CZ187697A3 - Novel receptor - Google Patents
Novel receptor Download PDFInfo
- Publication number
- CZ187697A3 CZ187697A3 CZ971876A CZ187697A CZ187697A3 CZ 187697 A3 CZ187697 A3 CZ 187697A3 CZ 971876 A CZ971876 A CZ 971876A CZ 187697 A CZ187697 A CZ 187697A CZ 187697 A3 CZ187697 A3 CZ 187697A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- compound
- receptor
- binds
- disorders
- receptors
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 75
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 30
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 75
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 75
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 39
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 35
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 34
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 claims description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 18
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 claims description 17
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 16
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 claims description 16
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 claims description 16
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 claims description 16
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 16
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 claims description 16
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 claims description 16
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 claims description 16
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 claims description 16
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 claims description 16
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 claims description 16
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 claims description 16
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 16
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 claims description 16
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 claims description 15
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 15
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 claims description 14
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 claims description 14
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 claims description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 11
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 5
- 239000010410 layer Substances 0.000 claims description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 claims description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000007271 Substance Withdrawal Syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 claims description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 claims 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 claims 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 claims 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims 2
- NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N manganese dioxide Chemical compound O=[Mn]=O NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NRPDUOGUSNRDQT-UHFFFAOYSA-N 3-(ethyliminomethylideneamino)propane-1,1-diamine;hydrochloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCC(N)N NRPDUOGUSNRDQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241001451794 Cerus Species 0.000 claims 1
- 125000000043 benzamido group Chemical group [H]N([*])C(=O)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 claims 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OMCXTFVBNCFZMY-PPJXEINESA-N 4-fluorophthalic acid Chemical compound [14C](=O)(O)C1=C(C(=O)O)C=CC(=C1)F OMCXTFVBNCFZMY-PPJXEINESA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 6-phosphonohexylphosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CCCCCCP(O)(O)=O WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 description 2
- -1 DNA Chemical class 0.000 description 2
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 2
- UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N Gabapentin Chemical compound OC(=O)CC1(CN)CCCCC1 UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N potassium cyanide Chemical compound [K+].N#[C-] NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 description 2
- DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N tributylstannane Chemical class CCCC[SnH](CCCC)CCCC DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- CQSLOZRJOIHHAQ-VHSXEESVSA-N (3r,4s)-4-amino-2,2-dimethyl-3,4-dihydrochromen-3-ol Chemical compound C1=CC=C2[C@H](N)[C@@H](O)C(C)(C)OC2=C1 CQSLOZRJOIHHAQ-VHSXEESVSA-N 0.000 description 1
- PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole;hydrate Chemical compound O.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXLPKTIAUMCNDX-UHFFFAOYSA-N 2h-pyran-3-ol Chemical compound OC1=CC=COC1 WXLPKTIAUMCNDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CELVQYDOLLNPMB-UHFFFAOYSA-N 3-[3-(trifluoromethyl)diazirin-3-yl]benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(C2(N=N2)C(F)(F)F)=C1 CELVQYDOLLNPMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108010078321 Guanylate Cyclase Proteins 0.000 description 1
- 102000014469 Guanylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- XLIIRNOPGJTBJD-MZDPCCPDSA-N N-[(3S,4S)-6-acetyl-3-hydroxy-2,2-dimethyl-3,4-dihydrochromen-4-yl]-3-chloro-4-fluoro(14C)benzamide Chemical compound C(C)(=O)C1=CC2=C(OC([C@H]([C@H]2N[14C](=O)C2=CC(=C(C=C2)F)Cl)O)(C)C)C=C1 XLIIRNOPGJTBJD-MZDPCCPDSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N Phenytoin Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C1(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 description 1
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000000262 chemical ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N diazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003529 diazepam Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960002767 ethosuximide Drugs 0.000 description 1
- HAPOVYFOVVWLRS-UHFFFAOYSA-N ethosuximide Chemical compound CCC1(C)CC(=O)NC1=O HAPOVYFOVVWLRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960002870 gabapentin Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229960001848 lamotrigine Drugs 0.000 description 1
- PYZRQGJRPPTADH-UHFFFAOYSA-N lamotrigine Chemical compound NC1=NC(N)=NN=C1C1=CC=CC(Cl)=C1Cl PYZRQGJRPPTADH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- NKAAEMMYHLFEFN-UHFFFAOYSA-M monosodium tartrate Chemical compound [Na+].OC(=O)C(O)C(O)C([O-])=O NKAAEMMYHLFEFN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 150000002941 palladium compounds Chemical class 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 229960002036 phenytoin Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012495 reaction gas Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- AEQFSUDEHCCHBT-UHFFFAOYSA-M sodium valproate Chemical compound [Na+].CCCC(C([O-])=O)CCC AEQFSUDEHCCHBT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- KXCAEQNNTZANTK-UHFFFAOYSA-N stannane Chemical compound [SnH4] KXCAEQNNTZANTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000080 stannane Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001768 subcellular fraction Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940102566 valproate Drugs 0.000 description 1
- PJDFLNIOAUIZSL-UHFFFAOYSA-N vigabatrin Chemical compound C=CC(N)CCC(O)=O PJDFLNIOAUIZSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005318 vigabatrin Drugs 0.000 description 1
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
- C07B59/002—Heterocyclic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
Předložený vynález se týká nového receptoru v podstatě v čisté formě, rozpustné formy receptoru a jeho použití jako terapeutického činidla, způsobu screeningu sloučenin vhodných pro léčení poruch interakcí s receptorem, nových sloučenin objevených při provedení způsobu screeningu; rekombinantního receptoru a jeho použití v takovém způsobů screeningu, přípravy monoklonálních a polyklonálních protilátek, které se vážou k receptoru; použití takových protilátek jako terapeutických činidel a metody stanovení účinnosti terapeutických činidel, která se vážou k receptoru.
Dosavadní stav techniky
WO 92/22293 (SmithKline Beecham) popisuje třídu sloučenin, které byly shledány jako behaviorální modely pro vykázání určitých CNS aktivit, zejména při léčbě a/nebo prevenci epilepsie. Příkladem takové sloučeniny popsané ve výše uvedené přihlášce je trans-(+)-6-acetyl-4S-(4fluorbenzolamino)-3,4-dihydro-2,2-dímethyl“2H-l-benzopyranl-ol (dále zde označovaný jako sloučenina A).
WO/94/13656, WO/94/I3657, WO/94/13292, WO/94/13297,
PCT/EP/95/02076, PCT/EP/95/02249 a PCT/EP/95/02246 všechny popisují jiné sloučeniny vykazující Určité CNS aktivity, zejména PCT/EP/95/02076 popisuje studenou sloučeninu z příkladu 4 v předložené přihlášce tj. sloučeninu B.
Sloučeniny popsané ve výše zmíněných patentech se nevážou k jakémukoliv ze známých receptorů a nyní byl identifikován nový receptor, ke kterému se takové sloučeniny vážou.
Podstata vynálezu
Podle toho poskytuje předložený vynález receptor v podstatě v čisté formě získatelný ze tkáně krysího předního mozku, který je charakterizován tím, že
a) sloučenina A se k němu váže s Kd 40nM pro tkáň krysího předního mozku,
b) sloučenina A se váže k němu s Bmax 220 pmol/g proteinu tkáně krysího předního mozku
c) sloučenina B se váže k němu s Kd 2 nM pro tkán krysího předního mozku
d) sloučenina B se k němu váže s Baax 220 pmol/g pro tkáň krysího předního mozku;
a homologní receptory z jiných zdrojů vykazují alespoň 85% homologiii se tkání krysího předního mozku.
Jiné známé ant ikonvul zantní sloučeniny zahrnující ·.. diazepam, fenytoin, pentobarbiton, valpro.át, karbazepin, vigabatrin, lamotrigin, ethosuximid a gabapentin, se nevážou k novému receptorů.
Navíc byl nový receptor nalezen v lidských nebo hlodavcích neuroblastomových a gliomových buněčných kulturách. Tyto mohou být použity bez přípravy nebo mohou být připraveny stejnou metodou jako mozková tkáň. V lidských neuroblastomových buněčných liniích např. SHSY5Y nebo IMR 32., se sloučenina B váže k novému receptorů s Kd 2nM a Bmax 150 pmol/g proteinu.
Nový receptor se izoluje v podstatě v čisté formě běžnými technikami. Například podíl (například obsahující 1 až 10 mg í proteinu/ml) tkáně, obsahující nový receptor (například jak je .
popsán výše) se smísí s radioaktivně značenou (například IZ5I) fotoafinitně značenou sloučeninou (například sloučeninou C viz příklad 6). Výhodně finální koncentrace fotoafinitně značené sloučeniny ve směsi je 0,1 až 1000 pM. Směs může být vhodně inkubována po asi 1 h při teplotě místnosti. Směs se pak vystaví UV záření (například 366 nm ze 6W lampy) na asi 30 min., Tkáň se pak promyje odstředováním pro odstranění nenavázané fotoafinitní značené sloučeniny. Fotoafinitní' značený receptor může být na počátku oddělen od jiných proteinů gelovou permeační chromatografií (například se Superose 6) za neredukujících podmínek. Proteinové frakce, obsahující receptor mohou pak být vysráženy kyselinou trichloroctovou jak popisuje Bensadoun a Weinstein (Bensadoun A. a Weinstein D. (1976) Anal.Biochem.70, 241-250). Proteiny jsou pak dále děleny pomocí dodecylsulfát sodný
-polyakrylamidový gel elektroforézy (SDS-PAGE) za redukujících podmínek. Byly použity 6 % (hmotn./obj.) tyčky gelů převrstvené 5 % (hmotn./obj.) stohovacími gely, nebo vertikálně 10 % (hmotn./obj.), nebo 4-20 % (hmotn./obj.) gradient, řezy gelů mohou být použity,, podle metody Laemmliho (viz Laemmli U.K. (.1970) Nátuře, 227, 680-685). Další Čištění receptorů může být dosaženo pomocí isoelektrické fokusace (Isoelectric Focussing - IEF) v imobi1 izovaných pH gradientech polyakrylamidových gelů materiálu připraveného preparáti.vní
SDS-PAGE.
Molekulová hmotnost receptorů je v oblasti 130 kiloDaltonu při analýze gelovou elektroforézou (SDS-PAGE).
Druhý aspekt vynálezu poskytuje rozpustnou formu výše uvedeného receptorů.
Rozpustné formy uvedeného receptorů mohou být připraveny běžnými technikami.
Takové rozpustné formy uvedeného receptorů se považují za vykazující terapeutickou využitelnost a proto předložený vynález zahrnuje použití rozpustné formy uvedeného receptorů jako terapeutického činidla.
Předložený vynález také zahrnuje použití rozpustné formy uvedeného receptorů ve výrobě léčiva pro léčení a/nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoi.dním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain., nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s anťikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie.
Předložený vynález se také týká způsobu léčení a/nebo prevence úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo
-i < ·: &
, ií ;· št ~ •'iS.·' ‘ ' ,ι'-ί ijt4· · -u.
prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie; Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, který zahrnuje podání účinného nebo profylaktického množství rozpustného receptoru postiženému případě potřeby.
Předložený vynález se také týká farmaceutické kompozice pro použití při léčení nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba,, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, který zahrnuje rozpustný receptor smísený s farmaceuticky přijatelnými nosiči.
Takové farmaceutické kompozice a nosiče jsou dobře známé v oboru a mohou být připraveny běžnými technikami.
Ve třetím aspektu předložený vynález poskytuje způsob screeningu sloučenin, majících terapeutickou aktivitu spojenou s vazbou k uvedenému receptoru, který zahrnuje:: kontaktování testované sloučeniny se substrátem, ve kterém je nový receptor přítomen a měření stupně vazby.
Substráty, ve kterých může být nový receptor nalazen zahrnují, ale nejsou tak omezeny, mozkové tkáně krys, lidí, kosmanů, psu, koček a myší. Taková mozková tkáň může být vhodně homogenizována v pufrovaném vodném mediu jako je 5 až 50 mM HEPES, pH 7,4 nebo Tris/HCl pufr. Homogenizovaná tkáň může být promyta odstředěním a resuspendováním. Subcelulární frakce připravené ze tkáně mohou být také použity.
Kontaktování testované sloučeniny se substrátem, ve kterém je nový receptor přítomen, může být provedeno smísením podílu (například obsahujícího 1 až 10 mg proteinu/ml) tkáně', obsahující nový receptor (například jak je popsána výše) s radioaktivně značenou (například s 3H nebo 125I) testovanou sloučeninou. Výhodně finální koncentrace testované sloučeniny ve směsi je 0,1 až 1000 nM, výhodněji 1 až 50 nM.
Směs může být vhodně inkubována po asi 1 hodiu při teplotě okolí. Nenavázaná sloučenina se pak oddělí od navázané testované sloučeniny filtrací. Tato může být provedena za použití Whatman filtrů ze skelných vláken výhodně typu GF/B nebo GF/C. Filtry mohou být vhodně promyty ledově studeným pufrovaným mediem (výhodně typu použitého při tkáňové přípravě).
Množství radioaktivity navázané ke tkáni zachycené na filtrech může být měřeno přídavkem kapalného scintilačního koktejlu k filtrům s následujícím spočtením v kapalinovém scintilačním čítači (pro 3H) nebo přímo na filtrech v gamma čítači (pro 125T).
Alternativně při použití celých buněk adherovaných ke kultivační pl.otně může být nenavázaná testovaná sloučenina oddělena od navázané testované sloučeniny promytím buněk s ledově studeným pufrovaným mediem s následujícím rozpuštěním buněk v roztoku hydroxidu sodného a spočtením v kapalinovém scinti.lačním čítači nebo gamma čítači jak uvedeno výše.
Radioaktivní značení testované sloučeniny se provede za použití obvyklých technik.
Alternativně vazebné afinity radioaktivně neznačených testovaných sloučenin mohou být stanoveny měřením množství vytěsněné radioaktivně značené sloučeniny, o které je známo, že se váže k receptorů jako sloučenina (A) a (B) a jiné sloučeniny uvedené nebo pokryté výše zmíněnými patenty nebo přihláškami, za použití běžných technik.
Je třeba vzít v úvahu, že radioaktivně značené sloučeniny, které, se vážou k receptorů a mohou být vytěsněny za použití této metody screeningu jsou nové a tvoří další aspekt předloženého vynálezu.
Může být výhodné použít rekombinantní receptory ve screeningové metodě, které mohou být připraveny běžnými technikami.
Například jedním z prostředků pro izolaci nový lidský receptor kódující nukleové kyseliny je sondování lidské genomické nebo cDNA knihovny přirozenými nebo uměle konstruovanými sondami za použití v oboru uznávaných postupů (viz např.: Current Protocols in Molecular Biology, Áusubel F.M. a spol. :(vyd.) Greene Publishing Assoc. and John Wiley Interscience, New York 1989, 1992). Izolované molekuly nukleové kyseliny takto získané mohou být použity pro získání komplementárních kopií genomické DNA, cDNA nebo RNA z lidských, savčích nebo jiých živočišných zdrojů nebo pro screen takových zdrojů na příbuzné sekvence, zahrnující transkripční regulátorové a kontrolní prvky definované výše
jakož jiné stabi1itní,procesní, translační a tkáňovou specifitu-determinující regiony od 5' a/nebo 3' regionů vzhledem ke kódujícím sekvencím.
Proteiny podle předloženého vynálezu se výhodně vyrábějí technikami rekombinantního genetického iženýrství. Izolované nukleové kyseliny, zejména DNA mohou být zavedeny do expresních vektorů operativním spojením DNA k nezbytným expresním kontrolním regionům (např. regulátorovým regionům) vyžadovaným pro genovou expresi. Vektory mohou být zavedeny do vhodných hostitelských buněk jako jsou prokaryotické (např. bakteriální) nebo eukaryotické (např. kvasinky, hmyz nebo savčí) buňky metodami, které jsou v oboru dobře známé (Ausubel a spol. supra). Kódující sekvence pro požadované proteiny, které mají být připraveny nebo izolovány, mohou být klonovány do vhodného vektoru nebo replikonu. Mnoho klonovacích vektorů, je známo odborníkům v oboru a výběr vhodného klonovacího vektoru je zdrojem volby. Příklady rekombinantních DNA vektorů pro klonování a hostitelských buněk, které tyto mohou transformovat, zahrnují bakteriofág lambda (E.coli), pBR322 (E.coli), pACYC177 (E.coli), pKT230 (gram-negativní bakterie), pGVllOó (gram-negativní bakterie), pLAFRl (gram-negativní akterie), pME20 (ne-E.coli gram-negativní bakterie), pHV14 (E.coli a Bacillus subtilis), pBD9 (Bacillus), pIJ61 (Streptomyces), pUC (Streptomyces), YIp5 (Saccharomyces) , bykulovirový hmyzí buněčný systém, YCpl9 (Saccharomyces). Viz obecně DNA Cloning: Vol.I& II,, Glover a spol. vyd. IRL Press Oxford (1985) (1987) a T.Maniatis a spol. (Molécular Cloning Cold Spring Harbor Laboratory (1982).
Gen může být umístěn pod kontrolou promotoru, . F * í·· ribosotnového vazebného místa (pro bakteriální expresi) a , popřípadě, operátor (kolektivně zde označované jako kontrolní prvky), takže DNA sekvence, kódující požadovaný protein, je transkribována do RNA v hostitelské buňce transformované vektorem, obsahujícím tento expresní konstrukt. Kódující sekvence může nebo nemusí obsahovat, signální peptidovou nebo leader sekvenci. Subjednotka antigenů podle předloženého vynálezu může být exprimována za použití, například E.coli tac promotoru nebo protein A genového (spa) promotoru a signální sekvence. Leader sekvence mohou být odstraněny bakteriálním hostitelem v post-translačním zpracování. Viz např. US patenty či 4431739; 4425437; 4338397.
Navíc ke kontrolním sekvencím může být žádoucí přidat regulátorové sekvence, které umožňují regulaci exprese proteinových sekvenci vzhledem k růstu hostitelské buňky. Regulátorové sekvence jsou známé odborníkům v oboru a příklady zahrnují ty, které působí, aby exprese genu byla obrácena zpět nebo vypnuta v odpovědi na chemický nebo fyzikální stimul, zahrnující přítomnost regulátorové sloučeniny. Jiné typy regulátorových prvků mohou být také přítomny ve vektoru, . například enhancerové sekvence.
Expresní vektor je kontruován tak, že partikulární kódující sekvence je umístěna ve vektoru se vhodnou regulátorovou sekvencí, umístění a orientace kódující sekvence vzhledem ke kontrolním sekvencím je takové, že kódující sekvence je transkribována pod kontrolou kontrolních sekvencí (tj. RNA Polymerasa, která se váže k DNA Molekule při kontrolních sekvencích transkribuje kódující sekvenci). Modifikace sekvencí, kódujících jednotlivý zájmový antigen,
.. i - > > -v.
' -· '· v-.:·?
' ·· '·:^Κ může být žádoucí dosáhnout na tomto konci. Například v některých případech může být nezbytné modifikovat sekvenci tak, že může být připojena ke kontrolním sekvencím se vhodnou orientací: tj. k zachování čtecího rámečku. Kontrolní sekvence a jiné regulátorové sekvence mohou být ligovány ke kódující sekvenci před inzercí do vektoru, jako jsou klonovací vektory popsané výše. Alternativně, kódující sekvence může být klonována přímo do expresního vektoru, který již obsahuje kontrolní sekvence a vhodné restrikční místo.
V některých případech může být žádoucí přidat sekvence, které působí sekreci polypeptidů z hostitelského organismu, s následným štěpením sekrečního signálu. Může být také žádoucí produkovat mutanty nebo analogy receptorů, které jsou středem zájmu. Mutanty nebo analogy mohou být připraveny delecí části sekvence, kódující protein, inzercí sekvence a/nebo substitucí jednoho nebo více nukleotidů v sekvenci. Techniky modifikace nukleotidových sekvencí, jako je místně řízená mutageneze, jsou dobře známé odborníkům v oboru. Viz např. T.Maniatis a spol,, supra; DNA Clonig, Vols I a II supra; Nucleic Acid Hybridization, supra. ..
V oboru je známo mnoho prokaryotických expresních vektorů. Viz např. US patent č. 4578355; 4440859; 4436815; 4431739; 4428941; 4425437;· 4418149; 441 1994; 4366246; 4342832; viz také UK patentové přihlášky GB 2121054; GB 2008123; GB 2007675 a evropská patentová přihláška 103395. Kvasinkové expresní vektory jsou také v oboru známé. Viz např. US patenty č. 4446235; 4443539; 4430428; viz také evropské patentové přihlášky 103409; 100561; 96491. pSV2neo (jak jě popsán v
J.Mol.Appl.Genet. 1: 327-341), který poú*ívá SV40 pozdní promotor k řízení exprese v savčích buňkách nebo pCDNAlneo, vektor odvozený z pCDNAl (Mol.Cell Biol. 7:4125-29), který používá CMV promotor k řízení exprese. Oba tyto posledně uvedené dva vektory mohou být použity pro přechodnou nebo stabilní (použití G418 rezistence) expresi v savčích buňkách. Hmyzí buněčné expresní systémy, např. Drosophila, jsou také vhodné, viz např. PCT přihlášky US 89/05155 a US 91/06838 jakož i EP přihláška 88/304093.3.
V závislosti na zvoleném expresním systému a hostiteli, jsou proteiny podle vynálezu produkovány růstem hostitelských buněk transformovaných expresním vektorem ppsaným výše zá podmínek, kdy je exprimován zájmový protein. Protein se pak izoluje z hostitelských buněk a čistí. Jestliže expresní systém sekretuje protein do růstového media, může být protein čištěn přímo z media. Jestliže protein není sekretován, je izolován z buněčného lyzátu nebo získán z buněčné membránové frakce. V takovém případě kdy protein je lokalizován k buněčnému povrchu, mohou být celé buňky nebo izolované membrány použity jako zkoušený zdroj požadovaného genového produktu. Selekce vhodných růstových podmínek a metody získání jsou v rukou odborníka v oboru.
Alternativní metoda pro identifikaci proteinů podle předloženého vynálezu je konstrukce genových knihoven za použití klonů ke transformaci E.coli a pooling a screening jednotlivých kolonií za použití polyklonálních sérových nebo monoklonálních protilátek k požadovanému receptorů.
Proteiny podle předloženého vynálezu mohou být produkovány chemickými syntézami jako je peptidová syntéza v pevné fázi, za použití aminokyselinových sekvencí nebo aminokyselinových sekvencí získaných z DNA sekvence zájmových genů. Takové metody jsou odborníkům v oboru známé. Chemická syntéza peptidů není zvláště preferována.
Proteiny podle předloženého vynálezu nebo jejich fragmenty, obsahující alespoň jeden epitop mohou být použity pro produkci protilátek, jak polyklonálních tak monoklonálnich. Jsou-1i žádoucí polyklonální protilátky, je zvolený savec (např. myš, králík, koza, kůň atd.) imunizován s receptorem podle předloženého vynálezu nebo jeho fragmentem nebo mutovaným receptorem. Sérum z imunizovaného zvířete se shromáždí a zpracuje podle známých postupů. Jestliže se použije sérum, obsahující polyklonální protilátky, mohou být polyklonální protilátky čištěny imunoafinitní chromatografií nebo jinými známými postupy.
Monoklonální protilátky k proteinům podle předloženého vynálezu a k jejich fragmentům, mohou být snadno připraveny odborníky v oboru. Obecná metodologie pro výrobu monoklonálnich protilátek použitím hybridomové technologie je dobře známá. Imortální protilátku produkující buněčné' linie mohou být vytvořeny buněčnou fúzí a také jinými technikami jako je přímá transformace B lymfocytů s onkogenní DNA nebo transfekce s virem Epstein-Barrové. Viz např. M.Schreier a spolHybridoma Techniques (1980);, Hammerling a spol., Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas (1981); Kennett a spol., Monoclonal Antibodies. (1980) ; vi.z také US patenty č. 4341761; 4399121; 4427783; 4444887;. 4452570; 446691.7; 4472500; 4491632 a 4493890. Panely monoklonálnich protilátek produkovaných proti zájmovému antigenu nebo jeho fragmentu, .· · mohou být screenovány na různé vlastnosti; tj isotyp, epitop, afinitu atd. MOnoklonální protilátky jsou vhodné v čištění za použití imunoafinitnich technik, jednotlivých antigenů, proti kterým jsou řízeny. Alternativně geny, kódující zájmové monoklonály mohou být izolovány z hybridomů PCR technikami známými v oboru a klonovány a exprimovány ve vhodných vektorech. Protilátky podle tohoto vynálezu ať polyklonální nebo monoklonální mají další využitelnost v tom, že mohou být použity jako činidla v imunoesejích, RIA, ELISA a podobně.
V jiných provedeních mohou být použity buněčné membránové frakce, obsahující receptor nebo izolované receptory volné nebo imobi1 i zaváné na pevných nosičích pro měření vazby ligandu, který se testuje. Jestliže se pro účely exprese receptorů použijí rekombinantní buňky, je výhodné použít buňky s malou nebo žádnou endogenní receptorovou aktivitou, takže vazba, pokud k ní dochází, je způsobena přítomností zájmového exprimovaného receptorů. Preferované buňky zahrnují buňky ledvin lidského embrya, opičích ledvin (HEK-293 buňky), fibroblastové (COS) buňky, buňky vaječníků čínského křečka (CHO), Drosophila nebo myší L-buňky. Je také preferováno použít jako hostitelskou buňku buňku, ve které existuje receptor responzivní druhý messengerový systém. Dobře známé druhé messengerové systémy zahrnují, ale nejsou tak omezeny zvýšení nebo snížení hydrolýzy fosfonoinositidu, adenylát cyklasy, guanylat cyklasy nebo iontové kanálkové aktivity v odezvě na vazbu ligandu k extracelulárním receptorovým doménám. V dalším provedení může být konstruován specificky tvarvaný indikátor receptorové vazby. Například fuzní protein může být vyroben fúzí receptorů podle předloženého vynálezu s proteinovou doménou, která je senzitivní k receptor lígandové vazbě. Takové doména označovaná zde jako indikátorová doména je schopna, sama nebo ve spojení s pomocnými molekulami, generování analyticky detegovatelného signálu, který je indikativní pro receptor ligandovou vazbu.
Alternativně mohou být použity buněčné membránové přípravky z transfektovaných nebo transformovaných buněk. V takovém pří=adě je měřena vazba analyticky detegovatelného ligandu. Použití radioaktivně a neradioaktivně značených ligandu je v tomto vynálezu zahrnuto. Všechny výše uvedené techniky jsou vhodné pro ligandovou identifikaci a jsou také vhodné pro protokoly screeningu léčiva a vývoje léčiva.
Čtvrtý aspekt poskytuje nové sloučeniny (zde dále označované jako sloučeniny vzorce X) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, hydráty nebo solváty identifikované ve výše uvedené screeningové metodě.
Farmaceuticky přijatelné soli, hydráty a jejich šaturáty mohou být připraveny běžným způsobem.
Vynález dále zahrnuje použití sloučeniny vzorce X nebo její farmaceuticky přijatelné soli, hydrátu nebo saturátu jako terapeutického činidla.
Vynález také zahrnuje způsob léčení nebo prevence chorob, který zahrnuje podání účinného a/nebo profylaktického množství sloučeniny vzorce X nebo její farmaceuticky přijatelné soli, hydrátu nebo solvátu postiženému v případě takové potřeby.
Předložený vynález také zahrnuje použití sloučeniny vzorce X ve výrobě léčiva pro léčení a/nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a henzodiazepíny,. poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivnírai činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie.
Předložený vynález se také týká farmaceutické kompozice pro použití při léčení nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odehráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, která obsahuje smíšenou sloučeninu vzorce X s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Takové nové sloučeniny identifikované uvedenou screeningovou metodou mohou být připraveny použitím technik známých v oboru organické chemie.
Pátý aspekt předloženého vynálezu pskytuje monoklonální nebo polyklonální protilátku, která se váže k novému reeptoru.
Takové monoklonální a polyklonální protilátky mohou být rozpoznány a připraveny běžnými technikami.
Předložený vynález také dále poskytuje použití monoklonální protilátky, která se váže k novému receptorů jako terapeutického činidla.
Předložený vynález dále poskytuje použití monoklonální nebo polyklonální protilátky, která se váže k novému receptorů pro výrobu léčiva pro léčení a/nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie; Parkinsonova choroba, psychóza,, migréna a/nebo cerebrální ischemie.
Předložený vynález se také týká způsobu léčení a/nebo prevence úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie; Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, který zahrnuje podání účinného nebo profylaktického množství monoklonální nebo polyklonální protilátky, která se váže k novému receptorů.
Předložený vynález se také týká farmaceutické kompozice pro použití při léčení nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální' ischemie, která obsahuje smíšenou monoklonální nebo polyklonální protilátku s farmaceuticky přijatelným nosičem.
. VV-C.
Šestý aspekt předloženého vynálezu poskytuje radioaktivně značené sloučeniny, které se vážou k novému receptorů. Takové radioaktivně značené sloučeniny mohou být připraveny obvyklými technikami. Jednotlivé příklady takových sloučenin jsou popsány v příkladech. Předložený vynález proto také poskytuje použití radioaktivně značených sloučenin, které se vážou k novému receptorů jako diagnostické nástroje pro detekci změn nebo abnormalit v novém receptorů. Tyto změny mohou být přítomny v poruchách spojených s vazbou receptorů zmíněného v předloženém vynálezu. Takové radioaktivně značené sloučeniny mohou být také použity jako výzkumné nástroje ke studiu vlastností nového receptorů. Preferované radioaktivně značené sloučeniny zahrnují ty, které jsou uvedeny v příkladech 2 až 5.
Následující příklady ilustrují předložený vynálezu.
Příklady provedeni vynálezu
Příklad 1
Dospělí samci krys Wistar byly usmrceni a mozky byly vyňaty. Celá tkáň předního mozku byla vyříznuta a homogenizována v pufrovaném vodném mediu. Homogenizovaná tkáň byla promyta odstředěním a resuspendována ve stejném pufru. Po odstředění byla resuspendovaná tkáň bud použita čerstvá nebo skladována zmrazená po periody až 3 měsíců nebo více před použitím.
Podíly tkáně připravené výše v koncentraci 1 až 10 mg proteinu/ml byly smíseny s podíly [3H]-sloučeniny A rozpuštěné n —9^.·
v pilířovaném mediu (50 nM HEPES, pH 7,4). Konečná koncentrace [3H] sloučeniny A ve směsi byla v rozmezí 20 až 50 nM, Směs byla inkubována při teplotě místnosti po asi 1 hodinu.
[3H]-sloučenina A vazba ke tkáni pak byla oddělena od nenávázané [3H]-sloučeniny A filtrací. Tato filtrace byla přes filtry Whatman ze skelných vláken (GF/B nebo GF/C). Filtry pak byly opakovaně promyty rychle ledově studeným pufrovaným mediem (.50 mM HEPES, pH 7,4). Množství radioaktivity navázané ke tkáni zachycené na filtrech bylo měřeno přídavkem kapalinového scintilačního kokteilu k filtrům s následujícím spočtením v kapalinovém scintilačním čítači.
Za účelem stanovení množství specifické” vazby [3H]-sloučeniny A (tj. specifické vazby k novému místu), byly provedeny paralelní eseje jako výše, .ve kterých se [3H]-sloučenina A a tkáň společně inkubují za přítomnosti vysoké koncentrace (1 až 10 μΜ) neznačené sloučeniny, která se také váže k novému místu a tak brání vazbě [3H]-sloučeniny A k tomuto místu. Může být použita neznačená sloučenina A samotná, ale jiné sloučeniny, které se vážou k novému místu mohou být také použity. Množství vazby [3H]-sloučéniny A zůstávající vpřítomnosti této neznačené sloučeniny je. definováno jako nespecifická vazba.Toto množství je odečteno od celkového množství navázané [3HJ-sloučeniny A (tj. které je přítomno za nepřítomnosti neznačené sloučeniny) za získání množství specifické vazby [3H]-sloučeniny A k novému místu.
Hodnocení hustoty nového vazebného místa ve tkáni á jeho afinita pro [3H]-sloučeninu A byly získány inkubací tkáně spolu s rozsahem koncentrací [3H]-sloučeniny A. Hladiny specifické vazby (jak definována výše) při různých λ'4» ··*- ν7Γ·' ji* kocentracích [3H]-sloučeniny A byly pak použity k výpočtu disociační konstanty (Kd) [3H]-sloučeniny A k novému místu a hustoty (Bnax) tohoto místa ve tkáni.
Výsledky
Vypočtené hodnoty pro sloučeninu A jsou Kd 40 nM a Bna-x 220 pmol/g proteinu pro tkáň předního mozku.
Použitím podobné metody jak byla popsána s tím rozdílem, že koncentrace sloučeniny B byla přibližně lOnásobně nižší; vypočtené hodnoty pro sloučeninu B jsou KD 2 nM a Bmax 220 pmol/g proteinu pro tkáň předního mozku.·
Příklad 2
Syntéza [karboxýl-14C]sloučeniny A a [karboxýl-14C] sloučenina A
1. Kyselina [karboxýl-14C]-4-fluorbenzoová
K míchané suspenzi kyanidu [14C]draselného (100 mCi, 60 mCi/mmol-1) v bezvodém dimethylformamidu se přidá jodid mědný (158 mg, 0,83 mmol) a 4-fluor-jodohenzen (433 mg, 1,95 mmol). Směs se zahřívá pod refluxem, pod dusíkem 22 hodin. Roztok se zalkal izuj e. přídavkem 5N hydroxidu sodného (2 ml) a zředí se vodou (20 ml). Směs se intenzivně extrahuje diethyletherem, spojené extrakty se postupně promyjí nasycenou solankou (2 x 30 ml), vodou (2 x 30 ml), suší se nad síranem hořečnatým, filtrují a ether se oddestiluje. Zbytek se rozpustí v ethanolu (1.5 ml), přidá se hydroxid draselný (1,34 g) ve vodě (8 ml) a výsledný roztok se zahřívá pod refluxem 15 hodin. OchLazená reakčni směs se zředí vodou (20 ml), pH se upraví na 1 až 2 IN kyselinou chlorovodíkovou a směs se intenzivně extrahuje ethylacetátem. Spojené extrakty se promyjí vodou (1 χ 50 ml), suší se nad síranem hořečnatým, filtrují a odpaří dosucha, získá se [karboxyl-14C]-4-fluorbenzoová kyselina (196 mg, i,38 mmol, 68,4 mCi, 68,4 %).
2. [Karboxyl-14C]sloučenina A [Karboxyl-14C]4-fluorbenzoová kyselina (196 mg, 68,4 mCi, 1,38 mmol), í-hydroxy-benzotriazol-hydrát (191,4 mg, 1,42 mmo1) a l-(.3-dimethylaminopropyl)-3-ethy lkarbodi imid-hydrochlor.id (265 mg, 1,38 mmol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (6 ml). K tomuto roztoku se přidá roztok (3R,4S)-4-amino-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-2H-benzo[b]pyran-3-olu (258 mg, 1,38 mmol, obsahuje 95 hmotn./hmotn. methanol)) a triethylaminu (.0,190 ml) v dichlormethanu (2,0 ml). Směs se míchá při teplotě okolí 1,5 hodiny a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se vyjme do ethylacetátu (25 ml), promyje se postupně zředěnou HCI (2 x 25 ml), vodou (25 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (2.5 ml),, vodou (25 rol), suší se nad síranem hořečnatým, filtruje a odpaří se dosucha.
Surová [karboxyl-14C]sloučenina A se čistí sloupcovou chromatografií (silikagel 40 g, eluce ethylacetátem/hexanem 1:3 obj./obj. pro odstranění nepolárních nečistot a 100 % ethylacetátem pro eluci [14C]sloučeniny A), získána [14C]sloučenina A (179,7 mg, 0,50 mmol). Část (139 mg) tohoto materiálu se dále čistí semi-preparativní HPLC (Spherisorb 5W silikagel 22,5 x 250 mm kolona, eluce rychlostí 10 ml/min chloroformem/methanolem 95:5 obj./obj.) za získání [14C]sloučeniny A (107 mg). Tato vsázka se nechá ekvilibrovat nad vodou 6 hodin, pak se pečlivě suší ve vakuu. Produkt měl radiochemickou čistotu 99,7 optickou čistotu >99 %, chemickou čistotu 95,5 % (jako takový) a specifickou aktivitu 59,6 ci.mmol-1. iH NMR spektrum bylo v souladu se strukturou a shodné s neznačenou sloučeninou A jak je připravena ve WO 92/22293. Analytické sysstémy jsou podrobně uvedeny dále.
Schéma 1
Syntéza [14C]sloučeniny A
i i
t14C]sloučenina A *znamená značení radioaktivním uhlíkem-14 'X, ií»·
- ••ι.'ί“
Příklad 3
Syntéza [karboxyl-14C] ···!” ř
Syntéza (3S,4S)-6-acetyl-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-4-(3-chlor4-f luorf enyl [14C]karbony1amino)-2H-benzo [b]pyran-3-olu
3-Chlor-:4-fluorbenzo[14C]nitril
I ·» · - >< . . - ·„ · 5i, > JÍ *,J .p , iw* • 3-Chlor-4-fluorjodobenzen, (472,8 mg,, 1/84.mmol), kyanid [4 4G]draselný (100 mCi při specifické aktivitě 60 mCi-mmol1; 1,67 mmol.,- 108,8 mg) a jodid mědný (173,9 mg, 0,91 mmol) se suspendují v N-methylpyrrolidinonu (4,5 ml).
'-.,···,· c · :·*’· · ' ·.
Směs se .pak zahřívá pod.dusíkem na 150 °C za míchání celkem po Ί9.25 hodin a nechá se stát při teplotě místnosti 49 hodin) ..(.Vyhodnocením podle ÍT.LC. (silikagel, eluce ethylacetát/hexan 1:5 obj./obj.) ukazuje, ie reakce prokázala přibližně 73% konverzi..-Reakční směs pak byla rozdělena mezi vodu (100 ml.) a ethylacetát £(400 ml) . Organická vrstva byla postupně .promyta 2% hmotnr/obj.roztokem chloridu železitého , (100 ml) ,. vodou (100 υι1):/ΐ2% íhmotn./obj. métabisulf i tu sodného (100 ml) „ vodou'-(100 .ml·) tálsolankou (100 ml). Organická vrstva pak byla sušena nad síranem hořečnatým, zfiltrována pro odstranění sušidla, odpařenaidosucha za sníženého tlaku a zbytky podrobeny sloupcové chromatografií na silikagelu (Merck • Art.9385) za eluce ethylacetátem/n-hexanem 1:8. Odpovídající frakce byly odděleny a spojeny za získání roztoku, • obsahujícího přibližně 72,7 mCi, což odpovídá 1,21 mmol, 188 mg; 72,7 % výtěžek) 3-chlor-4-fluorbenzo[14C]nitrilu.
Syntéza kyseliny 3-chlor-4-fluorbenzo[14C]karboxylové
Roztok 3-chlor-4-fluorbenzo[14C]ni trilu (36 mCi při specifické aktivitě 60 mCi.mmol1; 0,6 mmol, 94,5 mg) v ethylacetátu/n-hexanu 1:8 obj./obj. (85 ml) se odpaří dosucha za sníženého tlaku. Zbytky se suspendují v koncentrované kyselině chlorovodíkové (8,0 ml) a zahřívají se na 100 0 C za míchání pod dusíkem 6 hodin. V přibližně hodinových intervalech se směs míchá pro zpětné promytí sublimovaného materiálu do směsi. Směs se nechá vychladnout a stát při teplotě místnosti přes noc. Směs se pak rozdělí mezi vodu (30 ml) a ethylacetát (40 ml). Vodná vrstva se opět extrahuje ethylacetátem 40 ml); organické vrstvy se spojí a extrahují se do 2M roztoku hydroxidu sodného (40 ml). Organická vrstva se extrahuje navíc dvakrát do 2M roztoku hydroxidu sodného (2 x 20 ml). Spojené alkalické vodné vrstvy se opatrně okyselí na ρΗ 1 přídavkem koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Vodný roztok se pak extrahuje dvakrát do ethylacetátu (2 x 80 ml), organické vrstvy se spojí, suší nad síranem hořečnatým a filtrují pro odstranění sušidla. Sušidlo se několikrát promyje malými podíly ethylacetátu (celkový objem 50 ml) a promývací roztoky se spjí s filtrátem. Rozpouštědlo se plně odstraní za sníženého tlaku a získá se pevná (75 mg, 0,43 mmol, 71,7 % výtěžek) kyselina 3-chlor-4-fluorbenzo[14C]karboxylová.
Syntéza (3S,4S)-6-acetyl-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-4-(3-chlor~4-fluor• fenyl[14C]karbony lamí no)-2H-benzo[b]pyran-3-olu
Kyselina 3-chlor-4-fluorbenzo[14C]karboxylová (75 mg,
0,43 mmol) se ropustí v DMF (2,5 ml). K tomuto roztoku se > ,¼ Γ,ι* .-fa jl přidá hydroxybenztriazol (82,6 mg, 0,6 mmol, 1,42 ekv.) (sušený při teplotě místnosti za vakua 24 hodin) a hydrochlorid l-(3-dimethylamÍnopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (113,8 mg, 0,59 mmol, 1,37 ekv.)(sušený při teplotě místnosti za vakua po 24 hodin) a směs se míchá při teplotě místnosti 30 minut. Přidá se roztok (35.45) -6-acetyl-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-4-amino-2Hbenzo[b]pyran-3-olu (150 mg, 0,64 mmol, 1,49 ekv.) v DMF (2,5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se pak rozdělí mezi vodu (50 ml) a ethylacetát (100 ml); vodná vrstva se opět extrahuje do ethylacetátu (80 ml). Organické' vrstvy se spojí, promyjí se vodou (50 ml), suší nad síranem hořečnatým a filtrují pro odstranění sušidla. Sušidlo se promyje na filtru ethylacetátem (50 ml); filtrát a promývací roztoky se spojí a odpaří se dosucha za sníženého tlaku.
Zbytek se podrobí sloupcové chromatografií na silikagelu za eluce ethylacetátem/n-hexanem 1:1 obj./obj. Příslušné kolonové frakce se spojí, odpaří dosucha za sníženého tlaku a takto získané pěnovité zbytky se rekrystalují z acetonu/n-hexanu za získání bíléhopevného produktu,který se suší za vakua a získá se 123,5 mg, 0,31 mmol, 72% výtěžek (35.45) -ó-acetyl-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-4-(3-chlor-4-fluorfenyl(14C]karbonylamino)-2H-benzo[b]pyran-3-olu. Produkt měl rádiochemickou čistotu 98,7 %, chemickou čistotu 99,4 % (jako takový), chirální čistotu 99,9 % a specifickou aktivitu 59,4 ,Ci.mmol-1. NMR spektrum bylo v souladu se strukturou a , shodné s neznačenou sloučeninou připravenou jak popsáno ve.
výše zmíněných patentech. J
Příklad 4 [l25I]sloučenina B
Palladnatou sloučeninou katalýzující kondenzaci neznačené sloučeniny B s- bis(tributylcínem) byl tributylstananový derivát. Sloučenina B-[i25I] byla pak získána přes rádiojoddestanylaci na 100 pg části tributylstannanového derivátu s 5 mCi jodidu [! 25I]sodného za přítomnosti 1,0 až 2,0 pg chloraminu-T jako oxidantu ve 3% kyselině octové v ethanolu. Tento postup poskytl 3,4 až 3,9 mCi (68 až 78% radiochemický.výtěžek [125I]sl.oučeniny B při radiochemické čistotě alespoň 99 % po HPLC čištění (Baker silikagel kolona, 4,6 mm vnitřní průměr x 25 cm, 98:2 hexan/isopropanol, eluce 1,0 ml./min s UV monitorováním při 230 nm) . Specifická aktivita (odvozená ze měření hmotnostních a radioaktivitních koncentrací) byla stanovena jako 1775 až 1800 Ci/mmol.
σ
Ti ??'
Příklad 5
Í3H]-sloučenina A
Sloučenina D (1,0-1,2 mg, 1,9-2,4 pmol) se rozpustí v 1,0 ml 9:1 (obj./obj.) DMF (Baker/triethylamin (ALdrich). K tomuto roztoku se přidá 1,0 až 1,2 mg (100 % hmotn.} 10% palladia na uhlí (ALdrich). Reakční směs se míchá pod atmosférou 3,6-4,9 Ci tritiového plynu po 16 až 17 hodin při teplotě okolí.
Odstranění těkavých složek za přídavku methanolu (3x2 ml) a následujícím odstranění ve vakuu se získá 108-146 mCi surového produktu. Radio-HPLC analýza ukazuje, že tento materiál obsahuje 61 až 66 % pH] sloučeniny A. Tento materiál se čistí pomocí HPLC s reverzní fází (Beckman Octyl, 4,6 x 250 mra kolona, acetonitril/voda/kyselina trifluoroctová (40:60:0,1), UV detekce při. 220-240 nm, 1 ml/min průtoková rychlost) ve čtyřech až pěti nástřicích. Eluát,. odpovídající produktu se lyofilizuje a pak. rozpuštěním v ethanolu poskytne 24-25 mCi [3H]sloučeniny A. Analýza udává specifickou aktivitu 21,5 až 29 Cí/mmol (isotopový výskyt chemickou ionizací-hmotovou spektrometrií, NHj reakční plyn) a radiochemickou čistotu, alespoň 99 % (Ultrasphere ODS 5 pm, 4,6 x 250 mm kolona, acetonitri1/voda/kyselina trifluoroctová ' lineární gradient od 34:66:0,1 do 90:10:0,1 během 10 min při 1,0 ml/min, UV detekce při 230 nm a detekce radioaktivity pomocí in-line rad-ioaktivitního průtokového scintilačního monitoru).
sloučenina D
Příklad 6
Sloučenina C
sloučenina
Fotoafinitně značený [125I]6-acetyl-3,4-dihydro-2,2dimethyl-8- [1251]j od-4S-[3-{trifluormethyl-3H-diazirin-3-y1}2H-benzo[b]pyran-3R-ol, byl připraven jako mající radioznačení zavedené ipso substitucí 8-tributylstannanem za standardních podmínek {Na[125I]I (žádný nosič nepřidán)/chloramin-T} a surového [1251]6-acetyl-3,4-dihydro-2,2-dimethy1-8-[1251]jod4S-[3-{trifluormethyl-3H-diazirin-3-yl}-benzoylamino]-2Hhenzo[b}pyran-3R-olu, [1251]SB—224172 čištěný pomocí HPLC {Novapak C 18 eluovaný 0,1% vodnou TFA/acetonitrilem (1:1 obj./obj.}. Stannan byl připraven reakcí 6-acetyl-3,4-dihydro2,2-dimethyl-8-jod-4S-amino—2H-benzo[b]pyran-3R-olu s hexabutyldicínem a dibrompalladium bis(trifenylfosfinem) a následující kondenzací s kyselinou
3-[3-(trifluormethyl)-3H-diazirin-3-yl]benzoovou.
Reakčni. průtokové schéma
Claims (21)
1 · I Λ Va) Kyselina 3-(l,l-diazirino-2-trifluorethyl)benzoová
K míchanému roztoku
3-(l,l-diazirino-2-trifluorethyl)benzylalkoholu (2,7 g, ^připravený podle M.Cerusa a G.D.Prestwitche, Bioorg and Med
Chem Let.ts, 1994, 4, 2179-2184) v dioxanu (IO ml) a po částech ,bylo běhém 2,5 h přidáno 0,2 Μ KOH (63 ml) roztoku a ΚΜπΟλ (2/45 g). Směs se pak filtruje přes sloupeček Celitu pro odstranění přebytku MnO2 a filtrát se extrahuje etherem. Vodná vrstva se okyselí IM H2SO4 (25 ml) a extrahuje etherem. Organická vrstva se promyje vodou, solankou a suší nad bezvodým síranem sodným. Filtrací a odpařením ve vakuu se získá uvedená sloučenina jako světležlutá pevná látka (2,45 g) ·
b) trans-6“Acetyl-4S-(3-(l,l-diazirino~2-trifluorethyl)benzoylamino)-3,4-dihydro-2,2-dimethyl-8-jod-2H-lbenzopyran-3R-ol (sloučenina C)
K roztoku kyseliny diazirínylbenzoové výše popsané (0,124 g) v suchém DMF (2 ml) se přidá ethyldiaminopropylkarbodiimid-hydrochlorid (0,095 g) a 1-hydroxybenzotriazol (0,067 g). Tato smě*se míchá při teplotě ♦místnosti 10 min. K roztoku se přidá trans“6-acetyl-4R-amino3,4-díhydro-2,2-diroethyl-8-jod-2H-l-benzopyran~3S-ol (0,015 g, .jak byl připraven v popisu 1 a příkladu 8 PC/EP/95/02249) a v míchání se pokračovalo 3 h. Směs se nalije do vody a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje zředěnou HCl, vodou, nasyceným roztokem NaHCOj a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným. Filtrací a odpařením ve vakuu se získá surová pevná látka (0,37 g), která se rekrystaluje z ethylacetátu:n-bexanu za získání sloučeniny z příkladu 7 jako krystalu.
T.t. 109 až 100 ’C,[a]D25 +55,3° (MeOH, c= 1,1)
a) sloučenina A se k němu váže s Kd 40nM pro tkáň krysího předního mozku,
h) sloučenina A se váže k němu s BBax 220 pmol/g proteinu . tkáně krysího předního mozku
c) sloučenina B se váže k němu s Kd 2 nM pro tkáň krysího předního mozku
d.) sloučenina B se k němu váže s Baax 220 pmol/g pro tkáň krysího předního mozku;
a homologní receptory z jiných zdrojů vykazují alespoň 85% homologiii se1 tkání krysího předního mozku.
2. Rozpustná forma receptorů jak je definován v nároku 1.
3. Receptor podle nároku 1, mající molekulovou hmotnost v oblasti. 130 kiloDalton při analýze gelovou elektroforézou (SDS-PAGE) •
4. Použití rozpustné formy receptorů podle nároku 2 jako * terapeutického činidla.
5. Použití rozpustné formy uvedeného receptorů podle nároku
2 ve výrobě léčiva pro léčení a/nebo prevenci úzkosti, mánie, ' . ?. , --ί· -'·£Μ^ί./ *-·%·??·' deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinku spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální'ischemie.
♦
6. Způsobu léčení a/nebo prevence úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie; Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, který zahrnuje podání účinného nebo profylaktického množství rozpustného receptorů podle nároku 2 postiženému v případě takové potřeby.
7. Farmaceutická kompozice pro použití při léčení nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain,-, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, která obsahuje rozpustný receptor podle nároku 2 smíseňý s farmaceuticky přijatelnými nosiči.
*
8. Způsob screeningu sloučenin, majících terapeutickou aktivitu spojenou s vazbou k receptorů podle nároku 1, který zahrnuje: kontaktování testované sloučeniny se substrátem, ve kterém je nový receptor přítomen a měření stupně navázání.
9. Radioaktivně značená sloučenina, která se váže k receptorů podle nároku 1 a muže být vytěsněna použitím metody screeningu odle nároku 8.
10. Nová sloučenina a její farmaceuticky přijatelné soli, hydráty nebo solváty identifikované screeningovou metodou podle nároku 8.
11. Použití sloučeniny podle nároku 10 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, hydrátu nebo solvátů jako terapeutického činidla.
12. Způsob léčení nebo prevence poruch, který zahrnuje podání účinného a/nebo profytaktického množství sloučeniny definované v nároku 10 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, hydrátu nebo solvátů postiženému v případě potřeby.
13. Použití sloučeniny podle nároku 10 ve výrobě léčiva pro léčení a/nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch, léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie.
14. Farmaceutická kompozice pro použití při léčení nebo prevenci úzkosti,, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzívními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální.ischemie, která zahrnuje sloučeninu podle nároku 10 s farmaceuticky přijatelným nosičem.
15. Monoklonální nebo polyklonální protilátka, která se váže k receptorů podle nároku 1.
16. Použití monoklonálnínebo polyklonální protilátky podle nároku 15, která se váže k novému receptorů jako terapeutického činidla.
17. Použití monoklonální nebo polyklonální protilátky podle nároku 15, která se váže k novému receptorů, pro výrobu léčiva pro léčení a/nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzívními činidly jako je epilepsie; Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie.
18. Způsob léčení a/nebo prevence úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzívními činidly jako je epilepsie; Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, který zahrnuje podání účinného nebo profylaktického množství monoklonální nebo polyklonální protilátky podle nároku 15, která se váže «J k novému receptoru.
19. Farmaceutická kompozice pro použití při léčení nebo prevenci úzkosti, mánie, deprese, poruch spojených se subarachnoidním krvácením nebo nervovým šokem, účinků spojených s odebráním návykových substancí jako je kokain, nikotin, alkohol a benzodiazepiny, poruch léčitelných a/nebo prevence schopných s antikonvulzivními činidly jako je epilepsie, Parkinsonova choroba, psychóza, migréna a/nebo cerebrální ischemie, která obsahuje smíšenou monoklonální nebo polyklonální protilátku podle nároku 15 s farmaceuticky přijatelným nosičem.
20. Radioaktivně značená sloučenina, která se váže k novému receptoru podle nároku 1.
21. Použití radioaktivně značených sloučenin podle nároku 20, které se vážou k novému receptoru jako diagnostického nástroje pro detekci změn nebo abnormalit, v novém receptoru podle
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9425502.3A GB9425502D0 (en) | 1994-12-17 | 1994-12-17 | Novel receptor |
| PCT/EP1995/004998 WO1996018650A1 (en) | 1994-12-17 | 1995-12-11 | Novel receptor |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ187697A3 true CZ187697A3 (en) | 1997-10-15 |
Family
ID=10766105
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ971876A CZ187697A3 (en) | 1994-12-17 | 1995-12-11 | Novel receptor |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5985334A (cs) |
| EP (1) | EP0807122A1 (cs) |
| JP (1) | JPH10511083A (cs) |
| CN (1) | CN1175262A (cs) |
| AU (1) | AU710150B2 (cs) |
| BR (1) | BR9510060A (cs) |
| CA (1) | CA2207921A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ187697A3 (cs) |
| FI (1) | FI972558A (cs) |
| GB (1) | GB9425502D0 (cs) |
| HU (1) | HUT77077A (cs) |
| NO (1) | NO972771L (cs) |
| NZ (1) | NZ298059A (cs) |
| PL (1) | PL320747A1 (cs) |
| WO (1) | WO1996018650A1 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6245893B1 (en) * | 1994-12-17 | 2001-06-12 | Smithkline Beecham P.L.C. | Receptor that binds anti-convulsant compounds |
| US20230136109A1 (en) * | 2020-03-10 | 2023-05-04 | Epic Ventures Inc. | Light-activated pathogen-killing molecules and uses thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9112721D0 (en) * | 1991-06-13 | 1991-07-31 | Smithkline Beecham Plc | Novel treatment |
| GB9225860D0 (en) * | 1992-12-11 | 1993-02-03 | Smithkline Beecham Plc | Novel treatment |
| WO1995006117A1 (en) * | 1993-08-20 | 1995-03-02 | Smithkline Beecham Plc | Human 5-ht2 receptor |
-
1994
- 1994-12-17 GB GBGB9425502.3A patent/GB9425502D0/en active Pending
-
1995
- 1995-12-11 NZ NZ298059A patent/NZ298059A/xx unknown
- 1995-12-11 CN CN95197647A patent/CN1175262A/zh active Pending
- 1995-12-11 PL PL95320747A patent/PL320747A1/xx unknown
- 1995-12-11 CZ CZ971876A patent/CZ187697A3/cs unknown
- 1995-12-11 WO PCT/EP1995/004998 patent/WO1996018650A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-12-11 US US08/849,860 patent/US5985334A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-12-11 JP JP8518283A patent/JPH10511083A/ja active Pending
- 1995-12-11 CA CA002207921A patent/CA2207921A1/en not_active Abandoned
- 1995-12-11 BR BR9510060A patent/BR9510060A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-12-11 AU AU43458/96A patent/AU710150B2/en not_active Ceased
- 1995-12-11 HU HU9702146A patent/HUT77077A/hu unknown
- 1995-12-11 EP EP95942175A patent/EP0807122A1/en not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-06-16 FI FI972558A patent/FI972558A/fi unknown
- 1997-06-16 NO NO972771A patent/NO972771L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5985334A (en) | 1999-11-16 |
| NZ298059A (en) | 2000-03-27 |
| AU710150B2 (en) | 1999-09-16 |
| WO1996018650A1 (en) | 1996-06-20 |
| GB9425502D0 (en) | 1995-02-15 |
| NO972771D0 (no) | 1997-06-16 |
| AU4345896A (en) | 1996-07-03 |
| CN1175262A (zh) | 1998-03-04 |
| MX9704560A (es) | 1997-10-31 |
| EP0807122A1 (en) | 1997-11-19 |
| PL320747A1 (en) | 1997-10-27 |
| NO972771L (no) | 1997-08-15 |
| CA2207921A1 (en) | 1996-06-20 |
| JPH10511083A (ja) | 1998-10-27 |
| BR9510060A (pt) | 1998-06-02 |
| HUT77077A (hu) | 1998-03-02 |
| FI972558A0 (fi) | 1997-06-16 |
| FI972558A (fi) | 1997-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2017264980B2 (en) | Haptens of quetiapine for use in immunoassays | |
| CA2553769C (en) | Npc1l1 (npc3) and methods of identifying ligands thereof | |
| US5879657A (en) | Radiolabeled platelet GPIIb/IIIa receptor antagonists as imaging agents for the diagnosis of thromboembolic disorders | |
| EP2888234B1 (en) | Haptens of aripiprazole and their use in immunoassays | |
| MXPA01012665A (es) | El promotor genetico de la miostatina e inhibicion de la activacion del mismo. | |
| JP2002507892A (ja) | ヒト・アデニル酸シクラーゼのクローニングおよび特性評価 | |
| CZ187697A3 (en) | Novel receptor | |
| US6703393B2 (en) | (Oxo-pyrazolo[1,5a]pyrimidin-2-yl) alkyl-carboxamides | |
| US6245893B1 (en) | Receptor that binds anti-convulsant compounds | |
| JP2003334088A (ja) | ヒト由来の新規Ｋｌｏｔｈｏ様タンパク質及びその遺伝子 | |
| US20010027248A1 (en) | Novel receptor | |
| Chitneni et al. | Improved synthesis and metabolic stability analysis of the dopamine transporter ligand [18F] FECT | |
| AU641210B2 (en) | Gastrin releasing peptide receptor | |
| JP2002514926A (ja) | ヒト・アデニル酸シクラーゼのクローニングおよび特性評価 | |
| US20020127669A1 (en) | Novel compositions for the expression of the human peptide histidine transporter 1 and methods of use thereof | |
| MXPA97004560A (en) | Noved receiver | |
| US5606020A (en) | 6 (R)-l-erythro-5,6,7,8-tetrahydrobiopterin receptor | |
| JP4008446B2 (ja) | ベンゼン環上に二置換基を有するβ−ベンジルオキシアスパラギン酸誘導体 | |
| Torrens et al. | Tachykinin receptors: binding and cellular activity assays | |
| WO2010091721A1 (en) | 3 -substituted 1-arylsulfonylpiperidine derivatives for the treatment of pain | |
| Ekema et al. | Modulation of recombinant GABA receptor/channel subunits by domain-specific antibodies in Xenopus oocytes | |
| Hopkinsa et al. | Optimization of Novel Reversible Bruton Tyrosine Kinase Inhibitors Identified using Tethering-Fragment-Based Screens | |
| JP2003024070A (ja) | 新規なｇタンパク質共役型受容体タンパク質及びその遺伝子 | |
| Corbin | Biochemical characterization of the membrane imbedded region of the nicotinic acetylcholine receptor | |
| JP2003000253A (ja) | 新規なｇタンパク質共役型受容体タンパク質及びその遺伝子 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |