。未溶解物がないように溶解するのが
よい。このようにして得られる乳酸−グリコール酸重合
体の有機溶媒溶液（油相）に、上記したＢＴＣ蛋白質も
しくはそのムテイン又はその塩の水溶液、分散液又は懸
濁液（内水相）を添加し、ホモミキサー等で分散、乳化
し、Ｗ／Ｏエマルションを製造する。

【００２４】一方、上記（ii）、即ちＢＴＣ蛋白質もし
くはそのムテイン又はその塩を乳酸−グリコール酸重合
体の有機溶媒溶液に溶解あるいは懸濁して得られる油相
は、以下のようにして製造される。まず、乳酸−グリコ
ール酸重合体の有機溶媒溶液を製造する。該有機溶媒と
しては、上記Ｗ／Ｏエマルションを製造する際に用いた
有機溶媒と同様のものが用いられる。有機溶媒溶液中の
乳酸−グリコール酸重合体の濃度は、該乳酸−グリコー
ル酸重合体の分子量、有機溶媒の種類によって異なる
が、［乳酸−グリコール酸重合体の重量／（有機溶媒の
重量＋乳酸−グリコール酸重合体の重量）］（×１００
％）は、通常約０.０１ないし約７０％（ｗ／ｗ）、好
ましくは約１ないし約６０％（ｗ／ｗ）である。次に、
ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩を乳酸−
グリコール酸重合体の有機溶媒溶液に溶解あるいは懸濁
して油相を製造する。ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイ
ン又はその塩の使用量は、該ＢＴＣ蛋白質もしくはその
ムテイン又はその塩の乳酸−グリコール酸重合体に対す
る割合が上記Ｗ／Ｏエマルション（ｉ）を製造する場合
と同様になるように選択すればよい。

【００２５】ついで上記した（ｉ）Ｗ／Ｏエマルション
又は（ii）油相を、外水相に添加し、ホモミキサー等を
用いて分散、乳化し、それぞれＷ／Ｏ／Ｗエマルション
又はＯ／Ｗエマルションを製造する。外水相の使用量
は、通常上記（ｉ）又は（ii）の約１ないし約１０００
０容量倍、好ましくは約１０ないし約２０００容量倍、
特に好ましくは約５０ないし約５００容量倍である。外
水相中には、通常乳化剤を添加する。該乳化剤として
は、一般的に安定なＷ／Ｏ／Ｗエマルション又はＯ／Ｗ
エマルションを形成し得るものであればよく、例えばア
ニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、ポリオキ
シエチレンヒマシ油誘導体、ポリビニルピロリドン、ポ
リビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、レ
シチン、ゼラチン、ヒアルロン酸等が挙げられるが、中
でもポリビニルアルコールが好ましい。外水相中の乳化
剤の濃度は、通常約０.００１ないし約２０％（ｗ／
ｗ）、好ましくは約０.０１ないし約１０％（ｗ／
ｗ）、特に好ましくは約０.０５ないし約５％（ｗ／
ｗ）である。このようにして得られるＷ／Ｏ／Ｗエマル
ション又はＯ／Ｗエマルション（以下、これらを単にエ
マルションと略記する場合がある）を水中乾燥法に付す
ことにより、これらエマルションに含まれる有機溶媒を
除去してマイクロカプセルを製造することができる。

【００２６】このようにして得られるマイクロカプセル
は、遠心分離あるいは篩等で回収し、所望により、マイ
クロカプセル同士の凝集を防止するため糖あるいは糖ア
ルコール、無機塩等、好ましくはマンニトール、ソルビ
トール等の凝集防止剤を添加した後、凍結乾燥に付す。
マイクロカプセルと凝集防止剤の混合割合（重量比）
は、約５０：１ないし約１：１、好ましくは約２０：１
ないし約１：１、更に好ましくは約１０：１ないし約
５：１である。凝集防止剤の添加方法は、マイクロカプ
セルと凝集防止剤とが均一に混合される方法であれば特
に限定されないが、例えば凝集防止剤の水溶液にマイク
ロカプセルを分散する方法等が挙げられる。ＢＴＣ蛋白
質もしくはそのムテイン又はその塩の徐放性マイクロカ
プセルの製造法においては、水中乾燥法によりマイクロ
カプセル化するのが好適である場合が多い。このように
して得られたマイクロカプセルは、必要があれば減圧下
加温乾燥しマイクロカプセル中の水分及び溶媒の除去を
より完全に行う。

【００２７】また、前記したＷ／Ｏ／Ｗエマルション又
はＯ／Ｗエマルションを用いる方法の他に、ＢＴＣ蛋白
質もしくはそのムテイン又はその塩の粉末（Ｓ相）を、
乳酸−グリコール酸重合体を溶解した有機溶媒液（Ｏ
相）に分散させた、Ｓ／Ｏ型分散液から溶媒を除去する
ことによるＳ／Ｏ／Ｗ法により製造することもできる。
本法は、まず乳酸−グリコール酸重合体を有機溶媒に溶
解し、この有機溶媒液中にＢＴＣ蛋白質もしくはそのム
テイン又はその塩の粉末（Ｓ相）を添加し分散させる。
この際、ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩
と乳酸−グリコール酸重合体との混合割合（重量比）
は、例えば約１：１０００ないし約１：１、好ましくは
約１：２００ないし約１：５、更に好ましくは約１：１
００ないし約１：５である。また、ＢＴＣ蛋白質もしく
はそのムテイン又はその塩の粉末を有機溶媒液中に均一
に分散させるため、外部物理的エネルギーを加えること
が好ましい。その方法としては例えば超音波照射、ター
ビン型撹拌器、ホモジナイザー等が用いられる。

【００２８】次いでこのようにして調製された有機溶媒
分散液（Ｓ／Ｏ型分散液）を、更に水性溶媒（Ｗ相）中
に添加して、上記と同様の外部物理的エネルギー、例え
ば超音波照射、タービン型撹拌器、あるいはホモジナイ
ザー等によりＳ／Ｏ／Ｗ型エマルションを形成させる。
以後、油相溶媒を蒸発させマイクロカプセルを製造す
る。この際の水相体積は、一般的には油相体積の約１倍
ないし約１０,０００倍から選ばれる。更に好ましくは
約２倍ないし約５,０００倍、特に好ましくは約５倍な
いし約２,０００倍から選ばれる。上記外水相中には、
乳化剤を加えてもよい。該乳化剤としては、一般的に安
定なＳ／Ｏ／Ｗエマルションを形成できるものであれば
何れでもよい。乳化剤としては、例えばアニオン性界面
活性剤、非イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンヒ
マシ油誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアル
コール、カルボキシメチルセルロース、レシチン、ゼラ
チン、ヒアルロン酸等が挙げられる。これらは適宜組み
合わせて使用してもよい。外水相中の乳化剤の濃度は、
好ましくは約０.００１％ないし約２０％（ｗ／ｗ）で
ある。更に好ましくは約０.０１％ないし約１０％（ｗ
／ｗ）、特に好ましくは約０.０５％ないし約５％（ｗ
／ｗ）である。

【００２９】このようにして得られたマイクロカプセル
は、遠心分離あるいは濾過操作により分取した後、マイ
クロカプセルの表面に付着している乳化剤等を蒸留水に
よる洗浄で除去し、再び蒸留水等に分散して凍結乾燥す
る。その後必要であれば、加温してマイクロカプセル中
の水分及び有機溶媒を更に除去する。減圧下に加温して
もよい。加温条件としては、用いた乳酸−グリコール酸
重合体のガラス転移温度以上で、マイクロカプセルの各
粒子が互いに付着しない程度の温度で加熱乾燥する。好
ましくは、乳酸−グリコール酸重合体のガラス転移温度
からガラス転移温度より約３０℃高い温度の範囲で加熱
乾燥する。ここでガラス転移温度とは、示差走査熱量計
を用い、加温速度毎分１０ないし２０℃で昇温した際に
得られる中間点を云う。このようにして得られるマイク
ロカプセルは、粒子同士の凝集を防ぐために凝集防止剤
を加えてもよい。該凝集防止剤としては、例えばマンニ
トール、ラクトース、ブドウ糖、デンプン類（例えばコ
ーンスターチ等）、ヒアルロン酸あるいはこのアルカリ
金属塩等の水溶性多糖、グリシン、フィブリン、コラー
ゲン等の蛋白質、塩化ナトリウム、リン酸水素ナトリウ
ム等の無機塩類等が適宜用いられる。

【００３０】また、マイクロカプセルは、前記Ｂ−１−
ａ）の場合と同様に、加温後、冷却することにより、円
盤状、フィルム状、棒状（ロッド状）等に成形すること
もできる。

【００３１】前記した各種製造法において、有機溶媒に
乳酸−グリコール酸重合体を溶解する際に、該有機溶媒
に酸化亜鉛を添加してもよい。酸化亜鉛の使用量は、乳
酸−グリコール酸重合体１重量部に対し、例えば約０．
１〜約１００重量部、好ましくは約１〜約２０重量部で
ある。また、酸化亜鉛の粒子径は、通常約０．００１〜
約１０μｍ、好ましくは約０．００５〜約１μｍであ
る。このように、酸化亜鉛を使用して得られる徐放性製
剤は、「薬物取り込み率が高い」、「生体内投与時の薬
物初期過剰放出が小さい」、「長期にわたって持続的に
薬物を放出できる」等の優れた性質を有する。

【００３２】本発明の徐放性製剤を製造する際に、ＢＴ
Ｃ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩を、酢酸アン
モニウム水溶液に溶解し、凍結乾燥して用いてもよい。
このように酢酸アンモニウムで処理して得られるＢＴＣ
蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩は、粒子径が小
さく、優れた操作性を有するので、徐放性製剤を製造す
る際に有利である。

【００３３】こうして得られる本発明の徐放性製剤は、
そのままあるいは所望により製剤学的に許容される添加
剤（例えば安定化剤、保存剤、無痛化剤等）を用いて種
々の剤形に製造して投与することができる。このような
製剤としては、例えば非経口剤（例えば注射剤、埋め込
み剤、坐剤等）、経口投与剤（例えばカプセル剤、錠
剤、顆粒剤、散剤等の固形製剤、シロップ剤、乳剤、懸
濁剤等の液剤等）等が挙げられる。製剤学的に許容され
る添加剤としての安定剤としては、例えばヒト血清アル
ブミン、ポリエチレングリコール等、保存剤としては、
例えばベンジルアルコール、フェノール等、無痛化剤と
しては、例えば塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイン
等が挙げられる。本発明の製剤におけるＢＴＣ蛋白質も
しくはそのムテイン又はその塩の含有量は、製剤全体に
対して通常約０.０１ないし約１００％（ｗ／ｗ）の範
囲から適宜選択することができる。

【００３４】本発明の徐放性製剤は、ＢＴＣ蛋白質もし
くはそのムテイン又はその塩を、水性溶剤（例、蒸留
水、生理的食塩水、リンゲル液等）または油性溶剤
（例、オリーブ油、ゴマ油、綿実油、コーン油等の植物
油；プロピレングリコール等）に溶解、懸濁または乳化
した後、市販の徐放性製剤用容器［例、デュロス（商品
名、アルザ社製）］に封入することによっても製造され
る。

【００３５】本発明の製剤の投与方法は、経口、非経口
のいずれでよいが、非経口剤とするのが好ましく、なか
でも皮下投与剤、腹腔内投与剤及び筋肉内投与剤等の全
身性投与剤、又は臓器等への局所投与剤とすることが好
ましく、特に膵臓への局所投与剤とする場合が好まし
い。本発明において、ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイ
ン又はその塩を含有する膵臓への局所投与剤としては、
ＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩をそのま
ま、あるいは公知の製剤学的製造法に準じ、所望により
製剤学的に許容される担体を用いて種々の剤形に製造さ
れたＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩を含
有する製剤であればよいが、ＢＴＣ蛋白質もしくはその
ムテイン又はその塩を含有する徐放性製剤であることが
好ましい。膵臓への局所投与剤は、具体的には、ＢＴＣ
徐放性製剤を内視鏡手術等を応用して直接膵臓またはそ
の周辺へ投与する、ステント技術を用いて製剤を膵臓支
配動脈に投与する、経口的内視鏡を用いて膵管経由で製
剤を膵臓に投与する等の方法により用いられる。

【００３６】本発明の製剤の剤型としては、前記ＢＴＣ
蛋白質含有徐放性製剤の製造法の説明において例示した
円盤状成形物、フィルム状成形物、棒状成形物、マイク
ロカプセルなどが挙げられるが、ＢＴＣ蛋白質もしくは
そのムテイン又はその塩を膵臓において局所的にかつ長
期にわたって供給するためには、円盤状成形物、フィル
ム状成形物、棒状成形物が好ましい。さらに、製剤の製
造工程が簡便であることから、棒状成形物が特に好まし
い。

【００３７】本発明の製剤は低毒性であるので、哺乳動
物（例えばヒト、サル、マントヒヒ、チンパンジー、ブ
タ、ウシ、ヒツジ、ウマ、マウス、ラット等）の膵臓機
能障害や膵臓機能低下に対して安全な製剤として使用す
ることができる。具体的には、本発明の製剤は、細胞分
化促進剤として膵臓ベータ細胞の分化を促進する作用を
有する。即ち、本発明の製剤は、未分化膵臓幹細胞に作
用して、これを膵臓ベータ細胞へと分化させることがで
き、このようにして分化誘導されて生じた膵臓ベータ細
胞は、インスリンを分泌・産生することができる。ま
た、本発明の製剤は、未分化膵臓幹細胞を膵臓の他の細
胞、例えばパンクレアティックペプチド（以下、ＰＰと
略称する場合がある）を産生するＦ細胞へと分化誘導さ
せる作用も有する。更には、本発明の製剤はin vivoに
おける耐糖能改善作用を有する。従って、本発明の製剤
は、例えば糖尿病（例えばインスリン依存性糖尿病）、
糖尿病における膵臓機能障害、老人性のインスリン分泌
低下に伴う膵臓機能低下症、糖尿病性合併症（例えば神
経障害、腎症、網膜症、白内障、大血管障害、骨減少症
等）、未分化型膵ガン等の疾患の治療又は予防に有効に
用いることができる。本発明の製剤の投与量は、主薬で
あるＢＴＣ蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の種
類と含有量、剤形、持続期間、投与対象、投与ルート、
投与目的、対象疾患、症状等に応じて適宜選択すること
ができるが、例えば糖尿病の成人患者（体重約６０ｋ
ｇ）の治療に注射剤（例えば約２ないし約３ヶ月徐放
剤）として投与する場合、１回あたり、ＢＴＣ蛋白質も
しくはそのムテイン又はその塩として約３０ないし約６
００ｍｇ／ｋｇ体重である。

【００３８】また、本発明の製剤は、糖尿病治療剤、糖
尿病性合併症治療剤、抗高脂血症剤、降圧剤、抗肥満
剤、利尿剤、化学療法剤、免疫療法剤等の薬剤（以下、
併用薬剤と略記する）と組み合わせて用いることができ
る。この際、本発明の製剤及び併用薬剤の投与時期は限
定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与しても
よいし、時間差をおいて投与してもよい。併用薬剤の投
与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選
択することができる。また、本発明の製剤と併用薬剤の
配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組
み合わせ等に応じて適宜選択することができる。

【００３９】糖尿病治療剤としては、インスリン製剤
（例えばウシ、ブタの膵臓から抽出された動物インスリ
ン製剤；大腸菌、イーストを用い、遺伝子工学的に合成
したヒトインスリン製剤等）、インスリン感受性増強剤
（例えば塩酸ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグ
リタゾン（またはそのマレイン酸塩）、ＪＴＴ−５０
１、ＭＣＣ−５５５、Ｒ−１１９７０２等）、α−グル
コシダーゼ阻害剤（例えばボグリボース、アカルボー
ス、ミグリトール等）、ビグアナイド剤（例えばフェン
ホルミン、メトホルミン、ブホルミン等）、あるいはス
ルホニルウレア剤（例えばトルブタミド、グリベンクラ
ミド、グリクラジド、クロルプロパミド、トラザミド、
アセトヘキサミド、グリクロピラミド、グリメピリド
等）やその他のインスリン分泌促進剤（例えばレパグリ
ニド、セナグリニド、ミツグリニド、ＧＬＰ−１等）等
が挙げられる。糖尿病性合併症治療剤としては、アルド
ース還元酵素阻害剤（例えばトルレスタット、エパルレ
スタット、ゼナレスタット、ＳＫ−８６０、ＣＴ−１１
２等）、神経栄養因子（例えばＮＧＦ、ＮＴ−３等）、
活性酸素消去薬（例えばチオクト酸等）、脳血管拡張剤
（例えばチオプリド、メキシレチン等）が挙げられる。

【００４０】抗高脂血症剤としては、コレステロール合
成阻害剤であるスタチン系化合物（例えばセリバスタチ
ン、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、
アトロバスタチン、フルバスタチン等）、スクアレン合
成酵素阻害剤あるいはトリグリセリド低下作用を有する
フィブラート系化合物（例えばベザフィブラート、クロ
フィブラート、シムフィブラート、クリノフィブラート
等）等が挙げられる。降圧剤としては、アンジオテンシ
ン変換酵素阻害剤（例えばカプトプリル、エナラプリ
ル、デラプリル等）、アンジオテンシンII拮抗剤（例え
ばカンデサルタンシレキセチル、ロサルタン等）、カル
シウム拮抗剤（例えばニカルジピン、ニフェジピン、ジ
ルチアゼム、マニジピン等）等が挙げられる。抗肥満剤
としては、例えば中枢性抗肥満薬（例えばデキスフェン
フルアミン、フェンフルラミン、フェンテルミン、シブ
トラミン、アンフェプラモン、デキサンフェタミン、マ
ジンドール、フェニルプロパノールアミン、クロベンゾ
レックス等）、膵リパーゼ阻害薬（例えばオルリスタッ
ト等）、β３アゴニスト（例えばＣＬ−３１６２４３、
ＳＲ−５８６１１−Ａ、ＵＬ−ＴＧ−３０７、ＡＪ−９
６７７等）、ペプチド性食欲抑制薬（例えばレプチン
等）、コレシストキニンアゴニスト（例えばリンチトリ
プト、ＦＰＬ−１５８４９等）等が挙げられる。

【００４１】利尿剤としては、例えばキサンチン誘導体
（例えばサリチル酸ナトリウムテオブロミン、サリチル
酸カルシウムテオブロミン等）、チアジド系製剤（例え
ばエチアジド、シクロペンチアジド、トリクロルメチア
ジド、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、
ベンチルヒドロクロロチアジド、ペンフルチジド、ポリ
チアジド、メチクロチアジド等）、抗アルドステロン製
剤（例えばスピロノラクトン、トリアムテレン等）、炭
酸脱水酵素阻害剤（例えばアセタゾラミド等）、クロル
ベンゼンスルホンアミド系製剤（例えばクロルタリド
ン、メフルシド、インダパミド等）、アゾセミド、イソ
ソルビド、エタクリン酸、ピレタニド、ブメタニド、フ
ロセミド等が挙げられる。

【００４２】化学療法剤としては、例えばアルキル化剤
（例えばサイクロフォスファミド、イフォスファミド
等）、代謝拮抗剤（例えばメソトレキセート、５−フル
オロウラシル等）、抗癌性抗生物質（例えばマイトマイ
シン、アドリアマイシン等）、植物由来抗癌剤（例えば
ビンクリスチン、ビンデシン、タキソール等）、シスプ
ラチン、カルボプラチン、エトポキシド等が挙げられ
る。中でも５−フルオロウラシル誘導体であるフルツロ
ンあるいはネオフルツロン等が好ましい。免疫療法剤と
しては、例えば微生物又は細菌成分（例えばムラミルジ
ペプチド誘導体、ピシバニール等）、免疫増強活性のあ
る多糖類（例えばレンチナン、シゾフィラン、クレスチ
ン等）、遺伝子工学的手法で得られるサイトカイン（例
えばインターフェロン、インターロイキン（ＩＬ）
等）、コロニー刺激因子（例えば顆粒球コロニー刺激因
子、エリスロポエチン等）等が挙げられ、中でもＩＬ−
１、ＩＬ−２、ＩＬ−１２等が好ましい。

【００４３】更に、動物モデルや臨床で悪液質改善作用
が認められている薬剤、即ち、シクロオキシゲナーゼ阻
害剤（例えばインドメタシン等）〔キャンサー・リサー
チ（Cancer Reseach）、第４９巻、５９３５ないし５９
３９頁、１９８９年〕、プロゲステロン誘導体（例えば
メゲステロールアセテート）〔ジャーナル・オブ・クリ
ニカル・オンコロジー（Journal of Clinical Oncolog
y）、第１２巻、２１３ないし２２５頁、１９９４
年〕、糖質ステロイド（例えばデキサメサゾン等）、メ
トクロプラミド系薬剤、テトラヒドロカンナビノール系
薬剤（文献は何れも上記と同様）、脂肪代謝改善剤（例
えばエイコサペンタエン酸等）〔ブリティシュ・ジャー
ナル・オブ・キャンサー（British Journal of Cance
r）、第６８巻、３１４ないし３１８頁、１９９３
年〕、成長ホルモン、ＩＧＦ−１、あるいは悪液質を誘
導する因子であるＴＮＦ−α、ＬＩＦ、ＩＬ−６、オン
コスタチンＭに対する抗体等も本発明製剤と併用するこ
とができる。

【００４４】

【発明の実施の形態】以下に、本発明を実施例及び実験
例を示して更に詳細に説明するが、本発明の範囲はこれ
らに限定されるものではない。本明細書および図面にお
いて、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵ
ＰＡＣ−ＩＵＢＣｏｍｍｉｓｉｏｎｏｎＢｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があ
り得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとす
る。ＤＮＡ：デオキシリボ核酸ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸Ａ：アデニンＴ：チミンＧ：グアニンＣ：シトシンＧｌｙ：グリシンＡｌａ：アラニンＶａｌ：バリンＬｅｕ：ロイシンＩｌｅ：イソロイシンＳｅｒ：セリンＴｈｒ：スレオニンＣｙｓ：システインＭｅｔ：メチオニンＧｌｕ：グルタミン酸Ａｓｐ：アスパラギン酸Ｌｙｓ：リジンＡｒｇ：アルギニンＨｉｓ：ヒスチジンＰｈｅ：フェニルアラニンＴｙｒ：チロシンＴｒｐ：トリプトファンＰｒｏ：プロリンＡｓｎ：アスパラギンＧｌｎ：グルタミン

【００４５】本願明細書の配列表の配列番号は、以下の
配列を示す。〔配列番号：１〕ヒト由来ＢＴＣ蛋白質のアミノ酸配列
を示す。〔配列番号：２〕マウス由来ＢＴＣ蛋白質のアミノ酸配
列を示す。〔配列番号：３〕配列番号：１および配列番号：２で表
されるアミノ酸配列の第３６番目から第４７番目の部分
アミノ酸配列を示す。〔配列番号：４〕配列番号：１および配列番号：２で表
されるアミノ酸配列の第４９番目から第５５番目の部分
アミノ酸配列を示す。〔配列番号：５〕配列番号：１および配列番号：２で表
されるアミノ酸配列の第５７番目から第６２番目の部分
アミノ酸配列を示す。〔配列番号：６〕配列番号：１および配列番号：２で表
されるアミノ酸配列の第７０番目から第８０番目の部分
アミノ酸配列を示す。〔配列番号：７〕配列番号：１で表されるヒト由来ＢＴ
Ｃ蛋白質のアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするＤ
ＮＡの塩基配列を示す。〔配列番号：８〕配列番号：２で表されるマウス由来Ｂ
ＴＣ蛋白質のアミノ酸配列を有する蛋白質をコードする
ＤＮＡの塩基配列を示す。

【００４６】

【実施例】実施例１ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールモノパルミテート（TetraGlycerol MonoPalmit
ate,ＴＧＭＰ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融解
後、ｒｈＢＴＣ（リコンビナントヒトベータセルリン蛋
白質）凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合後、１４G
留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化した。固化し
たｒｈＢＴＣ含有ＴＧＭＰを取り出すため留置針を５５
℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得られた円柱の
ペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.２mm、長さ
約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＭＰ製剤を得た。
製剤中の薬物（ｒｈＢＴＣ）含量は仕込み量で２.５％
であった。

【００４７】実施例２ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールジパルミテート（TetraGlycerol DiPalmitate,
ＴＧＤＰ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融解後、
ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合後、１
４G留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化した。固
化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＤＰを取り出すため留置針を
５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得られた円
柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.２mm、
長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＤＰ製剤を得
た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であった。

【００４８】実施例３ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールトリパルミテート（TetraGlycerol TriPalmita
te,ＴＧＴＰ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融解
後、ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合
後、１４G留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＴＰを取り出すため留
置針を５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得ら
れた円柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.
２mm、長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＴＰ製
剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であ
った。

【００４９】実施例４ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールヘキサパルミテート（TetraGlycerol HexaPalm
itate,ＴＧＨＰ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融
解後、ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合
後、１４G留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＰを取り出すため留
置針を５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得ら
れた円柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.
２mm、長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＰ製
剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であ
った。

【００５０】実施例５ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールモノステアレート（TetraGlycerol MonoSteara
te,ＴＧＭＳ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融解
後、ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合
後、１４G留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＭＳを取り出すため留
置針を５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得ら
れた円柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.
２mm、長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＭＳ製
剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であ
った。

【００５１】実施例６ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールジステアレート（TetraGlycerol DiStearate,
ＴＧＤＳ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融解後、
ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合後、１
４G留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化した。固
化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＤＳを取り出すため留置針を
５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得られた円
柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.２mm、
長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＤＳ製剤を得
た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であった。

【００５２】実施例７ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールトリステアレート（TetraGlycerol TriStearat
e,ＴＧＴＳ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融解
後、ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合
後、１４G留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＴＳを取り出すため留
置針を５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得ら
れた円柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.
２mm、長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＴＳ製
剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であ
った。

【００５３】実施例８ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールヘキサステアレート（TetraGlycerol HexaStea
rate,ＴＧＨＳ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融
解後、ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合
後、１４G留置針に約３０mg吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＳを取り出すため留
置針を５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得ら
れた円柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.
２mm、長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＳ製
剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であ
った。

【００５４】実施例９ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるヘキサグリ
セロールペンタステアレート（HexaGlycerol PentaStea
rate，ＨＧＰＳ）７６０mgを６０ないし７５℃で加熱融
解後、ｒｈＢＴＣ凍結乾燥粉末２０mgを添加し攪拌混合
後、１４G留置針に約30mg吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳを取り出すため留
置針を５５℃で約１分間加熱し押し出し成形した。得ら
れた円柱のペレットを長さ２０mmに切断し、長径約１.
２mm、長さ約２０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳ製
剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％であ
った。

【００５５】実施例１０ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールヘキサパルミテート（TetraGlycerol HexaPalm
itate，ＴＧＨＰ）１５６０mgを７０℃で加熱して融解
後、ｒhＢＴＣ凍結乾燥粉末４０mgを添加し攪拌混合
後、内径１.５mmの移植針に吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＰを取り出すため移
植針を６０℃で１ないし３分間加熱し押し出し成形し
た。得られた円柱ペレットを長さ１０mmに切断し、長径
１.５mm、長さ１０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＰ
製剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％で
あった。

【００５６】実施例１１ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるテトラグリ
セロールヘキサパルミテート（TetraGlycerol HexaPalm
itate，ＴＧＨＰ）１５６０mgを７０℃で加熱して融解
後、ｒhＢＴＣ凍結乾燥粉末４０mgを添加し攪拌混合
後、内径２.０mmの移植針に吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＰを取り出すため移
植針を６０℃で１ないし３分間加熱し押し出し成形し
た。得られた円柱ペレットを長さ１０mmに切断し、長径
２.０mm、長さ１０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＴＧＨＰ
製剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％で
あった。

【００５７】実施例１２ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるヘキサグリ
セロールペンタステアレート（HexaGlycerol PentaStea
rate，ＨＧＰＳ）１５６０mgを７０℃で加熱して融解
後、ｒhＢＴＣ凍結乾燥粉末４０mgを添加し攪拌混合
後、内径１.５mmの移植針に吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳを取り出すため移
植針を６０℃で１ないし３分間加熱し押し出し成形し
た。得られた円柱ペレットを長さ１０mmに切断し、長径
１.５mm、長さ１０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳ
製剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％で
あった。

【００５８】実施例１３ポリグリセリン脂肪酸エステルの１つであるヘキサグリ
セロールペンタステアレート（HexaGlycerol PentaStea
rate，ＨＧＰＳ）１５６０mgを７０℃で加熱して融解
後、ｒhＢＴＣ凍結乾燥粉末４０mgを添加し攪拌混合
後、内径２.０mmの移植針に吸引し室温にて冷却固化し
た。固化したｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳを取り出すため移
植針を６０℃で１ないし３分間加熱し押し出し成形し
た。得られた円柱ペレットを長さ１０mmに切断し、長径
２.０mm、長さ１０mmの徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳ
製剤を得た。製剤中の薬物含量は仕込み量で２.５％で
あった

【００５９】実施例１４Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の乳酸−グリコ
ール酸重合体（ＰＬＧＡ）４gを３.３mlジクロルメタン
に溶解し、氷冷下で５０mg/ml濃度のｒｈＢＴＣ水溶液
を０.８ml添加し、ポリトロンで２００００rpm、２０秒
間乳化した。乳化液を０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml中
に攪拌しながら注入しプロペラ攪拌機で攪拌しながら３
時間水中乾燥した。１２５μmメッシュで分級後遠心洗
浄後凍結乾燥し、薬物含量１％の徐放性ｒｈＢＴＣ含有
マイクロカプセルを得た。

【００６０】実施例１５Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の乳酸−グリコ
ール酸重合体４gを３.３mlジクロルメタンに溶解し、氷
冷下で１５０mg/ml濃度のｒｈＢＴＣ水溶液を０.８ml添
加し、ポリトロンで２００００rpm、２０秒間乳化し
た。乳化液を０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml中に攪拌し
ながら注入しプロペラ攪拌機で攪拌しながら３時間水中
乾燥した。１２５μmメッシュで分級後遠心洗浄後凍結
乾燥し、薬物含量３％の徐放性ｒｈＢＴＣ含有マイクロ
カプセルを得た。

【００６１】実施例１６Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の乳酸−グリコ
ール酸重合体４gを３.３mlジクロルメタンに溶解し、氷
冷下で２５０mg/ml濃度のｒｈＢＴＣ水溶液を０.８ml添
加し、ポリトロンで２００００rpm、２０秒間乳化し
た。乳化液を０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml中に攪拌し
ながら注入しプロペラ攪拌機で攪拌しながら３時間水中
乾燥した。１２５μmメッシュで分級後遠心洗浄後凍結
乾燥し、薬物含量５％の徐放性ｒｈＢＴＣ含有マイクロ
カプセルを得た。

【００６２】実施例１７Ｌ／Ｇ比１００／０、分子量１８０００の乳酸−グリコ
ール酸重合体（ポリ乳酸）１０gを８.３mlジクロルメタ
ンに溶解し、氷冷下で２７３mg/ml濃度のｒｈＢＴＣ水
溶液を２.０８ml添加し、ポリトロンで２４０００rpm、
３０秒間乳化した。乳化液を０.１％ＰＶＡ水溶液１６
００ml中に攪拌しながら注入しプロペラ攪拌機で攪拌し
ながら２時間水中乾燥した。１２５μmメッシュで分級
後遠心洗浄後凍結乾燥し、薬物含量５.２％の徐放性ｒ
ｈＢＴＣ含有マイクロカプセルを得た。

【００６３】実施例１８Ｌ／Ｇ比１００／０、分子量１８０００の乳酸−グリコ
ール酸重合体（ポリ乳酸；ＰＬＡ）８gを６.７mlジクロ
ルメタンに溶解し、氷冷下で２６５mg/ml濃度のｒｈＢ
ＴＣ水溶液を１.６７ml添加し、ポリトロンで２４００
０rpm、３０秒間乳化した。乳化液を一晩真空乾燥しｒ
ｈＢＴＣ含有ＰＬＡ粉末を得た。これを内径２.０mmの
テフロンチューブに４６mg充填し、６０℃で１５分間加
熱した。加熱後棒で圧縮し冷却し成形した。長径２.０m
m、長さ１cmの棒状製剤を得た。

【００６４】実施例１９分子量１８０００のポリ乳酸（ＰＬＡ）８．０ｇをジク
ロルメタン６．７ｍｌに溶解し、２６４．７２ｍｇ／ｍ
ｌ濃度のｒｈＢＴＣ水溶液１．６７ｍｌを添加し、氷冷
下ポリトロンで２４０００ｒｐｍ、３０秒間乳化した。
乳化液を一昼夜真空乾燥し、ｒｈＢＴＣ／ＰＬＡ粉末
８．０９ｇを得た。この粉末約４６ｍｇを内径２．０ｍ
ｍのテフロンチューブに充填し、６０℃で１５分間加熱
した。加熱後長径２．０ｍｍの棒で圧縮し、冷却後成形
した。ｒｈＢＴＣ５．１６％含有ロッド状製剤を得た。

【００６５】実施例２０分子量１２０００のポリ乳酸（ＰＬＡ）７．０ｇをジク
ロルメタン５．８ｍｌに溶解し、３６８ｍｇ／ｍｌ濃度
のｒｈＢＴＣ水溶液１．４６ｍｌを添加し、ポリトロ
ンで２５０００ｒｍｐ、３０秒間乳化した。乳化液を
０．１％ＰＶＡ水溶液１１７０ｍｌにホモミキサー（７
０００ｒｐｍ）で攪拌しながら注入し、プロペラ攪拌機
で攪拌しながら２時間水中乾燥した。１２５μｍメッシ
ュで分級後、遠心洗浄操作後凍結乾燥し、薬物含量５．
７５％のマイクロカプセルを得た。これを内径２．０ｍ
ｍのテフロンチューブに充填し、６０℃で１５分間加熱
した。加熱後長径２．０ｍｍの棒で圧縮し、冷却後成形
した。ｒｈＢＴＣ５．７５％含有ロッド状製剤を得た。

【００６６】実施例２１分子量１２０００のポリ乳酸（ＰＬＡ）７．０ｇおよび
酸化亜鉛３３．６ｍｇをジクロルメタン５．８ｍｌに溶
解し、３６８ｍｇ／ｍｌ濃度のｒｈＢＴＣ水溶液１．４
１ｍｌを添加し、ポリトロンで２５０００ｒｍｐ、３０
秒間乳化した。乳化液を０．１％ＰＶＡ水溶液１１７０
ｍｌにホモミキサー（７０００ｒｐｍ）で攪拌しながら
注入し、プロペラ攪拌機で攪拌しながら２時間水中乾燥
した。１２５μｍメッシュで分級後、遠心洗浄操作後凍
結乾燥し、薬物含量６．５５％のマイクロカプセルを得
た。これを内径２．０ｍｍのテフロンチューブに充填
し、６０℃で１５分間加熱した。加熱後長径２．０ｍｍ
の棒で圧縮し、冷却後成形した。ｒｈＢＴＣ６．５５％
含有ロッド状製剤を得た。

【００６７】実施例２２Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の乳酸−グリコ
ール酸重合体（ＰＬＧＡ）２．４ｇをジクロルメタン
２．０ｍｌに溶解し、４３９．０３ｍｇ／ｍｌ濃度のｒ
ｈＢＴＣ水溶液１．５８ｍｌを添加し、ポリトロンで２
５０００ｒｍｐ、３０秒間乳化した。乳化液を０．１％
ＰＶＡ水溶液４００ｍｌにホモミキサー（７０００ｒｐ
ｍ）で攪拌しながら注入し、プロペラ攪拌機で攪拌しな
がら２時間水中乾燥した。１２５μｍメッシュで分級
後、遠心洗浄操作後凍結乾燥し、マイクロカプセルを得
た。これを内径２．０ｍｍのテフロンチューブに充填
し、６０℃で１５分間加熱した。加熱後長径２．０ｍｍ
の棒で圧縮し、冷却後成形した。ｒｈＢＴＣ１０．４６
％含有ロッド状製剤を得た。

【００６８】実施例２３Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の乳酸−グリコ
ール酸重合体（ＰＬＧＡ）３．５ｇをジクロルメタンに
溶解し、ｒｈＢＴＣバルク粉末３８４ｍｇを添加し、ポ
リトロン（２００００ｒｐｍ、３０秒）で分散させ、ｓ
／ｏ分散系を得た。これを一昼夜真空乾燥し、内径２．
０ｍｍのテフロンチューブに充填し、６０℃で１５分間
加熱した。加熱後長径２．０ｍｍの棒で圧縮し、冷却後
成形した。ｒｈＢＴＣ８．１４％含有ロッド状製剤を得
た。

【００６９】実施例２４Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の乳酸−グリコ
ール酸重合体（ＰＬＧＡ）２．４ｇおよび酸化亜鉛２
４．０３ｍｇをジクロルメタン２．０ｍｌに溶解した。
得られる溶液に、ｒｈＢＴＣ２８２．８７ｍｇを蒸留
水５００ｍｇに溶解した溶液を添加し、ポリトロンで２
５０００ｒｍｐ、３０秒間乳化した。乳化液を０．１％
ＰＶＡ水溶液４００ｍｌにホモミキサー（７０００ｒｐ
ｍ）で攪拌しながら注入し、プロペラ攪拌機で攪拌しな
がら２時間水中乾燥した。１２５μｍメッシュで分級
後、遠心洗浄操作後凍結乾燥し、マイクロカプセルを得
た。これを内径２．０ｍｍのテフロンチューブに充填
し、６０℃で１５分間加熱した。加熱後長径２．０ｍｍ
の棒で圧縮し、冷却後成形した。ｒｈＢＴＣ９．１９％
含有ロッド状製剤を得た。

【００７０】実施例２５Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の乳酸−グリコ
ール酸重合体（ＰＬＧＡ）２．４ｇおよび酸化亜鉛２
３．９５ｍｇをジクロルメタン２．０ｍｌに溶解し、ｒ
ｈＢＴＣ２６９．７２ｍｇを添加し、ポリトロンで２
５０００ｒｍｐ、３０秒間乳化した。乳化液を０．１％
ＰＶＡ水溶液１１７０ｍｌにホモミキサー（７０００ｒ
ｐｍ）で攪拌しながら注入し、プロペラ攪拌機で攪拌し
ながら２時間水中乾燥した。１２５μｍメッシュで分級
後、遠心洗浄操作後凍結乾燥し、薬物含量６．５５％の
マイクロカプセルを得た。これを内径２．０ｍｍのテフ
ロンチューブに充填し、６０℃で１５分間加熱した。加
熱後長径２．０ｍｍの棒で圧縮し、冷却後成形した。ｒ
ｈＢＴＣ８．７２％含有ロッド状製剤を得た。

【００７１】実施例２６ｒｈＢＴＣバルクを４．３９ｍＭ酢酸アンモニウム水溶
液で２ｍｇ／ｍｌとなるように溶解し、急速凍結後、真
空乾燥した。分子量１２０００のポリ乳酸（ＰＬＡ）
３．５ｇと酸化亜鉛３５．５ｍｇをジクロルメタン３．
５ｍｌに溶解し、これに急速凍結乾燥したｒｈＢＴＣ３
９９ｍｇを添加し、ポリトロンで分散した。得られるｓ
／ｏ分散系を、一昼夜真空乾燥し、内径２．０ｍｍのテ
フロンチューブに充填し、６０℃で１５分間加熱した。
加熱後長径２．０ｍｍの棒で圧縮し、冷却後成形した。
ｒｈＢＴＣ１０．１１％含有ロッド状製剤を得た。

【００７２】実施例２７ｒｈＢＴＣバルクを４．３９ｍＭ酢酸アンモニウム水溶
液で２ｍｇ／ｍｌとなるように溶解し、急速凍結後、真
空乾燥した。Ｌ／Ｇ比７５／２５、分子量１２７００の
乳酸−グリコール酸重合体（ＰＬＧＡ）４．５ｇと酸化
亜鉛４５．３ｍｇをジクロルメタン４．５ｍｌに溶解
し、これに急速凍結乾燥したｒｈＢＴＣ５１５ｍｇを添
加し、ポリトロンで分散した。得られるｓ／ｏ分散系
を、一昼夜真空乾燥し、内径２．０ｍｍのテフロンチュ
ーブに充填し、６０℃で１５分間加熱した。加熱後長径
２．０ｍｍの棒で圧縮し、冷却後成形した。ｒｈＢＴＣ
１０．０２％含有ロッド状製剤を得た。

【００７３】実験例１実施例１４、１５及び１６で調製した徐放性ｒｈＢＴＣ
含有ＰＬＧＡマイクロカプセルをラット皮下にｒｈＢＴ
Ｃ量として３.２mg／kg、５.９mg／kg及び１０.０mg／k
gとなるようにそれぞれ投与し、投与部位の残存ｒｈＢ
ＴＣ及び血中ｒｈＢＴＣ濃度の経時変化を１ヶ月にわた
り測定した。各製剤において、図１で示されるようにｒ
ｈＢＴＣは１ヶ月にわたり残存し、また図２で示される
ように血中ｒｈＢＴＣ濃度は１ヶ月にわたり検出され
た。これより本発明の徐放性製剤が優れた徐放性を有す
ることは明らかである。

【００７４】実験例２実施例１３で調製した徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳ製
剤をラット皮下にｒｈＢＴＣ量として４.１mg／kgとな
るように投与し、残存ｒｈＢＴＣの経時変化を１ヶ月に
わたり測定した。図３で示されるように、ｒｈＢＴＣは
１ヶ月にわたり残存した。これより本発明の徐放性製剤
が優れた徐放性を有することは明らかである。

【００７５】実験例３実施例１３で調製し、実験例２で徐放性を確認した徐放
性ｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳ製剤をＳＴＺ糖尿病モデルラ
ットに皮下又は膵臓局所にｒｈＢＴＣ量として４５mg/k
g投与し、８週後に血中グルコース濃度及び血中インス
リン濃度を測定した。図４で示されるように、無処置糖
尿病ラット群と比較して皮下投与群及び膵臓局所投与群
では血糖降下作用（血中グルコース濃度の低下）が見ら
れ、耐糖能が改善した。また、図５で示されるように、
膵臓局所投与群ではインスリンの分泌が確認された。こ
れより、本発明の製剤が膵臓機能を改善させ、糖尿病の
治療又は予防に有用なことは明らかである。

【００７６】

【発明の効果】ＢＴＣ蛋白質又はそのムテイン又は塩を
含有する本発明の製剤は、膵臓機能を改善させ、糖尿病
等の治療又は予防に有用である。

【００７７】

【配列表】［ＳＥＱＵＥＮＣＥＬＩＳＴＩＮＧ］＜１１０＞ＴａｋｅｄａＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔ
ｄ．＜１２０＞ＢｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎＰｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎ
ｇＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎ＜１３０＞Ａ９９２３８＜１５０＞ＪＰ１０−３１０３４３＜１５１＞１９９８−１０−３０＜１６０＞８＜２１０＞１＜２１１＞８０＜２１２＞ＰＲＴ＜２１３＞Ｈｕｍａｎ＜４００＞１ＡｓｐＧｌｙＡｓｎＳｅｒＴｈｒＡｒｇＳｅｒＰｒｏＧｌｕ
ＴｈｒＡｓｎＧｌｙＬｅｕＬｅｕＣｙｓＧｌｙ１５
１０１５ＡｓｐＰｒｏＧｌｕＧｌｕＡｓｎＣｙｓＡｌａＡｌａＴｈｒ
ＴｈｒＴｈｒＧｌｎＳｅｒＬｙｓＡｒｇＬｙｓ２０２５
３０ＧｌｙＨｉｓＰｈｅＳｅｒＡｒｇＣｙｓＰｒｏＬｙｓＧｌｎ
ＴｙｒＬｙｓＨｉｓＴｙｒＣｙｓＩｌｅＬｙｓ３５４０
４５ＧｌｙＡｒｇＣｙｓＡｒｇＰｈｅＶａｌＶａｌＡｌａＧｌｕ
ＧｌｎＴｈｒＰｒｏＳｅｒＣｙｓＶａｌＣｙｓ５０５５
６０ＡｓｐＧｌｕＧｌｙＴｙｒＩｌｅＧｌｙＡｌａＡｒｇＣｙｓ
ＧｌｕＡｒｇＶａｌＡｓｐＬｅｕＰｈｅＴｙｒ６５７０
７５８０＜２１０＞２＜２１１＞８０＜２１２＞ＰＲＴ＜２１３＞Ｍｏｕｓｅ＜４００＞２ＡｓｐＧｌｙＡｓｎＴｈｒＴｈｒＡｒｇＴｈｒＰｒｏＧｌｕ
ＴｈｒＡｓｎＧｌｙＳｅｒＬｅｕＣｙｓＧｌｙ１５
１０１５ＡｌａＰｒｏＧｌｙＧｌｕＡｓｎＣｙｓＴｈｒＧｌｙＴｈｒ
ＴｈｒＰｒｏＡｒｇＧｌｎＬｙｓＶａｌＬｙｓ２０２５
３０ＴｈｒＨｉｓＰｈｅＳｅｒＡｒｇＣｙｓＰｒｏＬｙｓＧｌｎ
ＴｙｒＬｙｓＨｉｓＴｙｒＣｙｓＩｌｅＨｉｓ３５４０
４５ＧｌｙＡｒｇＣｙｓＡｒｇＰｈｅＶａｌＶａｌＡｓｐＧｌｕ
ＧｌｎＴｈｒＰｒｏＳｅｒＣｙｓＩｌｅＣｙｓ５０５５
６０ＧｌｕＬｙｓＧｌｙＴｙｒＰｈｅＧｌｙＡｌａＡｒｇＣｙｓ
ＧｌｕＡｒｇＶａｌＡｓｐＬｅｕＰｈｅＴｙｒ６５７０
７５８０＜２１０＞３＜２１１＞１４＜２１２＞ＰＲＴ＜２１３＞Ｈｕｍａｎ＜４００＞３ＨｉｓＰｈｅＳｅｒＡｒｇＣｙｓＰｒｏＬｙｓＧｌｎＴｙｒ
ＬｙｓＨｉｓＴｙｒＣｙｓＩｌｅ１５
１０＜２１０＞４＜２１１＞７＜２１２＞ＰＲＴ＜２１３＞Ｈｕｍａｎ＜４００＞４ＧｌｙＡｒｇＣｙｓＡｒｇＰｈｅＶａｌＶａｌ１５＜２１０＞５＜２１１＞６＜２１２＞ＰＲＴ＜２１３＞Ｈｕｍａｎ＜４００＞５ＧｌｕＧｌｎＴｈｒＰｒｏＳｅｒＣｙｓ１５＜２１０＞６＜２１１＞１１＜２１２＞ＰＲＴ＜２１３＞Ｈｕｍａｎ＜４００＞６ＧｌｙＡｌａＡｒｇＣｙｓＧｌｕＡｒｇＶａｌＡｓｐＬｅｕ
ＰｈｅＴｙｒ１５
１０＜２１０＞７＜２１１＞２４０＜２１２＞ＤＮＡ＜２１３＞Ｈｕｍａｎ＜４００＞７ＧＡＴＧＧＧＡＡＴＴＣＣＡＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＡＡＡＣＴＡＡＴ
ＧＧＣＣＴＣＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＡＡ６０ＡＡＣＴＧＴＧＣＡＧＣＴＡＣＣＡＣＣＡＣＡＣＡＡＴＣＡＡＡＧＣＧＧ
ＡＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴＣＴＣＴＡＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧ１２０ＣＡＡＴＡＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＣＡＡＡＧＧＧＡＧＡＴＧＣ
ＣＧＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＧＣＣＧＡＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣ１８０ＴＣＣＴＧＴＧＴＣＴＧＴＧＡＴＧＡＡＧＧＣＴＡＣＡＴＴＧＧＡＧＣＡ
ＡＧＧＴＧＴＧＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＣＴＴＧＴＴＴＴＡＣ２４０＜２１０＞８＜２１１＞２４０＜２１２＞ＤＮＡ＜２１３＞Ｍｏｕｓｅ＜４００＞８ＧＡＴＧＧＧＡＡＣＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＣＡＣＣＡＧＡＡＡＣＣＡＡＴ
ＧＧＣＴＣＴＣＴＴＴＧＴＧＧＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＡ６０ＡＡＣＴＧＣＡＣＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＣＣＴＡＧＡＣＡＧＡＡＡＧＴＧ
ＡＡＡＡＣＣＣＡＣＴＴＣＴＣＴＣＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧ１２０ＣＡＧＴＡＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＣＣＡＴＧＧＧＡＧＡＴＧＣ
ＣＧＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＡＧＣＡＡＡＣＴＣＣＣ１８０ＴＣＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＴＧＧＧＧＣＴ
ＣＧＧＴＧＴＧＡＧＣＧＡＧＴＧＧＡＣＣＴＧＴＴＴＴＡＣ２４０

【００７８】

【図面の簡単な説明】

【図１】ラットにおける徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＰＬＧＡ
マイクロカプセル皮下投与後の残存ｒｈＢＴＣ（％)の
経時変化を示すグラフである。●は投与量３.２mg/kg、
○は５.９mg/kg、▲は１０.０mg/kgを示す。

【図２】ラットにおける徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＰＬＧＡ
マイクロカプセル皮下投与後の血中ｒｈＢＴＣ濃度(pg
／ml)の経時変化を示すグラフである。●は投与量３.２
mg/kg、○は５.９mg/kg、▲は１０.０mg/kgを示す。

【図３】ラットにおける徐放性ｒｈＢＴＣ含有ＨＧＰＳ
製剤を皮下投与後の残存ｒｈＢＴＣ(％)の経時変化を示
すグラフである。投与量は４.１mg/kgを示す。

【図４】ＳＴＺ糖尿病モデルラットにおける徐放性ｒｈ
ＢＴＣ含有ＨＧＰＳ製剤の投与８週間後の血中グルコー
ス濃度(mg／dl)を示すグラフである。●は無処置糖尿病
ラット群、○は正常ラット群、▼は膵臓局所投与群（投
与量４５mg/kg）、▽は皮下投与群（投与量４５mg/kg）
を示す。

【図５】ＳＴＺ糖尿病モデルラットにおける徐放性ｒｈ
ＢＴＣ含有ＨＧＰＳ製剤投与後、８週後の血中インスリ
ン濃度(μU／ml)の経時変化を示すグラフである。●は
無処置糖尿病ラット群、○は正常ラット群、▼は膵臓局
所投与群（投与量４５mg/kg）、▽は皮下投与群（投与
量４５mg/kg）を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 1/18 Ａ６１Ｐ 1/18 3/10 3/10 5/48 5/48 Ｃ０７Ｋ 7/06 Ｃ０７Ｋ 7/06 7/08 7/08 14/47 14/47 // Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ベータセルリン蛋白質もしくはそのムテイ
ン又はその塩を含有する徐放性製剤。
【請求項２】ベータセルリン蛋白質が、配列番号：３、
配列番号：４、配列番号：５及び配列番号：６からなる
群から選ばれる少なくとも１つの配列番号で表わされる
アミノ酸配列を有する蛋白質である請求項１記載の徐放
性製剤。
【請求項３】ベータセルリン蛋白質が、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質又は配列番号：
２で表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質である請求
項１記載の徐放性製剤。
【請求項４】ベータセルリン蛋白質が、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質である請求項１
記載の徐放性製剤。
【請求項５】ベータセルリン蛋白質のムテインが、配
列番号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸
配列の１ないし４０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ
酸配列、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わさ
れるアミノ酸配列の１ないし４０個程度のアミノ酸が他
のアミノ酸に置換したアミノ酸配列、又は配列番号：
１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列に１
ないし４０個程度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列を
有する蛋白質である請求項１記載の徐放性製剤。
【請求項６】ベータセルリン蛋白質のムテインが、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個
又は３０個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列を有する
蛋白質である請求項１記載の徐放性製剤。
【請求項７】ベータセルリン蛋白質もしくはそのムテイ
ン又はその塩及びキャリアーを含有する請求項１記載の
徐放性製剤。
【請求項８】キャリアーがポリマーである請求項７記載
の徐放性製剤。
【請求項９】ポリマーが生体内分解性ポリマーである請
求項８記載の徐放性製剤。
【請求項１０】生体内分解性ポリマーが脂肪族ポリエス
テルである請求項９記載の徐放性製剤。
【請求項１１】脂肪族ポリエステルが乳酸−グリコール
酸重合体である請求項１０記載の徐放性製剤。
【請求項１２】乳酸−グリコール酸重合体の乳酸／グリ
コール酸組成比が約１００／０ないし約４０／６０であ
る請求項１１記載の徐放性製剤。
【請求項１３】乳酸−グリコール酸重合体の重量平均分
子量が約３,０００ないし約８０,０００である請求項１
１記載の徐放性製剤。
【請求項１４】ポリマーが生体内非分解性ポリマーであ
る請求項８記載の徐放性製剤。
【請求項１５】生体内非分解性ポリマーがポリグリセリ
ン脂肪酸エステルである請求項１４記載の徐放性製剤。
【請求項１６】膵臓機能改善剤である請求項１記載の徐
放性製剤。
【請求項１７】糖尿病の治療又は予防剤である請求項１
記載の徐放性製剤。
【請求項１８】非経口投与剤である請求項１記載の徐放
性製剤。
【請求項１９】膵臓への局所投与剤である請求項１記載
の徐放性製剤。
【請求項２０】皮下投与剤である請求項１記載の徐放性
製剤。
【請求項２１】筋肉内投与剤である請求項１記載の徐放
性製剤。
【請求項２２】腹腔内投与剤である請求項１記載の徐放
性製剤。
【請求項２３】ベータセルリン蛋白質もしくはそのムテ
イン又はその塩を含有する膵臓への局所投与剤。
【請求項２４】徐放性製剤を製造するためのベータセル
リン蛋白質又はそのムテイン又は塩の使用。
【請求項２５】膵臓への局所投与剤を製造するためのベ
ータセルリン蛋白質もしくはそのムテイン又はその塩の
使用。