HUT72493A

HUT72493A - Combinations of retroviral inhibitors

Info

Publication number: HUT72493A
Application number: HU9502451A
Authority: HU
Inventors: Debra Lynn Taylor; Albert Stanley Tyms
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1993-02-22
Filing date: 1994-01-18
Publication date: 1996-05-28
Also published as: NO307738B1; AU679497B2; MXPA94001311A; KR960700743A; GB9303518D0; HU9502451D0; NO953272L; AU6091894A; WO1994019008A1; IL108696A0; ZA941036B; JPH08509469A; EP0684836A1; IL108696A; CN1118142A; KR100293299B1; CA2155129A1; NO953272D0; CA2155129C; NZ261740A

Description

A találmány tárgya castanospermin-észterek és rövid pepiid analógok új kombinációi, amelyek kombinációban hatásosan alkalmazhatók retrovírusos fertőzések kezelésében, különösen a szerzett immun hiány szindróma (AIDS) és az ezzel kapcsolatos humán immunhiány vírus (HÍV) fertőzések kezelésében.

• ·

- 2 Az utóbbi években intenzív kutatás folyt, hogy olyan kezelést és terápiás módszert dolgozzanak ki, amely alkalmas emberekben és állatokban retrovírusos vírusfertőzések kezelésére, különösen a szerzett immunhiány szindróma (AIDS) és az AIDS-szel kapcsolatos komplex betegség (ARC) kezelésében. Az emberek felismerik az AIDS retrovírus súlyos egészségkárosító hatását és az ARC-ben, valamint az AIDS-ben szenvedő emberek száma riasztó mértékben növekszik. Ezen túlmenően az AIDS fertőzött betegek 5 éven túli túlélése már igen hosszú időszaknak számít. Az AIDS betegek, akiknek immunrendszere a fertőzés miatt súlyosan sérült, számos normális fertőzéstől és daganatos megbetegedéstől szenvednek, mint például Pneumocystis carninii pneumonia és Kaposi sarcoma. Jelenleg az AIDS terápia nem ismert és a jelenlegi kezelések nem biztonságosak, ezek hatásossága nem bizonyatott és számos káros mellékhatással rendelkeznek. A betegség súlyossága és a minden esetben halállal történő végződése miatt az AIDS betegségtől való félelem szociális elutasítást és diszkriminációt eredményezett az ilyen betegségben szenvedő vagy erről feltételezett betegekkel szemben.

Az AIDS vírus a vírusok azon általános osztályához tartozik, amelyeket retrovírusoknak neveznek. Mint osztály, számos ismert retrovírus egyben oncogén vagy tumor okozó vírus. Az első két humán retrovírus, amelyet felismertek és humán T-sejt leukémia I és II vírusnak vagy HTLV-I és -II vírusnak neveznek, okozza emberekben a T-lymphociták fertőzése után a ritka leukémiákat. A harmadik ilyen humán

X vírust, amelyet felismertek, a HTLV-III vírust, jelenleg HÍV vírusnak nevezik, és ez sejtelhalást okoz, miután a T-lymphocitákat megfertőzi és kimutatták, hogy ez a szerzett immunhiány szindróma (AIDS), illetve az AIDS-szel kapcsolatos komplex (ARC) betegség oka.

61.006/SM

A retrovírusok ribonukleinsavat (RNS) tartalmazó vírus osztály, amelyek reverz-transzkriptáz aktivitás segítségével replikálódnak és így egy láncot képeznek a kiegészítő DNS-sel szemben (cDNS), amelyből egy kétláncú provirális DNS keletkezik. Ez a provirális DNS ezután a gazdasejt kromoszóma DNS-ébe épül be és lehetővé teszi a vírus replikációt úgy, hogy ezt a beépült DNS-t a sejt átírja és a vírus messenger RNS segítségének átírásával proteinekké formálja. A vírus replikációja a vírus genom RNS szintézisével történik és ez glükozilezett és nem-glükozilezett vírus proteineket épít fel és így új vírus részecskék keletkeznek. A virionok megérése a sejtfelületen azt eredményezi, hogy egy fertőző vírus utód szabadul fel.

A retrovírusos fehérjék általában poliproteinként képződnek és vírussal kódolt proteázok szükségesek ahhoz, hogy a prekurzor poliproteineket hasítsák, és így vírus enzimeket és szerkezeti fehérjéket képezzenek. Például a gag és a gag-pol prekurzor poliproteinek a retrovírusokban a vírussal kódolt enzimek prekurzoraként szintetizáltak és nem glikozilezett szerkezeti fehérjék prekurzorai. Hasonlóan a HÍV borító fehérjéje 160 kDA nagyban glükozilezett prekurzor glükoprotein. A borító fehérjéket egy gazdasejt proteáz hasítja, és így 120 kDA külső glükoprotein (gp 120) és egy transzmembrán glükoprotein (gp 41) keletkezik. A gp 120 fehérje egy nagy affinitásé kötő helyet tartalmaz, amely a CD4-pozitív humán T-segítő sejtekben a CD4 ligandumot felismeri, amely ligandum a vírus ismert receptora.

A retrovírus proteázok, továbbá bizonyos azonosságot mutatnak inhibiálásuk során az aszpartil proteáz specifikus inhibitorokkal [lyoko és munkatársai, Natúré 329, 654-67], Hasonlóan a retrovírus proteázok aminosavszekvenciája is bizonyos szekvencia homológiát mutat. Mivel közös szerkezeti és funkcionális jellemzőkkel rendelkeznek és funkciójuk hasonló, az aszpartil proteázok potenciálisan értékes terápiás szereknek tekinthetők.

61.006/SM

A korrekt borító glükoproteinek a retrovírusokban igen fontos szerepet játszanak a vírus életciklusában, amely borítás potenciális klinikai beavatkozást tehet lehetővé. A borító glükoproteinek a virion és a cél gazdasejt kezdeti kölcsönhatásában is szerepet játszanak, valamint a vírus behatolása során a vírusos borítás és a gazdasejt membránok ezt követő fúziójára is hatást gyakorolnak. Bizonyos castanospermin észterek alkalmasak arra, hogy a vírust borító glükoproteinek kialakulásával kölcsönhatásba lépjenek, ennélfogva megakadályozzák a kezdeti vírus-gazdasejt kölcsönhatást és ezt követő fúziót.

Vizsgálataink során felfedeztük, hogy az aszpartil proteáz-specifikus inhibitorok [(II) általános képletü vegyületek] és a glükoprotein termelő inhibitorok, így a castanospermin származékok [(I) általános képletü vegyületek] kombinációban történő alkalmazása jelentősen megnövelt HÍV vírus inhibiálást eredményez, ahhoz képest, amelyet egyébként várnánk.

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények az (I) általános képletü glükozidáz inhibitort és a (II) általános képletü vírusos aszpartil-proteáz inhibitort tartalmaznak.

Az (I) általános képletü és (II) általános képletü vegyületeket, valamint gyógyszerészetileg elfogadható addíciós sóikat tartalmazó gyógyszerkészítmények új készítmények és igen értékes farmakológiai jellemzőkkel rendelkeznek. Ezek a készítmények gyakran szinergetikus hatást fejtenek ki és igen hatásosan inhibiálják a HÍV aktivitást, ennélfogva alkalmazhatók a vírusos fertőzések, különösen a HÍV vírus által okozott fertőzések megelőzésére vagy kezelésére.

A találmány tárgya az (I) és (II) általános képletü vegyületeket és fent leírt sóikat hatóanyagként tartalmazó készítmények, eljárás ezek előállítására, továbbá eljárás ezen készítmények alkalmazására a vírusos fertőzések, különösen a HÍV vírus által okozott fertőzések megelőző, illetve terápiás kezelésére.

61.006/SM

Az (I) általános képletü vegyületek és gyógyszerészetileg elfogadható sóik olyan vegyületek, ahol az általános képletben

R, R₁ és R₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-14 szénatomszámú alkanoil-csoport, 1-14 szénatomszámú alkenoil-csoport, ciklohexán-karbonil-csoport, 1-6 szénatomszámú alkoxi-acetil-csoport, (III) általános képletü csoport, naftalin-karbonil-csoport vagy kívánt esetben ilyen csoport, amely metilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat, fenil-2-6 szénatomszámú alkanoil-csoport, ahol a fenilcsoport kívánt esetben metilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat, cinnamoil-csoport, piridin-karbonil-csoport, amely kívánt esetben metilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat, dihidro-piridin-karbonil-csoport, amely kívánt esetben 1-10 szénatomszámú alkilcsoport szubsztituenst tartalmazhat, tiofén-karbonil-csoport, amely kívánt esetben metilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat vagy furán-karbonil-csoport, amely kívánt esetben metilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat;

Y jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport, halogénatom, trifluormetil-csoport, 1-4 szénatomszámú alkil-szulfonil-csoport, 1-4 szénatomszámú alkil-merkapto-csoport, cianocsoport vagy dimetil-amino-csoport;

Y’ jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport, halogénatom vagy az Y csoporttal együtt 3-4 metiléndioxi-csoport;

Y” jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxi-csoport vagy halogénatom;

azzal a feltétellel, hogy R, R! es R₂ megválasztása úgy történik, hogy legalább egyikük, de semmiképp sem kettőnél több jelentése hidrogénatom.

61.006/SM

A fent leírt 1-14 szénatomszámú alkanoil-csoportok lehetnek egyenes vagy elágazó szénláncú vagy ciklusos csoportok és például lehetnek formilcsoport, acetil-csoport, propionil-csoport, butiril-csoport, izobutiril-csoport, ciklopropán-karbonil-csoport, hexanoil-csoport, oktanoil-csoport és dekanoil-csoport. A fent leírt 1-14 szénatomszámú alkenoil-csoportok lehetnek egynes vagy elágazó szénláncú vagy ciklusos csoportok, amelyekben legalább egy szén-szén kötés kettöskötés, mint például propenoil-csoport, butenoil-csoport, izobutenoil-csoport, hexenoil-csoport, oktenoil-csoport és decenoil-csoport. A fent leírt 1-6 szénatomszámú alkoxi-acetil-csoport lehet például metoxi-acetil-csoport, etoxi-acetil-csoport és butoxi-acetil-csoport. A fent leírt halogénatomok lehetnek például fluoratom, klóratom, brómatom vagy jódatom. A fent leírt 2-6 szénatomszámú alkanoil-csoport elnevezés alatt például acetil-csoportot, propionil-csoportot, butiril-csoportot, izobutiril-csoportot és hexanoil-csoportot értünk. A fent leírt 1-4 szénatomszámú alkilcsoport önmagában vagy alkoxicsoport vagy alkil-szulfonil-csoport vagy alkil-merkapto-csoport részeként lehet maximálisan 4 szénatomot tartalmazó egyenes vagy elágazó szénláncú alkilcsoport. Ilyen csoportok például a metilcsoport, etilcsoport, propilcsoport, butil-csoport, metoxi-csoport, etoxi-csoport, butoxi-csoport, metil-szulfonil-csoport, etil-szulfonil-csoport, metil-merkapto-csoport és etil-merkapto-csoport. A fent megadott fenil-2-6 szénatomszámú alkanoil-csoportok lehetnek például benzol-acetil-csoport és benzol-propionil-csoport. A különféle naftalin-karbonil-csoportok, piridin-karbonil-csoportok, tiofén-karbonil-csoportok és furán-karbonil-csoportok lehetnek különféle helyzetű izomerek és lehetnek például naftalin-1-karbonil-csoport, naftalin-2-karbonil-csoport, nikotinoil-csoport, izonikotinoil-csoport, N-metil-dihidro-piridin-3-karbonil-csoport, tiofén-2-karbonil-csoport, tiofén-3-karbonil-csoport, furán-2-karbonil-csoport és furán-3-karbonil-csoport. A naftalin-csoport, piridin-csoport, tiofén-csoport és fu

61.006/SM rán-csoport kívánt esetben további szubsztituenseket tartalmazhat, amelyeket a fentiekben megadtunk.

A találmány szerinti előnyös vegyületek azok, amelyekben az általános képletben R, R-ι és R₂ jelentése egy vagy két alkanoil-csoport, alkenoil-csoport vagy benzoil-csoport, amely benzoil-csoport Y, Y’ és Y” szubsztituenseket tartalmaznak, amelyek a fent leírt szubsztituensek lehetnek, különösen 1-4 szénatomszámú alkanoil-csoport vagy benzoil-csoport, amely kívánt esetben alkilcsoporttal vagy halogénatommal szubsztituált lehet.

Különösen előnyös találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek, amelyekben az általános képletben R, R·, és R₂ jelentése alkanoil-csoport vagy benzoil-csoport, előnyösen 1-8 szénatomszámú alkanoil-csoport, 1-8 szénatomszámú alkenol-csoport vagy benzoil-csoport, amely kívánt esetben egy alkilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat, a másik csoportok jelentése hidrogénatom. Különösen előnyösek azok az (I) általános képletü vegyületek, amelyekben az általános képletben R, R₁ és R₂ jelentése 1-8 szénatomszámú alkanoil-csoport, 1-8 szénatomszámú alkenoil-csoport vagy benzoil-csoport, amely kívánt esetben egy alkilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst, előnyösen metilcsoport, brómatom, klóratom vagy fluoratom szubsztituenst tartalmaz és a többi csoport jelentése hidrogénatom.

Különösen előnyös találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek, amelyekben az általános képletben R₁ jelentése 1-8 szénatomszámú alkanoil-csoport, 1-8 szénatomszámú alkenoil-csoport vagy benzoil-csoport, amely kívánt esetben alkilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmaz, amely szubsztituensek lehetnek metilcsoport, brómatom, klóratom vagy fluoratom, különösen előnyösen metilcsoport, brómaton, klóratom vagy fluoratom a para-helyzetben és ahol R és R₂mindegyikének jelentése hidrogénatom.

61.006/SM

A találmány szerinti különösen előnyös vegyületek az alábbiak, amelyeket részletesen felsorolunk:

1. [1S-(1a,6E,7a,8R,8aB)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6-benzoát;

2. [1 S-(1 a,6B,7a,8B,8aü)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-7-benzoát;

3. [1S-(1a,6B,7a,8B,8aB)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6-(4-metil-benzoát);

4. [1S-(1a,6B,7a,8B,8aB)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-7-(4-bróm-benzoát);

5. [1S-(1a,6B,7a,8B,8aB)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6,8-dibutanoát;

6. [1S-(1α,6β,7α,8β,8aβ)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6-butanoát;

7. [15-(1α,6β,7α,8β,83β)]-ο^3Ν0Γθ-1,6,7,8-ίηόοΙίζίη-{βϋΌΐ-6-(2-ίυΓέη^3ΰχ)ΧϊΙέί);

8. [1 S-(1 a^,7a^,8aR)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-7-(2,4-diklór-benzoát);

9. [1 S-(1 α,6β,7α,8β,83β)]-οΜ3ΝάΓθ-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6-(3-hexenoát);

10. [1 S-(1 α,6β,7α,8β,83β)]-οΜ3ί^Γ0-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6-oktanoát;

11. [1 S-(1 α,6β,7α,8β,83β)]-ο^3ΐηΐ0Γ0-1,6,7,8-indolizin-tetron-6-pentanoát.

Bizonyos találmány szerinti vegyületek az (I) általános képletü vegyületek közül előnyös, ilyen a [18-(1α,6β,7α,8β,83β)]-0^3ΐιί0Γ0-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6-butanoát.

A találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek előállítási eljárását az 5,017,563 számú 1991. május 21-én benyújtott amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben leírták, amely bejelentést referenciaként adunk meg. A castanospermin előállítási eljárását leírták az 5,066,807 számú 1991. november 19-én benyújtott amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben, amelyet szintén referenciaként adunk meg.

61.006/SM • ·

A találmány szerinti (II) általános képletű vegyületek, valamint hidrátjaik, izoszterjeik és gyógyszerészetileg elfogadható sóik olyan vegyületek, ahol az általános képletben x jelentése 0 vagy 1 egész szám;

P-i jelentése Q vagy B általános képletű csoport, ahol B jelentése a (IV) általános képletű csoport, azzal a feltéttéllel, hogy B jelentése nem p-hidroxi-benzil-csoport vagy p-alkoxi-benzil-csoport;

a jelentése 0,1,2 vagy 3 egész szám;

b jelentése 0 vagy 1 egész szám;

c jelentése 0, 1,2, 3, 4 vagy 5 egész szám;

d jelentése 1 vagy 2 egész szám;

e jelentése 0, 1 vagy 2 egész szám;

Q jelentése (V) általános képletü csoport;

P₂ jelentése 1-6 szénatomszámú alkilcsoport, ciklopentil-csoport, ciklohexil-csoport, 1-6 szénatomszámú hidroxi-alkilén-csoport, (VI) általános képletü csoport, ahol T jelentése hidrogénatom vagy C(O)R₄ általános képletű csoport, CH₂CONHR₄ általános képletü csoport vagy CH₂CONHR₄ általános képletű csoport;

R jelentése hidrogénatom, -CH₂CHO képletű csoport, hidroxi-1 -6 szénatomszámú alkilén-csoport, 1-6 szénatomszámú alkoxi-1-6 szénatomszámú alkilén-csoport, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport, fenilcsoport, (VII) általános képletű csoport vagy Q általános képletű csoport;

R-i jelentése benziloxi-csoport, 1-6 szénatomszámú alkoxi-csoport, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport, fenilcsoport, benzilcsoport, fenetil-csoport, fluorén-metilénoxi-csoport, 2-izokinolinil-csoport, PDL-csoport, (Vili) képletű csoport, (IX) képletű csoport, NHSO₂R₄ általános képletű csoport, N(R₄)(benzil) általános

61.006/SM • · · · · · · • · ·· · · ···· ··* ·*»· ·*·* · - 10képletű csoport és N(R₄)(PDL) általános képletű csoport, ahol PDL jelentése -(CH₂)_a-2-, 3- vagy 4-piridil-csoport vagy p-W-szubsztituált-benziloxi-csoport, ahol W jelentése nitrocsoport, hidroxilcsoport, aminocsoport, 1-6 szénatomszámú alkoxi-csoport vagy hidroxi-1-6 szénatomszámú alkilén-csoport vagy halogénatom;

R₃ jelentése 1-6 szénatomszámú allenil-1 -6 szénatomszámú alkoxi-csoport, 1-6 szénatomszámú alkoxi-1-6 szénatomszámú alkilén-csoport, hidroxi-1-6 szénatomszámú alkilén-csoport, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport, hidrogénatom vagy hidroxilcsoport;

R₄ jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport, fenilcsoport vagy benzilcsoport;

R₅ jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport, hidroxilcsoport, 1-6 szénatomszámú alkoxi-csoport, (X) általános képletű csoport, ahol W jelentése OR₄ általános képletű csoport vagy hidroxi-1-6 szénatomszámú alkilén-csoport, CH₂Si(CH₃)₂(R3) általános képletű csoport, -(CH₂)_d-Q általános képletű csoport, PDL képletű csoport, (IX) képletű csoport, (XI) általános képletű csoport, (XII) általános képletű csoport, -(1-6 szénatomszámú alkilén)-OR₄általános képletű csoport, vagy -CH(Y)(Z) általános képletű csoport, ahol Y jelentése hidroxi-1-6 szénatomszámú alkilén-csoport, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy (CH₂)_e-C₆H₄-(V)_e általános képletű csoport, és Z jelentése CHO-csoport, CO₂R₄ általános képletű csoport, CO₂NHR₄ általános képletű csoport vagy (CH₂)_e-OR₄ képletű csoport;

R₆ jelentése az R₅ jelentésével megegyező, azzal a feltétellel, hogy amennyiben R₅ jelentése hidrogénatom, akkor R₆ jelentése hidrogénatomtól eltérő, továbbá R₅ és R₆ jelentése együttesen a kapcsolódó nitrogénatommal együtt lehet (a) képletű, (b) képletű, (c) képletű, (d) általános képletű, (e) általános

61.006/SM • · képletü, (f) általános képletü, (g) képletü, (h) általános képletü vegy (i) általános képletü heterociklusos csoport;

R₇ jelentése CH₂OR₄ általános képletü csoport vagy C(O)NHR₄ általános képletü csoport;

R₈ jelentése (H,OH) csoport vagy oxocsoport.

Mint a gyógyszerészeti iparban alkalmazható vegyületek legtöbb csoportjára érvényes, bizonyos alcsoportok különösen előnyösen alkalmazhatók. A találmány szerinti vegyületek közül előnyösen alkalmazható vegyületek, ahol az általános képletben

R₅ jelentése hidrogénatom és továbbá;

R-i jelentése benzilcsoport, benziloxi-csoport, 4-alkoxi-benziloxi-csoport, morfolil-csoport, (XIII) általános képletü csoport, (3-piridil)-etil-csoport, izokinolil-csoport;

P₂ jelentése metilamid-csoport, izopropil-csoport, ciklopentil-csoport, 2-(4,4-difluor)-pirrolidil-csoport, 2-hidroxi-2-propil-csoport, terc-butil-csoport;

P·! jelentése piperonil-csoport, 4-(benziloxi)-benzil-csoport, 3-benziloxi-benzil-csoport, (4-benziloxi-3-metoxi)-benzil-csoport;

R₆ jelentése benzilcsoport, piperonil-csoport, CH₂-piridil-csoport, 4-benziloxi-benzil-csoport, morfolino-csoport, tetrahidro-izokinolil-csoport, 4-(3-hidroxi-propil)-benzil-csoport, 3-(3-hidroxi-propil)-benzil-csoport és (XIV) képletü csoport vagy -CH(Y)(Z) általános képletü csoport, ahol Y és Z jelentése a fent megadott, azonban különösen Y jelentése izopropil-csoport, amely előnyösen D-konfigurációjú, vagy fenilcsoport és Z jelentése benziloxi-metilén-csoport, formilcsoport, karboxilcsoport, alkoxicsoport vagy COOR₄ általános képletü csoport.

61,006/SM

- 12 Amennyiben R₅ jelentése hidrogénatomtól eltérő, előnyösen R₅ jelentése metilcsoport, 4-hidroxi-butil-csoport vagy 3-hidroxi-propil-csoport és R₆ jelentése benziloxi-csoport vagy benzilcsopor, valamint amennyiben R₅ és R₆ jelentése együttesen a kapcsolódó nitrogénatommal együtt heterociklusos-csoport, ez a heterociklusos csoport lehet az (f) perhidro-izokinolin-csoport, a (g) képletü csoport és a (c) képletü morfolino-csoport. Előnyös (II) általános képletü vegyületek azok, amelyeket az alábbiakban megadunk, illetve a példákban megadott termékek.

Különösen előnyös vegyületcsoport, amelyben a szubsztituenseket az alábbi vegyületekkel jellemezhetjük:

1. N-terc-butil-dekahidro-2[R(R)-hidroxi-4-fenil-3(S)-{[N-(2-kinolin-karbonil)-L-aszparaginil]-amino}-butil]-(4aS,8aS)-izokinolin-3(S)-karboxamid;

2· [1(S)-{[3,3-difluor-2,4-dioxo-1-{[4-(fenil-metil)-amino]-butil}-amino-karbonil]-2-metil-propil}-karbonsav, fenil-metil-észter; vagy

3. N-{4-[N-(benziloxi-karbonil)-L-valil]-amino-2,2-difluor-1,3-dioxo-5-(e-beniloxi)-fenil-pentil}-(0-benzil)-D-valinol.

A (II) általános képletü vegyületek egy előállítási eljárását, illetve a vegyületeket részletesebben leírták a WO 92/12123 számú nemzetközi szabadalmi bejelentésben, amelyet a Szabadalmi Együttműködési Egyezmény keretében tettek közzé és amelyet referenciaként adunk meg.

A találmány szerinti (I) és (II) vegyületekből álló készítményben található mindenegyes vegyület aszimmetrikus centrumot tartalmazhat és előfordulhat racemát, racém keverék, valamint egyes diasztereomer formában és a találmány tárgykörébe valamennyi formát beleértünk.

61.006/SM »·

-13- .....

Az (I) és (II) általános képletű előnyös vegyületek bármely kombinációban alkalmazhatók úgy, hogy az (I) általános képletű vegyület valamely csoportjából egyet és a (II) általános képletű vegyület csoportjából egyet alkalmazunk. Előnyösen alkalmazhatók például azok az (I) képletű vegyületek, melyek általános képletében Rt jelentése 1-8 szénatomszámú alkanoil-csoport, 1-10 szénatomszámú alkenoil-csoport, 1-8 szénatomszámú alkoxi-acetil-csoport vagy benzoil-csoport, amely kívánt esetben egy alkilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóját tartalmazhatja, továbbá (II) általános képletű vegyületet vagy hidrát izoszter vagy gyógyszerészetileg elfogadható só formáját tartalmazhatja, ahol az általános képletben Rt jelentése benziloxi-csoport, (XIII) képletű csoport, (3-piridil)-etil-csoport, izokinolil-csoport, 4-alkoxi-benziloxi-csoport vagy morfolil-csoport;

P₂ jelentése izopropil-csoport, ciklopentil-csoport, 2-(4,4-difluor)-pirrolidil-csoport,

2-hidroxi-2-propil-csoport, terc-butil-csoport;

P₁ jelentése piperonil-csoport, 4-benziloxi-benzil-csoport, 3-benziloxi-benzil-csoport, 4-benziloxi-3-metoxi-benzil-csoport, és amennyiben R₅ jelentése hidrogénatom, R₆ jelentése benzilcsoport, piperonil-csoport, CH₂-piridil-csoport, 4-benziloxi-benzil-csoport, morfolino-csoport, tetrahidro-izokinolil-csoport, 4-(3-hidroxi-propil)-benzil-csoport, 2-(3-hidroxi-propil)-benzil-csoport és (XIV) képletű csoport vagy -CH(Y)(Z) általános képletű csoport, ahol Y és Z jelentése a fent megadott, azonban különösen előnyösen Y jelentése izopropil-csoport, amely előnyösen D-konfigurációjú vagy fenilcsoport és Z jelentése benziloxi-metilén-csoport, formilcsoport, karboxilcsoport, alkoxi-csoport vagy COOR₄ általános képletű csoport, és amennyiben R₅ jelentése hidrogénatomtól eltérő, R₅ jelentése előnyösen metilcsoport, 4-hid

61.006/SM ···· ···» ««·· roxi-butil-csoport vagy 3-hidroxi-propil-csoport és ebben az esetben R₆ jelentése benziloxi-csoport vagy benzilcsoport vagy R₅ és R₆ jelentése a kapcsolódó nitrogénatommal együtt heterociklusos-csoport, amely előnyösen (g) képletű csoport és morfolino-csoport, tartalmazzák

A fenti kombináció alcsoportjait képezhetjük az (I) és a (II) képletű vegyületek alábbi csoportjaiból is.

61.006/SM

Οί τ

II ιη

Τ

	Ν C φ 12	Ν C φ 12	Ν C Φ 12
X X	X ο	X Ο	’χ Ο	X X	X X	Ν C φ
	’ν	ν	Ν			12
	C	C	C
	φ	φ	φ
	.Q	.Q	12
			'
	^τ		4

Ν C φ 12 ’ο.

Ο

ο σ Ν

I CO

Ν

C

CZ

C

£Ζ

C

Φ

φ

Φ

12

χ>

12

.Q

12

JD

12

xk.

x-k

X-k,

x-k

z-k

x-k

X

ο

Ν

ν

’ν

Ν

’ν

Ν

C

£Ζ

C

Φ

φ

12

η

12

η

12

X)

12

'-γ-'

'γ-'

Ύ-^ζ

Ύ**

''γ-''

'γ-'

Ύ*·*

xt

4

^τ

rt-

61.006/SM

61,006/SM

- tó'

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények alkalmas inhibitorai a retrovítusos proteázoknak, valamint a sejtbeni γ-glükozidáz I enzimnek, amelyek szükségesek a vírus replikációhoz, különösen a HIV-1 és a HIV-2 vírusok replikációjához. Ebből eredően alkalmasak a humán immunhiány vírus (HÍV) fertőzés megelőzésére vagy kezelésére, illetve az ilyen fertőzésből eredő patológiai állapot kezelésére, amely állapot lehet például a HÍV vírussal fertőzhető emlősökben az szerzett immunhiány szindróma (AIDS). Az AIDS kezelése (a HÍV fertőzés megelőzése vagy HÍV fertőzés kezelése) nem limitáltan olyan eljárás, amelynek során a HÍV fertőzés állapotainak széles körét kezeljük, amelyek lehetnek AIDS, ARC (AIDS-szel kapcsolatos komplex) és ez a kezelés a szimptómás, aszimptómás és aktuális vagy potenciális HÍV fertőzés kezelésre is vonatkozik. Például a találmány szerinti gyógyszerkészítmények alkalmasak a HÍV fertőzés megelőzésére, amennyiben a HÍV vírussal történő fertőzés lehetősége például vértranszfúzió, véletlenszerű tűszúrás vagy sebészeti beavatkozás során a beteg vérrel történő érintkezése, miatt fennáll.

Ebből a célból a találmány szerinti vegyületeket adagolhatjuk orális, parenterális (például szubkután injekció, intravénás, intramuszkuláris, transzdermális, intrasternális injekció vagy infúzió) úton vagy spré inhalációval vagy rektálisan dózisegység készítmény formában, amely továbbá nem toxikus gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot vagy segédanyagokat és kiszerelőanyagokat tartalmazhat.

Ebből eredően a találmány tárgya továbbá eljárás és gyógyszerkészítmény HÍV fertőzés és AIDS kezelésére. A kezelés során az ilyen kezelést igénylő betegnek valamely gyógyszerkészítményt adagolunk, amely azzal jellemezhető, hogy gyógyszerészeti hordozóanyagot, valamint a találmány szerinti (I) és (II) általános képletü vegyületek vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóik hatásos mennyiségét tartalmazza.

• ·

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények lehetnek orálisan adagolható szuszpenzió vagy tabletta, nazális spré, steril injektálható készítmény, mint például steril injektálható vizes vagy olajos szuszpenzió vagy kúp formák vagy ezeket lehet adagolni transzdermális úton.

Amennyiben a készítményt orálisan szuszpenzió formában adagoljuk, a készítményeket a gyógyszerészeti szakirodalomban jól ismert formulálási eljárásokkal állíthatjuk elő és a készítmény tartalmazhat hordozóanyagként mikrokristályos-cellulózt, szuszpendálószerként alginsavat vagy nátrium-alginátot, viszkozitás növelőként metil-cellulózt, illetve szakirodalomban ismert édesitő/ízesítő anyagokat. A közvetlen ható-anyag kibocsátású tabletta formák esetében a készítmények tartalmazhatnak mikro-kristályos-cellulózt, dikálcium-foszfátot, keményítőt, magnézium-sztearátot és laktózt és/vagy más kiszerelőanyagokat, kötőanyagokat, töltőanyagokat, dezintegráló szereket, higítóanyagot és kenőanyagokat, amelyek a szakirodalomban ismertek.

Az orális adagolás céljára az (I) általános képletü vegyületeket szilárd vagy folyékony készítménnyé alakíthatjuk, amely lehet például kapszula, pilula, tabletta, pirula, labdacs, olvadék, por, oldat, szuszpenzió vagy emulzió forma. A szilárd egységdózis forma lehet továbbá kapszula, amely szokásos kemény vagy lágy zselatin típusú lehet. Az ilyen forma például tartalmazhat felületaktív anyagokat, kenőanyagokat és inért töltőanyagokat, mint például laktóz, szukróz, kálcium-foszfát és kukoricakeményítő. Más megvalósítás szerint a találmány szerinti vegyületek tabletta formává alakíthatók szokásos tablettaalap hordozóanyagokkal, mint például laktóz, szukróz és kukoricakeményítő, kötőanyagokkal, mint például akácia, kukoricakeményítő vagy zselatin, dezintegráló szerekkel, amelyek elősegítik a tabletta adagolás utáni szétbomlását és oldódását, mint például burgonyakeményítö, alginsav, kukoricakeményítő és guar gumi, kenőanyagokkal, amelyek javítják a tabletta granulátum

61.006/SM • ·

-20 áramlási képességét és megakadályozzák, hogy ez a tabletta anyag a tablettázó gép felületéhez tapadjon, amely lehet például talkum, sztearinsav vagy magnézium-kálcium- vagy cink-sztearát, festékanyagokkal, színezőanyagokkal és ízesítőanyagokkal, amelyek javítják a tabletták esztétikai jellemzőit és ezeket a beteg számára elfogadható teszik. Az orális folyadék dózisformák esetében alkalmazható hordozóanyagok lehetnek higítóanyagok, mint például víz és alkoholok, például etanol, benzilalkohol és polietilén-alkoholok és ezek mellett kívánt esetben alkalmazhatunk gyógyszerészetileg elfogadható felületaktív anyagot, szuszpendálószert vagy emulzifikáló szert.

Amennyiben a találmány szerinti vegyületeket nazális aeroszol vagy inhalációs készítmény formában adagoljuk, a készítményeket a gyógyszerészeti szakirodalomban jól ismert eljárásokkal állítjuk elő és ezek lehetnek fiziológiás sóoldatban képzett oldatok, amelyekben benzilalkoholt vagy más alkalmas tartósítóanyagokat, továbbá a biológiai felszívódást javító abszorpció promotorokat, fluor-szénhidrogéneket és/vagy egyéb oldódást vagy diszpergálást elősegítő segédanyagokat alkalmazhatunk, amely anyagok a szakirodalomban ismertek.

Az (I) és (II) általános képletű vegyületeket tartalmazó készítmények továbbá adagolhatok parenterálisan, amely lehet szubkután, intravénás, intramuszkuláris vagy intraperitoneális adagolás és ebben az esetben a vegyületek injektálható dózisát képezzük fiziológiailag elfogadható higítóanyagokkal, amelyekben gyógyszerészeti hordozóanyagot alkalmazunk, amely lehet steril folyadék vagy folyadékok keveréke, mint például víz, fiziológiás sóoldat, vizes dextróz oldat és hasonló cukor oldatok; valamely alkohol, mint például etanol, izopropanol vagy hexadecil-alkohol; glikolok, mint például propilén-glikol vagy polietilén-glikol; glicerol-ketálok, mint például 2,2-dimetil-1,3-dioxolán-4-metanol; éterek, mint például poli-(etilén-glikol) 400; valamely olaj, valamely zsírsav, valamely zsírsav, észter vagy glicerid vagy egy

61.006/SM

-21 acetilezett zsírsav-glicerid és ezek a készítmények tartalmazhatnak továbbá kívánt esetben gyógyszerészetileg elfogadható felületaktív anyagokat, mint például szappant vagy valamely detergenst, szuszpendálószereket, mint például pektint, karbomereket, metil-cellulózt, hidroxi-propil-metil-cellulózt vagy karboxi-metil-cellulózt vagy emulzifikáló szert és egyéb gyógyszerészeti segédanyagot. Alkalmazható olajok a parenterális készítményekben a találmány szerint lehetnek petróleum, állati, növényi vagy szintetikus eredetű olajok, például mogyoróolaj, szójaolaj, szezámolaj, gyapotmagolaj, kukoricaolaj, olívaolaj, petrolátum és ásványi olaj. Alkalmazható zsírsavak lehetnek olajsav, sztearinsav és izosztearinsav. Alkalmazható zsírsav észterek lehetnek például etil-oleát és izopropil-mirisztát. Alkalmazható szappanok lehetnek zsírsav-alkálifém, ammónium vagy trietanol-amin sók és alkalmas detergensek lehetnek kationos detergensek, mint például dimetil-dialkil-ammónium-halogenidek, alkil-piridinium-halogenidek, és alkil-amin-acetátok, anionos detergensek, például alkil-aril- és olefin-szulfonátok, alkil-olefin-éter és monoglicerid szulfátok és szulfoszukcinátok, nem-ionos detergensek, mint például zsírsav-amin-oxidok, zsírsav-alkanol-amidok és polioxi-etilén-polipropilén kopolimerek, továbbá lehetnek amfoter detergensek, mint például alkilú-amino-propionátok és 2-alkil-imidazolin-kvaternerammónium sók, továbbá ezek keverékei.

Amennyiben a találmány szerinti készítményt rektális úton adagoljuk kúp formában, az ilyen készítményeket úgy állíthatjuk elő, hogy a hatóanyagot alkalmas nem irritáló hordozóanyaggal, mint például kakaóvajjal, szintetikus glicerid-észterekkel vagy polietilén-glikolokkal elegyítjük, amely utóbbiak szobahőmérsékleten szilárd halmazállapotúak, viszont a rektális üregben elfolyósodnak és/vagy oldódnak és így a hatóanyagot kibocsátják.

A találmány szerinti addíciós sók lehetnek kationos vagy anionos sók és ezek a sók azok, amelyek a kívánt hatás eléréséhez szükséges adagolt dózisban lénye61.006/SM • ·

- 22 gében nem toxikusak és önmagukban nem fejtenek ki jelentős farmakológiás aktivitást. Az (I) és (II) általános képletű készítmények átalakítását függetlenül vagy egymás mellett végezhetjük különféle addíciós sóvá, illetve ezeknek a sóknak a formulálását együttesen vagy párhuzamosan végezhetjük. Alkalmazható kationos sók például az alálifém, mint például a nátrium és kálium sók, az alkáliföldfém, mint például a kálcium és magnézium sók, a (Illa) csoportba tartozó könnyűfém, mint például alumínium sók és a szerves primer-szekunder- és tercier-aminokkal képzett sók, mint például trialkil-aminokkal, például trietilaminnal, prokainnal, dibenzil-aminnal, 1-etén-aminnal, Ν,Ν’-dibenzil-etilén-diaminnal, dihidro-abietilaminnal, N-kis szénatomszámú alkil-piperidinnel képzett sók vagy más alkalmas aminnal képzett sók. Az előnyösen alkalmazható sók a nátriumsók. Elfogadható savaddíciós sók is előállíthatok úgy, hogy az ilyen vegyületeket szokásos eljárásnak megfelelően szervetlen savval, mint például sósavval, kénsavval, salétromsavval, foszforsavval, stb. vagy valamely szerves savval, mint például ecetsavval, citromsavval, maleinsavval, fumársavval, bórkősavval, metánszulfonsavval, p-toluolszulfonsavval reagáltatjuk.

A fent jelzett betegségek kezelésében vagy megelőzésében orális dózis esetében két vagy öt alkalommal vagy ennél több alkalommal történő adagolásban a hatásos dózisszint általában 0,02-5,0 vagy 10,0 g/nap készítmény. Például a HÍV fertőzést hatásosan kezelhetjük napi 1-3 alkalommal történő adagolással 10-50 mg vegyület/kg testtömeg dózis adagolásával. Természetesen az adott dózisszintet és a dózis adagolásának gyakoriságát az adott beteg esetében a kezelőorvos által határozza meg és ez változhat és függ több faktortól, mint például az adagolt vegyületek aktivitása, a kombinációban adagolt vegyületek metabolitikus stabilitása és hatásának időtartama, a beteg kora, testtömege, általános egészségi állapota, neme, étkezési formája, az adagolás útja és időpontjai, a kiválasztás sebessége, az adott be

61,006/SM • «

-23 tegség súlyossága és ebben adagolt hatóanyag kombináció, illetve az egyéb párhuzamosan adagolt terápia.

A találmány tárgya továbbá HÍV proteáz inhibitor hatású vegyületek kombinációja egy vagy több olyan hatóanyaggal, amely alkalmas AIDS kezelésére, mint például olyan ismert olyan vírusellenes szerekkel, amelyek alkalmasak a HÍV 1 és HÍV 2 vírusos fertőzések kezelésére, például castanospermin (I) általános képletü vegyületek és (II) általános képletü vírus proteáz inhibitor vegyületek kombinációja. Például a találmány tárgya az (I) általános képletü glükoprotein kialakítást inhibiáló vegyület és az aszpartil proteáz specifikus (II) általános képletü inhibitor vegyület alkalmazása és gyógyszerkészítmény előállítása, amely gyógyszerkészítmény alkalmas szimultán, külön vagy sorrendi alkalmazásra HÍV fertőzés kezelésében, ahol a fenti vegyületek az (I) általános képletü vegyület vagy gyógyszerészetileg elfogadható sója, ahol az általános képletben

R-! 1-8 szénatomszámú alkanoil-csoport, 1-10 szénatomszámú alkenoil-csoport,

1- 8 szénatomszámú alkoxi-acetil-csoport vagy benzoil-csoport, amely kívánt esetben alkilcsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmazhat és a (II) általános képletü vegyület vagy hidrát vagy izoszter vagy gyógyszerészetileg elfogadható só formája, ahol az általános képletben R-j jelentése benziloxi-csoport, (XVIII) képletü csoport (3-piridil)-etil-csoport, izokinolil-csoport,

4-alkoxi-benziloxi-csoport vagy morfolil-csoport;

2- hidroxi-2-propil-csoport, terc-butil-csoport;

P-ι jelentése piperonil-csoport, 4-benziloxi-benzil-csoport, 3-benziloxi-benzil-csoport, 4-benziloxi-3-metoxi-benzil-csoport, és amennyiben R₅ jelentése hidrogénatom, R₆ jelentése benzilcsoport, piperonil-csoport, CH₂-piridil-csoport,

4-benziloxi-benzil-csoport, morfolino-csoport, tetrahidro-izokinolil-csoport,

61.006/SM

4-(3-hidroxi-propil)-benzil-csoport, 2-(3-hidroxi-propil)-benzil-csoport, és (XIV) képletű csoport vagy -CH(Y)(Z) általános képletű csoport, ahol Y és Z jelenté se a fent megadott és különösen Y jelentése izopropil-csoport, amely előnyösen D-konfigurációjú vagy fenilcsoport, továbbá Z jelentése benziloxi-metilén-csoport, formilcsoport, karboxilcsoport, alkoxicsoport vagy COOR₄ általános képletű csoport, és amennyiben R₅ jelentése nem hidrogénatom, előnyösen R₅ jelentése metilcsoport, 4-hidroxi-butil-csoport vagy 3-hidroxi-propil-csoport és ugyanakkor R₆ jelentése benziloxi-csoport vagy benzilcsoport, továbbá R₅és R₆ jelentése a kapcsolódó nitrogénatommal együtt lehet heterociklusos-csoport és ez előnyösen (XXV) képletű csoport és morfolino-csoport, továbbá a fenti kombináció alcsoportjait is beleértjük a találmány tárgykörébe, amelyeket az (I) és a (II) általános képletű vegyületek csoportjaiból képezünk.

Az (I) és (II) általános képletű vegyületeket tartalmazó előnyös készítmények azok, amelyek legalább 10% (I) általános képletű vegyületet, továbbá azok a készítmények, amelyek legalább 10% (II) általános képletű vegyületet tartalmaznak.

A találmány szerinti készítményeket és vegyületeket HÍV replikáció inhibiálásban tesztvizsgálatnak vetettük alá és az alábbi eljárásokat alkalmaztuk.

Kísérleti eljárások

Az alábbi példákban a találmány szerinti készítmény és eljárás különböző jellemzőit mutatjuk be. Az alábbiakban leírt reagensek, sejtvonalak, vírustörzsek és tesztvizsgálatok bemutatják a találmány szerinti korábban leírt készítmények alkalmazhatóságát. A tesztvizsgálatokkal kapcsolatos további eljárások és módszerek a szakirodalomban ismertek.

A fent leírt készítmények HIV-1 növekedését befolyásoló hatását vizsgáltuk abból a célból, hogy meghatározzuk milyen lehetőséget biztosítanak az AIDS mint HÍV alkalmas modell kezelésében.

61.006/SM

-25« · · · · · · • · ·« « ·

Hatóanyag kombináció tesztvizsgálat

A hatóanyag kombinációk tesztvizsgálatában az MTT sejt élhetőségi tesztvizsgálatot (Pauwels és munkatársai, J. Virol. Methods, 1988, 20, 309-321) alkalmaztuk. Különféle hatóanyag kombinációkat készítettünk úgy, hogy egy olyan táblázatot állítottunk elő, amelynek során az egyik vegyületet vízszintesen titráltuk, a második vegyületet pedig függőlegesen helyeztük el egy 96 üreges mikrotiter lemezen több utas pipetták alkalmazásával. 6 pl térfogatú lemezek szükségesek mindenegyes tesztvizsgálathoz (csak a belső 60 üreg) és mindenegyes hatóanyag kombinációt négyszeres üregben készítettünk el. A kettes hígításokat vagy fél lóg hígításokat állítottunk elő és a vég sorokban levő hatóanyagmentes üregeket készítettünk.

100 TCID₅₀ HIV-1_RF per 5 x 10⁴ sejt értékben NT-4 sejteket fertőztünk, majd mindenegyes üregbe 5 x 10⁴ sejt per üreg koncentrációt adagoltunk. Az így kapott elegyet 37°C hőmérsékleten 6 napon át inkubáltuk, majd 10 μΙ savanyított izopropanolt adtunk a lemezhez és Multiscan MCC/340 spektrofotométerrel 540nm érték mellett (Flow Laboratories) a lemezeket leolvastuk. A soronkénti lemezadatokat egy floppy lemezen Ultroterm (LKB) segítségével rögzítettük. Ezt követően az adat redukciót Excel (Microsoft) segítségével végeztük. Ez lehetővé tette mindenegyes hatóanyag kombináció esetében az O.D. értékek számítását, illetve egy 19 dózisválaszfüggvény megalkotását, azaz mindenegyes hatóanyag dózis válaszfüggvényét, miközben a másik hatóanyag állandó értékű volt és ezt a görbét minimális felhasználó beavatkozással állítottuk elő. A felső bal négy sarok üreget, amelyben a legnagyobb koncentrációt alkalmaztuk mindenegyes hatóanyagból, pozitív kontrollként (azaz ezekben a sejtek élhetősége tökéletesen védett) kezeltük és a négy jobboldali alsó sarokban található üreget negatív kontrollként használtuk, mivel ezekben nem alkalmaztunk hatóanyagot (azaz tökéletes sejtpusztulás történt).

61.006/SM

A hatóanyag kombináció analízise Isobolic eljárással

A dózis-válaszfüggvény görbékből mindenegyes hatóanyag IC₅₀ értékét önmagában vagy kombinációban a másik hatóanyag állandó koncentrációjával meghatároztuk és isobologrammot állítottunk fel [Suhnel, Antiviral Research 13, 23-40 (1990)]. Meghatározhatjuk az isobole alakját és ebből megállapítottuk, hogy a hatóanyag szinergetikus viszonyban van (konkáv) additív hatást gyakorol (lineáris) vagy antagonizmust mutat (konvex). Ezen túlmenően a kombinációs indexet (IC) is meghatároztuk (Suhnel, 1990).

Mindenegyes vegyület esetében a másik vegyület állandó koncentrációja mellett a dózis-válasz függvényekből a táblázatból meghatározható az ED₅₀ érték.

Ezekből az adatokból meghatároztuk a kombinációs indexet (Cl) az alábbi képlet alapján:

(D)i + (D)₂ + a(D)₁ (D)₂

Cl = ------------------------------------(DX)-| (DX)₂ (Dx)-i (Dx)₂ ahol a = 1 mindként esetben nem kizárólagos hatóanyagokra és (DX^ = IC₅₀ a fenti I hatóanyagra, (DX)₂ = IC₅₀ a fenti II hatóanyagra, (D)_d és (D)₂ = az I és II hatóanyag koncentrációja a készítményben, amely 50%-os inhibiálást biztosít.

Amennyiben ez az érték:

< 1 (szinergizmus);

Cl = 1 (0 kölcsönhatás);

> 1 (antagonizmus).

[J. Suhnel, Antiviral Research 13 (1990), 23-40]

61.006/SM

1. példa

RO-31-8959 és MDL7369 vírusellenes aktivitása BUCAST alkalmazásával

Három proteáz inhibitort az MLD 73669 (1A és 1B táblázatok) az RO-31-8959 vegyületet (2A és 2B táblázatok) és MDL 74538 (3A és 3B táblázatok) vizsgálunk az MDL 28574 (BUCAST) glükoprotein kialakulás inhibitorral kombinációban. A különféle vegyületek kombinációban található eltérő koncentrációjának hatását vizsgáltuk a kombinációban úgy, hogy meghatároztuk a vírusellenes aktivitást a sejt élhetőség tesztvizsgálattal, amelyet korábban leírtunk. A vegyületekkel és készítményekkel végzett tesztvizsgálat lehetővé tette, hogy meghatározzuk az adatokból a szinergetikus kölcsönhatásokat ezen adatok analízisével és így a kombinációs indexet (I.C.).

A vegyületekre az alábbi rövidítéseket alkalmaztuk:

MDL 73669 = [1 (S)-{[3,3-difluor-2,4-dioxo-1-{[4-(fenil-metoxi)-fenil]-metil}-4-[(fenil-metil)-amino]-butil]-aminokarbonil}-2-metil-propil}-karbonsav, fenil-metilészter;

MDL 74538 = N-{4-[N-(benziloxi-karbonil)-L-valil]-amino-2,2-difluor-1,3-dioxo-5-(4-benziloxi-fenil)-pentil}-(O-benzil)-D-valinol;

MDL 28574 = (Bucast) [1S-(1a,6B-7cc,8B,8aB)]-oktahidro-1,6,7,8-indolizin-tetrol-6-butanoát;

RO-31 -8959 = N-terc-butil-dekahidro-2{2(R)-hidroxi-4-fenil-3(S)-[/N-(2-kinolil-karbonil)-L-aszparaginil/-amino]-butil}-(4aS,8aS)-izokinolin-3(S)-karboxamid.

61.006/SM

ΙΑ és ΙΒ táblázatok

Az MDL 73669 és az MDL 28574 koncentrációi kombinációban és önmagukban, amely ahhoz szükséges, hogy a HIV-1_RF által felrtözött MT-4 sejtek 50%-os védelmét biztosítsák, illetve az ezen értékekből számított kombinációs indexek

Fixált konc. MDL 73669 (μΜ)	Ιθ50 MDL 28574 μ	C.I.*
0	100	-
0,0001	100	-
0,0003	100	-
0,001	45	0,45
0,003	25	0,25
0,010	21	0,22
0,03	32	0,37
0,1	20	0,4
0,3	30	0,95
1	-	-

* A kombinációs indexek (C.l.) szinergizmust jeleznek

Fixált konc. MDL 28574 (μΜ)	1^50 MDL 73669 μ	C.I.*
0	0,6	-
0,1	0,55	-
0,3	0,6	-
1	0,5	0,85
3	0,5	0,89
10	0,42	0,87
30	0,002	0,3
100	-	-
300	-	-

* A kombinációs indexek (C.l.) szinergizmust jeleznek

61.006/SM

I.* ' *

-29• 9 fi 9 9 · ·

9 9· · · ·»♦♦ ·· ·« ·· ·

2A és 2B táblázatok

Az RO-31-8959 és az MDL 28574 koncentrációi kombinációban és önmagukban, amely koncentrációk ahhoz szükségesek, hogy a HIV-1_RF fertőzött MT-4 sejtek 50%-os védelmét biztosítsák, továbbá az ezen értékekből számított kombinációk indexek

Fixált konc. RO-31-8959 (μΜ)	1^50 MDL 28574 μ	C.I.*
0	100	-
0,1	50	0,52
0,3	60	0,66
1	12	0,28
3	6,8	0,52
10	-	-
30	-	-
100	-	-

* A kombinációs indexek (C.l.) szinergizmust jeleznek

Fixált konc. MDL 28574 (μΜ)	1^50 RO-31-8959 μ	C.I.*
0	6,9	-
0,1	6,1	-
0,3	9,0	-
1	6,1	-
3	12	-
10	1,4	0,32
30	0,38	0,37
100	-	-
300	-	-

* A kombinációs indexek (C.l.) szinergizmust jeleznek

61.006/SM

».> ' »

3Α és 3B táblázatok

A 74538 és az MDL 28574 koncentrációi kombinációban és önmagukban, amely ahhoz szükséges, hogy a HIV-1_RF fertőzött MT-4 sejtek 50%-os védelmét biztosítsák és ezen értékekből számított kombinációs indexek

Fixált konc. MDL 74538 (μΜ)	IC50 MDL 28574 μ	C.I.*
0	23	-
0,1	20	0,87
0,3	95	0,42
1,0	25	1,1
3,0	8,2	0,43
10,0	6,2	0,39
30,0	3,0	0,48

* A kombinációs indexek (C.l.) szinergizmust jeleznek

Fixált konc. MDL 28574 (μΜ)	IC50 MDL 74538 μ	C.I.*
0	100	-
3,0	30	0,47
10,0	2	0,46

* A kombinációs indexek (C.l.) szinergizmust jeleznek

Claims

1. Gyógyszerkészítmény, amely hatóanyagként valamely (I) képletü vegyületet vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóját, amely [1 S-(1 a,6b,7a,8b,8ab]-oktahidro-1,6-7,8-indolizin-tetrol-6-butanoát és valamely, a (II) képletü vegyületet, hidrátjait, izoszter formájit vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóit, amely

N-terc-butil-dekahidro-2[R(R)-hidroxi-4-fenil-3(S)-{[N(2-kinolil-karbonil)-L-aszparaginil]-amino}-butil]-(4aS,8aS)-izokinolin-3(S)-karboxamid;

[1(S)-{[3,3-difluor-2,4-dioxo-1-{[4-(fenil-metil)-amino]-butil}-amino-karbonil]-2-metil-propil}-karboxaminsav, fenil-metil-észter; és

N-[4-(N-benziloxi-karbonil-L-valil)-amino-2,2-difluor-1,3-dioxo-5-(e-benziloxi)-fenil]-(0-benzil)-D-valinol;

tartalmazza.

2. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelyben a (II) képletü vegyület legalább 10% mennyiségben található.

3. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelyben az (I) képletü vegyület legalább 10% mennyiségben található.

4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, amely parenterális adagolásra alkalmas.

5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az (I) képletü vegyületet és a (II) képletü vegyületet fiziológiailag elfogadható só vagy más formában tartalmazza és gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot is tartalmaz.

6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény alkalmazása HÍV fertőzés kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.

61.006/SM

7. Készítmény, amely az 1. igénypontban megadott (II) képletű vegyületet tartalmazza, amely alkalmas HÍV fertőzés párhuzamos, külön vagy egymást követő kombinált kezelésére.