JP2000157294A - β位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の製造法 - Google Patents
β位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の製造法Info
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- JP2000157294A JP2000157294A JP10336609A JP33660998A JP2000157294A JP 2000157294 A JP2000157294 A JP 2000157294A JP 10336609 A JP10336609 A JP 10336609A JP 33660998 A JP33660998 A JP 33660998A JP 2000157294 A JP2000157294 A JP 2000157294A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 β位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸
の４種類の立体異性体の１つを分離する、効率よく簡便
な製造法の開発が望まれていた。 【解決手段】 光学活性α−アミノ酸の製造等に用いら
れているＤ又はＬ−デカルバミラーゼが、Ｎ−カルバミ
ル−α−アミノ酸のβ位の立体配置の違いを認識してい
ることを発見した。そして、これらの酵素を適切にえら
んで利用することにり、β位に不斉炭素を持つ光学活性
α−アミノ酸の立体異性体の１つを効率よく製造する。
の４種類の立体異性体の１つを分離する、効率よく簡便
な製造法の開発が望まれていた。 【解決手段】 光学活性α−アミノ酸の製造等に用いら
れているＤ又はＬ−デカルバミラーゼが、Ｎ−カルバミ
ル−α−アミノ酸のβ位の立体配置の違いを認識してい
ることを発見した。そして、これらの酵素を適切にえら
んで利用することにり、β位に不斉炭素を持つ光学活性
α−アミノ酸の立体異性体の１つを効率よく製造する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は医薬品や農薬等の中
間体として用いられるα、β位に不斉炭素を持つ光学活
性アミノ酸の製造法、特にＮ−カルバミル−Ｄ−α−ア
ミノ酸のカルバミル基を除去して対応するＤ−α−アミ
ノ酸に変換する酵素（以下、Ｄ−デカルバミラ−ゼと称
する）、またはＮ−カルバミル−Ｌ−α−アミノ酸のカ
ルバミル基を除去して対応するＬ−α−アミノ酸に変換
する酵素（以下、Ｌ−デカルバミラ−ゼと称する）を使
用したβ位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の製
造に関する。例えばスレオニンやイソロイシンを合成法
で製造する場合、副生してくるアロ体を除去する技術と
して利用できる。
間体として用いられるα、β位に不斉炭素を持つ光学活
性アミノ酸の製造法、特にＮ−カルバミル−Ｄ−α−ア
ミノ酸のカルバミル基を除去して対応するＤ−α−アミ
ノ酸に変換する酵素（以下、Ｄ−デカルバミラ−ゼと称
する）、またはＮ−カルバミル−Ｌ−α−アミノ酸のカ
ルバミル基を除去して対応するＬ−α−アミノ酸に変換
する酵素（以下、Ｌ−デカルバミラ−ゼと称する）を使
用したβ位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の製
造に関する。例えばスレオニンやイソロイシンを合成法
で製造する場合、副生してくるアロ体を除去する技術と
して利用できる。
【０００２】
【従来の技術】β位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミ
ノ酸では４種類の立体異性体が存在するが、これらの共
存する状態（例えばアミノ酸を化学合成した場合）では
目的とする異性体を分離することが必要である。その分
離には、例えば溶解度の差等を利用したジアステレオマ
−相互の分離と、化学的な光学分割等による鏡像体の分
離を組み合わせた方法がとられる為、操作が煩雑で効率
が悪かった。
ノ酸では４種類の立体異性体が存在するが、これらの共
存する状態（例えばアミノ酸を化学合成した場合）では
目的とする異性体を分離することが必要である。その分
離には、例えば溶解度の差等を利用したジアステレオマ
−相互の分離と、化学的な光学分割等による鏡像体の分
離を組み合わせた方法がとられる為、操作が煩雑で効率
が悪かった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、天然又は非
天然のβ位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の４
つの異性体から目的とするジアステレオマ−を分離する
ための、効率よく簡便な方法の提供を目的とする。
天然のβ位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の４
つの異性体から目的とするジアステレオマ−を分離する
ための、効率よく簡便な方法の提供を目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、Ｄ−α−
アミノ酸の製造等に用いられているＤ−デカルバミラ−
ゼ、及びＬ−α−アミノ酸の製造等に用いられているＬ
−デカルバミラ−ゼについてその性質を精査したとこ
ろ、Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸のβ位の立体配置の
違いを認識していることを発見し、これらの酵素を利用
することによってβ位に不斉炭素を持つ光学活性α−ア
ミノ酸を効率よく製造する方法を発明することにより本
発明を完成させるに至った。
アミノ酸の製造等に用いられているＤ−デカルバミラ−
ゼ、及びＬ−α−アミノ酸の製造等に用いられているＬ
−デカルバミラ−ゼについてその性質を精査したとこ
ろ、Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸のβ位の立体配置の
違いを認識していることを発見し、これらの酵素を利用
することによってβ位に不斉炭素を持つ光学活性α−ア
ミノ酸を効率よく製造する方法を発明することにより本
発明を完成させるに至った。
【０００５】即ち、本発明は、式（１） （式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ異なり、かつ Ｃ
Ｈ（ＮＨ2）ＣＯＯＨ、ＣＨ（ＮＨＣＯＮＨ2）ＣＯＯＨ
とはなることはなく、Ｒ1Ｒ2Ｒ3Ｃ*−としてアミノ酸の
特性決定基を表す。Ｃ*は不斉炭素原子を表す）で表さ
れるβ位に不斉炭素を持つＤ−体および／またはＬ−体
のＮ−カルバミル−α−アミノ酸に、β位の不斉炭素に
関する立体配置を異にする異性体が共存する状態で、Ｄ
−またはＬ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸をα−アミ
ノ酸に変換する酵素（デカルバミラ−ゼ）を作用させて
不斉加水分解することを特徴とする 式（２） （Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は前記に同じ）で表されるβ位に不斉
炭素を持つα−アミノ酸の、α，β炭素に関わる４つの
立体異性体の内特定の立体異性体を優先的に製造する方
法 に関わる。以下、本発明を詳述する。
Ｈ（ＮＨ2）ＣＯＯＨ、ＣＨ（ＮＨＣＯＮＨ2）ＣＯＯＨ
とはなることはなく、Ｒ1Ｒ2Ｒ3Ｃ*−としてアミノ酸の
特性決定基を表す。Ｃ*は不斉炭素原子を表す）で表さ
れるβ位に不斉炭素を持つＤ−体および／またはＬ−体
のＮ−カルバミル−α−アミノ酸に、β位の不斉炭素に
関する立体配置を異にする異性体が共存する状態で、Ｄ
−またはＬ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸をα−アミ
ノ酸に変換する酵素（デカルバミラ−ゼ）を作用させて
不斉加水分解することを特徴とする 式（２） （Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は前記に同じ）で表されるβ位に不斉
炭素を持つα−アミノ酸の、α，β炭素に関わる４つの
立体異性体の内特定の立体異性体を優先的に製造する方
法 に関わる。以下、本発明を詳述する。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明者らはβ位に不斉を持つ光
学活性α−アミノ酸であるスレオニン、イソロイシン等
を、Ｄ−α−アミノ酸の製造等に用いられているＤ−デ
カルバミラ−ゼ、及びＬ−α−アミノ酸の製造等に用い
られているＬ−デカルバミラ−ゼを用いて、そのそれぞ
れ対応するＮ−カルバミル−α−アミノ酸より製造する
研究を行っていた際に、該酵素がＤ体、Ｌ体の識別のみ
ではなく、β位の立体配置の違いを認識していることを
発見した。すなわち、スレオニンの例で説明すると、Ｎ
−カルバミル−スレオニンの４種の立体異性体（D-およ
びL-スレオニンとD-およびL-アロスレオニンのＮ−カル
バミル体）の共存する状態でＤ-体特異的なＤ−デカル
バミラ−ゼ、例えばアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ
（Agrobacterium sp.） KNK712（FERM BP-1900）由来の
Ｄ−デカルバミラ−ゼ等を作用させたところ、Ｄ-体特
異的に脱カルバミルされるが、生成してくるＤ−アミノ
酸のallo体とthreo体の比が基質として用いたＮ−カル
バミル体の比と大きく異なり、Ｄ−allo体が優先的に生
成していた。そこで、その反応の時間的な経過を見たと
ころ、反応の初期においてＤ− allo体の生成する優先
率が高く、時間と共にallo体と threo体の比が変化し
ており、例えばアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK
712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラーゼ等を
作用させた場合には反応初期においてＤ− allo体が優
先的に生成し、時間の経過と共にallo体／threo体比の
値が減少していくという現象を発見した。このようなＤ
−またはＬ−デカルバミラ−ゼがβ-位の立体配置を識
別するという知見は、β位に不斉炭素を持つα−アミノ
酸とそのβ位の立体配置を異にする異性体が共存／夾雑
する状態にある場合、当該アミノ酸をＮ−カルバミル体
とした後適切なカルバミラ−ゼを作用させて一方の異性
体のカルバミル基を優先的に脱離し目的の立体配置を持
つアミノ酸を優先的に得ることに使用することができ
る。その上Ｄ−体とＬ−体のアミノ酸が共存している場
合、即ち４種の異性体のそれぞれ対応するＮ−カルバミ
ル−α−アミノ酸が共存する状態で、Ｄ−デカルバミラ
−ゼまたはＬ−デカルバミラ−ゼを適宜使用して、４種
の内特定の異性体を優位に取得することができる。式
（１）のβ位に不斉炭素を持つα-アミノ酸のＮ−カル
バミル体は構造に特に制限はなく、天然・非天然のα-
アミノ酸のカルバミル体が使用できる。 即ち Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ異なりアルキル基、アリ−
ル基、アリ−ルアルキル基、アミノ基、水酸基、チオ−
ル基、環状アミンなどの複素環、スルフォニル基（以
上、置換基を持っていてもよく又保護基で保護されてい
てもよい）、シアノ基、水素原子あるいはハロゲンなど
を表す。 但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、ＣＨ(ＮＨ2)−ＣＯ
ＯＨやＣＨ(ＮＨＣＯＮＨ2)−ＣＯＯＨとはならない。
置換基としては、アルキル基、アルコキシル基、アルキ
レンジオキシ基、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、
ハロゲン、シアノ基、スルフォニル基など通常の化学化
合物を構成する基をとることができる。アルキル基とし
ては、メチル、エチル、など炭素数１−６のアルキル
基、アリ−ル基としてはフェニル、アリ−ルアルキル基
としてはベンジル、フェネチルなど、アルコキシ基とし
てはメトキシ、エトキシなどをとることができる。
（１）の化合物としては、式（２）のα-アミノ酸のＤ
−体および／またはＬ−体のＮ−カルバミル化合物を使
用することができる。つまりＤ−アミノ酸またはＬ−ア
ミノ酸だけのβ位の２種の異性体が共存する状態、Ｄ−
アミノ酸とＬ−アミノ酸のそれぞれのβ位の異性体すな
わち４種の異性体が共存する状態いずれでも適用でき
る。それぞれの異性体の存在比率にも制限はなく、分離
を必要とする程度の割合であれば本発明を使用すること
ができる。例えばＮ−カルバミル−スレオニン、Ｎ−カ
ルバミル−イソロイシン、Ｎ−カルバミル−３，４−メ
チレンジオキシフェニルセリン或いはＮ−カルバミル−
β−メチルフェニルアラニン等で、それぞれのＤ−およ
び／またはＬ−体についてβ位の異性体が、任意の割合
で共存する状態で使用する事が出来る。反応は、Ｄ−ま
たはＬ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸を対応するＤ−
またはＬ−α−アミノ酸に変換する酵素（デカルバミラ
ーゼ）を式（１）の化合物に作用させて加水分解しカル
バミル基を脱離する。Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ
酸に選択的に作用する酵素をＤ−デカルバミラーゼ、Ｌ
−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸に選択的に作用する酵
素をＬ−デカルバミラーゼと言う。本発明で用いること
が出来るＤ−及びＬ−デカルバミラ−ゼとしては特に限
定されるものではないが、例えばアグロバクテリウム・
スピ−シ−ズ KNK712（FERM BP-1900）、ブラストバク
タ−・スピ−シ−ズ（Blastobacter sp.）A17p-4（FERM
BP-4410）の生産するＤ−デカルバミラ−ゼあるいはア
ルカリゲネス・キシロソキシダンス（Alcaligenes xylo
soxidans）A35（FERM BP-6383）の生産するＬ−デカル
バミラ−ゼ等が利用可能である。また、酵素の利用の形
態としては精製酵素のみならず、各種精製段階の粗精製
酵素、該酵素を生産する菌体、その破砕物、その処理
物、或いは担体等に固定化した菌体や各種精製段階の酵
素等が使用できる。デカルバミラ−ゼによる不斉加水分
解の条件、即ちｐＨ、温度、式（１）の基質濃度酵素濃
度などは、使用するデカルバミラ−ゼに応じて適宜決め
ることができる。産生される式（２）のアミノ酸の４つ
の異性体としてはＤ−体、Ｌ−体についてそれぞれエリ
スロ型、スレオ型あるいは、別の表現をすれば、β−炭
素の立体配置が（Ｒ）もしくは（Ｓ）の場合がありう
る。Ｄ−α−アミノ酸であり且つそのα-炭素の立体配
置が（Ｒ）である式（１）のＮ−カルバミルアミノ酸
に、そのβ位の不斉炭素の立体配置を異にする２つの異
性体の共存下、Ｄ−デカルバミラ−ゼを作用させると、
優先的に生産される式（２）のアミノ酸のβ位の立体配
置は（Ｒ）となる場合、即ち（αＲ、βＲ）体となる場
合の多いことが観察された。式（１）のＮ−カルバミル
−α−アミノ酸の（αＲ）体と（αＳ）体とが共存し、
従って４つの異性体が共存する場合でも同じく（αＲ，
βＲ）の異性体が優先することが観察された。これは、
アミノ酸のＤ−体が（αＲ）配置、Ｌ−体が（αＳ）配
置である式（１）の化合物についてあてはまる。例え
ば、本願の式（１）においてＲ1、Ｒ2、Ｒ3が置換また
は無置換のアルキル基、アリ−ル基およびアリ−ルアル
キル基や水酸基でＤ−体が（αＲ）配置となる場合であ
って、置換基によっても無置換時とβ炭素の立体配置の
(R,S)表示が同じである式（１）の化合物については、
Ｄ−体にＤ−デカルバミラーゼを作用させるとβ位の不
斉炭素の立体配置は（Ｒ）配置となる。本願において具
体的に開示した式（１），（２）の化合物の場合、すべ
てＤ−体は（αＲ）配置であり、優先的に生成する
（２）のアミノ酸は（βＲ）であった。本来、Ｄ−また
はＬ−カルバミラ−ゼは、Ｄ−またはＬ−アミノ酸を識
別する酵素であり、酵素反応の基質となるアミノ酸につ
いては特性決定基（Ｒ1Ｒ2Ｒ3Ｃ*−）のα−炭素に結合
する空間的な位置関係は決まっている。又α−炭素に結
合する他の基もＨ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、と共通してい
る。それが立体選択性をより厳密にしていると思われる
が、β−炭素の場合、決まっている基は ＣＨ（Ｎ
Ｈ2）ＣＯＯＨ １つで他の基は多様であり、Ｄ−体と
Ｌ−体とを識別する酵素にとってβ−位の立体選択性は
必須ではない。しかしながら、本発明ではＤ−またはＬ
−デカルバミラーゼがβ位を認識し、４種類の異性体の
中から特定の１つの化合物を認識していることは明らか
である。
学活性α−アミノ酸であるスレオニン、イソロイシン等
を、Ｄ−α−アミノ酸の製造等に用いられているＤ−デ
カルバミラ−ゼ、及びＬ−α−アミノ酸の製造等に用い
られているＬ−デカルバミラ−ゼを用いて、そのそれぞ
れ対応するＮ−カルバミル−α−アミノ酸より製造する
研究を行っていた際に、該酵素がＤ体、Ｌ体の識別のみ
ではなく、β位の立体配置の違いを認識していることを
発見した。すなわち、スレオニンの例で説明すると、Ｎ
−カルバミル−スレオニンの４種の立体異性体（D-およ
びL-スレオニンとD-およびL-アロスレオニンのＮ−カル
バミル体）の共存する状態でＤ-体特異的なＤ−デカル
バミラ−ゼ、例えばアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ
（Agrobacterium sp.） KNK712（FERM BP-1900）由来の
Ｄ−デカルバミラ−ゼ等を作用させたところ、Ｄ-体特
異的に脱カルバミルされるが、生成してくるＤ−アミノ
酸のallo体とthreo体の比が基質として用いたＮ−カル
バミル体の比と大きく異なり、Ｄ−allo体が優先的に生
成していた。そこで、その反応の時間的な経過を見たと
ころ、反応の初期においてＤ− allo体の生成する優先
率が高く、時間と共にallo体と threo体の比が変化し
ており、例えばアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK
712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラーゼ等を
作用させた場合には反応初期においてＤ− allo体が優
先的に生成し、時間の経過と共にallo体／threo体比の
値が減少していくという現象を発見した。このようなＤ
−またはＬ−デカルバミラ−ゼがβ-位の立体配置を識
別するという知見は、β位に不斉炭素を持つα−アミノ
酸とそのβ位の立体配置を異にする異性体が共存／夾雑
する状態にある場合、当該アミノ酸をＮ−カルバミル体
とした後適切なカルバミラ−ゼを作用させて一方の異性
体のカルバミル基を優先的に脱離し目的の立体配置を持
つアミノ酸を優先的に得ることに使用することができ
る。その上Ｄ−体とＬ−体のアミノ酸が共存している場
合、即ち４種の異性体のそれぞれ対応するＮ−カルバミ
ル−α−アミノ酸が共存する状態で、Ｄ−デカルバミラ
−ゼまたはＬ−デカルバミラ−ゼを適宜使用して、４種
の内特定の異性体を優位に取得することができる。式
（１）のβ位に不斉炭素を持つα-アミノ酸のＮ−カル
バミル体は構造に特に制限はなく、天然・非天然のα-
アミノ酸のカルバミル体が使用できる。 即ち Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ異なりアルキル基、アリ−
ル基、アリ−ルアルキル基、アミノ基、水酸基、チオ−
ル基、環状アミンなどの複素環、スルフォニル基（以
上、置換基を持っていてもよく又保護基で保護されてい
てもよい）、シアノ基、水素原子あるいはハロゲンなど
を表す。 但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、ＣＨ(ＮＨ2)−ＣＯ
ＯＨやＣＨ(ＮＨＣＯＮＨ2)−ＣＯＯＨとはならない。
置換基としては、アルキル基、アルコキシル基、アルキ
レンジオキシ基、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、
ハロゲン、シアノ基、スルフォニル基など通常の化学化
合物を構成する基をとることができる。アルキル基とし
ては、メチル、エチル、など炭素数１−６のアルキル
基、アリ−ル基としてはフェニル、アリ−ルアルキル基
としてはベンジル、フェネチルなど、アルコキシ基とし
てはメトキシ、エトキシなどをとることができる。
（１）の化合物としては、式（２）のα-アミノ酸のＤ
−体および／またはＬ−体のＮ−カルバミル化合物を使
用することができる。つまりＤ−アミノ酸またはＬ−ア
ミノ酸だけのβ位の２種の異性体が共存する状態、Ｄ−
アミノ酸とＬ−アミノ酸のそれぞれのβ位の異性体すな
わち４種の異性体が共存する状態いずれでも適用でき
る。それぞれの異性体の存在比率にも制限はなく、分離
を必要とする程度の割合であれば本発明を使用すること
ができる。例えばＮ−カルバミル−スレオニン、Ｎ−カ
ルバミル−イソロイシン、Ｎ−カルバミル−３，４−メ
チレンジオキシフェニルセリン或いはＮ−カルバミル−
β−メチルフェニルアラニン等で、それぞれのＤ−およ
び／またはＬ−体についてβ位の異性体が、任意の割合
で共存する状態で使用する事が出来る。反応は、Ｄ−ま
たはＬ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸を対応するＤ−
またはＬ−α−アミノ酸に変換する酵素（デカルバミラ
ーゼ）を式（１）の化合物に作用させて加水分解しカル
バミル基を脱離する。Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ
酸に選択的に作用する酵素をＤ−デカルバミラーゼ、Ｌ
−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸に選択的に作用する酵
素をＬ−デカルバミラーゼと言う。本発明で用いること
が出来るＤ−及びＬ−デカルバミラ−ゼとしては特に限
定されるものではないが、例えばアグロバクテリウム・
スピ−シ−ズ KNK712（FERM BP-1900）、ブラストバク
タ−・スピ−シ−ズ（Blastobacter sp.）A17p-4（FERM
BP-4410）の生産するＤ−デカルバミラ−ゼあるいはア
ルカリゲネス・キシロソキシダンス（Alcaligenes xylo
soxidans）A35（FERM BP-6383）の生産するＬ−デカル
バミラ−ゼ等が利用可能である。また、酵素の利用の形
態としては精製酵素のみならず、各種精製段階の粗精製
酵素、該酵素を生産する菌体、その破砕物、その処理
物、或いは担体等に固定化した菌体や各種精製段階の酵
素等が使用できる。デカルバミラ−ゼによる不斉加水分
解の条件、即ちｐＨ、温度、式（１）の基質濃度酵素濃
度などは、使用するデカルバミラ−ゼに応じて適宜決め
ることができる。産生される式（２）のアミノ酸の４つ
の異性体としてはＤ−体、Ｌ−体についてそれぞれエリ
スロ型、スレオ型あるいは、別の表現をすれば、β−炭
素の立体配置が（Ｒ）もしくは（Ｓ）の場合がありう
る。Ｄ−α−アミノ酸であり且つそのα-炭素の立体配
置が（Ｒ）である式（１）のＮ−カルバミルアミノ酸
に、そのβ位の不斉炭素の立体配置を異にする２つの異
性体の共存下、Ｄ−デカルバミラ−ゼを作用させると、
優先的に生産される式（２）のアミノ酸のβ位の立体配
置は（Ｒ）となる場合、即ち（αＲ、βＲ）体となる場
合の多いことが観察された。式（１）のＮ−カルバミル
−α−アミノ酸の（αＲ）体と（αＳ）体とが共存し、
従って４つの異性体が共存する場合でも同じく（αＲ，
βＲ）の異性体が優先することが観察された。これは、
アミノ酸のＤ−体が（αＲ）配置、Ｌ−体が（αＳ）配
置である式（１）の化合物についてあてはまる。例え
ば、本願の式（１）においてＲ1、Ｒ2、Ｒ3が置換また
は無置換のアルキル基、アリ−ル基およびアリ−ルアル
キル基や水酸基でＤ−体が（αＲ）配置となる場合であ
って、置換基によっても無置換時とβ炭素の立体配置の
(R,S)表示が同じである式（１）の化合物については、
Ｄ−体にＤ−デカルバミラーゼを作用させるとβ位の不
斉炭素の立体配置は（Ｒ）配置となる。本願において具
体的に開示した式（１），（２）の化合物の場合、すべ
てＤ−体は（αＲ）配置であり、優先的に生成する
（２）のアミノ酸は（βＲ）であった。本来、Ｄ−また
はＬ−カルバミラ−ゼは、Ｄ−またはＬ−アミノ酸を識
別する酵素であり、酵素反応の基質となるアミノ酸につ
いては特性決定基（Ｒ1Ｒ2Ｒ3Ｃ*−）のα−炭素に結合
する空間的な位置関係は決まっている。又α−炭素に結
合する他の基もＨ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、と共通してい
る。それが立体選択性をより厳密にしていると思われる
が、β−炭素の場合、決まっている基は ＣＨ（Ｎ
Ｈ2）ＣＯＯＨ １つで他の基は多様であり、Ｄ−体と
Ｌ−体とを識別する酵素にとってβ−位の立体選択性は
必須ではない。しかしながら、本発明ではＤ−またはＬ
−デカルバミラーゼがβ位を認識し、４種類の異性体の
中から特定の１つの化合物を認識していることは明らか
である。
【０００７】脱カルバミル反応に使用する式（１）のＮ
−カルバミルアミノ酸の濃度は、およそ 0.001％〜２
０％、反応温度やｐＨは使用するカルバミラーゼに応じ
て通常１０−９０℃、ｐＨ６−９から適宜選ぶことがで
きる。反応は水性媒体、実質的に水媒体中で行う。これ
らは従来知られているＤ−またはＬ−カルバミラーゼの
使用条件と特に異なるところはない。
−カルバミルアミノ酸の濃度は、およそ 0.001％〜２
０％、反応温度やｐＨは使用するカルバミラーゼに応じ
て通常１０−９０℃、ｐＨ６−９から適宜選ぶことがで
きる。反応は水性媒体、実質的に水媒体中で行う。これ
らは従来知られているＤ−またはＬ−カルバミラーゼの
使用条件と特に異なるところはない。
【０００８】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明する。
明する。
【０００９】（実施例１）20 mMのＮ−カルバミル−ス
レオニン（４種の異性体それぞれ5 mM）、500 mMリン酸
カリウム緩衝液（pH 6.0）、0.80単位（Ｎ−カルバミル
−Ｄ−ｐ−ヒドロキシフェニルグリシンより、ｐＨ7.
0、30℃の反応で１分間に１μMのＤ−ｐ−ヒドロキシフ
ェニルグリシンを生成する酵素量を１単位と定義す
る。）のアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK712（F
ERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.1 m
Lの溶液を30℃で反応させ、経時的に一部サンプリング
して分析を行った。分析は反応によって生成したアミノ
酸を Buckと Kurmmenの方法［Buck,R.H.とKrummen,K.,
ジャ−ナル オブ クロマトグラフィ−（ J. Chromato
gr.）,387巻,255-265 (1987年)］に従ってO-フタルアル
デヒドとＮ−アセチル−Ｌ−システインによって誘導体
とし、Shim-pack CLC-ODS(M)カラム（4.6×250 mm）を
装着した高速液体クロマトグラフィ−（島津製作所製）
を用い、50 mMのリン酸カリウム緩衝液(pH 6.5)、メタ
ノ−ル、テトラヒドロフランを70:40:2の容量比で含む
溶液を溶離液として分離し、励起波長344 nmで443 nmの
蛍光を検出することによって行った。その結果を図１に
示すが、Ｄ体のみが選択的に脱カルバミルされており、
そのうちＤ−アロスレオニンが優先的に生成しているこ
とが分かった。
レオニン（４種の異性体それぞれ5 mM）、500 mMリン酸
カリウム緩衝液（pH 6.0）、0.80単位（Ｎ−カルバミル
−Ｄ−ｐ−ヒドロキシフェニルグリシンより、ｐＨ7.
0、30℃の反応で１分間に１μMのＤ−ｐ−ヒドロキシフ
ェニルグリシンを生成する酵素量を１単位と定義す
る。）のアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK712（F
ERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.1 m
Lの溶液を30℃で反応させ、経時的に一部サンプリング
して分析を行った。分析は反応によって生成したアミノ
酸を Buckと Kurmmenの方法［Buck,R.H.とKrummen,K.,
ジャ−ナル オブ クロマトグラフィ−（ J. Chromato
gr.）,387巻,255-265 (1987年)］に従ってO-フタルアル
デヒドとＮ−アセチル−Ｌ−システインによって誘導体
とし、Shim-pack CLC-ODS(M)カラム（4.6×250 mm）を
装着した高速液体クロマトグラフィ−（島津製作所製）
を用い、50 mMのリン酸カリウム緩衝液(pH 6.5)、メタ
ノ−ル、テトラヒドロフランを70:40:2の容量比で含む
溶液を溶離液として分離し、励起波長344 nmで443 nmの
蛍光を検出することによって行った。その結果を図１に
示すが、Ｄ体のみが選択的に脱カルバミルされており、
そのうちＤ−アロスレオニンが優先的に生成しているこ
とが分かった。
【００１０】（実施例２）8 mMのＮ−カルバミル−イソ
ロイシン（４種の異性体それぞれ2 mM）、500 mMホウ酸
−水酸化ナトリウム緩衝液（pH 11.0）、0.68単位のア
グロバクテリウム・スピーシーズ KNK712（FERM BP-190
0）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.2 mLの溶液を3
0℃で反応させ、経時的に一部サンプリングして分析を
行った。その結果を図２に示すが、Ｄ体のみが選択的に
脱カルバミルされており、そのうちＤ−イソロイシンが
優先的に生成していることが分かった。 （実施例３）6.25mMのＮ−カルバミル−３，４−メチレ
ンジオキシフェニルセリン（４種の異性体それぞれ1.56
25 mM）、500 mMトリス−塩酸緩衝液（pH 8.5）、1.7単
位のアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK712（FERM
BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.2 mLの
溶液を30℃で反応させ、経時的に一部サンプリングして
分析を行った。その結果を図３に示すが、Ｄ体のみが選
択的に脱カルバミルされており、そのうちＤ−エリスロ
−３，４−メチレンジオキシフェニルセリンが優先的に
生成していることが分かった。
ロイシン（４種の異性体それぞれ2 mM）、500 mMホウ酸
−水酸化ナトリウム緩衝液（pH 11.0）、0.68単位のア
グロバクテリウム・スピーシーズ KNK712（FERM BP-190
0）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.2 mLの溶液を3
0℃で反応させ、経時的に一部サンプリングして分析を
行った。その結果を図２に示すが、Ｄ体のみが選択的に
脱カルバミルされており、そのうちＤ−イソロイシンが
優先的に生成していることが分かった。 （実施例３）6.25mMのＮ−カルバミル−３，４−メチレ
ンジオキシフェニルセリン（４種の異性体それぞれ1.56
25 mM）、500 mMトリス−塩酸緩衝液（pH 8.5）、1.7単
位のアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK712（FERM
BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.2 mLの
溶液を30℃で反応させ、経時的に一部サンプリングして
分析を行った。その結果を図３に示すが、Ｄ体のみが選
択的に脱カルバミルされており、そのうちＤ−エリスロ
−３，４−メチレンジオキシフェニルセリンが優先的に
生成していることが分かった。
【００１１】（実施例４）5 mMのＮ−カルバミル−β−
メチルフェニルアラニン（４種の異性体それぞれ1.25 m
M）、500 mMホウ酸−水酸化ナトリウム緩衝液（pH 9.
0）、1.7単位のアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK
712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含
む0.2 mLの溶液を30℃で反応させ、経時的に一部サンプ
リングして分析を行った。その結果を図４に示すが、Ｄ
体のみが選択的に脱カルバミルされており、そのうちス
レオ−Ｄ−β−メチルフェニルアラニンが優先的に生成
していることが分かった。 （実施例５）Ｄ−デカルバミラ−ゼを産生するブラスト
バクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4（FERM BP-4410）の湿
菌体10％(W/V)、20 mMのＮ−カルバミル−β−メチルフ
ェニルアラニン（４種の異性体それぞれ5 mM）、200 mM
リン酸緩衝液（pH 7.0）を含む0.2 mLの溶液を30℃で一
晩反応させ、キラルＴＬＣ法（Macherey-Nagel社製、CH
IRALPLATE；アセトニトリル、メタノール及び水を４:
１:１で含む展開液によって分離し、0.2 %ニンヒドリン
（アセトン溶液）によって検出)により分析した。その
結果を図５に示すが、Ｄ体のみが選択的に脱カルバミル
されており、そのうちスレオ−Ｄ−β−メチルフェニル
アラニンが優先的に生成していることが分かった。
メチルフェニルアラニン（４種の異性体それぞれ1.25 m
M）、500 mMホウ酸−水酸化ナトリウム緩衝液（pH 9.
0）、1.7単位のアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK
712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含
む0.2 mLの溶液を30℃で反応させ、経時的に一部サンプ
リングして分析を行った。その結果を図４に示すが、Ｄ
体のみが選択的に脱カルバミルされており、そのうちス
レオ−Ｄ−β−メチルフェニルアラニンが優先的に生成
していることが分かった。 （実施例５）Ｄ−デカルバミラ−ゼを産生するブラスト
バクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4（FERM BP-4410）の湿
菌体10％(W/V)、20 mMのＮ−カルバミル−β−メチルフ
ェニルアラニン（４種の異性体それぞれ5 mM）、200 mM
リン酸緩衝液（pH 7.0）を含む0.2 mLの溶液を30℃で一
晩反応させ、キラルＴＬＣ法（Macherey-Nagel社製、CH
IRALPLATE；アセトニトリル、メタノール及び水を４:
１:１で含む展開液によって分離し、0.2 %ニンヒドリン
（アセトン溶液）によって検出)により分析した。その
結果を図５に示すが、Ｄ体のみが選択的に脱カルバミル
されており、そのうちスレオ−Ｄ−β−メチルフェニル
アラニンが優先的に生成していることが分かった。
【００１２】（実施例６）20 mMのＮ−カルバミル−Ｄ
−β−メチルフェニルアラニン（４種の異性体それぞれ
5 mM）、200 mMリン酸緩衝液（pH 7.0）、0.24単位のブ
ラストバクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4（FERM BP-441
0）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.2 mLの溶液を3
0℃で反応させ、一晩反応させ、キラルＴＬＣによって
分析を行った。その結果を図６に示すが、Ｄ体のみが選
択的に脱カルバミルされており、そのうちスレオ−Ｄ−
β−メチルフェニルアラニンが優先的に生成しているこ
とが分かった。 （実施例７）Ｌ−デカルバミラ−ゼを産生するアルカリ
ゲネス・キシロソキシダンス A35（FERM BP-6383）の湿
菌体10％(W/V)、20 mMのＮ−カルバミル−β−メチルフ
ェニルアラニン（４種の異性体それぞれ5 mM）、200 mM
トリス−塩酸緩衝液（pH 7.4）を含む0.2 mLの溶液を30
℃で一晩反応させ、キラルＴＬＣによって分析を行っ
た。アミノ酸生産量及びカルバミルアミノ酸減少量は高
速液体クロマトグラフィ−法［コスモシ−ル（登録商
標）5C18-ARカラム；35％メタノール水溶液(pH 2.5にリ
ン酸で調整)を溶離液とし、260 nmの吸光度により定
量］によって分析を行った。そしてアミノ酸の光学純度
の分析は、実施例１と同様に Buckと Kurmmenの方法に
よって行った。その結果を図５のカラムｂ及び図７に示
すが、Ｌ体のみが選択的に脱カルバミルされており、そ
のうちスレオ−Ｌ−β−メチルフェニルアラニンが優先
的に生成していることが分かった。 （参考例１）アグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK71
2（FERM BP-1900）を生育培地（２５ｇ／ｌ グリセリ
ン、５ｇ／ｌ シュ−クロ−ス、５ｇ／ｌ ＫＨ2Ｐ
Ｏ4、５ｇ／ｌ Ｎａ2ＨＰＯ4、１ｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・
７Ｈ2Ｏ、１０ｍｇ／Ｌ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、４ｇ／
ｌ イ−ストエキストラクト、２ｇ／ｌ 尿素、１ｇ／
ｌ Ｄ−Ｎ−カルバミル−ｐ−ヒドロキシフェニルグリ
シン（ｐＨ６．５））で３３℃、２５時間培養した。こ
の培養液を遠心分離により菌を集め、生理食塩水で菌を
洗浄した後、０．１Ｍ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ
７．０）に懸濁して超音波によって菌を破砕した後、遠
心分離によって上清を分離して無細胞抽出液を得、その
まま又は精製を行ったものをＤ−デカルバミラ−ゼ酵素
液として用いた。 （参考例２）ブラストバクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4
（FERM BP-4410）を生育培地（１ｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4、
１ｇ／ｌ Ｋ2ＨＰＯ4、０．３ｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ、３ｇ／ｌ イーストエキストラクト、３ｇ／ｌ
肉エキス、１０ｇ／ｌ グリセリン、２ｇ／ｌ ポリ
ペプトン、１．５ｇ／ｌ ウラシル（ｐＨ７．０））で
２８℃、７日間培養し、遠心分離によって菌を集め、生
理食塩水で菌を洗浄することにより菌体を調製した。無
細胞抽出液の調製は、この菌体を０．０１Ｍリン酸カリ
ウム緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁して直径０．２５ｍｍ
のガラスビーズを用いて菌を破砕した後、遠心分離によ
って上清を分離した。そしてそのまま又は精製を行った
ものをＤ−デカルバミラーゼ酵素液として用いた。 （参考例３）アルカリゲネス・キシロソキシダンス A35
（FERM BP-6383）を生育培地（１ｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4、
１ｇ／ｌ Ｋ2ＨＰＯ4、０．３ｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ、３ｇ／ｌ イ−ストエキストラクト、１０ｇ／
ｌ グリセリン、１ｇ／ｌＮＨ4Ｃｌ、１．５ｇ／ｌ
Ｎ−カルバミル−Ｌ−ロイシン（ｐＨ７．０））で２８
℃、１日間培養し、遠心分離によって菌を集め、生理食
塩水で菌を洗浄することによりＬ−デカルバミラ−ゼを
含む菌体を調製した。
−β−メチルフェニルアラニン（４種の異性体それぞれ
5 mM）、200 mMリン酸緩衝液（pH 7.0）、0.24単位のブ
ラストバクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4（FERM BP-441
0）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを含む0.2 mLの溶液を3
0℃で反応させ、一晩反応させ、キラルＴＬＣによって
分析を行った。その結果を図６に示すが、Ｄ体のみが選
択的に脱カルバミルされており、そのうちスレオ−Ｄ−
β−メチルフェニルアラニンが優先的に生成しているこ
とが分かった。 （実施例７）Ｌ−デカルバミラ−ゼを産生するアルカリ
ゲネス・キシロソキシダンス A35（FERM BP-6383）の湿
菌体10％(W/V)、20 mMのＮ−カルバミル−β−メチルフ
ェニルアラニン（４種の異性体それぞれ5 mM）、200 mM
トリス−塩酸緩衝液（pH 7.4）を含む0.2 mLの溶液を30
℃で一晩反応させ、キラルＴＬＣによって分析を行っ
た。アミノ酸生産量及びカルバミルアミノ酸減少量は高
速液体クロマトグラフィ−法［コスモシ−ル（登録商
標）5C18-ARカラム；35％メタノール水溶液(pH 2.5にリ
ン酸で調整)を溶離液とし、260 nmの吸光度により定
量］によって分析を行った。そしてアミノ酸の光学純度
の分析は、実施例１と同様に Buckと Kurmmenの方法に
よって行った。その結果を図５のカラムｂ及び図７に示
すが、Ｌ体のみが選択的に脱カルバミルされており、そ
のうちスレオ−Ｌ−β−メチルフェニルアラニンが優先
的に生成していることが分かった。 （参考例１）アグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK71
2（FERM BP-1900）を生育培地（２５ｇ／ｌ グリセリ
ン、５ｇ／ｌ シュ−クロ−ス、５ｇ／ｌ ＫＨ2Ｐ
Ｏ4、５ｇ／ｌ Ｎａ2ＨＰＯ4、１ｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・
７Ｈ2Ｏ、１０ｍｇ／Ｌ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、４ｇ／
ｌ イ−ストエキストラクト、２ｇ／ｌ 尿素、１ｇ／
ｌ Ｄ−Ｎ−カルバミル−ｐ−ヒドロキシフェニルグリ
シン（ｐＨ６．５））で３３℃、２５時間培養した。こ
の培養液を遠心分離により菌を集め、生理食塩水で菌を
洗浄した後、０．１Ｍ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ
７．０）に懸濁して超音波によって菌を破砕した後、遠
心分離によって上清を分離して無細胞抽出液を得、その
まま又は精製を行ったものをＤ−デカルバミラ−ゼ酵素
液として用いた。 （参考例２）ブラストバクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4
（FERM BP-4410）を生育培地（１ｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4、
１ｇ／ｌ Ｋ2ＨＰＯ4、０．３ｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ、３ｇ／ｌ イーストエキストラクト、３ｇ／ｌ
肉エキス、１０ｇ／ｌ グリセリン、２ｇ／ｌ ポリ
ペプトン、１．５ｇ／ｌ ウラシル（ｐＨ７．０））で
２８℃、７日間培養し、遠心分離によって菌を集め、生
理食塩水で菌を洗浄することにより菌体を調製した。無
細胞抽出液の調製は、この菌体を０．０１Ｍリン酸カリ
ウム緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁して直径０．２５ｍｍ
のガラスビーズを用いて菌を破砕した後、遠心分離によ
って上清を分離した。そしてそのまま又は精製を行った
ものをＤ−デカルバミラーゼ酵素液として用いた。 （参考例３）アルカリゲネス・キシロソキシダンス A35
（FERM BP-6383）を生育培地（１ｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4、
１ｇ／ｌ Ｋ2ＨＰＯ4、０．３ｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ、３ｇ／ｌ イ−ストエキストラクト、１０ｇ／
ｌ グリセリン、１ｇ／ｌＮＨ4Ｃｌ、１．５ｇ／ｌ
Ｎ−カルバミル−Ｌ−ロイシン（ｐＨ７．０））で２８
℃、１日間培養し、遠心分離によって菌を集め、生理食
塩水で菌を洗浄することによりＬ−デカルバミラ−ゼを
含む菌体を調製した。
【００１３】
【発明の効果】本発明は、β位に不斉炭素を持つα−ア
ミノ酸の４つの立体異性体から目的とする異性体を優先
的に取得する方法を提供する。スレオニンやイソロイシ
ンなどの合成製造法においてアロ-体との分離に有効で
ある。
ミノ酸の４つの立体異性体から目的とする異性体を優先
的に取得する方法を提供する。スレオニンやイソロイシ
ンなどの合成製造法においてアロ-体との分離に有効で
ある。
【図１】Ｎ−カルバミル−スレオニンの４種の異性体
に、アグロバクテリウム・スピーシーズ KNK712（FERM
BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを作用させた反
応によるＤ−アミノ酸の生産。
に、アグロバクテリウム・スピーシーズ KNK712（FERM
BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを作用させた反
応によるＤ−アミノ酸の生産。
【図２】Ｎ−カルバミル−イソロイシンの４種の異性体
に、アグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK712（FERM
BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを作用させた反
応によるＤ−アミノ酸の生産。
に、アグロバクテリウム・スピ−シ−ズ KNK712（FERM
BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを作用させた反
応によるＤ−アミノ酸の生産。
【図３】Ｎ−カルバミル−３，４−メチレンジオキシフ
ェニルセリンの４種の異性体に、アグロバクテリウム・
スピ−シ−ズ KNK712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカ
ルバミラ−ゼを作用させた反応によるＤ−アミノ酸の生
産。
ェニルセリンの４種の異性体に、アグロバクテリウム・
スピ−シ−ズ KNK712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカ
ルバミラ−ゼを作用させた反応によるＤ−アミノ酸の生
産。
【図４】 Ｎ−カルバミル−β−メチルフェニルアラニ
ンの４種の異性体にアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ
KNK712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼ
を作用させた反応によるＤ−アミノ酸の生産。
ンの４種の異性体にアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ
KNK712（FERM BP-1900）由来のＤ−デカルバミラ−ゼ
を作用させた反応によるＤ−アミノ酸の生産。
【図５】 Ｎ−カルバミル−β−メチルフェニルアラニ
ンの４種の異性体にＤ−デカルバミラ−ゼを産生するブ
ラストバクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4（FERM BP-441
0）（カラムａ）またはＬ−デカルバミラ−ゼを産生す
るアルカリゲネス・キシロソキシダンス A35（FERM BP-
6383）（カラムｂ）の湿菌体を作用させた反応により産
生されたアミノ酸のキラルＴＬＣによる分析。
ンの４種の異性体にＤ−デカルバミラ−ゼを産生するブ
ラストバクタ−・スピ−シ−ズ A17p-4（FERM BP-441
0）（カラムａ）またはＬ−デカルバミラ−ゼを産生す
るアルカリゲネス・キシロソキシダンス A35（FERM BP-
6383）（カラムｂ）の湿菌体を作用させた反応により産
生されたアミノ酸のキラルＴＬＣによる分析。
【図６】 Ｎ−カルバミル−β−メチルフェニルアラニ
ンの４種の異性体にブラストバクタ−・スピ−シ−ズ A
17p-4（FERM BP-4410）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを
作用させた反応により産生されたアミノ酸のキラルＴＬ
Ｃによる分析。
ンの４種の異性体にブラストバクタ−・スピ−シ−ズ A
17p-4（FERM BP-4410）由来のＤ−デカルバミラ−ゼを
作用させた反応により産生されたアミノ酸のキラルＴＬ
Ｃによる分析。
【図７】Ｎ−カルバミル−β−メチルフェニルアラニン
の４種の異性体にＬ−デカルバミラ−ゼを産生するアル
カリゲネス・キシロソキシダンス A35（FERMBP-6383）
の湿菌体を作用させた反応により産生されたアミノ酸の
高速液体クロマトグラフィ−法による分析。上段に反応
後の分析結果を、下段に４種のメチルフェニルアラニン
(Mphe)異性体のピークの保持時間を標準として示す。
の４種の異性体にＬ−デカルバミラ−ゼを産生するアル
カリゲネス・キシロソキシダンス A35（FERMBP-6383）
の湿菌体を作用させた反応により産生されたアミノ酸の
高速液体クロマトグラフィ−法による分析。上段に反応
後の分析結果を、下段に４種のメチルフェニルアラニン
(Mphe)異性体のピークの保持時間を標準として示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:05） Ｃ０７Ｍ 7:00
Claims (12)
- 【請求項１】 式（１） （式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、それぞれ異なり、かつ Ｃ
Ｈ（ＮＨ2）ＣＯＯＨ、ＣＨ（ＮＨＣＯＮＨ2）ＣＯＯＨ
とはなることはなく、Ｒ1Ｒ2Ｒ3Ｃ*−としてアミノ酸の
特性決定基を表す。Ｃ*は不斉炭素原子を表す）で表さ
れるβ位に不斉炭素を持つＤ−体および／またはＬ−体
のＮ−カルバミル−α−アミノ酸に、β位の不斉炭素に
関する立体配置を異にする異性体が共存する状態で、Ｄ
−またはＬ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸をα−アミ
ノ酸に変換する酵素（デカルバミラ−ゼ）を作用させて
不斉加水分解することを特徴とする式（２） （Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は前記に同じ）で表されるβ位に不斉
炭素を持つα−アミノ酸の、α，β炭素に関わる４つの
立体異性体の内特定の立体異性体を優先的に製造する方
法。 - 【請求項２】 Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸のカ
ルバミル基を除去して対応するＤ−α−アミノ酸に変換
する酵素（以下、Ｄ−デカルバミラ−ゼと称する）を、
Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸またはＤ−およびＬ
−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸に作用させる請求項１
記載の製造方法。 - 【請求項３】 用いる酵素がアグロバクテリウム（Agro
bacterium ) 属またはブラストバクタ−（Blastobacte
r）属由来のＤ−デカルバミラ−ゼである請求項２記載
の製造方法。 - 【請求項４】 アグロバクテリウム属由来のＤ−デカル
バミラ−ゼがアグロバクテリウム・スピ−シ−ズ（Agro
bacteriumsp.）KNK712（FERMBP-1900）由来のＤ−デカ
ルバミラ−ゼである請求項３記載の製造法。 - 【請求項５】 ブラストバクタ−属由来のＤ−デカルバ
ミラ−ゼが、ブラストバクタ−・スピ−シ−ズ（Blasto
bacter sp.） A17p-4（FERM BP-4410）由来のＤ−デカ
ルバミラ−ゼである請求項３記載の製造方法。 - 【請求項６】 Ｄ−体またはＤ−体およびＬ体のＮ−カ
ルバミル−α−アミノ酸が、それぞれＤ−体またはＤ−
体およびＬ−体のスレオニン、イソロイシン、３，４−
メチレンジオキシフェニルセリン、又はβ−メチルフェ
ニルアラニンのＮ−カルバミル体であり、式（２）のα
−アミノ酸の特定の立体異性体が、それぞれＤ−アロ・
スレオニン、Ｄ−イソロイシン、エリスロ−Ｄ−３，４
−メチレンジオキシフェニルセリン、又はスレオ−Ｄ−
β−メチルフェニルアラニンである請求項２，３もしく
は４に記載の製造方法。 - 【請求項７】 Ｄ−体またはＤ−体およびＬ体のＮ−カ
ルバミル−α−アミノ酸がＤ−体またはＤ−体およびＬ
体のβ−メチルフェニルアラニンのＮ−カルバミル体で
あり、式（２）のα−アミノ酸の特定の立体異性体がス
レオ−Ｄ−β−メチルフェニルアラニンである請求項
２，３もしくは５記載の製造法。 - 【請求項８】 Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸がＲ
−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸の場合で、Ｄ−カルバ
ミラーゼを作用して得られるα−アミノ酸のβ−炭素の
立体配置が（Ｒ）配置となる請求項２，３，４、５，６
もしくは７記載の製造方法。 - 【請求項９】Ｌ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸のカル
バミル基を除去して対応するＬ−α−アミノ酸に変換す
る酵素（以下、Ｌ−デカルバミラ−ゼと称する）をＬ−
体またはＤ−およびＬ−体のＮ−カルバミル−α−アミ
ノ酸に作用させる請求項１記載の製造方法。 - 【請求項１０】Ｌ−デカルバミラ−ゼがアルカリゲネス
属由来のＬ−デカルバミラ−ゼである請求項９記載の製
造方法。 - 【請求項１１】 アルカリゲネス属由来のＬ−デカルバ
ミラ−ゼがアルカリゲネス・キシロソキシダンス（Alca
ligenes xylosoxidans）A35（FERM BP-6383）由来のＬ
−デカルバミラ−ゼである請求項１０記載の製造方法。 - 【請求項１２】 Ｌ−体またはＤ−体およびＬ−体のＮ
−カルバミル−α−アミノ酸がＬ−体またはＤ−体およ
びＬ−体のβ−メチルフェニルアラニンのＮ−カルバミ
ル体であり、式（２）のα−アミノ酸の特定の立体異性
体が、スレオ−Ｌ−β−メチルフェニルアラニンである
請求項９，１０もしくは１１に記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10336609A JP2000157294A (ja) | 1998-11-27 | 1998-11-27 | β位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10336609A JP2000157294A (ja) | 1998-11-27 | 1998-11-27 | β位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000157294A true JP2000157294A (ja) | 2000-06-13 |
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ID=18300939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10336609A Pending JP2000157294A (ja) | 1998-11-27 | 1998-11-27 | β位に不斉炭素を持つ光学活性α−アミノ酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000157294A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004007741A1 (ja) * | 2002-07-12 | 2004-01-22 | Kaneka Corporation | 光学活性β−アミノニトリル化合物及びその対掌体アミド化合物の製造方法 |
-
1998
- 1998-11-27 JP JP10336609A patent/JP2000157294A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004007741A1 (ja) * | 2002-07-12 | 2004-01-22 | Kaneka Corporation | 光学活性β−アミノニトリル化合物及びその対掌体アミド化合物の製造方法 |
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