HUT67667A - Pharmaceutical composition causes inhibition of phosphatidylinositol-3-kinase containing wortmannin and analogs thereof and process for its production - Google Patents
Pharmaceutical composition causes inhibition of phosphatidylinositol-3-kinase containing wortmannin and analogs thereof and process for its production Download PDFInfo
- Publication number
- HUT67667A HUT67667A HU9402128A HU9402128A HUT67667A HU T67667 A HUT67667 A HU T67667A HU 9402128 A HU9402128 A HU 9402128A HU 9402128 A HU9402128 A HU 9402128A HU T67667 A HUT67667 A HU T67667A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- kinase
- formula
- phosphatidylinositol
- compound
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
Description
“KIVONAT analógj aival
ÉLI LILLY AND COMPANY, INDIANAPOLIS, Indiana,
AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK
A bejelentés napja: | 1994. 07. 18. |
Elsőbbsége: | 1993. 07. 19. (08/094,279), AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK |
A találmány tárgya az emlősök foszfatidil-inozitol-3-kináz enzimét gátló, a nevezett enzimmel kapcsolatos állapotuk ideértve a neoplazmát * kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyag az. '(I) általános képletű, ahol R jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport -, (II) képletű, vagy (III) általános képletű, ahol R1 jelentése hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport és R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, vegyület, valamint eljárás a nevezett gyógyszerkészítmény előállítására.
2 22! 2 59.154/SZE | S.B.G. & K. ««öapesH Nemzetközi ,,.///1 a Imi iroda j' / Budapest. Dalszínház u. JO. .WV /53-3733, Fax; Ϊ53-3664 | ·..···:··..· ...... | Á |
: A eíu -s I M | ι I íS /Γ*ϊ |
67687 τ ..... ’ ' ccj
Foszfatidil-inozitol-3-kináz gátlásai Wortmanninnal és , , ii | ’ (-Ζ - ., analógjaival)
ÉLI LILLY AND COMPANY, INDIANAPOLIS, Indiana,
AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK
Feltalálók.:
BONJOUKLIAN Rosanne, ZIONSVILLE, Indiana,
POWIS Garth, TUSCON, Arizona,
VLAHOS Chris John, CARMEL, Indiana,
AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK
A bejelentés napja: 1994. 07. 18.
Elsőbbsége:
1993. 07. 19. (08/094,279),
AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK
A találmány tárgya eljárás foszfatidil-inozitol-3-kináz (Pl
3-kináz) gátlására lizált és teljes sejtekben, ami abból áll, hogy a lizált vagy teljes sejteket Wortmannin néven ismert vegyülettel vagy a Wortmannin analógok valamelyikével kezeljük. A vegyületek felhasználhatók az emlősök és az ember szervezetében is a foszfatidil-inozitol-3-kináz szelektív gátlására és a foszfatidil-inozitol3-kinázzal összefüggésben lévő állapotok különösen az emberi neoplazmák - kezelésére.
Az inozitol-foszfolipidek metabolizmusáról feltételezik, hogy lényeges része van a különféle hormonokra és növekedési faktorokra adott válaszok receptorok által közvetített jelátalakító folyamataiban [Berridge M. J. és munkatársai, Natúré, 312:315-321 (1984); Nishizuka Y., Science, 225:1365-1370 (1984).
Ebben a jeladó folyamatban két intracelluláris másodhírvívő keletkezik a foszfatidil-inozitol-4,5-difoszfátnak foszfolipáz Cvel történő hidrolízise során: az inozitol-1,4,5-trifoszfát és a diacil-glicerin. Az inozitol-1,4,5-trifoszfát kalciumionokat (Ca2+) szabadít fel ;az intracelluláris kalciumion-forrásokból, ami a Ca2+/kalmodulin-függő kináz aktiválódásához vezet; a diacil-glicerin a protein-kináz-C-t aktivizálja. A lebomlást követően a foszfatidil-inozitol-4,5-difoszfát gyorsan újraszintetizálódik a foszfatidil-inozitolnak a foszfatidil-inozitol-4-kináz és a foszfatidil-inozitol-4-foszfát-kináz katalizálta lépcsőzetes foszforilációja révén. Ez a két kináz fontos szerepet látszik játszani a másodhírvívők keletkezésében [Duell, T. F., 5 001 064 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom (1991);
Shibasaki F. és munkatársai, J. Bioi. Chem., 266 (13):8108-8114 (1991)] .
Újabban egy másik foszfatidil-inozitol-kinázt azonosítottak és hoztak kapcsolatba bizonyos aktíváit tirozin-kinázokkal [Courtneidge, S. A. és munkatársai, Cell, 50: 1021-1029 (1987). Ez a fosztatidil-inozitol-3-kináznak meghatározott kináz a foszfatidil-inozitol (Pl) inozitol gyűrűjét fosztorilálja a 3-as helyen, fosztatidil-inozitol-3-foszfátot (I-3P) eredményezve [Whitmann D. és munkatársai, Natúré, 332:664-646 (1988)].
A foszfatidil-inozitolon kívül ez az enzim a foszfatidil-inozitol-4-foszfátot és a fosztatidil-inozitol-4,5-bifoszfátot is képes foszforilálni foszfatidil-inozitol-3,4-difoszfátot, illetve foszfatidil-inozitol-3,4,5~trifoszfátot (PIP3) termelve [Anger K. R . és munkatársai, CE11: 57:167-175 (1989)].
A Pl 3-kináz fizikailag kapcsolatban van tirozin-kinázokkal, mint amilyen a pp60v_src, polioma közép T/pp60c_src, vérlemezke növekedési faktor receptor, telep stimulációs faktor-1 receptor és inzulinrecéptor (Shibasaki, 1. fent), ami arra utal, - hogy noha még nem ismert, de - fontos szerepet játszik a jelátalkításban és más olyan celluláris eseményekben, melyben a Pl 3-kinázzal kapcsolatban lévő és azt aktiváló protein tirozin-kinázok részt vesznek. A Pl 3-kináz aktivitást ugyancsak megállapították a neutrofil leukocitákban és a vérlemezkékben lévő G-protein receptorokkal kapcsolatban [Traynor-Kaplan, A. E. és munkatársai, Natúré, 334:353-356 (1988); Mitchell, C. A. és munkatársai, Proc. Nat. Acad. Sci., 87:9396-9400 (1990)]. A
I « .* : . · · · .· *·· ·· ····
- 4 neutrofil leukocitákban lévő Pl 3-kináz aktiválása azonban a tirozin-foszforilációtól függetlenül történik (Vlahos C. J. és munkatársai, FEBC Letters, 309 (3):241-248 (1992)].
A Pl 3-kináz egy 85 kDa-os szabályozó alegység és egy 110 kDA-os katalitikus alegység szoros heterodimerjeként létezik, és celluláris komplexben található csaknem valamennyi ligand- aktíváit növekedési faktor receptorral és onkogén protein tirozin-kinázzal [Cantley L. C. és munkatársai, Cell, 64:281-302 (1991)]. A 85 kDa-os szabályozó alegyeség olyan adapterproteinként működik, ami lehetővé teszi a Pl 3-kináz 110 kDa-os katalitikus alegysége számára, hogy kölcsönhatásba lépjen növekedési faktor receptorokkal és a tirozin foszforilált proteinekkel [Margolis
C., Cell Groth Differ., 3:73-80 (1992)].
Noha a Pl 3-kináz fontos enzimnek tűnik a jelátalakító folyamatokban, csak korlátozott számú vegyületről állapították meg, hogy gátló hatású a Pl 3-kinázra [például Matter W. F. és munkatársai, Biochem. Biophys. Rés. Commun., 186:624-631 (1992)].
Ellentétben a j'elen találmány szerinti vegyületekkel, melyek szelektív hatással vannak a Pl 3-kinázra, Matter és munkatársai által alkalmazott bioflavinoid vegyületek, főleg a kvercetin és egyes analógjai, a Pl-3-kináz mellett más kinázokat, például a protein kináz C-t és a Pl 4-kinázt is gátolják (Matter és munkatársai , 1. fent).
A jelen találmány tárgya tehát eljárás foszfatidil-inozitol-3-kináz gátlására lizált vagy teljes sejtekben Wortmannin vagy egyes Wortmannin-analógok felhasználásával.
A találmány további tárgya, eljárás a fosztatidil-inozitol-3-kináz gátlására emlősökben és főleg emberben, Wortmannin vagy egyes Wortmannin analógok felhasználásával.
A találmány további tárgya eljárás a foszfatidil-inozitol-3-kinázzal kapcsolatos állapotok, elsősorban az emlősök neoplazmáinak kezelésére.
Közelebbről, a találmány tárgya, eljárás lizált vagy teljes sejtek foszfatidil-inozitol-3-kinázának gátlására, ami abból áll, hogy a lizált vagy teljes sejteket (I) általános képletű - ahol R jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport -, (II) képletű vagy (III) általános képletű - ahol Rjelentése hidrogénatom, metilvagy etilcsoport; R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport vegyülettel kezeljük.
A találmány további tárgya eljárás emlősök foszfatidil-inozitol-3-kinázának gátlására, ami abból áll, hogy a nevezett emlős szervezetébe a fenti (I) általános képletű, (II) képletű vagy (III) általános képletű vegyület valamelyikének gátló hatású mennyiségét juttatjuk be.
A találmány további tárgya eljárás emlősök foszfatidil-inozitol-3-kinázzal kapcsolatos állapotának kezelésére, ami abból áll, hogy a kezelésre szoruló szervezetbe az (I) általános képletű, a (II) képletű vagy a (III) általános képletű vegyületek valamelyikének a foszfatidil-inozitol-3-kinázt gátló mennyiségét juttatjuk be.
Az (I), (II) és (III) képletű vegyületek ismertek a szakterületen. Az I. táblázatban feltüntetjük a jelen találmány
szerinti eljárásban alkalmazott előnyös vegyületek triviális neveit.
I. TÁBLÁZAT
A Wortmannin és az előnyös Wortmannin-analógok képlet R R1 R2 triviális név
(la) acetoxi | - | - | Wortmannin |
(Ib) H | - | - | 11-dezacetoxi-Wortmannin |
(II) | - | - | /χ 9, 11-dehidro-dezacetoxi- |
-wortmannin | |||
(Illa) | H | H | nyitott A gyűrűjű |
wortmannin-sav | |||
(Illb) | metil | H | nyitott A gyűrűjű |
wortmannin-észtér | |||
A Wortmannin | (ía) | bioszintetikus | előállítása jól ismert a |
szakterületen. Előállítása tipikusan az alábbi mikroorganizmusok egyikének fermentálásával történhet: Talaromyces Wortmannin [Nakanishi és munkatársai, J. Bioi. Chem., 167 (4):2157-2163 (1992)], Penicillium wortmannii, Myrothecium roridium és Fusarium oxysporum [Abbas és munkatársai, Appl. Environ. Microbiol., 54 (5):1267-1274 (1988)]. A fermentációt követően a Wortmannin az ismert módszerekkel extrahálható és tisztítható.
A Wortmannint előnyösen mikrobiológiai úton az A24603.1 • « törzs fermentálásával állítjuk elő és ennek fermentlevéből gyakorlatilag tiszta állapotban nyerjük ki.
Az A24603.1 törzs a Budapesti Egyezmény szerint lett letétbe helyezve a Midwes Area Northern Régiónál Research Center törzsgyűjteményében (Agricultural Research Service, United States Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois, 61604) .
A Wortmannin előállításához a fenti A24603.1 törzset süllyesztett tenyészetben fermentáljuk; alkalmas tápközegben, aerob körülmények között, amíg kinyerésre alkalmas mennyiségű Wortmannin nem termelődik. A Wortmannin kinyeréséhez az ismert izolációs és tisztítási eljárásokat alkalmazhatjuk.
Az A24603.1 törzs tenyésztéséhez bármelyik alkalmas tápközeget felhasználhatjuk. Gazdasági megfontolásokból, az optimális hozadék és a termék könnyű kinyerése szempontjából azonban a nagyméretű fermentálás előnyös szénforrása a glükóz és az oldható - például kukorica - keményítő. Ugyancsak használható szénforrás a maltózp ribóz, xilóz, fruktóz, galaktóz, mannóz, mannitol, burgonya dextrin, metil-oleát, olajok, például szőjaolaj, stb.
Előnyös nitrogénforrás az enzimmel hidrolizált kazein és gyapotmagliszt, noha ugyancsak használható a pepszinnel kezelt tej, az emésztett szójaliszt, halliszt, kukoricalekvár, élesztőkivonat, savval hidrolizált kazein, marhahúskivonat, stb.
A szervetlen tápsók a kalcium-, magnézium-, nátrium-, ammónium-, klorid-, karbonát-, szulfát-, nitrát-, cink- és ···; ; · · · · · . ί . · : :
hasonló ionokat szolgáltató oldható sók.
A mikroorganizmus növekedéséhez és fejlődéséhez esszenciális nyomelemekre van szükség, ezek azonban a tápközeg más komponenseinek szennyezéseként kellő mennyiségben általában jelen vannak.
A Wortmannin kellő mennyiségű termelődéséhez előnyös a süllyesztett aerob fermentálást kevertetett bioreaktorokban végezni, kis mennyiségű Wortmannin rázott lombikokban is előállítható. A spórákkal beoltott nagy bioreaktorokban lezajló növekedés lag fázisa miatt, előnyös a reaktort vegetatív oltóanyaggal beoltani. A vegetatív oltóanyag előállításához a kis térfogatú tápközeget spórával vagy micéliumfragmensekkel oltjuk be, és így egy aktívan növekvő tenyészethez jutunk.
Az A24603.1 mikroorganizmus 23-29°C hőmérsékleten termel Wortmannint, a termelés optimális hőmérséklete 25°C.
Amint az a süllyesztett tenyészeteknél szokásos, az edény aljáról steril levegőt buborékoltatunk, miközben a tenyészetet a szokásos terelőlapátos keverővei kevertetjük. A levegőztetés és a kevertetés mértékét ‘rendszerint úgy állítjuk be, hogy az oldott oxigén szintje legalább elérje egy 5 atm. nyomású edényben kialakult levegőtelítettségnek 45 %-át.
A Wortmannin termelődését a tenyészléextraktum Pl 3-kináz tesztjével követhetjük nyomon. Az alábbiakban ismertetett Pl 3kináz vizsgálati módszer erre a célra megfelel.
A termelődést követően a Wortmannin ismert módszerrel kinyerhető a fermentációs léből. A Wortmannin elsősorban a tápközegben található.
A Wortmannin kinyerésének előnyös módja, hogy a teljes fermentlevet kerámiaszűrőn átszűrjük, a szürletet szerves oldószerrel, például etil-acetáttal extraháljuk és az extraktumot bepároljuk. A bepárlási maradékot alkoholban szuszpendáljuk, amíg a kristályosodás megtörténik, az oldószert kiszűrjük és a kristályokat mossuk és szárítjuk. Az anyag igazolására a kristályos anyag mintáját szerves oldószerben oldjuk és fordított fázisú szilikagélen (Cg vagy C^g) kromatografáljuk, eluensként szerves oldószer/vizes puffer rendszert, például 60 %-os acetonitrilt használunk.
A 11-deacetoxi-Wortmannin (lb) ugyancsak ismert, minthogy előállítására módszerek állnak rendelkezésünkre. Ezt a vegyületet előállíthatjuk bioszintetikus úton a Penicillium funiculosum Thom [például Baggolini és munkatársai, Exp. Cell. Rés., 169:408-418 (1987)] tenyészet fermentálásával, de előnyös a Wortmanninból kémiai úton előállítani Haeflinger és munkatárai módszerével [Helv. Chem., Acta, 56 (8):2901-2904 (1973)].
Hasonlóan ismert a Λ, 9,11-dehidro-deacetoxi-wortmannin (II) előállítása, amit Haeflinger és munkatársai (1. fent) írtak le. A (III) általános képletű vegyületek előállítására MacMillan J. és munkatársai adnak meg eljárást [J. Chem. Soc. Perkin 1:2892-2898 (1972)].
A jelen módszer szerint az (I), (II) és (III) képletű, illetve általános képletű vegyületek hatásosak a lizált vagy teljes sejt foszfatidil-inozitol-3-kinázának szelektív gátlásában. A módszer in vitro vagy in vivő alkalmazható és mint ···· · • · •••4 ♦· ·* • · · · · • · · *
·..· ·..· ....
- 10 farmakológiai eszköz olyan folyamatok tanulmányozására használható, melyben a Pl 3-kináz részt vesz, például mitogenezis, sejtszaporodás vagy celluláris differenciálódás. A vegyületek sejtben történő könnyebb nyomonkövetésére az (I), (II) és (III) képletű, illetve általános képletű vegyületek radioaktívan jelölhetők (például tríciummal).
Az (I), (II) és (III) vegyületek felhasználásánál, ezeket a vegyületeket szerves oldószerben, például dimetil-szulfoxidban (DMSO) oldjuk és HEPES pufferral (pH 7,5; 15mM magnézium-kloridot és ImM EGTA-t tartalmaz) hígítjuk a megfelelő koncentrációra. A nyert preparátumot hozzuk érintkezésbe ismert módon a tisztított Pl 3-kináz enzimmel vagy a sejttel.
A jelen találmány egy másik kivitelezési módja, amikor az emlősök és főként az ember foszfatidil-inozitol-3-kinázát gátoljuk oly módon, hogy a szervezetben az (I), (II) vagy (III) képletű vegyület valamelyikének a foszfatidil-inozitol-3-kinázt gátló mennyiségét juttatjuk be.
A jelen találmány egyik előnyös kivitelezési módja, amikor az emlősök foszfatidil-inozitol-3-kinázzal kapcsolatos állapotát kezeljük oly módon, hogy a szervezetbe az (I), (II) vagy (III) képletű vegyület valamelyikének a foszfatidil-inozitol-3-kinázt gátló mennyiségét juttatjuk be. A Pl 3-kinázzal összefüggő állapotok közé tartoznak olyan biokémiai folyamatok, melyek összefüggésben vannak a fájdalomérzéssel, a cukorbetegséggel, a gyulladással, vérlemezke aggregálódással, vaszkuláris megbetegedésekkel - például ateroszklerózis, resztenózis, stb. - és ··*:
• · · · · · · ·..· ··;· ·-’ *··* ····
- 11 főként a neoplazmáknál észlelhető abnormális sejtnövekedéssel.
Ezek szerint a jelen találmány egyik különösen előnyös kivitelezési módja az az eljárás, amit a foszfatidil-inozizol-3-kinázzal összefüggésben lévő neoplazmák, főleg a különféle limfoszarkómák kezelésére használunk az (I), (II) és (III) képletű, illetve általános képletű vegyületek valmelyikének alkalmazásával. A Pl 3-kinázzal kapcsolatos más neoplazma például: a női emlő adenokarcinómája, vastagbélrák, a fej és a nyak epidermiszrákja, leukémia, melanoma, petefészekkarcinóma, plazmasejtmielóma, és a pikkelyes vagy kis-sejtes tüdőrák. Az ilyen vagy a Pl 3-kinázzal kapcsolatos neoplazmatikus megbetegedések kezelésére a Wortmannin alkalmazása előnyös.
A gyógyászati kezelésre az (I), (II) vagy (III) képletű, illetve általános képletű vegyületeket használhatjuk önmagukban vagy gyógyszerkészítmény formájában, ami bevihető parenterálisan, transzdermálisan, végbélen át, orron keresztül, intravénásán vagy - előnyösen - szájon át. Ezek a gyógyszerkészítmények ismert módon előállíthatok, és a gyógyászati szempontból alkalmazható vívőanyagok kíséretében hatóanyagként az (I), (II) vagy (III) képletű, illetve általános képletű vegyületekbol legalább egyet tartalmaznak. A hatóanyag kifejezés alatt az (I), (II) vagy (III) képletű, illetve általános képletű vegyületeket vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sóikat értjük.
A gyógyszerkészítmény előállításánál a hatóanyagot általában összekeverjük vagy hígítjuk a vívőanyaggal vagy a vívőanyagba zárjuk, ami ez esetben lehet kapszula, tasak, papír vagy más • · · · · ·*·ί • · • · ·«·· »« *« alakban. Amikor a vivőanyag hígítóként szolgál, az lehet szilárd, félfolyékony vagy folyékony. A készítmény ilyenkor tabletta, pirula, por, lózeng, ostya, elixír, emulzió, oldat, szirup, szuszpenzió, injektálható steril oldat, sterilen csomagolt por, kemény vagy lágy kapszula alakjában lehet.
Alkalmas vivőanyag, közeg vagy hígító lehet például a laktóz, dextróz, szacharóz, szorbitol, mannitol, keményítő, akácia mézga, kalcium-foszfát, alginát, kalcium-szilikát, mikrokristályos cellulóz, polivinil-pirrolidon, cellulóz, tragakant, zselatin, szirup, metil-cellulóz, metil-hidroxi-benzoát, propil-hidroxi-benzoát, talkum, magnézium-sztearát, víz és ásványi olaj. A készítmény ezen kívül tartalmazhat még sikosítóanyagot, nedvesítőszert, emulgeáló és szuszpendáló szereket, konzerváló anyagokat, édesítő és aromásító anyagokat. A készítmények összeállíthatók úgy, hogy a hatóanyag gyorsan, folyamatosan vagy késleltetve jusson a szervezetbe a bejuttatását követően. Ezek a módszerek ismertek.
Szájon át történő adagolásnál a tablettában a hatóanyag vívőanyaggal vagy hígítóval lehet elekevert vagy beolvasztott, vagy zselatinkapszulába lehet zárt. A készítmény lehet folyékony közegben például 10 %-os vizes glűkózoldatban, izotóniás sóoldatban, steril vízben, stb. oldva, és bevihető intravénásán vagy inj ekcióval.
A készítményt előnyös egységnyi adagokban formulázni, amelyek 1-500 mg, gyakrabban 5-300 mg hatóanyagot tartalmaznak. Az egységnyi adag fizikailag elkülönített egységeket jelent, • ·
- 13 ami alkalmas a dozirzott adagolásra embernél vagy az emlősöknél. Az egyes egységek a hatóanyag előre meghatározott mennyiségét tartalmazzák, melyet a kívánt terápiás hatásnak megfelelően állapítottak meg. A hatóanyag gyógyászati szempontból alkalmazható vívőanyag kíséretében lehet. A gyógyászati szempontból alkalmazható kifejezést az olyan vívőanyagra, hígítóra vagy közegre értjük, ami kompatibilis a készítmény más alkotórészeivel és nem káros a befogadó szervezetre.
Az (I), (II) és (III) képletű vegyületek széles dózistartományon belül hatásosak a Pl 3-kinázra és a Pl 3-kinázzal kapcsolatban lévő állapotokra. A napi adag általában 0,1-50 mg/testsúlykilogramm közé esik. Felnőtt embernél a napi dózis előnyösen
5-25 mg/kg között van, egyszeri vagy osztott adagolásban. Az azonban nyilvánvaló, hogy a beviendő adagot adott esetben az orvos állapítja meg a körülmények ismeretében, ideértve a betegség állapotának viszonylagos súlyosságát, a beviendő vegyület milyenségét, a beteg életkorát, súlyát és hatóanyagra adott válaszát; a bevitel módját. Ezért a fent megadott dózistartomány természetesen nem korlátozza a találmány oltalmi körét.
Az (I), (II) és (III) képletű vegyületek szelektív hatásúak a Pl 3-kináz enzimre. Az alábbiakban ismertetjük azokat a vizsgálati eljárásokat, melyekkel ez az aktivitás bemutatható.
A foszfatidil-inozltol-3-kináz tisztítása
A Pl 3-kináz több módon elkészíthető. Az egyik eljárás szerint a Pl 3-kinázt összefolyó Swiss 3T3 sejtekből (beszerezve « ·«· az American Type Culture Collectiontól, Rockville, MD. USA) nyerjük. Az enzim tisztítása előtt a sejteket nagy mennyiségben tenyésztjük 10 % fetális borjúszérummal kiegészített Dublecco's Modified Eagles Médium táptalajon (DMEM, Sigma, St. Louis, MO, USA), majd átvisszük 0,15 % tripszint és 0,02 % etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA) tartalmazó közegre. Négy, 100 mm-es lemezről 24x10sejtet 10 ml Hanks Balanced Salt Solution (BSS, Sigma, pH 7,4) oldattal mosunk és borjúszérumot nem tartalmazó DMEM közegben hagyjuk egy órán át, mielőtt 15 percen át stimulálunk 100 ng/ml vérlemezből származó növekedési faktor (piatelet derived growth factor, PDGF, Genzyme, Cambridge, MA, USA) rekombináns humán BB homodimerjével. A közeget leszívjuk és a sejteket 10 ml HBSS oldattal mossuk, mielőtt 3 ml alábbi összetételű oldatban lizáljuk: 137mM nátrium-klorid, 20mM Trisz (pH 8,0), lmM magnézium-klorid, 10 % glicerin, 1 % Triton X-100 (Rohm and Haas, Philadelphia, PA USA), 2 ^g/ml leupeptin, 2 ^g/ml aprotonin, lmM fenil-metil-szulfonil-fluroid (PMSF) és lmM nátrium-orto-vanadát1. A sejteket lekaparjuk a csésze felszínéről és 6000 g értéken centrifugáljuk 1 percen át. A felülúszót 50 μΐ mosott, IgG2bk antifoszfotirozin-antitest gyöngyökkel keverjük össze (Upstate Biotechnology Inc., Laké Piacid, NY.) egy 1,5 mles csőben. A csövet lezárjuk 2 órán át 4°C hőmérsékleten forgatjuk. A gyöngyöket kétszer 1 ml HBSS oldattal mossuk, ami 2 gg/ml leupeptint, 4 μg/ml aprotonint, lmM PMSF-t, 200mM adenozint és lmM nátrium-orto-vanadátot tartalmaz. A tirozin-foszforilált Pl 3-kinázt csövenként 200 μΐ lOmM Trisz-pufferrel (pH 7,5) ···· · *·*Β -** .· ί. .. ·
·..· ·♦:· ··»· ··.
- 15 mossuk le a gyöngyökről, ahol a puffer tartalmaz még 2M nátriumkloridot, ImM EDTA-t, 200 μΜ adenozint, lOmM nátrium-fenil- foszfátot.
Egy másik előnyös módszer szerint a Pl 3-kinázt borjúagyból nyerjük ki. Két, kb. 900 mg súlyú borjúagyat percekkel az állat leölése után jégbe helyezzük és egy órán át homogenizáljuk. Az agyról előzetesen eltávolítjuk a felesleges zsírszövetet és vérereket, majd egy Tekmar Tissuemizer (Cincinnati, OH, USA) készülékben homogenizáljuk 4°C hőmérsékleten 20mM Trisz-pufferben (pH 8,3), ami 250mM szacharózt, 6mM B-merkapto-etanolt, 1 Mg/ml leupeptint, 1 Mg/ml pepsztatin A-t, 0,4mM PMSF-t és ImM magnézium-kloridot tartalmaz.
perces, 10000 g értéken történő centrifugálás után, a felülúszó (kb. 1200 ml) kémhatását 4°C hőmérsékleten cseppenként adott 1M ecetsavval pH 5,75 értékre savanyítjuk. 4°C hőmérsékleten további 15 percen át kevertetjük, és az oldatot 13500 g értéken centrifugáljuk 60 percen át. A felülúszót eldobjuk, az üledéket-A pufferben’ szuszpendáljuk (20mM Trisz, pH 8,3, 6mM Bmerkapto-etanol, 0,ImM etilén-glikol-bisz(B-amino-etil-éter)-N,Ν,Ν',N'-tetraecetsav (EGTA), 1 Mg/ml leupeptin, 1 Mg/ml pepsztatin A és ImM magnézium-klorid. A szuszpenziót egy Fást Flow Q Sepharose oszlopra (300 ml) visszük és 4°C hőmérsékleten 5 ml/perc sebesség mellett átfolyatjuk. A megkötődés után az oszlopot háromszor mossuk A-pufferral, ami 0,1M kálium-kloridot tartalmaz, majd a kinázt lineáris gradiensű elúcióval eluáljuk, az A pufferben a kálium-klorid koncentrációját 0,lM-ról 0,6M-ra ···» .»·.
···· · ·,’· ♦··· ·«* *.»* .?··
- 16 emelve. Eluáláshoz kétszeres térfogatú eluenst használunk, az átfolyási sebesség: 3 ml/perc.
A frakciók Pl 3-kináz aktivitását 10 μΐ frakciómintából kiindulva és a foszfatidil-inozitolt használva szubsztrátként az alábbiakban ismertetett eljárás szerint határozzuk meg. A Pl
4-kináz a fronttal eluálódik, a Pl 3-kináz a 0 , 3M kálium-klorid koncentrációnál. Az összegyűjtött Pl 3-kináz frakciót 40 %-os ammónium-szulfáttal lecsapjuk, 60 perces 13500 g értéken végzett centrifugálás után az üledéket B pufferben (lOmM kálium-foszfát, pH 7,4, 6mM β-merkapto-etanol, 1 gg/ml leupeptin, 1 μg/ml pepsztatin A és ImM magnézium-klorid) szuszpendáljuk és 50 ml hidroxil-apatitból készített oszlopra visszük (Calbiochem, Inc., La Jolla, Ca, USA) 2,5 ml/perc átfolyási sebesség mellett. Az oszlopot 150 ml B pufferral mossuk, amíg a 280 nm-en mért abszorpciós alapvonal el nem éri a 0 értéket. Ezt követően a kinázt lineáris gradienselúcióval eluáljuk a kálium-dihidrogén-foszfát koncentrációt lOmM-ról 320mM-ra emelve; átfolyási sebesség. 1 ml/perc, ‘kromatografálás ideje 450 perc.
Az aktív frakciókat egyesítjük és 3 ml/perc átfolyási sebesség mellett egy MonoS oszlopra (8 ml) (Pharmacia, Inc., Piscataway, NJ., USA) visszük, amit C pufferral (50mM MES, pH 6,2, 6mM β-merkapto-etanol, 0, ImM EGTA, 1 μρ/πιΐ leupeptin, 1 μς/ιτιΐ pepsztatin A és ImM magnézium-klorid) kiegyensúlyoztuk. A Pl 3-kinázt lineáris grádienselúcióval eluáljuk 120 perc alatt a C pufferben a kálium-klorid koncentrációját OM-ról 0,4M-ra emelve. A Pl 3-kináz aktivitás általában két frakcióban van, az aktivitás főtömege a fronttal jön le, kb. 20 %-a pedig a gradienselúció alatt. Noha ez utóbbinak jelentős Pl 4-kináz aktivitása van, a fronttal lejövő frakciónak nincs lényeges Pl 4-kináz aktivitása. A fronttal lejött frakciót betöményitjük Mini-Ultrasette Omega 50 K membránon (Filtron, Inc., Northborough, MA, USA) tangenciális áramlási szűréssel, és C pufferral hígítjuk, hogy csökkentsük a vezetőképességét. Az anyagot a fenti körülmények között ismét rávisszük egy MonoS oszlopra. A mosás alatt a Pl 3-kináz megkötődik az oszlopon és a gradiens alatt eluálódik. A foszfatidil-inozitol-kináz aktivitást a gradienselúció alatt két adagban kapjuk meg; az I-frakció 95 % Pl 3-kináz és 5 % Pl 4-kináz aktivitású, míg a II-frakció főként Pl 4-kináz aktivitást mutat.
Az I-frakciót A pufferral hígítjuk és MonoQ (1 ml) oszlopon kromatografáljuk, a gradienselúcióhoz az A pufferben a kálium-klorid koncentrációt OM-ról 0,4M-ra emelve. A végterméket Pl
3-kináz és Pl 4-kináz aktivitás szempontjából megvizsgálva, úgy találtuk,.. hogy több, mint 99 %-ban Pl 3-kináz aktivitást mutat.
Tisztított Pl 3-kináz aktivitás vizsgálata
A Pl 3-kináz aktivitást Matter W. F. és munkatársai módszerével mérjük [Biochemical and Biophysical Research Communications, 186:624-631 (1992)]. A gátlóanyagnak vélt vegyületet dimetil-szulfoxidban oldjuk és HEPES pufferral, pH 7,5 - ami 15mM magnézium-kloridot és ImM EGTA-t tartalmaz - tízszeresére hígítjuk. 10 μΐ ilyen oldatot inkubálunk 98 μΐ tisztított
.... . .··} ,··, ,··.
borjúagy Pl 3-kináz oldattal és 5 μΐ foszfatidil-inozit oldattal (2 mg/ml foszfatidil inozitol 50mM HEPES pufferban, pH 7,5, ami ImM EGTA-t tartalmaz). A végső reakcióelegy 0,1-5 ng/ml gátlóanyagot és 3 % DMSO-t (térf%) tartalmaz. Ez a DMSO koncentráció nincs hatással a Pl 3-kináz aktivitására. A kontrollként használt reakcióelegy 3 % DMSO-t tartalmaz inhibitor nélkül. A reaktánsokat 10 percen át szobahőmérsékleten előinkubáljuk, majd 1 μΐ [gamma_32p]atp oldat hozzáadásával elindíjuk az enzimreakciót. ATP kiindulási oldat: 2 mCi/ml, 500 μΜ ATP; a reakcióelegyben a végkoncentráció 0,08 mCi/ml, 20 μΜ ATP (Dupont New England Nuclear, Boston, MA). A reakciót szobahőmérsékleten 10 percen át hagyjuk lejátszódni időnkénti megkeverés mellett. A reakciót 40 μΐ 1 n sósav hozzáadásával állítjuk le. A lipideket 80 μΐ kloroform/metanol, 1:1 eleggyel extraháljuk. A mintát összekeverjük, centrifugáljuk és az alsó szerves fázist szilikagél TLC (vékonyrétegkromatográfiás) lemezre visszük (EM Science Gibbstown, NJ). A kromatogramot kloroform/metanol/víz/ /ammónium-hidroxid,.'45 : 35 ; 8,5 : 1,5 eluenssel fejlesztjük ki. A lemezeket megszárítjuk és a kinázreakciót autoradiográfiával tesszük láthatóvá. A foszfatidil-inozitol-3-monofoszfát régióját lekaparjuk a lemezről, és szcintillációs közegként Ready Proteint (Beckman Instruments, Inc., Fullerton CA, USA) használva, folyadék szcintillációs spektroszkópiával megmérjük az aktivitást. A Wortmannin és analógjainak gatlási szintjét percenkénti -épbeütés alapján százalékosan adjuk meg a kontrolihoz viszonyítva.
Eljárhatunk úgy is, hogy a Pl 3-kináz reakció termékeit
V» « * ····
HPLC-vel állapítjuk meg Whitman M. módszerével [Natúré, 332:644646 (1988)]. A foszfolipideket metil-amin reagensben deacilezzük és egy Whatman Partisphere SAX anioncserélő oszlopon elválasztjuk Auger K. R. eljárása szerint [Cell, 57:167-175 (1989)]. A deacilált [22P]-enzimtermékek kimutatásához egy Radiometric Model A-140 Flo-One/Beta online radiokatívitási detektort használunk. Belső standardként deacilált [2H]ΡΙ-4-monofoszfátot alkalmazunk .
A Wortmannin és analógjainak a borjúagy tisztított Pl 3-kinázára kifejtett hatásokat a II. táblázatban mutatjuk be.
II. TÁBLÁZAT
A borjúagy tisztított foszfatidil-inozitol-3-kináz gátlása
Wortmanninnal és Wortmannin analógokkal
képlet | IC50 (ng/ml) |
(la) | 1,8 (4,2nM) |
(Ilb) | 6,2 (16,7nM) |
(II) | 20,0 (59,0nM) |
(Illb) | 1500,0 (4,6 μΜ) |
A jelen találmány szerinti módszerek szerint vizsgálva a
Wortmannin és a Wortmannin analógok nincsenek hatással a Pl 4kinázra, a foszfolipáz C-re, a c-src protein tirozin kinázra vagy a protein kináz C-re és az előzőleg leírt aktivitásnál százszor nagyobb gátló hatásai vannak a miozin könnyű lánc kinázra [például Nakanishi S. és munkatársai, J. Bioi. Chem., 257 (4):2157-2163)]. A Wortmannin és analógjai tehát a Pl 3-kináznak hatásos, nagy szelektívitású inhibitorai.
A teljes sejt Pl 3-kináz aktivitás vizsgálati eljárása
A foszfatidil-inozitol-3-foszfát aktivitás mérésére V-sis
NIH 3T3 sejteket (National Cancer Institute, Bethesda, MD, USA) választunk, mert konstitutív, valamint a vérlemezekbol származó növekedési faktor által stimulált Pl 3-kináz aktivitással rendelkeznek. A 75 ciA térfogatú tenyészedényben logaritmikus növekedésben lévő v-sis NIH 3T3 sejteket 2 órára fetális borjúszérumot nem tartalmazó DMEM-be helyezünk. A sejtekek foszfátmentes DMEM-mel mossuk és 70 percen át ugyanebben a közegben inkubáljuk, 0,1 % zsírsavmentes borjúszérum albumin és 0,15 mCi/ml [32Ρ]ΗβΡθ4 (ICN Biomedicals, Irvine, CA, USA) jelenlétében. A gátlóanyagnak vélt preparátumot a fenti módszernél ismertetett módon állítjuk elő és érintkezésbe hozzuk a sejtekkel 10 perccel a stimulálásukat megelőzően. A sejteket 100 ng/ml PDGF-vel stimuláljuk 10 percen át. A foszfatidil-inozitol-3-foszfátok sejtben való meghatározására eltávolítjuk a közeget és a sejteket foszfáttal pufférőit sóoldattal mossuk, majd edényenként 4 ml sósav/metanol, 1:1 (térf.) elegyet adunk hozzájuk. A sejteket lekaparjuk az edényről és az összlipidet kiextraháljuk Folch, J. és munkatársai módszerével [J. Bioi. Chem., 226:497-509 (1957)]. Clark N. G. és munkatársai • · · « módszerével [Biochem J., 195:301-306 (1981)] metil-aminban deaciláljuk a lipideket és HPLC-vel elválasztjuk, 10 cm-es RÁC II.
Partisii 5 SAX oszlopot (Whatman, Kent, U.K.) használva. A grádiens elúciót ammónium-dihidrogén-foszfáttal alakítjuk ki
Anger K. R. és munkatársai szerint [Methods in inositide research, 159-166. oldal, szerk. Irvine R. F., Raven Press, Ltd., New York, NY (1990)]. Áramlási sebesség: 0,8 ml/perc. A csúcsok detektálására áramlási radiokatívitás-detektort használunk (FloOne Béta, Model A515, Radiomatic Instruments, Meriden, CT). Referencia-vegyületeknek pH]foszfatidil-inozitol-4,5-difoszfátot és deacil-[32P]foszfatidil-inozitol-3,4,5-trifoszfátot használunk.
Noha a tisztított Pl 3-kináz gátlása lényegesen nagyobb, mint a Pl 3-kináz gátlása teljes sejtben, a Wortmannin 1,3 μΜ koncentrációban csaknem teljesen gátolja a vérlemezből származó növekedési-faktor stimulálta foszfatidil-inozitol-3-foszfát keletkezését a teljes sejtben.
Az elmondottak bemutatására az alábbiakban példákat adunk meg. A példák-kizárólag szemléltető célzatúak, és a találmány oltalmi körét nem korlátozzák.
1. példa
Az A24603.1 fermentációja
A) Rázott lombikos fermentálás
A vegetatív tenyészet beoltásához az A24603.1 törzs fagyasztva szárított, centrifugált üledékét vagy folyékony nitrogénben tartott szuszpenzióját használjuk.A vegetatív • · tenyészet tápközegének összetétele:
alkotórészg/l glükóz10,0 glicerin10,0 gyapotmagliszt*25,0.
*(PROFLO fluor, Traders Protein, Memphis, TN).
A tápoldat kémhatása pH 6,3; nem beállított.
A beoltott vegetatív táptalajt 250 ml-es, szélesszájú
Erlenmeyer lombikban 25°C hőmérsékleten rázatjuk 72 órán át; percenkénti fordulatszám: 250; kitérés: 5,08 cm.
B) Az A24603.1 törzs tankfermentálása
A nagyobb térfogatú oltóanyag előállításához 10 ml, a fentiek szerint nyert vegetatív tenyészettel beoltunk 400 ml fentiekben ismertetett összetételű tápoldatot. Ezt a második lépéses tenyészetet 2 literes, szélesszájú Erlenmeyer lombikban rázatjuk 25°C hőmérsékleten 23 órán át; percenkénti fordulatszám: 250; kitérés: 5,08 cm.
A 400 ml tenyészettel beoltunk 115 liter steril tápközeget, melynek összetétele:
alkotórészg/l glükóz25,0 kukoricakeményítő10,0 lexein10,0 enzimmel hidrolizált kazein 4,0 • · · · melasz5,Ο magnézium-szulfát (vízmentes)5,0 kalcium-karbonát2,0 ionmentes vízzel 115 literre kiegészítve.
A táptalaj kémhatása: pH 6,8; nem beállított.
Habzásgátló: SÁG 471 (Unión Carbide, Sistersville, WV) 0,2 g/l.
A kevertetett tenyészetet 25°C hőmérsékleten fermentáljuk
4-5 napon át. A levegőtelítettség 45 %-ának megfelelő oldott oxigénszintet tartunk fent; a kevertetés percenkénti fordulats z áma: 18 0-330.
2. példa
A Wortmannin kinyerése és tisztítása
Az 1. példában leírtak szerint nyert fermentlevet kerámia szűrőn (Membralox Systems, Illinois Water Treatment, Rockford, IL, USA) leszűrjük 175 liter szürletet nyerve, ami a wortammannint tartalmazza. A szürlet kémhatását 5 n sósavval pH
3,9 értékre állít j uk'· be . A megsavanyított szürletet háromszor féltérfogat etil-acettátal extraháljuk, a 270 1 össztérfogatú egyesített extraktumot csökkentett nyomáson 6 liter térfogatra bepárolj uk.
A 6 liter etil-acetátos koncentrátumot csökkentett nyomáson tovább töményítjük sötétbarna olajosán folyó bepárlási maradékot kapva. A maradékhoz hozzáadunk 250 ml meleg metanolt. 18 óra múlva a kristályokat szűréssel összegyűjtjük, 4,2 g Wortmannint nyerve. A visszamaradt felülúszóval megismételjük a kristályo-
sítást további 1,9 g Wortmanninhoz jutva. A Wortmannint HPLC-vel azonosítjuk.
3. példa
A keményzselatin kapszula töltelékének összetétele:
mg/kaszula hatóanyag250 keményítő, szárított200 magnézium-sztearát10 összesen:460.
4. példa
A tabletta összetétele:
mg/tabletta hatóanyag 250 cellulóz, mikrokristályos 400 szilícium-dioxid, kolloidális 10 sztearinsav 5 összesen: 665.
A komponenseket összekeverjük és 665 mg tömegű tablettákká saj tolj uk.
5. példa
Az aeroszol oldat összetétele:
tömegrész hatóanyag0,25 etanol25,75
Propellant 22 (klór-difluor-metán)70,00 összesen: 100,00.
A hatóanyagot etanolban oldjuk és hozzáadjuk a Propellant 22 egy részét, lehűtjük -30°C hőmérsékletre és a töltőkészülékbe visszük. Kellő mennyiségű oldatot viszünk a rozsdamentes acéltartályba és a propellant megmaradt részével hígítunk. Felhelyezzük a palack szelepét.
6. példa mg hatóanyagot tartalmazó tabletta összetétele:
hatóanyag | 60 mg |
keményítő | 4 5 mg |
cellulóz, mikrokristályos | 3 5 mg |
polivinil-pirrolidon (10 %-os
vizes oldatban) | 4 mg |
nátrium-karboxil-metil-keményítő | 4,5 mg |
magnézium-sztearát | 0,5 mg |
talkum | 1 mg |
összesen:
150 mg.
♦ « • · • ·
- 26 - ...........
A hatóanyagot, a keményítőt és a cellulózt 45 mesh U.S. szitaszámú szitán engedjük át és alaposan összekeverjük. A polivinil-pirrolidont tartalmazó vizes oldatot összekeverjük a porral, és a keveréket 14 mesh U.S. szitaszámú szitán átengedjük. A nyert granulátumot 50°C hőmérsékleten megszárítjuk és 18 mesh U.S. szitaszámú szitán átszitáljuk. A nátrium-karboxil-metil-keményítőt, a magnézium-sztearátot és a talkumot 60 mesh U.S. szitaszámú szitán megszitáljuk, hozzáadjuk a granulátumhoz és összekeverés után 150 mg tömegű tablettákká sajtoljuk.
7. példa mg hatóanyagot tartalmazó kapszulák töltelékének összetétele:
hatóanyag | 80 mg |
keményítő | 59 mg |
cellulóz, mikrokristályos | 59 mg |
magnézium-sztearát | 2 mg |
összesen:. | 20 0 mg |
A hatóanyagot, a cellulózt, a keményítőt és a magnézium-sztearátot összekeverjük, 45 mesh U.S. szitaszámú szitán átengedjük és 200 mg keveréket töltünk egy keményzselatin kapszulába.
·· ·· 4 4 ·· ··
4 4 · · · ·
• »44444 4 4 4 « 27 - ........... |
8. példa
225 mg hatóanyagot tartalmazó kúp összetétele:
hatóanyag | 225 mg |
telített zsírsav-glicerid | 2000 mg |
összesen: | 2225 mg. |
A hatóanyagot 60 mesh U.S. | szitaszámú szitán átengedjük és |
az olvadáshoz szükséges legalacsonyabb hőmérsékleten megolvasztott telített zsírsav-glicerid olvadékához keverjük. A keveréket 2 g nominális méretű öntőformákba öntjük és hagyjuk kihűlni.
9. példa ml-ben 50 mg hatóanyagot tartalmazó szuszpenzió összetétele:
hatóanyag(ok) | 5 0 mg |
nátrium-karboxil-metil-cellulóz | 5 0 mg |
szirup | 1,25 ml |
benzoesav-oldat | 0,10 ml |
színanyag | tetszés szerint |
ízesitőanyag | tetszés szerint |
tisztított vízzel feltöltve | 5 ml-re. |
A hatóanyagot 45 mesh U.S. | szitaszámú szitán átengedjük és |
összekeverjük a karboxi-metil-cellulózzal és a sziruppal, egy sűrű masszát képezve. Ehhez hozzáadjuk a benzoesav-oldatot, az ízesítő- és színanyagot, amiket előzetesen a víz egy részével • · • · meghígítottunk. Összekeverés után vízzel a kívánt térfogatra kiegészítjük a szuszpenziót.
10. példa
Az intravénás oldat összetétele:
hatóanyag 100 mg izotóniás sóoldat 1000 ml.
• 4
Claims (16)
- - 29 - ...........SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Gyógyszerkészítmény, emlősök foszfatidil-inozitol-3-kináz enzimének gátlására, azzal j ellemezve, hogy a hatóanyag az (I) általános képletű, aholR jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport;(II) képletű vagy (III) általános képletű, ahol jelentése hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport;R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója, gyógyászati szempontból alkalmazható vívőanyagok kíséretében.
- 2. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése hidrogénatom.
- 3. A 2. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése acetoxicsoport.
- 4. Gyógyszerkészítmény, emlősök foszfatidil-inozitol-3-kináz enzimjével kapcsolatos állapotok kezelésére, azzal jellemezve, hogy a hatóanyag az (I) általános képletű, aholR jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport;a (II) képletű vagy (III) általános képletű, aholR1 jelentése hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport;R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója, gyógyászati szempontból alkalmazható vívőanyagok kíséretében.
- 5. A 4. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hivatkozott foszfatidil-inozitol-3-kinázzal kapcsolatos állapot a neoplazma.
- 6. Az 5. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport.
- 7. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol· R jelentése acetoxicsoport.
- 8. A 4. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a nevezett hatóanyag a (II) képletű vegyület.
- 9. Eljárás emlősök foszfatidil-inozitol-3-kináz enzimét gátló gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű, aholR jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport;a (II) képletű, vagy a (III) általános képletű, aholRx jelentése hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport;R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, vegyületet, mint hatóanyagot gyógyászati szempontból alkalmazható vívőanyagokkal gyógyszerkészítménnyé az ismert módon feldolgozzuk.
- 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, melynél a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport.
- 11. a 10. igénypont szerinti eljárás, melynél a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése acetoxicsoport.• 4 · 4 4 • ·
- 12. Eljárás az emlősök foszfatidil-inozitol-3-kináz enzimével kapcsolatos állapotának kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű, aholR jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport;a (II) képletű, vagy a (III) általános képletű, aholR1 jelentése hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport;R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, vegyűletet, mint hatóanyagot gyógyászati szempontból alkalmazható vívőanyagokkal gyógyszerkészítménnyé az ismert módon feldolgozzuk.
- 13. A 12. igénypont szerinti eljárás, olyan gyógyszerkészítmény előállítására, ahol a hivatkozott foszfatidil-inozitol-3-kinázzal kapcsolatos állapot a neoplazma.
- 14. A 13. igénypont szerinti eljárás gyógyszerkészítmény előállítására, melynél a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése hidrogénatom vagy acetoxicsoport.
- 15. A 14; -igénypont szerinti eljárás gyógyszerkészítmény előállítására, melynél a nevezett hatóanyag az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése acetoxicsoport.
- 16. A 12. igénypont szerinti eljárás gyógyszerkészítmény előállítására, melynél a nevezett hatóanyag a (II) képletű vegyület.A meghatalmazott
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/094,279 US5378725A (en) | 1993-07-19 | 1993-07-19 | Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase with wortmannin and analogs thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9402128D0 HU9402128D0 (en) | 1994-09-28 |
HUT67667A true HUT67667A (en) | 1995-04-28 |
Family
ID=22244209
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9402128A HUT67667A (en) | 1993-07-19 | 1994-07-18 | Pharmaceutical composition causes inhibition of phosphatidylinositol-3-kinase containing wortmannin and analogs thereof and process for its production |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5378725A (hu) |
EP (1) | EP0635268A1 (hu) |
JP (1) | JPH0753370A (hu) |
KR (1) | KR950002755A (hu) |
CN (1) | CN1111127A (hu) |
AU (1) | AU678831B2 (hu) |
CA (1) | CA2128046A1 (hu) |
CZ (1) | CZ283806B6 (hu) |
HU (1) | HUT67667A (hu) |
IL (1) | IL110325A0 (hu) |
NO (1) | NO942641L (hu) |
PH (1) | PH30794A (hu) |
PL (1) | PL304317A1 (hu) |
RU (1) | RU94026082A (hu) |
TW (1) | TW287102B (hu) |
ZA (1) | ZA945103B (hu) |
Families Citing this family (69)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5504103A (en) * | 1993-08-25 | 1996-04-02 | Eli Lilly And Company | Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase with 17 β-hydroxywortmannin and analogs thereof |
US5468773A (en) * | 1993-08-25 | 1995-11-21 | Eli Lilly And Company | Methods for inhibiting bone loss and cartilage degradation using wortmannin and its analogs |
US7863429B2 (en) * | 1995-12-21 | 2011-01-04 | Qlt Inc. | Treatment of inflammatory diseases including psoriasis |
US5910417A (en) * | 1996-05-31 | 1999-06-08 | National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine | Regulation of cytokine production in a hematopoietic cell |
US7670767B1 (en) | 1997-01-16 | 2010-03-02 | The Regents Of The University Of California | Genetic alterations associated with cancer |
EP2311495B1 (en) * | 1998-03-24 | 2014-09-24 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Vascularization inhibitors |
US6413773B1 (en) * | 1998-06-01 | 2002-07-02 | The Regents Of The University Of California | Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors as stimulators of endocrine differentiation |
JP2003523166A (ja) * | 1998-09-29 | 2003-08-05 | ガミダ セル リミテッド | 幹細胞および前駆細胞の増殖と分化を制御する方法 |
EP2298311B1 (en) * | 1999-01-13 | 2012-05-09 | Bayer HealthCare LLC | w-Carboxy aryl substituted diphenyl ureas as p38 kinase inhibitors |
US8124630B2 (en) * | 1999-01-13 | 2012-02-28 | Bayer Healthcare Llc | ω-carboxyaryl substituted diphenyl ureas as raf kinase inhibitors |
US6566081B1 (en) | 1999-10-06 | 2003-05-20 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods of identifying a compound which modulates the non-transcriptional non-map-kinase induced effects of steroid hormones |
US6667300B2 (en) | 2000-04-25 | 2003-12-23 | Icos Corporation | Inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta |
WO2001091699A2 (en) * | 2000-05-30 | 2001-12-06 | Advanced Research & Technology Institute | Compositions and methods for identifying agents which modulate pten function and pi-3 kinase pathways |
AU2002258798A1 (en) * | 2001-04-13 | 2002-10-28 | Children's Hospital Medical Center | Methods for the treatment of hepatic disorders |
US7371763B2 (en) * | 2001-04-20 | 2008-05-13 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of raf kinase using quinolyl, isoquinolyl or pyridyl ureas |
GB0119865D0 (en) | 2001-08-14 | 2001-10-10 | Cancer Res Campaign Tech | DNA-PK inhibitors |
GB0119863D0 (en) | 2001-08-14 | 2001-10-10 | Cancer Res Campaign Tech | DNA-PK inhibitors |
US6703414B2 (en) * | 2001-09-14 | 2004-03-09 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Device and method for treating restenosis |
US20080108672A1 (en) * | 2002-01-11 | 2008-05-08 | Bernd Riedl | Omega-Carboxyaryl Substituted Diphenyl Ureas As Raf Kinase Inhibitors |
IL152904A0 (en) * | 2002-01-24 | 2003-06-24 | Gamida Cell Ltd | Utilization of retinoid and vitamin d receptor antagonists for expansion of renewable stem cell populations |
WO2003062404A1 (en) * | 2002-01-25 | 2003-07-31 | Gamida-Cell Ltd. | Methods of expanding stem and progenitor cells and expanded cell populations obtained thereby |
WO2003068228A1 (en) * | 2002-02-11 | 2003-08-21 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Aryl ureas with angiogenesis inhibiting activity |
US7049313B2 (en) | 2002-02-25 | 2006-05-23 | Kudos Pharmaceuticals Ltd. | ATM inhibitors |
WO2004005532A2 (en) * | 2002-07-10 | 2004-01-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Solid-phase and solution-phase synthesis of glycosylphosphatidylinositol glycans |
US20050054097A1 (en) * | 2002-11-17 | 2005-03-10 | Tony Peled | EX-VIVO expansion of hematopoietic system cell populations in mononuclear cell cultures |
GB0304632D0 (en) * | 2003-02-28 | 2003-04-02 | Proxara Biotechnology Ltd | Method |
UY28213A1 (es) * | 2003-02-28 | 2004-09-30 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Nuevos derivados de cianopiridina útiles en el tratamiento de cáncer y otros trastornos. |
EP1601759A4 (en) * | 2003-03-07 | 2007-02-14 | Gamida Cell Ltd | EXPANSION OF RENEWABLE STEM CELL POPULATIONS USING PI-3 KINASE MODULATORS |
BRPI0409681A (pt) * | 2003-04-23 | 2006-04-18 | Wyeth Corp | derivados de wortmanina solúveis em água |
EP1636585B2 (en) * | 2003-05-20 | 2012-06-13 | Bayer HealthCare LLC | Diaryl ureas with kinase inhibiting activity |
IL161903A0 (en) * | 2003-07-17 | 2005-11-20 | Gamida Cell Ltd | Ex vivo progenitor and stem cell expansion for usein the treatment of disease of endodermally- deri ved organs |
ME00294B (me) * | 2003-07-23 | 2011-05-10 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Fluoro supstituisana omega-karaboksiaril difenil urea za liječenje i prevenciju bolesti i stanja bolesti |
DE602004026071D1 (de) | 2003-08-13 | 2010-04-29 | Kudos Pharm Ltd | Aminopyrone und ihre verwendung als atm inhibitoren |
US20050054614A1 (en) * | 2003-08-14 | 2005-03-10 | Diacovo Thomas G. | Methods of inhibiting leukocyte accumulation |
WO2005016348A1 (en) * | 2003-08-14 | 2005-02-24 | Icos Corporation | Method of inhibiting immune responses stimulated by an endogenous factor |
US7932260B2 (en) | 2004-05-13 | 2011-04-26 | Icos Corporation | Quinazolinones as inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta |
EP1755609A1 (en) * | 2004-05-25 | 2007-02-28 | Icos Corporation | Methods for treating and/or preventing aberrant proliferation of hematopoietic cells |
WO2006030442A2 (en) * | 2004-09-16 | 2006-03-23 | Gamida-Cell Ltd. | Methods of ex vivo progenitor and stem cell expansion by co-culture with mesenchymal cells |
BRPI0515498A (pt) | 2004-09-20 | 2008-07-29 | Kudos Pharm Ltd | inibidores de dna-pk |
CN101039952A (zh) * | 2004-10-13 | 2007-09-19 | 惠氏公司 | 作为pi3k抑制剂的17-羟基渥曼青霉素类似物 |
CN1875959B (zh) * | 2004-10-14 | 2010-05-12 | 孔庆忠 | 一种抗癌药物组合物 |
CN100369632C (zh) * | 2004-10-14 | 2008-02-20 | 孔庆忠 | 抗癌药物组合物 |
JP2008529995A (ja) | 2005-02-09 | 2008-08-07 | クドス ファーマシューティカルズ リミテッド | Atm阻害剤 |
EP1885356A2 (en) * | 2005-02-17 | 2008-02-13 | Icos Corporation | Phosphoinositide 3-kinase inhibitors for inhibiting leukocyte accumulation |
AR053358A1 (es) | 2005-04-15 | 2007-05-02 | Cancer Rec Tech Ltd | Inhibidores de adn - pk |
EP1886138A4 (en) * | 2005-05-11 | 2009-04-15 | Genetic Technologies Ltd | PROCESS FOR ENRICHING FETTAL CELLS |
CA2609387A1 (en) * | 2005-05-27 | 2006-11-30 | Bayer Healthcare Ag | Combination therapy comprising diaryl ureas for treating diseases |
JP2007063205A (ja) * | 2005-08-31 | 2007-03-15 | Japan Science & Technology Agency | 神経因性疼痛治療剤 |
US8846393B2 (en) | 2005-11-29 | 2014-09-30 | Gamida-Cell Ltd. | Methods of improving stem cell homing and engraftment |
WO2008056368A2 (en) * | 2006-11-09 | 2008-05-15 | Gamida-Cell Ltd. | Use of ex-vivo cultured hematopoietic cells for treatment of peripheral vascular diseases |
TW200845960A (en) * | 2007-04-05 | 2008-12-01 | Wyeth Corp | Wortmannin-rapalog conjugate and uses thereof |
US20100109416A1 (en) * | 2008-11-03 | 2010-05-06 | Jones Margaret L | Adjustable safety harness |
US9492449B2 (en) | 2008-11-13 | 2016-11-15 | Gilead Calistoga Llc | Therapies for hematologic malignancies |
ES2674719T3 (es) | 2008-11-13 | 2018-07-03 | Gilead Calistoga Llc | Terapias para neoplasias hematológicas |
US20100233733A1 (en) * | 2009-02-10 | 2010-09-16 | Nodality, Inc., A Delaware Corporation | Multiple mechanisms for modulation of the pi3 kinase pathway |
EP2411391A1 (en) | 2009-03-24 | 2012-02-01 | Gilead Calistoga LLC | Atropisomers of2-purinyl-3-tolyl-quinazolinone derivatives and methods of use |
CN102458410A (zh) * | 2009-04-20 | 2012-05-16 | 吉联亚·卡利斯托加有限责任公司 | 治疗实体瘤的方法 |
CN102647987A (zh) | 2009-07-21 | 2012-08-22 | 吉里德卡利斯托加公司 | 使用pi3k抑制剂治疗肝脏障碍 |
BRPI1107182B1 (pt) * | 2011-12-29 | 2022-03-08 | Fundação De Amparo À Pesquisa Do Estado De Minas Gerais - Fapemig | Composições farmacêuticas contendo ang-(1-7) ou outro agonista do receptor mas em combinação com inibidores de pi3k/akt para tratamento terapêutico anticâncer |
BR112014020119A2 (pt) | 2012-02-13 | 2020-10-27 | Gamida-Cell Ltd | cultura de células-tronco mesenquimais |
AR090253A1 (es) | 2012-03-05 | 2014-10-29 | Gilead Calistoga Llc | Formas polimorficas de (s)-2-(1-(9h-purin-6-ilamino)propil)-5-fluor-3-fenilquinazolin-4(3h)-ona |
US9175266B2 (en) | 2012-07-23 | 2015-11-03 | Gamida Cell Ltd. | Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity |
US9567569B2 (en) | 2012-07-23 | 2017-02-14 | Gamida Cell Ltd. | Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells |
WO2014203129A1 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Olema Pharmaceuticals, Inc. | Combinations of benzopyran compounds, compositions and uses thereof |
US9708327B2 (en) | 2013-12-20 | 2017-07-18 | Gilead Calistoga Llc | Polymorphic forms of a hydrochloride salt of (S)-2-(1-(9H-purin-6-ylamino)propyl)-5-fluoro-3-phenylquinazolin-4(3H)-one |
MX2016008259A (es) | 2013-12-20 | 2016-10-13 | Gilead Calistoga Llc | Metodo de proceso para inhibidores de fosfatidilinositol 3-cinasa. |
SG11201609877XA (en) | 2014-06-13 | 2016-12-29 | Gilead Sciences Inc | Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors |
CN104774239B (zh) * | 2015-03-13 | 2017-01-04 | 暨南大学 | 多节孢绿胶霉素类化合物及其用途 |
CN107058137B (zh) * | 2017-06-14 | 2020-02-07 | 海正药业(杭州)有限公司 | 一种渥曼青霉及其生产渥曼青霉素的方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3668222A (en) * | 1969-05-14 | 1972-06-06 | Sandoz Ltd | 11-desacetoxy-wortmannin |
US4988682A (en) * | 1989-02-03 | 1991-01-29 | University Of Pittsburgh | Myo-inositol analogs and method for their use |
JPH0328948A (ja) * | 1989-06-27 | 1991-02-07 | Nec Corp | 入出力制御装置の動作状態情報収集方式 |
-
1993
- 1993-07-19 US US08/094,279 patent/US5378725A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-23 TW TW082109883A patent/TW287102B/zh active
-
1994
- 1994-07-13 ZA ZA945103A patent/ZA945103B/xx unknown
- 1994-07-13 CZ CZ941692A patent/CZ283806B6/cs unknown
- 1994-07-14 CA CA002128046A patent/CA2128046A1/en not_active Abandoned
- 1994-07-14 IL IL11032594A patent/IL110325A0/xx unknown
- 1994-07-14 NO NO942641A patent/NO942641L/no unknown
- 1994-07-15 EP EP94305192A patent/EP0635268A1/en not_active Withdrawn
- 1994-07-15 PL PL94304317A patent/PL304317A1/xx unknown
- 1994-07-15 PH PH48651A patent/PH30794A/en unknown
- 1994-07-18 CN CN94108398A patent/CN1111127A/zh active Pending
- 1994-07-18 HU HU9402128A patent/HUT67667A/hu unknown
- 1994-07-18 RU RU94026082/14A patent/RU94026082A/ru unknown
- 1994-07-18 AU AU67540/94A patent/AU678831B2/en not_active Ceased
- 1994-07-18 JP JP6165068A patent/JPH0753370A/ja active Pending
- 1994-07-18 KR KR1019940017228A patent/KR950002755A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0753370A (ja) | 1995-02-28 |
CA2128046A1 (en) | 1995-01-20 |
CZ283806B6 (cs) | 1998-06-17 |
EP0635268A1 (en) | 1995-01-25 |
AU6754094A (en) | 1995-01-27 |
US5378725A (en) | 1995-01-03 |
RU94026082A (ru) | 1996-05-20 |
AU678831B2 (en) | 1997-06-12 |
NO942641D0 (no) | 1994-07-14 |
PL304317A1 (en) | 1995-01-23 |
KR950002755A (ko) | 1995-02-16 |
NO942641L (no) | 1995-01-20 |
PH30794A (en) | 1997-10-17 |
IL110325A0 (en) | 1994-10-21 |
TW287102B (hu) | 1996-10-01 |
HU9402128D0 (en) | 1994-09-28 |
ZA945103B (en) | 1996-03-27 |
CN1111127A (zh) | 1995-11-08 |
CZ169294A3 (en) | 1995-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HUT67667A (en) | Pharmaceutical composition causes inhibition of phosphatidylinositol-3-kinase containing wortmannin and analogs thereof and process for its production | |
US5504103A (en) | Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase with 17 β-hydroxywortmannin and analogs thereof | |
US5281587A (en) | Steroid sulphatase inhibitors | |
CA2133815A1 (en) | Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase with viridin, demethoxyviridin, viridiol, demethoxyviridiol, virone, wortmannolone, and analogs thereof | |
EP0762879B1 (en) | Stereochemical wortmannin derivatives | |
US5468773A (en) | Methods for inhibiting bone loss and cartilage degradation using wortmannin and its analogs | |
Hall et al. | Anti-inflammatory agents III: Structure–activity relationships of brusatol and related quassinoids | |
NO308884B1 (no) | Anvendelse av 5-halo-2-pyrimidin-deoksyribose eller 5-halo- pyrimidinon for fremstilling av et medikament for behandling av kreft | |
KULAR et al. | Co-operation of phosphatidylinositol transfer protein with phosphoinositide 3-kinase γ in the formylmethionyl-leucylphenylalanine-dependent production of phosphatidylinositol 3, 4, 5-trisphosphate in human neutrophils | |
CN103860529B (zh) | 金色灰绿曲霉素类化合物的用途 | |
US5607970A (en) | ACAT inhibitory agent | |
Lamosova et al. | Effect of Rooibos tea (Aspalathus linearis) on chick skeletal muscle cell growth in culture | |
Cody et al. | Structure-activity relationships of flavonoids as inhibitors of iodothyronine deiodinase | |
KR20120082226A (ko) | Gpr92를 저해하는 화합물을 포함하는 항 신경성 통증 또는 항 혈전 약학조성물 | |
SANKARAN et al. | Effect of vitamin A deprivation on maintenance of rat mammary tissue and on the potential of the epithelium for hormone-dependent milk protein synthesis | |
EP0369503B1 (en) | Method for the control of pneumocystis carinii | |
CN101669935B (zh) | 一种含樱黄素的药物组合物及其在制药中的应用 | |
EP0821961A1 (en) | Neovascularization inhibitor | |
Svensson et al. | Okadaic acid and cultured frog sciatic nerves: potent inhibition of axonal regeneration in spite of unaffected Schwann cell proliferation and ganglionic protein synthesis | |
Zagozdzon et al. | Overexpression of the Csk homologous kinase facilitates phosphorylation of Akt/PKB in MCF-7 cells | |
CN100546575C (zh) | 一种含红车轴草素、樱黄素的药物组合物及其在医药上的应用 | |
KR20080042349A (ko) | 제니스테인을 포함하는 사이트-1-프로티아제 저해용 조성물 | |
US4263301A (en) | β-Phenyl-β-hydroxyethylaminoalkyltheophyllines as inhibitors of biosynthesis of triglycerides | |
US4285953A (en) | Inhibition of biosynthesis of triglycerides by certain N-β-phenethyl-N-pyridylalkylamines | |
KR20000009196A (ko) | 항암 및 항염증 효과를 갖는 우분 추출물 및 그 제조방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DFD9 | Temporary protection cancelled due to non-payment of fee |