ITMI951859A1 - Processo per la preparazione di salinomicina - Google Patents

Abstract

Si descrive un processo per la preparazione di salinomicina per fermentazione di un adatto microorganismo produttore caratterizzato dal fatto che si utilizza un terreno di coltura contenente nitrato di sodio come fonte di azoto e che detto terreno viene acidificato a pH 4,5-5,5 prima della sterilizzazione.

Description

"PROCESSO PER LA PREPARAZIONE DI SALINOMICINA"

La presente invenzione riguarda un processo di preparazione per via fermentativa di antibiotici di tipo polietere, in particolare salinomicina.

La salinomicina, descritta in GB 1378414, è un antibiotico largamente impiegato in medicina veterinaria. Il brevetto IT 1096401 descrive un metodo per la produzione di salinomicina che comprende la fermentazione di un ceppo di Streptomyces in un terreno di cultura contenente acidi grassi o loro precursori come fonte di carbonio e ammoniaca o un sale di ammonio come fonte di azoto.La resa riportata in questo brevetto è di circa 60.000 gamma di salinomicina per mi di terreno di cultura. Si è ora trovato, e costituisce l'oggetto di questa invenzione, che rese superiori o paragonabili di salinomicina possono essere raggiunte utilizzando nella fase produttiva della fermentazione di un opportuno ceppo produttore sodio nitrato come fonte di azoto e acidificando a pH 4,5-5,5 il terreno di fermentazione prima della sterilizzazione.

Il terreno secondo l'invenzione contiene inoltre un olio vegetale, in percentuale compresa tra il 10 e il 35% in peso, oltre a conponenti convenzionali quali sali minerali, agenti antischiuma, melassa, farina vegetale,estratto di lievito ecc..

Il nitrato di sodio viene preferibilmente aggiunto nel corso della fermentazione,della durata di 150-350 ore circa,ad intervalli regolari fino a raggiungere una concentrazione complessiva pari a 0.1-0.5% in peso rispetto al brodo di coltura.

L’aggiunta viene preferibilmente effettuata gocciolando nel fermentatore una soluzione sterile acquosa di nitrato di sodio di opportuna concentrazione.

Come ceppo produttore, si impiega di norma un ceppo di Streptomyces albus da collezione.

L'olio vegetale utilizzabile in accordo con la presente invenzione è tipicamente olio di soia, olio di oliva, olio di ravizzone, olio di sesamo,olio di semi di cotone,olio di arachidi,olio di girasole,olio di mais o loro miscele.Alternativamente,possono anche essere usati oli o grassi di origine animale. L’acidificazione del terreno fermentativo prima della sterilizzazione, essenziale ai fini dell'ottenimento di rese elevate in salinomicina,viene effettuata per aggiunta di acidi organici o inorganici diluiti, ad esempio acido tartarico o acido cloridrico diluito.

L'isolamento e la purificazione della salinomicina sono infine effettuati ricorrendo a tecniche convenzionali, come descritte ad esempio nel sopra menzionato brevetto italiano n.1096401.

Il metodo oggetto della presente invenzione consente di raggiungere titoli di salinomicina nel brodo di coltura particolarmente elevati, dell'ordine di 60.000-90.000 gamma/ml.

Nei seguenti esempi, che illustrano ulteriormente l'invenzione, si sono utilizzati fermentatori in acciaio inox della capacità geometrica di 250-1300 litri muniti di sistema di agitazione.

Le prove sono state condotte utilizzando due stadi di crescita germinativa.

Esempio Comparativo

1 stadio: La patina di uno slant inoculato con Streptomyces albus viene raccolta con acqua sterile e trasferita in un pallone sferico da 5000 mi contenente 1000 mi di terreno germinativo così composto:

Saccarosio 0,5 - 1,5 %

Cornsteep dry 0,5 - 1,5 %

Estratto di lievito 0,01 - 0,05 %

Potassio fosfato 0,1 - 0,5 %

Ammonio fosfato 0,1 - 0,5 %

Calcio carbonato 0,05 - 0,1 %

Olio vegetale 0,1 - 0,5 %

Acqua di fonte q.b.a 100.

Il pallone viene incubato su shaker rotativo 170 rpm per 36-50 ore a 25-35*C.

2 stadio:Con una coltura matura di primo stadio viene inoculato in ragione dello 0,06-0,15%, un prefermentatore contenente un terreno vegetativo così composto:

Saccarosio 0,5 2,0 %

Cornsteep dry 0,5 2,0 %

Ammonio solfato 0,5 2,0 %

Calcio carbonato 0,1 0,5 %

Olio vegetale 0,1 1,0 %

Antischiumante 0,01 0,05 %

Acqua di fonte q.b.a 100.

Il secondo stadio viene incubato sotto agitazione e aerazione per un periodo di 45-55 ore a temperatura di 25-35ec.

Fermentazione

A maturazione il secondo stadio viene trasferito sterilmente, in ragione del 5-8% rispetto cil volume di carica della fase fermentativa, in un fermentatore contenente un terreno la cui composizione è la seguente:

Melassa 0,5 2,0 %

Farina vegetale 1,0 3,0 %

Sodio nitrato 0,1 0,5 %

Calcio solfato 0,01 0,1 %

Olio vegetale 15,0 35,0 %

Antischiumante 0,05 - 0,15 %

Acqua di fonte q.b.a 100.

Il processo nel fermentatore viene condotto ad una temperatura di 25-35eC con una agitazione di 200-400 rpm ed una aerazione pari a 0,5-1,5 wm (volumi di aria per volume di brodo al minuto).

Dopo 324 ore di fermentazione l’attività in salinomicina riscontrata nel brodo di coltura è pari a 30.000-35.000 microgrammi/g. Esempio X

La sperimentazione viene condotta nelle stesse modalità dell'Esempio Comparativo aggiungendo la seguente variante: acidificazione a pH 4, 5-5 ,5 del terreno fermentativo prima della sterilizzazione .

Dopo 324 ore di fermentazione l'attività in salinomicina riscontrata nel brodo di coltura è pari a 45.000-50.000 microgrammi/ g. Esempio 2

La sperimentazione viene condotta con le stesse modalità dell'Esempio 1 eseguendo,durante il processo, aggiunte di una soluzione si sodio nitrato in ragione di una quantità totale pari allo 0,1-0,5% in sodio nitrato rispetto al brodo di coltura.

Dopo 324 ore di fermentazione l'attività in salinomicina riscontrata risulta essere 62.000-67.000 microgrammi/g. _

Claims (4)

1. RIVENDICAZIONI 1. Processo per la preparazione di salinomicina per fermentazione di un adatto microorganismo produttore caratterizzato dal fatto che si utilizza un terreno di coltura contenente nitrato di sodio come fonte di azoto e che detto terreno viene acidificato a pH 4,5-5,5 prima della sterilizzazione.
2. 2. Processo secondo la rivendicazione 1, in cui il microorganismo produttore è un ceppo di Streptomyces albus.
3. 3. Processo secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui il nitrato di sodio è aggiunto gradualmente nel corso della fermentazione fino a raggiungere una concentrazione complessiva pari a 0,1-0,5% in peso rispetto al terreno di coltura.
4. 4. Procedimento secondo una qualunque delle rivendicazioni precedenti in cui il terreno contiene un olio vegetale in percentuale in peso compresa tra il 10 e il 35%.