JP2003515542A

JP2003515542A - 単糖および二糖誘導体

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Publication number: JP2003515542A
Application number: JP2001540995A
Authority: JP
Inventors: ルーカス、アルフォンサス、テオドラス、ヒルガーズ; アネケ、ジョージーン、ブロム
Original assignee: コバシーン、ベスローテン、フェンノートシャップ
Priority date: 1999-11-30
Filing date: 2000-11-30
Publication date: 2003-05-07
Anticipated expiration: 2020-11-30
Also published as: WO2001040240A3; JP5025869B2; US20120288528A1; EP1233969A2; PT1233969E; US20110305730A1; EP1233969B2; DE60038248D1; CN101108250A; US8052981B2; DK1233969T4; US8637659B2; DE60038248T3; ATE388160T1; CN100345592C; US20090304723A1; AU2558601A; EP1104767A1; US20030220270A1; DK1233969T3

Abstract

(57)【要約】本発明は、単糖誘導体および二糖誘導体の新規なファミリー、ならびにその製造方法に関する。本発明による単糖および二糖誘導体は、少なくとも１つの脂肪酸エステルを含んでなり、１以上の陰イオン基をさらに含んでもよく、とりわけ医療、医薬、化粧品および食品用途に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、単糖誘導体および二糖誘導体、ならびにその製造方法に関する。本
発明はさらに、とりわけ医療、医薬、化粧品および食品用途におけるこれらの誘
導体の使用に関する。

【０００２】糖脂肪酸エステルはそれらの乳化力についてよく知られている。それらは水中
油型および油中水型のいずれかで、大きな分散相を小さな連続相で乳化させるこ
とができる。さらに、糖脂肪酸エステルについては、それらのＨＬＢ値（親水性
親油性バランス、スクロースエステルのＨＬＢ値は＜１から１６まで様々である
）が広範囲であることもよく知られている。糖脂肪酸エステルのＨＬＢ値は、糖
一分子当たりの脂肪酸エステルの数および脂肪酸エステルの炭素鎖の長さによっ
て異なる。

【０００３】糖脂肪酸エステルはさらに、油脂の結晶化を促進または阻害する能力、抗菌作
用、湿潤および分散作用、タンパク質の熱および凍結変性防止剤としての使用の
可能性、ならびに非特異的宿主防御の増強作用など、その他いくつかの用途につ
いて知られている。

【０００４】 Nigam et al. (Br. J. Cancer, 46, pp. 782-793, 1982)には、アラビノース
、ガラクトース、グルコース、マンノース、セロビオース、ラクトース、マルト
ース、およびスクロースの種々の脂肪酸エステルのin vitroおよびin vivo免疫
刺激作用が開示されている。抗体応答の増強倍数は１から＜１０まで様々であっ
た。

【０００５】 Nigam et al. (Cancer Res. 38, pp. 3315-3312, 1978)には、二糖脂肪酸エス
テル、特に四パルミチン酸マルトースの免疫増強活性が開示されている。

【０００６】 Nishikawa et al. (Chem Pharm. Bull. 29, pp. 505-513, 1981)には、スクロ
ース脂肪酸エステルの抗腫瘍活性が開示されている。

【０００７】 Azuma（欧州特許第ＥＰ１，５７２，３６８号公報）には、ワクチン効力に対
する糖脂肪酸エステルの増強作用（これを本明細書では「アジュバント活性」ま
たは「アジュバント性」という）が開示されている。

【０００８】水中油エマルションと組み合わせた二糖脂肪酸エステルのワクチン効力に対す
る刺激作用はよく知られている。

【０００９】 Nigam et al. (Br. J. Cancer, 46, pp. 782-793, 1982)にはまた、スクロー
ス脂肪酸エステルとスクアラン水中油エマルションの組合せ、ならびにアジュバ
ントとしてのそれらの使用が開示されている。しかしながら、スクロース八オレ
イン酸エステルでは、たとえあるにしてもワクチン効力に対する刺激作用はわず
かなものであるに過ぎないことが示されている（本明細書の下記実施例も参照）
。スクロース八オレイン酸エステルとスクアラン水中油エマルション組合せでさ
え、ワクチン効力に対する増強作用は弱く、ワクチンアジュバントとして用いる
には不十分であることが示されている（本明細書の下記実施例も参照）。

【００１０】スクロース硫酸エステルもよく知られている。米国特許第３，４３２，４８９
号明細書には、種々の二糖ポリスルフェートおよびそれからのアルミニウム錯体
の合成方法が、それらの適当な治療用途ともに開示されている。さらに詳しくは
、この特許明細書には、ピリジンをはじめとする種々の溶媒中で、スクロースを
クロロスルホン酸またはＳＯ_３−ピリジンをはじめとする多くの硫酸化剤と反応
させることが記載されている。さらに、米国特許第３，４３２，４８９号明細書
には、スクロース硫酸エステル、特にスクラルファートとしても知られる、スク
ロース八硫酸エステルとアルミニウム塩との錯体の医薬および医療用途が開示さ
れている。胃腸障害の治療におけるスクラルファートの適用はよく知られている
。

【００１１】ＷＯ９０／０２１３３号公報には、医療用のスクロース硫酸エステルおよびそ
のアルミニウム錯体、ならびにその製剤の製造方法が開示されている。

【００１２】 Bazin et al. (Carbohydrate Res. 309, pp. 189-205, 1998)には、アシルス
クロースのスルホン化によるスクロースベース界面活性剤の位置選択的合成が開
示されている。開示された誘導体は、スクロース一分子当たり１個のアシル基と
、スクロース一分子当たり１個の硫酸基を含む。開示された方法は、スクロース
分子の特定の水酸基を誘導体化する位置選択的方法である。この方法では、特定
の水酸基をブロッキングするのにジブチルスタンニレン錯体が用いられる。この
製造方法の欠点はその煩雑性である。

【００１３】 Hilgers et al. (Immunology 60, pp. 141-146, 1986)には、スルホリポ多糖
としても知られる、脂肪酸エステルと硫酸エステルの双方を含有する多糖類、お
よびワクチンのアジュバントとしてのそれらの使用が開示されている。さらに、
Hilgers et al. (Immunology 60, pp. 141-146, 1986; WO96/20222)には、この
多糖を塩化アコイルと接触させ、次いでスルホン化剤と接触させることによるス
ルホリポ多糖の製造方法が開示されている。

【００１４】 Mashihi and Hilgers（ＥＰ−Ａ−０−２９５，７４９号公報）には、スルホ
リポ多糖と水中油エマルションの組合せ、特に親水性スルホリポ多糖と水中スク
アランエマルションの組合せが開示されている。Mashihi and Hilgers（ＥＰ−
Ａ−０−２９５，７４９号公報）にはさらに、非特異的宿主防御機構に対するス
ルホリポ多糖、特に親水性スルホリポ多糖と水中油エマルション、特に水中スク
アランエマルションの組合せの増強作用が開示されている。

【００１５】 Hilgers et al. (Vaccine 12, pp. 653-660, 1994; Vaccine 12, pp. 661-665
, 1994; WO96/20008; Vaccine 17, pp. 219-228, 1999)には、スルホリポ多糖、
特に疎水性スルホリポ多糖と水中油エマルション、特に水中スクアランエマルシ
ョン、水中鉱油エマルション、水中大豆油エマルションおよび水中ヘキサデカン
の組合せが開示されている。スルホリポ多糖、特に疎水性スルホリポ多糖と水中
油エマルション、特に水中スクアランエマルション、水中鉱油エマルション、水
中大豆油エマルションおよび水中ヘキサデカンエマルションの組合せの安定な製
剤の製造方法も開示されている。

【００１６】ＷＯ９６／２０００８号公報に開示されているスルホリポ多糖の製造方法は、
（１）まず、多糖を塩化アコイルと接触させ、次いで（２）その脂質多糖誘導体
をスルホン化剤と接触させるという二工程を含む。両工程ともランダムな化学付
加反応であると考えられ、エステル化されている多糖分子の各水酸基の確率は等
しく、この工程中変化しないことを意味する。このスルホリポ多糖の製造方法に
よって、多糖一分子当たりに存在する硫酸エステルの数、多糖一分子当たりの水
酸基の数、ならびに多糖一分子における脂肪酸エステル、硫酸エステルおよび水
酸基の分布が異なる種々のスルホリポ多糖誘導体が形成される。得られた製剤中
の化学的に異なるスルホリポ多糖誘導体の数は、出発材料中の種々の多糖分子の
数により、また多糖一分子当たりの水酸基の数により決まる。

【００１７】スルホリポ多糖製剤中に存在する化学的に異なる多数のスルホリポ多糖誘導体
について上記の点を説明するため、Hilgers et al. （ＷＯ９６／２０００８号
公報）によって開示されているように、以下の例が含まれる。

【００１８】当技術分野で公知の最も良く化学的に定義されているスルホリポ多糖誘導体製
剤は、β−シクロデキストリンから得られるスルホリポ多糖製剤（スルホリポ−
シクロデキストリンとしても知られる）である。このスルホリポ−シクロデキス
トリン製剤は多糖一分子当たり７個のグルコース分子を有する多糖から得られる
。このスルホリポ−シクロデキストリン製剤は、開示された最も小さい分子量の
多糖から誘導され、最も少ない水酸基を有する。β−シクロデキストリンの分子
量は１１５３Ｄａであり、一分子当たりの水酸基は２１個である。これらの水酸
基は脂肪酸エステルまたは硫酸エステルにより化学的に付加され得るか、あるい
は不変である。スルホリポ−シクロデキストリン製剤に存在する誘導体はβ−シ
クロデキストリン一分子当たりの脂肪酸エステルの数、β−シクロデキストリン
一分子当たりの硫酸エステルの数、β−シクロデキストリン一分子当たりの水酸
基の数、β−シクロデキストリン一分子におけるこれらの脂肪酸エステル、硫酸
エステルおよび水酸基の分布が異なる。当技術分野で公知の方法(Vaccine 17, p
p. 219-228, 1999; ＷＯ９６／２０２２２号公報)によって製造されたスルホリ
ポ−シクロデキストリン製剤における化学的に異なる誘導体の数は極めて多い。
β−シクロデキストリン一分子における脂肪酸エステル、硫酸エステルおよび水
酸基の分布を考慮しない場合、スルホリポ−シクロデキストリン製剤中の化学的
に異なる誘導体の数は数百であり得る（例えば２１０）。また、β−シクロデキ
ストリン一分子における脂肪酸エステル、硫酸エステルおよび水酸基の分布を考
慮する場合には、スルホリポ−シクロデキストリン製剤における化学的に異なる
誘導体の数は、３^３＋｛（３^３）^７−３^３｝／７＝１，４９４，３３６，１９５である。

【００１９】スルホリポ−シクロデキストリン製剤における化学的に異なる誘導体の濃度は
、出発材料、すなわちHilgers et al.（ＷＯ９６／２０２２２号公報）により開
示されたようにβ−シクロデキストリン、塩化アコイルおよびスルホン化剤のモ
ル比または重量比を変えることで調整することができる。スルホリポ−シクロデ
キストリン製剤に存在する化学的に異なる誘導体の濃度は数学的に見積もること
ができる。スルホリポ多糖誘導体の製造に含まれる両化学反応が完全にランダム
であれば、スルホリポ−シクロデキストリン製剤に存在する特定の誘導体の最大
濃度は大抵５％未満となる。β−シクロデキストリンより分子当たりの水酸基の
数がずっと多い多糖から得られたスルホリポ多糖製剤は、含まれる化学的に異な
る誘導体の数がずっと多く、従って、含まれる誘導体それぞれの濃度は低くなる
。

【００２０】このように、Hilgers et al.（ＷＯ９６／２０２２２号公報；ＷＯ９６／２０
００８号公報）の開示に従って得られるスルホリポ多糖製剤は化学的に異なる多
数の誘導体を含み、それはある状況では不利となり得るものと結論づけることが
できる。また、特定の誘導体が極めて少量でしか存在しないということも不利と
なり得る。

【００２１】スルホリポ多糖の欠点は様々な物理的、化学的および物理化学的特性（溶解度
、張力活性など）を有することであり、それらの意図される使用（例えば、洗剤
または乳化剤として）には適当なものではあるが、他の分子とともに使用するに
は、かつ／または他の使用には適当でない。このため、「適当な」スルホリポ多
糖誘導体から「不適当な」スルホリポ多糖誘導体を分離することが望まれる。こ
のような分離は当技術分野で周知の従来の分離技術によって行うことができる。
しかし、記載したように、スルホリポ多糖誘製剤中の「適当な」誘導体の濃度は
比較的低い。また、「不適当な」スルホリポ多糖誘導体と「適当な」スルホリポ
多糖誘導体の化学特性および物理特性は酷似している可能性がある。従って、分
離方法は煩雑で、コストも時間もかかる。

【００２２】 Hilgers et al.（ＷＯ９６／２０２２２号公報；ＷＯ９６／２０００８号公報
）により開示されているスルホリポ多糖製剤のさらなる欠点としては、比較的大
量の有機溶媒が用いられ、最終のスルホリポ多糖製剤からこれを除去する必要が
あるということである。これは困難であることが多く、かつ／または特に工業規
模では難しく、コストがかかり、また危険でさえある方法の使用を含む。

【００２３】従って、種々の目的のための幅広い用途を可能とする物理化学的および／また
は生物学的および／またはバイオ医薬的特性を有する糖誘導体が依然として必要
とされていることは明らかである。さらに、かかる糖誘導体の工業規模での容易
、安全かつ安価な製造方法も必要とされている。

【００２４】本発明の目的は、多様な水不混和分子と安定な製剤を形成し得る糖誘導体を提
供することにある。目的の糖誘導体は極めて有利な物理的および／または物理化
学的および／または生物学的および／または医薬的特性を有するものであり、医
療用途、例えば、ワクチンおよび／またはワクチンアジュバントの製造における
用途など、種々の用途に好適なものとなる。本発明の目的は、さらに、かかる糖
誘導体の簡便、容易かつ安価な製造方法を提供することにある。

【００２５】本発明によれば、極めて有利な化学的、物理的および物理化学的特性を有する
糖誘導体が提供される。これらの誘導体は、単糖および二糖分子に対する種々の
化学的（および／または酵素的）修飾によるものである。

【００２６】本発明は、単糖分子（単糖分子には開放された水酸基が３、４または５個ある
）または二糖類（二糖分子には開放された水酸基が好ましくは８個ある）の開放
された水酸基の少なくとも１つが修飾されている糖誘導体に関する。これらの修
飾は、水酸基の水素原子または水酸基それ自体全体のいずれかの、多様な置換基
の１つによる置換である。このようにして、行われた置換の数およびタイプに応
じて、所望の特性を有する単糖または二糖誘導体が得られる。

【００２７】特に、本発明は、１個〜Ｎ−１個の脂肪酸エステル基（Ｎはその誘導体が誘導
される単糖または二糖の水酸基の数である）を有する新規な単糖または二糖誘導
体に関する。好ましい実施態様によれば、単糖または二糖誘導体は、１個〜Ｎ−
１個の陰イオン基をさらに含んでなり、この場合には、脂肪酸エステル基と陰イ
オン基の合計数はＮを超えない。陰イオン基と脂肪酸エステル基の合計数は１〜
Ｎである。好ましくは、単糖または二糖誘導体は２個以下の開放された水酸基を
有し、水酸基、脂肪酸エステルおよび陰イオン基の合計数はＮを超えない。

【００２８】好ましい実施態様によれば、二糖誘導体は少なくとも２個、さらに好ましくは
少なくとも３個、さらに好ましくは少なくとも４または５個、最も好ましくは少
なくとも６個、かつＮ−１個以下の脂肪酸エステル基と、少なくとも１個、かつ
Ｎ−２個以下、さらに好ましくはＮ−３個以下、さらに好ましくはＮ−４または
Ｎ−５個以下、最も好ましくはＮ−６個以下の陰イオン基を有し、脂肪酸エステ
ルと陰イオン基の合計数はＮを超えない（Ｎはその誘導体が誘導される二糖の水
酸基の数である）。

【００２９】本発明による単糖誘導体は、好ましくは、少なくとも２個、さらに好ましくは
少なくとも３または４個、かつＮ−１個以下の脂肪酸エステルと、少なくとも１
個、かつＮ−２個以下、さらに好ましくはＮ−３個以下の陰イオン基を有し、脂
肪酸エステルと陰イオン基の合計数はＮを超えない（Ｎはその誘導体が誘導され
る二糖の水酸基の数である）。

【００３０】従って、本発明による特に好ましい誘導体化単糖は、少なくとも１個の陰イオ
ン基と少なくとも２個の脂肪酸エステルを有し、陰イオン基と脂肪酸エステルの
合計数は３〜５の範囲であり、特に好ましい誘導体化二糖は、少なくとも１個の
陰イオン基、好ましくは１または４個の陰イオン基と、少なくとも１個の脂肪酸
エステルを有し、陰イオン基と脂肪酸エステルの合計数は６〜８個の範囲、好ま
しくは７または８個である。

【００３１】本明細書において「脂肪酸エステル基」または「脂肪酸基」とは、少なくとも
８個の炭素原子の直鎖炭化水素鎖を含んでなる脂肪酸エステル基をいう。本明細
書において「陰イオン基」とは、負電荷を持つ（すなわち、中性ｐＨまたはその
誘導体が適用される環境のｐＨで負電荷を有する）部分である。かかる陰イオン
基としては、例えば、硫酸基、スルホン酸基またはリン酸基が挙げられる。好ま
しい陰イオン基としては、「硫酸エステル基」、すなわち一般式ＳＯ_２−ＯＲを
有する基、「リン酸エステル基」、すなわち一般式ＰＯ_２−（ＯＲ）_２（ここで
、Ｒは一価の陽イオンを形成する原子および／または分子の群から選択される）
が挙げられる。「水酸基」とは、式−ＯＨを有する基をいう。

【００３２】本明細書において「糖誘導体」とは、単糖および二糖誘導体をいう。

【００３３】本発明による糖誘導体は、有利には水不混和分子の乳化剤として用いられる。
水不混和分子の本発明による糖誘導体との複合体形成により、その水不混和分子
製剤のバイオアベラビリティー、生体活性および安定性に関する著しい利点がも
たらされる。糖誘導体と標的分子の間の会合の向上は、同時に水不混和分子製剤
のバイオアベラビリティー、生体活性および／または医薬活性、ならびに物理特
性（例えば安定性）に改良をもたらす。本発明の単糖または二糖誘導体の物理化
学的特性は、存在する陰イオン基の数と脂肪酸エステル基の数（および脂肪酸エ
ステル基に対する陰イオン基の割合）（また、小さな程度ではあるが水酸基の数
）、ならびに陰イオン基の対イオンの性質および脂肪酸エステル基のタイプおよ
び性質によって異なる。本発明による単糖誘導体は、好ましくは少なくとも１個
かつ３または４個以下の陰イオン基を有し、二糖誘導体は、好ましくは少なくと
も１個かつ７個以下の陰イオン基を有する。

【００３４】本発明による糖誘導体はさらに、ワクチンのアジュバントとしての使用に極め
て適している。抗原性成分と本発明の糖誘導体との複合体を形成することで、そ
の抗原性成分製剤のバイオアベラビリティー、生体活性および安定性が向上する
とい点で著しい利点がもたらされる。糖誘導体と抗原性成分との会合における向
上は、ワクチンの効力および／または安定性が同時に改良され、免疫反応が増強
するか、または免疫系が活性化され得る。本明細書において「抗原性成分」とは
、ウイルス、細菌、マイコプラズマ、寄生虫または腫瘍細胞などの抗原自体、微
生物サブユニット、タンパク質、多糖、ペプチド、糖タンパク質、多糖−タンパ
ク質コンジュゲート、ペプチド−タンパク質コンジュゲートなどのアレルゲンな
ど、またはそれに対して免疫応答が生じると考えられる他のいずれかの物質であ
るいずれかの成分または材料をいう。この抗原性成分は、例えば１以上の活性生
物、不活化した生物、またはいわゆるサブユニット（後者は例えば、合成により
、または組換えＤＮＡ技術により製造されたもの、あるいは生物から単離された
もの）からなるか、あるいはそれらを含有し得る。抗原性成分はさらに、抗原、
例えば免疫化された被験体（そこで抗原性成分の形成を誘導することができる）
の宿主細胞（のＤＮＡ）に組み込むことができるＤＮＡまたはＲＮＡ配列を誘導
することができるいずれの成分をもいう。かかるヌクレオチド配列を含んでなる
ワクチンはまた、ＤＮＡワクチンまたはＲＮＡワクチンとも呼ばれる。

【００３５】本発明による単糖誘導体は一般式Ｃ_５Ｈ_１０Ｏ_５を有するペントースまたは一
般式Ｃ_６Ｈ_１２Ｏ_６を有するヘキソースから誘導されるのが好ましい。好適なペ
ントースは、アラビノース、リボース、キシロースからなる群から選択され得る
。好適なヘキソースは、アロロース、アルトリオース、フルクトース、ガラクト
ース、グルコース、グロース、イノシトール、マンノースおよびソルボースから
なる群から選択され得る。好ましくは、新規な単糖誘導体はフルクトース、ガラ
クトースまたはグルコースから誘導される。

【００３６】本発明による二糖誘導体は、好ましくは一般式Ｃ_１２Ｈ_２２Ｏ_１１の二糖から
誘導され、セロビオース、ゲンチオビオース、ラクトース、ラクツロース、マル
トース、メリビオース、スクロースおよびツラノースからなる群から好適に選択
され得る。好ましくは、新規な二糖誘導体はラクトース、マルトースまたはスク
ロースから誘導される。最も好ましくは、本発明による糖誘導体はスクロースか
ら誘導される。

【００３７】脂肪酸エステル基は、好ましくは−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ_３（
式中、ｘは４〜２４、好ましくは４〜２２、さらに好ましくは６〜１８、最も好
ましくは６〜１４である）の一般化学構造を有する直鎖炭素鎖エステル基、−Ｏ
−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−ＣＨ_３（式中、ｘ＋
ｙは４〜２４、好ましくは４〜２２、さらに好ましくは６〜１４である）の一般
構造を有するエステル基、または−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ＝ＣＨ
−（ＣＨ_２）_ｙ−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ_２）_ｚ−ＣＨ_３（式中、ｘ＋ｙ＋ｚは２〜
２０、好ましくは４〜１８、さらに好ましくは６〜１４である）の一般構造を有
する基である。これらの脂肪酸エステル基の組合せもまた存在し得る。

【００３８】 −Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ_３の一般構造を有する特に好ましい脂
肪酸エステル基は、ｘが４（ヘキサノン酸）、６（オクタノン酸）、８（デカン
酸）、１０（ドデカン酸；本明細書ではラウリン酸とも呼ばれる）、１２（ミリ
スチン酸としても知られるテトラデカン酸）、１４（パルミチン酸としても知ら
れるヘキサデカン酸）、および１６（ステアリン酸としても知られるオクタデカ
ン酸）であるものである。−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ＝ＣＨ−（Ｃ
Ｈ_２）_ｙ−ＣＨ_３の一般構造を有する好ましい脂肪酸エステル基は、ｘ＋ｙが１
４（例えばオレイン酸）であるものである。−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−
ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ_２）_ｚ−ＣＨ_３の一般構造を有
する好ましい脂肪酸エステル基は、ｘ＋ｙ＋ｚが１２（例えばリノール酸）であ
るものである。

【００３９】陰イオン基は、好ましくは一般構造−Ｏ−ＳＯ_２−ＯＲまたは−ＰＯ_２−（Ｏ
Ｒ）_２（ここで、Ｒは一価の陽イオンを形成する原子および／または分子からな
る群から選択される）を有する。Ｒの例としては、Ｈ^＋、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、Ｌｉ^＋またはＮＨ_４ ^＋が挙げられる。特定の具体例としては、硫酸エステル基−Ｏ−Ｓ
Ｏ_２−ＯＨ、−Ｏ−ＳＯ_２−ＯＮａ、または−Ｏ−ＳＯ_２−ＯＮＨ_４を有する糖
誘導体が挙げられる。これらの硫酸エステル基の組合せも存在し得る。

【００４０】本発明はさらに、上記単糖および二糖誘導体の容易、安全かつ安価な製造方法
に関する。本方法は、単糖または二糖を塩化アコイルおよびスルホン化剤と反応
させることを含んでなる。単糖または二糖は、該塩化アコイルおよびスルホン化
剤と順次に反応させてもよいし、同時に反応させてもよい。

【００４１】以下に詳細に論じるように、（１）用いる単糖または二糖の性質を変えること
、（２）用いる種々の出発材料の量（割合）を変えること、（３）用いる塩化ア
コイルの性質を変えること、および／または（４）精製に用いる水溶液において
用いられる陽イオンを変えることのいずれかにより、種々の単糖または二糖誘導
体製剤が得られ、それらは特異な物理化学的特性を有することが分かっている。
このようにして調節できる単糖または二糖誘導体の特性としては、水性溶媒（水
）および非水性（非極性）溶媒中での溶解度、他の分子とミセルおよび混合ミセ
ルを形成する能力、疎水面への吸着力、親水面への吸着力、生体材料への吸着力
、および界面活性／張力活性がある。

【００４２】好ましい塩化アコイルとしては、塩化ヘキサノイル、塩化オクタノイル、塩化
デカノイル、塩化ドデカノイル（塩化ラウロイル）、塩化テトラデカノイル（塩
化ミリストイル）、塩化ヘキサデカノイル（塩化パルミトイル）、塩化オクタデ
カノイル（塩化ステアロイルおよび塩化オレオイル）、およびこれらの混合物が
ある。

【００４３】本明細書では特定の具体例として、水に対する溶解度が高く、有機溶媒中の溶
解度が低く、疎水分子との結合力が小さく、かつ、疎水面との結合力が小さい単
糖または二糖誘導体が開示される。この点で塩化アコイルは塩化オクタノイル、
塩化デカノイル、塩化ドデカノイル、塩化テトラデカノイル、およびその混合物
の群から選択するのが好ましい。この点でさらに好ましくは、塩化アコイルは塩
化オクタノイル、塩化デカノイル、および／または塩化ドデカノイルの群から選
択される。この点で最も好ましくは、塩化アコイルは塩化デカノイルおよび／ま
たは塩化ドデカノイルである。

【００４４】本明細書では他の具体例として、水に対する溶解度が低く、有機溶媒中の溶解
度が高く、疎水分子との結合力が大きく、かつ、疎水面との結合力が大きい単糖
または二糖誘導体が開示される。この点で塩化アコイルは塩化ドデカノイル、塩
化テトラデカノイル、塩化ヘキサデカノイル、塩化オクタデカノイル、およびそ
の混合物の群から選択するのが好ましい。この点でさらに好ましくは、塩化アコ
イルは塩化テトラデカノイル、塩化ヘキサデカノイル、および／または塩化オク
タデカノイルである。この点で最も好ましくは、塩化アコイルは塩化ヘキサデカ
ノイルおよび／または塩化オクタデカノイルである。

【００４５】好ましいスルホン化剤としては、ＳＯ_３ガス、ＨＣｌＳＯ_３（クロロスルホン
酸）、ＳＯ_３−ピリジン、ＳＯ_３−２−メチルピリジン、ＳＯ_３−２，６−ジメ
チルピリジン、ＳＯ_３−ジメチルホルムアミド、ＳＯ_３−トリメチルアミン、Ｓ
Ｏ_３−トリエチルアミン、ＳＯ_３−ジメチルアラニン、ＳＯ_３−Ｎ−エチルモル
ホリン、ＳＯ_３−ジエチルアラニン、ＳＯ_３−ジオキサンまたはこれらの混合物
がある。スルホン化剤は、好ましくはＳＯ_３−ピリジンまたはＳＯ_３ガスである
。

【００４６】単糖または二糖は、１：１〜１：Ｎ−１のモル比の塩化アコイル、および１：
１〜１：Ｎ−１のモル比のスルホン化剤と反応させるのが好ましく、ここでは塩
化アコイルエステルの量とスルホン化剤の量の合計がＮを超えず、Ｎはその誘導
体が誘導される単糖または二糖の水酸基の数である。当業者ならば試薬間のモル
比を適宜選択することで、所望の数の脂肪酸エステル基および硫酸エステル基を
有する単糖または二糖誘導体を便宜に製造することができる。

【００４７】単糖または二糖は、無水の非プロトン性媒質中で塩化アコイルおよびスルホン
化剤と反応させるのが好ましい。本方法は、好ましくは、可能な限り少量の有機
溶媒中で行う。好ましくは、これらの有機溶媒は、それらが例えば沈殿、濾過、
結晶化または蒸発により反応混合物から容易に除去できるように選択する。好ま
しい有機溶媒はピリジンおよびＮ−メチルピロリジノンである。極めて好ましい
のは無水ジメチルホルムアミドと無水ピリジンの混合物、および無水Ｎ−眼IT類
似体ピロリジノンと無水ピリジンの混合物である。

【００４８】ピリジンを用いる場合、その量は好ましくは用いる塩化アコイルの量の二倍未
満である。用いるピリジンの量は塩化アコイルの量と同等であるのがさらに好ま
しい。

【００４９】例えば、単糖または二糖を塩化アコイルと反応させて二糖脂肪酸エステルを形
成した後、それをスルホン化剤と反応させることが可能である。

【００５０】好ましくは、単糖または二糖を塩化アコイルと約６０〜７０℃で４〜８時間、
好ましくは約６時間反応させる。この後、反応混合物を周囲温度で１８時間まで
静置することが望ましい。スルホン化剤との反応は周囲温度〜７０℃の間で少な
くとも６時間行うことが好ましい。好ましい実施態様によれば、単糖または二糖
を塩化アコイルおよびスルホン化剤と同時に約６０〜７０℃で少なくとも６時間
反応させる。この後、反応混合物を周囲温度で１８時間まで静置することが望ま
しい。

【００５１】別の好ましい実施態様によれば、単糖または二糖を、まず周囲温度で塩化アコ
イルおよびスルホン化剤と反応させ、その後温度を約５０〜７０℃、好ましくは
５５〜７０℃、さらに好ましくは約６０℃にする。

【００５２】この点で、周囲温度で処理を行うということは、その処理に対して温度が重要
なものではないということである。かかる特徴から、広範囲な温度で、同時に省
力的な広範囲な条件下で処理が行われる。約１０℃といった低い周囲温度であっ
てもよいと考えられる。好ましい周囲温度は約１５℃以上、さらに好ましくは約
１８℃以上である。さらに、好ましい周囲温度は約５０℃以下、さらに好ましく
は約４０℃以下、最も好ましくは約２５℃以下である。

【００５３】本発明の単糖または二糖誘導体は、単糖または二糖と塩化アコイルおよびスル
ホン化剤との二段階反応によって得られる。好ましい実施態様によれば、この反
応は単糖または二糖を塩化アコイルおよびスルホン化剤と同時に反応させ、一段
階で行われる。もちろん、単糖脂肪酸エステルまたは二糖脂肪酸エステル、例え
ばスクロースラウリン酸エステルＬ−１９５(Mitsubishi, Japan)、スクロース
ラウリン酸エステルＬ−５９５(Mitsubishi, Japan)、またはスクロースステア
リン酸エステルＳ−１９５(Mitsubishi, Japan)、から出発して、この出発材料
を１以上のスルホン化剤と反応させて所望の単糖または二糖誘導体を形成するこ
ともできる。

【００５４】上述のように、使用する有機溶媒は可能な限り少量であることが好ましい。こ
の点で、単糖または二糖を有機溶媒に加熱溶解して透明な均質溶液を得ることが
好ましい。特に、この均質溶液の調製方法は有機溶媒に比較的わずかしか溶けな
い、または有機溶媒に対して難溶性の糖、例えばスクロースおよびラクトースに
好適である。これらの糖を最少量の有機溶媒へ溶解するため、温度を＞８０℃ま
で上昇させる。好ましくは、有機溶媒の温度を＞９０℃まで上昇させる。

【００５５】好ましい実施態様によれば、反応完了後、有機溶媒中の単糖または二糖誘導体
をＮａＯＨ、ＮＨ_４ＯＨ、ＫＯＨ溶液で中和し、Ｎａ^＋、Ｋ^＋またはＮＨ_４ ^＋の
うちの１つの陽イオンを含む硫酸エステル基を有する単糖または二糖誘導体を得
る。

【００５６】目的の単糖または二糖誘導体を冷却して回収すると、結果として２または３以
上の異なる相が形成され、その１つの相に単糖または二糖誘導体が多く含まれて
いる。これを濾過、デカンテーションなどをはじめとする当技術分野で周知の方
法により回収する。残留する有機溶媒は、例えば高温および減圧で蒸発させるか
、または水相で洗浄することによりこの相から除去する。冷却後、有機溶媒およ
び反応で形成された副生成物はいずれも、単糖または二糖誘導体が全くまたはほ
とんど含まれない１つまたは２つの相に存在すると考えられる。この相またはこ
れらの相は濾過、デカンテーションなどをはじめとする当技術分野で周知の方法
により除去できる。誘導体化した糖類は当技術分野で公知のその他の技術により
さらに精製してもよい。

【００５７】単糖または二糖誘導体を、単糖または二糖誘導体の製造に用いた有機溶媒と不
混和性の液体を用いて反応混合物から抽出することができる。これによって、単
糖または二糖誘導体を副生成物およびその製造に用いた有機溶媒から分離するま
たは単離する。この点で、上記の液体が揮発性有機溶媒であるか、または糖誘導
体の最終の製剤の構成要素であることが好ましい。上記の液体が油状物質であり
、最終の製剤がエマルションであることがさらに好ましい。最も好ましくは、上
記の液体はスクアランである。

【００５８】本発明による単糖誘導体および二糖誘導体の合成に関与する２つの化学反応は
ランダム反応であると考えられるため、単糖または二糖一分子当たりの硫酸エス
テル基の数が異なり、かつ／または単糖または二糖一分子当たりの脂肪酸エステ
ル基の数が異なり、その結果、それらが有する構造および物理化学的特性が異な
る様々な単糖または二糖誘導体の集合物が得られる。

【００５９】しかしながら、単糖または二糖誘導体の製造における化学的に異なる誘導体の
数は、従前に記載されたHilgers et al.により開示されたスルホリポ多糖の製造
（ＷＯ９６／２０２２２号公報；ＷＯ９６／２０００８号公報）によるものより
もかなり少ないことは特筆すべきである。二糖分子における脂肪酸エステル基、
硫酸エステル基および水酸基の分布を考慮しない場合、本発明に従って８個の水
酸基を有する二糖から製造される製剤中の異なる誘導体の数は２８である。二糖
分子における脂肪酸エステル基、硫酸エステル基および水酸基の分布を考慮する
場合には、本発明に従って８個の水酸基を有する二糖から得られる異なる誘導体
の数は３^８＝６，５６１である。これらの数がスルホリポ−シクロデキストリン
のものに比べて低いこと（それぞれ２１０と１，４９４，３３６，１９５であっ
た）がそれらの使用および製造においてかなり有利である。

【００６０】従って、単糖または二糖誘導体を製造する本方法によってかかる誘導体の混合
物が得られる。これらの誘導体は、結晶化、沈殿、濾過、蒸発、透析または限外
濾過などの技術を用いて分離することができる。用いた有機溶媒および形成され
た副生成物の除去については、得られた様々な単糖または二糖の分離と同時に行
うことが好ましい。好ましくは、これを相分離、クロマトグラフィー、沈殿、溶
解、抽出、またはこれらの技術の組合せによって行う。さらに好ましくは、単糖
または二糖誘導体を凍結乾燥により乾燥単糖または二糖誘導体製剤として有機溶
媒から分離する。好ましくは、かかる凍結乾燥は、室温、１０ミリバール未満の
内部圧力および−２５℃未満の低温トラップで行う。

【００６１】特に、本明細書では、約１モルの二糖を、それによって製造される二糖一分子
当たりの各脂肪酸エステル基に対し約７モルの塩化アコイルと、それによって製
造される二糖一分子当たりの各硫酸エステル基に対し約１モルのスルホン化剤ま
たは各リン酸エステルに対し約１モルのホスホン化剤と接触させる（ただし、塩
化アコイルおよびスルホン化剤の全モル数はＮ以下である（ここで、Ｎは接触し
た二糖の水酸基総数である））工程による、特定の数および種類の脂肪酸エステ
ル基および陰イオン基を有する二糖誘導体を多く含有する製剤の製造方法を開示
する。

【００６２】本発明による単糖または二糖誘導体製剤の水溶性は、（１）本発明による方法
で使用するスルホン化剤またはホスホン化剤の量を増やすこと、かつ／または本
発明による方法で使用する塩化アコイルの量を減らすことにより高められ、従っ
て、存在する脂肪酸エステル基の数に応じた数の陰イオン基を有する単糖または
二糖誘導体が得られる。また、高い水溶性は（２）短い炭素鎖の塩化アコイルを
使用することによっても達成され、比較的短い炭素鎖の脂肪酸エステル基を有す
る単糖または二糖誘導体が得られる。これについては、特に塩化アコイル試薬と
して、塩化オクタノイル、塩化デカノイル、塩化ドデカノイル（塩化ラウロイル
）および／または塩化テトラデカノイルによって達成してもよい。

【００６３】逆の作用を利用して水溶性を低下させてもよいし、または非極性溶媒への溶解
性を高めてもよい。これについては、特に塩化アコイル試薬として、塩化ドデカ
ノイル（塩化ラウロイル）、塩化テトラデカノイルおよび／または塩化オクタノ
イルによって達成してもよい。同じ方法で単糖または二糖誘導体の疎水面への結
合力が高められる。

【００６４】本発明による単糖または二糖誘導体のミセル形成力は、本発明による方法で使
用するスルホン化剤またはホスホン化剤の量を増やすこと、かつ塩化アコイルの
量を増やすことにより提供される。同じ方法で表面活性／張力活性が高められる
。

【００６５】この点で、本発明による単糖および二糖誘導体がその他の化合物と大きな混合
ミセルを形成することは、特筆すべきである。例えば、単糖一分子当たり１硫酸
エステル基および３脂肪酸エステル基の硫酸エステル／脂肪酸エステル比の単糖
誘導体、または二糖一分子当たり１硫酸エステル基および７脂肪酸エステル基の
硫酸エステル／脂肪酸エステル比の二糖誘導体がポリソルベート８０と混合ミセ
ルを形成することが認められている。これらのミセルは高分子量を排除する限外
濾過膜を通らない。その他の化合物との混合ミセルの大きさは、親水基（すなわ
ち硫酸エステル）と疎水基（すなわち脂肪酸エステル）の比率、およびそれと結
合する分子の物理的特徴によって決まる。

【００６６】特定の数および種類の陰イオン基、例えば硫酸エステル基および脂肪酸エステ
ル基を有する単糖または二糖誘導体を多く含有する製剤が、特定分子の安定性、
反応性、移動性および／またはバイオアベイラビリティーを改変し得る特定の水
不混和分子、例えば食品成分、色素、香味剤、オイル、薬剤分子および抗原と複
合体を形成し得ることが分かっている。

【００６７】本発明による単糖および二糖誘導体は種々の医療用途および製薬用途に使用し
てもよい。

【００６８】本発明による単糖および二糖誘導体によれば、分子（薬剤分子または抗原化合
物など）と複合体を形成した場合、固体、半固体および／または液体製剤の分子
のバイオアベイラビリティーに改良がもたらされる。また、本発明による単糖お
よび二糖誘導体によれば、安定性が向上し、貯蔵寿命が向上する。さらに、本発
明による単糖および二糖誘導体は、これと複合体を形成する分子の副作用（毒性
）を弱める。最後に、本発明による単糖および二糖誘導体によれば、均質な取り
扱いやすい注射溶液（難溶性薬剤）の提供が可能となる。

【００６９】本発明の単糖および二糖誘導体（およびその製剤）の使用によって優れた利点
がもたらされる医療適用例はワクチンアジュバントである。好適なアジュバント
としては、水中油エマルション（水中スクアラン、水中鉱油、水中ヘキサデカン
、水中大豆油、水中スクロース脂肪酸エステルなどを含む）、油中水エマルショ
ン（鉱油中水、スクアラン中水、スクロース脂肪酸エステル中水などを含む）ま
たは水中油中水エマルション（水中鉱油中水、水中スクアラン中水、水中スクロ
ース脂肪酸エステル中水などを含む）と一般的に呼ばれるものが挙げられる。

【００７０】ワクチン接種は、ヒトおよび動物の双方の健康のために感染症を予防し、抑制
する最も原価効率のよい手段の１つである。ワクチン接種または免疫化では、関
連した抗原性成分および／またはエピトープに対する好適な免疫応答様式が十分
なレベルおよび／または期間で起こる。免疫応答は、例えば血清中の抗体力価、
リンパ球の増殖応答、人為または自然感染に対する防御、防御期間、非応答動物
の数などによって確認できる。

【００７１】多数の標的動物種、例えばブタ、畜牛、飼鳥類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒトなど
では、ウイルス、細菌、寄生虫または他のいずれかの感染体、例えばインフルエ
ンザウイルス、肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、パルボウイルス
、狂犬病ウイルス、連鎖球菌、髄膜炎菌、クロストリジウム属、大腸菌、サルモ
ネラ菌、カンピロバクター、アクチノバチルス、リステリア菌、マラリア、トリ
パノソーマ属、肺線虫、原生動物、マイコプラズマ、クラミジアなどに引き起こ
される疾患を、ワクチン接種によって予防または抑制することができる。

【００７２】多くの場合、不活化抗原に対する免疫応答およびいくつかの場合でも活性抗原
に対する免疫応答が低すぎて十分なレベルの防御または十分な期間の防御が確立
することができない。そのため、これらの抗原に免疫応答を刺激するアジュバン
トを添加する。

【００７３】理想的なアジュバントは防御に関連する抗原および／またはエピトープに対す
る関連免疫応答様式（体液性および細胞性）を重大な副作用なく増強する。ある
免疫様式を刺激するアジュバントはある用途には好適であるが他の用途には不適
当である。さらに、ある抗原に対する免疫を刺激するアジュバントはある用途に
は好適であるが他の用途には不適当である。強力なアジュバントは、例えば多く
の異なる抗原に対する抗体媒介性および細胞媒介性免疫を増強する。アジュバン
トが異なる抗原へ異なる影響を及ぼすことは、特にいくつかの異なる抗原を含有
する組合せワクチンに対しては明らかに不利となる。抗原の種類、動物種、免疫
応答様式に関して強い活性を示すアジュバントには重要な利点がある。

【００７４】アジュバントをin vivoにおいて抗原を誘導し得るＤＮＡまたはＲＮＡにおい
て使用する場合、アジュバントが宿主のＤＮＡにＤＮＡまたはＲＮＡ配列をうま
く組み込む（トランスフェクション）手助けをすることが好ましい。

【００７５】多くの異なる種類のアジュバントが知られているが、ごくわずかなものだけが
商業的なヒトまたは家畜ワクチンに使用されているに過ぎない。ワクチンに選ば
れるアジュバントの種類は、標的動物種、アジュバントの効力、アジュバントの
毒性、アジュバントの質、アジュバントの原価などをはじめとするいくつかの要
因によって決められる。アジュバントの効力および毒性については、効力が高け
れば毒性も高く、毒性が低ければ効力も低いといった関係があることは十分に知
られている。高い毒性は局所反応、例えば炎症、はれ、膿瘍形成、肉芽腫、壊死
など、および／または全身反応、例えば痛み、熱、高血圧、過敏症、食欲不振、
体重の減少などとして現れる。アジュバントの毒性はその用途をかなり限定する
ものであり、ある動物種では許容されるものであっても、別の動物種では許容さ
れない。

【００７６】実験動物での標準アジュバントは強力なアジュバントであるフロイントの完全
アジュバントである。その毒性、特に局所作用によって、それはヒトまたは食用
動物もしくは伴侶動物には使用できない。畜牛、ヒツジおよびブタなどの食用動
物では、多くの場合、鉱油のエマルションが選ばれるアジュバントである。例と
しては、水中鉱油エマルション（Ｏ／Ｗ）、鉱油中水エマルション（Ｗ／Ｏ）お
よび水中鉱油中水エマルション（Ｗ／Ｏ／Ｗ）が挙げられる。これらのアジュバ
ントは高い免疫応答をもたらす（しかし、フロイントの完全アジュバントよりは
低い）。局所および全身副作用をはじめとする毒性によって伴侶動物およびヒト
における使用を避ける。ネコ、イヌおよびウマなどの伴侶動物では比較的安全な
アジュバント、例えばＩＳＣＯＭ、Ａｌ（ＯＨ）_３およびポリアクリレートを使
用する。一般に、これらのアジュバントは鉱油エマルションよりも誘導する応答
が低いが、不利益な副作用は少ない。ヒトでは、アルミニウム塩が認可された唯
一のアジュバントである。それらは家畜ワクチンに使用される多くのアジュバン
トよりも低い免疫応答しか起こさないが、比較的安全であると考えられる。

【００７７】よって、強いアジュバントの欠点は毒性が比較的高いことである。安全なアジ
ュバントの欠点は効力が比較的低いことである。

【００７８】効力と毒性に加え、アジュバントおよびアジュバントを含有するワクチンの品
質が極めて重要である。品質の基準としては、粘性、化学的安定性、物理的安定
性、物理化学的安定性などが挙げられる。粘性が高いと製品の取り扱い、例えば
製品のシリンジへの吸引または製品の動物への投与が難しくなる。粘性が低いと
製品の取り扱いが容易である。化学的、物理的または物理化学的安定性が低いと
ワクチンの貯蔵寿命が短くなり、製品の貯蔵および輸送には厳しい条件が必要と
なる。化学的、物理的および物理化学的安定性が高いと貯蔵寿命が長く、製品の
ロジスティックスが容易となる。食用動物に使用される鉱油エマルションを含有
するワクチンは高い粘性を有しており、不安定になりやすいことは十分に知られ
ている。

【００７９】上記のことから、高い効力と低い毒性を有し、広範囲の抗原に対して有効であ
りかつ取り扱いが容易であるアジュバントの必要になお迫られていることが明ら
かである。

【００８０】本発明によれば、このようなアジュバントが提供される。上記の単糖または二
糖誘導体が種々のワクチンのアジュバントとして非常に好適であることが分かっ
た。よって、本発明は本発明の単糖または二糖誘導体形のアジュバントおよび１
以上の上記の単糖または二糖誘導体を含んでなるワクチンを製造するためのアジ
ュバント製剤に関する。アジュバント製剤はさらに医薬上許容される担体を含ん
でなってもよい。好適な担体の例としては、生理食塩水および水中油エマルショ
ン、好ましくは水中スクアランエマルションが挙げられる。

【００８１】本発明による特に好ましいアジュバント製剤は、本発明による単糖または二糖
誘導体（Ｉ）、水不混和性液相または水不混和性固相（II）、乳化剤または安定
剤（III）および所望により水相（IV）を含んでなる。

【００８２】本発明による糖誘導体はいずれもアジュバントとして使用できる。この誘導体
は、例えば１〜３個、好ましくは１または２個の脂肪酸基と０〜３個、好ましく
は１または２個の陰イオン基を有するペントース（ただし、陰イオン基と脂肪酸
基の合計は４個を超えない）とすることができる。

【００８３】１〜４個、好ましくは１〜３個の脂肪酸基と０〜４個、好ましくは１〜３個の
陰イオン基を有するヘキソース（ただし、陰イオン基と脂肪酸基の合計は５を超
えない）もまた、本発明によるアジュバントとしての使用に好適である。

【００８４】アジュバントとして好ましい二糖誘導体は、１〜７個、さらに好ましくは３〜
７個、最も好ましくは４〜７個の脂肪酸基と０〜７個、さらに好ましくは０〜６
個、最も好ましくは１〜５個の陰イオン基（ただし、陰イオン基と脂肪酸基の合
計は８個を超えない）を含んでなるものとすることができる。

【００８５】１個の陰イオン基、好ましくは硫酸エステル基と５〜７個の脂肪酸エステル基
を有する二糖誘導体で特に優れた結果が得られた。また、４個の陰イオン基、好
ましくは硫酸エステル基と４個の脂肪酸エステル基を有する二糖誘導体がアジュ
バントとして極めて安定した性能を示した。

【００８６】本発明によるアジュバント製剤には、通常、アジュバントとして本発明による
１以上の糖誘導体が０．１〜１０００ｇ／ｌ、好ましくは０．５〜５００ｇ／ｌ
、さらに好ましくは１〜３２０ｇ／ｌの濃度で存在する。

【００８７】水不混和性液相は油状物質が好ましい。好適な油状物質としては、例えば大豆
油、落花生油、カノーラ油、オリーブ油、ベニバナ油、トウモロコシ油、マゾー
ラ油、肝油、扁桃油、綿実油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、
パルミチン酸イソプロピル、鉱油、ミリスチルアルコール、オクチルドデカノー
ル、桃仁油、ゴマ油、オレイン酸ミリスチル、オレイン酸セチルおよびパルミチ
ン酸ミリスチルが挙げられる。その他の好適な油状物質としては、飽和、不飽和
および／または部分的水素化脂肪酸からなる生体適合性のある油、シリコーン含
有油、例えばオレイン酸のグリセロールトリグリセリドエステルのような、飽和
および不飽和鎖のＣ_１２〜Ｃ_２４脂肪酸で構成されたトリグリセリドのような合
成油、テルペン、リノレン、スクアレン、スクアラン、スクアラミンならびに
ＦＣ−４０、ＦＣ−４３、ＦＣ−７２、ＦＣ−７７、ＦＣ−７０、ＦＣ−７５、
ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロオクチルブロミド（ペルフルオロブロンと
しても知られる）、ペルフルオロオクチルヨージドとして知られるペルフルオロ
化合物をはじめとするフッ素化油、もしくはこれらの混合物が挙げられる。

【００８８】水不混和性相（II）がスクアラン、スクアレン、鉱油、植物油、ヘキサデカン
、過フッ化炭化水素またはシリコーン油であるアジュバント製剤で極めて優れた
結果が得られた。

【００８９】典型的には、水不混和性相（II）はアジュバント製剤において０〜６４０ｇ／
ｌ、好ましくは０〜４８０ｇ／ｌ、さらに好ましくは１０〜３２０ｇ／ｌの様々
な濃度で存在する。

【００９０】アジュバント製剤が水不混和性固相を含んでなる場合、かかる固相が水に不溶
性の塩であることが好ましい。特に好適なものは不溶性アルミニウムまたはカル
シウム塩もしくはこれらの混合物である。好ましい塩としては、水酸化アルミニ
ウム、リン酸アルミニウム、リン酸カルシウムシリカおよびこれらの混合物が挙
げられる。

【００９１】乳化剤または安定剤（III）は洗剤であってもよい。好適な乳化剤および／ま
たは安定剤としては、例えばコレステロール、ジエタノールアミン、モノステア
リン酸グリセリル、ラノリンアルコール、レシチン、モノおよびジグリセリド、
モノエタノールアミン、オレイン酸、オレイルアルコール、ポロキサマー、例え
ばポロキサマー１８８、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８１、非イオンブ
ロック重合体（例えばBASFのＰＬＵＲＯＮＩＣＳ）、ステアリン酸ポリオキシエ
チレン５０、ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル１０オレイルエーテル、
ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポ
リソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート
８０、二酢酸プロピレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、
ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン
、モノオレイン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸
ソルビタン、ステアリン酸、トリトンＸ−１００、サポニン、精製サポニン（例
えばＱＳ２１）、高分子（例えばポリアクリレート）が挙げられる。

【００９２】乳化剤または安定剤（III）が、親水性親油性バランス値が１０を超える非イ
オン洗剤、糖脂肪酸エステル、または親水性親油性バランス値が１０を超える陰
イオン洗剤であるアジュバント製剤で特に優れた結果が得られた。

【００９３】好ましい乳化剤または安定剤（III）としては、ポリソルベート２０、ポリソ
ルベート８０、ポリソルベート８５、トリトンＸ−１００、サポニン、レシチン
、非イオンブロック共重合体、スクロース脂肪酸エステル、糖ラウリル酸エステ
ル、例えばMitsubishi-Kagaku Food corporationのＲｙｏｔｏ糖エステルＬ１６
９５が挙げられる。ポリソルベート８０およびスクロース脂肪酸エステルが特に
好ましい。

【００９４】また、本発明の単糖または二糖をアジュバント製剤で乳化剤または安定剤（II
I）として使用することも有利である。少なくとも３個、好ましくは少なくとも
４個、かつＮ−１個以下の陰イオン基と、少なくとも１個、かつＮ−３個以下、
好ましくはＮ−４個以下の脂肪酸エステル基を有する単糖または二糖誘導体（た
だし、Ｎは誘導体を誘導する単糖または二糖の水酸基の数であり、脂肪酸と陰イ
オン基の合計数はＮを超えない）で特に優れた結果が得られた。

【００９５】典型的には、１以上の乳化剤または安定剤は、本発明によるアジュバント製剤
において全濃度０〜６４０ｇ／ｌ、好ましくは１〜４８０ｇ／ｌ、さらに好まし
くは１〜３２０ｇ／ｌで存在する。

【００９６】好適な水相（IV）としては、例えば生理食塩水、リン酸緩衝溶液、クエン酸緩
衝溶液、等張イオン溶液、等張非イオン溶液などが挙げられる。水相量の範囲は
広く、通常、０〜９９９．９ｇ／ｌ、好ましくは１０〜９９０ｇ／ｌ、さらに好
ましくは６４０〜９９０ｇ／ｌである。

【００９７】さらに、本発明は、抗原化合物および本発明による単糖または二糖誘導体を、
所望により本発明によるアジュバント製剤中に含んでなるワクチンに関する。か
かるワクチンは、アジュバントとして単糖または二糖誘導体またはかかる誘導体
の混合物を０．０５〜２５０ｇ／ｌ、好ましくは０．２５〜１２５ｇ／ｌ、さら
に好ましくは１〜８０ｇ／ｌで含んでなってもよい。これはさらに、１以上の乳
化剤または安定剤を全濃度０〜６４０ｇ／ｌ、好ましくは１〜４８０ｇ／ｌ、さ
らに好ましくは１〜３２０ｇ／ｌで含んでなってもよく、さらに水不混和性液相
、好ましくは油状物質を０〜６４０ｇ／ｌ、好ましくは１〜４８０ｇ／ｌ、さら
に好ましくは１〜３２０ｇ／ｌの様々な濃度で含んでなってもよい。

【００９８】ワクチンは上記のいずれかの抗原性成分を含有していてもよい。ワクチンの製
造については、使用するかなり前または直前のいずれかに抗原性成分を混合する
。

【００９９】本発明によるワクチンは、例えばヒトおよび動物（後者としては、例えば哺乳
類、鳥類および齧歯類（例えばブタ、畜牛、ヒツジ、ウマ、イヌ、飼鳥類）が挙
げられる）の免疫化に使用することができる。

【０１００】ワクチン、アジュバントまたはアジュバント製剤は、非経口または経口経路、
例えば筋肉内、皮内、経皮、皮下、腹膜内、皮内、鼻腔内、経鼻、経口、膣内、
排泄腔内などにおいて適用される。

【０１０１】本発明が公知のアジュバントと本発明による単糖または二糖誘導体形のアジュ
バントの組合せの使用をも意図していることに留意すべきである。

【０１０２】食用動物に関し、本発明によるアジュバントには、すでに適用されているアジ
ュバントより優れたいくつかの利点がある。例えば、局所および全身副作用が少
ないこと、動物への予防接種の不快さが少ないこと、体重増加への不利な作用が
弱まり、経済的損失が少ないこと、ワクチン残留物を含有する食肉がなくなり、
経済的損失が少ないこと、ワクチン適用者に対する自己注入の危険性が少なくな
ること、ワクチンの取り扱いの容易性の向上、製品の安定性の向上などが挙げら
れる。

【０１０３】伴侶動物に関し、本発明によるアジュバントには、すでに適用されている公知
のアジュバントより優れたいくつかの利点がある。例えば、免疫応答レベルが高
いこと、免疫応答期間が拡大すること、応答動物数が増加すること、アジュバン
トと組み合わせることができる抗原が多いことなどが挙げられる。

【０１０４】以下、限定されるものではないが、実施例を挙げて本発明を説明する。実施例以下の実施例に記載される実験のいくつかは同時に実施した。比較を容易にす
るために、選択された群の結果を例ごとに示す。結論として対照群の結果はいく
つかの実施例に示されている。

【０１０５】実施例１いわゆるスルホリポ多糖に関して従前に記載されているように(Hilgers et al
., 1986)スクロース誘導体を合成した。便宜には、微粉状スクロース(Merck)を
＜５０ミリバールにて９０℃で約６時間加熱することによって乾燥させ、無水Ｎ
−メチルピロリジノン（ＮＭＰ;Merck）および無水ピリジン(Merck)を加えた。
この混合物を透明な溶液が得られるまで約８０℃で攪拌した。塩化ドデカノイル
(Merck)を加えて反応混合物を６０℃で約６時間維持した。ＳＯ_３−ピリジン(Me
rck)を加えて反応混合物を室温で約１８時間インキュベートした。ｐＨを４Ｍの
ＮａＯＨを用いて７．０（±０．３）に調整した。Ｎ−メチルピロリジノンおよ
びピリジンを、残渣の重量減が３０分間で０．１ｇ未満となるまで高温（＜８０
℃）、減圧（＜１０ミリバール）で十分にな蒸発させ（＞６時間）、４℃で凝縮
させることで除去した。種々の誘導体に用いた出発材料の量は表１．１に示され
ている。

【０１０６】

【表１】

【０１０７】得られた生成物は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にて分析した。誘導体の
０．５ｇサンプルを４．５ｍｌのＮＭＰに溶解し、得られた２μｌの各溶液をシ
リカゲルＴＬＣプレート（ＨＰＬＣ−ＴＬＣ、順相；Analtech、Newark; Delawa
re, USA）に適用し、２３３ｍｌのジエチルエーテル＋１００ｍｌのｎ−ヘキサ
ン＋８．３ｍｌの酢酸の混合物で溶出した。スポットはプレートにメタノール中
の５０ｖ／ｖ％硫酸の溶液を噴霧し、プレートを１２０℃で１０〜３０分間加熱
することによって可視化した。結果は図１に示されている。

【０１０８】表１．１の種々のスクロース誘導体の製剤は１０ｇのスクロース誘導体を１０
ｇのポリソルベート８０(ICI)および４０ｇのスクアラン(Merck)および１９０ｇ
の０．０１ｗ／ｖ％チメロサール(Sigma)リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ−チメ
ロサール；ｐＨ７．０）の溶液と混合することによって製造した。得られた各混
合物は少なくとも４００バールの内部圧力および周囲温度にてマイクロフリュー
ダイザーモデルＹ１１０(Microfluidics Corp., Newton, USA)に３回通すことに
よって乳化した。各エマルションは顕微鏡下で観察した。１０００倍率の顕微鏡
下で、調べた１０視野につき直径が１μｍより大きい油滴が１０個より多く認め
られた場合には乳化手順を繰り返した。得られたエマルションは使用まで４℃で
保存した。

【０１０９】これらの製剤のアジュバント活性はブタで調べた。ワクチンは１容量のいずれ
かの製剤をHulst et al(1994)によって記載されるように昆虫細胞において産生
された３２μｇ／ｍｌの古典的ブタコレラウイルス糖タンパク質Ｅ２（ＣＳＦＶ
−Ｅ２；ID-DLO,Lelystad,The Netherlands）を含有する１容量の抗原製剤と混
合することによって製造した。

【０１１０】５個体のブタからなる群（１０週齢）を動物当たり２ｍｌのワクチンで筋肉内
感作した。３週間後、同一ワクチンで感作を反復した。２回目の感作を行ってか
ら３週間後、ＣＳＦＶ−Ｅ２に対する血清中の抗体力価をTerpstra et al.(Vet.
Microbiol. 9, pp 113-120, 1984)によって記載されるウイルス中和アッセイに
よって測定した。幾何平均力価（ＧＭＴ）、各群の標準偏差および真数（２指数
ＧＭＴ）を算出した。結果は表１．２に示されている。

【０１１１】動物実験には、水中スルホリポ−シクロデキストリン／スクアランエマルショ
ン（ＳＬ−ＣＤ／スクアラン／ポリソルベート８０；Hilgers et al., Vaccine
17, pp.219-228, 1999）を含めた。

【０１１２】

【表２】

【０１１３】実施例２８４．２ｇ（０．１モル）の無水スクロース(Merck)、１４９ｇ（１．５モル
）の無水Ｎ−メチル−ピロリジノンおよび７９ｇ（１モル）の無水ピリジンを丸
底フラスコに入れ、次いでこれをＲｏｔａｖａｐｏｒ（商標）(Buchi, Switzerl
and)に接続し、回転させることによって混合した。混合物を透明な溶液が得られ
るまで、９０℃まで加熱した。温度を６０℃に調節し、スクロース溶液に１５３
．３ｇ（０．７モル）のドデカノイルクロリドを入れた。フラスコ中の反応混合
物を６０℃で６時間維持した。フラスコ中の反応混合物に１５．９ｇ（０．１モ
ル）のＳＯ_３−ピリジンを入れ、反応混合物を６０℃で６時間、次いで、周囲温
度で１２時間維持した。この反応混合物を４℃で２４時間維持したところ結晶性
沈殿および２種の液相が形成した。上相を回収し、溶媒を、残渣の重量減が３０
分当たり０．１ｇ未満となるまでＲｏｔａｖｏｐｏｒ（商標）で高温（＜６０℃
）、減圧（＜１０ミリバール）で蒸発させ、４℃で凝縮させることによって除去
した（画分Ｉ）。画分Ｉのサンプルに、ｎ−ヘキサンおよびＮ−メチルピロリジ
ノンを加えた。この混合物を１０００ｇで１０分間遠心分離して透明な黄色の上
相（画分II）、白乳白色の中間相（画分III）および透明な下相を得た。画分II
および画分IIIの溶媒を、残渣の重量減が３０分当たり０．１ｇ未満となるまで
Ｒｏｔａｖａｐｏｒ（商標）で高温（＜６０℃）、減圧（＜１０ミリバール）で
蒸発させ、４℃で凝縮させることによって除去した。

【０１１４】得られた生成物は実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０１１５】いくつかの製剤を製造し、ＣＳＦＶ−Ｅ２に対する抗体応答に対するその作用
を上記実施例１に記載のように調べた。結果は表２．２に示されている。

【０１１６】１０ｇのポリソルベート８０(ICI)、４０ｇのスクアラン(Merck)および１９０
ｇのＰＢＳ−チメロサールを含む、１０ｇのスクロース誘導体の各画分（画分Ｉ
、画分IIおよび画分III）の製剤は上記実施例１に記載のように製造した。これ
らの製剤はそれぞれ第３群、第６群および第８群として試験した。

【０１１７】１０ｇのポリソルベート８０、４０ｇのスクアランおよび１９０ｇのＰＢＳ−
チメロサールを含む、１０ｇの実施例１の（スルフェート）１−（ドデカノイル
）７−スクロースの製剤は実施例１に記載のように製造した。この製剤は群２お
よび５で調べた。

【０１１８】１０ｇのポリソルベート８０、１０ｇのスクアランおよび２２０ｇのＰＢＳ−
チメロサールを含む、１０ｇの表１．１の（スルフェート）１−（ドデカノイル
）７−スクロースの製剤は実施例１に記載のように製造した。この製剤は第４群
として試験した。

【０１１９】１０ｇのポリソルベート８０および２３０ｇのＰＢＳ−チメロサールを含み、
スクアランを含まない、１０ｇの表１．１のスクロース誘導体（スルフェート）
１−（ドデカノイル）７−スクロースの製剤は実施例１に記載のように製造した
。この製剤は第７群として試験した。

【０１２０】１０ｇのポリソルベート８０、４０ｇのスクアラン(Merck)および２００ｇの
ＰＢＳ−チメロサールの製剤は上記実施例１に記載のように製造した。この製剤
は第９群として試験した。

【０１２１】実験には正の対照として水中鉱油中水系ＣＳＦＶ−Ｅ２ワクチン(ID-Lelystad
, Lelystad, The Netherlands)を含めた。この製剤は第１０群として試験した。

【０１２２】

【表３】

【０１２３】抗体応答の他に、これらのアジュバントの細胞媒介性免疫応答に対するいくつ
かの作用を末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いるリンパ球増殖アッセイによって
調べた。２回目の感作を行ってから６日後、第１群、第２群および第１０群の各
ブタから約５ｍｌのヘパリン血を採取した。血液サンプルを３容量のＰＢＳで希
釈し、５０ｍｌのポリプロピレンチューブ(Falcon)中の１２ｍｌのＦｉｃｏｌｌ
−Ｐａｑｕｅ(Pharmacia, Uppsala, Sweeden)上に積層した。１０００ｇで２０
分間遠心分離した後、ＰＢＭＣを含む界面を回収し、細胞をＰＢＳで２回洗浄し
、懸濁液を１０〜１５分間遠心分離した。１００倍にてトリパンブルー排除法に
よって生細胞数を調べ、懸濁液を培地［１００ＩＥ／ペニシリンｍｌ、０．１ｍ
ｇ／ｍｌストレプトマイシン、４μｌ／Ｌ β−メルカプトエタノールおよび１
０％の正常ブタ血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（Ｆｌｏｗ１０−６０１−
２２）］１ｍｌ当たり５×１０^６個細胞に調節した。各懸濁液のうち１００μｌ
のサンプルを平底９６ウェルプレートのウェルに６反復で入れた。３反復には５
０μｌのＲＰＭＩ培地を添加し（負の対照）、３反復には培地１ｍｌ当たり７．
１μｇのＣＳＦＶ−Ｅ２の５０μｌの溶液を加えた。細胞をＣＯ_２インキュベー
ターにおいて５％のＣＯ_２中で３７℃で４日間インキュベートした。インキュベ
ーション後、培地１ｍｌ当たり５０μＣｉのメチル３Ｈ−チミジン(Amersham T
RA 120；１ｍＣｉ／ｍｌ)を含有する２５μｌの培地を各ウェルに加えた。４時
間インキュベートした後、セルハーベスター(Tomtec Harvester 96 match IIIM)
を用いて細胞のＤＮＡをフィルター(Wallac)上に回収した。フィルターを７０℃
で乾燥させてフィルターバッグ(Wallac)に入れた。５ｍｌのシンチレーション液
(Wallac betaplate scint；Wallac, Turku, Finland)を加えてバッグを密閉し、
各サンプルの放射活性をβカウンター(Wallac beta-counter Model 1450 Microb
eta PLUS,Wallac)で測定した。個々の動物のリンパ球懸濁液の刺激指数は抗原で
刺激した２または３反復の１分当たりの平均カウント数（ｃｐｍ）から培地単独
とともにインキュベートした２または３反復の１分当たりの平均カウント数を差
し引くことによって算出した。各群の動物の算術的平均刺激指数（ＡＭＴ）およ
び標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を算出した。結果は表２．３に示されている。

【０１２４】

【表４】

【０１２５】実施例３種々のスクロース誘導体は実施例１に記載のように合成した。微粉状スクロー
ス(Merck)を＜５０ミリバールにて９０℃で６時間加熱することによって乾燥さ
せ、無水Ｎ−メチルピロリジノン(Merck)および無水ピリジン(Merck)を加えた。
混合物を透明な溶液が得られるまで８０℃で攪拌した。塩化ドデカノイル(Merck
)、塩化テトラデカノイル(Merck)、塩化ヘキサデカノイル(Merck)または塩化オ
クタデカノイル(Merck)を加え、反応混合物を６０℃で６時間インキュベートし
た。ＳＯ_３−ピリジン(Merck)を加えて反応混合物を室温で１８時間インキュベ
ートした。反応混合物を４℃で２４時間維持し、２または３相を形成させた。上
相を回収し、Ｎ−メチルピロリジノンおよびピリジンを、残渣の重量減が３０分
当たり０．１ｇ未満となるまで高温（＜６０℃）、減圧（＜１０ミリバール）で
の蒸発させ、４℃で凝縮させることで除去した。

【０１２６】用いた出発材料の量は表３．１に示されている。

【０１２７】

【表５】

【０１２８】得られたいくつかの生成物は上記実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した
。１０ｇのポリソルベート８０(ICI)、４０ｇのスクアラン(Merck)および１９０
ｇのＰＢＳ−チメロサールを含む、１０ｇの表３．１のスクロース誘導体の製剤
を上記実施例１に記載のように製造した。

【０１２９】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤のいくつ
かの作用を上記実施例１に記載のように調べた。ＣＳＦＶに対する血清中の抗体
力価は上記実施例１に記載のようにウイルス中和アッセイによって測定した。結
果は表３．２に示されている。

【０１３０】さらに、ＣＳＦＶに対する抗体力価は酵素結合免疫吸着アッセイ(ＥＬＩＳＡ)
によって測定した。このために、各ウェルに５０μｌの２．５μｇ／ｍｌの免疫
アフィニティークロマトグラフィー精製したＣＳＦＶ−Ｅ２を含有する炭酸バッ
ファー（ｐＨ９．６）を分注し、次いで４℃で１８時間または３７℃で２時間イ
ンキュベートすることによってＥＬＩＳＡプレートを被覆した。プレートを０．
０２％のＴｗｅｅｎ２０で５回洗浄し、ウェル当たり２００μｌのリン酸緩衝生
理食塩水（ＰＢＳ；ｐＨ７．２；０．０５Ｍ）中の２％（ｗ／ｖ）スキムミルク
(Difco)でブロッキングして３７℃で１時間インキュベートした。血清サンプル
は２％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含有するＰＢＳ（ＰＢＳ／ＳＭ）に１０または
１００倍に予め希釈し、５０μｌのこれらの予備希釈液をＥＬＩＳＡプレート中
のＰＢＳ／ＳＭに２倍に連続希釈した。次いで、プレートを３７℃で１時間イン
キュベートした。０．０２％のＴｗｅｅｎ２０での５回洗浄した後、供給業者の
使用説明書に従って希釈したペルオキシダーゼ(Dako)と結合させたウサギ抗ブタ
Ｉｇ抗血清を含有するＰＢＳ／ＳＭ５０μｌをウェルに加え、このプレートを再
び３７℃で１時間インキュベートした。プレートを０．０２％のＴｗｅｅｎ２０
で１０回洗浄し、１００μｌの２，２’−アジノ−ジ−［３−エチル−ベンズチ
アゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）］およびＨ２Ｏ２(Kirkegaard & Perry Labs
, Inc., Gaithersburg, MA)を含有する基質溶液をウェルに加えた。プレートを
２０℃で１時間インキュベートし、４０５ｎｍでの吸光度をTitertek Multiscan
(ICN/ Flow, Oxfordshire, United Kingdom)によって測定した。抗体力価は血清
濃度対吸光度値のプロットの直線部分の回帰係数（直線性は０．０〜１．４の吸
光度値間で著しい）として表し、これはＥＬＩＳＡにおけるバックグラウンドを
超える１吸光度単位という光学密度を示す血清サンプルの希釈係数に相当する。
追加免疫の３および１２週後の抗体力価がそれぞれ表３．３および３．４に示さ
れている。

【０１３１】これらの製剤のＣＳＦＶ−Ｅ２に対する細胞媒介性免疫応答に対する作用は上
記実施例２に記載のように調べた。結果は表３．５に示されている。

【０１３２】

【表６】

【０１３３】ブタにおける不活化インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１株Ａ／ブタおよびＨ３Ｎ
２株ＭＲＣ−１１（以下、それぞれＡ／ブタおよびＭＲＣ−１１と示す）ならび
に不活化偽狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）に対する血清中の抗体応答におけるこれら
の製剤のいくつかの作用を調べた。０週目および３週目に動物にFort Dodge Ani
mal Health Holland, Weesp, The Netherlandsの４．４μｇのＡ／ブタ、４μｇ
のＭＲＣ−１１および１０^８３ＴＣＩＤ５０（ＴＣＩＤ５０はin vitroにおいて
組織培養物の５０％感染を引き起こす用量である）不活化ＰＲＶ(Hilgers et al
. Vaccine 1994)をアジュバントとともに、あるいはアジュバントをともなわず
に注射した。最初の感作から３週間後（第３週）および２回目の感作から３週間
後（第６週）に、Ａ／ブタおよびＭＲＣ−１１に対する抗体応答をＥＬＩＳＡに
よって測定した。このために、ＥＬＩＳＡプレートを各ウェルに５μｇ／ｍｌＨ
Ａを含有する炭酸バッファー（ｐＨ９．６）５０μｌを分注し、次いで、４℃で
１８時間または３７℃で２時間インキュベートすることによってスクロース勾配
精製インフルエンザウイルスで被覆した。プレートは０．０２％のＴｗｅｅｎ２
０で５回洗浄し、ウェル当たり２００μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；ｐ
Ｈ７．２；０．０５Ｍ）中の２％（ｗ／ｖ）スキムミルク(Difco)でブロッキン
グし、３７℃で１時間インキュベートした。血清サンプルは２％（ｗ／ｖ）スキ
ムミルクを含有するＰＢＳ（ＰＢＳ／ＳＭ）に１０または１００倍に予め希釈し
、５０μｌのこれらの予備希釈液をＥＬＩＡプレート中のＰＢＳ／ＳＭに２倍に
連続希釈した。次いで、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。０．０
２％のＴｗｅｅｎ２０での５回の洗浄の後、ＰＢＳ／ＳＭに１／２０００希釈し
たペルオキシダーゼと結合させたマウス抗ブタ総ＩｇＧモノクローナル抗体(ID-
Lelystad)を含有するＰＢＳ／ＳＭ５０μｌをウェルに加え、プレートを再度３
７℃で１時間インキュベートした。プレートを０．０２％のＴｗｅｅｎ２０で１
０回洗浄し、１００μｌの２，２’−アジノ−ジ−［３−エチル−ベンズチアゾ
リンスルホネート（ＡＢＴＳ）］およびＨ２Ｏ２(Kirkegaard ＆ Perry Labs, I
nc., Gaithersburg, MA)を含有する基質溶液をウェルに加えた。プレートを２０
℃で６０分インキュベートし、４０５ｎｍでの吸光度をTitertek Multiscan(ICN
/Flow, Oxfordshire, United Kingdom)によって測定した。抗体力価は血清濃度
対吸光度値のプロットの直線部分の回帰係数（直線性は０．０〜１．４の吸光度
値の間で著しかった）として表し、これはＥＬＩＳＡにおけるバックグラウンド
を超える１吸光度単位という光学密度を示す血清サンプルの希釈係数に相当する
。最初の（初回抗原刺激）および２回目の（追加）感作から３週間後の抗体力価
がそれぞれ表３．６および３．７に示されている。

【０１３４】６週間後、ｉＰＲＶに対する抗体応答をHilgers et al. (Vaccine 12, pp.653
-660, 1994)によって記載されるウイルス中和アッセイによって測定した。結果
は表３．８に示されている。

【０１３５】ブタにおけるインフルエンザウイルスＨ１Ｎ１株Ａ／ブタおよびＨ３Ｎ２株Ｍ
ＲＣ−１１対する細胞媒介性免疫応答に対するこれらの製剤の作用を、上記実施
例２に記載のように調べた。ＰＢＭＣはＡ／ブタおよびＭＲＣ−１１で細胞培養
培地１ｍｌ当たり０．５および１．５μｇＨＡという濃度で刺激した。結果はそ
れぞれ表３．９および３．１０に示されている。

【０１３６】

【表７】

【０１３７】実施例４種々のスクロース誘導体を実施例３に記載のように合成した。用いた出発材料
の量は表４．１に示されている。

【０１３８】

【表８】

【０１３９】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０１４０】１０ｇポリソルベート８０(ICI)、４０ｇスクアラン(Merck)および１９０Ｐ
ＢＳ−チメロサールを含む表４．１の種々のスクロース誘導体１０ｇの製剤を上
記実施例１に記載のように製造した。

【０１４１】実施例５種々のスクロース誘導体を実施例３に記載のように合成した。なお、出発材料
の量は表５．１に示されている。

【０１４２】

【表９】

【０１４３】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０１４４】１０ｇポリソルベート８０(ICI)、４０ｇスクアラン(Merck)および１９０ｇＰ
ＢＳ−チメロサールを含む表５．１のスクロース誘導体１０ｇの製剤を上記実施
例１に記載のように製造した。

【０１４５】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。ワクチンは１容量のアジュ
バント製剤と１容量の抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対
する血清中の抗体力価を上記実施例１に記載のようにウイルス中和アッセイによ
って測定した。結果は表５．２に示されている。

【０１４６】２回目の感作（追加抗原投与）から３週間および１２週間後に、上記実施例３
に記載のようにＥＬＩＳＡにより抗体力価を測定した。結果は表５．３および５
．４に示されている。

【０１４７】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表５．５に示されている。

【０１４８】

【表１０】

【０１４９】ブタにおける不活化インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１株Ａ／ＳｗｉｎおよびＨ
３Ｎ２株ＭＲＣ−１１に対する血清中の抗体応答におけるこれらの種々の製剤の
作用を上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより調べた。結果は表５．６お
よび５．７に示されている。

【０１５０】

【表１１】

【０１５１】実施例６種々の二糖誘導体を実施例４に記載のように合成した。なお、出発材料の量は
表６．１に示されている。

【０１５２】

【表１２】

【０１５３】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０１５４】ポリソルベート８０(ICI)、スクアラン(Merck)およびＰＢＳ−チメロサールを
含む表６．１の種々のスクロース誘導体の製剤を上記実施例１に記載のように製
造した。

【０１５５】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。ワクチンは１容量のアジュ
バント製剤と１容量の抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対
する血清中の抗体力価を上記実施例１に記載のようにウイルス中和アッセイによ
って測定した。結果は表６．２に示されている。

【０１５６】２回目の感作（追加抗原投与）から３週間および１２週間後に、上記実施例３
に記載のようにＥＬＩＳＡにより抗体力価を測定した。結果は表６．３および６
．４に示されている。

【０１５７】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表６．５に示されている。

【０１５８】

【表１３】

【０１５９】ブタにおける不活化インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１株Ａ／ＳｗｉｎおよびＨ
３Ｎ２株ＭＲＣ−１１に対する血清中の抗体応答におけるこれらの種々の製剤の
作用を上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより調べた。結果は表６．５お
よび６．６に示されている。

【０１６０】

【表１４】

【０１６１】実施例７種々の二糖誘導体を、スクロース脂肪酸エステルＬ１９５(Mitsunishi-kagaku
Foods Corp., Tokyo, Japan)とＳＯ_３−ピリジンを６０℃で約６時間接触させ
ることで合成した。出発材料の量は表７．１に示されている。

【０１６２】

【表１５】

【０１６３】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。１０ｇの表７．１のスクロース誘導体、１０ｇポリソルベート８０(ICI)、４
０ｇスクアラン(Merck)および１９０ｇＰＢＳ−チメロサールの製剤を上記実施
例１に記載のように製造した。

【０１６４】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。ワクチンは１容量のアジュ
バント製剤と１容量の抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対
する血清中の抗体力価を上記実施例１に記載のようにウイルス中和アッセイによ
って測定した。結果は表７．２に示されている。

【０１６５】２回目の感作（追加抗原投与）から３週間および１２週間後に、上記実施例３
に記載のようにＥＬＩＳＡにより抗体力価を測定した。結果は表７．３および７
．４に示されている。

【０１６６】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表７．５に示されている。

【０１６７】

【表１６】

【０１６８】ブタにおける不活化インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１株Ａ／ＳｗｉｎおよびＨ
３Ｎ２株ＭＲＣ−１１に対する血清中の抗体応答におけるこれらの種々の製剤の
作用を上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより調べた。結果は表７．６お
よび７．７に示されている。

【０１６９】

【表１７】

【０１７０】実施例８４０ｇＬ１９５(Mitsunishi-kagaku Foods Corp., Tokyo, Japan)、１０ｇポ
リソルベート８０(ICI)および２００ｇＰＢＳ−チメロサールの製剤を上記実施
例１に記載のように製造した。１０ｇポリソルベート８０(ICI)、４０ｇＬ１９
５(Merck)および１９０ｇＰＢＳ−チメロサールを含む実施例５の１０ｇ（スル
フェート）１−（ドデカノイル）７−スクロースの製剤を上記実施例１に記載の
ように製造した。

【０１７１】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。ワクチンは１容量のアジュ
バント製剤と１容量の抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対
する血清中の抗体力価を上記実施例１に記載のようにウイルス中和アッセイによ
って測定した。結果は表８．２に示されている。

【０１７２】２回目の感作（追加抗原投与）から３週間および１２週間後に、上記実施例３
に記載のようにＥＬＩＳＡにより抗体力価を測定した。結果は表８．３および８
．４に示されている。

【０１７３】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表８．５に示されている。

【０１７４】

【表１８】

【０１７５】実施例９（オレイル）８−スクロースを、０．０２モルのスクロースと０．１５モルの
塩化オレイル(Merck)を６０℃で約６時間接触させることで製造した。このスク
ロース誘導体をｎ−ヘキサンで抽出した。上記実施例２に記載のように高温・減
圧下で蒸発させることでｎ−ヘキサンを除去した。得られた生成物は、実施例１
に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０１７６】スクロースオクタオレイン酸エステルの種々のエマルションを製造した。（オ
レオイル）８−スクロース、スクアラン、ポリソルベート８０およびＰＢＳ−チ
メロサールを表９．１に示された量で混合し、上記実施例１に記載のように乳化
した。さらに、スクロースオクタオレイン酸エステルを含まないスクアラン／ポ
リソルベート８０のエマルションを、表９．１に示された量のスクアラン、ポリ
ソルベート８０およびＰＢＳ−チメロサールを混合することにより製造した。

【０１７７】

【表１９】

【０１７８】ＣＳＦＶ−Ｅ２に対するウイルス中和抗体応答アッセイに対する表９．１のエ
マルションの作用を実施例１に記載のように調べた。ＳＬ−ＣＤ／水中スクアラ
ン(Fort Dodge Animal Health Holland, The Netherkands)を対照として含めた
。結果は表９．２に示されている。

【０１７９】

【表２０】

【０１８０】実施例１０不活化インフルエンザウイルス株ＭＲＣ−１１およびＡ／ブタを用量当たり４
．０および４．４μｇＨＡ、ならびに不活化偽狂犬病ウイルスを用量当たり１０ ^８．３ＴＣＩＤ_５０を含有する市販の偽狂犬病／インフルエンザウイルスワクチ
ン(Suvaxyn O/W of Fort Dodge Animal Health Holland, Weesp, The Netherlan
ds)を、実施例１のアジュバント製剤（スルフェート）−（ドデカノイル）７−
スクロース／スクアラン／ポリソルベート８０と１００／０、３３／６６、２０
／８０および１０／９０の容量比で混合した。ブタの群を２回免疫し、Hilgers
et al. (Vaccine 12, pp 653-660, 1994)のようなウイルス中和抗体アッセイに
より偽狂犬病ウイルスに対する抗体応答を測定した。結果は表１０．１に示され
ている。インフルエンザウイルス株Ａ／ブタおよびＭＲＣ−１１に対する抗体応
答を実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより測定した。結果はそれぞれ表１０
．２および１０．３に示されている。

【０１８１】

【表２１】

【０１８２】実施例１１スクロース誘導体を実施例１に記載のように合成した。用いた出発材料の量は
表１．１に示されている。

【０１８３】

【表２２】

【０１８４】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。ポリソルベート８０(ICI)、スクアラン(Merck)およびＰＢＳ−チメロサールを
含む表１０．１のスクロース誘導体の製剤を上記実施例１に記載のように製造し
た。

【０１８５】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。ワクチンは１容量のアジュ
バント製剤と１容量の抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対
する血清中の抗体力価を上記実施例１に記載のようにウイルス中和アッセイによ
って測定した。結果は表１１．２に示されている。

【０１８６】抗体力価は上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより測定した。結果は表
１１．３に示されている。

【０１８７】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１１．４に示されている。

【０１８８】

【表２３】

【０１８９】実施例１２いくつかのスクロース誘導体を実施例１に記載のように合成した。スクロース
を塩化ドデカノイル（塩化ドデカノイル；Merck）、塩化デカノイル(Merck)、塩
化オクタノイル(Merck)または塩化ヘキサノイル(Merick)と、さらにＳＯ_３−ピ
リジンと接触させた。出発材料の量は表１２．１に示されている。

【０１９０】

【表２４】

【０１９１】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。ポリソルベート８０(ICI)、スクアラン(Merck)およびＰＢＳ−チメロサールを
含む表１２．１のスクロース誘導体の製剤を上記実施例１に記載のように製造し
た。

【０１９２】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の作用を
上記実施例１に記載にように調べた。結果は表１２．２に示されている。

【０１９３】抗体力価は上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより測定した。結果は表
１２．３に示されている。

【０１９４】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１２．４に示されている。

【０１９５】

【表２５】

【０１９６】実施例１３スクロースエステルＬ１９５(Mitsunishi-kagaku Foods Corp., Tokyo, Japan
)、ポリソルベート８０(Merck)、スクアラン(Merck)、実施例９の（オレイル）
８−スクロース、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム(DDA; Eastman Koda
k Company, Rochester, NY)、カルボポール９３４ＰＨ(BFGoodrich, Cleveland
HO)を上記の実施例に記載のように製造した。用いた出発材料の量は表１３．１
に示されている。

【０１９７】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。結果は表１３．２に示され
ている。

【０１９８】抗体力価は上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより測定した。結果は表
１３．３に示されている。

【０１９９】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１３．４に示されている。

【０２００】

【表２６】

【０２０１】実施例１４マンノース誘導体を実施例１に記載のように合成した。用いた出発材料の量は
表４．１に示されている。

【０２０２】

【表２７】

【０２０３】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。１０ｇポリソルベート８０(ICI)、４０ｇスクアラン(Merck)および１９０ｇＰ
ＢＳ−チメロサールを含む表１４．１のマンノース誘導体１０ｇの製剤を上記実
施例１に記載のように製造した。

【０２０４】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載にように調べた。結果は表１４．２に示され
ている。

【０２０５】抗体力価は上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより測定した。結果は表
１４．３に示されている。

【０２０６】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１４．４に示されている。

【０２０７】

【表２８】

【０２０８】実施例１５（スルフェート）１−（ドデカノイル）２−グリセロールを実施例１に記載の
ように合成した。４．６ｇ無水グリセロール(Merck)を、無水Ｎ−メチルピロリ
ジノン(Merck)および無水ピリジン(Merck)に溶解した。２１．９ｇ塩化ドデカノ
イル(Merck)を加え、反応混合物を６０℃で６時間インキュベートした。８．０
ｇＳＯ_３−ピリジン(Merck)を加え、反応混合物を室温で１８時間インキュベー
トした。反応混合物を２４時間４℃で維持し、二層を形成させた。上層を回収し
、高温（＜６０℃）減圧（＜１０ミリバール）で蒸発させ、残渣の重量減が３０
分間で０．１ｇ未満となるまで４℃で凝縮させることによりＮ−メチルピロリジ
ノンおよびピリジンを除去した。

【０２０９】得られた（スルフェート）１−（ドデカノイル）２−グリセロールを実施例１
に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０２１０】１０ｇグリセロール誘導体、１０ｇポリソルベート８０(ICI)、４０ｇスクア
ラン(Merck)および１９０ｇＰＢＳ−チメロサールを上記実施例１に記載のよう
に製造した。

【０２１１】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載にように調べた。結果は表１５．１に示され
ている。

【０２１２】抗体力価は上記実施例３に記載のようにＥＬＩＳＡにより測定した。結果は表
１５．２に示されている。

【０２１３】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１５．３に示されている。

【０２１４】

【表２９】

【０２１５】実施例１６１．３ｇスクロースエステルＬ１９５(Mitsunishi-kagaku Foods Corp., Toky
o, Japan)、１．３ｇポリソルベート８０(Merck)、１０．８ｇスクアラン(Merck
)、２３７．７ｇＰＢＳ−チメロサールの製剤を実施例１に記載のように製造し
た。１．３ｇの実施例１２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース、１．３ｇポリソルベート８０(Merck)、１０．８ｇスクアレン(Merck)およ
び２３８．１ｇＰＢＳ−チメロサールの製剤を実施例１に記載のように製造した
。

【０２１６】不活化ヒトインフルエンザウイルス株Ａ／パナマ、Ａ／ニューカレドニアおよ
びＢ／山梨に対する血清中のＥＬＩＳＡ抗体応答におけるこれらの製剤のいくつ
かの作用をブタにおいて調べた。このため、市販のインフルエンザウイルスワク
チンSolvay Pharmaceuticals (Weesp, The Netherlands)のＩＮＦＬＵＶＡＣ（
商標）１用量（０．５ｍｌ）をいずれかのアジュバント製剤１ｍｌに混合し、ブ
タ５匹の群を感作した。最初の感作から３週間後に抗体応答を実施例３に記載の
ようにＥＬＩＳＡにより測定した。免疫記憶の誘発は、アジュバントを用いずSo
lvay Pharmaceuticals のＩＮＦＬＵＶＡＣ（商標）で２回目の感作を行った後
に抗体応答を測定することにより調べた。最初の感作の後のＡ／パナマ、Ａ／ニ
ューカレドニアおよびＢ／山梨に対する抗体力価の結果はそれぞれ表１６．１、
１６．２および１６．３に示されている。アジュバントを用いずに２回目の感作
を行ってから１週間後のＡ／パナマ、Ａ／ニューカレドニアおよびＢ／山梨に対
する抗体力価の結果はそれぞれ表１６．４、１６．５および１６．６に示されて
いる。アジュバントを用いずに２回目の感作を行ってから３週間後のＡ／パナマ
、Ａ／ニューカレドニアおよびＢ／山梨に対する抗体力価の結果はそれぞれ表１
６．７、１６．８および１６．９に示されている。

【０２１７】

【表３０】

【０２１８】実施例１７（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロースエステルは、実施例１
に記載のように２０５．２ｇスクロースと９１８ｇ塩化ドデカノイルおよび９８
ｇＳＯ_３−ピリジンを接触させることで合成した。このスクロースエステルを上
記実施例２に記載のようにｎ−ヘキサンで抽出した。

【０２１９】（スルフェート）４−（ドデカノイル）４−スクロースエステルは、実施例１
に記載のように２３．９ｇスクロースと６７．５ｇ塩化ドデカノイルおよび４５
．６ｇＳＯ_３−ピリジンを接触させることで合成した。

【０２２０】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０２２１】（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロースのアジュバント製剤は
、油としてのスクアラン(Merck)、スクアレン(Merck)、ヘキサデカン(Acros, Ge
el, Belgium)、トリオレイン(Sigma, St. Louis, MI) Markol 52 (Esso)、臭化
ペルフルオロオクチル(Acros)またはシリコーン油(Acros)、乳化剤としてのポリ
ソルベート８０(Merck)、ポリソルベート２０(Baler)、Ｌ１６９５(Mitsubishi-
Kagaku)、トリトンＸ−１００(Sigma)、サポニン(Fluka, Zwijndrechr, The Net
herkands)または（スルフェート）４−（ドデカノイル）４−スクロース、およ
び水相としてのＰＢＳ−チメロサールまたはＷＦＩ（ID-Lelystadの注射用水, L
elyatad, The Netherlands）を下記表１７．１に示されている量で用いて製造し
た。

【０２２２】これらの製剤を上記実施例１に記載のように乳化した。

【０２２３】

【表３１】

【０２２４】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。第１群および第２群は各群
５匹、第３群〜第１０群は各群４匹であった。ワクチンは１容量のアジュバント
製剤と１容量の抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対する血
清中の抗体力価を上記実施例３に記載のようＥＬＩＳＡによって測定した。結果
は表１７．２に示されている。

【０２２５】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１７．３に示されている。

【０２２６】

【表３２】

【０２２７】実施例１８（スルフェート）１−（デカノイル）７−スクロースエステルは、実施例１に
記載のように２３．９ｇスクロースと９４ｇ塩化デカノイルおよび１１．１ｇＳ
Ｏ_３−ピリジンを接触させることで合成した。このスクロースエステルを上記実
施例２に記載のようにｎ−ヘキサンで抽出した。

【０２２８】（スルフェート）４−（デカノイル）４−スクロースエステルは、実施例１に
記載のように２４ｇスクロースと５４．４ｇ塩化デカノイルおよび４５ｇＳＯ_３ −ピリジンを接触させることで合成した。得られた生成物は、実施例１に記載の
ようにＴＬＣにて分析し、結果は図１８に示されている。

【０２２９】これらのスクロースエステルのいくつかのアジュバント製剤を、油としてのス
クアランまたはスクアレン、乳化剤かつ／または安定剤としてのポリソルベート
８０、Ｌ１６９５(Mitsubishi-Kagaku)または（スルフェート）４−（デカノイ
ル）４−スクロース、およびＰＢＳ−チメロサールを表１８．１に示されている
量で用いて製造した。これらの製剤を上記実施例１に記載のように乳化した。

【０２３０】

【表３３】

【０２３１】ブタにおけるＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答におけるこれらの製剤の（いく
つかの）作用を上記実施例１に記載のように調べた。第１群は各群５匹、第２群
および第３群は各群４匹であった。ワクチンは１容量のアジュバント製剤と１容
量の抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対する血清中の抗体
力価を上記実施例３に記載のようＥＬＩＳＡによって測定した。結果は表１８．
２に示されている。

【０２３２】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１８．３に示されている。

【０２３３】

【表３４】

【０２３４】実施例１９Ｌ１９５(Mitsubishi)、スクアレン(Merck)、Ｌ１６９５(Mitsubishi)および
ＰＢＳ−チメロサールまたはＷＦＩの製剤を表１９．１に示されている量で製造
した。この製剤を上記実施例１に記載のように乳化した。

【０２３５】

【表３５】

【０２３６】ブタにおけるこれら製剤のうち２種の、ＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答にお
ける作用を上記実施例１に記載のように調べた。第１群は各群５匹、第２群およ
び第３群は各群４匹であった。ワクチンは１容量のアジュバント製剤と１容量の
抗原製剤とを単に混合することで製造した。ＣＳＦＶに対する血清中の抗体力価
を上記実施例３に記載のようＥＬＩＳＡによって測定した。結果は表１９．２に
示されている。

【０２３７】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表１９．３に示されている。

【０２３８】

【表３６】

【０２３９】実施例２０（デカノイル）７−スクロースエステルは実施例１に記載のように合成した。
２３．９ｇ微粉スクロース(Merck)を９４ｇ塩化デカノイル(Merck)と接触させた
。このスクロースエステルを上記実施例２に記載のようにｎ−ヘキサンで抽出し
た。

【０２４０】得られた生成物は、実施例１に記載のようにＴＬＣにて分析した。

【０２４１】（デカノイル）７−スクロースエステル、スクアレン、ポリソルベート８０お
よびＰＢＳ−チメロサールの製剤を表２０．１に示されている量で製造し、上記
実施例１に記載のように乳化した。

【０２４２】

【表３７】

【０２４３】ブタにおけるこれら製剤のうち１種の、ＣＳＦＶ−Ｅ２に対する免疫応答にお
ける作用を上記実施例１に記載のように調べた。第１群は各群５匹、第２群は４
匹であった。ＣＳＦＶに対する血清中の抗体力価を上記実施例３に記載のようＥ
ＬＩＳＡによって測定した。結果は表２０．２に示されている。

【０２４４】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表２０．３に示されている。

【０２４５】

【表３８】

【０２４６】実施例２１免疫応答に対する１回目と２回目の時間間隔の作用を検討した。ブタの個体群
をＣＳＦＶ−Ｅ２および実施例１７の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７
−スクロース／スクアレン／ポリソルベート８０［４０／１６０／４０］で３週
間空けて（第０週と第３週）、また２週間開けて（第１週と第３週）２回感作し
た。ＣＳＦＶに対する血清中の抗体力価を上記実施例３に記載のＥＬＩＳＡによ
り測定した。結果は表２１．１に示されている。

【０２４７】ＣＳＦＶに対する細胞媒介性応答を上記実施例２に記載のようにリンパ球増殖
アッセイにより測定した。結果は表２１．２に示されている。

【０２４８】

【表３９】

【０２４９】実施例２２実施例１３に記載のように製造したアジュバント製剤Ｌ１９５／スクアレン／
ポリソルベート８０［４０／１６０／４０］を、３μｇ口蹄疫ウイルスＯ／台湾
株／ｍｌを含有する同量の抗原溶液と混合した。ブタ３匹の群を２ｍｌワクチン
で２回感作した。van Maanen and Terpstra (J. Immunol. Meth. 124, pp.111-1
19, 1989)により記載されたウイルス中和抗体試験によって種々の時間間隔で抗
Ｏ／台湾ウイルス中和抗体応答を測定した。

【０２５０】結果は表２２．１に示されている。

【０２５１】

【表４０】

【０２５２】実施例２３１６０ｇＬ１９５、６４０ｇスクアラン、１６０ｇポリソルベート８０および
４０ｇ注射用水（Ｌ１９５／スクアラン／ポリソルベート８０［１６０／６４０
／１６０］）のアジュバント製剤を実施例１に記載のように乳化した。このアジ
ュバント製剤１容量を３μｇ口蹄疫ウイルスＯ／台湾株／ｍｌを含有する抗原溶
液１容量と混合した。ブタ５匹の群を２ｍｌワクチンで２回感作し、実施例２２
に記載のように種々の時間間隔で抗体応答を測定した。結果は表２３．１に示さ
れている。

【０２５３】

【表４１】

【０２５４】実施例２４実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロース画分III／
スクアラン／ポリソルベート８０［４０／１６０／４０］アジュバントを、Oonk
et al. (Vaccine 16, pp 1074-1082, 1998)によって記載されたようにして製造
した卵白アルブミンと共役したゴナドトロピン放出ホルモンペプチド（Ｇ６ｋ−
ＧｎＲＨ−タンデム−ダイマーＯＶＡコンジュゲート）と混合した。ブタ１０匹
（第１群）を１８７μｇＧ６ｋ−ＧｎＲＨ−タンデム−ダイマー−ＯＶＡコンジ
ュゲートおよび（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロース画分III
／スクアラン／ポリソルベート８０［４０／１６０／４０］で２回感作し、５匹
（第２群；対照）を抗原を含まない（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−
スクロース画分III／スクアラン／ポリソルベート８０［４０／１６０／４０］
で感作した。１０週目に１回目の感作を行った後、また１７週目に２回目の感作
を行った後に種々の時間間隔で、１／２０００希釈した血漿サンプル中のＧｎＲ
Ｈに対する抗体力価を、Amersham Pharmacia Biotech (Buckinghamshire, Engla
nd)から購入したヨウ素化ＧｎＲＨを用いてMeloen et al. (Vaccine 12, pp 741
-746, 1994)により記載されたようなＲＩＡにより測定した。結果は表２４．１
に示されている。２４週目に精巣の重量を、Meloen et al. (Vaccine 12, pp 74
1-746, 1994)により記載されたように調べた。結果は表２４．２に示されている
。

【０２５５】

【表４２】

【０２５６】実施例２５実施例１７の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロース、スクア
ラン、ポリソルベート８０およびＰＢＳ−チメロサールを表２５．１に示されて
いる量で混合することでアジュバント製剤を製造した。これらの混合物を実施例
１に記載のように乳化した。

【０２５７】

【表４３】

【０２５８】実施例２６１０ｇの実施例１７の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロース
、１０ｇポリソルベート８０(Baker)および３ｗ／ｖ％水酸化アルミニウム懸濁
液(Alhydrogel of Superfos Biosector a/s, Vedbaeck, Denmark)２３０ｍｌを
混合することでアジュバント製剤を製造した。参照文献

【表４４】

【図面の簡単な説明】

【図１ａ】実施例１に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例１の（ドデカノイル）７−スクロース；レーン３：実施例１の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロース；レーン４：実施例１の（ドデカノイル）−スクロース；レーン５：実施例１の（スルフェート）１−（ドデカノイル）５−スクロース；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図１ｂ】実施例１に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例１の（ドデカノイル）３−スクロース；レーン３：実施例１の（スルフェート）１−（ドデカノイル）３−スクロース；レーン４：実施例１の（ドデカノイル）１−スクロース；レーン５：実施例１の（スルフェート）１−（ドデカノイル）１−スクロース；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図２Ａ】実施例３に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例３の（ドデカノイル）７−スクロース；レーン３：実施例３の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロース；レーン４：実施例３の（テトラデカノイル）７−スクロース；レーン５：実施例３の（スルフェート）１−（テトラデカノイル）７−スクロー
ス；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図２Ｂ】実施例３に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例３の（ヘキサデカノイル）７−スクロース；レーン３：実施例３の（スルフェート）１−（ヘキサデカノイル）７−スクロー
ス；レーン４：実施例３の（オクタデカノイル）７−スクロース；レーン５：実施例３の（スルフェート）１−（オクタデカノイル）７−スクロー
ス；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図３Ａ】実施例４に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例４の（ドデカノイル）８−スクロース；レーン３：実施例４の（スルフェート）０．５−（ドデカノイル）７−スクロー
ス；レーン４：実施例４の（スルフェート）１．０−（ドデカノイル）６−スクロー
ス；レーン５：実施例４の（スルフェート）１．５−（ドデカノイル）５−スクロー
ス；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図３Ｂ】実施例４に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例４の（スルフェート）２．０−（ドデカノイル）４−スクロー
ス；レーン３：実施例４の（スルフェート）２．５−（ドデカノイル）３−スクロー
ス；レーン４：実施例４の（スルフェート）３．０−（ドデカノイル）２−スクロー
ス；レーン５：実施例４の（スルフェート）３．５−（ドデカノイル）１−スクロー
ス；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図４Ａ】実施例５に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例５の（ドデカノイル）８−スクロース；レーン３：実施例５の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロース；レーン４：実施例５の（スルフェート）２−（ドデカノイル）６−スクロース；レーン５：実施例５の（スルフェート）３−（ドデカノイル）５−スクロース；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図４Ｂ】実施例５に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例５の（スルフェート）４−（ドデカノイル）４−スクロース；レーン３：実施例５の（スルフェート）５−（ドデカノイル）３−スクロース；レーン４：実施例５の（スルフェート）６−（ドデカノイル）２−スクロース；レーン５：実施例５の（スルフェート）７−（ドデカノイル）１−スクロース；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図５】実施例６に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例６の（ドデカノイル）７−マルトース；レーン３：実施例６の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−マルトース；レーン４：実施例６の（ドデカノイル）７−ラクトース；レーン５：実施例６の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−ラクトース；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図６】実施例７に記載のように製造した誘導体の薄層クロマトグラフィー。レーン１（左）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III；レーン２：実施例７のＬ１９５；レーン３：実施例７の（スルフェート）１−Ｌ１９５；レーン４：実施例７の（スルフェート）２−Ｌ１９５；レーン５：実施例７の（スルフェート）２．３−Ｌ１９５；レーン６（右）：実施例２の（スルフェート）１−（ドデカノイル）７−スクロ
ース画分III。

【図７】Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３、およびＲ’４がＨまたは
−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）（＝Ｏ）−ＯＲ（ここで、ＲはＨ、Ｎａ、ＫまたはＮＨ_４であ
る）または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＨ_３（ここで、ｎは６〜２４で
ある）である本発明のスクロース誘導体の化学構造。

【図８】本発明のアジュバント、特に（スルフェート）１（ドデカノイル）７−スクロ
ース／スクアラン／ポリソルベート８０エマルション（実施例２の第５群）を含
有するＣＳＦＶ−Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）
の５匹の個々の動物における局所反応の顕微鏡観察。わずかに繊維形成と浮腫が
見られる。

【図９】本発明のアジュバント、特に（スルフェート）１（ドデカノイル）７−スクロ
ース／スクアラン／ポリソルベート８０エマルション（実施例２の第５群）を含
有するＣＳＦＶ−Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）
の５匹の個々の動物における局所反応の顕微鏡観察。わずかに繊維形成と浮腫が
見られる。

【図１０】本発明のアジュバント、特に（スルフェート）１（ドデカノイル）７−スクロ
ース／スクアラン／ポリソルベート８０エマルション（実施例２の第５群）を含
有するＣＳＦＶ−Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）
の５匹の個々の動物における局所反応の顕微鏡観察。わずかに繊維形成と浮腫が
見られる。

【図１１】本発明のアジュバント、特に（スルフェート）１（ドデカノイル）７−スクロ
ース／スクアラン／ポリソルベート８０エマルション（実施例２の第５群）を含
有するＣＳＦＶ−Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）
の５匹の個々の動物における局所反応の顕微鏡観察。わずかに繊維形成と浮腫が
見られる。

【図１２】本発明のアジュバント、特に（スルフェート）１（ドデカノイル）７−スクロ
ース／スクアラン／ポリソルベート８０エマルション（実施例２の第５群）を含
有するＣＳＦＶ−Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）
の５匹の個々の動物における局所反応の顕微鏡観察。わずかに繊維形成と浮腫が
見られる。

【図１３】水中−鉱油中−水アジュバント（実施例２の第１０群）を含有するＣＳＦＶ−
Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）の５匹の個々の動
物における局所反応の顕微鏡観察。肉芽腫、膿瘍、および壊死が見られる。

【図１４】水中−鉱油中−水アジュバント（実施例２の第１０群）を含有するＣＳＦＶ−
Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）の５匹の個々の動
物における局所反応の顕微鏡観察。肉芽腫、膿瘍、および壊死が見られる。

【図１５】水中−鉱油中−水アジュバント（実施例２の第１０群）を含有するＣＳＦＶ−
Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）の５匹の個々の動
物における局所反応の顕微鏡観察。肉芽腫、膿瘍、および壊死が見られる。

【図１６】水中−鉱油中−水アジュバント（実施例２の第１０群）を含有するＣＳＦＶ−
Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）の５匹の個々の動
物における局所反応の顕微鏡観察。肉芽腫、膿瘍、および壊死が見られる。

【図１７】水中−鉱油中−水アジュバント（実施例２の第１０群）を含有するＣＳＦＶ−
Ｅ２ワクチンの筋肉内注射後３週間（ａ）および６週間（ｂ）の５匹の個々の動
物における局所反応の顕微鏡観察。肉芽腫、膿瘍、および壊死が見られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C057 BB02 BB03 DD01 HH03 4C085 AA03 AA38 DD86 FF01 FF02 FF14

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】少なくとも１個かつＮ−１個以下の脂肪酸エステル基（Ｎはその誘導体が誘導
される単糖または二糖の水酸基の数である）を有する、単糖または二糖誘導体。
【請求項２】少なくとも１個かつＮ−１個以下の陰イオン基をさらに含んでなり、脂肪酸エ
ステル基と陰イオン基の合計数がＮを超えないものである、請求項１に記載の単
糖または二糖誘導体。
【請求項３】少なくとも２個、好ましくは少なくとも３個、かつＮ−１個以下の脂肪酸エス
テル基と、少なくとも１個、かつＮ−２個以下、好ましくはＮ−３個以下の陰イ
オン基を有する、請求項２に記載の単糖または二糖誘導体。
【請求項４】少なくとも４個かつＮ−１個以下の脂肪酸エステル基と、少なくとも１個、か
つＮ−３個以下、好ましくはＮ−４個以下の陰イオン基を有する、請求項３に記
載の単糖または二糖誘導体。
【請求項５】少なくとも１個の陰イオン基と、少なくとも２個の脂肪酸エステル基を有し、
陰イオン基と脂肪酸エステル基の合計数が３〜５個の範囲である、請求項１〜４
のいずれか一項に記載の単糖誘導体。
【請求項６】少なくとも１個の陰イオン基、好ましくは１または４個の陰イオン基と、少な
くとも１個の脂肪酸エステル基を有し、陰イオン基と脂肪酸エステル基の合計数
が６〜９個の範囲、好ましくは７または８個である、請求項１〜４のいずれか一
項に記載の二糖誘導体。
【請求項７】一般式Ｃ_５Ｈ_１０Ｏ_５を有するペントースまたは一般式Ｃ_６Ｈ_１２Ｏ_６を有す
るヘキソースから誘導されるものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の
単糖誘導体。
【請求項８】Ｎが３または４である単糖から誘導されるものである、請求項１〜５または７
のいずれか一項に記載の単糖誘導体。
【請求項９】一般式Ｃ_１２Ｈ_２２Ｏ_１０を有する二糖から誘導されるものである、請求項１
〜４または６のいずれか一項に記載の二糖誘導体。
【請求項１０】アロロース、アルトリオース、フルクトース、ガラクトース、グルコース、グ
ロース、イノシトール、マンノース、ソルボース、サッカロース、マルトース、
ラクトース、ラクツロース、アラビノース、キシロース、リボース、セロビオー
ス、ゲンチオビオース、スクロース、ツラノース、またはメリビオースから誘導
されるものである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単糖または二糖誘導体
。
【請求項１１】少なくとも１個の陰イオン基が、一般式−ＳＯ_２−ＯＲを有する硫酸エステル
、または一般式−ＰＯ_２−（ＯＲ）_２を有するリン酸エステル（ここで、Ｒは一
価の陽イオンである）である、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の単糖また
は二糖誘導体。
【請求項１２】いずれのＲも、独立して、Ｈ^＋、Ｋ^＋、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋およびＮＨ_４ ^＋からな
る群から選択されるものである、請求項１４に記載の単糖または二糖誘導体。
【請求項１３】脂肪酸エステル基の各々が、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ_３（式中
、ｘは少なくとも４である）、−ＯＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ＝ＣＨ−（
ＣＨ_２）_ｙ−ＣＨ_３（式中、ｘ＋ｙは少なくとも４であり、好ましくは２４以下
である）、または−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ_２）_ｙ −ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ_２）_ｚ−ＣＨ_３（式中、ｘ＋ｙ＋ｚは２〜２０である）の
一般式で示されるものである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単糖また
は二糖誘導体。
【請求項１４】脂肪酸エステル基の各々が−ＯＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ_３（式中、ｘ
は６〜１４である）の一般式で示されるものである、請求項１３に記載の単糖ま
たは二糖誘導体。
【請求項１５】各脂肪酸エステル基が−ＯＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＨ_３（式中、ｘは６
、８、１０または１２である）の一般式で示されるものである、請求項１３に記
載の単糖または二糖誘導体。
【請求項１６】アジュバントとしての、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単糖または二
糖誘導体の使用。
【請求項１７】請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単糖または二糖誘導体（Ｉ）、水不混
和液相（II）、乳化剤または安定剤（III）および所望により水相（IV）を含ん
でなる、アジュバント製剤。
【請求項１８】水不混和相（II）が油である、請求項１７に記載のアジュバント製剤。
【請求項１９】水不混和相（II）が、スクアラン、スクアレン、鉱油、植物油、ヘキサデカン
、フルオロカーボンまたはシリコーン油である、請求項１７または１８に記載の
アジュバント製剤。
【請求項２０】乳化剤または安定剤（III）が、親水性親油性バランス値が１０を超える非イ
オン界面活性剤、糖脂肪酸エステル、または親水性親油性バランス値が１０を超
える陰イオン界面活性剤である、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載のアジ
ュバント製剤。
【請求項２１】乳化剤または安定剤（III）が請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単糖ま
たは二糖誘導体である、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載のアジュバント
製剤。
【請求項２２】請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単糖または二糖誘導体、水不混和固相
（Ｖ）および所望により水相（IV）を含有する、アジュバント製剤。
【請求項２３】水不混和固相（Ｖ）が不溶性の塩である、請求項２２に記載のアジュバント製
剤。
【請求項２４】不溶性の塩が、アルミニウムまたはカルシウム塩、好ましくは水酸化アルミニ
ウム、リン酸アルミニウム、リン酸カルシウム、シリカまたはその混合物である
、請求項２３に記載のアジュバント製剤。
【請求項２５】請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単糖もしくは二糖誘導体、または請求
項１７〜２４のいずれか一項に記載のアジュバント製剤を含んでなり、抗原性成
分をさらに含んでなる、ワクチン。
【請求項２６】請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単糖もしくは二糖誘導体の製造方法で
あって、単糖または二糖を、逐次または同時に、塩化アコイルおよびスルホン化
剤と反応させる、方法。
【請求項２７】単糖または二糖を塩化アコイルおよびスルホン化剤と周囲温度で反応させ、次
いで単糖または二糖、塩化アコイルおよびスルホン化剤の混合物の温度を約５０
〜７０℃にする、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】塩化アコイルが、塩化ヘキサノイル、塩化オクタノイル、塩化デカノイル、塩
化ドデカノイル、塩化テトラデカノイル、塩化ヘキサデカノイル、塩化オクタデ
カノイル、塩化オレオイルまたはこれらの混合物である、請求項２６または２７
に記載の方法。
【請求項２９】スルホン化剤が、ＳＯ_３ガス、ＨＣｌＳＯ_３、ＳＯ_３−ピリジン、ＳＯ_３−２
−メチルピリジン、ＳＯ_３−２，６−ジメチルピリジン、ＳＯ_３−ジメチルホル
ムアミド、ＳＯ_３−トリメチルアミン、ＳＯ_３−トリエチルアミン、ＳＯ_３−ジ
メチルアラニン、ＳＯ_３−Ｎ−エチルモルホリン、ＳＯ_３−ジエチルアラニン、
ＳＯ_３−ジオキサンまたはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項２
６〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】乳化剤としての、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単糖または二糖誘導
体の使用。