HUT77077A - Új receptor - Google Patents
Új receptor Download PDFInfo
- Publication number
- HUT77077A HUT77077A HU9702146A HU9702146A HUT77077A HU T77077 A HUT77077 A HU T77077A HU 9702146 A HU9702146 A HU 9702146A HU 9702146 A HU9702146 A HU 9702146A HU T77077 A HUT77077 A HU T77077A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- receptor
- compound
- treatment
- disorders
- mania
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 97
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 87
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 87
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 35
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 claims description 32
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 28
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 22
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 claims description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 19
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 17
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 claims description 16
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 claims description 16
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 claims description 16
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 16
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 claims description 16
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 claims description 16
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 claims description 16
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 claims description 16
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 claims description 16
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 claims description 16
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 claims description 16
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 claims description 16
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 15
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 claims description 15
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 claims description 15
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 claims description 15
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 claims description 15
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 claims description 13
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 13
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 claims description 12
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 claims description 12
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 claims description 11
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 7
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000001773 anti-convulsant effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 102100034014 Prolyl 3-hydroxylase 3 Human genes 0.000 claims description 3
- 229960003965 antiepileptics Drugs 0.000 claims description 3
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 claims 1
- 208000009205 Tinnitus Diseases 0.000 claims 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 claims 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 claims 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 231100000886 tinnitus Toxicity 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- -1 4-fluoroanilino Chemical group 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002082 anti-convulsion Effects 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 3
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 description 2
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N Gabapentin Chemical compound OC(=O)CC1(CN)CCCCC1 UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N isopropyl alcohol Natural products CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N manganese dioxide Chemical compound O=[Mn]=O NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- KXCAEQNNTZANTK-UHFFFAOYSA-N stannane Chemical compound [SnH4] KXCAEQNNTZANTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000080 stannane Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N tributylstannane Chemical class CCCC[SnH](CCCC)CCCC DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- REDSKZBUUUQMSK-UHFFFAOYSA-N tributyltin Chemical compound CCCC[Sn](CCCC)CCCC.CCCC[Sn](CCCC)CCCC REDSKZBUUUQMSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CQSLOZRJOIHHAQ-VHSXEESVSA-N (3r,4s)-4-amino-2,2-dimethyl-3,4-dihydrochromen-3-ol Chemical compound C1=CC=C2[C@H](N)[C@@H](O)C(C)(C)OC2=C1 CQSLOZRJOIHHAQ-VHSXEESVSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGNQDBQYEBMPFZ-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-4-iodobenzene Chemical compound FC1=CC=C(I)C=C1 KGNQDBQYEBMPFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole;hydrate Chemical compound O.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHPLDZRKRZACGK-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-1-fluoro-3-iodobenzene Chemical compound FC1=CC=CC(I)=C1Cl VHPLDZRKRZACGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXLPKTIAUMCNDX-UHFFFAOYSA-N 2h-pyran-3-ol Chemical compound OC1=CC=COC1 WXLPKTIAUMCNDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CELVQYDOLLNPMB-UHFFFAOYSA-N 3-[3-(trifluoromethyl)diazirin-3-yl]benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(C2(N=N2)C(F)(F)F)=C1 CELVQYDOLLNPMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMCXTFVBNCFZMY-PPJXEINESA-N 4-fluorophthalic acid Chemical compound [14C](=O)(O)C1=C(C(=O)O)C=CC(=C1)F OMCXTFVBNCFZMY-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- CNXYPUUAPXKSBM-UHFFFAOYSA-N 8ah-chromen-3-ol Chemical compound C1=CC=CC2=CC(O)=COC21 CNXYPUUAPXKSBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 108700002304 Drosophila can Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108010078321 Guanylate Cyclase Proteins 0.000 description 1
- 102000014469 Guanylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- XLIIRNOPGJTBJD-MZDPCCPDSA-N N-[(3S,4S)-6-acetyl-3-hydroxy-2,2-dimethyl-3,4-dihydrochromen-4-yl]-3-chloro-4-fluoro(14C)benzamide Chemical compound C(C)(=O)C1=CC2=C(OC([C@H]([C@H]2N[14C](=O)C2=CC(=C(C=C2)F)Cl)O)(C)C)C=C1 XLIIRNOPGJTBJD-MZDPCCPDSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N Phenytoin Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C1(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N benzyl alcohol Substances OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 description 1
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000000262 chemical ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N diazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003529 diazepam Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012362 drug development process Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960002767 ethosuximide Drugs 0.000 description 1
- HAPOVYFOVVWLRS-UHFFFAOYSA-N ethosuximide Chemical compound CCC1(C)CC(=O)NC1=O HAPOVYFOVVWLRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960002870 gabapentin Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001848 lamotrigine Drugs 0.000 description 1
- PYZRQGJRPPTADH-UHFFFAOYSA-N lamotrigine Chemical compound NC1=NC(N)=NN=C1C1=CC=CC(Cl)=C1Cl PYZRQGJRPPTADH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- MUJIDPITZJWBSW-UHFFFAOYSA-N palladium(2+) Chemical compound [Pd+2] MUJIDPITZJWBSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INIOZDBICVTGEO-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) bromide Chemical compound Br[Pd]Br INIOZDBICVTGEO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002036 phenytoin Drugs 0.000 description 1
- 150000003906 phosphoinositides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005222 photoaffinity labeling Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AEQFSUDEHCCHBT-UHFFFAOYSA-M sodium valproate Chemical compound [Na+].CCCC(C([O-])=O)CCC AEQFSUDEHCCHBT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 210000001768 subcellular fraction Anatomy 0.000 description 1
- 201000009032 substance abuse Diseases 0.000 description 1
- 231100000736 substance abuse Toxicity 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229940102566 valproate Drugs 0.000 description 1
- PJDFLNIOAUIZSL-UHFFFAOYSA-N vigabatrin Chemical compound C=CC(N)CCC(O)=O PJDFLNIOAUIZSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005318 vigabatrin Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
- C07B59/002—Heterocyclic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Addiction (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány kiterjed az olyan, más forrásokból nyerhető homológ receptorokra is, amelyek a patkány előagy szövetből nyert receptorral legalább 85 %-os homológiát mutatnak.
k P9702146 64.134/DE
KÖZZÉTÉTELI
PÉLDÁNY
S.b.G. & K
Nemzetközi Szabadalmi Iroda
H-1062 Budapest. Andrássy út 113. Telefon: 34-24-950, Fax: 34-24-323
UJ RECEPTOR
| SMITHKLINE BEECHAM P.L.C., | Brentford, Middlesex, | GB |
| Feltalálók: | ||
| HERDON, Hugh, Jonathan, | Harlow, Essex, | GB |
| JERMAN, Jeffrey, Clifford, | Harlow, Essex, | GB |
| CHAN, Wai, Ngor, | Harlow, Essex, | GB |
A bejelentés napja: 1995. 12. 11.
Az elsőbbség napja: 1994. 12. 17. 9425502.3 GB
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/EP95/04998
A nemzetközi közzététel száma: WO 96/18650
A találmány egy lényegében tiszta formában lévő új receptorra, a receptornak egy oldható formájára és ennek terápiás hatóanyagként történő felhasználására, betegségek kezelésére felhasználható vegyületeknek a receptorral történő kölcsönhatás útján történő szkrínelési (kiválasztási) eljárására, a szkrínelési eljárás végrehajtásával kiválasztott új vegyületekre, a rekombináns receptorra és ennek egy ilyen szkrínelési eljárásban történő felhasználására, az ilyen antitestek terápiás hatóanyagokként történő felhasználására, valamint a receptorhoz kötődő terápiás hatóanyagok hatékonyságának meghatározására szolgáló eljárásra vonatkozik.
A WO 92/22293. számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés (SmithKline Beecham plc) olyan vegyületek osztályát írja le, amelyekről viselkedési modellekkel kimutatták, hogy bizonyos központi idegrendszeri (CNS) aktivitással rendelkeznek, közelebbről felhasználhatók az epilepszia kezelésére és/vagy megelőzésére. Az említett szabadalmi bejelentésben ismertetett vegyületek egyik példája a transz-(+)-6-acetil-4S-(4-fluor-anilino) -3, 4-dihidro-2,2-dimetil-2íí-l-benzopirán-3A-ol (a továbbiakban: A. vegyület).
A WO 94/13656., WO 94/13657., WO 94/13292. és a WO
94/13297. számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben, valamint a PCT/EP95/02076., PCT/EP95/02249. és a
PCT/EP95/02246. számú nemzetközi szabadalmi bejelentésben további központi idegrendszeri aktivitással rendelkező vegyületeket ismertetnek. Az előbbiek közül a PCT/EP95/02076. számú nemzetközi szabadalmi bejelentésben leírják a jelen találmány 4.
példája szerinti hideg vegyületet, azaz a B. vegyületet.
A fentiekben hivatkozott szabadalmi dokumentumokban ismertetett vegyületek egyetlen ismert receptorhoz sem kötődnek. Vizsgálataink során azonosítottunk egy olyan, új receptort, amelyhez az ilyen vegyületek hozzákötődnek.
A jelen találmány egy olyan, patkány előagy szövetből nyerhető, lényegében tiszta formában lévő receptorra vonatkozik, amelyre az jellemző, hogy
a) az A. vegyület 40 nM-os Kd értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;
b) az A. vegyület 220 pmol/g protein Bmax értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;
c) a B. vegyület 2 riM-os Kd értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;
d) a B. vegyület 220 pmol/g protein Bmax értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;
és a találmány kiterjed az olyan, más forrásokból nyerhető homológ receptorokra is, amelyek a patkány előagy szövetből nyert receptorral legalább 85 %-os homológiát mutatnak.
Más ismert antikonvulzív vegyületek, amilyen — egyebek mellett — például a diazepam, phenytoin, pentobarbitone, valproate, carbamazepine, vigabatrin, lamotrigine, ethosuximide és a gabapentin, nem kötődnek az új receptorhoz.
Ezenkívül az új receptor megtalálható a humán vagy rágcsáló neuroblastoma és glioma sejttenyészetekben is. Ezeket felhasználhatjuk preparálás nélkül, illetve előállíthatók az agyszövet esetén alkalmazott eljárások felhasználásával. A humán neuroblastoma sejtvonalakban, például az SHSY5Y vagy az IMR 32 sejtvonalakban a B. vegyület 2 nM-os Kd értékkel és 150 pmol/g protein Bmax értékkel kötődik az új receptornál.
Az új receptort szokásos módszerek alkalmazásával lényegében tiszta formában izoláljuk. Például az új receptort tartalmazó (például a fentiekben ismertetett) szövetnek egy (például 1-10 mg protein/ml-es) részletét összekeverjük egy radioaktív izotóppal (például I izotóppal) jelzett fotoaffinitás-jelző vegyülettel [például a C. vegyülettel (lásd a 6. példát)]. A keverékben a fotoaffinitás-jelző vegyület koncentrációja előnyösen 0,1 pM és 1000 pM közötti értékű. A keveréket körülbelül egy órán keresztül környezeti hőmérsékleten alkalmasan inkubálhatjuk. Ezt követően a keveréket körülbelül 30 percen keresztül (például egy 6 W-os fényforrásból származó 366 nm hullámhosszúságú) UV fénnyel világítjuk meg. Ezt követően a nemkötött fotoaf finitás-jelző vegyület eltávolítása érdekében a szövetet centrifugálással mossuk. A fotoaffinitás-jelzett receptort először a további proteinektől különítjük el, amelynek során nemredukáló körülmények között végrehajtott gélpermeációs kromatográf iát alkalmazunk (például Superose 6-tal). A receptort tartalmazó proteinfrakciókat ezt követően például Bensadoun és
Weinstein módszerének [Bensadoun A. and Weinstein D., Anal.
Biochem., 70, 241-250 (1976)] megfelelően triklór-ecetsavval precipitálhatjuk. A proteinek további elválasztását redukáló körülmények között végrehajtott nátrium-dodecil-szulfát/poliakrilamid gélelektroforézis (SDS-PAGE) alkalmazásával hajthatjuk végre. Erre a célra a Laemmli-féle eljárás [Laemmli U. K.,
Natúré, 227, 680-685 (1970)] alapján például 5 vegyes% felviteli géllel felülrétegelt 6 vegyes% rúdgélt, vagy 10 vegyes% vertikális gélt, vagy 4-20 vegyes% gradiens lapgélt alkalmazhatunk. A receptor további tisztítását a preparatív SDS-PAGE útján előállított anyag immobilizált pH gradiens poliakrilamid-gélekben végzett izoelektromos fokuszálásával (IEF) valósíthatjuk meg.
A gélelektroforézissel (SDS-PAGE) végzett analízis alapján a receptor molekulatömege a 130 kilodaltonos régióban van.
A jelen találmány második tárgyát a fenti receptornak egy oldható formája képezi.
A receptor oldható formáit hagyományos módszerek alkalmazásával állíthatjuk elő.
Véleményünk szerint a receptor ilyen oldható formái gyógyászati felhasználást nyerhetnek, így a találmány kiterjed a receptor egy oldható formájának terápiás hatóanyagként történő felhasználására is.
A jelen találmány magában foglalja továbbá a receptor egy oldható formájának a felhasználását egy anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
A találmány magában foglal egy eljárást anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére, amelynek során egy arra rászoruló betegnek beadjuk az oldható receptor hatásos vagy profilaktikus mennyiségét.
A találmány tárgyát képezi egy anxietas, mánia, depreszszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény is, amely az oldható receptort gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal összekeverve tartalmazza.
Az ilyen gyógyszerkészítmények és hordozók jól ismertek a szakterületen. A gyógyszerkészítményeket hagyományos módszerek alkalmazásával állíthatjuk elő.
A jelen találmány harmadik tárgya eljárás a receptorhoz kötődéssel kapcsolatos terápiás aktivitással rendelkező vegyületek kiválasztására (szkrínelésére), amelynek során egy tesztvegyületet egy olyan szubsztráttal érintkeztetjük, amelyben jelen van a receptor, majd mérjük a kötődés mértékét.
A szubsztrátok, amelyekben az új receptor megtalálható, magukban foglalják — egyebek mellett — például a patkányokból, emberekből, fehér selyemmajmokból, kutyákból, macskákból és egerekből származó agyszövetet. Az ilyen agyszövetet alkalmasan egy puffereit vizes médiumban, például 5-50 mM HEPES (pH 7,4) közegben vagy Tris/HCl pufferben homogenizálhatjuk. A homogenizátumot centrifugálással és ismételt szuszpendálással moshatjuk. A szövetből származó szubcelluláris frakciókat is felhasználhatjuk.
A tesztvegyület és az új receptort tartalmazó szubsztrát érintkeztetését úgy hajthatjuk végre, hogy az új receptort tartalmazó (például a fentiekben ismertetett) szövetnek egy (például 1-10 mg protein/ml-es) részletét összekeverjük egy rádióaktív izotóppal (például H vagy I izotóppal) jelzett tesztvegyülettel. A keverékben a tesztvegyület végkoncentrációja előnyösen 0,1-1000 nM, még előnyösebben 1-50 nM.
A keveréket alkalmasan körülbelül egy órán keresztül környezeti hőmérsékleten inkubálhatjuk. A nemkötött tesztvegyületet ezt követően szűréssel választjuk el a kötött tesztvegyülettől. Ezt a szűrési műveletet Whatman üvegrostszűrők, előnyösen GF/B vagy GF/C típusú üvegrostszűrők alkalmazásával végezhetjük el. A szűrőket alkalmasan jéghideg puffereit médiummal (előnyösen a szövetpreparálás során alkalmazott típusú médiummal) moshatjuk.
A szűrőkön maradt szövethez kötött radioaktivitás mennyiségét úgy mérhetjük, hogy a szűrőkhöz folyadékszcintillációs koktélt adunk, majd egy H mérésére szolgáló folyadékszcintil8 , 125 lacios számlálóban beütésszamot merünk, illetve I eseten egy gammaszámlálóban közvetlenül a szűrőket számláljuk.
Egy másik megoldás értelmében, ha tenyésztőlemezhez tapadt egész sejteket használunk, eljárhatunk úgy is, hogy a nemkötött tesztvegyületnek a kötött tesztvegyülettől történő elválasztása során a sejteket jéghideg, puffereit médiummal mossuk, ezt követően a sejteket feloldjuk nátrium-hidroxid-oldatban, majd a fentieknek megfelelően folyadékszcintillációs számlálóban vagy gammaszámlálóban számlálást végzünk.
A tesztvegyületek radioizotópos jelzését szokásos módszerek alkalmazásával hajtjuk végre.
A radioizotóppal nem jelezett tesztvegyületek kötési affinitásait alternatív módon meghatározhatjuk úgy is, hogy szokásos módszerek alkalmazásával megmérjük egy olyan, radioizotóppal jelzett vegyület kicserélődési mennyiségét, amelyről ismert, hogy hozzákötődik a receptorhoz; az ilyen vegyületek körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: A. vagy B. vegyület, illetve más, a fentiekben hivatkozott szabadalmi leírásokban és bejelentésekben említett vagy azok oltalmi körébe tartozó vegyületek.
Hangsúlyozni kívánjuk, hogy a receptorhoz kötődő és a kiválasztási (szkrínelési) eljárás alkalmazásával helyettesíthető radioizotóppal jelzett vegyületek újak, és ezek a vegyületek ugyancsak a találmány tárgyát képezik.
A kiválasztási eljárásban előnyös lehet hagyományos módszerekkel előállítható rekombináns receptorok alkalmazása.
Az új humán receptort kódoló nukleinsav izolálására szol9 gáló egyik megoldás során például egy humán genom vagy cDNS könyvtárt a szakterületen ismert felismerési eljárások alkalmazásával egy természetes vagy mesterségesen tervezett próbával tesztelünk [lásd például: Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F. M., et al. (eds.) Greene Publishing Assoc. and John Wiley Interscience, New York (1989, 1992)]. Az ily módon nyert izolált nukleinsav-molekulákat felhasználhatjuk a humán, emlős vagy más állati forrásokból származó genom DNS, cDNS vagy RNS komplementer másolatainak az előállítására, vagy az ilyen forrásoknak a szekvenciákkal kapcsolatos, például a transzkripciós regulátor vagy kontroll elemek, valamint az 5' és/vagy 3’ szakaszoktól a kódoló szekvenciákig terjedő más stabilitási, transzlációs és szövetspecifitás-meghatározó szakaszok szkrínelésére.
A találmány szerinti proteineket előnyösen rekombináns géntechnológiai módszerekkel állítjuk elő. Az izolált nukleinsavakat, különösen a DNS-eket a DNS-nek a génexpresszióhoz szükséges expressziós kontroll régiókhoz (például regulátor régiókhoz) történő működőképes kötésével vezethetjük be az expressziós vektorokba. A vektorokat a szakterületen jól ismert eljárások [lásd például: Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F. M., et al. (eds.) Greene Publishing Assoc.
and John Wiley Interscience, New York (1989, 1992)] alkalmazáséval vezethetjük be a megfelelő gazdasejtekbe, például prokarióta (például bakteriális) vagy eukarióta (például élesztő, rovar vagy emlős) sejtekbe. A kívánt proteinekhez szükséges, előzetesen előállított és izolált kódoló szekvenciákat egy al- 10 kalmas vektorba vagy replikonba klónozhatjuk. Az ezen a területen jártas szakember számára számos klónozó vektor ismert; a megfelelő klónozó vektor kiválasztása egyedi elbírálás kérdése.
A klónozásra szolágló rekombináns DNS vektorok és az ezekkel transzformálható gazdasejtek példái közé tartoznak — egyebek mellett — a következők: bakteriofág λ (E. coli), pBR322 (E. coli), pACYC177 (E. coli), pKT230 (Gram-negatív baktériumok), pGV1106 (Gram-negatív baktériumok) , pLAFRl (Gram-negatív baktériumok) , pME290 (nem-E. coli Gram-negatív baktériumok), pHV14 (E. coli és Bacillus subtilis) , pBD9 {Bacillus) , pIJ61 {Streptomyces), pUC6 {Streptomyces) , YIp5 {Saccharomyces), egy baculovirus rovarsejt rendszer, YCpl9 {Saccharomyces) [általánosan lásd: DNA Cloning: Vols I & II, Glover et al., ed. IRL Press
Oxford (1985, 1987); valamint T. Maniatis et al., Molecular
Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory (1982)].
A gént egy promoter, riboszóma kötő hely (bakteriális expresszió esetén) és adott esetben egy operátor (együttesen: kontroll elemek) olyan kontrollja alá helyezhetjük, amelynek eredményeként a kívánt proteint kódoló DNS szekvencia átíródik az ezen expressziós kontrukciót tartalmazó vektorral transzformáit gazdasejtbe. A kódoló szekvencia adott esetben szignál peptidet vagy vezető szekvenciát tartalmazhat. A találmány szerinti alegység antigéneket például az E. coli tac promoter vagy a protein A gén (spa) promoter és szignál szekvencia alkalmazásával expresszálhatjuk. A vezető szekvenciákat a bakteriális gazda poszt-transzlációs feldolgozásával távolíthatjuk el (lásd például: 4 431 739., 4 425 437. és 4 338 397. számú amerikai
- 11 egyesült államokbeli szabadalmi leírás).
A kontroll szekvenciákon kívül kívánatos lehet olyan regulátor szekvenciák alkalmazása is, amelyek lehetővé teszik a protein szekvenciák expressziójának a gazdasejt növekedéséhez viszonyított regulációját. A regulátor szekvenciák jól ismertek az ezen a területen jártas szakember számára. Ezek közé tartoznak például azok, amelyek egy kémiai vagy fizikai stimulusra adott válaszreakcióban ki- vagy bekapcsolandó gén expresszióját okozzák egy regulátor vegyület jelenlétében. A regulátor elemek más típusai is jelen lehetnek a vektorban, amilyenek például a fokozó szekvenciák.
Egy expressziós vektort úgy állítunk össze, hogy az egyedi kódoló szekvencia a megfelelő regulátor szekvenciákkal rendelkező vektorban helyezkedjen el, és a kódoló szekvenciának a kontroll szekvenciákhoz viszonyított helyzete és orientációja olyan legyen, hogy a kódoló szekvencia a kontroll szekvenciák kontrollja alatt átíródjon (azaz a DNS molekulához kötődő RNS polimeráz a kontroll szekvenciáknál átírja a kódoló szekvenciát) . Ennek megvalósításához kívánatos lehet az adott egyedi antigént kódoló szekvenciák módosítása. Bizonyos esetekben, például a leolvasási keret fenntartásához szükségessé válhat a szekvencia oly módon történő módosítása, hogy a szekvenciát a megfelelő orientációval hozzákapcsoljuk a kontroll szekvenciákhoz. A kontroll szekvenciákat és más regulátor szekvenciákat mielőtt egy vektorba, például a fentiekben ismertetett klónozó vektorokba inszertálnánk, hozzákapcsolhatjuk a kódoló szekvenciához. Alternatív módon eljárhatunk úgy is, hogy a kódoló
- 12 szekvenciát közvetlenül egy olyan expressziós vektorba klónozzuk, amely már tartalmazza a kontroll szekvenciákat és tartalmaz egy megfelelő restrikciós helyet.
Bizonyos esetekben kívánatos lehet olyan szekvenciák alkalmazása is, amelyek a szekréciós szignál hasítását követően a polipeptidnek a gazdaorganizmusból történő kiválását okozzák. Bizonyos esetekben előnyös lehet az adott receptorok mutánsainak vagy analógjainak az előállítása is. Mutánsokat és analógokat állíthatunk elő például a proteint kódoló szekvencia egy részének deléciójával, egy szekvencia inszerciójával és/vagy egy vagy több a szekvenciában lévő nukleotidnak a szubsztitúciójával. A nukleotid szekvenciák módosítására szolgáló módszerek, például az oldalirányú mutagenezis, az ezen a területen jártas szakember számára jól ismertek [lásd például: T. Maniatis et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory (1982); DNA Cloning: Vols I & II, Glover et al., ed. IRL Press Oxford (1985, 1987); valamint Nucleic Acid Hybridization (fentebb)] .
A szakterületen igen nagy számú prokarióta expressziós vektor ismert (lásd például: 4 578 355., 4 440 859., 4 436 815.
431 740., 4 431 739., 4 428 941., 4 425 437., 4 418 149.,
411 994., 4 366 246. és 4 342 832. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás; 2 121 054., 2 008 123. és
077 675. számú nagy-britanniai szabadalmi bejelentés; valamint 103 395. számú európai szabadalmi bejelentés). Élesztő expressziós vektorok is ismertek a szakterületen (lásd például:
446 235., 4 443 539. és 4 430 428. számú amerikai egyesült
- 13 államokbeli szabadalmi leírás; valamint 103 409., 100 561. és
491. számú európai szabadalmi bejelentés). A pSV2neo (J. Mól. Appl. Génét., .1, 327-340) az SV40 késleltetett promotert használja az emlős sejtekben történő expresszió irányítására. A pCDNAl-ből (Mól. Cell Biol., 7, 4125-4129) származó pCDNAlneo vektor a CMV promotert használja az expresszió vezetéséhez. Az utóbbi két vektor mindegyike felhasználható emlős sejtekben történő tranziens vagy (G418 rezisztencia alkalmazásával) stabil expresszió esetén. Rovarsejt, például Drosophila expreszsziós rendszerek ugyancsak alkalmazhatók (lásd például:
PCT/US89/05155. és PCT/US91/06838. számú nemzetközi szabadalmi bejelentés, valamint 88/304093.3 számú európai szabadalmi bejelentés) .
A választott expressziós rendszertől és gazdaszervezettől függően a találmány szerinti proteinek a fentiekben ismertetett expressziós vektorok egyikével transzformált gazdasejteknek olyan körülmények között végzett tenyésztésével állíthatók elő, amely körülmények között az adott protein expresszálódik. Ezt követően a proteint elválasztjuk a gazdasejttől és tisztítjuk.
Amennyiben az expressziós rendszer a proteint a tenyésztő közegbe szekretálja, a proteint közvetlenül a médiumból tisztíthatjuk. Ha a protein nem válik ki, a proteint a sejtlizátumokból izolálhatjuk vagy a sejtmembrán frakcióból nyerhetjük ki.
Azokban az esetekben, mint itt, ahol a protein a sejtfelületen lokalizálódik, a kívánt géntermék vizsgálható forrásaként teljes sejteket vagy izolált membránokat használhatunk. A megfelelő tenyésztési körülmények és kinyerési módszerek kiválasztása
- 14 az ezen a területen jártas szakember ismeretanyagának része.
A találmány szerinti proteinek azonosításának egy alternatív eljárása során az E. coli transzformálására használt kiónok alkalmazásával génkönyvtárakat konstruálunk, majd az egyedi kolóniákat egyesítjük és poliklonális szérum vagy monoklonális antitestek alkamazásával a kívánt receptorra szkríneljük.
A találmány szerinti proteineket kémiai szintézisekkel, például szilárd fázisú peptidszintézisekkel is előállíthatjuk, amelyek során ismert aminosav-szekvenciákat vagy az adott gének
DNS szekvenciájából származó aminosav-szekvenciákat alkalmazunk. Az ilyen eljárások az ezen a területen jártas szakember számára jól ismertek. A peptidek kémiai szintézise nem kifejezetten előnyös.
A találmány szerinti proteineket vagy legalább egy epitopot tartalmazó fragmentumaikat felhasználhatjuk antitestek, mind poliklonális, mind monoklonális antitestek előállítására. Amennyiben poliklonális antitesteket kívánunk előállítani, egy kiválasztott emlőst (például egeret, nyulat, kecskét, lovat stb.) egy találmány szerinti receptorral vagy ennek fragmentumával, illetve egy mutált receptorral immunizálunk. Az immunizált állatból szérumot nyerünk, majd a szérumot ismert eljárásoknak megfelelően kezeljük. Amennyiben poliklonális antitesteket tartalmazó szérumot használunk, a poliklonális antitesteket immunaffinitás-kromatográfiával vagy más ismert eljárásokkal tisztíthatjuk.
A találmány szerinti proteinek és fragmentumaik monoklonális antitestjeit is egyszerűen elő tudja állítani az ezen a te- 15 rületen jártas szakember. A monoklonális antitestek hibridoma technológia alkalmazásával történő előállításának általános módszerei jól ismertek. Sejtfúzióval vagy más módszerekkel, például B limfociták onkogén DNS-sel végzett direkt transzformálásával vagy Epstein-Barr-vírussal végzett transzfekciójával immortális antitest-termelő sejtvonalakat hozhatunk létre [lásd például: M. Schreier et al., Hybridoma Techniques (1980); Hammerling et al., Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas (1981); Kennett et al., Monoclonal Antibodies (1980); valamint 4 341 761., 4 399 121., 4 427 783., 4 444 887.,
452 570., 4 466 917., 4 472 500., 4 491 632. és 4 493 890.
számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás]. Az adott antigén vagy ennek fragmentuma ellen termelt monoklonális antitestek paneljeit különféle jellemzőkre, például izotópra, epitopra, affinitásra stb. nézve szkrínelhetjük. A monoklonális antitesteket felhasználhatjuk például azoknak az egyedi antigéneknek az immunaffinitási módszerek alkalmazásával végzett tisztítására, amelyek ellen az antitestek közvetlenül irányulnak. Alternatív módon az adott monoklonális antitesteket kódoló géneket ismert PCR módszerek alkalmazásával hibridomákból is izolálhatjuk, majd a géneket a megfelelő vektorokba klónozhatjuk és expresszálhatjuk. A találmány szerinti antitestek, monoklonális és poliklonális antitestek további felhasználási területét jelentheti, hogy reagensekként alkalmazhatók immunvizsgálatokban, amilyen például a RIA, az ELISA stb.
Egy másik megoldás értelmében a receptort, illetve izolált szabad vagy szilárd hordozókon rögzített receptorokat tartalma- 16 zó sejtmembrán-frakciókat felhasználhatjuk a tesztelendő ligand kötésének mérésére. Amennyiben rekombináns sejteket használunk a receptor expresszálásához, előnyösen olyan sejteket alkalmazunk, amelyek csak kis endogén receptor aktivitással rendelkeznek vagy amelyeknek nincs endogén receptor aktivitásuk, és így a kötés (ha van) az adott expresszált receptor jelenlétének a következménye. Az előnyös sejtek körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: humán embrionális vesesejtek, majom vesesejtek (HEK-293 sejtek), fibroblaszt (COS) sejtek, kínai hörcsög petefészek (CHO) sejtek, Drosophila vagy rágcsáló L-sejtek. Gazdasejtként előnyösen alkalmazhatók az olyan sejtek is, amelyekben egy receptor érzékeny második messenger rendszer működik. A jól ismert második messenger rendszerek körébe tartoznak — egyebek mellett — például a következők: a foszfo-inozitid hidrolízis növekedése vagy csökkenése; adenilát-cikláz; guanilát-cikláz; vagy az extracelluláris receptor doménekhez történő ligandkötésre adott válaszreakcióban fellépő ioncsatorna aktivitás. Egy további megoldás értelmében specifikusan tervezett indikátor- vagy receptorkötés alakítható ki. Például fúziós proteint hozhatunk létre oly módon, hogy a találmány szerinti receptort egy, a receptor ligand kötésre érzékeny protein doménnel fúzionáljuk. Egy ilyen dómén, amelyet a jelen leírásban mint indikátor domént is hivatkozunk, önmagában vagy más kiegészítő molekulákkal társítva alkalmas olyan, analitikailag detektálható szignál létrehozására, amely jellemző a receptor ligand kötésre.
Alternatív módon transzfektált vagy transzformált sejtek- 17 bői származó sejtmembrán preparátumokat is alkalmazhatunk.
Ilyen esetben egy analitikailag detektálható ligand kötését mérjük. A találmány szerinti megoldás során radioizotóppal jelzett és radioizotóppal nem jelzett ligandok alkalmazását egyaránt figyelmbe vesszük. A ligandok azonosítására alkalmas, a fentiekben említett módszerek mindegyike felhasználható gyógyszerhatóanyagok szkrínelésére és magában a gyógyszerfejlesztés folyamatában is.
A találmány negyedik tárgyát a fentiekben ismertetett szkrínelési eljárással azonosított új vegyületek [amelyeket a továbbiakban (X) általános képletű vegyületekként hivatkozunk] és ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói, hidrátjai vagy szolvátjai képezik.
A vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sóit, hidrátjait és szolvátjait szokásos módon állíthatjuk elő.
A találmány magában foglalja egy (X) általános képletű vegyületnek vagy gyógyszerészetileg elfogadható sójának, hidrátjának vagy szolvátjának terápiás hatóanyagként történő felhasználását is.
A találmány magában foglal továbbá egy eljárást rendellenességek kezelésére és/vagy megelőzésére, amelynek során egy arra rászoruló betegnek beadjuk egy (X) általános képletű vegyületnek vagy gyógyszerészetileg elfogadható sójának, hidrátjának vagy szolvátjának hatásos és/vagy profilaktikus mennyiségét .
A találmány magában foglalja továbbá egy (X) általános képletű vegyületnek a felhasználását egy anxietas, mánia, dep- 18 resszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neurális sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebrális ischaemia kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
A találmány tárgyát képezi egy anxietas, mánia, depreszszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neurális sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebrális ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény is, amely egy (X) általános képletű vegyületet egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval összekeverve tartalmaz.
A szkrínelési eljárással azonosított új vegyületeket a szerves kémia területén jól ismert módszerek alkalmazásával állíthatjuk elő.
A találmány ötödik tárgyát egy, az új receptorhoz kötődő monoklonális vagy poliklonális antitest képezi.
Az ilyen monoklonális vagy poliklonális antitesteket szokásos módszerekkel ismerhetjük fel, illetve állíthatjuk elő.
A találmány magában foglalja egy, az új receptorhoz kötődő
- 19 monoklonális vagy poliklonális antitestnek terápiás hatóanyagként történő felhasználását is.
A találmány magában foglalja egy, az új receptorhoz kötődő monoklonális vagy poliklonális antitest felhasználását egy anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
A találmány magában foglal egy eljárást anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére, amelynek során egy arra rászoruló betegnek beadjuk egy, az új receptorhoz kötődő monoklonális vagy poliklonális antitest hatásos vagy profilaktikus mennyiségét.
A találmány tárgyát képezi egy anxietas, mánia, depreszszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiaze- 20 pineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény is, amely egy monoklonális vagy poliklonális antitestet egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval összekeverve tartalmaz.
A jelen találmány hatodik tárgyát olyan, radioaktív izotóppal jelzett vegyületek képezik, amelyek hozzákötődnek az új receptorhoz. Az ilyen radioaktív izotóppal jelzett vegyületeket szokásos módszerek alkalmazásával állíthatjuk elő. Az ilyen típusú vegyületek néhány egyedi képviselőjét a példákban mutatjuk be. A találmány magában foglalja ezeknek a receptorhoz kötődő, radioizoppal jelzett vegyületeknek az új receptorban történő változások vagy rendellenességek detektálására szolgáló diagnosztikumokként történő felhasználását is. Ezek a változások jelen lehetnek a fentiekben említett, a receptornál történő kötéssel együttjáró rendellenességekben is. Az ilyen radioizotóppal jelzett vegyületek kutatási eszközökként is felhasználhatók az új receptor tulajdonságainak vizsgálatára. A radioizotóppal jelzett vegyületek előnyös képviselői közé tartoznak a 2-5.
példában ismertetettek.
Az alábbi példák a találmány részletesebb bemutatására szolgálnak.
- 21 1. példa
Kifejlett hím Wistar patkányokat leöltünk, majd az agyakat kimetszéssel eltávolítottuk. A teljes előagy szövetet kimetszettük, majd puffereit vizes közegben homogenizáltuk. A homogenizált szövetet centrifugálással mostuk és ugyanabban a pufferben szuszpendáltuk. A centrifugálás után szuszpendált szövetet frissen felhasználtuk, illetve a felhasználást megelőzően lefagyasztva akár 3 hónapon át vagy még hosszabb ideig tároltuk.
A fentiek szerint preparált szövet egy részét 1-10 mg protein/ml koncentráció mellett összekevertük egy puffereit közegben (50 nM HEPES, pH 7,4) oldott [3H]-A. vegyület részleteivel.
A keverékben a [ H]-A. vegyület végső koncentrációja 20-50 nM közötti értékű volt. A keveréket egy órán keresztül szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ezt követően a szövethez kötött [3H]-A. vegyületet szűréssel elválasztottuk a nemkötött [ H]-A. vegyülettől. A szűrést Whatman üvegrostszűrőkön (GF/B vagy GF/C) végeztük. A szűrőket jéghideg, puffereit közeggel (50 mM HEPES, pH 7,4) gyorsan mostuk. A szűrőkön maradt, a szövethez kötött radioaktivitás mennyiségét úgy mértük, hogy a szűrőkhöz folyadékszcintillációs koktélt adtunk, majd egy folyadékszcintillációs számlálóban számlálást végeztünk.
A [ H]-A. vegyület specifikusan kötött (azaz a specifikusan az új helyen kötött) mennyiségének a meghatározásához párhuzamos vizsgálatokat végeztünk, amelyekben a [ H]-A. vegyületet és a szövetet egy olyan nemjelzett vegyület nagy (1-10 μΜ) koncentrációjának jelenlétében inkubáltuk, amely nemjelzett
- 22 vegyület szintén kötődik az új helyhez; az utóbbi vegyület nagy koncentrációja megakadályozza, hogy a [ H]-A. vegyület hozzákötődjön ehhez a helyhez. Erre a célra nemjelzett A. vegyületet alkalmaztunk, de más olyan vegyületek is felhasználhatók, ame3 lyek hozzakötodnek az uj helyhez. A [ H]-A. vegyület kötésének a nemjelzett vegyület jelenlétében megmaradó mennyiségét nemspecifikus kötés”-ként definiáltuk. Ezt a mennyiséget kivontuk a [ H]-A. vegyület kötésének teljes mennyiségéből (azaz a nemjelzett vegyület nélkül nyert értékből), és így megkaptuk az új helyhez specifikusan kötött [ H]-A. vegyület mennyiségét.
Az uj kötőhely szövetbeli sűrűségének és a [ H]-A. vegyület iránti affinitásának értékeléséhez a szövetet a [ H]-A. vegyület különböző koncentrációival inkubáltuk. A fentiekben definiált specifikus kötésnek a [ H]-A. vegyület különböző koncentrációinál nyert értékeit használtuk az új helyen a [3H]-A. vegyület disszociációs állandójának (Kd), illetve az új hely szövetbeli sűrűségének (Bmax) kiszámításához.
Eredmények
Patkány előagy szövet esetén az A. vegyületre számított értékek a következők: Kd = 40 nM; és Bmax = 220 pmol/g protein.
Az előbbiekben ismertetett eljáráshoz hasonló módon jártunk el a B. vegyület esetén is, azzal az eltéréssel, hogy a B.
vegyületet körülbelül tízszer kisebb koncentrációban alkalmaztuk, mint az A. vegyületet.
Patkány előagy szövet esetén a B. vegyületre számított értékek a következők: Kd = 2 nM; és Bmax = 220 pmol/g protein.
- 23 2. példa
A [ karboxi 1-14C] -A. vegyület szintézise és a [karboxil- C]-A. vegyület
1. [ Karboxi I-14C]-4-fluor-benzoesav
100 mCi (60 mCi/mmol) kálium-[ 14C]cianid vízmentes N, W-dimetil-formamiddal készített, kevertetett szuszpenziójához hozzáadtunk 158 mg (0,83 mmol) réz (I)-jodidot és 433 mg (1,95 mmol) 4-fluor-jód-benzolt. A keveréket nitrogénatmoszféra alatt órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk. Az oldatot 2 ml 5 M vizes nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával meglúgosítottuk, majd 20 ml vízzel meghígítottuk. Az így nyert keveréket dietil-éterrel igen alaposan extraháltuk, a dietil-éteres oldatokat egyesítettük, előbb kétszer 30 ml telített, vizes nátrium-klorid-oldattal, majd háromszor 30 ml vízzel mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és a dietil-étert kidesztilláltuk. A maradékot feloldottuk 15 ml etanolban, az oldathoz hozzáadtuk 1,34 g kálium-hidroxid 8 ml vízzel készített oldatát, majd az így nyert oldatot 15 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk. A lehűtött reakciókeveréket meghígítottuk 20 ml vízzel, 1 M sósavoldat hozzáadásával a pH-t 1-2 közötti értékre állítottuk be, majd a keveréket etil-acetáttal igen alaposan extraháltuk. Az etil-acetátos oldatokat egyesítettük, 50 ml vízzel egyszer mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük, majd szárazra pároltuk. Ennek eredményeként 196 mg (1,38 mmol, 68,4 mCi) mennyiségben (68,4 %-os kitermeléssel) nyertük a [karboxil-14C]-4-fluor-benzoesavat.
- 24 2. [Karboxi C] -A. vegyület
196 mg (1,38 mmol, 68,4 mCi) [karboxil-^C]-4-fluor-benzoesavat, 191,4 mg (1,42 mmol) 1-hidroxi-benzotriazol—hidrátot és 265 mg (1,38 mmol) 1-[3-(dimetil-amino)-propil)-3-etil-karbodiimid—hidrokloridot feloldottunk 6 ml vízmentes metilén-dikloridban. Az így nyert oldathoz hozzáadtuk 258 mg (1,38 mmol) (3R, 4S) -4-amino-3, 4-dihidro-2,2-dimetil-2J7-benzo [b]pirán3-ol 95 tömeg%-os metanolos oldatának és 0,190 ml trietil-aminnak 2,0 ml metilén-dikloriddal készített oldatát. A keveréket környezeti hőmérsékleten 19,5 órán keresztül kevertettük, majd az oldószert vákuum alatt eltávolítottuk. A maradékot feloldottuk 25 ml etil-acetátban, az oldatot sorrendben kétszer 25 ml híg sósavoldattal, 25 ml vízzel, 25 ml telített, vizes nátrium-hidrogén- karbonát-oldattal, majd 25 ml vízzel mostuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és szárazra pároltuk. A nyers [karboxil-14C] -A. vegyületet 40 g szilikagélen oszlopkromatografálva tisztítottuk, amelynek során eluensként a nempoláris szennyezőanyagok eltávolításához 1:3 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet, majd a [karboxi 1-1½] -A. vegyület elúciójához tiszta etil-acetátot alkalmaztunk. Ennek eredményeként 179,7 mg (0,50 mmol) mennyiségben nyertük a [karboxil-14C]-A. vegyületet. Az anyag 130 mg-os részletét félpreparatív HPLC útján tovább tisztítottuk, amelynek során 22,5x250 mm-es Spherisorb 5W kolonnát és eluensként 10 ml/perc áramlási sebességgel 95:5 térfogatarányú kloroform/metanol oldószerelegyet alkalmaztunk. Ennek eredményeként 107 mg mennyiségben nyertük a [karboxil-14C]-A. vegyületet. Ezt a részt víz felett
- 25 5 órán át hagytuk ekvilibrálódni, majd vákuum alatt igen alaposan szárítottuk. A termék 99,7 %-os radiokémiái tisztasággal, 99 %-nál nagyobb optikai tisztasággal, 95,5 %-os kémiai tisztasággal és 59,6 Ci/mmol fajlagos aktivitással rendelkezett. Az 1H-NMR spektrum megfelelt a várt szerkezetnek, illetve megegyezett a WO 92/22293. számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés szerinti eljárással előállított nemjelzett A. vegyület megfelelő spektrumával. Az analitikai rendszereket az alábbiakban részletezzük.
1. REAKCIÓVÁZLAT
A [karboxil-^C] -A. vegyület szintézise
*: a radioizotópos 14C] jelzés helyét mutatja
- 26 3. példa
A (3S,4S)-6-acetil-3,4-dihidro-2,2-dimetil-4-[{(3-klór-4-fluor-fenil) - [14C]karbonil}-amino] -2H-benzo[b]pirán-3-ol
A [karboxil- C]-szintézise 14
4-Fluor-3-klór-benzo[ C]nitril
472,8 mg (1,84 mmol) 4-fluor-3-klór-jód-benzolt, 108,8 mg (1,67 mmol, 100 mCi) 60 mCi/mmol fajlagos aktivitású kálium-[ 14C]cianidot és 173,9 mg (0,91 mmol) réz(I)-jodidot 4,5 ml N-metil-pirrolidinonban szuszpendáltunk.
Ezt követően a keveréket nitrogénatmoszféra alatt, keverés közben 150 °C hőmérsékletre melegítettük, 19,25 órán keresztül ezen a hőmérsékleten kevertettük, majd szobahőmérsékleten 49 órán keresztül állni hagytuk. A szilikagélen, 1:5 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegy alkalmazásával végzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat azt mutatta, hogy a reakció körülbelül 73 %-os konverziót ért el. Ezt követően a reakciókeveréket megosztottuk 100 ml víz és 100 ml etil-acetát között. A szerves fázist egymást követően 100 ml 2 vegyes %-os vozes vasiul) -klorid-oldattal, 100 ml vízzel és 100 ml telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, a szárítószer eltávolítása érdekében szűrtük, majd a szűrletet csökkentett nyomás alatt szárazra pároltuk. A maradékot szilikagélen (Merck Art. 9385) oszlopkromatografáltuk, amelynek során eluensként 1:8 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. A megfelelő frakciókat egyesítettük, és így egy 72,7 mCi aktivitású 4-fluor-3-klór-benzo[14C]nitril-oldatot nyertünk, ami 1,21 mmol,
- 27 azaz 188 mg 4-fluor-3-klór-benzo [ 14C]nitrilnek (72,7 %-os kitermelésnek) felelt meg.
4-Fluor-3-klór-benzo[14C]karbonsav mCi aktivitású (60 mCi/mmol fajlagos aktivitás; 0,6 mmol; 94,5 mg) 4-fluor-3-klór-benzo [ 14C] nitril-oldatot (85 ml 1:8 térfogatarányú etil-acetát/hexán) csökkentett nyomás alatt szárazra pároltunk. A maradékot 8,0 ml tömény sósavban szuszpendáltuk, majd a szuszpenziót keverés közben, nitrogénatmoszféra alatt 6 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraltuk.
A szublimált anyagnak a reakciókeverékbe történő visszamosása érdekében körülbelül egyórás időközönként a lombikot alaposan megmozgattuk. Ezt követően a reakciókeveréket hagytuk szobahőmérsékletre hűlni, majd egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. A reakciókeveréket megosztottuk 30 ml víz és 40 ml etil-acetát között. A vizes réteget 40 ml etil-acetáttal ismételten extraháltuk. A szerves oldatokat egyesítettük, majd 40 ml 2 M vizes nátrium-hidroxid-oldattal extraháltuk. A nátrium-hidroxidos vizes oldatokat egyesítettük, majd tömény sósav óvatos hozzáadásával pH 1 értékig megsavanyítottuk. A vizes oldatot ezt követően kétszer 80 ml etil-acetáttal extraháltuk, a szerves oldatokat egyesítettük, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk és a szárítószer eltávolítása érdekében szűrtük. A szárítószert kis részletekben összesen 50 ml etil-acetáttal mostuk, majd a mosófolyadékokat hozzáadtuk a szűrlethez. Ezt követően az oldószert csökkentett nyomás alatt eltávolítva szilárd anyag formájában és 75 mg (0,43 mmol) mennyiségben
- 28 (71,7 %-os kitermeléssel) nyertük a 4-fluor-3-klór-benzo[14C] karbonsavat.
A (3S,4S) -6-acetil-3,4-dihidro-2,2-dimeti1-4-[{(3-klór-4-fluor-fenil)-[ C]karbonil}-amino]-2H-benzo[b]pirán-3-ol szintézise mg (0,43 mmol) 4-fluor-3-klór-benzo [14C]karbonsavat feloldottunk 2,5 ml N, N-dimeti1-formamidban. Az oldathoz hozzáadtunk 82,6 mg (0,61 mmol; 1,42 ekvivalens) vákuum alatt 24 órán keresztül szobahőmérsékleten szárított hidroxi-benzotriazolt ás 113,8 mg (0,59 mmol; 1,37 ekvivalens) vákuum alatt 24 órán keresztül szobahőmérsékleten szárított 1-[3-(dimetil-amino) -propil)-3-etil-karbodiimid—hidrokloridot, majd a reakciókeveréket 30 percen keresztül szobahőmérsékleten kevertettük. Ezt követően hozzáadtuk 150 mg (1,64 mmol; 1,49 ekvivalens) (3S, 4Sj -6-acetil-3,4-dihidro-2,2-dimetil-4-amino-2H-benzo[b]pirán-3-ol 2,5 ml N, N-dimetil-formamiddal készített oldatát, majd a reakciókeveréket egy éjszakán át szobahőmérsékleten kevertettük. Ezt követően a keveréket megosztottuk 50 ml víz és 100 ml etil-acetát között. A vizes fázist 80 ml etil-acetáttal ismételten extraháltuk. A szerves oldatokat egyesítettük, 50 ml vízzel mostuk, vízmentes magnézium-szülfát felett szárítottuk, majd a szárítószer eltévolítása érdekében szűrtük. A szűrőn lévő szárítóanyagot 50 ml etil-acetáttal mostuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítettük, majd csökkentett nyomás alatt szárazra pároltuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatografáltuk, amelynek során eluensként 1:1 térfogatarányú etil-acetát/hexán oldószerelegyet alkalmaztunk. A megfelelő frakciókat
- 29 egyesítettük és csökkentett nyomás alatt szárazra pároltuk. A maradékként kapott habszerű anyagot aceton/hexán oldószerelegyből kristályosítottuk, majd az így nyert fehér, szilárd anyagot vákuum alatt szárítottuk. Ennek eredményeként 123,5 mg (0,31 mmol) mennyiségben (72 %-os kitermeléssel) nyertük a (3S, 4S)-6-acetil-3,4-dihidro-2,2-dimetil-4-[{(3-klór-4-fluor-fenil)- [14C]karbonil}-amino]-2H-benzo[b]pirán-3-olt. A termék 98,7 %os radiokémiái tisztasággal, 99,4 %-os kémiai tisztasággal,
99,9 %-os királis tisztasággal és 59,4 mCi/mmol fajlagos akti1 vitással rendelkezett. Az H-NMR spektrum megfelelt a várt szerkezetnek, illetve megegyezett a fentiekben hivatkozott szabadalmi dokumentumokban ismertetett eljárással előállított nemjelzett vegyület megfelelő spektrumával.
4. példa [125I]-B. vegyület
A nemjelzett B. vegyület bisz(tributil-ón)-nal végzett palládium(II)-katalizált kapcsolása a tributil-sztannán-származékot eredményezte. A 125-jódizotóppal jelzett célvegyületet, 125 azaz a [ I]-B. vegyületet ezt követően úgy nyertük, hogy a tributil-sztannán-származék 100 μg-os részletét 3 % ecetsavat tartalmazó etanolban 1,0-2,0 μg Chloramine T {N-klór-p-toluolszulfonamid-nátrium-só [C^Cg^SC^N (Cl) Na] } mint oxidálószer jelenlétében 5,0 mCi nátrium-[ I]jodiddal radiojód-sztanni125 leztük. Az eljárás 3,4-3,9 mCi [ I]-B. vegyületet eredményezett, ami 68-78 %-os radiokémiái hozamnak felelt meg. A terméket 4,6 mm-es belső átmérőjű és 25 cm-es hosszúságú Baker szi- 30 likagél-kolonnán HPLC útján tisztítottuk, amelynek során eluensként 1,0 ml/perc áramlási sebességű 98:2 térfogatarányú hexán/izopropil-alkohol oldószerelegyet alkalmaztunk; az UV detektálást 230 nm hullámhosszon végeztük. A HPLC tisztítás után. a termék legalább 99 %-os radiokémiái tisztasággal rendelkezett. A tömegmérésekből és a radioaktivitási koncentrációkból meghatározott fajlagos aktivitás 1775-1800 Ci/mmol értékűnek bizonyult.
5. példa [ 3H]-A. vegyület
1,0-1,2 mg (1,9-2,4 μπιοί) D. vegyületet feloldottunk 1,0 ml 9:1 térfogatarányú N, N-dimetil-formamid (Baker)/trietil-amin (Aldrich) elegyben. Az oldathoz hozzáadtunk 1,01,2 mg (100 tó- 31 meg%) 10 %-os palládium/szén katalizátort (Aldrich). A reakciókeveréket 3,6-4,9 Ci trícium-atmoszférában 16-17 órán keresztül környezeti hőmérsékleten kevertettük.
A reakciókeveréket háromszor 2 ml metanol hozzáadása után vákuum alá helyezve eltávolítottuk az illékony komponenseket. 108-146 mCi nyers termék maradt vissza. A radio-HPLC analízis azt mutatta, hogy az anyag 61-66 % [ H]-A. vegyületet tartalmazott. Az anyagot 4-5 injektálással, fordított (reverz) fázisú
HPLC útján tisztítottuk, amelynek során 4,6x250 mm-es Beckman Octyl kolonnát és eiuensként 1 ml/perc áramlási sebességgel 40:60:0,1 térfogatarányú acetonitril/víz/trifluor-ecetsav elegyet alkalmaztunk; az UV detektálást 220-240 nm hullámhosszon végeztük. A terméknek megfelelő eluátumot liofilizáltuk, majd feloldottuk etanolban, és így 24-25 mCi [ H]-A. vegyületet nyertünk. Az analízis szerint a termék fajlagos aktivitása 21,5-29 Ci/mmol (kémiai ionizációs tömegspektrometria útján meghatározott izotópgyakoriság; NH3 reagensgáz), radiokémiái tisztasága pedig legalább 99 % volt (kolonna: Ultrasphere ODS 5 μπι, 4, 6x250 mm; eluens: 34:66:0, 1 —> 90:10:0,1 térfogatarányú acetonitril/víz/trifluor-ecetsav lineáris gradiens 10 perc alatt; áramlási sebesség: 1,0 ml/perc; UV detektálás: 230 nm;
radioaktivitás-detektálás: in-line radioaktivitás áramlási szcintillációs monitor).
6. példa
C. vegyület
A [125I] fotoaffinitás jelzett 6-acetil-3,4-dihidro-2,2-dimetil-8- [125I] jód-4S- [ {3- [3- (trifluor-metil) -3Jí-diazirin-3-il]-benzoil}-amino]-2H-benzo[b]pirán-3A-olt a 8-tributil125 sztannan standard körülmények között {Na-[ I]I (hordozó nélkül ) /Cloramin-T } végzett saját szubsztitúciója útján történő radioizotóp-bevezetéssel állítottuk elő. A nyers 6-acetil-3,4-dihidro-2,2-dimetil-8- [ 125I]jód-4S-[{3-[3-(trifluor-metil)-3H-diazirin-3-il] -benzoil}-amino] -2íf-benzo [b]pirán-3A-olt
- 33 1 ? R {[ I]SB-224172} HPLC útján tisztítottuk, amelynek során Novapak C18 kolonnát és eluensként 0,1 % trifluor-ecetsavat tartalmazó 1:1 térfogatarányú víz/acetonitril oldószerelegyet alkalmaztunk. A sztannánt úgy állítottuk elő, hogy 6-acetil-3,4-dihidro-2,2-dimetil-8-jód-45-amino-2H-benzo[b]pirán-3E-olt bisz(tributil-ón)-nal és dibróm-palládium-bisz(trifenil-foszfin)nal reagáltattunk, majd 3-[3-(trifluor-metil)-3H-diazirin-3-il]-benzoesavval kondenzációs reakciót hajtottunk végre.
Folyamatábra
SröUj
7. példa
a) 3-(1,1-Diazirino-2,2,2-trifluor-etil)-benzoesav
2,7 g 3-(1,l-diazirino-2,2,2-trifluor-etil)-benzil-alkohol [M. Ceruso and G. D. Prestwich, Bioorg. and Med. Chem. Letts ., 4,
2179-2184 (1994)] 10 ml dioxánnal és 63 ml 0,2 M vizes kálium-hidroxid-oldattal készített oldatához keverés közben részletekben, 2,5 óra alatt hozzáadtunk 2,45 g kálium-permanganátot.
A mangán(IV)-oxid feleslegének eltávolítása érdekében a keveréket celitrétegen szűrtük keresztül, majd a szűrletet dietil-éterrel extraháltuk. A vizes fázist 25 ml 1 M kénsavoldattal megsavanyítottuk, majd dietil-éterrel extraháltuk. A szerves
- 34 fázist vízzel, majd telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítottuk és szűrtük, majd a szűrletet vákuum alatt betöményítettük. Ennek eredményeként világossárga, szilárd anyag formájában és 2,45 g mennyiségben nyertük a kívánt vegyületet.
b) transz-6-Acetil-4S-{[3-(1,l-diazirino-2,2,2-trifluor-etil)-benzoil]-amino}-3,4-dihidro-2,2-dimetil-8-jód-2H-l-benzo[b]pirán-3R-ol (C. vegyület)
0,124 g 3-(1, l-diazirino-2,2,2-trifluor-etil)-benzoesav 2 ml vízmentes Ν,Ν-dimetil-formamid oldatához hozzáadtunk 0,095 g etil-[(dimetil-amino)-propil]-karbodiimid—hidrokloridot és
0,067 g 1-hidroxi-benzotriazolt. Az oldatot 10 percen keresztül szobahőmérsékleten kevertettük, majd az oldathoz hozzáadtunk 0,015 g transz-6-acetil-4A-amino-3,4-dihidro-2,2-dimetil-8-jód-2N-l-benzopirán-3S-olt (PCT/EP95/02249. számú nemzetközi szabadalmi bejelentés). Ezt követően a reakciókeveréket 3 órán keresztül kevertettük, majd vízre öntöttük. Az így nyert keveréket etil-acetáttal extraháltuk. A szerves fázist egymást követően híg sósavoldattal, vízzel, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítottuk, szűrtük és vákuum alatt betöményítettük. A maradékként kapott 0,37 g szilárd anyagot etil-acetát/hexán oldószerelegyből átkristályosítva kristályos anyag formájában nyertük a címvegyületet.
Olvadáspont: 109-100 ’C.
[a]25 +55,3° (c = 1,1; metanol).
Claims (21)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Lényegében tiszta formában lévő, patkány előagy szövetből nyerhető receptor, azzal jellemezve, hogya) az A. vegyület 40 nM-os Kd értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;b) az A. vegyület 220 pmol/g protein Bmax értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;c) a B. vegyület 2 nM-os Kd értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;d) a B. vegyület 220 pmol/g protein Bmax értékkel kötődik a receptorhoz patkány előagy szövet esetén;és olyan, más forrásokból nyerhető homológ receptorok, amelyek a patkány előagy szövetből nyert receptorral legalább 85 %-os homológiát mutatnak.
- 2. Az 1. igénypont szerinti receptornak egy oldható formája.
- 3. Egy 1. igénypont szerinti receptor, azzal jellemezve, hogy SDS-PAGE gélelektroforézissel végzett analízis alapján a receptor molekulatömege a 130 kilodaltonos régióban van.
- 4. A 2. igénypont szerinti oldható formában lévő receptor terápiás hatóanyagként történő felhasználása.
- 5. A 2. igénypont szerinti oldható formában lévő receptor felhasználása egy anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a niko• · · ·- 36 tinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 6. Eljárás anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére, azzal jellemezve, hogy egy arra rászoruló betegnek beadjuk a 2. igénypont szerinti oldható receptor hatásos vagy profilaktikus mennyiségét.
- 7. Gyógyszerkészítmény anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neuralis sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésében és/vagy megelőzésében történő felhasználásra, azzal jellemezve, hogy gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal összekeverve a 2. igénypont szerinti oldható receptort tartalmazza.• · • «4« » ** · · • · · « · · ···· ·· ··*· · ·*··- 37
- 8. Eljárás az 1. igénypont szerinti receptorhoz kötődéssel kapcsolatos terápiás aktivitással rendelkező vegyületek kiválasztására — szkrínelésére —, azzal jellemezve, hogy egy tesztvegyületet egy olyan szubsztráttal érintkeztetünk, amelyben jelen van az új receptor, majd mérjük a kötődés mértékét .
- 9. Radioizotóppal jelzett vegyületek, amelyek kötődnek az 1. igénypont szerinti receptorhoz és amelyek a 8. igénypont szerinti kiválasztási — szkrínelési — eljárás alkalmazásával helyettesíthetők.
- 10. Egy, a 8. igénypont szerinti kiválasztási — szkrínelési — eljárással azonosított új vegyület és ennek gyógyszerészetileg elfogadható sói, hidrátjai vagy szolvátjai.
- 11. Egy 10. igénypont szerinti vegyületnek vagy gyógyszerészetileg elfogadható sójának, hidrátjának vagy szolvátjának terápiás hatóanyagként történő felhasználása.
- 12. Eljárás rendellenességek kezelésére és/vagy megelőzésére, azzal jellemezve, hogy egy arra rászoruló betegnek beadjuk egy 10. igénypont szerinti vegyületnek vagy gyógyszerészetileg elfogadható sójának, hidrátjának vagy szolvátjának hatásos és/vagy profilaktikus mennyiségét.
- 13. Egy 10. igénypont szerinti vegyület felhasználása egy anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neurális sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető • «- 38 rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 14. Gyógyszerkészítmény anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neurális sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésében és/vagy megelőzésében történő felhasználásra, azzal jellemezve, hogy gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal összekeverve egy 10. igénypont szerinti vegyületet tartalmaz.
- 15. Egy monoklonális vagy poliklonális antitest, amely kötődik az 1. igénypont szerinti receptorhoz.
- 16. Egy 15. igénypont szerinti, az új receptorhoz kötődő monoklonális vagy poliklonális antitest terápiás hatóanyagként történő felhasználása.
- 17. Egy 15. igénypont szerinti monoklonális vagy poliklonális antitest felhasználása egy anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neurális sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cereb- 39 ·· R·· *· < » ν·»**· w · - J « · » · • · · · · » «»·* ·· ··»· · «*·· ralis ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
- 18. Eljárás anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neurális sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebrális ischaemia kezelésére és/vagy megelőzésére, azzal jellemezve, hogy egy arra rászoruló betegnek beadjuk egy 15. igénypont szerinti monoklonális vagy poliklonális antitest hatásos vagy profilaktikus mennyiségét.
- 19. Gyógyszerkészítmény anxietas, mánia, depresszió, subarachnoidealis vérzéssel vagy neurális sokkal együttjáró rendellenességek, a szenvedélybetegségek anyagainak, például a kokainnak, a nikotinnak, az alkoholnak és a benzodiazepineknek a megvonásával együttjáró hatások, antikonvulzív hatóanyagokkal kezelhető és/vagy megelőzhető rendellenességek, például epilepszia, továbbá Parkinson-kór, pszichózis, migrén és/vagy cerebralis ischaemia kezelésében és/vagy megelőzésében történő felhasználásra, azzal jellemezve, hogy gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal összekeverve egy 15. igénypont szerinti monoklonális vagy poliklonális antitestet tartalmaz.
- 20. Egy radioizotóppal jelzett vegyület, amely kötődik az 1. igénypont szerinti új receptorhoz.
- 21. A 20. igénypont szerinti, az új receptorhoz kötődő ve- 40 • / ·» • * ‘ ·* · « · ·· ···· gyületeknek az 1. igénypont szerinti új receptorban fellépő változások vagy rendellenességek detektálására szolgáló diagnosztikumokként történő felhasználása.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9425502.3A GB9425502D0 (en) | 1994-12-17 | 1994-12-17 | Novel receptor |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT77077A true HUT77077A (hu) | 1998-03-02 |
Family
ID=10766105
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9702146A HUT77077A (hu) | 1994-12-17 | 1995-12-11 | Új receptor |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5985334A (hu) |
| EP (1) | EP0807122A1 (hu) |
| JP (1) | JPH10511083A (hu) |
| CN (1) | CN1175262A (hu) |
| AU (1) | AU710150B2 (hu) |
| BR (1) | BR9510060A (hu) |
| CA (1) | CA2207921A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ187697A3 (hu) |
| FI (1) | FI972558A (hu) |
| GB (1) | GB9425502D0 (hu) |
| HU (1) | HUT77077A (hu) |
| NO (1) | NO972771L (hu) |
| NZ (1) | NZ298059A (hu) |
| PL (1) | PL320747A1 (hu) |
| WO (1) | WO1996018650A1 (hu) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6245893B1 (en) * | 1994-12-17 | 2001-06-12 | Smithkline Beecham P.L.C. | Receptor that binds anti-convulsant compounds |
| WO2021179064A1 (en) * | 2020-03-10 | 2021-09-16 | Epic Ventures Inc. | Light-activated pathogen-killing molecules and uses thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9112721D0 (en) * | 1991-06-13 | 1991-07-31 | Smithkline Beecham Plc | Novel treatment |
| GB9225860D0 (en) * | 1992-12-11 | 1993-02-03 | Smithkline Beecham Plc | Novel treatment |
| EP0665887B1 (en) * | 1993-08-20 | 1998-10-14 | Smithkline Beecham Plc | Human 5-ht 2? receptor |
-
1994
- 1994-12-17 GB GBGB9425502.3A patent/GB9425502D0/en active Pending
-
1995
- 1995-12-11 NZ NZ298059A patent/NZ298059A/xx unknown
- 1995-12-11 JP JP8518283A patent/JPH10511083A/ja active Pending
- 1995-12-11 US US08/849,860 patent/US5985334A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-12-11 PL PL95320747A patent/PL320747A1/xx unknown
- 1995-12-11 AU AU43458/96A patent/AU710150B2/en not_active Ceased
- 1995-12-11 HU HU9702146A patent/HUT77077A/hu unknown
- 1995-12-11 EP EP95942175A patent/EP0807122A1/en not_active Withdrawn
- 1995-12-11 CA CA002207921A patent/CA2207921A1/en not_active Abandoned
- 1995-12-11 CZ CZ971876A patent/CZ187697A3/cs unknown
- 1995-12-11 CN CN95197647A patent/CN1175262A/zh active Pending
- 1995-12-11 BR BR9510060A patent/BR9510060A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-12-11 WO PCT/EP1995/004998 patent/WO1996018650A1/en not_active Application Discontinuation
-
1997
- 1997-06-16 NO NO972771A patent/NO972771L/no not_active Application Discontinuation
- 1997-06-16 FI FI972558A patent/FI972558A/fi unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5985334A (en) | 1999-11-16 |
| AU710150B2 (en) | 1999-09-16 |
| WO1996018650A1 (en) | 1996-06-20 |
| PL320747A1 (en) | 1997-10-27 |
| CA2207921A1 (en) | 1996-06-20 |
| FI972558A0 (fi) | 1997-06-16 |
| AU4345896A (en) | 1996-07-03 |
| CN1175262A (zh) | 1998-03-04 |
| NO972771L (no) | 1997-08-15 |
| BR9510060A (pt) | 1998-06-02 |
| NO972771D0 (no) | 1997-06-16 |
| GB9425502D0 (en) | 1995-02-15 |
| JPH10511083A (ja) | 1998-10-27 |
| EP0807122A1 (en) | 1997-11-19 |
| NZ298059A (en) | 2000-03-27 |
| FI972558A (fi) | 1997-06-16 |
| MX9704560A (es) | 1997-10-31 |
| CZ187697A3 (en) | 1997-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2017264980B2 (en) | Haptens of quetiapine for use in immunoassays | |
| US5879657A (en) | Radiolabeled platelet GPIIb/IIIa receptor antagonists as imaging agents for the diagnosis of thromboembolic disorders | |
| JP4590417B2 (ja) | Ｎｐｃ１ｌ１（ｎｐｃ３）およびこのリガンドの同定方法 | |
| CA2393002A1 (en) | Nucleic acids, proteins, and antibodies | |
| US6737038B1 (en) | Use of small molecule radioligands to discover inhibitors of amyloid-beta peptide production and for diagnostic imaging | |
| CN112533928A (zh) | 用于诊断的新化合物 | |
| US20040009474A1 (en) | Novel human polynucleotides and polypeptides encoded thereby | |
| US20050288241A1 (en) | Novel polypeptides and nucleic acids encoded thereby | |
| Gao et al. | Synthesis and initial in vitro characterization of a new P2X7R radioligand [18F] IUR-1602 | |
| US20020082206A1 (en) | Novel polynucleotides from atherogenic cells and polypeptides encoded thereby | |
| JP2000500658A (ja) | 新規プリン受容体 | |
| US20040009907A1 (en) | Proteins and nucleic acids encoding same | |
| HUT77077A (hu) | Új receptor | |
| JP2002507892A (ja) | ヒト・アデニル酸シクラーゼのクローニングおよび特性評価 | |
| WO2006107106A1 (ja) | 小胞アセチルコリントランスポーターに対するリガンド | |
| CA2398227A1 (en) | 17 human secreted proteins | |
| Kozaka et al. | Syntheses and in vitro evaluation of decalinvesamicol analogues as potential imaging probes for vesicular acetylcholine transporter (VAChT) | |
| US6245893B1 (en) | Receptor that binds anti-convulsant compounds | |
| Raab et al. | Synthesis of the first sulfur-35-labeled hERG radioligand | |
| US20010027248A1 (en) | Novel receptor | |
| EP1732864B1 (en) | Radiolabeled 3-[3- (benzoyl-amido) benzyloxy]aspartic acid derivative and method of producing the same | |
| JP2003527859A (ja) | 新規ポリペプチドおよびそれをコードする核酸 | |
| MXPA97004560A (en) | Noved receiver | |
| JP2002514926A (ja) | ヒト・アデニル酸シクラーゼのクローニングおよび特性評価 | |
| JP2001519156A (ja) | １０１個のヒト分泌タンパク質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |