ITMI942094A1 - Procedimento microbiologico per la preparazione di 3-oxo-4-azasteroidi -17beta-carbossi sostituiti e uso dei prodotti come inibitori dell'enzima 5alfa-riduttasi - Google Patents

Description

"PROCEDIMENTO MICROBIOLOGICO PER LA PREPARAZIONE DI 3 -0X0-4-AZASTEROIDI— 17BETA-CARB0SSI SOSTITUITI E USO DEI PRODOTTI CO-ME INIBITORI DELL’ENZIMA 5 ALFA-RIDUTTAS I "

La presente invenzione riguarda un procedimento microbiologico per la trasformazione di 4-azaandrostan-3-oni-17B-sostituiti e l'uso dei prodotti di biotrasformazione come inibitori dell'enzima 5<β>(-Γiduttasi.

E' noto che la classe di molecole note come 4-azastoroidi possiede la capacità di inibire specificamente il processo di 50(-riduzicne del testosterone. Attualmente sono noti in letteratura numerosi esenpi di inibitori dell'enzima 5-0f-riduttasi dotati di questa struttura (Rasmusson, G, H.; Reynolds, G.F.; Utne T.; Jobscn R.B.; Primka R.L.; Broocks J. R.; Berman C. J. Med. Chem. 1984, 27, 1690-1701. Rasmusson, G, H.; Reynolds,G.F.; Steimberg, N.G.; Waltcn, E.; Patel G. F.; Liang T.;Cacsieri M.A.; Cheung A. H. ; Broocks J. R- ; Berman C. J. Med. Chem.

1986, 29, 2298-2315; EP 155096, EP 538192, EP468012, EP 484094) . Molte (felle molecole studiate sotto questo aspetto hanno la caratteristica comune di possedere una insaturazione in posizione 1, come illustrato nella seguente Formula 1: _

nella quale è idrogeno o un gruppo alchile inferiore, Rj è un gruppo OH, ORy NHR^, dove è un gruppo C^-Cg alchile lineare o ramificato, cicloalchile , contenente eventualmente uno o più eteroatomi scelti tra S, 0, N, policicloalchile , arile.

Le metodiche descritte per l 'introduzione di questa insaturazicne seno molteplici: in alcuni casi si utilizza care reattivo l 'anidride fenilselenica (Back T.G. J. Org. Chem. 1981, 46, 1442-1446) , oppure si può pervenire a tali composti attraverso una reazione di sul ferii 1 azione (Zoretic P.A. et al. J. Org, Chem. 1978 , 43, 1379-1382) o come riportato più recentemente attraverso un processo di sii il azione ed ossidazione attraverso la formazione di un addotto con DDQ (2, 3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzochinone) . Tutte queste metodiche richiedalo condizioni sperimentali estreme (ad esempio le te np arature di reazione variano a seconda della metodica seguita da -78° a 120<e>C, i solventi impiegati richiedano particolari precauzioni relative alla loro anidridtà, i reattivi inpiegati sono dotati di notevole tossicità) . E' interessante sottolineare che sebbene le percentuali di conversione nel prodotto desiderato siano in alcuni casi buone i reattivi impiegati, fortemente colorati e non atossici, complicano notevolmente le procedure di purificazione per arrivare ad ottenere un prodotto farmaceuticamente accettabile a scapito della resa reale del processo. Inoltre il problema ecologico relativo allo smaltimento dei reattivi impiegati per una produzione su ampia scala di questi prodotti pone il problema di ricercare metodi nucvi e meno inquinanti per realizzare questo passaggio chimico.

E' noto in letteratura che alcuni tipi di microorganismi sono in grado di trasformare il tradizionale nucleo steroideo (Phytochemistry, 1984, 23(10), 2131-2154; Microbial tranformation of steroids and alkaloids, Iizuka H., Naito A. University of Tokio Press, 1967; Yamanè T. et al. Biotechnology and bioengineering, 22, 1979, 2133-2141; Sih C.J. et al. Biochem. Biophys. Acta 38, 1969, 378-379; Dodscn R.M. et al. J. Am. Chem. Soc. 82, I960, 4026) ma nessun dato di letteratura in nostro possesso descriveva un qualsiasi tipo di biotrasformazione su strutture, del tipo 4-aza-androstan-3-cni 17fl-carbossi sostituiti come descritti in formula 1.

Sorprendentemente è stato trovato che alcuni microorganismi sono in grado di biotrasf ormare il nucleo azasteroideo in modo tale da introdurre in posizione 1 una insaturazione o di introdurre una funzione idrossilica in diverse posizioni. Così impiegando, ad esenpio, come subato il noto 17-N-t-butilcarbammoil-4-aza-androstan-3-one (Reynolds, G. F.; Steimberg, N. G.; Waltcn, E.; Patel G. F.; Liang T. Cacsieri M. A.; Cheung A. H.; Broocks J. R.; Berman C. J. Med. Chem. 1986, 29, 2298-2315) e come microorganismi Arthrobacter simplex, Nocardia sp. siamo riusciti ad ottenere il corrispondente derivato deidrogenato in posizione 1 con rese variabili dal 20 all*80% (Schema 1). ;;;;Mediante 1 'impiego di Penicilllum sp., Rhizopus, Cunninqhamella siamo stati in grado di ottenere miscele di ccnposti monoidrossilati in diverse posizioni. ;Pertanto è un oggetto della presente invenzione un procedimento per la preparazione di composti di formula (1): ;;;;;nella quale R^ è idrogeno o un gruppo alchile inferiore, Rj è un gruppo OH, OR^, NHR^, dove è un gruppo C^-Cg alchile lineare o ramificato, cicloalchile , conte nente eventualmente uno o più etarcatomi scelti tra S, O, N, policicloalchile , aromatico; che comprende gli stadi di: ;a) coltivazione di un microorganismo del genere Arthrobacter o Noeardia in un opportuno mezzo di coltura; ;b) induzione in detto microorganismo della produzione di Δ 1 deidrogenasi; ;c) separazione delle cellule di detto microorganismo: ;d) incubazione di detto microorganismo con un ccnposto di formula (2) : ;;(2) ;;dove R^ e R2 sono carne sopra definiti; ;e) isolamento del prodotto di incubazione; ;f) eventuale alchilazione dell'atomo di azoto steroideo. ;La presente invenzione comprende anche un procedimento per la monoidrossilazione del nucleo sferoideo di carposti di formula (2): ;;(2) ;;nella quale è idrogeno o un gruppo alchile inferiore, è un gruppo OH, OR^, NHR^, dove Rj è un gruppo C^-Cg alchile lineare o ramificato, cicloalchile, contenente eventualmente uno o più eteroatomi scelti tra S, 0, N, C10-C20 policicloalchile, aromatico; che comprende gli stadi di: ;a) coltivazione di un microorganismo del genere Penlcilllum sp. , Rhizopus o Cunninghamella ; ;b) aggiunta di un compo sto di formula (2) : ;;;dove e R2 sono come sopra definiti; e successiva incubazione; ;c) isolamento del derivato monoidrossilato ottenuto nello stadio (b) . ;Seguendo una metodica del tutto generale, batteri appartenenti ai generi Arthrobacter o Noc ar dia vengono coltivati in adatti media liquidi contenenti una fonte di carbonio, generalmente costituita da un esoso, solitamente glucosio, in concentrazioni ccnprese tra 0, 5 e 15 g/1, preferibilmente tra 1 e 10 g/1, e da una miscela di sostanze complesse, del tipo dei pepteni, degli idrolizzati e degli estratti, quali i pepteni di carne, di sangue, di gelatina, gli idrolizzati di caseina o albumina, gli estratti od autolisati di lievito, in concentrazione totale compresa tra 10 e 100 g/1, preferibilmente tra 20 e 50 g/1. La coltivazione avviene a temperature tra 25 e 35 “C, preferibilmente a 27-29°C, per un tempo compreso tra le 20 e le 72 ore (di norma 24 ore) . Dopo 5-12 ore dall' inoculo alla brodocoltura viene aggiunta una soluzione o sospensione contenente una molecola in grado di indurre nei batteri la produzione dell'enzima A1 deidrogenasi. A tal fine si possalo impiegare induttori di tipo steroideo quali il progesterone o 1 ' idrocortisone in concentrazioni comprese tra 10 mg e 1 g/1 (preferibilmente tra 100 e 500 mg/1) . Al termine della coltivazione le cellule vengono separate dal liquido mediante filtrazione o centrifugazione ed utilizzate. Si possono utilizzare le cellule "in toto" o quelle frazioni dotate dell’attività enzimatica di interesse. E' anche possibile conservare intatta l'attività delle cellule per alcuni mesi, congelando la pasta cellulare a -25°C. La reazione di trasformazione viene effettuata in tampone a pH 6,00-8,00 (preferibilmente a pH 7,00) ed a temperatura tra i 25 e i 35“C, per tempi variabili tra le 10 e le 120 ore. E' indispensabile al fine di una buona percentuale di conversione impiegare un tampone previamente saturato con un solvente organico quale CHCl^, tetradecanolo , acetato di etile, cicloesano, benzene, n-butanolo, e preferibilmente tra questi, solventi con log P superiori a 1,5 quali il CHCl^ sino ad un massimo del 10% v/v. Al medium di incubazione così predisposto è necessario aggiungere un cofattore esterno quale il menadione o la fenazina metasolfato, preferìbilmente il menadione in concentrazioni variàbili tra i 20 ed i 250 mg/1. Il substrato da trasformare viene aggiunto alla miscela di reazione in concentrazioni variabili tra 0,1 e 1 g/1. L'aggiunta può essere effettuata in un'unica soluzione, frazionata o in modo continuo. ;La reazione viene quindi lavorata allontanando il micelio per filtrazione su celite ed estraendo il filtrato con CHCl^. Gli estratti organici così ottenuti sano anidrificati su solfato di sodio, filtrati ed evaporati sotto vuoto a dare un grezzo successivamente purificato per cromatografia su silice: per eluizione con dielororetano/metanolo 95/5 si recupera con rese variabili dal 20 all'80% il prodotto deidrogenato per ulteriore eluizione isocratlca si recupera il prodotto non biotrasformato con rese variabili dal 60 al 10%. ;Seguendo una metodica del tutto generale la reazione di idrossilazione viene effettuata utilizzando ceppi fungini appartenenti ai generi Penicillium, Rhizopus o Cunninghamella conservati su slants di Sabouraud o PDA (patata-destrosio-agar). Questi microorganismi vengono coltivati in terreno liquido contenente uno zucchero semplice cane sorgente di carbonio. Si utilizza solitamente glucosio in concentrazioni tra 1 e 50 g/1, ma parimenti adatto allo scopo è il melasso in quantità tra 5 e 80 g/1. Il medium viene anche addizionato di sorgenti complesse di azoto quali il oom steep, i peptoni (di carne o di soja), gli idrolizzati (di caseina, di albumina o di gelatina) e gli estratti o autolisati di lievito. E' utile abbinare due o più sorgenti di azoto organico, in quantità tale da avere concentrazioni totali di 2-50 g/1, di preferenza 5-15 g/1. Il medium viene completato con sali minerali, indispensabili per un buon sviluppo dei microorganismi, quali i fosfati o i bifosfati di sodio e potassio, il solfato di magnesio ed i cloruri di calcio, di sodio, di potassio o di magnesio. Le concentrazioni di questi sali minerali sono generalmente comprese tra 0,1 e 5 g/1, preferibilmente tra 0,2 e 2 g/1. Tracce di oligoelementi, quali ferro, zinco, manganese, rame hanno generalmente un effetto stimolante la crescita e le attività enzimatiche. Questi vengcno solitamente forniti cane solfati o cloruri in concentrazioni dell'ordine di 1-50 mg/1. Il pH del medium viene aggiustato in un intervallo di 6,00-7,00 (preferibilmente 6,4-6,7) mediante una base inorganica. La coltivazione dei microorganismi avviene a tenperature tra i 23 e i 30°C, preferibilmente tra 24 e 28<e>C per tarpi variabili tra le 24 e le 96 ore (solitamente tra 30 e 48). Ottenute le colture con un buon sviluppo vegetativo, si procede all'aggiunta, direttamente nel brodo di fermentazione, del substrato da trasformare. Questo può essere aggiunto come soluzione concentrata in adatto solvente organico, oppure come polvere, in quantità tale da ottenere una concentrazione finale nella miscela di reazione conpresa tra 100 mg/1 e 1 g/1. Può essere utile aggiungere il substrato da trasformare a piccole dosi o lentamente in modo continuo. La reazione di idrossidazione viene fatta procedere alla stessa terperatura di crescita per un periodo di tempo ocrpreso tra 1 e 12 e le 120 ore (preferibilmente tra le 48 e le 72 ore), in dipendenza anche dalla concentrazione finale di substrato che si vuole trasformare. ;Raggiunta la ccnpleta trasformazione del substrato (tic CHCl^/CH^OH 95/5) la miscela di reazione viene filtrata su celate ed il filtrato estratto con CHCl^. Gli estratti organici così ottenuti sono anidrificati su solfato di sodio, filtrati ed evaporati sotto vuoto a dare un grezzo successivamente eluito su silice (rapporto 1/15); lavando successivamente il pannello con dicloranetano/metanolo 95/5 si recupera nel filtrato con rese variabili dal 60 all'80% la miscela di prodotti idrossilati. Questi prodotti possono essere successivamente isolati per cristallizzazione frazionata o attraverso una purificazione cromatografica su silice (diclorometaro/metanolo 95/5 come eluente). ;In una realizzazione preferita dell'invenzione, l'incubazione di 17-N-t-butilcarbanmoil-4-aza-androstan-3-one con PeniciIlium sp. porta alla mcnoidrossilazione del nucleo sferoideo in 6 e in 15, come mostrato nel seguente schema 2: ;;;;I due procedimenti sperimentali descritti di deidrogenazione e di idrossilazione possono essere effettuati anche impiegando i sopradetti microorganismi imnobilizzati oppure utilizzando anogeneati grezzi ottenuti da questi microorganismi. Le tecniche sperimentali relative seno facilmente realizzabili e conosciute all'esperto del settore (Glass T.L. et al. J. Lipid. Res., 1982, 23, 352; Fukui S. et al. flcta biotechnol. 1981, 1, 339; Gnata T. et al. Eur. J. Microbiol. Biotechnol. ;1979, 8, 143; Kim M.N. et al. Biotechnol. Letters 1982, 4, 233; Ohloscn S. et al. Eur. J. Appi. Microbiol. Biotechnol. 1979, 7, 103). Si possono inoltre realizzare le sopramenzionate reazioni anche attraverso l'inpiego di enzimi purificati provenienti dagli stessi microorganismi. Anche in questo caso la possibilità di isolare queste deidrogenasi ed idrossilasi ed inpiegarle come biocatalizzatori allo stato nativo o ;;supportato su di una matrice polimerica è ampiamente descritta in letteratura (Grunwald J. et al. J. Am. Chem. Soc. 1986,108, 6732; Snjider-Kantoers A.M. et al. Recl. Trav. Chim. Pays-Bas 1991, 110, 226 Santaniello E. et al. Chem. Rev. 92, 1992, 1071-1140). ;I seguenti esempi illustrano ulteriormente l'invenzione. ;Esempio 1 ;Deidrogenazione ccn A. sinplex del 17-t-butilcarbantnoil-4-azaandrostan-3-cne ;II microorganismo viene mantenuto su slants contenenti 9 mi di un terreno avente la seguente conposizione: ;;Materia prima Concentrazione (g/1) ;;Estratto di carne (Difco) 1,500 ;Estratto di lievito (Difco) 3,000 ;Peptcne (Difco) 6,000 ;Idrolizzato da caseina (Costantino) 4,000 ;Destrosio (Cerestar) 1,000 ;Agar (Difco) 18,000 ;;La crescita avviene in 18-20 ore alla temperatura di 28°C. I trapianti si effettuano ogni 20-30 giorni. Si preparano per la coltura vegetativa, beute da 300 mi contenenti 50 mi ciascuna di un rredium con la seguente composizione: ;Materia prima Concentrazione (g/1) ;;Destrosio (Cerestar) 1,000 ;Peptone batteriologico (Costantino) 6,000 Idrolizzato di caseina (Costantino) 4,000 Autolisato di lievito (Costantino) 3,000 ;;pH tal quale (6,10-6,30) corretto a 7,00 mediante NaOH IN e sterilizzato a 121"C per 15 minuti. L'inoculo si effettua mediante 0,50 mi/beuta di una sospensione ottenuta lavando con 5 mi di soluzione fisiologica uno slant. Le beute vengono quindi incubate a 28°C su shaker rotativo a 200 rpm per 17 ore. Lo stadio successivo avviene in un fermentatore da 3 litri di voltarne totale, contenente 1,7 1 del terreno sopra specificato ed inoculato in ragione del 6% (120 mi). Le condizioni operative sono le seguenti: 28<e>C, aerazione 0,5 w m a 200-500 rpm. Dopo 6 ore si aggiungono 1,7 mi di una sospensione di idrocortisane in 2 mi di acetone (alla temperatura di 60<e>C) e si procede alla coltivazione per ulteriori 18 ore. Dopo 24 ore totali si recuperano le cellule per centrifugazione a 4.800 xg (20 minuti) e si risospendcno in tanpcne fosfato 0,1 M pH 7,00 saturato con CHCl^ in ragione di 50 g/1 di peso umido. La sospensione cellulare viene distribuita in beute da 300 mi (20 mi/beuta), a ciascuna delle quali vengono aggiunti 0,125 mi di una soluzione preparata da 84 mg di 17B-t-butilcarbamnoil-4-azaandrostan-3-one e 8,7 mg di menadione in 2 mi di metanolo (concentrazione finale del substrato 260 mg/1) . Si incuba alla tempe ratura di 30 °C per 72 ore su shaker rotativo a 250 rpm. La reazione viene quindi lavorata filtrando il brodo di reazione su celate ed estraendo il filtrato con CHCL^ (volume a volume con la fase acquosa). Gli estratti organici vengono anidrificati su solfato di sodio, filtrati ed evaporati a secchezza a dare un grezzo successivamente purificato per cromatografia su silice: l'eluizione in gradiente con C^Clj/MeOH 95/5 permette di recuperare ccn rese del 60% il prodotto desiderato e con rese del 20% il prodotto di partenza. ;1⁄2-NMR (60 MHz): 0,70 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 1,40 (s, 9H), 3,1-3,6 (m, IH), 5,2 (m, IH), 6,3 (m, IH), 5,8 (d, J = 9Hz, IH), 6,7 (d, J = 9Hz, IH). ;P.f. 253-254°C. ;Esempio 2 ;Idrossilazione ccn Penicillium sp. del 17-t-butilcarbammoll-4-azaandrostan-3-cne ;Il fungo viene conservato su slants di "EMMON'S modification of SABOURAUD'S AGAR", mantenuti in termostato alla temperatura di 26-27 “C per 6-7 giorni sino ad ottenere un micelio abbondantemente sporulato. Successivamente gli slants possano essere mantenuti a 5°C per 2-3 mesi. La coltura vegetativa viene effettuata nello stesso terreno usato per la conservazione, privato dell'agar, distribuito in beute da 300 mi in ragione di 50 ml/beuta. Per effettuare l'inoculo si prelevano da uno slant, sterilmente mediante spatola, 1,0-1, 5 cm di micelio per ogni beuta che si vuole inoculare. Il feltro viene finemente frantumato in Potter con 1 mi circa di soluzione fisiologica e la sospensione così ottenuta viene distribuita nelle beute. Queste sono incubate a 27°C su shaker rotativo a 140 giri/minuto per 48 ore. La coltura vegetativa primaria serve per inoculare un medium avente la seguente composizione: ;;Materia prima Concentrazione (g/1) ;;Destrosio anidro 5,000 ;Cor Steep atonizzato 2,000 ;Peptone di soja 1,000 ;Urea 0,300 ;Potassio fosfato monobasico 1,000 ;Magnesio solfato.7^ 0 0,300 ;Ferro solfato.7H20 0,005 ;Zinco solfato.7H20 0,005 ;Manganese solfato.HjO 0,001 ;Rame solfato.5H20 0,001 ;;Il pH finale viene carretto a 6,5 con KCH IN, distribuito in beute da 300 mi in ragione di 50 mi/beuta e sterilizzato a 121°C per 20 minuti. Le beute inoculate con il 10% di coltura vegetativa vengono incubate alla temperatura di 27°C (140 rpm) per 24 ore. Dopo questo intervallo di tempo, in caso di presenza di grosse pellets o di crescita del micelio confluente in un unico blocco si procede ad una omogeneizzazione in Blendor per alcuni secondi. Al micelio finemente disperso si aggiungono 0,35 mi/beuta di una soluzione a 42 mg/1 di 17βt-butilcarbanTnoil-4-azaandrostan-3-cne in etanolo (concentrazione finale in beuta 270 mg/1 di substrato) e si incuba nuovamente nelle condizioni sopra specificate. Dopo 24 ore si aggiungono, a ciascuna beuta ulteriori 0,7 mi della stessa soluzione e si incuba nuovamente a 27°C per ulteriori 72 ore. Al termine della trasformazione la miscela di reazione viene filtrata su celite ed il filtrato estratto con CHCl^ (3 volte per un pari di volume della fase acquosa). Gli estratti organici vengono anidrificati su solfato di sodio, filtrati ed evaporati a secchezza a dare un grezzo successivamente eluito su silice (rapporto 1/15 con il grezzo): successivi lavaggi con CHjClj/MeOH 95/5 permettono di recuperare con rese del 90% la miscela di prodotti mcnoidrossilati che seno stati successivamente separati per cristallizzazione da acetato di etile. Sano stati isolati tre prodotti aventi le seguenti caratteristiche spettrali: ;1° prodotto. ;1⁄2 -NMR (500 MHz; CDCl^; segnali diagnostici)$ : 0,7 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 2,4 (m, 2H), 2,88 (d, IH), 3,55 (m, IH), 5,1 (s, IH), 6,8 (s, IH, scantoiabile); ;MS (m/e): 390,30 (m+), 375,30 (ro-15), 372,25 (ro-18), 357,40 (m-33), 318,30 (nv-72), 290,25 (m-100); ;attribuibile a 17B-t-butilcarbanmoil-6ot-idrossi-4-azaandrostan-3-ane; ;2° e 3° prodotto. ;1⁄2 -NMR (500 MHz; CDCl^; segnali diagnostici)S : 0,92-1,04 (dd, 6H), 1,37 (d, 9H), 2,42 (m, 2H), 3,05 (m, IH), 4,3 e 5,05 (2m, IH totali), 5,22 (s, IH, scanbiabile ) , 5,5 <s, IH, scambiabile) ; ;MS (m/e) : 390,30 (m+) , 372,25 (m-18) , 357,25 (m-33) , 331,25 (m-59) , 314 ,20 (m-73) , 290,30 (m-100) . ;attribuibile a 17B-t-butilcarbanmoil-15*l-idrossi-4-azaandrostan-3-one e 17B-t-butilcarbammoil-150-idrossi-4-azaandrostan-3-one.

I tre prodotti mcnoidr ossilati ottenuti per biotras formazione del nucleo azasteroideo mediante l'impiego di Penici llium sp. sano dotati di attività biologica sull'enzima 51^-riduttasi. A questo scopo è stato usato il metodo enzimatico "in vitro" descritto nella demanda di brevetto intemazionale WO/9413691, pubblicata il 23 giugno 1994. Inaspettatamente è stata riscontrata una potente attività inibitrice l'enzima 3⁄4^-riduttasi per i prodotti 2 e 3 , per i quali la concentrazione inibente il 50% dell 'attività enzimatica ( IC5Q ) è risultata sovrapponibile a quella della Finasteride, usata come prodotto standard, mentre il prodotto 1 è risultato poco attivo.

Pertanto la presente invenzione conprende anche l'uso dei composti monoidrossilati come agenti terapeutici, in particolare per la preparazione di un medicamento avente attività di inibizione della testosterone 5-0f-riduttasi.

La presente invenzione conprende anche ccnposizioni farmaceutiche da somministrare per via orale, parenterale e topica contenenti i conposti suddetti con veicoli ed eccipienti convenzionali farmaceuticamente accettabili.

Esempi di conposizioni farmaceutiche orali sono compresse, capsule, bustine e sospensioni; esenpi di corposi zicni par en ter ali sono flaconcini liofilizzati o sospensioni sterili; esenpi di conposizioni topiche seno creme, unguenti, gel, aerosol o schiume.

Le c opposizioni oggetto dell ' invenzione sono preparate con metodi convenzionali, come per esempio quelli descritti in Remington <1 >s Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. XVII ed. N.Y. U.S.A..

La posologia e modalità di sortministrazione saramo stabilite dal medico curante dipendentemente dalla patologia da trattare , dalla gravità dei sintomi e dalle condizioni del paziente (età, sesso e peso) .

Claims (17)

1. RIVENDICAZIONI 1 . Procedimento per la preparazicne di composti di formula { 1 ) : nella quale è idrogeno o un gruppo alchile inferiore, è un gruppo Cftl, OR^, NHR^Ì dove Rj è un gruppo C^-Cg alchile lineare o ramificato, cicloalchile , contenente eventualmente uno o più eteroatomi scelti tra S, 0, N, ^0^20 policicloalchile aromatico; che comprende gli stadi di: a) coltivazione di un microorganismo del genere Arthrobacter o Nocard-i^ in un opportuno mezzo di coltura; b) induzione in detto microorganismo della produzione di 1 deidrogenasi ; c) separazione delle cellule di detto microorganismo; d) incubazione di detto microorganismo con un composto di formula (2) : (2) dove è come sopra definito; e) isolamento del prodotto di incubazione; f) eventuale alchilazicne dell'atomo di azoto steroideo.
2. 2. Procedimento secondo la rivendicazione 1, nel quale il microorganismo è Arthrobacter simplex oppure Nocardia sp..
3. 3. Procedimento secondo le rivendicazioni 1-2, nel quale lo stadio b) è effettuato per mezzo di induttori di tipo steroideo.
4. 4. Procedimento secondo la rivendicazione 3, nel quale detto induttore è idrocertisene.
5. 5. Procedimento secondo le rivendicazioni 1-4, nel quale lo stadio d) è condotto in un tanpene a pH conpreso tra 6 e 8 previamente saturato con un solvente avente log P superiore a 1,5, sino a un massimo del 10% v/v.
6. 6. Procedimento secondo la rivendicazione 5, del quale detto solvente è cloroformio.
7. 7. Procedimento secondo le rivendicazioni 5 e 6, nel quale a detto tampone è aggiunto menadione o fenazina metasolfato.
8. 8. Procedimento secondo le rivendicazioni 1-7, nel quale nel composto di formula 1 è un gruppo ter-C^Hg-NH-.
9. 9. Procedimento per la mcnoidrossilazione del nucleo steroideo di conposti di formula (2) : nella quale è idrogeno o un gruppo alchile inferiore, è un gruppo OH, OR^, NHR^, dove R^ è un grippo C^-Cg alchile lineare o ramificato, cicloalchile, contenente eventualmente uno o più et ero atomi scelti tra S, 0, N, C10-C20 poli cicloalchile , aromatico; che ccrp rende gli stadi di: a) coltivazione di un microorganismo del genere Penlcillium sp. , Rhlzopus o Cunninqhamella; b) aggiunta di un conposto di formula (2) : (2) dove e 1*2 sono cane saprà definiti, e successiva incubazione; c) isolamento del derivato manoidrossilato.
10. 10. Procedimento secondo la rivendicazione 9, nel (pale detto microorganismo è Penici llium sp..
11. 11. Procedimento secondo le rivendicazioni 9-10, nel quale nel ccnposto di formula 2 è un gruppo ter-C^Hg-NH-.
12. 12. Composti mcnoidrossilati ottenibili dal procedimento delle rivendicazioni 9, 10 e 11.
13. 13. Conposto secondo la rivendicazione 12 di formula:
14. 14. Composto secondo la rivendicazione 12 di formula:
15. 15. Uso dei conposti delle rivendicazioni 12-14 come agenti terapeutici.
16. 16. Uso dei conposti delle rivendicazioni 12-14 per la preparazione di un medicamento avente attività di inibizione della testosterone 5-0(-riduttasi.
17. 17. Conposizioni farmaceutiche contenenti un ccrposto delle rivendica-zioni 12-14 come principio attivo in miscela oon veicoli ed eccipienti farmaceuticamente accettabili.