JP2000169392A

JP2000169392A - 新規なアジュバント及びそれを用いたワクチン

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Publication number: JP2000169392A
Application number: JP11196150A
Authority: JP
Inventors: Toshiaki Ogiya; 年昭扇谷; Shigeji Katayama; 茂二片山; Kenji Oda; 健司小田; Toshio Nagai; 淑郎長井; Yukari Sato; 由香利佐藤
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation; Fujifilm Finechemicals Co Ltd
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation; Fujifilm Finechemicals Co Ltd
Priority date: 1998-09-29
Filing date: 1999-07-09
Publication date: 2000-06-20
Anticipated expiration: 2019-07-09
Also published as: JP3041799B1

Abstract

(57)【要約】【課題】接種動物に対して安全性が高く、且つアジュ
バント活性が高いアジュバントを提供し、更にこのアジ
ュバントを利用した高性能のワクチンを提供すること。【解決手段】構成単糖がグルコサミンであるオリゴ糖
と脂肪酸が少なくともアミド結合したオリゴ糖脂肪酸ア
ミド、又は構成単糖がグルコース、ガラクトース及びマ
ンノースのうち少なくとも１種であるオリゴ糖と脂肪酸
がエステル結合したオリゴ糖脂肪酸エステルを含有する
ことを特徴とするアジュバント、及びそれを含むワクチ
ン組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、家畜及び愛玩動物
用のワクチンに好適に用いることができるアジュバン
ト、及びそれを用いたワクチン組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒト用あるいは動物用の不活化あるいは
コンポーネントワクチン等にはその免疫効果を高める目
的で、アジュバントと呼ばれる組成物を添加することが
あり、特に動物用ワクチンでは殆どの製品に何らかのア
ジュバントが添加されている。アジュバントの代表例と
してはリン酸アルミニウムゲル、水酸化アルミニウムゲ
ル、ミョウバン、水酸化カルシウムゲル、キラヤサポニ
ン及びオイルアジュバントなどがあり、既に広く実用化
されている。しかし、これら既存のアジュバントには下
記の様な問題があった。

【０００３】アルミニウムゲル、カルシウムゲルでは
接種部位の局所反応は弱く、安全性は高いものの、強い
免疫効果が得られない。またアルミニウムはアルツハイ
マー病との関連も疑われている。キラヤサポニンはアジュバント効果は比較的優れてい
るが、溶血活性や組織への毒性が極めて高く、使用範囲
が限定される。オイルアジュバントはアジュバント効果と抗体の持続
性では優れているが、接種反応が強く、ワクチンの接種
部位に硬結や、場合によっては膿瘍、壊死などを生ずる
場合がある。これらの理由により、従来のアジュバントでは、安全性
と有効性の両立が困難な状態にあった。

【０００４】畜産分野のワクチンアジュバントとして
は、特に鶏においてゲルアジュバント以外にミネラルオ
イルを主体とするW/O型オイルアジュバントが開発さ
れ、実用化されている。しかしこの型のアジュバント
は、接種局所反応が極めて強く、哺乳動物には母豚免疫
など特殊な用途以外には適用し難い。一方、アジュバン
ト物質の素材としては、単糖あるいは２糖類の誘導体が
知られている。例えば、単糖の誘導体としては、特開昭
５２−８３５０６号、特開昭５２−１５６８１２号、特
開昭５６−１６４１９６号、特開昭５７−２６６９８
号、特開昭５６−１６９６９７号、特開昭５５−１９２
３６号、特開昭５９−２０２９７号、特開昭６１−２７
５２９９号の各公報等に記載のペプチド誘導体又は脂肪
酸エステル誘導体が挙げられる。２糖類の誘導体として
は、特開昭５９−８９６３２号、特開昭５５−１４５６
９６号、特開昭５９−８９６３２号、特開平１−１４６
８９１号の各公報に記載されたものが挙げられる。これ
ら素材は、アジュバント活性が低く、その活性を挙げる
ために、置換基を複雑化する必要があった。そのため
に、素材の合成上高価となる問題があった。

【０００５】また、最近では合成高分子を素材としてポ
リオキシエチレン・ポリオキシプロピレンブロックポリ
マーを用いたＯ／Ｗ型ワクチンアジュバント（特開平８
−３２６３９号公報）や、疎水性合成リポ多糖体を構成
成分とするＯ／Ｗ型ワクチンアジュバント（特開平５−
２５５１１７号公報）が開示されている。しかし、これ
らはいずれも合成高分子であって、また乳化助剤として
ポリオキシエチレン系の界面活性剤を使用していること
から、接種動物に発熱や疼痛、接種部位の壊死等、強い
接種反応を生じることが予想される。

【０００６】一方、本発明者らは、無水マンニトールと
オレイン酸エステル及び流動パラフィンからなる組成物
が、高いアジュバント活性を持つことを見いだしている
（特開昭６３−３５５２５号公報）。しかしながら、こ
のアジュバントも動物種によって接種反応を起こす場合
があり、安全面での問題を抱えていた。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、接種動物に対して安全性が高く、且つアジュバント
活性が高いアジュバントを提供し、更に、このアジュバ
ントを利用した高性能のワクチンを安価に提供すること
にある。尚、アジュバント活性とは、免疫機構を刺激
し、抗原に対する免疫反応を増強する機能をいう。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は以上のような従
来のアジュバントの問題点を解決すべく鋭意研究した結
果、特定のオリゴ糖と脂肪酸のエステルあるいはアミド
化物をアジュバントとして使用することにより、高いア
ジュバント活性と、接種動物に対して安全性が高いアジ
ュバントが得られる事を見出し、下記構成の本発明を完
成するに至った。（１）構成単糖がグルコサミンであるオリゴ糖と脂肪
酸が少なくともアミド結合したオリゴ糖脂肪酸アミド、
又は構成単糖がグルコース、ガラクトース及びマンノー
スのうち少なくとも１種であるオリゴ糖と脂肪酸がエス
テル結合したオリゴ糖脂肪酸エステルを含有することを
特徴とするアジュバント。

【０００９】（２）前記オリゴ糖脂肪酸アミド又はオ
リゴ糖脂肪酸エステルを構成するオリゴ糖の糖鎖が３〜
９９個の単糖で構成されることを特徴とする前記（１）
に記載のアジュバント。（３）前記オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸
エステルを構成する脂肪酸が、オリゴ糖脂肪酸アミドで
は炭素数３〜２４個の直鎖脂肪酸、炭素数４〜２４個の
分岐脂肪酸あるいは炭素数６〜２２個の不飽和脂肪酸で
あり、オリゴ糖脂肪酸エステルでは炭素数２〜２４個の
直鎖脂肪酸、炭素数４〜２４個の分岐脂肪酸あるいは炭
素数６〜２２個の不飽和脂肪酸であることを特徴とする
前記（１）又は（２）に記載のアジュバント。

【００１０】（４）前記オリゴ糖脂肪酸アミド又はオ
リゴ糖脂肪酸エステルの構成単糖当たりの脂肪酸の平均
導入数が０．３〜３．５であることを特徴とする前記
（１）〜（３）のいずれかに記載のアジュバント。（５）前記（１）〜（４）のいずれかに記載のアジュ
バントと所望の抗原を含むことを特徴とするワクチン組
成物。

【００１１】本発明のアジュバントは、接種動物に対し
て安全性が高く且つアジュバント活性も高いもので、従
来のアジュバントの問題点を克服することができた。

【００１２】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、上記オリゴ糖脂肪酸アミドまたは上記
オリゴ糖脂肪酸エステルのオリゴ糖の糖鎖の構成単糖の
数は、３〜９９個の範囲を表わす。好ましくは３〜５０
個であり、更に好ましくは５〜２０個である。これらの
好ましい範囲にすることにより、アジュバント活性が一
層高くなる。本発明においては、糖鎖の構成単糖数が異
なるオリゴ糖の混合物でも良いが、上記構成単糖数のオ
リゴ糖が主に含有することが好ましい。上記構成単糖数
のオリゴ糖が主に含有するとは、具体的には上記構成単
糖数のオリゴ糖が、好ましくはオリゴ糖の全重量に対し
て５０重量％以上含有すること、より好ましくは１００
重量％含有することを言う。後述の実施例で使用したグ
ルコースのオリゴ糖である市販のマルトデキストリン
は、イオンクロマトグラフによる測定の結果、糖鎖の単
糖数が５０個以下のオリゴ糖の混合物であり、糖鎖の単
糖数が３〜５０個のものが全オリゴ糖の約９０％であっ
た。

【００１３】本発明において、上記オリゴ糖脂肪酸アミ
ドの構成単糖としてはグルコサミンであり、上記オリゴ
糖脂肪酸エステルの糖鎖の構成単糖としては、グルコー
ス、ガラクトース及びマンノースが挙げられ、これらの
単独又はこれら２種以上の単糖を基本とするオリゴ糖が
好ましい。上記単糖を基本的に含有するとは、具体的に
は上記単糖が、オリゴ糖を構成する単糖全てに対して５
０モル％以上、好ましくは１００モル％含有すること
を言う。

【００１４】具体的にはグルコースを基本糖鎖とするオ
リゴ糖としては、マルトトリオース、マルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルト
ヘプタオース、アミロース、マルトデキストリン、デキ
ストラン、セロトリオース、セロテトラオース、セロペ
ンタオース、セロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖等が挙
げられる。ガラクトースを基本糖鎖とするオリゴ糖とし
ては、ガラクトオリゴ糖等が挙げられる。

【００１５】マンノースを基本糖鎖とするオリゴ糖とし
ては、象牙ヤシマンナン、酵母マンナン、海藻マンナ
ン、サプレッサマンナン等のマンナンを酸又は酵素によ
る部分加水分解により得られるマンナン由来のオリゴ糖
が挙げられる。グルコサミンを基本糖鎖とするオリゴ糖
としては、キトサン等を酸又は酵素による部分加水分解
により得られるオリゴ糖が挙げられる。上記構成単糖を
複数種含有する複合糖鎖を基本とするオリゴ糖として
は、グルコマンナン、ガラクトマンナン等を酸又は酵素
による部分加水分解により得られるオリゴ糖が挙げられ
る。

【００１６】又、本発明におけるオリゴ糖脂肪酸アミド
又はオリゴ糖脂肪酸エステルのオリゴ糖の基本糖鎖の構
造としては直鎖構造若しくは分岐構造が挙げられる。

【００１７】これらのオリゴ糖のうち、グルコース、ガ
ラクトースを基本糖鎖とするオリゴ糖及びセルロース由
来のオリゴ糖は市販品を用いることができる。例えば、
アルドリッチ社製のマルトデキストリン、和光純薬工業
社製のポリデキストロース、フルカ社製のデキストリン
及びデキストラン、東京化成社製のアミロース、シグマ
社製のセロオリゴ糖、ヤクルト薬品工業社製のガラクト
オリゴ糖等が挙げられる。マンノースを基本糖鎖とする
オリゴ糖は、生化学実験講座第４巻糖質の化学（上）
（日本生化学会編）記載の合成法、グルコサミンのオリ
ゴ糖はキチン、キトサン実験マニュアル（技報堂出版）
記載の合成法により合成できる。

【００１８】上記オリゴ糖脂肪酸エステルのオリゴ糖と
しては、グルコース、マンノースを基本糖鎖とするオリ
ゴ糖、上記オリゴ糖脂肪酸アミドのオリゴ糖としては、
キトサン由来のオリゴ糖が好ましい。本発明において
は、グルコースを基本糖鎖とするオリゴ糖が更に好まし
い。

【００１９】オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸
エステルに用いられる脂肪酸としては、直鎖脂肪酸、分
岐脂肪酸、不飽和脂肪酸が挙げられる。直鎖脂肪酸とし
ては、オリゴ糖脂肪酸アミドの場合には炭素数３〜２４
個の直鎖飽和脂肪酸が好ましく、オリゴ糖脂肪酸エステ
ルの場合には炭素数２〜２４個の直鎖飽和脂肪酸が好ま
しい。これらの脂肪酸の具体例としては、例えば、酢
酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、ヘキサン酸、ヘプタ
ン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン
酸、ラウリン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ペン
タデカン酸、ヘキサンデカン酸、ヘプタデカン酸、オク
タデカン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸
等が挙げられる。

【００２０】又、オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂
肪酸エステルに用いられる分岐脂肪酸としては、炭素数
４〜２４個の分岐飽和脂肪酸が好ましく、例えば、イソ
酪酸、イソ吉草酸、２−エチル酪酸、イソペンタン酸、
ミコール酸等が挙げられる。

【００２１】又、オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂
肪酸エステルに用いられる不飽和脂肪酸としては、炭素
数６〜２２個の不飽和脂肪酸が好ましく、例えば、オレ
イン酸、エライジン酸、リノール酸、リノレン酸、パル
ミトレイン酸、イコサジエン酸、イコサトリエン酸、ア
ラキドン酸、イコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサテ
トラエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン
酸、テトラコセン酸等の不飽和脂肪酸が挙げられる。

【００２２】オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸
エステルに用いられる脂肪酸として好ましくは、上記分
岐脂肪酸又は不飽和脂肪酸である。該脂肪酸としては、
より好ましくはオレイン酸、リノール酸、ミコール酸で
あり、更に好ましくは、オレイン酸である。これらの脂
肪酸を１種又は２種以上導入することにより、アジュバ
ント活性の高いオリゴ糖脂肪酸アミド化物又はエステル
化物を得ることができる。

【００２３】本発明におけるオリゴ糖脂肪酸アミド又は
オリゴ糖脂肪酸エステルは、オリゴ糖およびアミノオリ
ゴ糖と脂肪酸クロライドとの置換反応、オリゴ糖と脂肪
酸メチルエステルとのエステル交換反応、オリゴ糖と脂
肪酸との縮合反応等により容易に合成することができ
る。脂肪酸の導入量は、原料の仕込みモル比を変化させ
ることで容易に調整することができる。

【００２４】オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸
エステルの構成単糖１個当たりの脂肪酸の平均導入数
は、０．３〜３．５であることが好ましく、更に好まし
くは１．０〜３．５であり、特には１．０〜２．１が好
ましい。０．３未満ではアジュバント活性が不十分な場
合があり、３．５を超えると合成し難い。尚、上記オリ
ゴ糖脂肪酸アミドは、オリゴ糖と脂肪酸が少なくともア
ミド結合したオリゴ糖脂肪酸アミドであるが、アミド結
合ばかりでなく、エステル結合でオリゴ糖と脂肪酸が結
合していてもよい。

【００２５】なお、オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖
脂肪酸エステルの構成単糖当たりの脂肪酸の平均導入数
は、４００ＭＨｚ¹Ｈ−ＮＭＲを使用し、クロロホルム
を内部標準物質として使用するプロトン比率の測定によ
り定量することができる。

【００２６】オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸
エステルの重量平均分子量としては、好ましくは１，０
００〜５０，０００であり、更に好ましくは、１，５０
０〜３０，０００である。なお、重量平均分子量はＧＰ
Ｃで測定した。

【００２７】本発明のアジュバントは、上記オリゴ糖脂
肪酸アミド又は上記オリゴ糖脂肪酸エステルそのものの
みをアジュバントとしてもよいし、上記オリゴ糖脂肪酸
アミド又は上記オリゴ糖脂肪酸エステル化物を含有する
水性懸濁型アジュバントでも、油性アジュバント（Ｗ／
Ｏ型あるいはＯ／Ｗ型）でもよい。水性懸濁型アジュバ
ントの場合には、水性媒体中にオリゴ糖脂肪酸アミド又
はオリゴ糖脂肪酸エステルを添加する。油性アジュバン
トの場合には、油性媒体中にオリゴ糖脂肪酸アミド又は
オリゴ糖脂肪酸エステルを添加する。上記水性媒体とし
ては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢ
Ｓ）、グリセリン加ＰＢＳ等の緩衝液が挙げられる。上
記油性媒体としては、流動パラフィン、スクワラン、ス
クワレン、合成直鎖アルカン、食用植物油等が挙げられ
る。

【００２８】本発明のアジュバント中のオリゴ糖脂肪酸
アミド及び／又はオリゴ糖脂肪酸エステルの含有量とし
ては、上記水性媒体に対しては通常０．１〜１０W/V％
が好ましく、より好ましくは０．３〜５W/V ％である。
Ｗ／Ｏ型油性アジュバントの場合、上記油性媒体に対し
ては通常3〜１０W/V％が好ましく、より好ましくは３〜
５W/V ％である。Ｏ／Ｗ型油性アジュバントの場合、上
記油性媒体に対しては通常５〜１５W/V％が好ましく、
より好ましくは５〜１０W/V ％である。アジュバント
は、上記オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸エス
テルを含む水性媒体あるいは油性媒体（必要により、所
望の抗原も含んでもよい）を、手振り、機械的振盪、超
音波分散、ホモミキサーによる分散、自己乳化、膜乳
化、真空乳化法、超高圧乳化法などの方法により調整で
きる。これらのアジュバントは、分子ふるい、遠心分離
等により粒度をそろえて使用することもできる。

【００２９】また、Ｗ／Ｏ型オイルアジュバントは、具
体的には上記油性溶媒に所定量のオリゴ糖脂肪酸アミド
又はオリゴ糖脂肪酸エステルを分散させ、これに必要に
より、乳化安定剤、溶解補助剤を適量添加し、混合攪拌
することで調製できる。又、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバン
トの場合には、上記混合物に必要により親水性界面活性
剤を添加することにより調製できる。

【００３０】本発明のアジュバント中には、添加剤を含
有させることができる。そのような添加剤としては例え
ば、オレイン酸、スクワラン、スクワレン、流動パラフ
ィン、合成直鎖アルカン系オイル、サポニン、ポリグリ
セリンエステル系などの界面活性剤、リン酸アルミニウ
ムゲル、水酸化アルミニウムゲル等が含まれる。その含
有量は、オレイン酸、スクワラン、スクワレン、流動パ
ラフィン、合成直鎖アルカン系オイルについては通常８
５〜９９．９V/V％であり、界面活性剤については通常
０．１〜１５V/V％であり、リン酸アルミニウムゲル、
水酸化アルミニウムゲルについては通常５〜２０V/V％
である。

【００３１】本発明のワクチン組成物は、上記本発明の
アジュバントと所望の抗原を含有する。ワクチン組成物
中のアジュバントの含有量は、剤形により異なり、水性
懸濁アジュバントワクチン組成物の場合は、０．１〜１
０ｖ／ｖ％が好ましく、より好ましくは０．３〜５ｖ／
ｖ％である。油性アジュバントワクチン組成物の場合、
Ｗ／Ｏ型では通常２〜２０V/V％が好ましく、より好ま
しくは５〜１５V/V ％であり、Ｏ／Ｗ型では、通常１〜
５V/V％が好ましく、より好ましくは３〜５V/V％であ
る。ワクチン組成物に、オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリ
ゴ糖脂肪酸エステルそのものを直接添加する場合には、
通常０．２〜５W/V％が好ましく、より好ましくは、
０．５〜２W/V％である。

【００３２】ワクチン組成物中の所望の抗原液の含有量
は、水性懸濁アジュバントワクチン組成物の場合は、９
５〜９９．８ｖ／ｖ％が好ましく、より好ましくは９８
〜９９．５ｖ／ｖ％である。油性アジュバントワクチン
組成物の場合、Ｗ／Ｏ型では通常１０〜５０V/V％が好
ましく、より好ましくは１０〜３０V/V％であり、Ｏ／
Ｗ型では、通常５０〜９９V/V％が好ましく、より好ま
しくは５０〜８０V/V ％である。本発明のワクチン組成
物は、上記アジュバントに所望の抗原液を添加し、必要
により乳化／分散処理することで調整できる。抗原液と
アジュバントの混合比率は、液の乳化状態等の液の安定
性に影響を与えない範囲で適宜調整することができる。
所望の抗原としては、いずれの抗原でも用いることがで
きる。本発明のワクチン組成物の投与量、投与方法とし
ては、抗原の種類により異なるので適宜設定できる。

【００３３】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本実施例は本発明を限定するものではない。

【００３４】〔実施例１〕マルトヘキサオース（東京化
成社製）２００ｍｇをジメチルホルムアミド４０ｍｌに
溶解させ、トリエチルアミン５２０ｍｇを添加した。こ
の溶液を５℃に冷却後、オレイン酸クロライド７８０ｍ
ｇを添加し、２０〜２５℃で２４時間反応した。反応
後、トリエチルアミン塩酸塩を濾過分離し、ゲル濾過精
製を実施してマルトヘキサオースオレエート１１０ｍｇ
を得た。重量平均分子量は３，０３０で、構成単糖当た
りの脂肪酸の平均導入数は０．８１であった。

【００３５】〔実施例２〕マルトデキストリン（アルド
リッチ社製、デキストロース当量１３．０〜１７．０）
４ｇをジメチルホルムアミド１６０ｍｌに溶解後、トリ
エチルアミン１０．６ｇを添加した。この溶液に２０℃
以下でアセチルクロライド２．１ｇを添加後、２０℃で
２時間反応した。この反応液に更にオレイン酸クロライ
ド６．８ｇを添加して２０〜２５℃で２４時間反応し
た。反応後、トリエチルアミン塩酸塩を濾過分離し、濃
縮後、酢酸エチル１２０ｍｌ、飽和食塩水１２０ｍｌ及
び１Ｎ塩酸１０ｍｌを添加した。この溶液を６０℃で１
時間反応してアセチル基を脱保護した。反応後、酢酸エ
チル層を分離、濃縮することで粗製のマルトデキストリ
ンオレエート固体を９．３ｇ得た。この粗製品８．８ｇ
をメタノール１８ｍｌに溶解後、水４．５ｍｌ添加して
分離したオイルを分液、濃縮、脱揮して、精製のマルト
デキストリンオレエート固体７．８ｇを得た。重量平均
分子量は４，７１０で、構成単糖当たりの脂肪酸の平均
導入数は２．０５であった。

【００３６】〔実施例３〕実施例２において、使用する
アセチルクロライド量を１．０ｇとし、又、オレイン酸
クロライド量を８．５ｇとする他は同じ合成法によっ
て、重量平均分子量は５，７３０で構成単糖当たりの脂
肪酸の平均導入数が２．４８のマルトデキストリンオレ
エート固体７．３ｇを得た。

【００３７】〔実施例４〕マルトデキストリン（アルド
リッチ社製、デキストロース当量１３．０〜１７．０）
１ｇをジメチルホルムアミド４０ｍｌに溶解し、トリエ
チルアミン２．６４ｇを添加した。この溶液に２０℃以
下でアセチルクロライド０．５２ｇを添加後２０℃で２
時間反応した。この反応液に更にオレイン酸クロライド
０．９ｇを添加し２０〜２５℃で２４時間反応した。反
応後、トリエチルアミン塩酸塩を濾過分離し、この濾液
に１Ｎ塩酸５ｍｌ添加し、６０℃で１時間反応してアセ
チル基を脱保護した。この反応液を濃縮して粗製品を
４．３ｇ得た。この粗製品をエタノール１００ｍｌで懸
濁攪拌後濾過分離してマルトデキストリンオレエート精
製品０．６ｇを得た。重量平均分子量は２，６６０で、
構成単糖当たりの脂肪酸の平均導入数は０．３２であっ
た。

【００３８】〔実施例５〕実施例４において、使用する
オレイン酸クロライド量を２．９ｇとする他は同じ合成
法によって、重量平均分子量は３，４７０、構成単糖当
たりの脂肪酸の平均導入数が１．０１のマルトデキスト
リンオレエート固体０．７ｇを得た。

【００３９】〔実施例６〕マルトデキストリン（アルド
リッチ社製、デキストロース当量４．０〜７．０）１ｇ
をジメチルホルムアミド４０ｍｌに溶解し、トリエチル
アミン２．６４ｇを添加した。この溶液に２０℃以下で
アセチルクロライド０．５２ｇを添加後、２０℃で２時
間反応した。この反応液に更にオレイン酸クロライド
１．６９ｇを添加し２０〜２５℃で２４時間反応した。
反応後、トリエチルアミン塩酸塩を濾過分離し、濃縮し
て粗製品を４．１ｇ得た。この粗製品をエタノール１０
０ｍｌで懸濁攪拌後濾過分離してマルトデキストリンオ
レエート精製品０．６ｇを得た。重量平均分子量は１，
９９０で、構成単糖当たりの脂肪酸の平均導入数は０．
５９であった。

【００４０】〔実施例７〕アミロース（東京化成社製、
分子量約１５，０００、平均単糖数９２個）１ｇをジメ
チルスルホキシド４０ｍｌに溶解し、トリエチルアミン
２．６４ｇを添加した。この溶液に２０℃以下でアセチ
ルクロライド０．５２ｇを添加後、２０℃で２時間反応
した。この反応液に更にオレイン酸クロライド１．６９
ｇを添加し、２０〜２５℃で２４時間反応した。反応
後、トリエチルアミン塩酸塩を濾過分離し、濃縮して粗
製品を得た。この粗製品をエタノール１００ｍｌで懸濁
攪拌後濾過分離して、アミロースオレエート精製品０．
５ｇを得た。重量平均分子量は２２，５８０で、構成単
糖当たりの脂肪酸の平均導入数は０．３１であった。

【００４１】〔実施例８〕マルトトリオース（東京化成
社製）１ｇをジメチルホルムアミド２００ｍｌに溶解さ
せ、トリエチルアミン３．９ｇを添加した。この溶液を
５℃に冷却後、オレイン酸クロライド５．８ｇを添加
し、２０〜２５℃で２４時間反応した。反応後、トリエ
チルアミン塩酸塩を濾過分離し、ゲル濾過精製を実施し
てマルトトリオースオレエート０．５ｇを得た。重量平
均分子量は２，９１０で、構成単糖当たりの脂肪酸の平
均導入数は３．５１であった。

【００４２】〔実施例９〕オリゴ糖として、ガラクトオ
リゴ糖（ヤクルト薬品工業社製、オリゴメイト５５Ｐ）
を１ｇ使用した他は、実施例８と同じ方法でガラクト
オリゴ糖オレエート精製品を０．５ｇ得た。重量平均
分子量は１，９００で構成単糖当たりの脂肪酸の平均導
入数は２．１０であった。

【００４３】〔実施例１０〕キトサン１０ｇを濃塩酸１
００ｍｌに溶解させ、８０℃で２時間加水分解反応し
た。この分解液の不溶物を濾過分離後、濾液に０．５ｇ
の活性炭を添加し、２０℃で３０分脱色後、濾過した。
この濾液を濃縮乾固し、メタノール１００ｍｌを加え２
０℃で２時間攪拌後、不溶物を濾過分離し、濾液を濃縮
乾固した。この濃縮乾固品をゲル濾過を実施して、糖鎖
の構成単糖数が３〜１０個のキトサンオリゴ糖を１．８
ｇ得た。キトサンオリゴ糖０．５ｇをジメチルホルムア
ミド２０ｍｌに溶解し、トリエチルアミン２．６４ｇを
添加した。この溶液にオレイン酸クロライド０．６０ｇ
を添加し２０〜２５℃で２４時間反応した。反応後、ト
リエチルアミン塩酸塩を濾過分離し、濃縮して粗製品
１．７ｇを得た。この粗製品をエタノール５０ｍｌで懸
濁攪拌後濾過分離してオレオイルキトサン精製品０．３
ｇを得た。重量平均分子量は２，１３０で、構成単糖当
たりの脂肪酸の平均導入数は０．６１であった。

【００４４】〔実施例１１〕０．０２Ｍクエン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）５０ｍｌ中に１００ｇの酵母ペーストを
懸濁させ、オートクレーブ中で１２０〜１２５℃で９０
分加熱した。冷却後遠心分離し、上澄み液を分離した。
この液に攪拌しながら８０ｍｌのフェーリング試薬を加
えた。マンナン−銅複合体のガム状の沈殿を濾過し、６
ｍｌの３Ｎ塩酸を加えて溶解した。この溶液をメタノー
ル／酢酸混液（１／１）１００ｍｌへ攪拌しながら滴下
した。２時間放置してマンナンが沈殿した後、析出した
マンナンを濾過し、メタノール１００ｍｌに添加して洗
浄し、１．２ｇのマンナンを得た。上記操作を繰り返し
得られたマンナン６ｇを、無水酢酸−氷酢酸−９８％硫
酸（１：１：０．１、Ｖ／Ｖ）混液７５ｍｌに１０℃以
下で加え、１０〜２０℃で３日間攪拌後、遠心分離した
上澄み液を氷水１Ｌに注入した。この液を炭酸ナトリウ
ムで中和後、クロロホルム５００ｍｌで３回抽出し、濃
縮乾固後、メタノール５０ｍｌに再溶解させ１％ナトリ
ウムメチラート５ｍｌを加え室温で３０分攪拌して脱ア
セチル化を行う。脱アセチル化した液を酢酸で中和後、
濃縮乾固する。

【００４５】この濃縮乾固品をゲル濾過を実施して、糖
鎖の構成単糖数が３〜９個のマンノオリゴ糖を１．５ｇ
得た。マンノオリゴ糖０．５ｇをジメチルホルムアミド
２０ｍｌに溶解し、トリエチルアミン１．３２ｇを添加
した。この溶液にオレイン酸クロライド０．８５ｇを添
加し２０〜２５℃で２４時間反応した。反応後、トリエ
チルアミン塩酸塩を濾過分離し、濃縮して粗製品１．５
ｇを得た。この粗製品をエタノール５０ｍｌで懸濁攪拌
後濾過分離してマンノオリゴ糖オレエート精製品０．４
ｇを得た。重量平均分子量は２，３９０で、構成単糖当
たりの脂肪酸の平均導入数は１．８７であった。

【００４６】〔実施例１２〕セロペンタオース（関東化
学社製）０．４ｇをジメチルホルムアミド１６ｍｌに溶
解後、トリエチルアミン１．０６ｇを添加した。この溶
液に２０℃以下でアセチルクロライド０．２１ｇを添加
後、２０℃で２時間反応した。この反応液に更にオレイ
ン酸クロライド０．６８ｇを添加して２０〜２５℃で２
４時間反応した。反応後、トリエチルアミン塩酸塩を濾
過分離し、濃縮後、酢酸エチル１２ｍｌ及び飽和食塩水
１２ｍｌを添加した。酢酸エチル層を分離、濃縮するこ
とで粗製のセロペンタオースアセチルオレエート固体を
０．９ｇ得た。この粗製品０．９ｇをメタノール２ｍｌ
に溶解後、水０．５ｍｌ添加して分離したオイルを分
液、濃縮、脱揮して、精製のセロペンタオースアセチル
オレエート固体０．７ｇを得た。重量平均分子量は２，
２１０で、構成単糖当たりの脂肪酸の平均導入数は１．
１０であった。

【００４７】〔アジュバント活性試験〕〔実施例１３〕卵白アルブミンに対するアジュバント効
果卵白アルブミン（ＯＶＡ）１０μｇにリン酸緩衝生理食
塩液（ＰＢＳ）１００μｇを懸濁後、アジュバントとし
て実施例２記載のマルトデキストリンオレエート、エス
テル化率２．０５（ＭＤＯ−ＲＴ：２．０５）１０μｇ
を懸濁して３週齢のddY系マウスの後肢筋肉内に注射
し、卵白アルブミンに対するマウスの抗体応答を間接赤
血球凝集反応（PHA法）で継時的に測定した。これらの
結果を図１に示した。PHA抗体価の測定は以下の通りで
ある。

【００４８】〔間接赤血球凝集反応(PHA)による抗OVA抗
体の測定法〕 [ＯＶＡ固定赤血球の調製方法]りん酸緩衝食塩水10ml
に、ＯＶＡ50mgおよびヒツジ生血球0.4ml（packed cell
vol.）を添加し、2.5％グルタルアルデヒド3mlを滴下
し、37℃下、撹拌器で1時間撹拌する。遠心後、血球を
りん酸緩衝食塩水10mlにて洗浄し、1MグリシンNaOH緩衝
液（pH7.2）1mlに浮遊し、4℃、1晩静置する。再び血球
をりん酸緩衝食塩水10mlにて洗浄し、血球の終濃度が1
％（v/v）となるようにグリシンベロナール緩衝液(GVB;
pH7.2)に浮遊、これをOVA固定赤血球とした。

【００４９】[PHA価の測定]被検マウス血清をGVBにて2
階段希釈し、96ウェルU字底マイクロタイタープレート
（住友ベークライト社製）に100μlずつ添加する。つぎ
に上記OVA固定赤血球25μlを各ウェルに添加して、プレ
ートミキサーにて撹拌、室温下4時間静置する。プレー
ト管底の血球凝集物の沈降円の大きさおよび色調を、陽
性/陰性両対照血清群のものと比較し、陽性を示す最小
希釈倍数の逆数をPHA価、すなわち被検血清の抗OVA抗体
価とした。

【００５０】図１をみると、アジュバントを加えないマ
ウス（−▲−）では全く抗体感応がみられなかったのに
対して、マルトデキストリンオレエート（ＭＤＯ−Ｒ
Ｔ：２．０５）をアジュバントとした場合、高い抗体産
生がみとめられた。マルトデキストリンオレエートの抗
体価は比較としたリン酸アルミニウムゲル（添加量１０
Ｖ／Ｖ％）に比べ、明らかに高く且つ持続性も優れてい
る事が確認され、本発明のものはnon-oil系（水性懸
濁）のアジュバントとして有用であることが確認され
た。

【００５１】〔実施例１４〕糖鎖長の異なる７種のグル
コースオリゴ糖、平均構成単糖数３；マルトトリオース（東京化成社製）、５；マルトペンタオース（東京化成社製）、７；マルトヘプタオース（東京化成社製）、１５；マルトデキストリン（アルドリッチ社製）、１８；マルトデキストリン（アルドリッチ社製）、６１；ＡＳ−１０（中埜酢店製）、及び９２；アミロース（東京化成社製）を原料として実施例７に記載の方法に準じて構成単糖当
たりの脂肪酸（オレイン酸）導入率が０．３±０．０２
となるように条件を整えて合成及び精製した。これらの
アミロースオレエートとＯＶＡを１０μｇ／０．１ｍｌ
ずつ含む免疫原をモルモットの大腿部筋肉内に注射し、
注射後４週目における血中抗体価を間接赤血球凝集抑制
反応で測定し、その結果を図２に示した。この結果か
ら、抗体価は特に単糖数７〜１５で最も高い抗体価が得
られることが確認された。

【００５２】〔実施例１５〕猫ヘルペスウイルスに対す
るアジュバント効果猫ヘルペスウイルス（ＦＨＶ）感染CRFK細胞を界面活性
剤Nonidet P-4０で可溶化したのち、超遠心した上清を
抗原(100HA unit/ml)とし、この抗原0.5mlに、実施例２
〜５記載のマルトデキストリンオレエート脂肪酸導入率
（ＭＤＯ−ＲＴ）を０．３２〜２．４８へ変化させたマ
ルトデキストリンオレエート１０μｇをそれぞれ加え
たものを、ラットに皮下免疫し、ＦＨＶに対する抗体を
plaque reduction法で測定した。その結果を図３に示し
た。

【００５３】〔ネコヘルペスウイルスに対する中和抗体
の測定法（plaque reduction法）〕被検血清を56℃、30
分間非働化し、希釈液で３２倍に希釈する。希釈血清0.
1mlと約200pfu/0.1mlに調整したネコヘルペスウイルス
0.1mlを混合して37℃、1時間感作する。径60mmのシャー
レ上でコンフルエントになったネコ腎由来CRFK細胞に先
の感作液0.1mlを接種し、37℃、1時間吸着させる。接種
液を除去して１％寒天を含んだ培養液を重層し、寒天を
固化させる。37℃の５％炭酸ガス孵卵器内で４日間培養
し、先の重層寒天の組成にニュートラルレッドを0.01%
加えた寒天をさらに重層・固化して培養を続ける。翌
日、プラック（白く抜けた円形物）をカウントし、陰性
対照血清でのプラック形成阻止率を百分率で求めた。

【００５４】脂肪酸導入率１．０未満のマルトデキスト
リンオレエートは透明に溶解したのに対して、１．０で
はやや白濁し、１．５以上では白色懸濁液となり、更に
２．０以上では疎水性が高いため懸濁状態が不安定であ
った。これらの結果から、脂肪導入率の違いにより水相
への溶解性が明らかに異なることが確認された。また、
図３をみると、ＦＨＶに対する抗体感応は脂肪酸導入率
１．０未満では比較的低いのに対して、１．０以上のサ
ンプルではより強い事が確認され、分子性状として親水
性の高いサンプルはアジュバント活性が比較的低く、疎
水性が高いサンプルはアジュバント活性がより高い事が
確認された。更に疎水性が高いサンプルの中でも、脂肪
酸導入率が１．０〜２．１の範囲のサンプルにより高い
活性が得られた。抗体価の上昇と持続を従来のリン酸ア
ルミニウムゲルアジュバント（添加量１０Ｖ／Ｖ％）と
比較したところ、ゲルアジュバントは抗体が一過性に上
昇するが、持続が極めて短いのに対して、脂肪酸導入率
の高いマルトデキストリンオレエートは高い抗体価が３
ヶ月以上持続することが確認された。

【００５５】〔実施例１６〕ヘモフィルス・パラガリナルム（Ｈ．ｐｇ−Ａ）A型菌
（コリーザＡ型菌）に対する安全性（副作用）とアジュ
バント活性に関する試験３０日齢のハイライン系ＳＰＦ鶏♀に、1.4×１０⁸ｃｆ
ｕのヘモフィルス・パラガリナルムA型菌と、実施例１
記載のマルトヘキサオースオレエート、実施例２、６記
載のマルトデキストリンオレエート、実施例８記載のマ
ルトトリオースオレエート、実施例９記載のガラクトオ
リゴ糖オレエート、実施例１０記載のオレオイルキトサ
ン、実施例１１記載のマンノオリゴ糖オレエート、実施
例１２記載のセロペンタオースアセチルオレエート、又
は実施例１記載のマルトヘキサオースオレエートと実施
例１０記載のオレオイルキトサンの１：１の混合物それぞれ１５０μgとを０．５ｍｌのＰＢＳに懸濁させ
て、それを脚部筋肉内に注射し、注射直後から注射部位
の腫脹、硬結その他の一般症状を観察するとともに、注
射後３週間目および５週間目の時点で採血しＨＩ抗体価
を測定した。また、同じく５週間目に剖検し、注射部位
の観察を行った。その結果を表１、表２に示した。な
お、一般所見の観察は、注射直後より観察し、剖検ま
での間に所見の認められた例を表記した。表１の副作
用において、＋が多い程、重篤な副作用を表し、−は副
作用が認められなかったことを表す。また、＋−は、副
作用が極わずか観察されたことを表す。抗体価の測定は
以下に記載した方法で実施した。

【００５６】[ヘモフィルス・パラガリナルムA型菌に対
するHI抗体価の測定法]被検血清の０．０２５ｍｌをＰ
ＢＳで2倍階段希釈した。これに０．０２５ｍｌ中に４
単位のＩＣ−Ａ型菌（Ｈｐｇ２２１株）赤血球凝集素を
含有したＰＢＳを加え、室温で１０分間感作後、０．５
％鶏赤血球浮遊液０．０５ｍｌを加え、振盪後、６０分
間室温静置し、赤血球の凝集を完全に抑制した被検血清
の最高希釈倍数の逆数をＨＩ抗体価とした。

【００５７】

【表１】

【００５８】

【表２】

【００５９】表１、２の試験の結果、安全性において
は、従来より広く実用化されているリン酸アルミニウム
ゲル（比較例３、添加量１０Ｖ／Ｖ％）、水酸化アルミ
ニウムゲル（比較例４、添加量１０Ｖ／Ｖ％）では、剖
検時点で軽度の接種反応が認められた。また、無水マン
ニトールオレイン酸エステル（比較例２、添加量３．０
ｗｔ％）においては、硬結、腫脹がみられ、筋肉の白色
変性も若干認められた。Ｗ／Ｏ型市販オイルアジュバン
トＡでは極めて強い接種反応がみられ、膿瘍形成、筋肉
変性が顕著であった。これに対して、オリゴ糖オレイン
酸アミド又はオリゴ糖オレイン酸エステルでは高いアジ
ュバント活性を示し、又接種反応は軽微で、臨床的異常
も認められなかった。

【００６０】アジュバント活性は、比較的脂肪酸導入率
の低いオレオイルキトサンが高い活性を示したことよ
り、キトサンの陽性荷電がアジュバント活性の発現に対
して有利に作用している可能性が示唆された。又、オリ
ゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸エステルを構成す
る糖鎖の長さとして、グルコース（単糖）のオレエート
（比較例１、添加量３．０ｗｔ％）、マルトース（二
糖）のオレエート（比較例６、添加量３．０ｗｔ％）は
アジュバント活性が低く、本発明のオリゴ糖脂肪酸アミ
ド又はオリゴ糖脂肪酸エステルが有用であることが確認
された。ガラクトースやグルコサミンの単糖や二糖につ
いても比較実験を行ったが、それぞれ同様の結果が得ら
れた。尚、これらの比較例の単糖及び二糖と脂肪酸との
反応物の合成は実施例１の合成と同様の合成法で合成し
た。

【００６１】〔実施例１７〕オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸エステルのオ
イルアジュバントへの応用例（ニューカッスル病・鶏伝
染性コリーザA型、Ｃ型混合ワクチンへの応用）（Ｗ／Ｏ型オイルアジュバントワクチンの調整）軽質流
動パラフィン９５容量部に、アジュバントとして実施例
２記載のマルトデキストリンオレエート脂肪酸導入率
２．０５（ＭＤＯ−ＲＴ２．０５）５容量部を溶解し調
整したＷ／Ｏ乳剤用オイルアジュバント７容に対し、ニ
ューカッスル病ウイルスとして、１０^9.5ＥＩＤ５０／
ｍｌヘモフィルス・パラガリナルム（Ｈ．ｐｇ）Ａ型
及びC型のチメロサール不活化菌体をそれぞれ１．０×
１０⁸個／ｍｌの濃度で含む抗原液３容を加えてウルト
ラホモジナイザーを用いて乳化してＷ／Ｏ型オイルアジ
ュバントワクチンを調製した。

【００６２】（Ｏ／Ｗ型オイルアジュバントワクチンの
調整）実施例２記載のマルトデキストリンオレエート脂
肪酸導入率２．０５（ＭＤＯ−ＲＴ２．０５）３容量部
をスクワラン３０容量部に分散し、リン酸緩衝生理食塩
液６７容量部を添加して乳化調整したＯ／Ｗ型乳剤用オ
イルアジュバント２．５溶に対して、ニューカッスル病
ウイルスとして、１０^9.5 ＥＩＤ５０／ｍｌヘモフィル
ス・パラガリナルム（Ｈ．ｐｇ）Ａ型及びC型のチメロ
サール不活化菌体をそれぞれ１．０×１０⁸個／ｍｌの
濃度で含む抗原液７．５容を加えてウルトラホモジナイ
ザーを用いて乳化してＯ／Ｗ型オイルアジュバントワク
チンを調製した。

【００６３】（水性懸濁型アジュバントの調整）実施例
２記載のマルトデキストリンオレエート脂肪酸導入率
２．０５（ＭＤＯ−ＲＴ２．０５）３容量部を、リン酸
緩衝生理食塩液３０容量部に分散して調整した水性懸濁
型（ノンオイル）アジュバント５溶に対して、ニューカ
ッスル病ウイルスとして、１０^9.5 ＥＩＤ５０／ｍｌヘ
モフィルス・パラガリナルム（Ｈ．ｐｇ）Ａ型及びC型
のチメロサール不活化菌体をそれぞれ１．０×１０⁸個
／ｍｌの濃度で含む抗原液５容を加えてウルトラホモジ
ナイザーを用いて乳化して、水性懸濁型アジュバントワ
クチンを調製した。

【００６４】上記各ワクチン０．５ｍｌを、６０日齢の
白色レグホン（スーパーニック）の下腿部筋肉内に注射
し、継時的に採血（注射後２８日目と３５日目）して、
ニューカッスル病ウイルスに対するHI抗体価（ＮＤ−Ｈ
Ｉ抗体価）、ヘモフィルス・パラガリナルムA型菌に対
するHI抗体価（Ｈ．ｐｇＡ型−ＨＩ抗体価）、ヘモフィ
ルス・パラガリナルムＣ型菌に対するHI抗体価（Ｈ．ｐ
ｇＣ型−ＨＩ抗体価）を各々測定した。比較例とし
て、水酸化アルミニウムゲル、市販のＷ／Ｏ型及びＯ／
Ｗ型オイルアジュバントを、上記ワクチンの各アジュバ
ントの代わりに使用して上記と同様に調整したワクチン
を用いた。それらの結果を図４、図５、図６に示した。
抗体価の測定は以下に記載した方法で実施した。

【００６５】〔ＮＤ−ＨＩ抗体価の測定法〕プラスチッ
ク製血球凝集板（ＨＡｔｒａｙ）上で被検血清をＰＢ
Ｓで５倍に希釈し、これを元として０．２ｍｌ宛、２倍
階段希釈系列を作成する。これに０．２ｍｌのＮＤＶＨ
Ａ抗原（４単位；ニューカッスル病診断用赤血球凝集素
（ＮＤＶ石井株ＨＡ抗原；日生研株式会社製））を０．
２ｍｌ宛加え振盪後１０分静置する。さらに０．５％鶏
赤血球浮遊液０．５ｍｌを加え、振盪後６０分間静置
し、赤血球の凝集を完全に抑制する被検血清の最高希釈
倍数の逆数をＨＩ抗体価とした。〔Ｈ．ｐｇＡ型−ＨＩ抗体価の測定法〕上記実施例１
６に記載の方法と同様に行った。〔Ｈ．ｐｇＣ型−ＨＩ抗体価の測定法〕（ヒアルロニ
ダーゼ処理抗原使用）ホルマリン固定鶏赤血球で非特異凝集素を吸収した被検
血清０．２ｍｌを５倍希釈し、その０．２ｍｌを用いて
２倍階段希釈系列を作成した。これに４単位に調製した
ＨＡ抗原０．２ｍｌを加え、０．４ｍｌとして混和後１
０分静置した。これに１％ホルマリン固定赤血球浮遊液
０．４ｍｌを加え、振盪混和し６０分間室温で静置し、
上記ＮＤ−ＨＩ抗体価と同様にＨＩ抗体価を判定した。

【００６６】その結果、図４〜６に示すように、オリゴ
糖脂肪酸エステル（ＭＤＯ−ＲＴ２．０５；マルトデキ
ストリンオレエート）を含むオイルアジュバントは水性
懸濁型のものに比べてより高い抗体上昇が認められ、抗
体価の持続も優れ、従来より市販されているオイルア
ジュバントに比較しても明らかに高力価を示した。上記
ワクチン組成物を注射した鶏について、食欲、増体重、
跛行の有無などを観察するとともに、注射後五週間目に
剖検して注射部位の反応を確認した。その結果、各ワク
チン組成物を注射された鶏で上記の異常が見られた例は
なかった。剖検においてもコリーザ菌を含有するＷ／Ｏ
型ワクチン組成物を注射した例で、筋間結合織にワクチ
ンの残留と周辺の白色変化が認められた以外は、他の剤
型では全く変化が認められなかった。従来のＷ／Ｏ型ワ
クチン組成物では、接種部位の腫脹と筋肉における強度
の白色変性、膿瘍形成などが認められることから見て、
上記結果は、本発明のアジュバント及びワクチン組成物
の安全性を実証するものである。

【００６７】

【発明の効果】以上の記載の様に、本発明におけるオリ
ゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖脂肪酸エステルを含有す
るアジュバントは、比較例の無水マンニトールオレイン
酸エステルよりもアジュバント活性が高く、接種部位が
壊死、硬結等の副作用が無く、安全性を改良することが
できた。又、これらの化合物は、合成が容易であること
からより安価に提供することが可能である。本発明のア
ジュバントは、オリゴ糖脂肪酸エステル化物そのもの、
Ｗ／Ｏ型、Ｏ／Ｗ型及び水性懸濁の乳剤のいずれでも使
用することが可能である。以上の性能の向上により、安
全且つ効果的なアジュバント、更にワクチンとして適用
することが期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＯＶＡに対するマルトデキストリンオレエート
のアジュバント効果をグラフで示した図である。

【図２】平均構成単糖数とアジュバント活性の関係をグ
ラフで示した図である。

【図３】脂肪酸導入率とアジュバント活性の関係をグラ
フで示した図である。

【図４】ＮＤに対する各種アジュバント効果をグラフで
示した図である。

【図５】コリーザＡ型菌に対する各種アジュバント効果
をグラフで示した図である。

【図６】コリーザＣ型菌に対する各種アジュバント効果
をグラフで示した図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/245 Ａ６１Ｋ 39/245 (72)発明者小田健司京都府城陽市寺田市ノ久保２−７ (72)発明者長井淑郎神奈川県平塚市東八幡５−２−３三協化学株式会社合成化学研究所内 (72)発明者佐藤由香利神奈川県平塚市東八幡５−２−３三協化学株式会社合成化学研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】構成単糖がグルコサミンであるオリゴ糖
と脂肪酸が少なくともアミド結合したオリゴ糖脂肪酸ア
ミド、又は構成単糖がグルコース、ガラクトース及びマ
ンノースのうち少なくとも１種であるオリゴ糖と脂肪酸
がエステル結合したオリゴ糖脂肪酸エステルを含有する
ことを特徴とするアジュバント。
【請求項２】前記オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖
脂肪酸エステルを構成するオリゴ糖の糖鎖が３〜９９個
の単糖で構成されることを特徴とする請求項１に記載の
アジュバント。
【請求項３】前記オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖
脂肪酸エステルを構成する脂肪酸が、オリゴ糖脂肪酸ア
ミドでは炭素数３〜２４個の直鎖脂肪酸、炭素数４〜２
４個の分岐脂肪酸あるいは炭素数６〜２２個の不飽和脂
肪酸であり、オリゴ糖脂肪酸エステルでは炭素数２〜２
４個の直鎖脂肪酸、炭素数４〜２４個の分岐脂肪酸ある
いは炭素数６〜２２個の不飽和脂肪酸であることを特徴
とする請求項１又は２に記載のアジュバント。
【請求項４】前記オリゴ糖脂肪酸アミド又はオリゴ糖
脂肪酸エステルの構成単糖当たりの脂肪酸の平均導入数
が０．３〜３．５であることを特徴とする請求項１〜３
のいずれかに記載のアジュバント。
【請求項５】請求項１〜４のいずれかに記載のアジュ
バントと所望の抗原を含むことを特徴とするワクチン組
成物。