ITMI970252A1 - Polisaccaridi batterici o-solfatati - Google Patents
Polisaccaridi batterici o-solfatati Download PDFInfo
- Publication number
- ITMI970252A1 ITMI970252A1 IT97MI000252A ITMI970252A ITMI970252A1 IT MI970252 A1 ITMI970252 A1 IT MI970252A1 IT 97MI000252 A IT97MI000252 A IT 97MI000252A IT MI970252 A ITMI970252 A IT MI970252A IT MI970252 A1 ITMI970252 A1 IT MI970252A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- process according
- polysaccharide
- sulfation
- sulfur trioxide
- polysaccharides
- Prior art date
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 43
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 43
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound CC1(C)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N chlorosulfonic acid Substances OS(Cl)(=O)=O XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims abstract 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims abstract 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims abstract 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 8
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FBPINGSGHKXIQA-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-(2-carboxyethylsulfanyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CSCCC(O)=O FBPINGSGHKXIQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 5
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 5
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- DXASQZJWWGZNSF-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylmethanamine;sulfur trioxide Chemical compound CN(C)C.O=S(=O)=O DXASQZJWWGZNSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 2
- AKEJUJNQAAGONA-UHFFFAOYSA-N sulfur trioxide Inorganic materials O=S(=O)=O AKEJUJNQAAGONA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- UDYFLDICVHJSOY-UHFFFAOYSA-N sulfur trioxide pyridine complex Chemical compound O=S(=O)=O.C1=CC=NC=C1 UDYFLDICVHJSOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000001173 tumoral effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N D-fructose group Chemical group OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- NVTNQIBQPLGHGE-UHFFFAOYSA-N n,n-dibutylbutan-1-amine;hydrate Chemical compound [OH-].CCCC[NH+](CCCC)CCCC NVTNQIBQPLGHGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003658 preventing hair loss Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- GFBOPXWDDVZTHA-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid;sulfurochloridic acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(Cl)(=O)=O GFBOPXWDDVZTHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000006208 topical dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Domanda di brevetto per invenzione industriale dal titolo:
Polisaccaridi batterici O-solfatati .
Tecnica anteriore
Sono noti i polisaccaridi batterici identificati come K4, K5 e K40, costituiti da sequenze ripetitive di acido D-glucuronico ed amminozuccheri. Essi sono ottenuti secondo tecniche note mediante fermentazione di ceppi diversi di E. coli come descritto in varie pubblicazioni (Manzoni M., Bergomi S., F. e Cavazzoni V. Biotechnology Lettere 18(4) 383“386 (1996); B. Rodriguez M.R. et al., Eur. J. Biochem., 177 (1988) 117-124; e Dengler T. et al., Carb. Res-, 150 (1986) 233-240).
Sono inoltre noti processi di O-solfatazione studiati per altri polisaccaridi come ad esempio per l'eparina dopo completa desolfatazione.
Detti processi prevedono un trattamento preliminare atto a rimuovere dal polisaccaride il suo controione naturale (sodio normalmente ) per sostituirlo con tributilammonio idrossido (Ogamo et al Carb. Res. 193 (1989) l65-172) oppure con piridina (Rej et al., Carb. Res. 210 (1991) 299-310) allo scopo di rendere solubile il polisaccaride stesso in solventi come la dimetilformammide o il dimetilsolfossido .
Detti processi richiedono numerosi stadi tra i quali anche un costoso stadio di liofilizzazione . Inoltre presentano vari inconvenienti come ad esempio il raddoppio in peso dovuto al controione .
Sommario
Noi abbiamo trovato che è possibile ottenere i polisaccaridi K4, K5 e K40 O-solfatati mediante un processo in cui detti polisaccaridi in forma di sali di sodio vengono solfatati direttamente in una sospensione in un solvente organico.
Il processo secondo la presente invenzione comprende i seguenti stadi:
a) sospensione del polisaccaride in forma di sale di sodio in un solvente aprotico,
b) 0-solfstazione con un addotto di piridina-solfo triossido o di trimetilammina-solfo triossido o con acido clorosolfonico; c) diluizione con acqua;
d) correzione del pH sino ad un valore basico;
e) precipitazione mediante aggiunta di etanolo saturato con acetato di sodio;
f) dissoluzione con una soluzione di NaCl;
g) diafiltrazione;
h) precipitazione del prodotto con alcoli come etanolo o metanolo o isopropanolo o con acetone;
i) essiccamento.
Con il processo secondo la presente invenzione si ottengono polisaccardi aventi peso molecolare da 4.000 a 35-000 e rapporto solfati/carbossili da 0,5 a 4,0;
I polisaccaridi 0-solfatati secondo la presente invenzione presentano una interessante attività antiangiogenetica ed antivirale oltre che anticoagulante. Inoltre sono efficaci in cosmetica nella prevenzione della caduta dei capelli.
Descrizione dettagliata dell'invenzione
Le caratteristiche ed i vantaggi del processo per la preparazione di polisaccaridi batterici 0-solfatati e dei prodotti ottenuti operando secondo la presente invenzione saranno maggiormente illustrati nel corso della seguente descrizione dettagliata.
Nella presente invenzione il materiale di partenza è costituito dai polisaccaridi batterici ottenibili da E. Coli definiti rispettivamente come K4, K5 e κ4θ.
II polisaccaride K5 è costituito da acido D-glucuronico e da N-acetil glucosammina uniti con legame a 1-4. Il legame tra i disaccaridi è β 1-4. Il polisaccaride K4 è costituito da acido D-glucuronico e da N-acetil galattosammina uniti con legame β 1-3■ Il legame tra i disaccaridi è β 1-4. Il polisaccaride K4 contiene anche un'unità di D-fruttosio legata con legame β 2-3 all'acido D-glucuronico. Il polisaccaride Κ4θ è costituito da trisaccaridi formati da acido D-glucuronico unito ad una N-acetilglucosammina con legame a 1-4 legata a sua volta ad un'altra Nacetilglucosaramina con legame a 1-6. Il legame tra i trisaccaridi è di tipo (S 1-4. Il polisaccaride K40 contiene anche un'unità di serina legata al carbossile dell'acido glucuronico.
Nel processo secondo la presente invenzione detti polisaccaridi, in forma di sali di sodio, vengono addizionati .a temperatura ambiente con un solvente aprotico per formare una sospensione. Detto solvente è preferibilmente scelto dal gruppo costituito da dimetilformammide, dimetilacetammide e dimetilsolfossido. Possono essere impiegate anche miscele di questi solventi. La quantità di solvente impiegato è compresa fra 10 e 80 parti in peso rispetto al polisaccaride.
Per la reazione di 0-solfatazione, alla sospensione ottenuta viene aggiunta uria soluzione costituita da una quantità compresa fra 10 e 50 parti in peso rispetto a detto polisaccaride, dello stesso solvente impiegato per preparare detta sospensione, e da una quantità compresa fra 0,5 e 20 parti in peso rispetto a detto polisaccaride, di un addotto di piridina-solfo triossido di trimetilammina-solfo triossido o con acido clorosolfonico.
La reazione viene condotta sotto agitazione a temperatura compresa fra 0 e 70“C, e preferibilmente fra 15 e 35°C, per un tempo compreso fra 2 e 24 ore.
Quando il tempo di reazione è terminato, la sospensione ottenuta viene diluita con un volume eguale di acqua oppure di soluzioni di NaCl da 0,1 a 1 N e poi il pH viene portato ad un valore compreso fra 7.5 e 8,5 mediante aggiunta di una soluzione acquosa di NaOH al 3-6% in peso.
Il prodotto viene precipitato mediante aggiunta di 1,5-3 volumi di etanolo saturato con acetato di sodio e mantenendo la miscela a temperatura di 3-5°C per 12-15 ore. Il precipitato ottenuto viene sciolto in 100 parti in peso di-una soluzione 2N di sodio cloruro e la soluzione viene diafiltrata con 10 volumi di acqua distillata impiegando una cartuccia di dialisi cut-off 3000 con sistema millipore TFF.
Il prodotto viene precipitato mediante aggiunta di 2-4 volumi di etanolo e poi viene essiccato a temperatura di 60°C, a pressione ridotta.
Quando si desidera ottenere un prodotto con caratteristiche di attività anti HIV il polisaccaride K4 di partenza viene preliminarmente defruttosilato ad esempio con il metodo descritto da B. Rodriguez M.R. et al. (Eur. J. Biochem., 177 (1988), 117-124).
I polisaccaridi 0-solfatati secondo la presente invenzione vengono analizzati mediante titolazione conduttimetrica, spettroscopia 13C-NMR e 1hNMR ed HPLC. In particolare, il loro peso molecolare viene determinato mediante HPLC.
I polisaccaridi 0-solfatati secondo la presente invenzione sono caratterizzati da un peso molecolare compreso fra 4.000 e 35-000 e da un rapporto solfati/carbossili da 0,5 a 4,0.
I composti secondo la presente invenzione presentano una buona attività antiangiogenetica per cui possono essere utilizzati nel controllo della crescita tumorale e della formazione di metastasi.
Essi,presentano inoltre una buona attività anticoagulante.—Infine. i composti maggiormente solfatati (solfati/disaccaride > 2,5) e nel caso del K4 defruttosilato presentano una interessante attività anti HIV-1.
Grazie a queste caratteristiche essi possono essere impiegati con successo nella terapia umana.
I composti secondo la presente invenzione, oltre che a scopo terapeutico per le indicazioni soprariportate, possono essere impiegati anche in campo cosmetico con la funzione di coadiuvanti nella prevenzione della caduta dei capelli.
Per i previsti impieghi terapeutici o cosmetici i derivati ottenibili in accordo con il processo dell'invenzione vengono formulati secondo tecniche convenzionali in adatte forme di somministrazione quali ad esempio soluzioni sterili, forme di dosaggio topiche e, in generale, in tutte quelle forme fino ad oggi proposte per derivati di tipo polisaccaridico o di glicosamminoglicani.
In particolare per l'impiego terapeutico a scopo antiangiogenetico, anticoagulante ed anti HIV-1 le dosi efficaci sono comprese fra 0.1 e 10 mg/kg/giorno.
USA è necessario fornire questi dati).
A scopo illustrativo dell'invenzione vengono riportati i seguenti esempi.
ESEMPIO 1: O-solfatazione del polisaccaride K4.
I g di K4 sale di sodio ottenuto per fermentazione (come descritto da Manzoni, M., Bergomi, S Molinari, F., & Cavazzoni, V (1996) Production and purification of an extracellularly produced K4 polysaccharide from Escherichia coli. Biotechnology Letters, 18, 383-386) viene sospeso in 60 mi di
dimetilformammide anidra a temperatura ambiente e vengono poi aggiunti 40 mi di dimetilformammide anidra contenente 15.3 S di addotto piridina-solfo triossido. La sospensione ottenuta viene mantenuta a temperatura ambiente, sotto agitazione, per 18 ore e quindi diluita con un ugual volume di acqua. Il pH viene portato a 9 con NaOH al H% e il prodotto viene precipitato con 2 volumi di etanolo saturato con acetato di sodio mantenendo la soluzione a 4°C per 12 ore. Il precipitato ottenuto viene sciolto in 100 mi di sodio cloruro 2 N e diafiltrato con 10 volumi di acqua distillata utilizzando una cartuccia da dialisi cut-off 3000 con sistema millipore TFF.
II prodotto viene infine precipitato con 3 volumi di etanolo ed essiccato a temperatura di 60°C a pressione ridotta.
Il prodotto ottenuto presenta un rapporto solfati/carbossili di 3 e peso molecolare medio di 28.000 d.
ESEMPIO 2: 0-solfatazione del polisaccaride K4 defruttosilato. 1 g di K4 sale di sodio viene defruttosilato come descritto da B. Rodriguez M.R. et al. e poi trattato come descritto nell'esempio 1.
Il prodotto ottenuto presenta un rapporto solfati/carbossili di 1,2 e peso molecolare medio di 35-000 d.
ESEMPIO 3: 0-solfatazione del polisaccaride.K5-I g di K5 sale di sodio ottenuto per fermentazione come descritto da Manzoni M. et al. viene trattato come nell'esempio 1.
II prodotto ottenuto presenta un rapporto solfati/carbossili di 3.5 e peso molecolare medio di 11.000 d.
ESEMPIO 4: 0-solfatazione del polisaccaride K40.
I g di K40 sale di sodio ottenuto per fermentazione come descritto da Dengler T. ed al. viene trattato come nell'esempio 1.
II prodotto ottenuto presenta un rapporto solfati/carbossili di 3 e peso molecolare medio di 32.000 d.
ESEMPIO 5: 0-solfatazione del K5 con acido clorosolfonico
1 g di K5 sale di sodio ottenuto per fermentazione come descritto da Manzoni M. et al viene essiccato a 60°C a pressione ridotta per 24 ore e disciolto tramite lenta agitazione in 30 mi di una miscela di acido solforico-acido clorosolfonico nel rapporto di 2 a 1 preparata pecedentemente e mantenuta a -4 °C. La miscela viene lasciata per 60 minuti sotto agitazione a -4 °C e per altri 60 minuti a temperatura ambiente. Si recupera il prodotto neutralizzando con NaOH 5N controllando la temperatura con bagno refrigerato. La soluzione viene quindi desalata utilizzando una cartuccia da dialisi cut-off 3000 con sistema millipore TFF. Il prodotto viene infine precipitato con 3 volumi di etanolo ed essiccato.
Il prodotto ottenuto presenta un rapporto solfati/carbossili di 3,3 ed un peso molecolare medio di4.000 d.
Claims (12)
- RIVENDICAZIONI 1. Processo per la preparazione di polisaccaridi K4, K5 e K400-solfatati comprendente i seguenti stadi:, a) sospensione del polisaccaride K4, K5 o K40 in forma di sale di sodio in un solvente aprotico; b) 0-solfatazione con un addotto di piridina-solfo triossido o di trimetilammina-solfo triossido o con acido clorosolfonico; c) diluizione con acqua o con NaCl 0.2- IN; d) correzione del pH sino ad un valore basico; e) precipitazione mediante aggiunta di etanolo saturato con acetato di sodio oppure di metanolo, isopropanolo o acetone; f) dissoluzione con una soluzione di NaCl; g) diafiltrazione; h) precipitazione del prodotto con etanolo; i) essiccamento.
- 2. Processo secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che detto solvente aprotico impiegato nello stadio a) è scelto dal gruppo costituito da dimetilformammide, dimetilacetammide e dimetilsolfossido.
- 3- Processo secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che detta 0-solfatazione è condotta impiegando una quantità di addotto piridina-solfo triossido o trimetilammina-solfo triossido o di acido clorosolfonico compresa fra 0.5 e 20 parti in peso rispetto a detto polisaccaride, disciolto in quantità compresa fra 10 e 50 parti in peso rispetto a detto polisaccaride dello stesso solvente impiegato nello stadio a).
- 4. Processo secondo la rivendica_zione_ 1, caratterizzato,dal. fatto che detta 0-solfatazione è condotta a temperatura compresa fra 0 e 70°0 per un tempo compreso fra 2 e 24 ore.
- 5. Processo secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che detta correzione del pH dello stadio d) è condotta con una soluzione acquosa di NaOH al 2-6% in peso fino a raggiungere un pH compreso fra 7.5 e 8,5-
- 6. Processo secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che detta precipitazione dello stadio e) è condotta con 1,5-3 volumi di etanolo 0 metanolo o isopropanolo o acetone saturato con acetato di sodio e mantenendo la miscela a temperatura di 3-5°C per 12-15 ore.
- 7. Processo secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che il polisaccaride K4 di partenza viene preliminarmente defruttosilato.
- 8. Polisaccaridi K4, K5 e K400-solfatati caratterizzati da peso molecolare compreso fra 4.000 e 35-000, e rapporto solfati/carbossili da 0,5 a 4.
- 9. Polisaccaridi K4, K5 e K400-solfatati ottenuti con il processo secondo le rivendicazioni da 1 a 7·
- 10. Metodo terapeutico per il controllo di patologie tumorali, da HIV-1 e della coagulazione in cui vengano somministrate dosi comprese fra 0,1 e 10 mg/kg/giorno di polisaccaridi K4, K5 e K40 0-solfatati secondo la rivendicazione 8.
- 11. Impiego di polisaccaridi K4, K5 e K400-solfatati secondo la rivendicazione 8 per la preparazione di composizioni farmaceutiche atte al trattamento di patologie tumorali, da HIV-1 e della coagulazione.
- 12. Impiego di polisaccaridi K4, K5 e K400-solfatati secondo la rivendicazione 8 per la preparazione di composizioni cosmetiche.
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT97MI000252A IT1289613B1 (it) | 1997-02-07 | 1997-02-07 | Polisaccaridi batterici o-solfatati |
| PCT/EP1998/000598 WO1998034958A1 (en) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfated bacterial polysaccharides |
| DE69803362T DE69803362T2 (de) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfatierte, bakterielle polysaccharide |
| AT98909387T ATE211488T1 (de) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfatierte, bakterielle polysaccharide |
| AU63943/98A AU723168B2 (en) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfated bacterial polysaccharides |
| ES98909387T ES2169503T3 (es) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | Polisacaridos bacterianos orto-sulfatados. |
| EP98909387A EP0958307B1 (en) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfated bacterial polysaccharides |
| US09/355,211 US6288044B1 (en) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfated bacterial polysaccharides |
| NZ337399A NZ337399A (en) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfated K4, K5 and K40 bacterial polysaccharides |
| JP53375098A JP2001510502A (ja) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | Ｏ−硫酸化細菌性多糖類 |
| PT98909387T PT958307E (pt) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | Polissacaridos bacterianos o-sulfatados |
| CA002279317A CA2279317C (en) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfated bacterial polysaccharides |
| DK98909387T DK0958307T3 (da) | 1997-02-07 | 1998-02-04 | O-sulfatiserede bakterielle polysaccharider |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT97MI000252A IT1289613B1 (it) | 1997-02-07 | 1997-02-07 | Polisaccaridi batterici o-solfatati |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITMI970252A1 true ITMI970252A1 (it) | 1998-08-07 |
| IT1289613B1 IT1289613B1 (it) | 1998-10-15 |
Family
ID=11375918
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT97MI000252A IT1289613B1 (it) | 1997-02-07 | 1997-02-07 | Polisaccaridi batterici o-solfatati |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6288044B1 (it) |
| EP (1) | EP0958307B1 (it) |
| JP (1) | JP2001510502A (it) |
| AT (1) | ATE211488T1 (it) |
| AU (1) | AU723168B2 (it) |
| CA (1) | CA2279317C (it) |
| DE (1) | DE69803362T2 (it) |
| DK (1) | DK0958307T3 (it) |
| ES (1) | ES2169503T3 (it) |
| IT (1) | IT1289613B1 (it) |
| NZ (1) | NZ337399A (it) |
| PT (1) | PT958307E (it) |
| WO (1) | WO1998034958A1 (it) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITMI20032498A1 (it) | 2003-12-17 | 2005-06-18 | Pasqua Anna Oreste | Polisaccaridi antitrombotici a basso peso molecolare e |
| ITMI20010397A1 (it) * | 2001-02-27 | 2002-08-27 | Giorgio Zoppetti | Derivati altamente n,o-solfatati del polisaccaride k5 e loro preparazione |
| ITMI20010779A1 (it) * | 2001-04-12 | 2002-10-12 | Giorgio Zoppetti | Uso di polisaccaridi batterici solfati atti all'inibizione dell'angiogenesi |
| ITMI20011633A1 (it) * | 2001-07-27 | 2003-01-27 | San Raffaele Centro Fond | Uso di polisaccaridi batterici supersolfatati inibitori dell'hiv |
| EP1421091A4 (en) * | 2001-08-31 | 2008-02-20 | Ivax Research Inc | PROCESSES FOR SULFATATION OF SACCHARIDES |
| ITMI20012200A1 (it) * | 2001-10-22 | 2003-04-22 | Ibsa Inst Biochimique Sa | Processo per la preparazione di condroitin solfati dal polisaccaride k4 e prodotti ottenuti |
| ITMI20021294A1 (it) * | 2002-06-12 | 2003-12-12 | Inalco Spa | Polisaccaridi batterici o-solfatati e loro uso |
| US8513407B2 (en) | 2002-06-18 | 2013-08-20 | Glycores 2000 S.R.L. | Process for the preparation of N-acyl-(epi)K5-amine-O-sulfate-derivatives and products thus obtained |
| MXPA04012714A (es) * | 2002-06-18 | 2005-08-15 | Glycores 2000 Srl | Derivados epimerizados del polisacarido k5 con un grado muy alto de sulfatacion. |
| US20040171819A1 (en) | 2002-10-10 | 2004-09-02 | Aventis Pharma S.A. | Mixtures of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| CN100404557C (zh) * | 2005-12-09 | 2008-07-23 | 武汉理工大学 | 猪苓多糖硫酸酯的制备方法 |
| KR101788536B1 (ko) * | 2011-05-20 | 2017-10-20 | 그노시스 에스.피.에이. | 상어유사 콘드로이틴 설페이트 및 이의 제조방법 |
| US8664196B2 (en) | 2011-05-20 | 2014-03-04 | Gnosis S.P.A. | Shark-like chondroitin sulphate and process for the preparation thereof |
| ITMI20120896A1 (it) | 2012-05-23 | 2013-11-24 | Bongulielmi Reto | Condroitina per uso in medicina |
| ITMI20121316A1 (it) | 2012-07-27 | 2014-01-28 | Altergon Sa | Complessi di condroitina ad assorbimento transcutaneo |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2584728B1 (fr) * | 1985-07-12 | 1987-11-20 | Choay Sa | Procede de sulfatation de glycosaminoglycanes et de leurs fragments |
| EP0333243A3 (en) * | 1988-03-10 | 1989-09-27 | Akzo N.V. | Sulphated k5 antigen and sulphated k5 antigen fragments |
| FR2669932B1 (fr) * | 1990-12-03 | 1994-07-01 | Sanofi Sa | Nouvel heparosane-n,o-sulfate, son procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui le contiennent. |
-
1997
- 1997-02-07 IT IT97MI000252A patent/IT1289613B1/it active IP Right Grant
-
1998
- 1998-02-04 WO PCT/EP1998/000598 patent/WO1998034958A1/en active IP Right Grant
- 1998-02-04 DK DK98909387T patent/DK0958307T3/da active
- 1998-02-04 JP JP53375098A patent/JP2001510502A/ja active Pending
- 1998-02-04 PT PT98909387T patent/PT958307E/pt unknown
- 1998-02-04 ES ES98909387T patent/ES2169503T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-02-04 AT AT98909387T patent/ATE211488T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-02-04 NZ NZ337399A patent/NZ337399A/xx unknown
- 1998-02-04 US US09/355,211 patent/US6288044B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-04 CA CA002279317A patent/CA2279317C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-04 AU AU63943/98A patent/AU723168B2/en not_active Ceased
- 1998-02-04 DE DE69803362T patent/DE69803362T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-02-04 EP EP98909387A patent/EP0958307B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0958307T3 (da) | 2002-04-22 |
| EP0958307A1 (en) | 1999-11-24 |
| AU6394398A (en) | 1998-08-26 |
| DE69803362D1 (de) | 2002-02-28 |
| ES2169503T3 (es) | 2002-07-01 |
| IT1289613B1 (it) | 1998-10-15 |
| JP2001510502A (ja) | 2001-07-31 |
| PT958307E (pt) | 2002-06-28 |
| AU723168B2 (en) | 2000-08-17 |
| CA2279317C (en) | 2006-09-26 |
| NZ337399A (en) | 2000-01-28 |
| EP0958307B1 (en) | 2002-01-02 |
| US6288044B1 (en) | 2001-09-11 |
| WO1998034958A1 (en) | 1998-08-13 |
| CA2279317A1 (en) | 1998-08-13 |
| ATE211488T1 (de) | 2002-01-15 |
| DE69803362T2 (de) | 2002-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ITMI970252A1 (it) | Polisaccaridi batterici o-solfatati | |
| US20080146793A1 (en) | Highly sulfated derivatives of K5 polysaccharide and their preparation | |
| BRPI0811985B1 (pt) | complexos de ferro-derivado de carboidrato solúveis em água, seus usos e seu processo de preparação, e medicamentos | |
| Selyanin et al. | The history of hyaluronic acid discovery, foundational research and initial use | |
| AU2002236118A1 (en) | Highly sulfated derivatives of K5 polysaccharide and their preparation | |
| US8513407B2 (en) | Process for the preparation of N-acyl-(epi)K5-amine-O-sulfate-derivatives and products thus obtained | |
| JP5053512B2 (ja) | 非常に大きい硫酸化度を持つｋ５多糖体のエピマー化誘導体 | |
| KR101788536B1 (ko) | 상어유사 콘드로이틴 설페이트 및 이의 제조방법 | |
| DE602004012314T2 (de) | Niedermolekulare polysaccharide mit antithrombotischer wirkung | |
| FR2841250A1 (fr) | Composes se liant a l'interferon-gamma, leur procede de preparation, et medicaments les contenant | |
| ES2357320T3 (es) | Derivados epimerizados de polisacárido k5 con un grado de sulfatación muy alto. | |
| RU2333222C2 (ru) | Эпимеризованные производные полисахарида к5 с высокой степенью сульфатирования | |
| ITMI930736A1 (it) | Derivato epossidico dell'eparano solfato | |
| KR20050024339A (ko) | 엔-아실-(에피)케이5-아민-오-황산염-유도체 생산방법 및그 생성물 | |
| KR20050024348A (ko) | 저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드 | |
| KR20050024349A (ko) | 매우 높은 황산화도를 가진 케이5 폴리사카라이드의에피머화된 유도체 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 0001 | Granted |